Hatur nuhun pikeun ngadatangan Nature.com. Anjeun nganggo versi browser kalayan dukungan CSS kawates. Pikeun pangalaman anu pangsaéna, kami nyarankeun yén anjeun nganggo browser anu diropéa (atanapi nganonaktipkeun Mode Kasaluyuan dina Internet Explorer). Sajaba ti éta, pikeun mastikeun rojongan lumangsung, urang némbongkeun situs tanpa gaya na JavaScript.
Nampilkeun carousel tilu slide sakaligus. Pake tombol Saméméhna jeung Salajengna pikeun mindahkeun ngaliwatan tilu slides dina hiji waktu, atawa make tombol geseran di ahir pikeun mindahkeun ngaliwatan tilu slides dina hiji waktu.
Partikel silika porous disiapkeun ku métode sol-gél kalawan sababaraha modifikasi pikeun ménta partikel lega-pori. Partikel-partikel ieu diturunkeun ku N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) jeung styrene via reverse chain transfer-fragmentation (RAFT) polimérisasi pikeun ngahasilkeun N-phenylmaleimide intercalated polyamides. Styrene (PMP) fase diam. Sempit bore kolom stainless steel (100 × 1,8 mm diaméterna jero) ieu dipak kalawan packing slurry. Kinerja kromatografi kolom PMP dievaluasi pikeun misahkeun campuran péptida sintétik anu diwangun ku lima péptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu asam amino enkephalin) jeung tryptic hydrolyzate of sérum manusa. Dina kaayaan élusi optimal, jumlah téoritis pelat kalayan campuran péptida ngahontal 280.000 pelat / sq.m. Ngabandingkeun kinerja separation tina kolom dimekarkeun kalawan kolom komérsial Ascentis Express RP-Amide, ieu katalungtik yén efisiensi separation tina kolom PMP éta punjul ti kolom komérsial dina watesan efisiensi separation sarta resolusi.
Industri biopharmaceutical parantos janten pasar global anu ngembang kalayan paningkatan anu signifikan dina pangsa pasar dina taun-taun ayeuna. Kalayan tumuwuhna ngabeledug tina industri biofarmaseutik1,2,3 peryogi pisan pikeun analisa péptida sareng protéin. Salian péptida udagan, rupa-rupa pangotor kabentuk nalika sintésis péptida, ku kituna purifikasi kromatografi diperyogikeun pikeun kéngingkeun kamurnian péptida anu dipikahoyong. Analisis jeung karakterisasi protéin dina cairan awak, jaringan, jeung sél mangrupa tugas pisan nangtang alatan jumlah badag spésiés berpotensi bisa didéteksi hadir dina sampel tunggal. Sanaos spéktrométri massa mangrupikeun alat anu mujarab pikeun ngaruntuykeun péptida sareng protéin, upami conto sapertos kitu langsung dilebetkeun kana spéktrométer massa, pamisahanna bakal henteu nyugemakeun. Masalah ieu tiasa direngsekeun ku cara kromatografi cair (LC) sateuacan analisa MS, anu bakal ngirangan jumlah analit anu asup kana spéktrométer massa dina waktos anu ditangtukeun4,5,6. Salaku tambahan, analit tiasa konsentrasi dina daérah anu sempit salami pamisahan fase cair, ku kituna konsentrasi analit ieu sareng ningkatkeun sensitipitas deteksi MS. Kromatografi cair (LC) parantos maju sacara signifikan dina dasawarsa katukang sareng parantos janten metode anu seueur dianggo pikeun analisis proteomik7,8,9,10.
Kromatografi cair fase ngabalikeun (RP-LC) loba dipaké pikeun ngamurnikeun jeung misahkeun campuran péptida maké silika octadecyl-modified (ODS) salaku fase stasioner11,12,13. Sanajan kitu, alatan struktur kompléks maranéhanana jeung alam amphoteric, 14,15 RP fase cicing teu bisa nyadiakeun separation nyugemakeun péptida jeung protéin. Ku alatan éta, analisis péptida jeung protéin kalawan fragmén polar jeung non-polar merlukeun fase stasioner dirancang husus pikeun interaksi jeung nahan analits16 ieu. Kromatografi campuran, nu nawarkeun interaksi multimodal, bisa jadi alternatif pikeun RP-LC pikeun misahkeun péptida, protéin, jeung campuran kompléks lianna. Sababaraha fase cicing tipe campuran disiapkeun jeung kolom dieusian ku fase cicing ieu dipaké pikeun misahkeun péptida jeung protéin17,18,19,20,21. Kusabab ayana gugus polar sareng non-polar, fase stasioner mode campuran (LILIN / RPLC, HILIC / RPLC, interkalasi polar / RPLC) cocog pikeun pamisahan péptida sareng protéin22,23,24,25,26,27,28. , fase stasioner intercalated polar jeung gugus polar kabeungkeut kovalén némbongkeun kamampuh separation alus tur selectivity unik pikeun analytes polar jeung non-polar sabab separation gumantung kana interaksi antara analyte jeung fase cicing Multimodal interaksi 29,30,31,32. Anyar, Zhang et al. 30 diala fase stasioner poliamina anu ditungtungan ku béhényl sareng hasil misahkeun hidrokarbon, antidepresan, flavonoid, nukléosida, éstrogén, sareng sababaraha analit sanés. Bahan stasioner anu dipasang ku polar ngagaduhan gugus polar sareng non-polar, ku kituna tiasa dianggo pikeun misahkeun péptida sareng protéin kana bagian hidrofobik sareng hidrofilik. Kolom inline polar (contona, kolom C18 sareng inline amida) sayogi dina nami dagang kolom Ascentis Express RP-Amide, tapi kolom ieu ngan ukur dianggo pikeun analisa amina 33.
Dina ulikan ayeuna, hiji fase stasioner embedding polar (N-phenylmaleimide, embedding polystyrene) ieu disiapkeun jeung dievaluasi pikeun separation péptida jeung pembelahan HSA tryptic. Strategi di handap ieu dipaké pikeun nyiapkeun fase stasioner. Partikel silika porous anu disiapkeun nurutkeun prosedur dijelaskeun dina publikasi urang saméméhna, kalawan sababaraha parobahan dina skéma préparasi 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Babandingan uréa, poliétilén glikol (PEG), TMOS jeung asam cai-asétat anu disaluyukeun pikeun ménta partikel ukuranana silika jeung pore badag. Bréh, ligan fénilmaleimida-métilvinil isosianat anyar disintésis sarta partikel silika turunanana dipaké pikeun nyiapkeun fase stasioner polar. Fase cicing diala ieu dipak kana kolom stainless steel (diaméter jero 100 × 1,8 mm) nurutkeun hiji skéma packing dioptimalkeun. Pembungkusan kolom dibantuan ku geter mékanis pikeun mastikeun lapisan seragam dina kolom. Kolom anu dibungkus dievaluasi pikeun pamisahan campuran péptida anu diwangun ku lima péptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, péptida leucine-enkephalin). sareng hidrolisat tryptic tina albumin sérum manusa (HSA). Ieu katalungtik yén campuran péptida jeung HSA tryptic nyerna dipisahkeun kalawan resolusi alus tur efisiensi. Efisiensi pamisahan kolom PMP dibandingkeun sareng kolom Ascentis Express RP-Amide. Perhatikeun yén péptida sareng protéin gaduh résolusi anu saé sareng efisiensi pamisahan anu luhur dina kolom PMP, sareng efisiensi pamisahan kolom PMP langkung luhur tibatan kolom Ascentis Express RP-Amide.
PEG (poliétilén glikol), uréa, asam asétat, trimethoxyorthosilicate (TMOS), trimethylchlorosilane (TMCS), tripsin, albumin sérum manusa (HSA), amonium klorida, uréa, hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS), méthacryloyl chloride (MC4, BP4-Oksigén), styrene, acetonitrile (ACN) pikeun HPLC, métanol, 2-propanol sareng aseton. Sigma-Aldrich Company (St. Louis, Missouri, AS).
Campuran uréa (8 g), poliétilén glikol (8 g) jeung 8 ml 0,01 N. asam asétat ieu diaduk salila 10 menit, sarta 24 ml TMOS ditambahkeun thereto handapeun és-cooling. Campuran réaksi ieu dipanaskeun dina 40 ° C salila 6 jam lajeng dina 120 ° C salila 8 jam dina autoclave stainless steel. Cai dibuang sareng résidu dikeringkeun dina suhu 70 ° C salami 12 jam. Blok lemes garing digiling lancar sareng dikalsinasi dina oven dina 550 ° C salami 12 jam. Tilu bets disusun sareng dicirian pikeun nguji réproduktifitas ukuran partikel, ukuran pori sareng luas permukaan.
Grup polar jeung fase cicing pikeun ranté polystyrene. Prosedur persiapan dijelaskeun di handap.
N-phenylmaleimide (200 mg) jeung métil vinyl isocyanate (100 mg) ieu leyur dina toluene anhidrat, lajeng 0,1 ml 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ditambahkeun kana flask réaksi pikeun ménta hiji copolymer of phenylmaleimide na methylPMCP isocyanate. ) Campuran ieu dipanaskeun dina 60 ° C salila 3 jam, disaring tur garing dina oven dina 40 ° C salila 3 jam.
partikel silika garing (2 g) ieu dispersed dina toluene garing (100 ml), diaduk jeung sonicated pikeun 10 mnt dina 500 ml buleud handap flask. PMCP (10 mg) ieu leyur dina toluene sarta ditambahkeun dropwise kana flask réaksi ngaliwatan corong tambahan. Campuran ieu refluxed dina 100 ° C salila 8 jam, disaring, dikumbah ku acetone sarta garing dina 60 ° C salila 3 jam. Saterusna, partikel silika pakait sareng PMCP (100 g) ieu leyur dina toluene (200 ml), sarta 4-hidroksi-TEMPO (2 ml) ditambahkeun thereto ku ayana 100 μl dibutyltin dilaurate salaku katalis. Campuran diaduk dina 50 ° C salami 8 jam, disaring sareng garing dina 50 ° C salami 3 jam.
Styrene (1 ml), benzoyl péroxida BPO (0,5 ml) jeung partikel silika napel TEMPO-PMCP (1,5 g) dispersed dina toluene jeung purged kalawan nitrogén. Polimérisasi stirena dilaksanakeun dina 100 ° C salami 12 jam. Produk anu hasilna dikumbah nganggo métanol sareng garing sapeuting dina suhu 60 ° C. Skéma umum réaksi ditémbongkeun dina Gbr. hiji.
Sampel di-degassed dina 393 K salami 1 jam dugi tekanan sésa kirang ti 10-3 Torr dicandak. Jumlah N2 adsorbed dina tekanan relatif P / P0 = 0,99 ieu dipaké pikeun nangtukeun total volume pori. Morfologi partikel silika murni sareng kabeungkeut ligan ditaliti nganggo mikroskop éléktron scanning (Hitachi High Technologies, Tokyo, Jepang). Sampel garing (silika murni sareng partikel silika terikat ligan) disimpen dina batang aluminium nganggo pita karbon. Emas disimpen dina sampel nganggo alat sputtering Q150T, sareng lapisan Au kandel 5 nm disimpen dina sampel. Ieu ngaronjatkeun efisiensi tina prosés tegangan lemah sareng nyadiakeun nyemprot tiis rupa. Analisis unsur dilaksanakeun nganggo Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 analisa komposisi unsur. Penganalisis ukuran partikel Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 digunakeun pikeun meunangkeun distribusi ukuran partikel. Partikel silika uncoated jeung partikel silika ligan-kabeungkeut (5 mg unggal) anu dispersed dina 5 ml isopropanol, sonicated pikeun 10 menit, agitated pikeun 5 menit, sarta disimpen dina bangku optik Mastersizer. Analisis Thermogravimetric dilaksanakeun dina laju 5 °C per menit dina rentang suhu ti 30 nepi ka 800 °C.
Serat kaca dijejeran kolom stainless steel bore sempit jeung diménsi (ID 100 × 1,8 mm) anu dipak ku metoda slurry keusikan nuturkeun prosedur sarua sakumaha dina rujukan 31. kolom stainless steel (kaca dijejeran, ID 100 × 1 .8 mm) jeung hiji outlet ngandung 1 µm frit ieu disambungkeun ka mesin bungkusan slurry, Defield AS). Nyiapkeun suspénsi fase cicing ku ngagantungkeun 150 mg fase cicing dina 1,2 ml métanol sareng tuang kana kolom waduk. Métanol dipaké salaku pangleyur slurry jeung pangleyur kontrol. Pek kolom ku cara nerapkeun urutan tekanan 100 MP salila 10 mnt, 80 MP salila 15 mnt, jeung 60 MP salila 30 mnt. Prosés packing dipaké dua vibrator kolom kromatografi gas (Alltech, Deerfield, IL, AS) pikeun Geter mékanis pikeun mastikeun packing kolom seragam. Tutup packer slurry jeung leupaskeun tekanan lalaunan pikeun nyegah karuksakan string. Kolom ieu dipegatkeun tina nozzle slurry sarta pas sejen napel inlet tur disambungkeun ka sistem LC pikeun nguji operasi na.
A MLC custom ieu diwangun ngagunakeun hiji pompa LC (10AD Shimadzu, Jepang), a sampler kalawan 50 nL suntik loop (Valco (AS) C14 W.05), a degasser mémbran (Shimadzu DGU-14A), sarta jandela kapilér UV-VIS. Alat detektor (UV-2075) sareng microcolumn enamelled. Paké tabung nyambungkeun pisan sempit tur pondok pikeun ngaleutikan efek ékspansi kolom tambahan. Saatos ngeusian kolom, pasang kapiler (50 µm id 365) di outlet tina 1/16″ persimpangan réduksi sareng pasang kapiler (50 µm) tina persimpangan réduksi. Ngumpulkeun data sareng ngolah kromatogram dilaksanakeun nganggo parangkat lunak Multichro 2000. Dina 254 nm, absorbance UV tina analytes subjék diawaskeun dina 0. Data kromatografi dianalisis ngagunakeun OriginPro8 (Northampton, MA).
Albumin sérum manusa, bubuk lyophilized, ≥ 96% (éléktroforésis gél agarose) 3 mg dicampur tripsin (1.5 mg), 4.0 M uréa (1 ml) jeung 0.2 M amonium bikarbonat (1 ml). Leyuran ieu diaduk pikeun 10 mnt sarta diteundeun dina cai mandi dina 37 ° C salila 6 h, lajeng quenched kalawan 1 ml 0,1% TFA. Nyaring solusi sareng simpen di handap 4 ° C.
Separation tina campuran péptida jeung tryptic nyerna HSA dina kolom PMP dievaluasi misah. Pariksa hidrolisis tryptic tina campuran péptida jeung HSA dipisahkeun ku kolom PMP tur dibandingkeun hasilna jeung kolom Ascentis Express RP-Amide. Jumlah pelat téoritis diitung ngagunakeun persamaan di handap ieu:
Gambar SEM partikel silika murni jeung partikel silika kabeungkeut ligan ditémbongkeun dina Gambar 2. Gambar SEM partikel silika murni (A, B) nembongkeun bentuk buleud nu partikel nu elongated atawa boga simétri teratur dibandingkeun ulikan urang saméméhna. Beungeut partikel silika nu kabeungkeut ku ligan (C, D) leuwih lemes batan partikel silika murni, nu bisa jadi alatan ranté polistiréna nu nutupan beungeut partikel silika.
Nyeken mikrograf éléktron partikel silika murni (A, B) jeung partikel silika terikat ligan (C, D).
Sebaran ukuran partikel partikel silika murni jeung partikel silika kabeungkeut ligan ditémbongkeun dina Gbr. 2. 3(A). Kurva distribusi ukuran partikel volumetric némbongkeun yén ukuran partikel silika ngaronjat sanggeus modifikasi kimiawi (Gbr. 3A). Data distribusi ukuran partikel silika tina ulikan ayeuna jeung ulikan saméméhna dibandingkeun dina Table 1(A). Ukuran partikel volumetrik d(0.5) PMP éta 3.36 µm, dibandingkeun jeung ad(0.5) nilai 3.05 µm dina ulikan urang saméméhna (polystyrene kabeungkeut silika partikel)34. Kusabab parobahan dina rasio PEG, uréa, TMOS jeung asam asétat dina campuran réaksi, sebaran ukuran partikel tina bets ieu sempit dibandingkeun ulikan urang saméméhna. Ukuran partikel fase PMP rada leuwih badag batan fase partikel silika kabeungkeut polystyrene nu urang diajar saméméhna. Ieu ngandung harti yén fungsionalisasi permukaan partikel silika jeung stirena ngan disimpen dina lapisan polystyrene (0,97 µm) dina beungeut silika, sedengkeun dina fase PMP ketebalan lapisan 1,38 µm.
Distribusi ukuran partikel (A) sareng distribusi ukuran pori (B) partikel silika murni sareng partikel silika terikat ligan.
Ukuran pori, volume pori, jeung luas permukaan partikel silika dipaké dina ulikan ieu ditémbongkeun dina Tabél 1 (B). Propil PSD partikel silika murni jeung partikel silika kabeungkeut ligan ditémbongkeun dina Gbr. 3 (B). Hasilna dibandingkeun sareng ulikan urang saméméhna34. Ukuran pori partikel silika murni jeung ligan-kabeungkeut éta 310 Å na 241 Å, masing-masing nunjukkeun yén sanggeus modifikasi kimiawi, ukuran pori turun ku 69 Å, sakumaha ditémbongkeun dina Table 1 (B), sarta kurva shift ditémbongkeun dina Gbr. Wewengkon permukaan spésifik partikel silika dina ulikan kami ayeuna nyaéta 116 m2 / 116 m2. m2/g). Ditémbongkeun saperti dina Table 1 (B), aréa permukaan (m2 / g) partikel silika sanggeus modifikasi kimiawi ogé turun tina 116 m2 / g ka 105 m2 / g.
Hasil analisis unsur fase cicing dipidangkeun dina Tabél. 2. Eusi karbon tina fase cicing ayeuna nyaeta 6,35%, nu leuwih handap dina ulikan urang saméméhna (partikel silika pakait sareng polystyrene, 7,93% 35 jeung 10,21%, masing-masing) 42. Eusi karbon fase cicing ayeuna handap, saprak sababaraha ligan polar kayaning phenylmaleimide methylMP-vinyl isocyanate na 42. styrene dina persiapan SP. Persentase beurat nitrogén dina fase cicing ayeuna nyaéta 2,21% dibandingkeun 0,1735 sareng 0,85% dina studi saméméhna42. Ieu ngandung harti yén fase cicing ayeuna gaduh persentase beurat nitrogén anu luhur kusabab phenylmaleimide. Nya kitu, produk (4) jeung (5) boga kandungan karbon masing-masing 2,7% jeung 2,9%, sedengkeun produk ahir (6) ngabogaan kandungan karbon 6,35%, ditémbongkeun saperti dina Tabel 2. Analisis Thermogravimetric (TGA) dipaké dina fase stasioner PMP pikeun nguji leungitna beurat, sarta kurva TGA ditémbongkeun dina Gambar 4. anu saluyu sareng eusi karbon (6,35%), sabab ligan henteu ngan ukur ngandung C, tapi ogé N, O sareng H.
Ligan phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate dipilih pikeun ngaropea permukaan partikel silika kusabab gugus polar phenylmaleimide jeung vinylisocyanate na. Gugus isosianat vinil tiasa salajengna ngaréaksikeun sareng stirena ku cara hirup polimérisasi radikal. Alesan anu kadua nyaéta nyelapkeun grup anu gaduh interaksi sedeng sareng analit sareng teu aya interaksi éléktrostatik anu kuat antara analit sareng fase diam, sabab bagian phenylmaleimide henteu gaduh muatan maya dina pH normal. Polaritas fase stasioner tiasa dikontrol ku jumlah optimal stirena sareng waktos réaksi polimérisasi radikal bébas. Léngkah ahir réaksi (polimérisasi radikal bébas) penting sabab ngarobah polaritasna fase cicing. Analisis unsur dilaksanakeun pikeun mariksa kandungan karbon dina fase diam ieu. Geus dititénan yén ngaronjatna jumlah stirena jeung waktu réaksi ngaronjatkeun eusi karbon fase cicing jeung sabalikna. SPs disiapkeun kalawan konsentrasi béda stirena boga beban karbon béda. Nya kitu, fase cicing ieu disimpen dina kolom stainless steel sarta ciri kromatografi maranéhanana (selectivity, resolusi, nilai N, jsb) dipariksa. Dumasar kana percobaan ieu, komposisi dioptimalkeun pikeun persiapan fase cicing PMP dipilih pikeun nyadiakeun polaritasna dikawasa jeung ingetan alus analyte nu.
Kolom PMP ogé dievaluasi pikeun analisis lima campuran péptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) ngagunakeun kapasitas fase mobile. 60/40 (v/v) ACN/cai (0,1% TFA) dina laju aliran 80 µl/min. Dina kaayaan élusi optimal (200.000 pelat/m), jumlah pelat téoritis (N) per kolom (100 × 1,8 mm) nyaéta 20.000 ± 100. Nilai N pikeun tilu kolom PMP dipidangkeun dina Tabél 3 jeung kromatogram dipidangkeun dina Gambar 5A. Analisis gancang dina laju aliran tinggi (700 µl / mnt) dina kolom PMP, lima péptida eluted dina hiji menit, nilai N alus teuing tina 13.500 ± 330 per kolom (diameter 100 x 1.8 mm), sarua jeung 135.000 pelat / m (Gbr. 5B). Tilu kolom tina ukuran sarua (diaméter jero 100 x 1,8 mm) ieu ngeusi tilu bets béda tina PMP fase cicing pikeun nguji reproducibility. Analit dirékam pikeun unggal kolom ku cara misahkeun campuran tés anu sami dina unggal kolom nganggo kondisi élusi anu optimal, jumlah pelat téoritis N, sareng waktos ingetan. Data reproducibility pikeun kolom PMP dipidangkeun dina Table 4. Reproducibility kolom PMP correlated ogé kalawan nilai %RSD pisan low sakumaha ditémbongkeun dina Table 3.
Pamisahan campuran péptida dina kolom PMP (B) jeung kolom Ascentis Express RP-Amide (A), fase gerak 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), dimensi kolom PMP (100 x 1.8 mm id), analisis urutan Elution sanyawa: 1 (Gly-Tyr), 3- (Leu-Tyr), 3-u (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) jeung 5 (enkephalin asam leucic).
Kolom PMP (diameter jero 100 x 1,8 mm) dievaluasi pikeun pamisahan hidrolisat tryptic albumin sérum manusa ku HPLC. Kromatogram dina Gambar 6 nunjukkeun yén sampel dipisahkeun kalayan résolusi anu saé pisan. Solusi HSA dianalisis nganggo laju aliran 100 μl / mnt, fase gerak 70/30 asetonitril / cai sareng 0,1% TFA. Pecahan HSA dibagi kana 17 puncak, sakumaha ditémbongkeun dina kromatogram (Gbr. 6), pakait jeung 17 péptida. Éfisiensi pamisahan puncak individu tina hidrolisat HSA diitung sareng nilaina dipidangkeun dina Tabel 5.
Hidrolisat tryptic HSA dipisahkeun dina kolom PMP (diaméter jero 100 x 1,8 mm), laju aliran (100 μl / mnt), fase gerak 60/40 asetonitril / cai, sareng 0,1% TFA.
dimana L nyaéta panjang kolom, η nyaéta viskositas fase gerak, ΔP nyaéta tekanan tukang kolom, sareng u nyaéta laju linier fase gerak. Perméabilitas kolom PMP nyaéta 2,5 × 10–14 m2, laju aliran 25 µl/min, 60/40 v/v dipaké. ACN / cai. The perméabilitas kolom PMP (ID 100 × 1,8 mm) éta sarupa jeung ulikan urang Ref.34 saméméhna. Perméabilitas kolom anu dieusi partikel porous superfisial nyaéta 1,7 × 10 ,6 µm, 2,5 × 10-14 m2 pikeun partikel 5 µm43. Ku alatan éta, perméabilitas fase PMP sarua jeung perméabilitas partikel cangkang inti kalayan ukuran 5 μm.
dimana Wx nyaéta massa kolom anu dieusi kloroform, Wy nyaéta massa kolom anu dieusi métanol, sareng ρ nyaéta dénsitas pangleyur. Kapadetan métanol (ρ = 0,7866) jeung kloroform (ρ = 1,484). The total porosity kolom partikel silika-C18 (100 × 1,8 mm ID) 34 sarta kolom C18-urea31 urang diajar saméméhna éta 0,63 na 0,55, mungguh. Ieu ngandung harti yén ayana ligan uréa ngurangan perméabilitas fase cicing. Di sisi anu sanésna, total porositas kolom PMP (diaméter jero 100 × 1,8 mm) nyaéta 0,60. Kolom PMP kurang permeabel tibatan kolom anu dipak ku partikel silika kabeungkeut C18 sabab dina fase stasioner tipe C18 ligan C18 napel kana partikel silika dina ranté linier, sedengkeun dina fase stasioner tipe polystyrene kabentuk polimér nu kawilang kandel sabudeureun partikel. lapisan A. Dina percobaan has, porositas kolom diitung saperti kieu:
Dina Gbr. 7A, B nunjukkeun plot Van Deemter pikeun kolom PMP (id 100 x 1.8 mm) sareng kolom Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) dina kaayaan élusi anu sami, 60/40 ACN/H2O sareng 0 .1% TFA 20 µl/mnt dina duanana kolom dugi ka 80 µl/mnt. Nilai HETP minimum dina laju aliran optimal (80 µl / mnt) nyaéta 2.6 µm sareng 3.9 µm pikeun kolom PMP sareng kolom Ascentis Express RP-Amide masing-masing. Nilai HETP nunjukkeun yén efisiensi pamisahan kolom PMP (100 x 1,8 mm id) langkung luhur tibatan kolom Ascentis Express RP-Amide anu sayogi komersil (100 x 1,8 mm id). Grafik van Deemter dina Gbr. 7 (A) nunjukeun yen panurunan dina nilai N teu nyata luhur kalawan ngaronjatna aliran dibandingkeun ulikan urang saméméhna. Efisiensi separation luhur kolom PMP (id 100 × 1,8 mm) dibandingkeun kolom Ascentis Express RP-Amide dumasar kana ningkat bentuk partikel jeung ukuran sarta prosedur packing kolom canggih dipaké dina work34 ayeuna.
(A) plot Van Deemter (HETP vs laju linier fase mobile) diala dina kolom PMP (id 100 x 1,8 mm) dina 60/40 ACN / H2O kalawan 0,1% TFA. (B) plot Van Deemter (HETP versus laju linier fase mobile) diala dina kolom Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1,8 mm) dina 60/40 ACN / H2O kalawan 0,1% TFA.
Fase stasioner polar tina polystyrene intercalated disiapkeun sareng dievaluasi pikeun pamisahan campuran péptida sintétik sareng hidrolisat tryptic albumin sérum manusa (HSA) dina kromatografi cair kinerja luhur. Kinerja kromatografi kolom PMP pikeun campuran péptida alus teuing dina hal efisiensi sareng résolusi pamisahan. Efisiensi pamisahan ningkat tina kolom PMP disababkeun ku sababaraha alesan sapertos ukuran partikel silika sareng ukuran pori, sintésis dikawasa fase cicing, sareng bahan packing kolom kompléks. Salian efisiensi separation tinggi, kaunggulan sejen tina fase cicing ieu tekanan deui kolom low dina laju aliran tinggi. Kolom PMP tiasa diproduksi pisan sareng tiasa dianggo pikeun nganalisis campuran péptida sareng nyerna tryptic tina sababaraha protéin. Kami badé nganggo kolom ieu pikeun misahkeun sanyawa bioaktif tina produk alami, ekstrak pepelakan ubar sareng suung dina kromatografi cair. Ka hareupna, kolom PMP ogé bakal dievaluasi pikeun pamisahan protéin sareng antibodi monoklonal.
Widang, JK, Euerby, Bapak, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Panalungtikan kana sistem separation péptida péptida fase tibalik I: Ngembangkeun protokol pikeun karakterisasi kolom. Widang, JK, Euerby, Bapak, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Panalungtikan kana sistem separation péptida fase sabalikna kromatografi bagian I: Ngembangkeun protokol pikeun characterization kolom.Widang, JK, Owerby, Bapak, Lau, J., Togersen, H., sarta Petersson, P. Panalungtikan ngeunaan Péptida Separation Systems ku Reverse-Phase Kromatografi, Bagian I: Ngamekarkeun Protocol pikeun Characterization Kolom. Widang, JK, Euerby, Bapak, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Panalungtikan kana sistem separation péptida fase sabalikna kromatografi bagian I: Ngembangkeun protokol pikeun ciri kolom. Widang, JK, Euerby, Bapak, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Panalungtikan kana sistem separation péptida fase sabalikna kromatografi bagian I: Ngembangkeun protokol pikeun ciri kolom.Widang, JK, Owerby, Bapak, Lau, J., Togersen, H., sarta Petersson, P. Panalungtikan ngeunaan Péptida Separation Systems ku Reverse-Phase Kromatografi, Bagian I: Ngamekarkeun Protocol pikeun Characterization Kolom.J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
Gomez, B. et al. Métode pikeun nyiptakeun péptida aktip anu ningkat pikeun pengobatan panyakit tepa. Biotéhnologi. Prestasi 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. péptida terapi sintétik: Élmu jeung pasar. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. péptida terapi sintétik: Élmu jeung pasar.Vliege P, Lisowski V, Martinez J na Chreschatyski M. péptida terapi sintétik: sains jeung pasar.Vliege P, Lisowski V, Martinez J jeung Khreschatsky M. péptida terapi sintétik: sains jeung pasar. kapanggihna ubar. Dinten 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografi cair proteomik canggih. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografi cair proteomik canggih.Tempo F., Smith RD jeung Shen Yu. Kromatografi cair proteomik canggih. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Komposisi protéin canggih 液相色谱。Tempo F., Smith RD jeung Shen Yu. Kromatografi cair proteomik canggih.J. Kromatografi. A 1261, 78-90 (2012).
Liu, W. et al. Cairan kromatografi-spéktrométri massa tiasa ngagabungkeun métabolomik sareng proteomik basis lega. dubur. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Peran UHPLC dina ngembangkeun farmasi. Chesnut, SM & Salisbury, JJ Peran UHPLC dina ngembangkeun farmasi.Chesnut, SM sareng Salisbury, JJ Peran UHPLC dina pamekaran farmasi.Chesnut, SM sarta Salisbury, JJ Peran UHPLC dina ngembangkeun ubar. J. Séptémber Élmu. 30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM aspék dasar tur praktis kromatografi cair tekanan ultrahigh pikeun separations gancang. Wu, N. & Clausen, AM aspék dasar tur praktis kromatografi cair tekanan ultrahigh pikeun separations gancang.Wu, N. jeung Clausen, AM aspék dasar tur praktis kromatografi cair tekanan tinggi pikeun separation gancang. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM Aspék dasar tur praktis kromatografi cair tekanan ultra luhur pikeun separation gancang.Wu, N. jeung Clausen, AM aspék dasar tur praktis kromatografi cair tekanan tinggi pikeun separation gancang.J. Séptémber Élmu. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Paké kromatografi cair ultra-kinerja dina ngembangkeun farmasi. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Paké kromatografi cair ultra-kinerja dina ngembangkeun farmasi.Ren, SA na Chelischeff, P. Pamakéan kinerja tinggi ultra kromatografi cair dina ngembangkeun farmasi. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA na Chelischeff, P. Aplikasi kromatografi cair ultra-kinerja dina ngembangkeun ubar.J. Kromatografi. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Hidrogél macroporous monolithic diturunkeun tina émulsi minyak-dina-cai kalayan fase internal anu luhur pikeun pamurnian éfisién enterovirus 71. Kimia. proyék. Jurnal 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Peran kromatografi cair dina proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Peran kromatografi cair dina proteomics.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. sarta Wilkins, JA Peran kromatografi cair dina proteomics. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. sarta Wilkins, JA Peran kromatografi cair dina proteomics.J. Kromatografi. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Tren anyar dina separations kromatografi cair fase tibalik tina péptida terapi jeung protéin: Téori jeung aplikasi. & Guillarme, D. Tren anyar dina separations kromatografi cair fase tibalik tina péptida terapi jeung protéin: Téori jeung aplikasi. & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматографира хроматографира теория и приложения. & Guillarme, D. Tren anyar dina pamisahan péptida terapi jeung protéin ku fase sabalikna kromatografi cair: téori jeung aplikasi. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Guillarme, D.sarta Guillarmé, D. Tren anyar dina separation of péptida terapi jeung protéin ku fase sabalikna kromatografi cair: téori jeung aplikasi.J. Pharm. Élmu Biomédis. dubur. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Separation dua diménsi péptida ngagunakeun sistem RP-RP-HPLC kalawan pH béda dina dimensi separation kahiji jeung kadua. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Separation dua diménsi péptida ngagunakeun sistem RP-RP-HPLC kalawan pH béda dina dimensi separation kahiji jeung kadua.Gilar M., Olivova P., Dali AE na Gebler JK Separation dua diménsi péptida ngagunakeun sistem RP-RP-HPLC kalawan pH béda dina dimensi separation kahiji jeung kadua.Gilar M., Olivova P., Dali AE sareng Gebler JK Separation dua diménsi péptida ngagunakeun nilai pH béda dina dimensi separation kahiji jeung kadua ngagunakeun sistem RP-RP-HPLC. J. Séptémber Élmu. 28 (14), 1694-1703 (2005).
Fellitti, S. et al. Panalungtikan ngeunaan mindahkeun massa jeung ciri kinétik kolom kromatografi kinerja luhur dipak kalawan partikel C18 pinuh porous jeung superficially porous leuwih leutik batan 2 µm. J. Séptémber Élmu. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Tren panganyarna sareng tantangan analitis dina isolasi, idéntifikasi, sareng validasi péptida bioaktif tutuwuhan. dubur. Makhluk anal. Kimia. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. bentang Protéomic karajaan kahirupan. Alam 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. et al. Pasca-perlakuan péptida terapi ku kromatografi cair preparative. Molekul (Basel, Swiss) 26(15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Campuran-mode kromatografi jeung aplikasi na biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. Campuran-mode kromatografi jeung aplikasi na biopolymers.Anu, Yu. jeung Geng, X. Kromatografi modeu campuran sarta aplikasina pikeun biopolymér. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yang, Y. & Geng, X. Kromatografi mode campuran sarta aplikasi na di biopolymers.Anu, Yu. sarta Gene, X. Kromatografi mode campuran sarta aplikasi na biopolymers.J. Kromatografi. A 1218(49), 8813-8825 (2011).