Tack för att du besöker Nature.com. Webbläsarversionen du använder har begränsat stöd för CSS. För bästa upplevelse rekommenderar vi att du använder en uppdaterad webbläsare (eller stänger av kompatibilitetsläget i Internet Explorer). Under tiden, för att säkerställa fortsatt support, kommer vi att visa webbplatsen utan stilar och JavaScript.
Porösa kiseldioxidpartiklar framställdes med en sol-gel-metod med vissa modifieringar för att erhålla makroporösa partiklar. Dessa partiklar derivatiserades genom reversibel additionsfragmenteringskedjeöverföring (RAFT) polymerisation med N-fenylmaleimid-metylvinylisocyanat (PMI) och styren för att framställa N-fenylmaleimid-fasinterkalering av N-fenylmaleimid-fas-polystyren (PMP) stationär polystyren-fasinterkalering (PMP) pelarfri stål och styren. 1,8 mm id) packades genom uppslamningspackning. Utvärderad PMP-kolonnseparation av en peptidblandning bestående av fem peptider (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucinenkefalin) kromatografisk prestanda för humant serum (US-kromatografisk prestanda, HA) Det teoretiska antalet plattor för peptidblandningen är så högt som 280 000 plattor/m². Vid jämförelse av separationsprestandan för den utvecklade kolonnen med den kommersiella Ascentis Express RP-Amide-kolonnen, observerades att separationsprestandan för PMP-kolonnen var överlägsen den kommersiella kolonnen vad gäller separationseffektivitet och upplösning.
Under de senaste åren har den biofarmaceutiska industrin blivit en växande global marknad med en avsevärd ökning av marknadsandelar. Med den explosiva tillväxten av den biofarmaceutiska industrin1,2,3 är analysen av peptider och proteiner mycket önskvärd. Förutom målpeptiden genereras flera föroreningar under peptidsyntesen, vilket kräver att kroppsreningen av vävnadsproteiner ska renas och vävnadens egenskaper kräver vätskerening. s och celler är en extremt utmanande uppgift på grund av det stora antalet potentiellt detekterbara arter i ett enstaka prov. Även om masspektrometri är ett effektivt verktyg för peptid- och proteinsekvensering, om sådana prover injiceras i masspektrometern i en gång, kommer separationen inte att vara idealisk. Detta problem kan mildras genom att implementera (MS-analys mass-kromater och analys av vätskekromater) vid en given tidpunkt4,5,6. Dessutom, under vätskefasseparation, kan analyter fokuseras i smala områden, och därigenom koncentrera dessa analyter och förbättra MS-detektionskänsligheten. Vätskekromatografi (LC) har avancerat avsevärt under det senaste decenniet och har blivit en populär teknik inom proteomanalys7,8,9,10.
Vätskekromatografi med omvänd fas (RP-LC) används i stor utsträckning för rening och separation av peptidblandningar med användning av oktadecylmodifierad kiseldioxid (ODS) som stationär fas11,12,13. Dock ger RP stationära faser inte tillfredsställande separation av peptider och proteiner på grund av deras komplexa natur 1,4,1 stationära fasstruktur och amphirephilic design som krävs för 1,4,1 stationära faser. att analysera peptider och proteiner med polära och opolära delar för att interagera med och behålla dessa analyter16. Mixed-mode kromatografi, som ger multimodala interaktioner, kan vara ett alternativ till RP-LC för separation av peptider, proteiner och andra komplexa blandningar. Flera mixed-mode stationära faser har förberetts med,1 peptider,1 peptider har använts för,1 och 8 kolonner, peptider, 9,20,21. Blandade stationära faser (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polär interkalering/RPLC) är lämpliga för peptid- och proteinseparationer på grund av närvaron av både polära och icke-polära grupper22,23,24,25,26,27,28 .Liknande uppvisar unika, polära, selektiva, polära grupper med interkalativa, polära bindningar. polära och opolära analyter, eftersom separation beror på interaktionen mellan analyt och stationär fas.Multimodala interaktioner 29, 30, 31, 32. Nyligen har Zhang et al.30 förberedde en stationär fas av dodecylterminerad polyamin och framgångsrikt separerade kolväten, antidepressiva medel, flavonoider, nukleosider, östrogener och flera andra analyter. Den polära interkalatorn har både polära och opolära grupper, så den kan användas för att separera peptider och proteiner som har både hydrofoba och hydrofila kolumnbäddar (C1d-polära kroppar, C1d-polära ämnen, EG. ) är kommersiellt tillgängliga under handelsnamnet Ascentis Express RP-Amide-kolonner, men dessa kolonner används endast för analys av amin 33.
I den aktuella studien bereddes en polär inbäddad stationär fas (N-fenylmaleimid-inbäddad polystyren) och utvärderades för separation av peptider och trypsin-spjälkningar av HSA. Den stationära fasen framställdes med hjälp av följande strategi. Porösa kiseldioxidpartiklar framställdes enligt proceduren som gavs i vår tidigare publikation, med vissa modifieringar av polyethylOS, Preparatet till polyetylOS, Preparatet med vissa modifieringar. , justerades vattenättiksyra för att framställa kiseldioxidpartiklar med stor porstorlek. För det andra syntetiserades en ny ligand, fenylmaleimid-metylvinylisocyanat, och användes för att derivatisera kiseldioxidpartiklar för att framställa en polär inbäddad stationär fas. Den resulterande stationära fasen packades i en kolonn av rostfritt stål med hjälp av 180 mm packning. mekanisk vibration för att säkerställa att en homogen bädd bildas i kolonnen. Utvärdera packad kolonnseparation av peptidblandningar bestående av fem peptider;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) och trypsindigerering av humant serumalbumin (HAS). Peptidblandningen och trypsindigereringen av HSA observerades separera med god upplösning och effektivitet. Kolonnseparationsprestandan för RP-peptiderna jämfördes med PMP-peptiden. och proteiner observerades vara väl upplösta och effektiva på PMP-kolonnen, som var mer effektiv än Ascentis Express RP-amid-kolonnen.
PEG (polyetylenglykol), urea, ättiksyra, trimetoxiortosilikat (TMOS), trimetylklorosilan (TMCS), trypsin, humant serumalbumin (HSA), ammoniumklorid, urea, hexanmetyldisilazan (HMDS), metakryloylklorid (MC, hydroxy), benzogradig polyetylenoxid (HPLC, styren, 4-TEMPOHydroxy), acetyl-MPO, styren trile (ACN), metanol, 2-propanol och aceton köpt från Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
En blandning av urea (8 g), polyetylenglykol (8 g) och 8 ml 0,01 N ättiksyra omrördes i 10 minuter, och sedan tillsattes 24 ml TMOS därtill under iskalla förhållanden. Reaktionsblandningen upphettades vid 40°C i 6 timmar och sedan vid 120 timmar i autoklav, torkades stålet av i 8°C. d vid 70°C i 12 timmar. Den torkade mjuka massan maldes slät i en ugn och kalcinerades vid 550°C i 12 timmar. Tre satser framställdes och karakteriserades för att undersöka reproducerbarhet i partikelstorlek, porstorlek och ytarea.
Genom ytmodifiering av kiseldioxidpartiklar med försyntetiserad ligand fenylmaleimid-metylvinylisocyanat (PCMP) följt av radiell polymerisation med styren, framställdes en polär grupp innehållande förening.Stationär fas för ballast och polystyrenkedjor. Beredningsprocessen beskrivs nedan.
N-fenylmaleimid (200 mg) och metylvinylisocyanat (100 mg) löstes i torr toluen, och 0,1 ml 2,2'-azoisobutyronitril (AIBN) sattes till reaktionskolven för att framställa fenylmaleimid-metylvinylisocyanatblandningen under 3 timmar (C 6 timmar). d i ugn på 40°C i 3 timmar.
Torkade kiseldioxidpartiklar (2 g) dispergerades i torr toluen (100 ml), omrördes och ultraljudsbehandlades i en 500 ml rundbottnad kolv under 10 min. PMCP (10 mg) löstes i toluen och sattes droppvis till reaktionskolven via en dropptratt. Blandningen återloppskokades vid 80 timmar och torkades vid 60 ton och torkades vid 60 ton. °C i 3 timmar. Därefter löstes PMCP-bundna kiseldioxidpartiklar (100 g) i toluen (200 ml) och 4-hydroxi-TEMPO (2 ml) tillsattes i närvaro av 100 µL dibutyltenndilaurat som katalysator. Blandningen omrördes vid 50°C vid 50°C och torkades i 3 timmar vid 50°C i 3 timmar.
Styren (1 ml), bensoylperoxid BPO (0,5 ml) och TEMPO-PMCP-fästa kiseldioxidpartiklar (1,5 g) dispergerades i toluen och spolades med kväve. Polymerisationen av styren utfördes vid 100°C under 12 timmar. Den resulterande produkten tvättades med metanol över natten i reaktionsschemat 1 och torkades med etanol över natten.
Proverna avgasades vid 393 K under 1 timme för att erhålla ett resttryck på mindre än 10-3 Torr. Mängden N2 som adsorberades vid ett relativt tryck av P/P0 = 0,99 användes för att bestämma den totala porvolymen. Morfologin för nakna och ligandbundna kiseldioxidpartiklar undersöktes med silikatprov, scanningelektronisk mikroskopi, Japan och Japan. ed kiseldioxidpartiklar) placerades på en aluminiumkolonn med hjälp av självhäftande koltejp. Guld pläterades på proverna med en Q150T sputterbeläggning, och ett 5 nm Au-skikt avsattes på proverna. Detta förbättrar processeffektiviteten med låga spänningar och ger finkornig, kall sputtering. En termoelektron (Waltham-elementanalys, EA Malvernal, USA)2 element användes för analys av EA Malvernal, USA, Flash. orcestershire, Storbritannien) Mastersizer 2000 partikelstorleksanalysator användes för att erhålla partikelstorleksfördelningen. Nakna kiseldioxidpartiklar och ligandbundna kiseldioxidpartiklar (5 mg vardera) dispergerades i 5 ml isopropanol, ultraljudsbehandlades i 10 minuter, virvlades i 5 minuter och placerades på den optiska bänken i en 5 minuters Mastergravimetric-analys i °C. ett temperaturområde på 30 till 800 °C.
Glasfodrade, smala kolonner av rostfritt stål med dimensioner (100 × 1,8 mm id) packades med användning av slurrypackningsmetoden, med användning av samma procedur som användes i Ref.31. En kolonn av rostfritt stål (glasfodrad, 100 × 1,8 mm id) med en utloppskoppling innehållande en 1 µm fritta ansluts till en slurrypacker (Alltech Deerfield, IL, USA). Bered en stationär fasuppslamning genom att suspendera 150 mg stationär fas av 1,2 lagringsmetanol och metanol som användes i lagringsfasen. som drivlösningsmedel.Fyll kolonnen sekventiellt genom att applicera tryck på 100 MP i 10 minuter, 80 MP i 15 minuter och 60 MP i 30 minuter.Under packningen applicerades mekanisk vibration med två GC-kolonnskakare (Alltech, Deerfield, IL, USA) för att säkerställa enhetlig packning av kolonnen för att förhindra att kolonnen släpps in i skadorna och för att förhindra att kolonnen släpps långsamt. slurrypackningsenheten och anslut en annan koppling till inloppet och till LC-systemet för att kontrollera dess prestanda.
En LC-pump (10AD Shimadzu, Japan), injektor (Valco (USA) C14 W.05) med 50nL injektionsslinga, membranavgasare (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS kapillärfönster konstruerades. Speciell µLC-enhetsdetektor (UV-2075) och ansluter den extra korta glaskolumnen till pelaren och ansluter den extra korta glaskolonnen. bandbreddning. Efter förpackning installerades kapillärer (50 μm id 365 och reducerande unionskapillärer (50 μm) vid 1/16″-utloppet på den reducerande föreningen. Datainsamling och kromatografisk bearbetning gjordes med hjälp av Multichro 2000-mjukvara. Övervakning vid 254 UV-analyser testades för 254 UV-analys. (Northampton, MA).
Albumin från humant serum, lyofiliserat pulver, ≥ 96 % (agarosgelelektrofores) 3 mg blandat med trypsin (1,5 mg), 4,0 M urea (1 mL) och 0,2 M ammoniumbikarbonat (1 mL). Lösningen omrördes i 10 minuter och hölls i ett vattenbad vid 1 quen 7 timmar i 1 quen 7 timmar. TFA. Filtrera lösningen och förvara under 4 °C.
Separation av peptidblandningar och HSA-trypsindigeringar utvärderades separat på PMP-kolonner. Kontrollera separationen av peptidblandningen och trypsindigereringen av HSA med PMP-kolonnen och jämför resultaten med Ascentis Express RP-Amide-kolonnen. Det teoretiska plåtnumret beräknas enligt följande:
SEM-bilder av kala kiseldioxidpartiklar och ligandbundna kiseldioxidpartiklar visas i FIG.2 .SEM-bilder av kala kiseldioxidpartiklar (A, B) visar att, i motsats till våra tidigare studier, är dessa partiklar sfäriska där partiklarna är långsträckta eller har oregelbunden symmetri. Ytan på de ligandbundna kiseldioxidpartiklarna (C, D) är jämnare än ytan på de kala kiseldioxidpartiklarna, vilket kan bero på partiklarnas kedjebeläggning på polystyren.
Avsökningselektronmikroskopbilder av kala kiseldioxidpartiklar (A, B) och ligandbundna kiseldioxidpartiklar (C, D).
Partikelstorleksfördelningarna för nakna kiseldioxidpartiklar och ligandbundna kiseldioxidpartiklar visas i figur 3(A). Volymbaserade partikelstorleksfördelningskurvor visade att storleken på kiseldioxidpartiklarna ökade efter kemisk modifiering (Fig. 3A). Partikelstorleksfördelningsdatan för kiseldioxidpartiklarna från den aktuella studien och den tidigare studien jämförs med partikelstorleken 1(A, 5 är partikelstorleken P, 5 bas). 3,36 μm, jämfört med vår tidigare studie med ett ad(0,5) värde på 3,05 μm (polystyrenbundna kiseldioxidpartiklar)34. Den här satsen hade en snävare partikelstorleksfördelning jämfört med vår tidigare studie på grund av de varierande förhållandena mellan PEG, urea, TMOS och ättiksyrapartikeln i reaktionsblandningen i polystyrenfasen som är lite större än polystyrenfasen. Detta innebär att ytfunktionalisering av kiseldioxidpartiklar med styren endast avsatte ett polystyrenskikt (0,97 µm) på kiseldioxidytan, medan skikttjockleken i PMP-fasen var 1,38 µm.
Partikelstorleksfördelning (A) och porstorleksfördelning (B) för bara kiseldioxidpartiklar och ligandbundna kiseldioxidpartiklar.
Porstorleken, porvolymen och ytarean för kiseldioxidpartiklarna i den aktuella studien anges i tabell 1(B). PSD-profilerna för blotta kiseldioxidpartiklar och ligandbundna kiseldioxidpartiklar visas i figur 3(B). Resultaten är jämförbara med vår tidigare studie. 69 efter kemisk modifiering, som visas i tabell 1(B), och förändringen av kurvan visas i figur 3(B). På liknande sätt minskade porvolymen för kiseldioxidpartiklarna från 0,67 till 0,58 cm3/g efter kemisk modifiering. Den specifika ytarean av de för närvarande studerade kiseldioxidpartiklarna är jämförbar med 1 m2/g16 i vår tidigare studie (som tidigare visades är 1 m2/g11 i). 1(B) minskade också ytarean (m2/g) av kiseldioxidpartiklarna från 116 m2/g till 105 m2/g efter kemisk modifiering.
Resultaten av elementaranalys av den stationära fasen visas i tabell 2. Kolbelastningen i den nuvarande stationära fasen är 6,35 %, vilket är lägre än kolbelastningen i vår tidigare studie (polystyrenbundna kiseldioxidpartiklar, 7,93 %35 respektive 10,21 %) 42. Kolbelastningen av den nuvarande stationära fasen, eftersom SP i den nuvarande stationära fasen, är låg tillsats av styren och pol i den nuvarande stationära fasen. fenylmaleimid-metylvinylisocyanat (PCMP) och 4-hydroxi-TEMPO användes. Kväveviktsprocenten för den nuvarande stationära fasen är 2,21 %, jämfört med 0,1735 respektive 0,85 viktprocent kväve i tidigare studier. s av produkterna (4) och (5) var 2,7 % respektive 2,9 %, medan kolbelastningen för slutprodukten (6) var 6,35 %, som visas i tabell 2. Viktförlusten kontrollerades med PMP stationär fas, och TGA-kurvan visas i figur 4. TGA-kurvan visar en viktförlust på 3 i 6 % eftersom viktförlusten inte är bra, eftersom belastningen endast är 8 % och 5 %. men även N, O och H.
Fenylmaleimid-metylvinylisocyanatliganden valdes för ytmodifiering av kiseldioxidpartiklar eftersom den har polära fenylmaleimidgrupper och vinylisocyanatgrupper. Vinylisocyanatgrupper kan reagera ytterligare med styren genom levande radikalpolymerisation. Det andra skälet är att infoga en grupp som har en måttlig och ingen växelverkan mellan den analytiska fasen och den analytiska fasen med analyten och den analytiska fasen. ylmaleimiddelen har ingen virtuell laddning vid normalt pH. Polariteten för den stationära fasen kan styras av den optimala mängden styren och reaktionstiden för friradikalpolymerisation. Det sista steget i reaktionen (friradikalpolymerisation) är kritiskt och kan ändra polariteten för den stationära fasen. Elementaranalys utfördes för att kontrollera kolbelastningen i dessa stationära faser och ökade reaktionstiden för styren i stationära faser och ökad reaktionstid för den stationära fasen av styren och vi. versa.SPs framställda med olika koncentrationer av styren har olika kolladdningar. Återigen ladda dessa stationära faser i rostfria stålkolonner och kontrollera deras kromatografiska prestanda (selektivitet, upplösning, N-värde, etc.). Baserat på dessa experiment valdes en optimerad formulering för att förbereda den stationära PMP-fasen för att säkerställa kontrollerad polaritet och god analytretention.
Fem peptidblandningar (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucinenkefalin) utvärderades också med användning av en PMP-kolonn med användning av en mobil fas;60/40 (v/v) acetonitril/vatten (0,1 % TFA) vid en flödeshastighet av 80 μL/min. Under optimala elueringsförhållanden är det teoretiska plåtnumret (N) per kolonn (100 × 1,8 mm id) 20 000 ± 100 (200 000 P-plattor/m² T-värden för N-plattor/3 T-plattor). kromatogram visas i figur 5A. Snabb analys på en PMP-kolonn med hög flödeshastighet (700 μL/min), fem peptider eluerades inom en minut, N-värdena var mycket bra, 13 500 ± 330 per kolonn (100 × 1,8 mm id), Motsvarar 5 kolumnstorlekar/03 m, identiskt med 0/03 plåtar. (100 × 1,8 mm id) packades med tre olika partier av PMP stationär fas för att kontrollera reproducerbarheten. Analytkoncentrationen för varje kolumn registrerades med de optimala elueringsförhållandena och antalet teoretiska plattor N och retentionstid för att separera samma testblandning på varje kolumn. Reproducerbarhetsdata för PMP-kolonnerna visas i tabell 4. Den mycket låga reproducerbarheten för TRS visas i tabell 4. .
Separation av peptidblandning på PMP-kolonn (B) och Ascentis Express RP-amidkolonn (A);mobil fas 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), PMP-kolonndimensioner (100 × 1,8 mm id);analytisk Elueringsordningen för föreningarna: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) och 5 (leucin) surt enkefalin)).
En PMP-kolonn (100 × 1,8 mm id) utvärderades för separation av tryptiska smältningar av humant serumalbumin vid högpresterande vätskekromatografi. Kromatogrammet i figur 6 visar att provet är väl separerat och upplösningen är mycket bra. Som visas i kromatogrammet (Figur 6) har HSA-klyvningen delats upp i 17 toppar motsvarande 17 peptider. Separationseffektiviteten för varje topp i HSA-klyvningen beräknades och värdena anges i Tabell 5.
En tryptisk digerering av HSA (100 x 1,8 mm id) separerades på en PMP-kolonn;flödeshastighet (100 µL/min), mobil fas 60/40 acetonitril/vatten med 0,1 % TFA.
där L är kolonnlängden, η är viskositeten för den mobila fasen, ΔP är kolonnmottrycket och u är den mobila fasens linjära hastighet. Permeabiliteten för PMP-kolonnen var 2,5 × 10-14 m2, flödeshastigheten var 25 μL/min och 60/40 v/v PMP/1-kolonnen användes 60/40 v/v PMP/1 vatten. liknade den i vår tidigare studie Ref.34. Permeabiliteten för kolonnen packad med ytporösa partiklar är: 1,7 × 10-15 för 1,3 μm partiklar, 3,1 × 10-15 för 1,7 μm partiklar, 5,2 × 10-15 och 102 μm partiklar för 102 m för 102 μm. μm-partiklar 43. Därför liknar permeabiliteten för PMP-fasen den för 5 μm kärna-skal-partiklar.
där Wx är vikten av kolonnen packad med kloroform, Wy är vikten av kolonnen packad med metanol, och ρ är densiteten för lösningsmedlet. Densiteter av metanol (ρ = 0,7866) och kloroform (ρ = 1,484). Den totala porositeten för SILICA PARTICLES-C31 mm1-kolonner-C31 mm1-kolonner (C31 mm1-kolonner) och C31 mm1-kolonner. s 31 som vi tidigare studerat var 0,63 respektive 0,55. Detta betyder att närvaron av urealigander minskar permeabiliteten för den stationära fasen. Å andra sidan är den totala porositeten för PMP-kolonnen (100 × 1,8 mm id) 0,60. Permeabiliteten för PMP-kolonner-typ är lägre än den C8-kolonner som är packade med C8-kolonner, eftersom C8-kolonner är packade med C8-kolonner. C18-liganderna är bundna till kiseldioxidpartiklarna som linjära kedjor, medan i stationära faser av polystyrentyp bildas det relativt tjocka polymerskiktet runt det. I ett typiskt experiment beräknas kolonnporositeten som:
Figur 7A,B visar PMP-kolonnen (100 x 1,8 mm id) och Ascentis Express RP-Amide-kolonn (100 x 1,8 mm id) med samma elueringsbetingelser (dvs 60/40 ACN/H2O och 0,1 % TFA).) av van Deemter tomten.Utvalda peptidblandningar (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucin Enkephalin) framställdes i 20 µL/Minsta flödeshastighet för båda kolumnerna är 800 µL/min. Minsta flödeshastigheten är 800 µL/min. är Express RP-Amide-kolonnen var 2,6 µm respektive 3,9 µm. HETP-värdena indikerar att separationseffektiviteten för PMP-kolonnen (100 × 1,8 mm id) är mycket bättre än den kommersiellt tillgängliga Ascentis Express RP-Amide-kolonnen (100 × 1,8 mm id A) jämfört med en signifikant minskning av N-flödet (fig. till vår tidigare studie. Den högre separationseffektiviteten för PMP-kolonnen (100 × 1,8 mm id) jämfört med Ascentis Express RP-Amide-kolonnen är baserad på förbättringar i partikelform, storlek och komplexa kolonnpackningsprocedurer som används i det nuvarande arbetet34.
(A) van Deemter-plot (HETP kontra linjär hastighet i mobilfas) erhållen med användning av en PMP-kolonn (100 × 1,8 mm id) i 60/40 ACN/H2O med 0,1 % TFA.(B) van Deemter-plot (HETP kontra linjär hastighet i mobilfas) erhållen med en Ascentis Express RP-00 amid 4 i 00 mm2) kolumn (Acentis Express RP-Amid 4 in 00 mm2) med 0,1 % TFA.
En stationär polärt inbäddad polystyrenfas preparerades och utvärderades för separation av syntetiska peptidblandningar och trypsinspjälkningar av humant serumalbumin (HAS) i högpresterande vätskekromatografi. Den kromatografiska prestandan för PMP-kolonner för peptidblandningar är utmärkt i separationseffektivitet och upplösning. Den förbättrade separationsprestanda som beror på storleken på porerna och kiselstorleken hos PMP och kiselstorlek. partiklar, kontrollerad syntes av den stationära fasen och komplex kolonnpackning.Förutom hög separationseffektivitet är lågt kolonnmottryck vid höga flödeshastigheter en annan fördel med denna stationära fas.PMP-kolonner uppvisar god reproducerbarhet och kan användas för analys av peptidblandningar och trypsinuppslutning av olika proteiner. Vi avser att använda denna kolonn för separation av växtbaserade naturliga ämnen och vätskeextrakt från framtida växtbaserade vätskeprodukter, i vätskeextrakt, i vätskeextrakt. PMP-kolonner kommer också att utvärderas för separation av proteiner och monoklonala antikroppar.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Research on Peptide Separation Systems by Reversed Phase Chromatography Part I: Development of a Column Characterization Protocol.J.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Förbättrade aktiva peptider designade för behandling av infektionssjukdomar.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) idag, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (120.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Avancerad vätskekromatografi-masspektrometri möjliggör inkorporering av brett riktade metabolomics och proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ UHPLC:s roll i läkemedelsutveckling.J.Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Grundläggande och praktiska aspekter av ultrahögtrycksvätskekromatografi för snabba separationer.J.Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Tillämpning av ultrahögpresterande vätskekromatografi i läkemedelsutveckling.J.Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Monolitiska makroporösa hydrogeler framställda av olja-i-vatten emulsioner med hög inre fas för effektiv rening av enterovirus. Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Rollen av vätskekromatografi i proteomics.J.Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Nya trender i omvändfas-vätskekromatografiseparationer av terapeutiska peptider och proteiner: teori och tillämpningar.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Tvådimensionell separation av peptider med hjälp av ett RP-RP-HPLC-system som använder olika pH-värden i de första och andra separationsdimensionerna.J.Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. Massöverföringsegenskaperna och kinetiska prestanda hos högeffektiva kromatografiska kolonner packade med C18 sub-2 μm helt och ytligt porösa partiklar undersöktes.J.Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Senaste trender och analytiska utmaningar inom isolering, identifiering och validering av växtbioaktiva peptider.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-0218-028-00216-0218-018).
Mueller, JB et al. The proteomic landscape of the rike of life.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Nedströms bearbetning av terapeutiska peptider genom preparativ vätskekromatografi. Molecule (Basel, Schweiz) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography and its application to biopolymers.J.Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligander för mixed-mode protein chromatography: princip, karakterisering och design.J.Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).