பெப்டைடுகள் மற்றும் புரோட்டீன்களை அதிக செயல்திறன் கொண்ட திரவ குரோமடோகிராபி மூலம் பிரிப்பதற்காக கலப்பு-முறை நிலையான கட்டங்களை தயாரித்தல்

Nature.com ஐப் பார்வையிட்டதற்கு நன்றி.நீங்கள் பயன்படுத்தும் உலாவிப் பதிப்பில் CSS க்கு மட்டுப்படுத்தப்பட்ட ஆதரவே உள்ளது. சிறந்த அனுபவத்திற்காக, புதுப்பிக்கப்பட்ட உலாவியைப் பயன்படுத்துமாறு பரிந்துரைக்கிறோம் (அல்லது Internet Explorer இல் பொருந்தக்கூடிய பயன்முறையை முடக்கவும்).இதற்கிடையில், தொடர் ஆதரவை உறுதிசெய்ய, ஸ்டைல்கள் மற்றும் ஜாவாஸ்கிரிப்ட் இல்லாமல் தளத்தைக் காண்பிப்போம்.
நுண்துளை சிலிக்கா துகள்கள் மேக்ரோபோரஸ் துகள்களைப் பெறுவதற்கு சில மாற்றங்களுடன் சோல்-ஜெல் முறையால் தயாரிக்கப்பட்டன. இந்த துகள்கள் N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) உடன் மீளக்கூடிய கூட்டல் துண்டு துண்டான சங்கிலி பரிமாற்றம் (RAFT) பாலிமரைசேஷன் மூலம் பெறப்பட்டது. அம்பு-துளை துருப்பிடிக்காத எஃகு நெடுவரிசைகள் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) குழம்பு பேக்கிங் மூலம் நிரம்பியுள்ளன. ஐந்து பெப்டைட்களைக் கொண்ட பெப்டைட் கலவையின் மதிப்பிடப்பட்ட PMP நெடுவரிசைப் பிரிப்பு (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Tyr-Arg, Tyr-Kel-Arg, Tyr-Kel-Arg, மனித சீரம் அல்புமின் (HAS) மற்றும் மனித சீரம் அல்புமின் டிரிப்சின் செரிமானம். உகந்த நீக்குதல் நிலைமைகளின் கீழ், பெப்டைட் கலவையின் தத்துவார்த்த தட்டு எண்ணிக்கை 280,000 தகடுகள்/m² வரை அதிகமாக உள்ளது. வளர்ந்த நெடுவரிசையின் பிரிப்பு செயல்திறனை வணிக அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-Amide க்கு ஒப்பிடுகையில், வணிகரீதியான அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-Amide நிரலைப் பிரித்தெடுத்தல் பத்தியின் சூப்பர் பெர்பார்மன் பத்தியில் இருந்தது. மற்றும் தீர்மானம்.
சமீபத்திய ஆண்டுகளில், உயிரி மருந்துத் தொழில் சந்தைப் பங்கில் கணிசமான அதிகரிப்புடன் உலகளாவிய சந்தையாக மாறியுள்ளது. உயிரி மருந்துத் தொழில்துறையின் வெடிக்கும் வளர்ச்சியுடன், பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களின் பகுப்பாய்வு மிகவும் விரும்பப்படுகிறது. உடல் திரவங்கள், திசுக்கள் மற்றும் உயிரணுக்களில் உள்ள புரதங்களின் பகுப்பாய்வு மற்றும் குணாதிசயமானது, ஒரு மாதிரியில் அதிக எண்ணிக்கையில் கண்டறியக்கூடிய உயிரினங்கள் இருப்பதால் மிகவும் சவாலான பணியாகும். பெப்டைட் மற்றும் புரோட்டீன் வரிசைப்படுத்துதலுக்கு மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி ஒரு சிறந்த கருவியாக இருந்தாலும், அத்தகைய மாதிரிகளை ஒரே நேரத்தில் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமீட்டரில் செலுத்தினால், இது திரவவியல் மூலம் பிரித்தெடுக்கப்படாது. MS பகுப்பாய்வு, ஒரு குறிப்பிட்ட நேரத்தில் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமீட்டருக்குள் நுழையும் பகுப்பாய்வுகளின் எண்ணிக்கையைக் குறைக்கும்4,5,6. கூடுதலாக, திரவ நிலைப் பிரிவின் போது, ​​பகுப்பாய்வுகளை குறுகிய பகுதிகளில் கவனம் செலுத்தலாம், இதன் மூலம் இந்த பகுப்பாய்வுகளை ஒருமுகப்படுத்தலாம் மற்றும் MS கண்டறிதல் உணர்திறனை மேம்படுத்தலாம்.
ஆக்டாடெசில்-மாற்றியமைக்கப்பட்ட சிலிக்காவை (ODS) நிலையான கட்டமாகப் பயன்படுத்தி பெப்டைட் கலவைகளை சுத்திகரிக்கவும் பிரித்தெடுக்கவும் தலைகீழ்-கட்ட திரவ நிறமூர்த்தம் (RP-LC) பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. இருப்பினும், RP நிலையான கட்டங்கள் திருப்திகரமாக பிரிக்கப்படுவதில்லை இந்த பகுப்பாய்வுகளுடன் தொடர்புகொள்வதற்கும் தக்கவைப்பதற்கும் துருவ மற்றும் துருவமற்ற பகுதிகளுடன் கூடிய பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களை பகுப்பாய்வு செய்ய ary கட்டங்கள் தேவைப்படுகின்றன புரதம் பிரித்தல்கள் லார் குழுக்கள் துருவ மற்றும் துருவமற்ற பகுப்பாய்விற்கான நல்ல பிரிப்பு ஆற்றலையும் தனித்தன்மை வாய்ந்த தெரிவுநிலையையும் காட்டுகின்றன, ஏனெனில் பிரிப்பு பகுப்பாய்வு மற்றும் நிலையான கட்டத்திற்கு இடையிலான தொடர்புகளை சார்ந்துள்ளது.மல்டிமோடல் இடைவினைகள் 29, 30, 31, 32. சமீபத்தில், ஜாங் மற்றும் பலர்.30 ஒரு டோடெசில்-டெர்மினேட்டட் பாலிமைன் ஸ்டேஷனரி ஃபேஸ் தயாரித்து ஹைட்ரோகார்பன்கள், மன அழுத்த எதிர்ப்பு மருந்துகள், ஃபிளாவனாய்டுகள், நியூக்ளியோசைடுகள், எஸ்ட்ரோஜன்கள் மற்றும் பல பகுப்பாய்வுகளை வெற்றிகரமாகப் பிரித்தது. துருவ இன்டர்கேலேட்டரில் துருவ மற்றும் துருவமற்ற குழுக்கள் உள்ளன, எனவே இது பெப்டைடுகள் மற்றும் ஹைட்ரோஃபோப் புரோட்டீன்களை பிரிக்கப் பயன்படுகிறது. ஐடி-உட்பொதிக்கப்பட்ட C18 நெடுவரிசைகள்) வணிக ரீதியாக Ascentis Express RP-Amide பத்திகள் என்ற பெயரில் கிடைக்கின்றன, ஆனால் இந்த நெடுவரிசைகள் அமீன் 33 இன் பகுப்பாய்வுக்கு மட்டுமே பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
தற்போதைய ஆய்வில், HSA இன் பெப்டைடுகள் மற்றும் டிரிப்சின் செரிமானங்களைப் பிரிப்பதற்காக ஒரு துருவ-உட்பொதிக்கப்பட்ட நிலையான நிலை (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) தயாரிக்கப்பட்டு மதிப்பிடப்பட்டது. நிலையான கட்டம் பின்வரும் உத்தியைப் பயன்படுத்தி தயாரிக்கப்பட்டது. லைகோல் (PEG), TMOS, வாட்டர் அசிட்டிக் அமிலம், பெரிய துளை அளவு கொண்ட சிலிக்கா துகள்களைத் தயாரிப்பதற்காக சரிசெய்யப்பட்டது. இரண்டாவதாக, ஒரு புதிய லிகண்ட், ஃபீனைல்மேலிமைடு-மெத்தில் வினைல் ஐசோசயனேட், ஒருங்கிணைக்கப்பட்டு சிலிக்கா துகள்களைப் பெறுவதற்குப் பயன்படுத்தப்பட்டது. ஐடி) உகந்த பேக்கிங் திட்டத்தைப் பயன்படுத்துதல். நெடுவரிசையில் ஒரே மாதிரியான படுக்கையை உருவாக்குவதை உறுதிசெய்ய, நெடுவரிசை பேக்கிங் இயந்திர அதிர்வுடன் உதவுகிறது. ஐந்து பெப்டைட்களைக் கொண்ட பெப்டைட் கலவைகளின் பேக் செய்யப்பட்ட நெடுவரிசைப் பிரிப்பை மதிப்பிடவும்;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) மற்றும் மனித சீரம் அல்புமின் (HAS) டிரிப்சின் டைஜஸ்ட். RP-Amide நெடுவரிசை. பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்கள் இரண்டும் PMP நெடுவரிசையில் நன்கு தீர்க்கப்பட்டு திறமையானதாகக் காணப்பட்டது, இது Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசையை விட திறமையானது.
PEG (பாலிஎதிலீன் கிளைகோல்), யூரியா, அசிட்டிக் அமிலம், ட்ரைமெதாக்ஸி ஆர்த்தோசிலிகேட் (TMOS), ட்ரைமெதில் குளோரோசிலேன் (TMCS), டிரிப்சின், மனித சீரம் அல்புமின் (HSA), அம்மோனியம் குளோரைடு, யூரியா, ஹெக்ஸேன் மெத்தில்டிசிலாசேன் (HMDS), மெதக்ரைலாய்ல்-பெர்டிரோக்ளோரைட்-4, ஸ்டைல்டிராக்ஸ்-ஹோரைடு ide (BPO), HPLC கிரேடு அசிட்டோனிட்ரைல் (ACN), மெத்தனால், 2-புரோபனால் மற்றும் அசிட்டோன் சிக்மா-ஆல்ட்ரிச்சிலிருந்து (செயின்ட் லூயிஸ், MO, அமெரிக்கா) வாங்கப்பட்டது.
யூரியா (8 கிராம்), பாலிஎதிலீன் கிளைகோல் (8 கிராம்), மற்றும் 8 மில்லி 0.01 N அசிட்டிக் அமிலம் ஆகியவற்றின் கலவையை 10 நிமிடங்களுக்குக் கிளறி, பின்னர் 24 மில்லி TMOS ஐ பனி-குளிர் நிலையில் சேர்க்கப்பட்டது. எதிர்வினை கலவையை 40 ° C வெப்பநிலையில் 6 மணி நேரம் சூடாக்கி, பின்னர் 120 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 120 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் தண்ணீர் எடுக்கப்பட்டது. ஐடியல் பொருள் 70°C வெப்பநிலையில் 12 மணி நேரம் உலர்த்தப்பட்டது. உலர்ந்த மென்மையான நிறை ஒரு அடுப்பில் வழவழப்பாகவும், 550°C வெப்பநிலையில் 12 மணி நேரம் கணக்கிடவும் செய்யப்பட்டது. மூன்று தொகுதிகள் தயாரிக்கப்பட்டு, துகள் அளவு, துளை அளவு மற்றும் பரப்பளவு ஆகியவற்றில் இனப்பெருக்கம் செய்யக்கூடிய தன்மையை ஆராயும்.
ஸ்டைரீனுடன் ரேடியல் பாலிமரைசேஷனைத் தொடர்ந்து முன்-ஒருங்கிணைக்கப்பட்ட லிகண்ட் ஃபீனைல்மலைமைடு-மெத்தில்வினைலிசோசயனேட் (பிசிஎம்பி) உடன் சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பு மாற்றத்தால், ஒரு துருவக் குழுவைக் கொண்ட கலவை தயாரிக்கப்பட்டது.மொத்த மற்றும் பாலிஸ்டிரீன் சங்கிலிகளுக்கான நிலையான கட்டம். தயாரிப்பு செயல்முறை கீழே விவரிக்கப்பட்டுள்ளது.
N-phenylmaleimide (200 mg) மற்றும் methyl vinyl isocyanate (100 mg) உலர் டோலுயினில் கரைக்கப்பட்டது, மேலும் 0.1 mL 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) எதிர்வினை குடுவையில் சேர்க்கப்பட்டது. 3 மணி நேரம், வடிகட்டி மற்றும் 3 மணி நேரம் 40 ° C ஒரு அடுப்பில் உலர்.
உலர்ந்த சிலிக்கா துகள்கள் (2 கிராம்) உலர் டோலுயினில் (100 மிலி) சிதறடிக்கப்பட்டன, 500 மிலி ரவுண்ட் அடிமட்ட குடுவையில் 10 நிமிடம் கிளறி, சொனிகேட் செய்யப்பட்டன. பிஎம்சிபி (10 மி.கி.) டோலூயினில் கரைக்கப்பட்டு, துளி புனல் வழியாக வடிகட்டப்பட்ட குடுவையில் சொட்டுச் சேர்க்கப்பட்டது. 3 மணிநேரத்திற்கு 60°C. பின்னர், PMCP-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் (100 கிராம்) டோலூயினில் (200 மில்லி) கரைக்கப்பட்டு, 4-ஹைட்ராக்ஸி-TEMPO (2 mL) 100 µL dibutyltin dilaurate வடிப்பானின் முன்னிலையில் ஒரு ஊக்கியாக சேர்க்கப்பட்டது. கலவையானது 5 ° C க்கு 5 மணிநேரம் உலர்த்தப்பட்டது
ஸ்டைரீன் (1 மிலி), பென்சாயில் பெராக்சைடு பிபிஓ (0.5 மிலி), மற்றும் டெம்போ-பிஎம்சிபி-இணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் (1.5 கிராம்) டோலுயினில் சிதறடிக்கப்பட்டு நைட்ரஜனுடன் சுத்தப்படுத்தப்பட்டன. ஸ்டைரீனின் பாலிமரைசேஷன் 100 டிகிரி செல்சியஸில் மேற்கொள்ளப்பட்டு, 12 மணிநேரத்திற்கு 60 டிகிரி செல்சியஸுக்கு மேல் காய்ச்சப்பட்டது. படம் 1 இல்.
மாதிரிகள் 10-3 Torr க்கும் குறைவான எஞ்சிய அழுத்தத்தைப் பெற 1 மணிநேரத்திற்கு 393 K இல் டீகாஸ் செய்யப்பட்டன. P/P0 = 0.99 இன் ஒப்பீட்டு அழுத்தத்தில் உறிஞ்சப்பட்ட N2 இன் அளவு மொத்த துளை அளவை தீர்மானிக்க பயன்படுத்தப்பட்டது. , ஜப்பான்).உலர்ந்த மாதிரிகள் (வெற்று சிலிக்கா மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள்) ஒட்டும் கார்பன் டேப்பைப் பயன்படுத்தி ஒரு அலுமினிய நெடுவரிசையில் வைக்கப்பட்டன. Q150T ஸ்பட்டர் கோட்டரைப் பயன்படுத்தி மாதிரிகளில் தங்கம் பூசப்பட்டது, மேலும் 5 nm Au அடுக்கு மாதிரிகள் மீது டெபாசிட் செய்யப்பட்டது. இது குறைந்த மின்னழுத்தத்தை வழங்குகிறது tham, MA, USA) Flash EA1112 தனிமப் பகுப்பாய்வி தனிமப் பகுப்பாய்விற்குப் பயன்படுத்தப்பட்டது. A Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 துகள் அளவு பகுப்பாய்வி துகள் அளவு விநியோகத்தைப் பெறப் பயன்படுத்தப்பட்டது. நிர்வாண சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் 5 மி.கி. , 5 நிமிடங்களுக்கு சுழல், மற்றும் Mastersizer இன் ஆப்டிகல் பெஞ்சில் வைக்கப்பட்டது. தெர்மோகிராவிமெட்ரிக் பகுப்பாய்வு நிமிடத்திற்கு 5 °C என்ற விகிதத்தில் 30 முதல் 800 °C வெப்பநிலை வரம்பில் செய்யப்பட்டது.
ஸ்லரி பேக்கிங் முறையைப் பயன்படுத்தி, Ref இல் பயன்படுத்தப்பட்ட அதே நடைமுறையைப் பயன்படுத்தி, கண்ணாடி-கோடப்பட்ட துருப்பிடிக்காத எஃகு குறுகலான-துளை அளவுகள் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) நிரம்பியுள்ளன.31.ஒரு துருப்பிடிக்காத எஃகு நெடுவரிசை (கண்ணாடி-வரிசை, 100 × 1.8 மிமீ ஐடி) ஒரு 1 µm ஃப்ரிட் கொண்ட ஒரு அவுட்லெட் பொருத்தி ஒரு ஸ்லரி பேக்கருடன் இணைக்கப்பட்டது (ஆல்டெக் டீர்ஃபீல்ட், IL, USA). 150 மி.கி. ஸ்டேஷனரி நெடுவரிசையில் 150 மி.கி.யை விட ஸ்டேஷனரி ஃபேஸ் ஸ்லரியை தயார் செய்யவும். குழம்பு கரைப்பான் மற்றும் உந்துவிக்கும் கரைப்பானாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. 10 நிமிடங்களுக்கு 100 MP, 15 நிமிடங்களுக்கு 80 MP, மற்றும் 30 நிமிடங்களுக்கு 60 MP அழுத்தங்களைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் நெடுவரிசையை வரிசையாக நிரப்பவும். பேக்கிங்கின் போது, ​​மெக்கானிக்கல் அதிர்வு இரண்டு ஜி.சி. நெடுவரிசைக்குள் எந்த சேதமும் ஏற்படாமல் தடுக்க. ஸ்லரி பேக்கிங் யூனிட்டில் இருந்து நெடுவரிசையைத் துண்டித்து, அதன் செயல்திறனைச் சரிபார்க்க, இன்லெட் மற்றும் LC அமைப்புடன் மற்றொரு பொருத்தியை இணைக்கவும்.
ஒரு LC பம்ப் (10AD Shimadzu, ஜப்பான்), இன்ஜெக்டர் (Valco (USA) C14 W.05) உடன் 50nL இன்ஜெக்ஷன் லூப், சவ்வு டிகாஸர் (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS கேபிலரி சாளரம் கட்டப்பட்டது சிறப்பு µLC சாதனம் கண்டறிதல் (UV-2075) கூடுதல் நெடுவரிசைப் பட்டையை விரிவுபடுத்துவதன் விளைவைப் பார்க்கவும். பேக்கேஜிங்கிற்குப் பிறகு, நுண்குழாய்கள் (50 μm ஐடி 365 மற்றும் குறைக்கும் யூனியன் தந்துகிகள் (50 μm) குறைக்கும் யூனியனின் 1/16″ அவுட்லெட்டில் நிறுவப்பட்டன. Multichro 2000 Multichro 2000 சோதனை மென்பொருளில் Multichro 2000 மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி தரவு சேகரிப்பு மற்றும் குரோமடோகிராஃபிக் செயலாக்கம் செய்யப்பட்டது. கிராஃபிக் தரவு OriginPro8 (Northampton, MA) ஆல் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.
மனித சீரம், லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட தூள், ≥96% (அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ்) 3 mg டிரிப்சின் (1.5 mg), 4.0 M யூரியா (1 mL), மற்றும் 0.2 M அம்மோனியம் பைகார்பனேட் (1 mL) ஆகியவற்றில் இருந்து அல்புமின், கரைசலை 10 நிமிடங்கள் கிளறி, 1 ° C க்கு 7 மணி நேரம் தண்ணீரில் 10 நிமிடம், 3 மணி நேரம் கழித்து 6 மணி நேரம் குளிக்க வேண்டும். 1% TFA. கரைசலை வடிகட்டி 4 °Cக்கு கீழே சேமிக்கவும்.
பெப்டைட் கலவைகள் மற்றும் எச்எஸ்ஏ டிரிப்சின் டைஜெஸ்ட்களின் பிரிப்பு PMP நெடுவரிசைகளில் தனித்தனியாக மதிப்பிடப்பட்டது. PMP நெடுவரிசை மூலம் HSA இன் பெப்டைட் கலவை மற்றும் டிரிப்சின் டைஜஸ்ட் பிரித்தலைச் சரிபார்த்து, முடிவுகளை Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசையுடன் ஒப்பிடவும். கோட்பாட்டு தட்டு எண் பின்வருமாறு கணக்கிடப்படுகிறது:
வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் தசைநார் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் SEM படங்கள் FIG இல் காட்டப்பட்டுள்ளன.2 .வெறும் சிலிக்கா துகள்களின் (A, B) படங்கள், நமது முந்தைய ஆய்வுகளுக்கு மாறாக, இந்த துகள்கள் கோள வடிவில் உள்ளன, இதில் துகள்கள் நீளமாக அல்லது ஒழுங்கற்ற சமச்சீராக உள்ளன சிலிக்கா துகள்கள்.
வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் (A, B) மற்றும் தசைநார் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் (C, D) ஆகியவற்றின் எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கி படங்களை ஸ்கேன் செய்தல்.
வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் தசைநார் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் துகள் அளவு விநியோகம் படம் 3(A) இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. தொகுதி அடிப்படையிலான துகள் அளவு விநியோக வளைவுகள் இரசாயன மாற்றத்திற்குப் பிறகு சிலிக்கா துகள்களின் அளவு அதிகரித்திருப்பதைக் காட்டுகிறது (படம். 3A). .5), PMP இன் 3.36 μm ஆகும், இது 3.05 μm (பாலிஸ்டிரீன்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள்) 34. விளம்பர (0.5) மதிப்புடன் எங்களின் முந்தைய ஆய்வோடு ஒப்பிடும்போது, ​​PEG, யூரியா மற்றும் அசிட்டிக் அமிலத்தின் துகள் அளவு பெரிய துகள் TMOS இன் துகள் அளவை விட பெரிய அளவிலான மாறுபட்ட விகிதங்கள் காரணமாக, எங்கள் முந்தைய ஆய்வோடு ஒப்பிடும்போது இந்தத் தொகுதி குறுகிய துகள் அளவு விநியோகத்தைக் கொண்டிருந்தது. பாலிஸ்டிரீன்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள் கட்டத்தை நாங்கள் முன்பு ஆய்வு செய்தோம். இதன் பொருள் ஸ்டைரீனுடன் சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பு செயல்பாடு சிலிக்கா மேற்பரப்பில் ஒரு பாலிஸ்டிரீன் லேயரை (0.97 µm) மட்டுமே டெபாசிட் செய்கிறது, அதேசமயம் PMP கட்டத்தில் அடுக்கு தடிமன் 1.38 µm ஆகும்.
துகள் அளவு விநியோகம் (A) மற்றும் துளை அளவு விநியோகம் (B) வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் தசைநார் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள்.
தற்போதைய ஆய்வின் சிலிக்கா துகள்களின் துளை அளவு, துளை அளவு மற்றும் மேற்பரப்பு பகுதி ஆகியவை அட்டவணை 1(B) இல் கொடுக்கப்பட்டுள்ளன. வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் தசைநார் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் PSD சுயவிவரங்கள் படம் 3(B) இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. முடிவுகள் எங்களின் முந்தைய ஆய்வுடன் ஒப்பிடத்தக்கவை. அட்டவணை 1(B) இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, இரசாயன மாற்றத்திற்குப் பிறகு துளை அளவு 69 ஆல் குறைகிறது, மேலும் வளைவின் மாற்றம் படம் 3(B) இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. அதேபோல், இரசாயன மாற்றத்திற்குப் பிறகு சிலிக்கா துகள்களின் துளை அளவு 0.67 இலிருந்து 0.58 cm3/g ஆகக் குறைந்துள்ளது. இது 1 g/2 க்கு முந்தைய ஆய்வுப் பகுதியுடன் ஒப்பிடத்தக்கது. 4 m2/g).அட்டவணை 1(B) இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, சிலிக்கா துகள்களின் பரப்பளவு (m2/g) இரசாயன மாற்றத்திற்குப் பிறகு 116 m2/g இலிருந்து 105 m2/g ஆக குறைந்தது.
நிலையான கட்டத்தின் அடிப்படை பகுப்பாய்வின் முடிவுகள் அட்டவணை 2 இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. தற்போதைய நிலையான கட்டத்தின் கார்பன் ஏற்றுதல் 6.35% ஆகும், இது எங்கள் முந்தைய ஆய்வின் கார்பன் ஏற்றுதலை விட குறைவாக உள்ளது (பாலிஸ்டிரீன் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள், முறையே 7.93% 35 மற்றும் 10.21%) 42. ஸ்டைரீன், சில துருவ லிகண்ட்களான ஃபீனைல்மேலிமைடு-மெத்தில்வினிலிசோசயனேட் (பிசிஎம்பி) மற்றும் 4-ஹைட்ராக்ஸி-டெம்போ ஆகியவை பயன்படுத்தப்பட்டன. தற்போதைய நிலையான கட்டத்தின் நைட்ரஜன் எடை சதவீதம் 2.21% ஆகும், ஒப்பிடும்போது 0.1735 மற்றும் 0.85% ஆகும். phenylmaleimide க்கு. இதேபோல், தயாரிப்புகளின் கார்பன் ஏற்றுதல்கள் (4) மற்றும் (5) முறையே 2.7% மற்றும் 2.9% ஆகும், அதே சமயம் இறுதிப் பொருளின் (6) கார்பன் ஏற்றுதல் 6.35% ஆகும், அட்டவணை 2 இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. எடை இழப்பு PMP நிலையான கட்டத்தில் சரிபார்க்கப்பட்டது, மேலும் TGA வளைவு படம் 8 இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. கார்பன் ஏற்றுதலுடன் நல்ல உடன்பாடு (6.35%) ஏனெனில் லிகண்ட்களில் C மட்டும் இல்லாமல் N, O மற்றும் H ஆகியவை உள்ளன.
சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பு மாற்றத்திற்காக phenylmaleimide-methylvinylisocyanate லிகண்ட் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது, ஏனெனில் அதில் துருவ ஃபீனைல்மலைமைடு குழுக்கள் மற்றும் வினைலிசோசயனேட் குழுக்கள் உள்ளன. வினைல் ஐசோசயனேட் குழுக்கள் தீவிர பாலிமரைசேஷன் மூலம் ஸ்டைரீனுடன் மேலும் வினைபுரிய முடியும். இரண்டாவது காரணம், மிதமான பாலிமரைசேஷன் மற்றும் எலக்ட்ரோஸ்டேடிக் குழுவிற்கு இடையேயான ஊடாடலைச் செருகுவது. நிலையான கட்டம், ஏனெனில் phenylmaleimide பகுதிக்கு சாதாரண pH இல் மெய்நிகர் கட்டணம் இல்லை. நிலையான கட்டத்தின் துருவமுனைப்பு ஸ்டைரீனின் உகந்த அளவு மற்றும் ஃப்ரீ-ரேடிக்கல் பாலிமரைசேஷன் எதிர்வினை நேரத்தின் மூலம் கட்டுப்படுத்தப்படும். எதிர்வினையின் கடைசி படி (ஃப்ரீ-ரேடிக்கல் பாலிமரைசேஷன்) முக்கியமானது, மேலும் இந்த நிலைநிலைக் கட்டத்தின் துருவமுனைப்பை மாற்றலாம். ஸ்டைரீனின் அளவு மற்றும் எதிர்வினை நேரமானது நிலையான கட்டத்தின் கார்பன் ஏற்றுதலை அதிகரித்தது மற்றும் அதற்கு நேர்மாறாக. ஸ்டைரீனின் வெவ்வேறு செறிவுகளுடன் தயாரிக்கப்பட்ட எஸ்பிகள் வெவ்வேறு கார்பன் ஏற்றுதல்களைக் கொண்டுள்ளன. மீண்டும், இந்த நிலையான கட்டங்களை துருப்பிடிக்காத எஃகு நெடுவரிசைகளில் ஏற்றவும் மற்றும் அவற்றின் நிறமூர்த்த செயல்திறனைச் சரிபார்க்கவும் (தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட நிலை, தெளிவுத்திறன், N மதிப்பு போன்றவற்றைக் கட்டுப்படுத்தவும். துருவமுனைப்பு மற்றும் நல்ல பகுப்பாய்வு தக்கவைப்பு.
ஐந்து பெப்டைட் கலவைகள் (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) மொபைல் கட்டத்தைப் பயன்படுத்தி PMP நெடுவரிசையைப் பயன்படுத்தி மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது;80 μL/min ஓட்ட விகிதத்தில் 60/40 (v/v) அசிட்டோனிட்ரைல்/நீர் (0.1% TFA) MP நெடுவரிசைகள் மற்றும் குரோமடோகிராம்கள் படம் 5A இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. PMP நெடுவரிசையில் அதிக ஓட்ட விகிதத்தில் (700 μL/min) வேகமான பகுப்பாய்வு, ஒரு நிமிடத்திற்குள் ஐந்து பெப்டைடுகள் நீக்கப்பட்டன, N மதிப்புகள் நன்றாக இருந்தன, ஒரு நெடுவரிசைக்கு 13,500 ± 330 (100 × 1.8 மிமீ 0 ஐடி வரை) (படம் 100 × 1.8 மிமீ ஐடி வரை), ஒரே அளவிலான நெடுவரிசைகள் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) மறுஉற்பத்தியை சரிபார்க்க மூன்று வெவ்வேறு பிஎம்பி நிலையான கட்டத்துடன் நிரம்பியுள்ளன. ஒவ்வொரு நெடுவரிசைக்கான பகுப்பாய்வு செறிவு உகந்த எலுஷன் நிலைமைகள் மற்றும் கோட்பாட்டு தகடுகளின் எண்ணிக்கையைப் பயன்படுத்தி பதிவுசெய்யப்பட்டது மற்றும் ஒவ்வொரு நெடுவரிசையிலும் ஒரே சோதனை கலவையை பிரிக்கும் நேரம் மற்றும் தக்கவைப்பு நேரம் ஆகியவை. அட்டவணை 3 இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, மிகக் குறைந்த %RSD மதிப்புகளுடன் நன்கு தொடர்புடையது.
PMP நெடுவரிசை (B) மற்றும் Ascentis Express RP-Amide நிரல் (A) ஆகியவற்றில் பெப்டைட் கலவையைப் பிரித்தல்;மொபைல் கட்டம் 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP நெடுவரிசை பரிமாணங்கள் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி);பகுப்பாய்வு கலவைகளின் நீக்குதல் வரிசை: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) மற்றும் 5 (leucine) அமிலம் enkephalin)).
ஒரு PMP நெடுவரிசை (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) உயர் செயல்திறன் கொண்ட திரவ குரோமடோகிராஃபியில் மனித சீரம் அல்புமினின் டிரிப்டிக் டைஜஸ்ட்களைப் பிரிப்பதற்காக மதிப்பிடப்பட்டது. படம் 6 இல் உள்ள குரோமடோகிராம் மாதிரி நன்றாகப் பிரிக்கப்பட்டுள்ளது மற்றும் தெளிவுத்திறன் மிகவும் நன்றாக உள்ளது என்பதைக் காட்டுகிறது. HSA டைஜெஸ்ட்கள் 100 µL/0% நீர் பாய்ச்சல் வீதத்தைப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. .குரோமடோகிராமில் (படம் 6) காட்டப்பட்டுள்ளபடி, எச்எஸ்ஏ செரிமானமானது 17 பெப்டைட்களுடன் தொடர்புடைய 17 சிகரங்களாகப் பிரிக்கப்பட்டுள்ளது. எச்எஸ்ஏ டைஜெஸ்டில் உள்ள ஒவ்வொரு சிகரத்தின் பிரிப்புத் திறன் கணக்கிடப்பட்டு மதிப்புகள் அட்டவணை 5 இல் கொடுக்கப்பட்டுள்ளன.
HSA இன் டிரிப்டிக் டைஜஸ்ட் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) PMP நெடுவரிசையில் பிரிக்கப்பட்டது;ஓட்ட விகிதம் (100 µL/min), மொபைல் கட்டம் 60/40 அசிட்டோனிட்ரைல்/நீர் 0.1% TFA.
இதில் L என்பது நெடுவரிசை நீளம், η என்பது மொபைல் கட்டத்தின் பாகுத்தன்மை, ΔP என்பது நெடுவரிசையின் பின் அழுத்தம், மற்றும் u என்பது மொபைல் கட்டத்தின் நேரியல் திசைவேகம். PMP நெடுவரிசையின் ஊடுருவல் 2.5 × 10-14 m2, ஓட்ட விகிதம் 25 μL/min, மற்றும் 60/40 v/v நெடுவரிசையின் 60/40 v/v என்ற நெடுவரிசை பயன்படுத்தப்பட்டது. 8 மிமீ ஐடி) எங்கள் முந்தைய ஆய்வைப் போலவே இருந்தது Ref.34. மேலோட்டமாக நுண்ணிய துகள்களால் நிரம்பிய நெடுவரிசையின் ஊடுருவல்: 1.3 μm துகள்களுக்கு 1.7 × 10-15, 1.7 μm துகள்களுக்கு 3.1 × 10-15, 1.7 μm துகள்களுக்கு 5.2 × 10-5 மற்றும் 12 × 12 × துகள்கள் 5 μm துகள்களுக்கு 43. எனவே, PMP கட்டத்தின் ஊடுருவல் 5 μm கோர்-ஷெல் துகள்களைப் போன்றது.
இதில் Wx என்பது குளோரோஃபார்ம் நிரம்பிய நெடுவரிசையின் எடை, Wy என்பது மெத்தனால் நிரம்பிய நெடுவரிசையின் எடை, மற்றும் ρ என்பது கரைப்பானின் அடர்த்தி. மெத்தனால் (ρ = 0.7866) மற்றும் குளோரோஃபார்ம் (ρ = 1.484) அடர்த்திகள். நாம் முன்னர் ஆய்வு செய்த C18-யூரியா நெடுவரிசைகள் 31 முறையே 0.63 மற்றும் 0.55 ஆகும். இதன் பொருள் யூரியா லிகண்ட்களின் இருப்பு நிலையான கட்டத்தின் ஊடுருவலைக் குறைக்கிறது. மறுபுறம், PMP நெடுவரிசையின் மொத்த போரோசிட்டி (100 × 1.8 mm id) 0.60 நெடுவரிசையின் 1-வது நெடுவரிசையின் 1-ஐ விட குறைவானது. icles ஏனெனில் C18-வகை நிலையான கட்டங்களில் C18 லிகண்ட்கள் சிலிக்கா துகள்களுடன் நேரியல் சங்கிலிகளாக இணைக்கப்படுகின்றன, அதே சமயம் பாலிஸ்டிரீன் வகை நிலையான கட்டங்களில், ஒப்பீட்டளவில் தடிமனான பாலிமர் அடுக்கு அதைச் சுற்றி உருவாகிறது. ஒரு பொதுவான சோதனையில், நெடுவரிசை போரோசிட்டி பின்வருமாறு கணக்கிடப்படுகிறது:
படம் 7A,B ஆனது PMP நெடுவரிசை (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) மற்றும் அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நெடுவரிசை (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) ஆகியவற்றை அதே நீக்குதல் நிலைமைகளைப் பயன்படுத்தி (அதாவது, 60/40 ACN/H2O மற்றும் 0.1% TFA) காட்டுகிறது.) வேன் டீம்டர் சதி.தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட பெப்டைட் கலவைகள் (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/ இல் தயாரிக்கப்பட்டன. ) PMP நெடுவரிசை மற்றும் Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசை முறையே 2.6 µm மற்றும் 3.9 µm ஆகும். HETP மதிப்புகள் PMP நெடுவரிசையின் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) பிரிப்புத் திறன் வணிக ரீதியாகக் கிடைக்கும் Ascentis Express வான் 8 பிக் 1 வான் லாட்டரை விட p. 7(A) ஆனது, எங்கள் முந்தைய ஆய்வுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​N மதிப்பின் குறைவு குறிப்பிடத்தக்கதாக இல்லை என்பதைக் காட்டுகிறது. அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-Amide நெடுவரிசையுடன் ஒப்பிடும்போது PMP நெடுவரிசையின் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) அதிக பிரிப்புத் திறன் தற்போதைய வேலையில் பயன்படுத்தப்படும் துகள் வடிவம், அளவு மற்றும் சிக்கலான நெடுவரிசை பேக்கிங் நடைமுறைகளின் மேம்பாடுகளின் அடிப்படையில் அமைந்துள்ளது.
(A) 0.1% TFA உடன் 60/40 ACN/H2O இல் PMP நெடுவரிசை (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) பயன்படுத்தி பெறப்பட்ட வான் டீம்டர் ப்ளாட் (HETP மற்றும் மொபைல் ஃபேஸ் லீனியர் வேலாசிட்டி) 60/40 ACN/H2O இல் 0.1% TFA உடன்.
உயர் செயல்திறன் கொண்ட திரவ குரோமடோகிராஃபியில் செயற்கை பெப்டைட் கலவைகள் மற்றும் மனித சீரம் அல்புமின் (HAS) டிரிப்சின் செரிமானங்களை பிரிப்பதற்காக ஒரு துருவ-உட்பொதிக்கப்பட்ட பாலிஸ்டிரீன் நிலையான கட்டம் தயாரிக்கப்பட்டு மதிப்பிடப்பட்டது. சிலிக்கா துகள்கள், நிலையான கட்டத்தின் கட்டுப்படுத்தப்பட்ட தொகுப்பு, மற்றும் சிக்கலான நெடுவரிசை பேக்கிங். அதிக பிரிப்பு திறன், அதிக ஓட்ட விகிதத்தில் குறைந்த நெடுவரிசை பின் அழுத்தம் ஆகியவை இந்த நிலையான கட்டத்தின் மற்றொரு நன்மையாகும்.PMP நெடுவரிசைகள் நல்ல இனப்பெருக்கம் மற்றும் பெப்டைட் கலவைகள் மற்றும் டிரிப்சின் செரிமானத்தை பகுப்பாய்வு செய்ய பயன்படுத்தப்படலாம். திரவ குரோமடோகிராஃபியில் s. எதிர்காலத்தில், புரதங்கள் மற்றும் மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடிகளைப் பிரிப்பதற்காக PMP நெடுவரிசைகளும் மதிப்பீடு செய்யப்படும்.
ஃபீல்ட், ஜேகே, யூர்பி, எம்ஆர், லாவ், ஜே., தோகர்சன், எச்குரோமடோகிராபி.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
கோம்ஸ், பி. மற்றும் பலர். தொற்று நோய்களுக்கான சிகிச்சைக்காக வடிவமைக்கப்பட்ட மேம்படுத்தப்பட்ட செயலில் உள்ள பெப்டைடுகள்
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. செயற்கை சிகிச்சை பெப்டைடுகள்: அறிவியல் மற்றும் சந்தை. மருந்து கண்டுபிடிப்பு.15 (1-2) இன்று, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.0009.1009.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Cromatography.J.குரோமடோகிராபி.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al.மேம்பட்ட திரவ குரோமடோகிராபி-மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி பரந்த இலக்கு வளர்சிதை மாற்றங்கள் மற்றும் proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019) ஆகியவற்றின் ஒருங்கிணைப்பை செயல்படுத்துகிறது.
Chesnut, SM & Salisbury, JJ மருந்து வளர்ச்சியில் UHPLCயின் பங்கு. ஜே.செப். அறிவியல்.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM விரைவான பிரிப்புகளுக்கான அல்ட்ராஹை பிரஷர் திரவ நிறமூர்த்தத்தின் அடிப்படை மற்றும் நடைமுறை அம்சங்கள். ஜே.செப். அறிவியல்.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. மருந்து வளர்ச்சியில் அதி-உயர் செயல்திறன் திரவ நிறமூர்த்தத்தின் பயன்பாடு. ஜே.குரோமடோகிராபி.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
கு, எச். மற்றும் பலர். என்டோரோவைரஸ்களின் திறமையான சுத்திகரிப்புக்காக ஆயில்-இன்-வாட்டர் ஹை இன்டர்னல் பேஸ் குழம்புகளிலிருந்து தயாரிக்கப்படும் மோனோலிதிக் மேக்ரோபோரஸ் ஹைட்ரோஜெல்கள். கெமிக்கல். பிரிட்டன்.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA புரோட்டியோமிக்ஸில் திரவ நிறமூர்த்தத்தின் பங்கு.ஜே.குரோமடோகிராபி.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. சிகிச்சை பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களின் தலைகீழ்-கட்ட திரவ குரோமடோகிராஃபி பிரிப்புகளில் வளர்ந்து வரும் போக்குகள்: கோட்பாடு மற்றும் பயன்பாடுகள். ஜே.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC முதல் மற்றும் இரண்டாவது பிரிப்பு பரிமாணங்களில் வெவ்வேறு pH மதிப்புகளைப் பயன்படுத்தி RP-RP-HPLC அமைப்பைப் பயன்படுத்தி பெப்டைடுகளின் இரு பரிமாணப் பிரிப்பு.செப். அறிவியல்.28(14), 1694-1703 (2005).
ஃபெலெட்டி, எஸ். மற்றும் பலர். C18 துணை-2 μm முழுமையாக மற்றும் மேலோட்டமாக நுண்ணிய துகள்களால் நிரம்பிய உயர்-செயல்திறன் குரோமடோகிராஃபிக் நெடுவரிசைகளின் வெகுஜன பரிமாற்ற பண்புகள் மற்றும் இயக்க செயல்திறன் ஆகியவை ஆராயப்பட்டன.செப். அறிவியல்.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
பியோவெசானா, எஸ். மற்றும் பலர். தாவர உயிரியல் பெப்டைட்களின் தனிமைப்படுத்தல், அடையாளம் மற்றும் சரிபார்ப்பு ஆகியவற்றில் சமீபத்திய போக்குகள் மற்றும் பகுப்பாய்வு சவால்கள்
Mueller, JB et al.The proteomic landscape of the Kingdom of life.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.ஆயத்த திரவ குரோமடோகிராபி மூலம் சிகிச்சை பெப்டைட்களின் கீழ்நிலை செயலாக்கம். மூலக்கூறு (பாசல், சுவிட்சர்லாந்து) 26(15), 4688(2021).
யாங், ஒய். & ஜெங், எக்ஸ். கலப்பு-முறை குரோமடோகிராபி மற்றும் பயோபாலிமர்களுக்கு அதன் பயன்பாடு.ஜே.குரோமடோகிராபி.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
ஜாவோ, ஜி., டோங், எக்ஸ்.-ஒய்.& சன், ஒய். லிகண்ட்ஸ் கலப்பு-முறை புரத குரோமடோகிராஃபி: கொள்கை, குணாதிசயம் மற்றும் வடிவமைப்பு. ஜே.பயோடெக்னாலஜி.144(1), 3-11 (2009).


இடுகை நேரம்: ஜூன்-05-2022