Javascript är för närvarande inaktiverat i din webbläsare. Vissa funktioner på denna webbplats fungerar inte när javascript är inaktiverat.
Registrera dig med dina specifika uppgifter och specifika läkemedel av intresse så matchar vi informationen du ger med artiklar i vår omfattande databas och skickar dig omedelbart en PDF-kopia.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7, 6, 7, Livia Manperia University, Catzellal University, Catzellal University of C1lin, Manperi, Catzellal, Catzella 95123, Italien;2 Centrum för experimentell onkologi och hematologi, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italien;3 Medical Oncology, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italien;4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italien;5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italien;6 Institutionen för biomedicinska och bioteknologiska vetenskaper, University of Catania, Medical Genetics, Catania, Italien, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italien Kommunikation: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, e-post [e-postskyddad];[email protected] Syfte: Könscellsmutationer i BRCA1 och BRCA2 och etablerad bröstcancer (BC), äggstock (OC) och annat associerat med en livstidsrisk för cancer. Att testa för BRCA-genen är nyckeln för att bedöma individuell risk, såväl som för att hitta förebyggande metoder hos friska bärare och skräddarsy behandlingar hos cancerpatienter. Förekomsten av BRCA2 varierar stort över både geografiska och geografiska data. ogena varianter i sicilianska familjer, studier som specifikt riktar sig till populationer i östra Sicilien saknas. Syftet med vår studie var att undersöka förekomsten och distributionen av BRCA patogena könslinjeförändringar i en kohort av BC-patienter från östra Sicilien och att bedöma deras associering med specifika BC-egenskaper med hjälp av nästa generations närvaro av tumörsekvenser och tumörer med överallindex, överlevnadssekvenser och tumörer. 35 patienter (9 %) hade en BRCA-patogen variant, 17 (49 %) i BRCA1 och 18 (51 %) i BRCA2.BRCA1-förändringar är vanliga hos trippelnegativa BC-patienter, medan BRCA2-mutationer är vanligare hos luminala BC-patienter. Jämfört med icke-bärare, gav patienter med en övergripande BRCA1-gradig tumörvarianter och proliferativa BRCA1-varianter. mutationsstatus hos BC-patienter från östra Sicilien och bekräftar NGS-analysens roll för att identifiera patienter med ärftlig BC. Sammantaget överensstämmer dessa data med tidigare bevis som stöder BRCA-screening för korrekt förebyggande och behandling av cancer hos mutationsbärare.
Bröstcancer (BC) är den vanligaste maligniteten i världen och den dödligaste cancern hos kvinnor.1 De biologiska egenskaperna som bestämmer BC-prognos och kliniskt beteende har studerats omfattande och delvis belysts över tiden. Faktum är att flera surrogatmarkörer för närvarande används för att klassificera BC i olika molekylära subtyper. De är östrogen (R) och receptor för tillväxtfaktor (ER) och receptor för human tillväxt (ER) 2) amplifiering, proliferationsindex Ki-67 och tumörgrad (G).2 Kombinationen av dessa variabler identifierade följande BC-kategorier: 1) Luminala tumörer, som uppvisade ER- och/eller PgR-uttryck, stod för 75 % av BCs. Dessa tumörer delades ytterligare in i Luminal A, när Ki-67 var under 20 % och HER-20 och HER var lika med B2, 20 % och HER-20 och HER. närvaro av HER2-amplifiering, oavsett proliferationsindex;2) HER2+-tumörer som är ER- och PgR-negativa men visar HER2-förstärkning. Denna grupp står för 10 % av alla brösttumörer;3) Trippelnegativ bröstcancer (TNBC), som inte visar ER- och PgR-uttryck och HER2-amplifiering, står för cirka 15 % av bröstcancerfallen.2-4
Bland dessa BC-subtyper representerar tumörgrad och proliferationsindex tvärsnittsbiomarkörer som är direkt och oberoende associerade med tumöraggressivitet och prognos.5,6
Utöver de tidigare nämnda biologiska egenskaperna har de ärftliga genetiska förändringarnas roll som leder till utvecklingen av BC blivit allt viktigare under de senaste åren.7 Cirka 1 av 10 brösttumörer ärvs på grund av förändringar i könscellerna i specifika gener.8 Två stora epidemiologiska studier som involverade mer än 180 000 kvinnor har nyligen identifierat åtta, BRCA, BRCA, A1, BRCA 2, CHK2, PALB2, RAD51C och RAD51D) som är primärt ansvariga för ärftlig BC. Bland dessa gener visade BRCA1 och BRCA2 (nedan kallade BRCA1/2) den starkaste korrelationen med utvecklingen av brösttumörer. , pankreas, kolorektalt och melanom. Från åldern 13 till 80 år är den kumulativa incidensen av BC 72 % hos kvinnor med en patogen BRCA1-variant (PV) och 69 % hos kvinnor med BRCA2 PV.14
En nyligen publicerad publikation tyder på att risken för BC beror på typen av PV. I själva verket, jämfört med patogena trunkeringsvarianter, är påfallande missense-varianter, särskilt i BRCA1-genen, associerade med en minskad risk för BC, särskilt hos äldre kvinnor.15
Närvaron av BRCA1 eller BRCA2 PV var associerad med olika biologiska och kliniskt patologiska särdrag.16,17 BRCA1-associerade BCs tenderar att vara kliniskt aggressiva, dåligt differentierade och mycket proliferativa. Dessa tumörer är vanligtvis trippelnegativa och har en tidig ålder för debut. Tumörer som förekommer hos BRCA2-muterade patienter uppvisar typiskt välgraderade indifferentierade och proliferativa tumörer. s är vanligare i lumen B och förekommer vanligtvis hos äldre vuxna.16-18 Noterbart ökar mutationer i BRCA1 och BRCA2 känsligheten för specifika behandlingar, inklusive platinasalter och riktade läkemedel som poly(ADP-ribos) polymerashämmare (PARPi).19,20
Under de senaste åren har implementeringen av nästa generations sekvensering (NGS) i klinisk praxis gjort det möjligt för ett ökande antal BC-patienter att genomgå molekylära tester för cancerkänslighetssyndrom, inklusive BRCA1/2.21. Samtidigt är definitioner baserade på exakta kriterier avseende familjehistoria, demografiska och kliniskt patologiska egenskaper värda att bättre identifiera individuella kännetecken. mulera på BRCA1/2-screening i specifika populationer, vilket belyser skillnader mellan geografiska regioner.24–27 Även om det finns rapporter om BC-kohorten på västra Sicilien, finns färre data tillgängliga om BRCA1/2-screening i den östra Siciliens befolkning.28,29
Vi beskriver här resultaten av könslinje BRCA1/2-screening hos BC-patienter från östra Sicilien, vilket ytterligare korrelerar närvaron av BRCA1- eller BRCA2-mutationer med de huvudsakliga klinisk-patologiska egenskaperna hos dessa tumörer.
En retrospektiv studie genomfördes vid "Center for Experimental Oncology and Hematology" vid Policlinico Hospital.Rodolico – San Marco i Catania.Från januari 2017 till mars 2021 remitterades totalt 455 patienter med bröst- och äggstockscancer, melanom, pankreascancer eller prostatacancer till vår laboratorietest av molekylär diagnostik i enlighet med vår laboratorietest BRCA/2. Helsingfors och alla deltagare lämnade skriftligt informerat samtycke före molekylär analys.
Histologiska och biologiska egenskaper (ER, PgR, HER2-status, Ki-67 och grad) av BC utvärderades på kärnbiopsi eller kirurgiska prover, med hänsyn till endast aggressiva tumörkomponenter. Baserat på dessa egenskaper klassificerades BC enligt följande: luminal A (ER+ och/eller PgR+, HER2-, B0 Ki-+ ER, 7 %) och HER2-, B0 Ki-+ ER, 7, 2-, B0, Ki-6 -67≥20%), luminal B-HER2+ (ER och/eller PgR+, HER2+), HER2+ (ER och PgR-, HER2+) eller trippelnegativ (ER och PgR-, HER2-).
Innan BRCA1- och BRCA2-mutationsstatus bedömdes, genomförde ett multidisciplinärt team inklusive en onkolog, en genetiker och en psykolog en tumörgenetikkonsultation för varje patient för att fastställa förekomsten av BRCA1 och/eller BRCA1.eller individer med hög risk för PV i BRCA2-genen.Patienturval utfördes enligt riktlinjerna från Italian Society of Medical Oncology (AIOM) och lokala sicilianska rekommendationer.30,31 Dessa kriterier inkluderar: (i) familjehistoria av kända patogena varianter i känslighetsgener (t.ex. BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) hanar med BC;(iii) de med BC och OC;(iv) kvinnor med BC <36 år, TNBC <60 år eller bilateral BC <50 år;(v) personlig medicinsk historia av BC <50 år och minst en första gradens släkting: (a) BC < 50 år;(b) icke-mucinös och icke-gränsöverskridande OC oavsett ålder;(c) bilateral BC;(d) manlig BC;(e) pankreascancer;(f) prostatacancer;(vi) två eller flera personlig historia av BC > 50 år och familjehistoria av BC, OC eller pankreascancer för släktingar som är första gradens släktingar till varandra (inklusive släktingar med vilka hon är första gradens släkting);(vii) Personlig historia av OC och minst en första gradens släkting: (a) BC <50 år;(b) NOC;(c) bilateral BC;(d) manlig BC;(vii) hona med höggradig serös OC.
Ett 20 mL perifert blodprov erhölls från varje patient och samlades in i EDTA-rör (BD Biosciences). Genomiskt DNA isolerades från 0,7 mL helblodsprover med hjälp av QIAsymphony DSP DNA Midi-kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italien) enligt tillverkarens instruktioner och passerade genom en Fishormo Performometer 3.0, USA Qubitor® 3.0. kvantifiering.Målanrikning och biblioteksberedning utförs av Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, redo att laddas i Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit för automatiserad biblioteksberedning enligt tillverkarens instruktioner. Kitet består av två multiplexa PCR-primerpooler som kan användas för att studera alla BRCA1 (NM_0070)_00730-genen (NM_0073) (NM_0073) (NM_0073) och BRCA1 (NM_0073)-genen. kort och gott sattes 15 µL av varje utspätt prov-DNA (10 ng) till streckkodade plattor för biblioteksberedning och alla reagenser och förbrukningsvaror laddades på Ion Chef™-instrumentet. Automatiserad biblioteksberedning och streckkodade provbibliotekspoolning utfördes sedan på Ion Chef™-instrumentet. Antalet preparerade bibliotek utvärderades sedan av a Qumorific®, Fish0, Fisher, 3. MA, USA) enligt tillverkarens instruktioner. Slutligen kombineras biblioteken i ekvimolära förhållanden i Ion Chef™-biblioteksprovrör (streckkodade rör) och laddas på Ion Chef™-instrumentet. Sekvenseringen utfördes med ett Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific)-instrument (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific 510-analys utfördes av Ammo Fisher Scientific) av AmData Scientific. plicon Suite (SmartSeq srl) och Ion Reporter Software.
All variantnomenklatur följde de nuvarande riktlinjerna från Human Genome Variation Consortium, tillgängliga online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Den kliniska betydelsen av BRCA1/2-varianter definierades genom att använda klassificeringen av International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutenigons-databasen, https://org. UP, BRCAEXCHANGE , ClinVar, IARC_LOVD och UMD. Klassificeringen inkluderar fem distinkta riskkategorier: benign (kategori I), sannolikt benign (kategori II), variant av osäker signifikans (VUS, kategori III), sannolikt patogen (kategori IV), och patogen (kategori V) och patogen (kategori V, även analyserad av databasens funktion och 3-funktioner). 32
För att tilldela potentiell klinisk betydelse till varje VUS användes följande beräkningsalgoritmer för proteinförutsägelse: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) och Align_agvgvah.GD_aggvgvah.GD_aggvg. input.php). Varianter klassificerade som klass 1 och 2 ansågs vildtyp.
Sanger-sekvensering bekräftade förekomsten av varje patogen variant. Kortfattat designades ett par specifika primrar för varje detekterad variant genom att använda BRCA1- och BRCA2-genreferenssekvenserna (NG_005905.2, NM_007294.3 och NG_012772.3, NM_000059, NM_000059, respektive följt av PCR). cing.
Patienter som testade negativt för BRCA1/2-genen testades med multiplexligationsberoende probeamplifiering (MLPA) enligt tillverkarens instruktioner för att bedöma förekomsten av stora genomiska omarrangemang (LGR). Kortfattat denatureras DNA-prover och upp till 60 BRCA1- och BRCA2-genspecifika prober används, var och en detekterar en specifik DNA-sekvens av cirka 60 amplifieringsprodukter. av PCR-amplikoner, analyserades sedan med kapillärelektrofores och med Cofalyser.Net-programvaran i samband med lämpliga batchspecifika Cofalyser-tabeller (www.mrcholland.com).
Utvalda klinisk-patologiska variabler (histologisk grad och Ki-67 % proliferationsindex) associerades med närvaron av BRCA1/2 PV, beräknade med Prism-mjukvaran v. 8.4 med Fishers exakta test som antog att p-värde <0,05 var signifikant.
Mellan januari 2017 och mars 2021 screenades 455 patienter för mutationer i könsceller BRCA1/2. Mutationstestning utfördes vid Policlinico Hospital's Center for Experimental Oncology and Hematology. Enligt den sicilianska riktlinjen (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indic1,Vendic,N.201,N.2010,N. 020), Rodolico i Catania – San Marco” totalt, 389 patienter. Det fanns bröstcancer, 37 äggstockscancer, 16 pankreascancer, 8 prostatacancer och 5 melanom.Fördelningen av patienter efter cancertyp och analysresultat visas i figur 1.
Figur 1 visar ett flödesschema som visar en översikt över studien. Patienter med bröst-, melanom-, bukspottkörtel-, prostata- eller äggstockstumörer testades för mutationer i BRCA1- och BRCA2-generna.
Förkortningar: PV, patogen variant;VUS, variant av osäker betydelse;WT, vildtyp BRCA1/2-sekvens.
Vi fokuserade selektivt våra studier på bröstcancerkohorter. Patienterna hade en medianålder på 49 år (intervall 23-89) och var övervägande kvinnor (n=376, eller 97%).
Av dessa försökspersoner hade 64 (17 %) BRCA1/2-mutationer och alla var kvinnor. Trettiofem (9 %) hade PV och 29 (7,5 %) hade VUS. Sjutton (48,6 %) av de 35 patogena varianterna förekom i BRCA1 och 18 (51,4 %) i BRCA2, medan 80 (48,6 %) av de patogena varianterna uppträdde i BRCA1 och 18 (51,4 %) i BRCA2, medan 80 (48,6 %) av de patogena varianterna förekom i BRCA1 och 18 (51,4 %) i BRCA2, medan 8 %) förekom i BRCA 2,8 %) (8 %) (Figur 1 och 2). LGR var inte närvarande i MLPA-analysen.
Figur 2. Analys av BRCA1- och BRCA2-mutationer hos 389 bröstcancerpatienter.(A) Fördelning av patogena varianter (PV) (röd), varianter av osäker signifikans (VUS) (orange) och WT (blå) hos 389 bröstcancerpatienter;(B) 389 bröstcancerpatienter Trettiofem (9 %) hade BRCA1/2 patogena varianter (PV). Bland dem var 17 (48,6 %) BRCA1 PV-bärare (mörkröd) och 18 (51,4 %) var BRCA2-bärare (ljusröd);(C) 29 (7,5 %) av 389 försökspersoner bar VUS, 5 (17,2 %) BRCA1-gener (mörkorange) och 24 (82,8 %) BRCA2-gener (ljusorange).
Förkortningar: PV, patogen variant;VUS, variant av osäker betydelse;WT, vildtyp BRCA1/2-sekvens.
Vi undersökte därefter prevalensen av BC molekylära subtyper hos patienter med BRCA1/2 PV. Fördelningen inkluderade 2 (5,7 %) luminal A, 15 (42,9 %) luminal B, 3 (8,6 %) luminal B-HER2+, 2 (5,7 %) HER2+ och 13 (37,1 %) patienter med TN2+, 13 (37,1 %) TNluminal (37,1 %) TNluminal . B BC, 2 (11,8 %) hade HER2+-sjukdom och 10 (58,8 %) hade TNBC. Tumörer utan BRCA1-mutationer var antingen luminal A eller luminal B-HER2+ (Figur 3). I den BRCA2-positiva undergruppen var 10 (55,6 %) tumörer luminal B, 7ER (TN) 6 %). BC och 2 (11,1%) var luminal A (Figur 3). Inga HER2+-tumörer var närvarande i denna grupp. Således är BRCA1-mutationer utbredda hos TNBC-patienter, medan BRCA2-förändringar är dominerande hos lumen B-individer.
Figur 3 Prevalensen av bröstcancersubtyper hos patienter med patogena varianter i BRCA1 och BRCA2. Histogram som visar fördelningen av BRCA1- (mörkröd) och BRCA2- (ljusröd) PV:er bland molekylära subtyper av bröstcancerpatienter. Antalet som rapporteras i varje ruta representerar procentandelen patienter med BRCA1- och BRCA2-subtyp PV för varje subtyp av breastcancer.
Förkortningar: PV, patogen variant;HER2+, human epidermal tillväxtfaktorreceptor 2 positiv;TNBC, trippelnegativ bröstcancer.
Därefter utvärderade vi typen och genlokaliseringen av BRCA1 och BRCA2 PVs. I BRCA1 PV observerade vi 7 enkelnukleotidvarianter (SNVs), 6 deletioner, 3 duplikationer och 1 insättning. Endast en mutation (c.5522delG) representerar en ny upptäckt. Den vanligaste BRCA3CAT-delen upptäcktes i båda patienterna. förändring involverar en deletion av fem nukleotider (CTAAT) i BRCA1 exon 15, vilket resulterar i substitution av aminosyran leucin med tyrosin vid kodon 1679, och på grund av en translationsramförskjutning med ett förutsagt alternativt stoppkodon leder det till för tidig proteintrunkering. Alla andra förändringar har rapporterats i endast ett fall av conplicets-regionen. c.4357+1G>T) (tabell 1).
När det gäller BRCA2 PV, observerade vi 6 deletioner, 6 SNVs och 2 duplikationer. Ingen av förändringarna som hittats är nya. Tre mutationer återkom i vår population, c.428dup och c.8487+1G>A observerade i 3 försökspersoner, följt av c.5851_5854delAGTT återvunna i två fall av C. 28 återvunna fall. 5 av BRCA2, som förutspås koda för ett trunkerat, icke-funktionellt protein. c.8487+1G>A-mutationen inträffar i den introniska regionen av BRCA2 intron 19 (± 1,2) och påverkar splitsningskonsensussekvensen, vilket resulterar i förändrad splitsning som resulterar i onormal eller frånvarande 458-58-58-58-protein-protein. otiddeletion från nukleotidpositionerna 5851 till 5854 i den kodande exon 10 av BRCA2-genen och resulterar i en translationell ramförskjutning med ett förutsagt alternativt stoppkodon (p.S1951WfsTer). Noterbart, som tidigare rapporterats, involverade båda förändringarna c.631G>A och c.2A den första mutationen av patienten och c.700 den första detekterade patienten. enosin (A) i BRCA2 exon 7 med en guanin (G) innehållande nukleotid vilket resulterar i en förändring av valin till isoleucin vid kodon 211, isoleucin Aminosyra är en aminosyra med mycket liknande egenskaper. Denna förändring påverkar normal mRNA-splitsning. Den andra varianten är lokaliserad i en intronisk region och resulterar i en dubbel A till 13 thymin genen för BRCA 13 en substitution av BRCAon 13. 7008-2A>T förändring kan generera flera transkript av olika längder. Dessutom, i gruppen av BRCA2 PV, var 4 av 18 förändringar (22,2%) introniska.
Vi kartlade sedan BRCA1/2 skadliga mutationer i funktionella domäner och proteinbindande regioner (Fig. 4). I BRCA1-genen var 50 % av PV:erna belägna i bröstcancerklusterregionen (BCCR), medan 22 % av mutationerna var lokaliserade i äggstockscancerklusterregionen (OCCR) (Fig. 5 BC var i PV-regionen 3 %, I varianten av BRCA 2, 7 och 7). 42,8 % av mutationerna var lokaliserade i OCCR (Fig. 4B). Därefter bedömde vi läget för PV inom BRCA1- och BRCA2-proteindomänerna. För BRCA1-proteinet hittade vi tre PV: er i loop- och coiled coil-domänerna, och två mutationer i BRCT-domänen (Fig. 4A 4A-proteinet, i BRC-proteinet, i BRC-proteinet, i BRC-proteinet, i BRC-domänen, i repetition). tronic och 3 exoniska förändringar detekterades i oligo/oligosackarid-bindande (OB) och torn (T) domäner (Figur 4B).
Figur 4 Schematisk representation av BRCA1- och BRCA2-proteiner och lokalisering av patogena varianter. Den här figuren visar fördelningen av BRCA1 (A) och BRCA2 (B) patogena varianter hos bröstcancerpatienter. Exoniska mutationer visas i blått, medan introniska varianter visas i orange. Stapelhöjden representerar antalet fall. BRCA1- och BRCA1-proteinslingornas rapporterade funktionella dominer (proteina) är dominerna BRCA1. i (RING) och en nukleär lokaliseringssekvens (NLS), en coiled-coil-domän, en SQ/TQ-klusterdomän (SCD) och en BRCA1 C-terminal domän (BRCT).(B) BRCA2-proteinet innehåller åtta BRC-upprepningar, en DNA-bindande domän med en helixdomän (helicalaccle), trefaldigt oligonid-oligon,OB-bindande charotid-oligon,OB-bindande domän. (T), och ett NLS på C-sidan. Områden som kallas bröstcancerklusterregionen (BCCR) och ovariecancerklusterregionen (OCCR) visas längst ner.*Representerar mutationer som bestämmer stoppkodon.
Vi undersökte sedan BC klinikopatologiska egenskaper som kan korrelera med närvaron av BRCA1/2 PV. Kompletta kliniska journaler fanns tillgängliga för 181 BRCA1/2-negativa patienter (icke-bärare) och alla bärare (n = 35). Det fanns en korrelation mellan tumörproliferationshastighet och grad.
Vi beräknade fördelningen av Ki-67 baserat på medianen för vår kohort (25%, intervall <10-90%). Försökspersoner med Ki-67 < 25% definierades som "lågt Ki-67", medan individer med värden ≥ 25% ansågs vara "hög Ki-67". Signifikanta Ki-67-skillnader (1 CA-pv) hittades mellan 1 CA-pv-skillnader och < 0 CA-carriers. bärare (fig. 5A).
Figur 5 Korrelation av Ki-67 med gradfördelning hos bröstcancerkvinnor med och utan BRCA1 och BRCA2 PVs.(A) Boxplot som visar median Ki-67-värden hos 181 icke-bärare BC-patienter jämfört med BRCA1 (18) eller BRCA2 (17) PV-patienter. P-värden under 0,5 ansågs vara statistiskt signifikanta till hans cancerpatienter till 0,5. klassgrupper (G2 och G3) enligt BRCA1- och BRCA2-mutationsstatus (WT-personer, BRCA1- och BRCA2-PV-bärare).
På samma sätt undersökte vi om tumörgraden korrelerade med närvaron av BRCA1/2 PV. Eftersom G1 BC saknades i vår population delade vi in ​​patienterna i två grupper (G2 eller G3). I enlighet med Ki-67-resultaten avslöjade analysen en statistiskt signifikant korrelation mellan tumörgrad och BRCA1-mutation, med en högre andel av G3-bärare (<Fi0p) jämfört med G3-bärare (0p) (0p)-bärare. e 5B).
Framsteg inom DNA-sekvenseringsteknologi har möjliggjort oöverträffade framsteg inom BRCA1/2 genetisk testning, med avgörande implikationer för patienter med en familjehistoria av cancer. Hittills har cirka 20 000 BRCA1/2-varianter identifierats och klassificerats enligt American Society of Medical Genetics 35 och ENIGMA6-systemet i BRCA-området. s.37 Inom Italien varierade andelen BRCA1/2 PV från 8 % till 37 %, vilket visar stor variation inom landet.38,39 Med en befolkning på nästan 5 miljoner är Sicilien den femte största regionen i Italien när det gäller antalet invånare. Även om det finns data om fördelningen av BRCA1/2 i den västra delen av den västra delen av landet, finns det inga omfattande bevis i den västra delen av landet.
Vår studie är en av de första rapporterna om incidensen av BRCA1/2 PV hos BC-patienter i östra Sicilien.28 Vi fokuserade vår analys på BC, eftersom detta är den överlägset vanligaste sjukdomen i vår kohort.
Vid testning av 389 BC-patienter bar 9 % BRCA1/2 PV, jämnt fördelat mellan BRCA1 och BRCA2. Dessa resultat överensstämmer med de som tidigare rapporterats i den italienska befolkningen.28 Intressant nog var 3 % (13/389) av vår kohort män. Denna frekvens är högre än förväntat för manlig bröstcancer (1 % av alla BC1-patienter baserade på muterad risk för BRCA) (1 % av alla BC1-patienter), vi återspeglar risken för BRCA 02 BC. , utvecklade ingen av dessa män en BRCA1/2 PV, så de var kandidater för ytterligare molekylär analys för att utesluta förekomsten av mindre vanliga mutationer såsom PALB2, RAD51C och D, bland annat. Varianter av osäker signifikans återfanns i 7 % av försökspersonerna där BRCA2 VUS var uppenbart. Även detta resultat är överensstämmande med preexist 414 bevis,28.
När vi analyserade fördelningen av BC molekylära subtyper i BRCA1/2 mutanta kvinnor, bekräftade vi kända associationer mellan TNBC och BRCA1 PV (58,8%) och mellan luminal B BC och BRCA2 PV (55,6%).
Vi fokuserar sedan på typen och platsen för BRCA1/2 PV. I vår kohort var den vanligaste BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT. Även om Incorvaia et al.beskrev inte denna variant i sin sicilianska kohort, andra författare har rapporterat den som en könslinje BRCA1 PV.34 Flera BRCA1 PVs hittades i vår kohort – t.ex. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA och c.5266dupC – som har observerats i dessa två Sici- och BRc1-mutationer (28 av dessa två och 1G muter). .5266dupC) är vanligt förekommande hos ashkenaziska judar i Öst- och Centraleuropa (Polen, Tjeckien), slovenska, österrikiska, ungerska, vitryska och tyska ), 44,45 och, i USA och Argentina, definierades nyligen som en "återkommande könscellsvariant" hos italienska patienter med BC och OC-patienter med BC och OC5434c tidigare. i Palermo och Messina. Intressant nog, även Incorvaia et al.hittade c.3253dupA-varianten i vissa familjer i Catania.28 De mest representativa BRCA2 PV:erna är c.428dup, c.5851_5854delAGTT och den introniska varianten c.8487+1G>A, som har rapporterats mer detaljerat 28 hos en patient i Palermo med c.428dup-hus observerade i c.428dup, c. nordvästra Sicilien, främst i Trapani- och Palermo-regionerna, medan c.5851_5854delAGTT PV observerades i hushåll i nordvästra Sicilien. 8487+1G>A-varianten var vanligare hos försökspersoner från Messina, Palermo och Caltanissetta.28 Rebbeck et al.tidigare beskrivit c.5851_5854delAGTT-ändringen i Colombia.37 En annan BRCA2 PV, c.631+1G>A, har hittats hos BC- och OC-patienter från Sicilien (Agrigento, Siracusa och Ragusa).28 Noterbart observerade vi samexistensen av två BRCA2-varianter hos samma patient. som vi antog vara segregerade i cis-läge, som tidigare rapporterats så.34,46 Dessa BRCA2-uble-mutationer observeras verkligen ofta i den italienska regionen och har visat sig introducera för tidigt stoppkodon, vilket påverkar splitsning av budbärar-RNA och orsakar att BRCA2-proteinet misslyckas.47,48
Vi kartlade också BRCA1 och BRCA2 PVs i förmodade OCCR- och BCCR-regioner av proteindomäner och gener. Dessa regioner beskrevs av Rebbeck et al.som riskområden för att utveckla äggstocks- respektive bröstcancer.49 Emellertid är bevisen angående sambandet mellan lokaliseringen av könslinjevarianter och risken för bröst- eller äggstockscancer fortfarande kontroversiellt.28,50-52 I vår befolkning var BRCA1 PV:er övervägande lokaliserade i BCCR-regionen, medan BRCA2 PV:er var övervägande i de OCCR-regioner som vi inte kunde hitta mellan. OCCR- och BCCR-regioner och BC-egenskaper. Detta kan bero på det begränsade antalet patienter med BRCA1/2-mutationer. Ur ett proteindomänperspektiv är BRCA1-PV:er fördelade längs hela proteinet, och BRCA2-förändringar finns företrädesvis i BRC-repeteringsdomänen.
Slutligen korrelerade vi BC klinikopatologiska särdrag med BRCA1/2 PV. På grund av det begränsade antalet patienter som inkluderades, fann vi bara en signifikant korrelation mellan Ki-67 och tumörgraden. Även om bedömningen och tolkningen av Ki-67 fortfarande är något kontroversiell, är det säkert att höga proliferativa frekvenser är förknippade med ökad risk för återfall av sjukdomen och minskad överlevnad av sjukdomen och minskad överlevnad. låg” Ki-67 är 20%. Denna tröskel gäller dock inte för vår BRCA1/2-mutationspatientpopulation, som har ett medianvärde för Ki-67 på 25%.Denna trend i höga Ki-67-frekvenser kan förklaras av prevalensen i våra luminala B- och TNBC-kohorter, av vilka få luminala Aver-tumörer tycks förekomma, men några tumörer av luminal Aver-avskärning tycks förekomma. stratifiera patienter enligt deras prognos.53,54 Från resultaten av vår analys är en signifikant korrelation inte överraskande.Förekommer mellan höga Ki-67 och grader och närvaron av BRCA1 PV. Faktum är att BRCA1-relaterade tumörer är typiska för TNBC och uppvisar mer aggressiva egenskaper.16,17
Sammanfattningsvis ger denna studie en rapport om mutationsstatusen för BRCA1/2 i en BC-kohort från östra Sicilien. Sammantaget överensstämmer våra fynd med redan existerande bevis, både när det gäller mutationsprevalens och klinikopatologiska egenskaper i BC. Fler studier i större populationer av BRCA1/2-muterade BC-patienter, såsom användning av multigenomer, är PV för att bedöma förekomsten av mutation och PV. oftare än BRCA1/2. Detta kommer att möjliggöra identifiering och korrekt hantering av det ökande antalet patienter med ökad risk för cancer på grund av genetiska mutationer.
Vi bekräftade att patienter undertecknade informerat samtycke för att lämna ut sina tumörprover anonymt för forskningsändamål. Alla patienter undertecknade skriftligt informerat samtycke enligt Helsingforsdeklarationen. Enligt policyn för AOU Policlinico "G.Rodolico – S.Marco" var denna studie undantagen från etisk granskning eftersom BRCA1/2-analysen utfördes i enlighet med patienternas skriftliga samtycke för att alla patienter gav sitt samtycke till den kliniska praxisen. .
Vi tackar Prof. Paolo Vigneri för hans hjälp i vården av bröstcancerpatienter som begärts av Etikkommittén.
Federica Martorana rapporterar honoraria från Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. De andra författarna förklarar inga intressekonflikter i detta verk.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN uppskattar förekomsten och dödligheten av 36 cancerformer i 185 länder runt om i världen.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi:21603.32:21603.