Asante kwa kutembelea Nature.com.Toleo la kivinjari unachotumia lina uwezo mdogo wa kutumia CSS.Kwa matumizi bora zaidi, tunapendekeza utumie kivinjari kilichosasishwa (au uzime Hali ya Upatanifu katika Internet Explorer).Wakati huo huo, ili kuhakikisha usaidizi unaoendelea, tutatoa tovuti bila mitindo na JavaScript.
Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) ni mmea wa kunde unaotumika kwa ajili ya uzalishaji wa chakula na kuboresha udongo.Upanuzi wa kimataifa wa NLL kama zao umevutia uyoga wengi wa pathogenic, ikiwa ni pamoja na anthracnose ya lupine, ambayo husababisha ugonjwa wa anthracnose.Aleli mbili, Lanr1 na AnMan, ambazo huongeza upinzani, zimetumika katika ufugaji wa NLL, lakini mifumo ya msingi ya molekuli bado haijulikani.Katika utafiti huu, vialama vya Lanr1 na AnMan vilitumika kukagua sampuli za NLL za Ulaya.Upimaji wa chanjo katika mazingira yanayodhibitiwa ulithibitisha ufanisi wa wafadhili sugu.Uwekaji wasifu tofauti wa usemi wa jeni ulifanywa kwa mistari sugu na inayoweza kuathiriwa.Upinzani wa anthracnose ulihusishwa na kujieleza kupita kiasi kwa maneno ya ontolojia ya jeni "GO:0006952 Majibu ya Ulinzi", "GO:0055114 Mchakato wa Redox", na "GO:0015979 Photosynthesis".Kwa kuongezea, laini ya Lanr1(83A:476) ilionyesha uwekaji upyaji wa programu-jalizi muhimu kwa haraka baada ya kuchanjwa, huku mistari mingine ikionyesha kuchelewa kwa jibu hili kwa takriban saa 42.Majibu ya ulinzi yanahusishwa na jeni za TIR-NBS, CC-NBS-LRR na NBS-LRR, protini 10 zinazohusika katika pathogenesis, protini za uhamisho wa lipid, endoglucan-1,3-β-glucosidase, protini za ukuta wa seli za glycine, na jeni kutoka kwa njia tendaji ya oksijeni.Majibu ya mapema kwa 83A:476, ikijumuisha ukandamizaji kwa uangalifu wa jeni zinazohusiana na usanisinuru, sanjari na ulinzi uliofaulu wakati wa awamu ya ukuaji wa mimea ya baiolojia ya ukungu, na kupendekeza kuwa kiathiriwa huchochea kinga.Mwitikio wa Mandeloop umepunguzwa kasi, kama vile kuvuta mlalo kwa ujumla.
Lupine yenye majani membamba (NLL, Lupinus angustifolius L.) ni nafaka yenye protini nyingi inayotoka katika eneo la magharibi la Mediterania1,2.Kwa sasa hupandwa kama zao la chakula kwa wanyama na wanadamu.Pia inachukuliwa kuwa samadi ya kijani kibichi katika mifumo ya mzunguko wa mazao kutokana na uwekaji wa nitrojeni na bakteria wa kurekebisha nitrojeni na uboreshaji wa jumla wa muundo wa udongo.NLL imepitia mchakato wa haraka wa ufugaji katika karne iliyopita na bado iko chini ya shinikizo la juu la kuzaliana3,4,5,6,7,8,9,10,11,12.Pamoja na kuenea kwa kilimo cha NLL, mfululizo wa fangasi wa pathogenic ulitengeneza maeneo mapya ya kilimo na kusababisha magonjwa mapya ya kuharibu mazao. Ajabu zaidi kwa wakulima na wafugaji wa lupine ilikuwa kuonekana kwa anthracnose, iliyosababishwa na kuvu ya pathogenic, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Ajabu zaidi kwa wakulima na wafugaji wa lupine ilikuwa kuonekana kwa anthracnose, iliyosababishwa na kuvu ya pathogenic, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Наиболее примечательным для фермеров na селекционеров люпина было появление антракноза, вызванного патогенным грибком Colletotrichum, Feeldorrihum (3) Hailipishwi Kilichojulikana zaidi kwa wakulima na wafugaji wa lupine ilikuwa kuibuka kwa anthracnose iliyosababishwa na kuvu ya pathogenic Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.对于羽扇豆农民和饲养者來说，最引人注目的是炭疽病的起现，它是由病原真菌Colletotrichum lupini).对于羽扇豆农民和饲养者來说，最引人注目的是炭疽病的出现，它是由病原真菌Colletotrichum lupini). Наиболее поразительным для фермеров na селекционеров люпина является появление антракноза, вызываемого патогенгеным гриtricбком Colleiver . Kinachovutia zaidi wakulima na wafugaji wa lupine ni kuibuka kwa anthracnose inayosababishwa na fangasi wa pathogenic Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13.Ripoti za mapema zaidi za ugonjwa huo zilitoka Brazili na Merika, na dalili za kawaida zilionekana mnamo 1912 na 1929 mtawalia.Hata hivyo, baada ya miaka 30 hivi, kisababishi magonjwa kiliteuliwa kuwa Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., телеоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., teleomorph ya Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.,有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc.,有目的形态的Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sacc., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld katika Mofolojia Inayolengwa. & H. Schrenk,. & H. Schrenk,.na H. Schrenk. & H.施伦克，. & H.施伦克，.na H. Schlenk,.Uchunguzi wa awali wa ugonjwa uliofanywa katikati ya karne ya 20 ulionyesha ukinzani fulani katika viambatisho vya NLL na lupine ya manjano (L. luteus L.), lakini viambatisho vyote vya lupine nyeupe (L. albus L.) vilivyojaribiwa viliathiriwa sana15,16.Uchunguzi umeonyesha kuwa maendeleo ya anthracnose yanahusishwa na kuongezeka kwa mvua (unyevu wa hewa) na joto (katika aina mbalimbali za 12-28 ° C), na kusababisha ukiukwaji wa upinzani kwa joto la juu17, 18. Kwa kweli, wakati unaohitajika kwa conidia kuota na ugonjwa kuanza , ilikuwa mara nne mfupi kwa 24 ° C (katika hali ya hewa ya saa 12) chini ya 12 ° C chini ya hali ya juu ya 24 ° C (saa 12).Kwa hivyo, ongezeko la joto duniani linaloendelea limesababisha kuenea kwa anthracnose.Walakini, ugonjwa huo ulionekana huko Ufaransa (1982) na Ukrainia (1983) kama kiashiria cha tishio lililokuwa karibu, lakini inaonekana ulipuuzwa na tasnia ya lupine wakati huo20,21.Miaka michache baadaye, ugonjwa huu mbaya ulienea ulimwenguni kote na pia uliathiri nchi zinazozalisha lupine kama vile Australia, Poland na Ujerumani22,23,24.Kufuatia mlipuko wa anthracnose katikati ya miaka ya 1990, uchunguzi wa kina ulisababisha kutambuliwa kwa wafadhili kadhaa sugu katika sampuli za NLL19.Upinzani wa NLL dhidi ya anthracnose unadhibitiwa na aleli mbili tofauti zinazotawala zinazopatikana katika vyanzo tofauti vya kijidudu: Lanr1 katika aina ya Tanjil na Wonga na AnMan katika aina ya mimea.Mandalay 25, 26. Aleli hizi hukamilisha alama za molekuli zinazosaidia uteuzi wa viini sugu katika programu za kuzaliana25,26,27,28,29,30.Njia sugu ya kuzaliana 83A:476 iliyobeba aleli ya Lanr1 ilivukwa kwa njia ya mwitu inayoweza kuathiriwa P27255 ili kupata idadi ya watu wa RIL inayotenganisha upinzani wa anthracnose, ambayo ilifanya iwezekane kugawa locus ya Lanr1 kwa kromosomu NLL-1131, 32, 33 kutoka kwa ulinganifu wa upinzani wa ramani hadi ulinganifu wa ulinganifu wa ramani. mfumo, NLL ilifunua eneo la aleli zote tatu kwenye kromosomu sawa (NLL-11), lakini katika nafasi tofauti29,34,35.Hata hivyo, kutokana na idadi ndogo ya RILs na umbali mkubwa wa maumbile kati ya alama na aleli sambamba, hakuna hitimisho la kuaminika linaloweza kutolewa kuhusu jeni zao za msingi.Kwa upande mwingine, utumiaji wa chembe za urithi katika lupins ni ngumu kwa sababu ya uwezo wao wa chini wa kuzaliwa upya, ambayo hufanya ujanjaji wa kijeni kuwa mgumu37.
Ukuaji wa vijidudu vya nyumbani vinavyobeba aleli inayotakiwa katika hali ya homozigous, kama vile 83A:476 (Lanr1) na Mandelup (AnMan), imefungua mlango wa kuchunguza upinzani wa anthracnose katika uso wa kuwepo kwa michanganyiko pinzani ya aleli katika makundi ya pori.Uwezekano wa taratibu za Masi.Linganisha majibu ya ulinzi yanayotokana na aina maalum za jeni.Utafiti huu ulitathmini majibu ya awali ya nakala ya NLL kwa chanjo ya C. lupini.Kwanza, paneli ya viini vya NLL ya Uropa iliyo na mistari 215 ilikaguliwa kwa kutumia vialamisho vya molekuli vinavyoashiria aleli za Lanr1 na AnMan.Phenotyping ya anthracnose ilifanywa kwenye mistari 50 ya NLL, iliyochaguliwa hapo awali kwa alama za molekuli, chini ya hali zilizodhibitiwa.Kulingana na majaribio haya, mistari minne inayotofautiana katika ukinzani wa anthracnose na utunzi wa mzio wa Lanr1/AnMan ilichaguliwa kwa maelezo mafupi ya jeni ya ulinzi kwa kutumia mbinu mbili za ziada: mpangilio wa juu wa RNA na ukadiriaji wa wakati halisi wa PCR.
Uchunguzi wa seti ya NLL germplasm (N = 215) yenye vialama vya Lanr1 (Anseq3 na Anseq4) na AnMan (Anseq4) na AnMan (AnManM1) ilionyesha kuwa ni laini moja tu (95726, karibu na Salamanca-b) inayokuza "upinzani" wa aleli kwa alama zote, wakati "Pressceptible" zote zikipatikana (~73.5%) mistari.Mistari kumi na tatu ilitoa aleli mbili "sugu" za alama ya Lanr1, na mistari 8 ilitoa aleli "kinzani" za Lanr1.alama.Aleli ya "upinzani" ya kialama cha AnMan (Jedwali la Ziada S1).Mistari miwili ilikuwa heterozygous kwa kialama cha Anseq3 na heterozygous moja kwa kialama cha AnManM1.Laini 42 (19.5%) zilibeba awamu tofauti za aleli za Anseq3 na Anseq4, ikionyesha marudio ya juu ya ujumuishaji kati ya loci hizi mbili.Phenotypes ya anthracnose chini ya hali zilizodhibitiwa (Jedwali la Nyongeza S2) ilifunua tofauti katika upinzani wa genotypes zilizojaribiwa, ambazo zilionekana katika ukali wa anthracnose.Tofauti katika wastani wa alama zilianzia 1.8 (ikistahimili kiasi) hadi 6.9 (inayoathiriwa) na tofauti za uzito wa mmea zilianzia 0.62 (zinazoathiriwa) hadi 4.45 g (zinazostahimili). Kulikuwa na uwiano mkubwa kati ya maadili yaliyozingatiwa katika majibu mawili ya jaribio (0.51 kwa alama za ukali wa ugonjwa, P = 0.00017 na 0.61 kwa uzito wa mimea, P <0.0001) pamoja na kati ya vigezo hivi viwili (- 0.59 na - 0.77, P0 <0.00). Kulikuwa na uwiano mkubwa kati ya maadili yaliyozingatiwa katika majibu mawili ya jaribio (0.51 kwa alama za ukali wa ugonjwa, P = 0.00017 na 0.61 kwa uzito wa mimea, P <0.0001) na pia kati ya vigezo hivi viwili (- 0.59 na - 0.0001, 0.77, P <0.701). Выявлена ​​достоверная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях эксперимента (0,51 для баллов тяженияц, 1 изображение, 100 = 100 = массы растения, P < 0,0001), а также между этими двумя параметрами (-0,59 и -0,77, Р < 0,0001) 0,0001). Uwiano mkubwa ulipatikana kati ya maadili yaliyozingatiwa katika marudio mawili ya jaribio (0.51 kwa alama za ukali wa ugonjwa, P = 0.00017 na 0.61 kwa uzito wa mimea, P <0.0001), na pia kati ya vigezo hivi viwili (- 0.59 na -0.77, P0 <0 0.0).在两次重复实验中观察到的值之间存在显着相关性（疾病严重程度评分為0.51,P = 10.51,P = 10.000. 0.0001）以及這两个参数之间（- 0.59 na- 0.77，P <0.0001).在 两 次 重复 实验 中 观察 的 值 之间 存在 相关性 （疾病 严重 程度 评 分0 0 1 = 0 1 = 0 1 = 0 1 = 0 1 = 0 1 = 0 1 = 0 1 = 0 1 . ， 植物 為 為 0.61 , p <0.0001） 以及 两 个 参数 之间 （（（- 0.59 和– 0.59 和– 0.50 和– 0.50 、– 0.59 <– 0.59 <– 0.59 <– 0.59  Наблюдалась значительная корреляция между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях (оценка тяжести заболевания 0,51, 60, 10, 6, 10 = P <0,0001), и между этими двумя параметрами (-0,59 na -0,0001) 0,77, P <0,0001. Kulikuwa na uwiano mkubwa kati ya maadili yaliyozingatiwa katika nakala (alama ya ukali wa ugonjwa 0.51, P = 0.00017 na uzito wa mimea 0.61, P <0.0001) na kati ya vigezo hivi viwili (-0.59 na -0 .0001) 0.77, P <0.000. ).Dalili za kawaida zinazoonekana katika mimea inayoathiriwa ni pamoja na kinking na kupotosha kwa shina inayofanana na muundo wa "upinde wa mchungaji", ikifuatiwa na vidonda vya mviringo na sporozoiti za machungwa / pink (Mchoro wa Nyongeza. 1).Viingilio vya Australia vilivyobeba jeni za Lanr1 (83A:476 na Tanjil) na AnMan (Mandelup) vinastahimili wastani, 0.0331 na 0.0036).Baadhi ya mistari ambayo pia hubeba Lanr1 "sugu" na/au AnMan alleles huonyesha dalili za ugonjwa huo.
Jambo la kufurahisha ni kwamba, mistari michache ya NLL isiyo na kialama "kinga" ilifichua kiwango cha juu cha ukinzani wa anthracnose (inayolinganishwa au ya juu kuliko Lanr1 au AnMan genotypes), kama vile Boregine (P thamani <0.0001 kwa vigezo vyote viwili), Bojar (Thamani ya P <0.0001 kwa thamani ya 0.000000 kwa alama ya B/P9 kwa alama ya B/P9. 0.0001 kwa alama na isiyo muhimu kwa uzani). Jambo la kufurahisha ni kwamba, mistari michache ya NLL isiyo na kialama "kinga" ilifichua kiwango cha juu cha ukinzani wa anthracnose (inayolinganishwa au ya juu kuliko Lanr1 au AnMan genotypes), kama vile Boregine (P thamani <0.0001 kwa vigezo vyote viwili), Bojar (Thamani ya P <0.0001 kwa thamani ya 0.000000 kwa alama ya B/P9 kwa alama ya B/P9. 0.0001 kwa alama na isiyo muhimu kwa uzani). Интересно, что несколько линий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показали высокий уровень устойчинтного е высокий, чем для генотипов Lanr1 au AnMan), таких как Boregine (значение P <0,0001 для обоих параметров), Bojar (значение P < 0,000001,0001 стения) и популяции B-549/79b (значение P <0,0001 для оценки и незначимо для массы). Jambo la kushangaza ni kwamba mistari kadhaa ya NLL isiyo na alama yoyote 'sugu' ilionyesha kiwango cha juu cha upinzani dhidi ya anthracnose (inayolinganishwa na au ya juu kuliko Lanr1 au AnMan genotypes), kama vile Boregine (P thamani <0.0001 kwa vigezo vyote viwili ), Bojar (P thamani <0.0001 kwa 0.0001 kwa 0.0001 kwa 0 0001 na 7 b-9 uzito wa eva-4) Thamani ya P <0.0001 kwa tathmini na si muhimu kwa uzito).有趣的是，一些缺乏任何“抗性”标记等位基因的NLL 系显示出高水平的炭疽病抗性（帎LanRyan1更高），例如Boregine（两个参数的P 值< 0.0001）、Bojar（P 值<得分為0.0001，植物重和量社卉重和量社9-得4（9B9b5）Bojar)值< 0.0001，重量不显着）. Inashangaza kwamba baadhi ya mifumo ya NLL ambayo haina viambishi vyovyote vya "antijeni" huonyesha ukinzani wa juu wa mlalo (sawa na jeni za Lanr1 au AnMan au zaidi), kama vile Boregine (vigezo vyote viwili P <0.0001), Bojar (P thamani <0.0001, uzito wa mmea 0.001) na 490 / strain ya 9b muhimu 1, 5 strain 1. Интересно, что некоторые линии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллелей «резистентности», показали высокие уровни устойчинисти, чем у генотипов Lanr1 au AnMan), такие как Boregine (значение P для обоих параметров <0,0001), Bojar (значение P <0,0001, масса раст00лци 5/9 b) и 4 енка P-значение <0,0001, масса незначительна). Jambo la kufurahisha ni kwamba baadhi ya laini za NLL ambazo hazikuwa na viashirio vyovyote vya 'upinzani' zilionyesha viwango vya juu vya ukinzani wa anthracnose (kulinganishwa na au zaidi ya aina za genotypes za Lanr1 au AnMan), kama vile Boregine (P thamani ya vigezo vyote viwili <0.0001) , Bojar (P-thamani <0.0000/501 ya idadi ya watu) na B70101,0001 ya mmea (P-thamani <0.000/501) na B901,001,001,0001,2001, Bojar (P-thamani <0.000001001,0001,0001,001,0001,0001,001,001,2001 ya mmea). <0.0001, uzito sio muhimu).Jambo hili linapendekeza uwezekano wa riwaya ya chanzo cha upinzani cha kijenetiki, ikielezea ukosefu unaoonekana wa uwiano kati ya alama za genotypes na phenotypes za ugonjwa (P maadili kutoka ~ 0.42 hadi ~ 0.98).Kwa hivyo, mtihani wa Kolmogorov-Smirnov ulionyesha kuwa data juu ya upinzani wa anthracnose ilikuwa takriban kawaida kusambazwa kwa alama (P-thamani 0.25 na 0.11) na wingi wa mimea (P-maadili 0.47 na 0.55), na kupendekeza mimi hypothesize kwamba aleli zaidi kuliko Lanr1 na AnMan wanahusika.
Kulingana na matokeo ya uchunguzi wa upinzani wa anthracnose, mistari 4 ilichaguliwa kwa uchambuzi wa transcriptome: 83A: 476, Boregine, Mandelup, na Idadi ya Watu 22660. Mistari hii ilijaribiwa tena kwa upinzani wa anthrax katika majaribio ya inoculation kwa mpangilio wa RNA, ikiwa ni sawa na katika mtihani uliopita.Thamani za alama zilikuwa kama ifuatavyo: Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) na idadi ya watu 22660 (6.11 ± 1.29).
Itifaki ya Illumina NovaSeq 6000 ilipata wastani wa jozi za Mread 40.5 kwa kila sampuli (Mreads 29.7 hadi 54.4) (Jedwali la Nyongeza S3).Alama za ulinganifu katika mfuatano wa marejeleo zilianzia 75.5% hadi 88.6%.Wastani wa uwiano wa data ya hesabu iliyosomwa kati ya vibadala vya majaribio kati ya nakala za kibiolojia ulianzia 0.812 hadi 0.997 (maana 0.959). Kati ya jeni 35,170 zilizochanganuliwa, 2917 haikuonyesha usemi wowote, na jeni zingine 4785 zilionyeshwa kwa kiwango kidogo (maana ya msingi chini ya 5). Kati ya jeni 35,170 zilizochanganuliwa, 2917 haikuonyesha usemi wowote, na jeni zingine 4785 zilionyeshwa kwa kiwango kidogo (maana ya msingi chini ya 5). Из 35 170 проанализированных генов 2917 не проявляли экспрессии, а остальные 4785 генов экспрессировались на ненезнабрессии . Kati ya jeni 35,170 zilizochambuliwa, 2917 hazikuonyesha usemi wowote, na jeni 4785 zilizobaki zilionyeshwa kwa kiwango kisicho na maana (maana ya msingi <5).在分析的35,170 个基因中，2917 个没有表达，其他4785 个基因的表达可以忽略不计（基本平均值。35,170 Из 35 170 проанализированных генов 2917 не экспрессировались, а остальные 4785 генов имели незначительную экспрессировались, а остальные 4785 генов имели незначительную экспрессировались (базение 5). Kati ya jeni 35,170 zilizochambuliwa, 2917 hazikuonyeshwa na jeni 4785 zilizobaki zilikuwa na usemi usio na maana (maana ya msingi <5).Kwa hivyo, idadi ya jeni iliyozingatiwa imeonyeshwa (maana ya msingi ≥ 5) wakati wa jaribio ilikuwa 27,468 (78.1%) (Jedwali la Nyongeza S4).
Kutoka kwa mara ya kwanza, mistari yote ya NLL ilijibu kwa chanjo ya C. lupini (shida ya Col-08) kwa kupanga upya nakala (Jedwali 1), hata hivyo, tofauti kubwa zilizingatiwa kati ya mistari.Kwa hivyo, mstari wa upinzani wa 83A: 476 (unaobeba jeni la Lanr1) ulionyesha urekebishaji muhimu wa transcriptome katika hatua ya kwanza (6 hpi) na ongezeko la mara 31-69 katika idadi ya jeni pekee ya juu na chini ikilinganishwa na pointi nyingine za wakati kwa wakati huu.Kwa kuongeza, kilele hiki kilikuwa cha muda mfupi, kwani usemi wa jeni chache tu ulibakia kubadilishwa kwa kiasi kikubwa wakati wa pili (12 hpi).Inafurahisha, Boregine, ambayo pia ilionyesha kiwango cha juu cha upinzani katika jaribio la ufisadi, haikupitia urekebishaji mkubwa wa maandishi wakati wa jaribio.Hata hivyo, idadi ya jeni zilizoonyeshwa kwa njia tofauti (DEG) ilikuwa sawa kwa Boregine na 83A:476 katika 12 HPI.Mandelup na idadi ya watu 22660 walionyesha kilele cha DEG katika hatua ya mwisho ya (48 l/s), ikionyesha kuchelewa kwa majibu ya ulinzi.
Kwa sababu 83A:476 ilipitia urekebishaji mkubwa wa maandishi katika kukabiliana na C. lupini katika HPI 6 ikilinganishwa na mistari mingine yote, ~ 91% ya DEGs zilizozingatiwa wakati huu zilikuwa maalum za ukoo (Mchoro 1).Hata hivyo, kulikuwa na mwingiliano fulani wa majibu ya awali kati ya mistari ya utafiti, kwani 68.5%, 50.9%, na 52.6% DEG katika Boregine, Mandelup, na idadi ya watu 22660, mtawalia, yalipishana na yale yaliyopatikana katika 83A:476 katika nukta fulani kwa wakati.Hata hivyo, DEG hizi zilichangia sehemu ndogo tu (0.97–1.70%) ya DEG zote zilizogunduliwa kwa sasa kwa kutumia 83A:476.Kwa kuongeza, DEGs 11 kutoka kwa mistari yote zilikuwa sawa kwa wakati huu (Jedwali la Ziada S4-S6), ikiwa ni pamoja na vipengele vya kawaida vya majibu ya ulinzi wa mimea: protini ya uhamisho wa lipid (TanjilG_32225), endoglucan-1,3-β-glucoside kimeng'enya (TanjilG_23384), proteni mbili zinazoweza kuleta mkazo kama SAM2G5313 na Tanjil251. 31), protini ya msingi ya mpira (TanjilG_32352), na protini mbili za ukuta wa seli za muundo wa glycine (TanjilG_19701 na TanjilG_19702).Pia kulikuwa na mwingiliano wa juu kiasi wa majibu ya nukuu kati ya 83A:476 na Boregine katika 24 HPI (jumla ya 16-38% DEG) na kati ya Mandelup na Idadi ya Watu 22660 katika 48 HPI (jumla ya 14-20% DEG).
Mchoro wa Venn unaoonyesha idadi ya jeni zilizoonyeshwa kwa njia tofauti (DEG) katika mistari yenye majani membamba ya lupine (NLL) iliyochanjwa na Colletotrichum lupini (shida ya Col-08 iliyopatikana kutoka kwa maeneo ya lupine huko Wierzhenice, Poland, 1999).Laini za NLL zilizochanganuliwa zilikuwa: 83A:476 (sugu, kubeba aleli ya Lanr1), Boregine (kinzani, asili ya kijenetiki haijulikani), Mandelup (inastahimili wastani, iliyobeba aleli ya AnMan) na idadi ya watu 22660 (inayoathiriwa sana).Kifupi hpi kinasimama kwa saa baada ya chanjo.Thamani sifuri zimeondolewa ili kurahisisha grafu.
Seti ya jeni zilizoonyeshwa kupita kiasi katika hpi 6 ilichanganuliwa kwa uwepo wa vikoa vya kanuni za jeni za R (Jedwali la Nyongeza S7).Utafiti huu ulifunua uingizaji wa maandishi ya jeni za upinzani wa magonjwa na vikoa vya NBS-LRR pekee katika 83A:476.Seti hii ilikuwa na jeni moja la TIR-NBS-LRR (tanjilg_05042), jeni tano za CC-NBS-LRR (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, na tanjilg_16162) Tanjilg_16162, Tanjilg_16162-Bs, Tanjilg_16162-16162, Tanjilg_16162. RRE (tanjilg_16162) pamoja na Nne NBS-Lrr (tanjilg_16162) na Nne NBS-LRR (TANJILG_16162).Jeni hizi zote zina vikoa vya kisheria vilivyopangwa katika mfuatano uliohifadhiwa.Mbali na jeni za kikoa cha NBS-LRR, kinase kadhaa za RLL ziliwashwa katika hpi 6, ambazo ni moja katika Boregine (TanjilG_19877), mbili Mandelup (TanjilG_07141 na TanjilG_19877) na katika idadi ya watu 22660 (TanjilG_068014 na TanjilG_06174) 6.
Jeni zenye usemi uliobadilika sana katika kukabiliana na kuchanjwa na C. lupini (strain Col-08) zilifanyiwa uchambuzi wa uboreshaji wa Gene Ontology (GO) (Jedwali la Nyongeza S8). Neno la mchakato wa kibayolojia lililowakilishwa mara nyingi zaidi lilikuwa "GO: 0006952 majibu ya ulinzi" ambayo ilionekana katika mchanganyiko wa 6 kati ya 16 (wakati × mstari) wenye umuhimu wa juu (P thamani <0.001) (Mchoro 2). Neno la mchakato wa kibayolojia lililowakilishwa mara nyingi zaidi lilikuwa "GO: 0006952 majibu ya ulinzi" ambayo ilionekana katika mchanganyiko wa 6 kati ya 16 (wakati × mstari) wenye umuhimu wa juu (P thamani <0.001) (Mchoro 2). Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитный отвенным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитный отвенным термином биологического процесса был «GO: 0006952 защитный ответ», который и песни комбинаций с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Neno la mchakato wa kibaolojia lililowakilishwa zaidi mara nyingi lilikuwa 'GO:0006952 jibu la ulinzi', ambalo lilionekana katika mchanganyiko wa 6 kati ya 16 (wakati × ukoo) wenye umuhimu wa juu (P thamani <0.001) (Mchoro 2).最常被过度代表的生物过程术语是“GO:0006952 防御反应”，它出现在16 个（时间中明约红的约红）着性 (P 值< 0.001) (图2). Neno wakilishi zaidi la mchakato wa kibaolojia ni "GO:0006952 majibu ya ulinzi", ambayo inaonekana katika 6 kati ya 16 (时间×线) mchanganyiko, yenye umuhimu wa juu (P thamani <0.001) (图2) . Наиболее часто чрезмерно представленным термином биологического процесса был «GO: 0006952 Majibu ya Ulinzi», который появлялся 195 × 6 ин с высокой значимостью (значение P <0,001) (рис. 2). Neno la mchakato wa kibaolojia lililowakilishwa zaidi mara nyingi lilikuwa 'GO:0006952 Majibu ya Ulinzi', ambayo yalionekana katika michanganyiko 6 kati ya 16 (saa × mstari) yenye umuhimu wa juu (P thamani <0.001) (Mchoro 2).Neno hili liliwakilishwa kupita kiasi kwa nyakati mbili katika 83A: 476 na Boregine (6 na 24 hpi) na wakati mmoja katika Mandelup na Idadi ya Watu 22660 (12 na 6 hpi, mtawalia).Haya ni matokeo yanayotarajiwa, yanayoangazia mwitikio wa antifungal wa mistari sugu.Kwa kuongeza, 83A:476 ilijibu C. lupini kwa kushawishi kwa haraka jeni zinazohusiana na mlipuko wa kioksidishaji unaowakilishwa na neno "GO:0055114 mchakato wa redox", ikionyesha jibu maalum la ulinzi, wakati Boregine alifichua majibu maalum ya ulinzi, yanayohusiana na neno 'GO'.:0006950 Msongo wa mawazo”.Idadi ya watu 22660 iliwasha mwitikio mlalo wa upinzani unaohusisha metabolite za pili, ikiangazia idadi kubwa ya maneno "GO:0016104 Mchakato wa biosynthesis ya triterpene" na "GO:0006722 Mchakato wa kimetaboliki ya triterpene" (maneno yote mawili ni ya seti sawa ya jeni ), kwa kuzingatia matokeo ya uboreshaji wa uboreshaji wa GOMPONE 2660. Aidha, majibu ya mapema 83A:476 (6 hpi) na majibu yaliyochelewa Mandelup na Idadi ya Watu 22660 yanajumuisha neno GO:0015979 'photosynthesis' na michakato mingine inayohusiana ya kibiolojia.
Masharti ya ontolojia ya jeni za mchakato wa kibayolojia yaliyochaguliwa katika ufafanuzi wa jeni zilizoonyeshwa kwa njia tofauti wakati wa majibu ya nukuu ya lupine yenye majani membamba (NLL) iliyochanjwa na lupine ya kimeta (Shida ya Col-08 iliyopatikana kutoka kwa maeneo ya lupine huko Wierzhenice, Poland, mwaka wa 1999) yametiwa chumvi sana.Mistari ya NLL iliyochanganuliwa ilikuwa: 83A:476 (sugu, kubeba homozigous Lanr1 aleli), Boregine (kinasaba sugu, kisichojulikana), Mandelup (kina sugu kwa kiasi, kilichobeba homozigosi AnMan aleli) na idadi ya watu 22660 (inayoathiriwa).
Kwa sababu utafiti huu ulilenga kutambua jeni zinazochangia ukinzani wa anthracnose, jeni zilizopewa masharti GO “GO: 0006952 Majibu ya Kujihami” na “GO: 0055114 Michakato ya Redox” yalichanganuliwa kwa kupunguzwa kwa kuwa msingi unamaanisha ≥ 30 kwa angalau mstari mmoja.× hatua kwa wakati kuchanganya maadili muhimu ya kitakwimu ya log2 (mabadiliko ya mara).Idadi ya jeni zinazokidhi vigezo hivi ilikuwa 65 kwa GO:0006952 na 524 kwa GO:0055114.
83A:476 ilifichua vilele viwili vya DEG vilivyofafanuliwa kwa neno GO:0006952, cha kwanza katika jeni 6 kwa inchi (jeni 64, kanuni za juu na chini) na cha pili katika jeni 24 kwa inchi (jeni 15, kanuni za juu pekee).Boregine pia ilionyesha kuwa GO:0006952 ilifikia kilele kwa wakati mmoja, lakini kwa chini ya DEG (11 na 8) na uanzishaji wa upendeleo.Mandeloop ilionyesha vilele viwili vya GO:0006952 kwa 12 na 48 HPI, zote zikiwa na jeni 12 (ya kwanza ikiwa na jeni zinazowasha, na ya pili ikiwa na jeni zinazokandamiza tu), wakati idadi ya watu 22660 katika HPI 6 (jeni 13) ilikuwa na kiwango kikubwa cha kilele cha ongezeko.Taratibu.Ikumbukwe kwamba 96.4% ya GO:0006952 DEG katika vilele hivi ilikuwa na aina sawa ya majibu (juu au chini), ikionyesha mwingiliano mkubwa wa majibu ya ulinzi licha ya tofauti katika idadi ya jeni zinazohusika.Kundi kubwa zaidi la mfuatano unaohusiana na neno GO:0006952 husimba Protini 22 ya Ujumbe Unaohusishwa na Mkazo wa Njaa (SAM22-kama), ambayo ni ya kiwango cha 10 cha protini inayohusishwa na pathogenesis (PR-10) na protini msingi ya latex.sawa (MLP-kama) protini) protini (Mchoro 3).Makundi haya mawili yalitofautiana katika hali ya usemi na mwelekeo wa majibu.Jeni zinazosimba protini zinazofanana na SAM22 zilionyesha uingizwaji thabiti na muhimu wakati wa mapema (6 au 12 hpi) na kwa ujumla hazikuitikia mwisho wa jaribio (48 hpi), huku protini zinazofanana na MLP zilionyesha uratibu katika 6 hpi.hpi.83A:476 na Mandelup kwa 48 hp/in, karibu pointi nyingine zote za data hazikuitikia.Kwa kuongezea, tofauti katika wasifu wa usemi wa jeni za protini zinazofanana na SAM22 zilifuata utofauti ulioonekana katika ukinzani wa anthracnose, kwani mistari sugu ilikuwa na alama za muda zaidi za kushawishi jeni hizi kuliko jeni zinazoathiriwa zaidi.Jeni nyingine ya LlR18A/B-kama PR-10 ilionyesha muundo wa kujieleza unaofanana sana na jeni la protini linalofanana na SAM22.
Vipengee vikuu vya neno la mchakato wa kibayolojia "GO:0006952 Majibu ya Ulinzi" na mifumo ya usemi ya jeni zilizoteuliwa za aleli za Lanr1 na AnMan zilitambuliwa.Kipimo cha Log2 kinawakilisha thamani za log2 (mabadiliko ya mara) kati ya iliyochanjwa (Colletotrichum lupini, aina ya Col-08, iliyopatikana kutoka kwenye mashamba ya lupine, Wizhenica, Poland, 1999) na udhibiti (iliyochanjwa kwa sham) kwa wakati mmoja.Mistari ifuatayo ya majani membamba ya lupine ilichanganuliwa: 83A:476 (sugu, iliyobeba homozygous Lanr1 aleli), Boregine (kinga, asili ya kijenetiki haijulikani), Mandelup (inastahimili wastani, iliyobeba homozigosi AnMan aleli), na Idadi ya Watu 22660 (inayoweza kuathiriwa).
Kwa kuongeza, maelezo mafupi ya jeni za mtahiniwa wa RNA-seq Lanr1 (TanjilG_05042) na AnMan (TanjilG_12861) yalitathminiwa (Mchoro 3).Jeni ya TanjilG_05042 ilionyesha mwitikio muhimu (uwezeshaji) katika 83A:476 katika nukta ya mara ya kwanza tu (6 hpi), huku TanjilG_12861 ilikuwa muhimu katika Mandeloop kwa nyakati mbili pekee: 6 hpi (udhibiti wa chini) na 24 hpi (6 hpi).Na.).inayoweza kubadilishwa)).
Jeni zilizoonyeshwa zaidi katika neno GO: 0055114 "mchakato wa redox" zilikuwa jeni zinazosimba protini za cytochrome P450 na peroxidase (Mchoro 4).Kwa sampuli zilizotengwa kutoka 83A:476 katika HPI 6, kiwango cha juu au cha chini cha log2 (mabadiliko ya mara kwa mara) (kwa 86.6% ya jeni) zilizingatiwa kwa ujumla kati ya mimea iliyochanjwa na kudhibiti, ikionyesha mwitikio wa juu wa genotype hii kwa kuchanja ngono.83A:476 ilionyesha GO muhimu zaidi: 0055114 DEG katika 6 hpi (jeni 503), huku mistari mingine ikiwa 48 hpi (Boregine, jeni 31; Mandelup, jeni 85; na Idadi ya Watu 22660, jeni 78)).Katika jeni nyingi za familia ya GO:0055114, aina mbili za majibu kwa chanjo (uwezeshaji na kuzuia) zilizingatiwa.Inafurahisha, hadi 97.6% ya DEGs zilizotambuliwa kwa neno GO: 0055114 katika Mandelupe katika 48 hp Uchunguzi huu unapendekeza kwamba, licha ya kiwango kidogo zaidi (yaani, idadi ya jeni za redoksi zilizobadilishwa, 85 dhidi ya 503), muundo wa majibu ya nukuu yaliyocheleweshwa kwa majibu ya mapema ya 68 ya mandeloup sawa na 6:7.Katika Boregine na Idadi ya Watu 22660, muunganiko huu ni wa chini kwa 51.6% na 75.6%, mtawalia.
Mifumo ya kujieleza kwa vipengele vikuu vya muda wa mchakato wa kibiolojia "GO: 0055114 mchakato wa Redox" ilifunuliwa.Kipimo cha Log2 kinawakilisha thamani za log2 (mabadiliko ya mara) kati ya iliyochanjwa (Colletotrichum lupini, aina ya Col-08, iliyopatikana kutoka kwenye mashamba ya lupine, Wizhenica, Poland, 1999) na udhibiti (iliyochanjwa kwa sham) kwa wakati mmoja.Mistari ifuatayo ya majani membamba ya lupine ilichanganuliwa: 83A:476 (sugu, iliyobeba homozygous Lanr1 aleli), Boregine (kinga, asili ya kijenetiki haijulikani), Mandelup (inastahimili wastani, iliyobeba homozigosi AnMan aleli), na Idadi ya Watu 22660 (inayoweza kuathiriwa).
83A:476 Majibu ya maandishi kwa kuchanjwa na C. lupini (shida ya Col-08) pia yalijumuisha kunyamazisha kwa uratibu kwa jeni zinazohusishwa na neno GO:0015979 "photosynthesis" na michakato mingine inayohusiana ya kibiolojia (FIG. 5).Seti hii ya GO:0015979 DEG ilikuwa na jeni 105 ambazo zilikandamizwa kwa kiwango kikubwa saa 6 hpi saa 83A:476.Katika kitengo hiki kidogo, jeni 37 pia zilidhibitiwa huko Mandelup kwa HPI 48 na 35 kwa wakati mmoja katika idadi ya watu 22660, ikijumuisha 19 DEGs kawaida kwa genotypes zote mbili.Hakuna DEG zinazohusiana na neno GO: 0015979 ziliwezeshwa kwa kiasi kikubwa katika mchanganyiko wowote (saa ya x).
Mifumo ya kujieleza ya vipengele vikuu vya muda wa mchakato wa kibiolojia "GO: 0015979 Photosynthesis" ilifunuliwa.Kipimo cha Log2 kinawakilisha thamani za log2 (mabadiliko ya mara) kati ya iliyochanjwa (Colletotrichum lupini, aina ya Col-08, iliyopatikana kutoka kwenye mashamba ya lupine, Wizhenica, Poland, 1999) na udhibiti (iliyochanjwa kwa sham) kwa wakati mmoja.Mistari ifuatayo ya majani membamba ya lupine ilichanganuliwa: 83A:476 (sugu, iliyobeba homozygous Lanr1 aleli), Boregine (kinga, asili ya kijenetiki haijulikani), Mandelup (inastahimili wastani, iliyobeba homozigosi AnMan aleli), na Idadi ya Watu 22660 (inayoweza kuathiriwa).
Kulingana na matokeo ya uchanganuzi wa usemi tofauti na ikiwezekana kuhusika katika majibu ya ulinzi dhidi ya fangasi wa kusababisha magonjwa, seti hii ya jeni saba ilichaguliwa kwa ajili ya kukadiria wasifu wa kujieleza na PCR ya wakati halisi (Jedwali la Ziada S9).
Jeni ya protini ya kuweka TanjilG_10657 ilichochewa kwa kiasi kikubwa katika mistari na pointi zote zilizosomwa ikilinganishwa na mimea ya kudhibiti (kuiga) (Majedwali ya Ziada S10, S11).Kwa kuongeza, maelezo mafupi ya TanjilG_10657 yalionyesha mwelekeo unaoongezeka katika kipindi cha majaribio kwa mistari yote.Idadi ya watu 22660 ilionyesha usikivu wa juu zaidi wa TanjilG_10657 kwa kuchanjwa kwa kuwezesha mara 114 na kiwango cha juu zaidi cha kujieleza (4.4 ± 0.4) katika HPI 24 (Mchoro 6a).Jeni la protini la PR10 LlR18A TanjilG_27015 pia lilionyesha kuwezesha katika mistari na pointi zote za muda, kukiwa na umuhimu wa takwimu katika sehemu nyingi za data (Mchoro 6b).Sawa na TanjilG_10657, kiwango cha juu zaidi cha kujieleza cha TanjilG_27015 kilizingatiwa katika idadi ya watu waliochanjwa 22660 katika HPI 24 (19.5 ± 2.4).Jeni ya endochitinase ya asidi TanjilG_04706 ilidhibitiwa kwa kiasi kikubwa katika mistari yote na wakati wote isipokuwa kwa Boregine 6 hpi (Mchoro 6c).Ilichochewa sana katika hatua ya kwanza (6 HPI) katika 83A: 476 (kwa mara 10.5) na iliongezeka kwa wastani katika mistari mingine (kwa mara 6.6-7.5).Wakati wa jaribio, usemi wa TanjilG_04706 ulibaki katika viwango sawa katika 83A:476 na Boregine, wakati huko Mandelup na Idadi ya Watu 22660 uliongezeka sana, na kufikia viwango vya juu (5.9 ± 1.5 na 6.2 ± 1.5, mtawalia).Jeni ya endoglucan-1,3-β-glucosidase-kama TanjilG_23384 ilionyesha uanzishaji wa juu katika pointi mbili za kwanza za wakati (6 na 12 hpi) katika mistari yote isipokuwa idadi ya watu 22660 (Mchoro 6d).Viwango vya juu zaidi vya kujieleza vya TanjilG_23384 vilizingatiwa katika hatua ya pili (12 hpi) huko Mandelup (2.7 ± 0.3) na 83A:476 (1.5 ± 0.1).Katika HPI 24, usemi wa TanjilG_23384 ulikuwa wa chini kiasi katika mistari yote iliyosomwa (kutoka 0.04 ± 0.009 hadi 0.44 ± 0.12).
Maelezo mafupi ya jeni yaliyochaguliwa (ag) yanafichuliwa na kiasi cha PCR.Nambari 6, 12 na 24 zinawakilisha saa baada ya chanjo.Jeni za LanDExH7 na LanTUB6 zilitumika kuhalalisha na LanTUB6 ilitumika kusawazisha mfululizo.Pau za hitilafu zinawakilisha mkengeuko wa kawaida kulingana na nakala tatu za kibiolojia, ambazo kila moja ni wastani wa nakala tatu za kiufundi. Umuhimu wa kitakwimu wa tofauti za viwango vya kujieleza kati ya vilivyochanjwa (Colletotrichum lupini, aina ya Col-08, iliyopatikana mwaka wa 1999 kutoka kwa eneo la lupine huko Wierzenica, Poland) na mimea ya kudhibiti (iliyochanjwa kwa mzaha) imewekwa alama juu ya pointi za data (*P thamani <0.05, **P thamani ≤0 0.0). Umuhimu wa kitakwimu wa tofauti za viwango vya kujieleza kati ya vilivyochanjwa (Colletotrichum lupini, aina ya Col-08, iliyopatikana mwaka wa 1999 kutoka kwa eneo la lupine huko Wierzenica, Poland) na mimea ya kudhibiti (iliyochanjwa kwa mzaha) imewekwa alama juu ya pointi za data (*P thamani <0.05, **P thamani ≤0 0.0). Статистическая значимость различий katika уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штам Col-08, получен katika mwaka wa 1999 mwaka wa 1999 p. а) и контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечена над точками данных (*значение P < 0,05, **значение P ≤ 0,01, ***значение 0, *** значение 0, 01, *** . Tofauti kubwa za kitakwimu katika viwango vya kujieleza kati ya iliyochanjwa (Colletotrichum lupini, aina ya Col-08, iliyopatikana mwaka wa 1999 kutoka kwenye eneo la lupine huko Wierzhenice, Poland) na mimea ya udhibiti (iliyochanjwa kwa uwongo) imebainishwa juu ya pointi za data (*P thamani < 0.05, **P-thamani ≤ 0.0 1, ***P-0.接种（Colletotrichum lupini，Col-08株，1999年从波兰Wierzenica的羽扇豆田获得）和对照（模拟接种种种）椋异的统计学显着性标记在数据点上方（*P值< 0.05, **P 值≤ 0.01, ***P 值≤ 0.001).接种 （colletorichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 波兰 波兰 wierzenica 的 羽扇 获得） 和 对照 鼈接秗內 鼈接秗 对照 鼈接秗 波兰 波兰 波兰的 统计学 显着性 标记 数据点 上方*p 值 <0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001). Статистически значимые различия katika уровнях экспрессии между инокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Col-08, полученный с полей люпи, 9, 9 9 г.) na контрольными (ложно инокулированными) растениями отмечены над точками данных (* значение P < 0,05, ** P-значение ≤ 0,значение ≤ 0,01, ***P-01, ***P-0,01, ***P. Tofauti kubwa za kitakwimu katika viwango vya kujieleza kati ya iliyochanjwa (Colletotrichum lupini, aina ya Col-08, iliyopatikana kutoka mashamba ya lupine huko Verzhenice, Poland, mwaka wa 1999) na mimea ya udhibiti (iliyochanjwa kwa sham) imebainishwa juu ya pointi za data (*P thamani <0.05 , **P-thamani ≤ 0-10 ≤ 0.0 1).Mistari ya NLL iliyochanganuliwa ilikuwa: 83A:476 (sugu, iliyobeba homozygous Lanr1 aleli), Mandelup (inastahimili wastani, iliyobeba homozygous aleli ya AnMan), Boregine (kinasaba sugu, isiyojulikana) na idadi ya watu 22660 (inayoathiriwa).
Jeni mtahiniwa TanjilG_05042 katika eneo la Lanr1 alionyesha muundo tofauti wa usemi kutoka kwa wasifu uliopatikana kutoka kwa masomo ya RNA-seq (Mchoro 6e).Uanzishaji mkubwa wa jeni hili ulionekana huko Mandelup na idadi ya watu 22660 (hadi mara 39.7 na 11.7, kwa mtiririko huo), na kusababisha viwango vya juu vya kujieleza (hadi 1.4 ± 0.14 na 7.2 ± 1.3, kwa mtiririko huo).83A:476 pia ilifichua uboreshaji fulani wa jeni la TanjilG_05042 (hadi mara 3.8), hata hivyo, viwango vya kujieleza vilivyofikiwa (0.044 ± 0.002) vilikuwa chini ya mara 30 kuliko vile vilivyozingatiwa katika Mandelup na idadi ya watu 22660.iliyochanganuliwa na qPCR ilionyesha tofauti kubwa katika viwango vya kujieleza kati ya aina za jeni katika vibadala vya dhihaka (vidhibiti), na kufikia tofauti ya mara 58 kati ya idadi ya watu 22660 na 83A:476, na pia kati ya idadi ya watu 22660 na 22660. Tofauti ya mara mbili ilipatikana kati ya Boregine na Mandalup.
Jeni ya mtahiniwa katika locus ya AnMan, TanjilG_12861, ilianzishwa ili kukabiliana na chanjo katika 83A:476 na Mandelup, haikuegemea upande wowote katika idadi ya watu 22660, na ilidhibitiwa katika Boregine (Mchoro 6f).Usemi wa jamaa wa jeni la TanjilG_12861 ulikuwa wa juu zaidi katika 83A iliyochanjwa: 476 (0.14±0.01).Jeni ya protini ya mshtuko wa joto ya 17.4 kDa ya TanjilG_05080 HSP17.4 ilionyesha viwango vya chini vya kujieleza katika aina zote zilizosomwa na pointi za wakati (Mchoro 6g).Thamani ya juu zaidi ilizingatiwa katika HPI 24 katika idadi ya watu 22660 (0.14 ± 0.02, ongezeko la mara nane la kukabiliana na chanjo).
Ulinganisho wa wasifu wa usemi wa jeni (Kielelezo 7) ulifichua uwiano wa juu kati ya TanjilG_10657 na jeni nyingine nne: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80G) = 0.80 G_9 = 0.80 (r = 0.80);Matokeo kama haya yanaweza kuonyesha udhibiti wa ushirikiano wa jeni hizi wakati wa majibu ya ulinzi.Jeni za TanjilG_12861 na TanjilG_23384 zilionyesha wasifu tofauti wa usemi wenye thamani za chini za uwiano wa Pearson (kutoka 0.08 hadi 0.43 na -0.19 hadi 0.28, mtawalia) ikilinganishwa na jeni nyingine.
Uhusiano kati ya wasifu wa usemi wa jeni uligunduliwa kwa kutumia kiasi cha PCR.Mistari ifuatayo ya majani membamba ya lupine ilichanganuliwa: 83A:476 (sugu, iliyobeba homozygous Lanr1 aleli), Mandelup (inastahimili wastani, iliyobeba homozigosi AnMan aleli), Boregine (kinzani, asili ya kijenetiki haijulikani), na Idadi ya Watu 22660 (inayoathiriwa).Vipindi vitatu vilihesabiwa (saa 6, 12 na 24 baada ya kuchanjwa), ikiwa ni pamoja na kuchanjwa (Colletotrichum lupini, aina ya Col-08, iliyopatikana kutoka mashamba ya lupine huko Wierzhenice, Poland, mwaka wa 1999) na kudhibiti mimea (iliyochanjwa sham).Kiwango kinaonyesha thamani ya mgawo wa uunganisho wa Pearson.
Kulingana na data iliyopatikana kwa nguvu 6 za farasi kwa kila inchi, WGCNA ilitekelezwa mnamo 9981 DEG iliyotambuliwa kwa kulinganisha mitambo iliyochanjwa na kudhibiti ili kuzingatia majibu ya mapema ya ulinzi (Jedwali la Nyongeza S12).Module 22 za jeni (ndizo) zilipatikana na wasifu wa usemi unaohusiana (chanya au hasi) kati ya aina za jeni na vibadala vya majaribio. Kwa wastani, viwango vya usemi wa jeni vilikuwa vikishuka kwa mpangilio 83A:476 > Mandelup > Boregine > Idadi ya Watu 22660 (katika vibadala vyote viwili, hata hivyo, mwelekeo huu ulikuwa na nguvu zaidi katika mimea ya udhibiti). Kwa wastani, viwango vya usemi wa jeni vilikuwa vikishuka kwa mpangilio 83A:476 > Mandelup > Boregine > Idadi ya Watu 22660 (katika vibadala vyote viwili, hata hivyo, mwelekeo huu ulikuwa na nguvu zaidi katika mimea ya udhibiti). В среднем уровни экспрессии генов снижались в порядке 83A:476 Mandelup > Boregine > Idadi ya Watu 22660 растений). Kwa wastani, viwango vya usemi wa jeni vilipungua katika mpangilio 83A:476 > Mandelup > Boregine > Idadi ya Watu 22660 (katika vibadala vyote viwili, hata hivyo, mwelekeo huu ulikuwa na nguvu zaidi katika mimea ya udhibiti).平均而言，基因表达水平按83A:476 > Mandelup > Boregine > Idadi ya watu 22660更强.平均 而 言 , 基因 水平 按 按 83a: 476> mandelup> boregine> idadi ya watu 22660 的顺序 下降 （，在 种 中 中 在 种 中 中 在 种 中 中 。 .............. В среднем уровни экспрессии генов снижались katika ряду 83A:476 Mandelup > Boregine > Idadi ya Watu 22660 ни). Kwa wastani, viwango vya usemi wa jeni vilipungua katika mfululizo 83A:476 > Mandelup > Boregine > Idadi ya Watu 22660 (hata hivyo, katika anuwai zote mbili, mwelekeo huu ulikuwa na nguvu zaidi katika mimea ya udhibiti).Chanjo ilisababisha kurekebishwa kwa usemi wa jeni, haswa katika moduli 18, 19, 14, 6 na 1 (katika mpangilio wa athari), udhibiti mbaya (kwa mfano moduli 9 na 20) au kwa athari zisizo na upande (kwa mfano moduli 11, 22, 8 na 13).Uchanganuzi wa uboreshaji wa neno la GO (Jedwali la Ziada S13) ulifichua "GO: 0006952 Majibu ya Kinga" kwa moduli iliyochanjwa (18) yenye uwezeshaji wa kiwango cha juu zaidi, ikijumuisha jeni zilizochanganuliwa na qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 kama picha nyingi zaidi za TanjilG_10657), TanjilG_106572 moduli za awali (9).Kiunganishi cha Moduli ya 18 (Mchoro 8) kilitambuliwa kama jeni la TanjilG_26536 linalosimba protini ya LlR18B inayofanana na PR-10, na kontakta ya moduli 9 ilitambuliwa kama jeni la TanjilG_28955 linalosimba protini ya mfumo wa picha II wa PsbQ.Jeni la ustahimilivu la anthracnose Lanr1, TanjilG_05042, lilipatikana katika moduli ya 22 (Kielelezo 9) na inahusishwa na maneno "GO:0044260 Michakato ya kimetaboliki ya seli za seli" na "GO:0006355 Udhibiti wa Unukuzi, uundaji wa DNA12G02 hubeba Taratibu za Tarakilishi".jeni husimba sababu ya manukuu ya shinikizo la joto A-4a (HSFA4a).
Uchanganuzi wa uzani wa mtandao wa udhihirisho wa jeni wa moduli zilizo na masharti ya mchakato wa kibaolojia "GO: 0006952 majibu ya Ulinzi".Ligation imerahisishwa ili kuangazia jeni nne zilizochanganuliwa na qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 na TanjilG_27015).
Uchanganuzi wa mtandao uliopimwa wa usemi wa jeni wa moduli yenye neno la mchakato wa kibaolojia "GO: 0006355: Udhibiti wa maandishi, uundaji wa DNA" na kubeba jeni sugu la anthracnose Lanr1 TanjilG_05042.Uunganishaji umerahisishwa ili kutenga jeni ya TanjilG_05042 na jeni ya kati ya TanjilG_01212.
Uchunguzi wa upinzani wa anthracnose uliokusanywa nchini Australia ulionyesha kuwa aina nyingi za mimea zilizotolewa mapema zilishambuliwa;Kalya, Coromup na Mandelup zimeelezwa kuwa sugu kwa wastani, huku Wonga, Tanjil na 83A:476 zimeelezwa kuwa sugu kwa kiwango kikubwa26,27,31.alikuwa na aleli sawa ya upinzani, iliyoteuliwa Lanr1, na Coromup na Mandelup walikuwa na aleli tofauti, iliyoteuliwa AnMan10, 26, 39, huku Kalya akipitisha aleli tofauti., Lanr2.Uchunguzi wa ukinzani wa anthracnose nchini Ujerumani ulisababisha kutambuliwa kwa laini sugu ya Bo7212 yenye mgombeaji aleli isipokuwa Lanr1, iliyoteuliwa LanrBo36.
Utafiti wetu ulifunua masafa ya chini sana (takriban 6%) ya aleli ya Lanr1 kwenye plasma iliyojaribiwa.Uchunguzi huu unaendana na matokeo ya uchunguzi wa viini vya magonjwa ya Uropa Mashariki kwa kutumia viashirio vya Anseq3 na Anseq4, ambavyo vilionyesha kuwa aleli ya Lanr1 iko katika mistari miwili pekee ya Kibelarusi.Hii inaonyesha kwamba aleli ya Lanr1 bado haitumiki sana na programu za ufugaji wa kienyeji, tofauti na Australia, ambako ni mojawapo ya njia kuu za ufugaji unaosaidiwa na alama.Hii inaweza kuwa kutokana na kiwango cha chini cha upinzani kilichotolewa na aleli ya Lanr1 katika hali ya uga wa Ulaya ikilinganishwa na ripoti ya Australia.Kwa kuongeza, tafiti za anthracnose katika maeneo yenye mvua nyingi nchini Australia zimeonyesha kuwa majibu ya upinzani yaliyopatanishwa na aleli ya Lanr1 inaweza kuwa na ufanisi katika hali ya hewa ambayo inakuza ukuaji na maendeleo ya haraka ya pathogen19,42.Kwa hakika, katika utafiti wa sasa, baadhi ya dalili za anthracnose pia zilizingatiwa katika genotypes kubeba Lanr1 aleli, na kupendekeza kuwa upinzani unaweza kutoweka chini ya hali nzuri kwa ajili ya maendeleo ya C. lupini.Kwa kuongezea, tafsiri chanya za uwongo za uwepo wa alama za Anseq3 na Anseq4, ambazo ni takriban 1 cm kutoka eneo la Lanr1, zinawezekana 28,30,43.
Utafiti wetu ulionyesha kuwa 83A:476, iliyobeba aleli ya Lanr1, iliitikia chanjo ya C. lupini na urekebishaji wa maandishi ya kiwango kikubwa katika hatua ya kwanza iliyochambuliwa (6 hpi), wakati huko Mandelup, ikibeba AnMan aleli, majibu ya maandishi yalionekana baadaye sana.(kutoka 24 hadi 48 hp).Tofauti hizi za muda katika majibu ya ulinzi huhusishwa na tofauti katika dalili za ugonjwa, kuonyesha umuhimu wa utambuzi wa mapema wa pathojeni kwa jibu la mafanikio kwa upinzani.Ili kuambukiza tishu za mmea, spora za kimeta lazima zipitie hatua kadhaa za ukuaji kwenye uso wa mwenyeji, ikijumuisha kuota, mgawanyiko wa seli, na uundaji wa appressoria.Kiambatisho ni muundo unaoambukiza unaoshikamana na uso wa mwenyeji na kuwezesha kupenya ndani ya tishu za jeshi.Kwa hivyo, spores za C. gloeosporioides katika dondoo la pea zilionyesha mgawanyiko wa kwanza wa kiini baada ya dakika 75-90 ya incubation, uundaji wa tube ya vijidudu baada ya dakika 90-120, na ukandamizaji baada ya saa 4 45.Mango C. gloeosporioides ilionyesha zaidi ya 40% ya kuota kwa konidial baada ya saa 3 za incubation na karibu 20% ya uundaji wa vikandamizaji baada ya saa 4.Jeni la CAP20 linalohusishwa na virusi vya C. gloeosporioides lilionyesha shughuli ya maandishi katika conidia inayotengeneza epiphyte baada ya saa 3.5 kuangukiwa kwenye nta ya uso wa parachichi yenye viwango vya juu vya protini ya CAP20 baada ya saa 4 dakika 46.Vile vile, shughuli ya jeni za biosynthesis ya melanini katika C. trifolii ilisababishwa wakati wa incubation ya saa 2 ikifuatiwa na kuundwa kwa appressorium baada ya saa 1.Uchunguzi wa tishu za majani umeonyesha kuwa jordgubbar zilizochanjwa na C. acutatum huwa na ukandamizaji wa kwanza kwa 8 hpi, wakati nyanya zilizochanjwa na C. cocodes zina ukandamizaji wa kwanza kwa 4 hpi48,49.kwa kiasi kikubwa inalingana na kipimo cha wakati cha Colletotrichum spp.mchakato wa kuambukiza.Majibu ya haraka ya ulinzi kwa 83A:476 yanapendekeza kuhusika kwa upinzani wa mimea na jeni za kinga (ETI) katika mstari huu, wakati majibu yaliyochelewa ya Mandelup yanaunga mkono nadharia ya 50. Majibu ya awali kwa 83A: 476 na Mandelup.Muingiliano wa sehemu kati ya jeni zinazodhibitiwa juu au chini katika mwitikio uliocheleweshwa pia unaunga mkono dhana hii, kwani ETI mara nyingi huchukuliwa kuwa jibu la MTI lililoharakishwa na lililoimarishwa ambalo huishia kwenye kifo cha seli kilichopangwa kwenye tovuti ya maambukizi, inayojulikana kama mshtuko wa anaphylactic 51,52.
Jeni nyingi zinazohusishwa na neno linalowakilishwa kupita kiasi Gene Ontology GO:0006952 "Defense Response" ni homologues 11 za ujumbe wa 22 wa kufunga unaosababishwa na mkazo (sawa na SAM22) na wale saba kuu wa kupenda protini za mpira (MLPs).-kama protini 31, 34, 43 na 423 zilionyesha kufanana kwa mlolongo.Jeni zinazofanana na SAM22 zilionyesha uanzishaji mkubwa uliodumu kwa muda mrefu, ukionyesha viwango vya kuongezeka kwa upinzani wa anthracnose (83A: 476 na Boregine).Hata hivyo, jeni zinazofanana na MLP zilidhibitiwa tu katika mistari iliyobeba upinzani wa mtahiniwa (83A:476/Lanr1 kwa 6 hpi na Mandelup/AnMan kwa 24 hpi).Ikumbukwe kwamba homologi zote zinazofanana na SAM22 zinazotambuliwa hutoka kwa nguzo ya jeni inayochukua takriban kb 105, ilhali jeni zinazofanana na MLP hutoka katika maeneo tofauti ya jenomu.Uwezeshaji ulioratibiwa wa jeni kama hizo za SAM22 pia ulipatikana katika utafiti wetu wa awali wa upinzani wa NLL kwa chanjo ya Diaporthetoxica, na kupendekeza kuwa wanahusika katika vipengele vya usawa vya majibu ya ulinzi.Hitimisho hili pia linaungwa mkono na ripoti za mwitikio mzuri wa jeni zinazofanana na SAM22 kwa jeraha au matibabu na asidi salicylic, vishawishi vya kuvu, au peroksidi ya hidrojeni.
Jeni zinazofanana na MLP zimeonyeshwa kujibu mikazo mbalimbali ya kibiolojia na kibayolojia, ikiwa ni pamoja na maambukizi ya bakteria, virusi na vimelea vya pathogenic katika spishi nyingi za mimea55.Maelekezo ya mwitikio wa mwingiliano fulani kati ya mimea na vimelea vya magonjwa yalianzia kuongezeka kwa nguvu (yaani, wakati wa kushambuliwa kwa pamba na Verticillium dahliae) hadi kupungua kwa kiasi kikubwa (yaani, baada ya kuambukizwa kwa mti wa tufaha na Alternaria spp.)56,57.Udhibiti mkubwa wa jeni la MLP-like 423 umezingatiwa wakati wa ulinzi wa parachichi kwa maambukizi ya F. niger na wakati wa kuambukizwa kwa mti wa apple Botryosphaeria berengeriana f.cn.piricola na Alternaria alternata ni magonjwa ya tufaha58,59.Kwa kuongezea, apple calli inayodhihirisha kupita kiasi jeni ya MLP-kama 423 ilikuwa na mwonekano mdogo wa jeni zinazohusiana na ukinzani na ilishambuliwa zaidi na maambukizi ya fangasi59.Kufuatia Fusarium oxysporum f, jeni kama MLP-kama 423 pia ilikandamizwa katika vijidudu vya kawaida vya maharagwe sugu.cn.Maambukizi ya maharagwe 60.
Wanachama wengine wa familia ya PR-10 waliotambuliwa katika utafiti wetu wa RNA-seq walikuwa jeni za LlR18A na LlR18B katika kukabiliana na udhibiti, pamoja na jeni iliyodhibitiwa (1 jeni) au iliyopunguzwa (3 jeni) kwa protini ya uhamisho ya lipid DIR1..Kwa kuongezea, WGCNA inaangazia jeni la LlR18B kama kitovu katika moduli hii, ambayo huathirika sana na chanjo na hubeba jeni kadhaa za majibu ya kinga.Jeni za LlR18A na LlR18B zilichochewa katika majani ya lupini ya manjano ili kukabiliana na bakteria ya pathogenic, na vile vile kwenye mashina ya NLL baada ya chanjo ya D. toxica, wakati homologue ya mchele ya jeni hizi, RSOsPR10, ilichochewa kwa kasi na maambukizi ya ukungu ambayo huenda yakahusika katika njia ya asidi ya jasmonic, 62, njia ya kuashiria ya DIFIDE62, isiyo na maana ya DIFIDE62. protini za usafiri wa lipid ambazo zinahitajika kwa mwanzo wa upinzani uliopatikana wa utaratibu (SAR).Pamoja na maendeleo ya athari za kinga, protini ya DIR1 husafirishwa kutoka kwa lengo la maambukizi kupitia phloem ili kushawishi SAR katika viungo vya mbali.Jambo la kufurahisha ni kwamba jeni la TanjilG_02313 DIR1 lilichochewa kwa kiasi kikubwa mara ya kwanza katika mstari wa 84A:476 na Idadi ya Watu 22660, lakini ukinzani wa anthracnose ulisitawi kwa mafanikio katika mstari wa 84A:476 pekee.Hii inaweza kuonyesha ufanyaji kazi mdogo wa jeni la DIR1 katika NLL, kwa kuwa homologues tatu zilizobaki zilijibu kwa chanjo tu katika mstari wa 83A:476 kwenye 6 hpi, na jibu hili lilielekezwa chini.
Katika utafiti wetu, vipengele vya kawaida vinavyohusiana na mchakato wa kibiolojia unaoitwa "GO: 0055114 mchakato wa Redox" ulikuwa protini ya cytochrome P450, peroxidase, asidi linoleic 9S-/13S-lipoxygenase, na 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase.Zaidi ya hayo, WGCNA yetu inafafanua homologue ya HSFA4a kama moduli za kubeba hub kama vile mgombeaji wa jeni la upinzani la Lanr1 TanjilG_05042.HSFA4a ni sehemu ya udhibiti unaotegemea redox wa unukuzi wa nyuklia katika mimea.
Protini za Cytochrome P450 ni vioksidishaji vioksidishaji ambavyo huchochea athari za hidroksilishaji tegemezi za NADPH na/au O2 katika kimetaboliki ya msingi na ya upili, ikijumuisha kimetaboliki ya xenobiotiki, na vile vile homoni, asidi ya mafuta, sterols, vijenzi vya ukuta wa seli, biopolima, na muundo wa biosynthesis wa misombo ya kinga katika mmea wa P5, uboreshaji wa kimuundo wa 5 ulipunguzwa. 10.6 log2 (mabadiliko ya mara) hadi 5.7 kutokana na idadi kubwa ya homologi zilizobadilishwa (37) na tofauti za mifumo ya mwitikio kati ya jeni mahususi, inayoakisi masahihisho ya juu..Kutumia data ya RNA-seq pekee ili kufafanua utendakazi wekaji wa kibayolojia wa jeni za NLL katika jamii kubwa ya protini kama hiyo itakuwa ya kubahatisha sana.Hata hivyo, ni muhimu kuzingatia kwamba baadhi ya jeni za cytochrome P450 zinahusishwa na kuongezeka kwa upinzani kwa fungi ya pathogenic au bakteria, ikiwa ni pamoja na mchango wa athari za mzio69,70,71.
Peroxidasi za daraja la III ni vimeng'enya vingi vya mmea vinavyohusika katika michakato mingi ya kimetaboliki wakati wa ukuaji na ukuzaji wa mmea, na vile vile katika kukabiliana na mikazo ya kimazingira kama vile chumvi, ukame, mwanga mwingi, na shambulio la pathojeni72.Peroxidases huhusika katika mwingiliano wa aina kadhaa za mimea na Anthracis, ikiwa ni pamoja na Stylosanthes humilis na C. gloeosporioides, Lens culinaris na C. truncatum, Phaseolus vulgaris na C. lindemuthianum, Cucumis sativus na C. lagenarium73,764,75.Jibu ni la haraka sana, wakati mwingine hata kwa HPI 4, kabla ya kuvu kupenya tishu za mmea73.Jeni ya peroxidase pia iliitikia chanjo ya D. toxica NLL.Mbali na kazi zao za kawaida za kudhibiti kupasuka kwa oxidative au kuondoa mkazo wa oksidi, peroxidase inaweza kuingilia kati ukuaji wa pathojeni kwa kuunda vikwazo vya kimwili kulingana na uimarishaji wa ukuta wa seli wakati wa kuunganisha, subunit au kuunganisha msalaba wa misombo maalum.Chaguo hili la kukokotoa linaweza kuhusishwa katika siliko na jeni ya TanjilG_03329 inayosimba peroxidase ya anion inayotengeneza lignin ambayo ilidhibitiwa kwa kiasi kikubwa katika utafiti wetu katika mstari sugu wa 83A:476 katika 6 HPI, lakini si katika aina nyinginezo na nukta za muda ambazo hazikujibu.
9S-/13S-lipoxygenase ya asidi linoleic ni hatua ya kwanza katika njia ya oksidi ya biosynthesis ya lipid78.Bidhaa za njia hii zina kazi nyingi katika ulinzi wa mimea, ikiwa ni pamoja na uimarishaji wa ukuta wa seli kupitia uundaji wa amana za callose na pectini, na udhibiti wa mkazo wa oksidi kupitia uzalishaji wa aina tendaji za oksijeni79,80,81,82,83.Katika utafiti wa sasa, usemi wa asidi linoleic 9S-/13S-lipoxygenase ulibadilishwa katika aina zote, lakini katika idadi ya watu 22660, udhibiti ulienea kwa nyakati tofauti, wakati katika matatizo ya kubeba Lanr1 na aleli ya AnMan, inasisitiza utofauti wa safu ya oxylipinthi ya oxylipinthi.
Homologue ya 1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase (ACO) ilidhibitiwa kwa kiasi kikubwa (jeni 9) au kupunguzwa (jeni 2) ilipochanjwa lupine.Isipokuwa mara mbili, majibu haya yote yalitokea kwa 6 hp.katika 83A:476.Mmenyuko wa enzymatic unaopatanishwa na protini za ACO ni hatua ya kupunguza kiwango katika utengenezaji wa ethilini na kwa hivyo inadhibitiwa sana84.Ethylene ni homoni ya mimea ambayo ina jukumu mbalimbali katika kudhibiti ukuaji wa mimea na kukabiliana na hali ya abiotic na biotic stress.Uingizaji wa maandishi ya ACO na uanzishaji wa njia ya kuashiria ethilini kunahusika katika kuongeza upinzani wa mchele kwa kuvu ya hemibiotrophic oryzae oryzae kwa kudhibiti uzalishaji wa spishi tendaji za oksijeni na phytoaleksini.Mchakato unaofanana sana wa maambukizi ya majani uliopatikana kati ya M. oryzae na C. lupini88,89, dhidi ya hali ya nyuma ya udhibiti mkubwa wa homologues za ACO katika mstari wa 83A:476 ulioripotiwa katika utafiti huu, hubadilisha uwezekano wa kutoa upinzani kwa NLL anthracnose Ethylene hatua kuu ya kuashiria katika njia za molekuli.
Katika utafiti wa sasa, ukandamizaji mkubwa wa jeni nyingi zinazohusiana na usanisinuru ulizingatiwa katika hpi 6 katika 83A: 476 na hpi 48 huko Mandeloop na idadi ya watu 22660.Kiwango na maendeleo ya mabadiliko haya ni sawia na kiwango.Upinzani wa anthracnose ulizingatiwa katika jaribio hili.Hivi karibuni, ukandamizaji mkali na wa mapema wa nakala zinazohusiana na photosynthesis umeripotiwa katika mifano kadhaa ya mwingiliano wa mimea-pathogen, ikiwa ni pamoja na bakteria ya pathogenic na fungi.Haraka (kutoka 2 HPI katika baadhi ya mwingiliano) na ukandamizaji wa kimataifa wa jeni zinazohusiana na usanisinuru katika kukabiliana na maambukizi inaweza kusababisha kinga ya mimea kulingana na uwekaji wa spishi tendaji za oksijeni na mwingiliano wao na njia ya asidi ya salicylic kupatanisha athari za mzio 90,94.
Kwa kumalizia, mbinu za kukabiliana na utetezi zinazopendekezwa kwa ukoo unaostahimili zaidi (83A:476) ni pamoja na utambuzi wa haraka wa pathojeni na jeni la R (huenda TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) na asidi ya salicylic iliyoingiliana na mzio na ishara ya ethilini, ikifuatiwa na kuanzishwa kwa SAR ya masafa marefu.hatua ni mkono na DIR-1 protini.Ikumbukwe kwamba muda wa biotrophic kwa maambukizi ya C. lupini ni mfupi sana (takriban siku 2), ikifuatiwa na ukuaji wa necrotic95.Mpito kati ya hatua hizi unaweza kuhusishwa na nekrosisi na usemi wa protini inducible ethilini ambazo hufanya kama vichochezi vya athari za hypersensitivity katika mimea mwenyeji.Kwa hiyo, dirisha la muda la kukamata kwa mafanikio C. lupini katika hatua ya biotrophic ni nyembamba sana.Upangaji upya wa jeni unaohusishwa na redoksi na usanisinuru unaozingatiwa katika 83A:476 saa 6 hpi unalingana na kuendelea kwa hyphae ya ukungu na hutangaza ukuzaji wa mwitikio mzuri wa kinga katika hatua ya biotrofiki.Majibu ya maandishi ya Mandelup na idadi ya watu 22660 yanaweza kucheleweshwa sana kukamata kuvu kabla ya kubadili ukuaji wa necrotic, hata hivyo, Mandelup inaweza kuwa na ufanisi zaidi kuliko idadi ya 22660 kwa sababu udhibiti wa haraka wa PR-10 unakuza upinzani wa usawa.
ETI, inayoendeshwa na jeni ya kanuni ya R, inaonekana kuwa njia ya kawaida ya upinzani wa maharagwe kwa anthracnose.Kwa hivyo, katika mfano wa kunde Medicago truncatula, upinzani dhidi ya anthracnose hutolewa na jeni la RCT1, mwanachama wa darasa la jeni la mmea wa TIR-NBS-LRR97 R.Jeni hii pia hutoa upinzani wa anthracnose kwa wigo mpana katika alfalfa inapohamishwa kwa mimea inayoshambuliwa.Katika maharagwe ya kawaida (P. vulgaris), zaidi ya jeni mbili za upinzani wa anthracnose zimetambuliwa hadi sasa.Baadhi ya jeni hizi zinapatikana katika maeneo yasiyo na jeni zozote za R, hata hivyo nyingine nyingi ziko kwenye kingo za kromosomu zinazobeba nguzo ya jeni ya NBS-LRR, ikiwa ni pamoja na TIR-NBS-LRRs99.Utafiti wa SSR wa jenomu kote pia ulithibitisha uhusiano wa jeni la NBS-LRR na ukinzani wa anthracnose katika maharagwe ya kawaida.Jeni ya kisheria ya R pia ilipatikana katika eneo la genomic iliyobeba locus kuu ya upinzani ya anthracnose katika lupine 101 nyeupe.
Kazi yetu inaonyesha kwamba mmenyuko wa upinzani wa papo hapo, ulioamilishwa katika hatua ya awali ya maambukizi ya mimea (ikiwezekana si zaidi ya 12 hpi), inalinda vyema lupine yenye majani nyembamba kutoka kwa anthracnose inayosababishwa na kuvu ya pathogenic Collelotrichum lupini.Kwa kutumia mpangilio wa juu wa matokeo, tulionyesha maelezo mafupi ya usemi tofauti ya jeni zinazokinza anthracnose katika mimea ya NLL inayopatanishwa na jeni sugu za Lanr1 na AnMan.Ulinzi wenye mafanikio unahusisha kubuni kwa uangalifu jeni za protini zinazohusika katika redoksi, usanisinuru, na pathogenesis ndani ya saa chache baada ya mmea kugusa pathojeni kwa mara ya kwanza.Athari sawa za kinga, lakini zimechelewa kwa wakati, hazina ufanisi katika kulinda mimea kutokana na magonjwa.Ukinzani wa kimeta unaopatanishwa na jeni la Lanr1 hufanana na mwitikio wa haraka wa jeni la R (kinga inayotokana na athari), huku jeni ya AnMan ina uwezekano mkubwa wa kutoa majibu ya mlalo (kinga inayochochewa na muundo wa molekuli unaohusishwa na microbe), ikitoa kiwango cha wastani cha uendelevu.
Laini 215 za NLL zilizotumika kuchunguza alama za anthracnose zilijumuisha aina 74, mistari 60 iliyopatikana kwa kuvuka au kuzaliana, mabadiliko 5, na vijidudu 76 vya porini au asili.Mistari hiyo ilitoka nchi 17, haswa kutoka Poland (58), Uhispania (47), Ujerumani (27), Australia (26), Urusi (19), Belarusi (7), Italia (5) na mistari mingine.kutoka nchi 10.Seti hii pia inajumuisha mistari sugu ya marejeleo: 83A:476, Tanjil, Wonga iliyobeba aleli ya Lanr1, na Mandelup iliyobeba aleli ya AnMan.Laini hizo zilipatikana kutoka Hifadhidata ya Rasilimali Jeni ya Lupine ya Ulaya inayodumishwa na Poznań Plant Breeding Ltd., Wiatrowo, Poland (Jedwali la Ziada S1).
Mimea ilikuzwa chini ya hali iliyodhibitiwa (picha ya masaa 16, joto 25 ° C wakati wa mchana na 18 ° C usiku).Nakala mbili za kibaolojia zilichambuliwa.DNA ilitengwa kutoka kwa majani ya wiki tatu kwa kutumia DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Ujerumani) kulingana na itifaki.Ubora na mkusanyiko wa DNA iliyotengwa ilitathminiwa kwa mbinu za spectrophotometric (NanoDrop 2000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA).Alama ya AnManM1 inayoashiria jeni sugu ya anthracnose AnMan (inayotokana na cv. Mandelup) na vialama Anseq3 na Anseq4 pembeni ya jeni Lanr1 (inayotokana na cv. Tanjil) vilichanganuliwa 11,26,28.Homozigoti za aleli sugu ziliwekwa alama kama “1″, zinazoweza kuathiriwa – kama “0”, na heterozigoti – kama 0.5.
Kulingana na matokeo ya uchunguzi wa vialama vya AnManM1, AnSeq3 na AnSeq4 na upatikanaji wa mbegu kwa ajili ya majaribio ya mwisho ya ufuatiliaji, njia 50 za NLL zilichaguliwa kwa ajili ya ustahimilivu wa anthracnose.Uchanganuzi ulifanywa kwa nakala katika chafu kinachodhibitiwa na kompyuta na muda wa kupiga picha wa saa 14 na kiwango cha joto cha 22°C wakati wa mchana na 19°C usiku.Mbegu hukwaruzwa (kukatwa kwa koti ya mbegu upande wa pili wa kiinitete kwa blade kali) kabla ya kupanda ili kuzuia kutokuwepo kwa mbegu kwa sababu ya ganda la mbegu kuwa gumu sana na kuhakikisha kuota sawa.Mimea ilipandwa katika sufuria (11 × 11 × 21 cm) na udongo wenye rutuba (TS-1 REC 085 Medium Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warsaw, Poland).Uwekaji chanjo ulifanyika kwa aina ya Colletotrichum lupini Col-08, iliyokuzwa mwaka wa 1999 kutoka kwa mashina ya mimea ya lupine yenye majani membamba iliyokuzwa katika shamba huko Verzhenítsa, Polandi Kubwa (52° 27′ 42″ N 17° 04′ 05″ E ).Pata eneo.Vitenge vilikuzwa katika wastani wa SNA kwa 20° C. chini ya mwanga mweusi kwa muda wa siku 21 ili kushawishi uharibifu.Wiki nne baada ya kupanda, wakati mimea imefikia hatua ya jani 4-6, chanjo ilifanyika kwa kunyunyizia dawa na kusimamishwa kwa conidia kwa mkusanyiko wa 0.5 x 106 conidia kwa ml.Baada ya chanjo, mimea iliwekwa gizani kwa saa 24 kwa unyevu wa karibu 98% na joto la 25 ° C ili kuwezesha kuota kwa conidia na mchakato wa maambukizi.Mimea hiyo ilikuzwa chini ya kipindi cha picha cha masaa 14 kwa siku ya 22°C/19°C usiku na unyevu wa 70%.Alama ya ugonjwa ilifanyika siku 22 baada ya kuchanjwa na ilianzia 0 (kinga) hadi 9 (inayoweza kuathiriwa sana) kulingana na uwepo au kutokuwepo kwa vidonda vya necrotic kwenye shina na majani.Kwa kuongeza, baada ya bao, uzito wa mimea ulipimwa.Uhusiano kati ya aina za jeni za kialama na phenotipu za ugonjwa ulikokotolewa kama uunganisho wa mlolongo wa hatua mbili (kutokuwepo kwa alama za heterozygous katika seti ya mistari ya uchanganuzi wa phenotype inayokinza anthracnose).