Nature.com ஐப் பார்வையிட்டதற்கு நன்றி.நீங்கள் பயன்படுத்தும் உலாவி பதிப்பில் CSS ஆதரவு குறைவாக உள்ளது.சிறந்த அனுபவத்திற்கு, புதுப்பிக்கப்பட்ட உலாவியைப் பயன்படுத்துமாறு பரிந்துரைக்கிறோம் (அல்லது Internet Explorer இல் இணக்கத்தன்மை பயன்முறையை முடக்கவும்).இதற்கிடையில், தொடர்ந்து ஆதரவை உறுதிப்படுத்த, தளத்தை ஸ்டைல்கள் மற்றும் ஜாவாஸ்கிரிப்ட் இல்லாமல் வழங்குவோம்.
மருந்துப் பரிசோதனைக்காக இதயத்தின் உடலியல் சூழலை துல்லியமாக இனப்பெருக்கம் செய்யக்கூடிய நம்பகமான இன் விட்ரோ அமைப்பின் தேவை உள்ளது.மனித இதய திசு வளர்ப்பு அமைப்புகளின் குறைந்த அளவு கிடைப்பது இதய மருந்து விளைவுகளின் தவறான விளக்கங்களுக்கு வழிவகுத்தது.இங்கே, இதயத் திசு வளர்ப்பு மாதிரியை (CTCM) நாங்கள் உருவாக்கியுள்ளோம், இது இதயத் துண்டுகளை எலக்ட்ரோமெக்கானிக்கலாகத் தூண்டுகிறது மற்றும் இதயச் சுழற்சியின் சிஸ்டாலிக் மற்றும் டயஸ்டாலிக் கட்டங்களில் உடலியல் நீட்சிக்கு உட்படுகிறது.12 நாட்கள் கலாச்சாரத்திற்குப் பிறகு, இந்த அணுகுமுறை இதயப் பிரிவுகளின் நம்பகத்தன்மையை ஓரளவு மேம்படுத்தியது, ஆனால் அவற்றின் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டை முழுமையாகப் பாதுகாக்கவில்லை.எனவே, சிறிய மூலக்கூறு திரையிடலுக்குப் பிறகு, எங்கள் ஊடகத்தில் 100 nM ட்ரையோடோதைரோனைன் (T3) மற்றும் 1 μM டெக்ஸாமெதாசோன் (டெக்ஸ்) சேர்ப்பது பிரிவுகளின் நுண் கட்டமைப்பை 12 நாட்களுக்குப் பராமரித்ததைக் கண்டறிந்தோம்.T3/Dex சிகிச்சையுடன் இணைந்து, CTCM அமைப்பு டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனல் சுயவிவரங்கள், நம்பகத்தன்மை, வளர்சிதை மாற்ற செயல்பாடு மற்றும் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாடு ஆகியவற்றை 12 நாட்களுக்கு புதிய இதய திசுக்களின் அதே மட்டத்தில் பராமரித்தது.கூடுதலாக, கலாச்சாரத்தில் இதய திசுக்களின் அதிகப்படியான நீட்சி ஹைபர்டிராஃபிக் கார்டியாக் சிக்னலைத் தூண்டுகிறது, இது இதய நீட்சியால் தூண்டப்பட்ட ஹைபர்டிராஃபிக் நிலைமைகளைப் பிரதிபலிக்கும் CTCM இன் திறனுக்கான சான்றுகளை வழங்குகிறது.முடிவில், CTCM ஆனது நீண்ட காலத்திற்கு கலாச்சாரத்தில் உள்ள இதயத்தின் உடலியல் மற்றும் நோயியல் இயற்பியலை மாதிரியாக்க முடியும், இது நம்பகமான மருந்து ஸ்கிரீனிங்கை செயல்படுத்துகிறது.
மருத்துவ ஆராய்ச்சிக்கு முன், மனித இதயத்தின் உடலியல் சூழலை துல்லியமாக இனப்பெருக்கம் செய்யக்கூடிய நம்பகமான விட்ரோ அமைப்புகள் தேவை.இத்தகைய அமைப்புகள் மாற்றப்பட்ட இயந்திர நீட்சி, இதய துடிப்பு மற்றும் மின் இயற்பியல் பண்புகளை பிரதிபலிக்க வேண்டும்.விலங்கு மாதிரிகள் பொதுவாக மனித இதயத்தில் மருந்துகளின் விளைவுகளை பிரதிபலிப்பதில் வரையறுக்கப்பட்ட நம்பகத்தன்மையுடன் இதய உடலியக்கத்திற்கான திரையிடல் தளமாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன1,2.இறுதியில், ஐடியல் கார்டியாக் திசு வளர்ப்பு பரிசோதனை மாதிரி (CTCM) என்பது மனித இதயத்தின் உடலியல் மற்றும் நோயியல் இயற்பியலை துல்லியமாக இனப்பெருக்கம் செய்யும் பல்வேறு சிகிச்சை மற்றும் மருந்தியல் தலையீடுகளுக்கு மிகவும் உணர்திறன் மற்றும் குறிப்பிட்ட மாதிரியாகும்.அத்தகைய அமைப்பு இல்லாதது இதய செயலிழப்புக்கான புதிய சிகிச்சையின் கண்டுபிடிப்பை கட்டுப்படுத்துகிறது 4,5 மற்றும் மருந்து கார்டியோடாக்சிசிட்டி சந்தையிலிருந்து வெளியேறுவதற்கு ஒரு முக்கிய காரணமாக வழிவகுத்தது6.
கடந்த தசாப்தத்தில், எட்டு கார்டியோவாஸ்குலர் அல்லாத மருந்துகள் மருத்துவப் பயன்பாட்டிலிருந்து திரும்பப் பெறப்பட்டன, ஏனெனில் அவை QT இடைவெளி நீடிப்பதால் வென்ட்ரிகுலர் அரித்மியா மற்றும் திடீர் மரணத்திற்கு வழிவகுக்கும்7.எனவே, இருதய செயல்திறன் மற்றும் நச்சுத்தன்மையை மதிப்பிடுவதற்கு நம்பகமான முன்கூட்டிய ஸ்கிரீனிங் உத்திகளின் தேவை அதிகரித்து வருகிறது.மனிதனால் தூண்டப்பட்ட ப்ளூரிபோடென்ட் ஸ்டெம் செல்-டெரிவேட் கார்டியோமயோசைட்டுகளின் (hiPS-CM) சமீபத்திய பயன்பாடு மருந்து பரிசோதனை மற்றும் நச்சுத்தன்மை சோதனையில் இந்த பிரச்சனைக்கு ஒரு பகுதி தீர்வை வழங்குகிறது.இருப்பினும், hiPS-CM களின் முதிர்ச்சியடையாத தன்மை மற்றும் இதய திசுக்களின் பலசெல்லுலர் சிக்கலான பற்றாக்குறை ஆகியவை இந்த முறையின் முக்கிய வரம்புகளாகும்.தன்னிச்சையான சுருக்கங்கள் தொடங்கிய சிறிது நேரத்திலேயே இதய திசு ஹைட்ரோஜெல்களை உருவாக்குவதற்கு ஆரம்பகால hiPS-CM ஐப் பயன்படுத்துவதன் மூலமும், காலப்போக்கில் மின் தூண்டுதலை படிப்படியாக அதிகரிப்பதன் மூலமும் இந்த வரம்பை ஓரளவு சமாளிக்க முடியும் என்று சமீபத்திய ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன.இருப்பினும், இந்த hiPS-CM நுண்ணுயிரிகளில் வயது முதிர்ந்த மயோர்கார்டியத்தின் முதிர்ந்த மின் இயற்பியல் மற்றும் சுருக்க பண்புகள் இல்லை.கூடுதலாக, மனித இதயத் திசு மிகவும் சிக்கலான கட்டமைப்பைக் கொண்டுள்ளது, இதில் எண்டோடெலியல் செல்கள், நியூரான்கள் மற்றும் ஸ்ட்ரோமல் ஃபைப்ரோபிளாஸ்ட்கள் உட்பட பல்வேறு உயிரணு வகைகளின் பன்முகத்தன்மை கொண்ட கலவை உள்ளது, குறிப்பிட்ட எக்ஸ்ட்ராசெல்லுலர் மேட்ரிக்ஸ் புரதங்களால் ஒன்றோடொன்று இணைக்கப்பட்டுள்ளது.வயதுவந்த பாலூட்டிகளின் இதயத்தில் உள்ள கார்டியோமயோசைட் அல்லாத 11,12,13 மக்கள்தொகையின் இந்த பன்முகத்தன்மை தனிப்பட்ட செல் வகைகளைப் பயன்படுத்தி இதய திசுக்களை மாதிரியாக்குவதற்கு ஒரு பெரிய தடையாகும்.இந்த முக்கிய வரம்புகள் உடலியல் மற்றும் நோயியல் நிலைமைகளின் கீழ் அப்படியே மாரடைப்பு திசுக்களை வளர்ப்பதற்கான முறைகளை வளர்ப்பதன் முக்கியத்துவத்தை வலியுறுத்துகின்றன.
மனித இதயத்தின் பண்படுத்தப்பட்ட மெல்லிய (300 µm) பிரிவுகள் அப்படியே மனித மாரடைப்பின் நம்பிக்கைக்குரிய மாதிரியாக நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளன.இந்த முறை மனித இதய திசு போன்ற முழுமையான 3D பல்லுயிர் அமைப்புக்கான அணுகலை வழங்குகிறது.இருப்பினும், 2019 வரை, பண்பட்ட இதயப் பிரிவுகளின் பயன்பாடு குறுகிய (24 மணிநேர) கலாச்சார உயிர்வாழ்வினால் வரையறுக்கப்பட்டது.இயற்பியல்-இயந்திர நீட்டிப்பு இல்லாமை, காற்று-திரவ இடைமுகம் மற்றும் இதய திசுக்களின் தேவைகளை ஆதரிக்காத எளிய ஊடகங்களின் பயன்பாடு உள்ளிட்ட பல காரணிகளால் இது ஏற்படுகிறது.2019 ஆம் ஆண்டில், பல ஆராய்ச்சி குழுக்கள் இதய திசு வளர்ப்பு அமைப்புகளில் இயந்திர காரணிகளை இணைப்பதன் மூலம் கலாச்சார ஆயுளை நீட்டிக்கவும், இதய வெளிப்பாட்டை மேம்படுத்தவும், இதய நோயியலைப் பிரதிபலிக்கவும் முடியும் என்பதை நிரூபித்தது.இரண்டு நேர்த்தியான ஆய்வுகள் 17 மற்றும் 18, கலாச்சாரத்தின் போது இதய பினோடைப்பில் ஒரு ஆக்சியல் மெக்கானிக்கல் ஏற்றுதல் நேர்மறையான விளைவைக் கொண்டுள்ளது என்பதைக் காட்டுகிறது.இருப்பினும், இந்த ஆய்வுகள் இதய சுழற்சியின் மாறும் முப்பரிமாண இயற்பியல்-மெக்கானிக்கல் ஏற்றுதலைப் பயன்படுத்தவில்லை, ஏனெனில் இதயப் பிரிவுகள் ஐசோமெட்ரிக் இழுவிசை விசைகள் 17 அல்லது நேரியல் ஆக்சோடோனிக் ஏற்றுதல் 18 ஆகியவற்றைக் கொண்டு ஏற்றப்பட்டன.திசு நீட்சியின் இந்த முறைகள் பல இதய மரபணுக்களை அடக்குதல் அல்லது அசாதாரண நீட்டிப்பு பதில்களுடன் தொடர்புடைய மரபணுக்களின் அதிகப்படியான வெளிப்பாடு ஆகியவற்றில் விளைந்தன.குறிப்பிடத்தக்கது, Pitoulis மற்றும் பலர்.19 ஃபோர்ஸ் டிரான்ஸ்யூசர் ஃபீட்பேக் மற்றும் டென்ஷன் டிரைவ்களைப் பயன்படுத்தி கார்டியாக் சுழற்சி புனரமைப்புக்கான டைனமிக் ஹார்ட் ஸ்லைஸ் கல்ச்சர் குளியல் ஒன்றை உருவாக்கியது.இந்த அமைப்பு மிகவும் துல்லியமான விட்ரோ கார்டியாக் சுழற்சி மாடலிங் செய்ய அனுமதித்தாலும், முறையின் சிக்கலான தன்மை மற்றும் குறைந்த செயல்திறன் இந்த அமைப்பின் பயன்பாட்டைக் கட்டுப்படுத்துகிறது.எங்கள் ஆய்வகம் சமீபத்தில் 6 நாட்களுக்கு 20,21 நாட்கள் வரை பன்றி மற்றும் மனித இதய திசுக்களின் பகுதிகளின் நம்பகத்தன்மையை பராமரிக்க மின் தூண்டுதல் மற்றும் உகந்த ஊடகத்தைப் பயன்படுத்தி எளிமைப்படுத்தப்பட்ட கலாச்சார அமைப்பை உருவாக்கியுள்ளது.
தற்போதைய கையெழுத்துப் பிரதியில், கார்டியாக் திசு வளர்ப்பு மாதிரியை (CTCM) நாங்கள் விவரிக்கிறோம், இது போர்சின் இதயத்தின் பகுதிகளைப் பயன்படுத்தி முப்பரிமாண இதய உடலியல் மற்றும் இதய சுழற்சியின் போது நோயியல் இயற்பியல் விரிவாக்கத்தை மறுபரிசீலனை செய்ய நகைச்சுவை குறிப்புகளை உள்ளடக்கியது.இந்த CTCM ஆனது, மருத்துவத்திற்கு முந்தைய மருந்துப் பரிசோதனைக்காக பாலூட்டிகளின் இதயத்தின் உடலியல்/நோய் இயற்பியலைப் பிரதிபலிக்கும் செலவு குறைந்த, நடுத்தர-செயல்திறன் இதய அமைப்பை வழங்குவதன் மூலம் முன் மருத்துவ முன்கணிப்பின் துல்லியத்தை முன்னெப்போதும் அடையாத அளவிற்கு அதிகரிக்க முடியும்.
விட்ரோ 22,23,24 இல் கார்டியோமயோசைட் செயல்பாட்டை பராமரிப்பதில் ஹீமோடைனமிக் மெக்கானிக்கல் சிக்னல்கள் முக்கிய பங்கு வகிக்கின்றன.தற்போதைய கையெழுத்துப் பிரதியில், உடலியல் அதிர்வெண்களில் (1.2 ஹெர்ட்ஸ், நிமிடத்திற்கு 72 துடிப்புகள்) மின் மற்றும் இயந்திரத் தூண்டுதலைத் தூண்டுவதன் மூலம் வயது வந்தோருக்கான இதயச் சூழலைப் பிரதிபலிக்கக்கூடிய CTCM (படம் 1a) ஒன்றை உருவாக்கியுள்ளோம்.டயஸ்டோலின் போது அதிகப்படியான திசு நீட்சியைத் தவிர்க்க, திசு அளவை 25% அதிகரிக்க ஒரு 3D பிரிண்டிங் சாதனம் பயன்படுத்தப்பட்டது (படம். 1b).C-PACE அமைப்பால் தூண்டப்பட்ட மின் வேகமானது, இதய சுழற்சியை முழுமையாக இனப்பெருக்கம் செய்ய தரவு கையகப்படுத்தும் முறையைப் பயன்படுத்தி சிஸ்டோலுக்கு 100 எம்எஸ் தொடங்குவதற்கு நேரம் ஒதுக்கப்பட்டது.திசு வளர்ப்பு அமைப்பு, மேல் அறையில் உள்ள இதயத் துண்டுகளை விரிவுபடுத்துவதற்கு நெகிழ்வான சிலிகான் மென்படலத்தை சுழற்சி முறையில் விரிவுபடுத்த, புரோகிராம் செய்யக்கூடிய நியூமேடிக் ஆக்சுவேட்டரை (எல்பி இன்ஜினியரிங், ஜெர்மனி) பயன்படுத்துகிறது.இந்த அமைப்பு ஒரு அழுத்த மின்மாற்றி மூலம் வெளிப்புற காற்றுக் கோட்டுடன் இணைக்கப்பட்டது, இது அழுத்தம் (± 1 mmHg) மற்றும் நேரத்தை (± 1 ms) (படம் 1c) துல்லியமாக சரிசெய்ய முடிந்தது.
சாதனத்தின் கலாச்சார அறைக்குள் நீல நிறத்தில் காட்டப்பட்டுள்ள 7 மிமீ ஆதரவு வளையத்துடன் திசுப் பகுதியை இணைக்கவும்.கலாச்சார அறை காற்று அறையிலிருந்து மெல்லிய நெகிழ்வான சிலிகான் சவ்வு மூலம் பிரிக்கப்பட்டுள்ளது.கசிவைத் தடுக்க ஒவ்வொரு அறைக்கும் இடையே ஒரு கேஸ்கெட்டை வைக்கவும்.சாதனத்தின் மூடியில் மின் தூண்டுதலை வழங்கும் கிராஃபைட் மின்முனைகள் உள்ளன.b பெரிய திசு சாதனம், வழிகாட்டி வளையம் மற்றும் ஆதரவு வளையத்தின் திட்டவட்டமான பிரதிநிதித்துவம்.திசுப் பிரிவுகள் (பழுப்பு) சாதனத்தின் வெளிப்புற விளிம்பில் உள்ள பள்ளத்தில் வைக்கப்பட்டுள்ள வழிகாட்டி வளையத்துடன் பெரிதாக்கப்பட்ட சாதனத்தில் வைக்கப்படுகின்றன.வழிகாட்டியைப் பயன்படுத்தி, திசு அக்ரிலிக் பிசின் பூசப்பட்ட ஆதரவு வளையத்தை இதயத் திசுக்களின் பகுதியின் மேல் கவனமாக வைக்கவும்.c நிரல்படுத்தக்கூடிய நியூமேடிக் ஆக்சுவேட்டரால் (PPD) கட்டுப்படுத்தப்படும் காற்று அறை அழுத்தத்தின் செயல்பாடாக மின் தூண்டுதலின் நேரத்தைக் காட்டும் வரைபடம்.அழுத்தம் உணரிகளைப் பயன்படுத்தி மின் தூண்டுதலை ஒத்திசைக்க தரவு கையகப்படுத்தும் சாதனம் பயன்படுத்தப்பட்டது.கலாச்சார அறையில் அழுத்தம் செட் வாசலை அடையும் போது, ​​மின் தூண்டுதலைத் தூண்டுவதற்கு ஒரு துடிப்பு சமிக்ஞை C-PACE-EM க்கு அனுப்பப்படுகிறது.d இன்குபேட்டர் அலமாரியில் வைக்கப்பட்டுள்ள நான்கு CTCMகளின் படம்.நியூமேடிக் சர்க்யூட் வழியாக நான்கு சாதனங்கள் ஒரு PPD உடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன, மேலும் நியூமேடிக் சர்க்யூட்டில் உள்ள அழுத்தத்தைக் கண்காணிக்க ஹீமோஸ்டேடிக் வால்வில் பிரஷர் சென்சார்கள் செருகப்படுகின்றன.ஒவ்வொரு சாதனமும் ஆறு திசு பிரிவுகளைக் கொண்டுள்ளது.
ஒற்றை நியூமேடிக் ஆக்சுவேட்டரைப் பயன்படுத்தி, 4 CTCM சாதனங்களைக் கட்டுப்படுத்த முடிந்தது, ஒவ்வொன்றும் 6 திசுப் பிரிவுகளை வைத்திருக்க முடியும் (படம் 1d).CTCM இல், காற்று அறையில் உள்ள காற்றழுத்தம் திரவ அறையில் ஒத்திசைவான அழுத்தமாக மாற்றப்பட்டு இதயத் துண்டின் உடலியல் விரிவாக்கத்தைத் தூண்டுகிறது (படம் 2a மற்றும் துணைத் திரைப்படம் 1).80 மிமீ Hg இல் திசு நீட்சியின் மதிப்பீடு.கலை.25% (படம். 2b) மூலம் திசுப் பிரிவுகளின் நீட்சியைக் காட்டியது.இந்த சதவீத நீட்சியானது சாதாரண இதயப் பிரிவுச் சுருக்கத்திற்கு 2.2-2.3 µm என்ற உடலியல் சார்கோமியர் நீளத்திற்கு ஒத்ததாகக் காட்டப்பட்டுள்ளது17,19,25.தனிப்பயன் கேமரா அமைப்புகளைப் பயன்படுத்தி திசு இயக்கம் மதிப்பிடப்பட்டது (துணை படம் 1).திசு இயக்கத்தின் வீச்சு மற்றும் வேகம் (படம். 2c, d) இதய சுழற்சியின் போது நீட்டிக்க மற்றும் சிஸ்டோல் மற்றும் டயஸ்டோல் (படம். 2b) போது நேரத்துடன் ஒத்துள்ளது.சுருக்கம் மற்றும் தளர்வின் போது இதய திசுக்களின் நீட்சி மற்றும் வேகம் கலாச்சாரத்தில் 12 நாட்களுக்கு மாறாமல் இருந்தது (படம் 2f).கலாச்சாரத்தின் போது சுருங்குதலின் மீது மின் தூண்டுதலின் விளைவை மதிப்பிடுவதற்கு, ஷேடிங் அல்காரிதம் (துணை படம் 2a,b) ஐப் பயன்படுத்தி செயலில் உள்ள சிதைவைத் தீர்மானிப்பதற்கான ஒரு முறையை நாங்கள் உருவாக்கினோம், மேலும் மின் தூண்டுதலுடன் மற்றும் இல்லாத குறைபாடுகளை வேறுபடுத்தி அறிய முடிந்தது.இதயத்தின் அதே பகுதி (படம் 2f).வெட்டு (R6-9) நகரக்கூடிய பகுதியில், மின் தூண்டுதலின் போது மின்னழுத்தம் மின் தூண்டுதல் இல்லாததை விட 20% அதிகமாக இருந்தது, இது சுருக்க செயல்பாட்டிற்கு மின் தூண்டுதலின் பங்களிப்பைக் குறிக்கிறது.
காற்று அறை அழுத்தம், திரவ அறை அழுத்தம் மற்றும் திசு இயக்க அளவீடுகள் ஆகியவற்றின் பிரதிநிதி தடயங்கள், அறை அழுத்தம் திரவ அறை அழுத்தத்தை மாற்றுகிறது என்பதை உறுதிப்படுத்துகிறது, இதனால் திசு துண்டுகளின் இயக்கம் ஏற்படுகிறது.b சதவீதம் நீட்டிப்பு (ஆரஞ்சு) தொடர்புடைய திசு பிரிவுகளின் சதவீதம் நீட்டிப்பு (நீலம்) பிரதிநிதி தடயங்கள்.c கார்டியாக் ஸ்லைஸின் அளவிடப்பட்ட இயக்கமானது அளவிடப்பட்ட இயக்கத்தின் வேகத்துடன் ஒத்துப்போகிறது.(ஈ) இதயத்தின் ஒரு துண்டில் சுழற்சி இயக்கம் (நீலக் கோடு) மற்றும் வேகம் (ஆரஞ்சு புள்ளியிடப்பட்ட கோடு) ஆகியவற்றின் பிரதிநிதிப் பாதைகள்.e சுழற்சி நேரத்தின் அளவீடு (ஒரு குழுவிற்கு n = 19 துண்டுகள், வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து), சுருக்க நேரம் (ஒரு குழுவிற்கு n = 19 துண்டுகள்), தளர்வு நேரம் (ஒரு குழுவிற்கு n = 19 துண்டுகள், வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து), திசு இயக்கம் (n = 25).துண்டுகள்)/வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து குழு), உச்ச சிஸ்டாலிக் வேகம் (n = 24(D0), 25(D12) துண்டுகள்/வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து குழு) மற்றும் உச்ச தளர்வு விகிதம் (n=24(D0), 25(D12) துண்டுகள்/வெவ்வேறு பன்றிகளின் குழு).இரு முனை மாணவர்களின் டி-டெஸ்ட் எந்த அளவுருவிலும் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாட்டைக் காட்டவில்லை.f (சிவப்பு) மற்றும் (நீலம்) மின் தூண்டுதல் இல்லாத திசுப் பிரிவுகளின் பிரதிநிதி திரிபு பகுப்பாய்வு தடயங்கள், அதே பிரிவில் இருந்து திசுப் பிரிவுகளின் பத்து பிராந்திய பகுதிகள்.வெவ்வேறு பிரிவுகளில் இருந்து பத்து பகுதிகளில் மின் தூண்டுதலுடன் மற்றும் இல்லாமல் திசு பிரிவுகளில் உள்ள திரிபுகளின் சதவீத வேறுபாட்டின் அளவைக் கீழே உள்ள பேனல்கள் காட்டுகின்றன. (வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து n = 8 துண்டுகள்/குழு, இரு வால் மாணவர் டி-டெஸ்ட் செய்யப்படுகிறது; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05). (வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து n = 8 துண்டுகள்/குழு, இரு வால் மாணவர் டி-டெஸ்ட் செய்யப்படுகிறது; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05). (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; **p<0,0001, **p<001, **,<00). (வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து n = 8 பிரிவுகள்/குழு, இரு வால் மாணவர்களின் டி-டெஸ்ட்; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05). n = 8 片/组,来自不同的猪,进行双尾学生t 检验；****p <0.0001,**p <0.01,*p <0.05） n = 8 片/组,来自不同的猪,进行双尾学生t 检验；****p <0.0001,**p <0.01,*p <0.05） (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05). (n = 8 பிரிவுகள்/குழு, வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து, இரண்டு வால் மாணவர்களின் டி-டெஸ்ட்; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05).பிழை பார்கள் சராசரி ± நிலையான விலகலைக் குறிக்கின்றன.
எங்களின் முந்தைய நிலையான பயோமிமெடிக் ஹார்ட் ஸ்லைஸ் கலாச்சார அமைப்பில் [20, 21], மின் தூண்டுதலைப் பயன்படுத்துவதன் மூலமும் நடுத்தர கலவையை மேம்படுத்துவதன் மூலமும் இதயத் துண்டுகளின் நம்பகத்தன்மை, செயல்பாடு மற்றும் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டை 6 நாட்களுக்குப் பராமரித்தோம்.இருப்பினும், 10 நாட்களுக்குப் பிறகு, இந்த புள்ளிவிவரங்கள் கடுமையாக வீழ்ச்சியடைந்தன.எங்களின் முந்தைய நிலையான பயோமிமெடிக் கலாச்சார அமைப்பு 20, 21 கட்டுப்பாட்டு நிலைகளில் (Ctrl) வளர்க்கப்பட்ட பிரிவுகளைக் குறிப்பிடுவோம், மேலும் ஒரே நேரத்தில் இயந்திர மற்றும் மின் தூண்டுதலின் (CTCM) கீழ் MC நிலைமைகள் மற்றும் கலாச்சாரம் என எங்களின் முந்தைய உகந்த ஊடகத்தைப் பயன்படுத்துவோம்.அழைக்கப்பட்டது.முதலில், 6 நாட்களுக்கு திசு நம்பகத்தன்மையை பராமரிக்க மின் தூண்டுதல் இல்லாமல் இயந்திர தூண்டுதல் போதுமானதாக இல்லை என்று நாங்கள் தீர்மானித்தோம் (துணை படம் 3a, b).சுவாரஸ்யமாக, STCM ஐப் பயன்படுத்தி பிசியோ-மெக்கானிக்கல் மற்றும் மின் தூண்டுதலின் அறிமுகத்துடன், 12-நாள் இதயப் பிரிவுகளின் நம்பகத்தன்மை MS நிலைமைகளின் கீழ் புதிய இதயப் பிரிவுகளைப் போலவே இருந்தது, ஆனால் MTT பகுப்பாய்வு (படம் 1) மூலம் காட்டப்பட்டுள்ளபடி Ctrl நிலைமைகளின் கீழ் அல்ல.3a).இதய சுழற்சியின் இயந்திர தூண்டுதல் மற்றும் உருவகப்படுத்துதல் ஆகியவை நமது முந்தைய நிலையான கலாச்சார அமைப்பில் தெரிவிக்கப்பட்டதை விட இரண்டு மடங்கு நீண்ட காலத்திற்கு திசுப் பிரிவுகளை சாத்தியமானதாக வைத்திருக்க முடியும் என்று இது அறிவுறுத்துகிறது.இருப்பினும், கார்டியாக் ட்ரோபோனின் டி மற்றும் கனெக்சின் 43 இன் இம்யூனோலேபிலிங் மூலம் திசுப் பிரிவுகளின் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டின் மதிப்பீட்டின்படி, கனெக்சின் 43 வெளிப்பாடு MC திசுக்களில் 12 ஆம் நாளில் அதே நாளில் உள்ள கட்டுப்பாடுகளைக் காட்டிலும் கணிசமாக அதிகமாக இருந்தது என்பதைக் காட்டுகிறது.இருப்பினும், சீரான கனெக்சின் 43 வெளிப்பாடு மற்றும் Z-வட்டு உருவாக்கம் முழுமையாக பராமரிக்கப்படவில்லை (படம். 3b).திசு கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டைக் கணக்கிட செயற்கை நுண்ணறிவு (AI) கட்டமைப்பைப் பயன்படுத்துகிறோம், இது ட்ரோபோனின்-டி மற்றும் கனெக்சின் ஸ்டைனிங்43 ஆகியவற்றின் அடிப்படையிலான பட அடிப்படையிலான ஆழமான கற்றல் பைப்லைன், இதயத் துண்டுகளின் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாடு மற்றும் ஃப்ளோரசன்ஸை உள்ளூர்மயமாக்கலின் வலிமையின் அடிப்படையில் தானாகக் கணக்கிடுகிறது.இந்த முறையானது, குறிப்பில் விவரிக்கப்பட்டுள்ளபடி, தன்னியக்க மற்றும் பக்கச்சார்பற்ற முறையில் இதய திசுக்களின் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டை நம்பத்தகுந்த முறையில் அளவிடுவதற்கு ஒரு கன்வல்யூஷனல் நியூரல் நெட்வொர்க் (CNN) மற்றும் ஆழமான கற்றல் கட்டமைப்பைப் பயன்படுத்துகிறது.26. நிலையான கட்டுப்பாட்டு பிரிவுகளுடன் ஒப்பிடும்போது MC திசு நாள் 0 க்கு மேம்பட்ட கட்டமைப்பு ஒற்றுமையைக் காட்டியது.கூடுதலாக, மாசனின் ட்ரைக்ரோம் ஸ்டைனிங், கலாச்சாரத்தின் 12 ஆம் நாள் (படம் 3 சி) கட்டுப்பாட்டு நிலைமைகளுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​MS நிலைமைகளின் கீழ் ஃபைப்ரோஸிஸின் கணிசமாக குறைந்த சதவீதத்தை வெளிப்படுத்தியது.CTCM ஆனது 12 ஆம் நாளில் இதய திசுப் பிரிவுகளின் நம்பகத்தன்மையை புதிய இதய திசுவைப் போன்ற ஒரு நிலைக்கு அதிகரித்தாலும், அது இதயப் பிரிவுகளின் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டை கணிசமாக மேம்படுத்தவில்லை.
ஒரு பார் வரைபடம், நிலையான கலாச்சாரம் (D12 Ctrl) அல்லது CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 Ctrl), 12 (D12 Ctrl), 12 (D12 # குழு, MC) 12 (D12 Ctrl), 12 (D12 # குழு, MC) ஸ்லைஸ்களில் இருந்து புதிய இதயத் துண்டுகள் (D0) அல்லது இதயத் துண்டுகள் கலாச்சாரத்தின் MTT நம்பகத்தன்மையின் அளவைக் காட்டுகிறது. D0 உடன் ஒப்பிடும்போது 0.0001 மற்றும் D12 Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது **p <0.01). ஒரு பார் வரைபடம், நிலையான கலாச்சாரம் (D12 Ctrl) அல்லது CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 Ctrl), 12 (D12 Ctrl), 12 (D12 # குரூப், MC-ல் இருந்து வேறுபட்டது, 12 (D12 # குழு, MC) ஸ்லைஸ்களில் இருந்து 12 நாட்களுக்கு புதிய இதயத் துண்டுகள் (D0) அல்லது இதயத் துண்டுகள் கலாச்சாரத்தின் MTT நம்பகத்தன்மையின் அளவைக் காட்டுகிறது. D0 உடன் ஒப்பிடும்போது 0.0001 மற்றும் D12 Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது **p <0.01).MTT புதிய இதயப் பிரிவுகள் (D0) அல்லது இதயப் பிரிவுகளின் 12 நாட்களுக்கு நிலையான கலாச்சாரம் (D12 கட்டுப்பாடு) அல்லது CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 கட்டுப்பாடு) (n = 18 (D0), 15 (D12 கட்டுப்பாடு).####p <0,0001 по сравнению с D0 и **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). D0 உடன் ஒப்பிடும்போது ####p <0.0001 மற்றும் D12 Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது **p <0.01). a 条形图显示在静态培养 (D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl)养12 天的MTT 活力的量化), 来自不同猪的12 (D12 எம்சி)与D12 Ctrl 相比,**p <0.01)。 a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心 中新鲜心茝席新鲜心臥帥)的12 (டி 12 எம்சி)புதிய இதயப் பிரிவுகளில் (D0) அல்லது நிலையான கலாச்சாரத்தில் (D12 கட்டுப்பாடு) அல்லது CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 கட்டுப்பாடு) (n = 18 (D0), 15 (D12 கட்டுப்பாடு)) , 12 (D12 MC) பிரிவுகள்/ஒருவழி ANO- வெவ்வேறு பன்றிகளின் குழுவில் 12 நாட்களுக்கு வளர்க்கப்பட்ட இதயப் பிரிவுகளில் MTT நம்பகத்தன்மையின் அளவைக் காட்டும் ஹிஸ்டோகிராம்.####p <0,0001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). D0 உடன் ஒப்பிடும்போது ####p <0.0001, D12 Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது **p <0.01).b Troponin-T (பச்சை), connexin 43 (சிவப்பு) மற்றும் DAPI (நீலம்) புதிதாக தனிமைப்படுத்தப்பட்ட இதயப் பிரிவுகளில் (D0) அல்லது நிலையான நிலைகளில் (Ctrl) அல்லது CTCM நிலைகளில் (MC) 12 நாட்களுக்கு) பிரதிநிதித்துவ இம்யூனோஃப்ளோரெசென்ஸ் படங்கள் (வெற்று அளவு = 100). இதய திசு கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டின் செயற்கை நுண்ணறிவு அளவீடு (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) துண்டுகள்/குழு ஒவ்வொன்றும் வெவ்வேறு பன்றிகளில் இருந்து, ஒரு வழி ANOVA சோதனை செய்யப்படுகிறது; ####p <0.0001 D0 மற்றும் **p2 Ctr உடன் ஒப்பிடும்போது. இதயத் திசு கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டின் செயற்கை நுண்ணறிவு அளவீடு (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) துண்டுகள்/குழு ஒவ்வொன்றும் வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து, ஒரு வழி ANOVA சோதனை செய்யப்படுகிறது; ####p <0.0001 ஒப்பிடும்போது D0 மற்றும் ****p2 உடன் ஒப்பிடும்போது D0 மற்றும் ****p2. கோலிசெஸ்ட்வென்னாயா ஓசென்கா ஸ்ட்ரக்டர்னோய் செலோஸ்ட்னோஸ்டி செர்டெச்னோய் டிகானி இஸ்கஸ்ஸ்ட்வென்னிம் இன்டெலக்டோம் (என் = 7டிடிஎல்), (என் = 7டிடி10), எசோவ்/க்ரூப்ப் ஆஃப் ரஸ்னிஷ் ஸ்வினி, ப்ரோவோடிட்ஸிய ஒட்னோஃபாக்டர் டெஸ்ட் அனோவா D12 Ctrl). செயற்கை நுண்ணறிவு (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) பிரிவுகள்/குழுக்கள் மூலம் இதய திசுக்களின் கட்டமைப்பின் ஒருமைப்பாட்டின் அளவீடு வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து, ஒருவழி ANOVA சோதனை செய்யப்பட்டது; ####p <0.0001 எதிராக D0 மற்றும் ****p2 உடன் ஒப்பிடப்பட்டது D0 மற்றும் ****p2.人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ஸ்லைஸ்கள்/குரூப் ஒவ்வொன்றும் வெவ்வேறு பன்றிகள், ஒரு-வழி ANOVA சோதனை, <#0#000 சோதனை;比,****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ஸ்லைஸ்கள்/குரூப் ஒவ்வொன்றும் வெவ்வேறு பன்றிகள், ஒரு-வழி ANOVA சோதனை;比,****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 Искусственный INTELLEKT для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (20MD) அனோவா 12 Ctrl). இதயத் திசுக்களின் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டைக் கணக்கிடுவதற்கான செயற்கை நுண்ணறிவு (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) பிரிவுகள்/குழு ஒவ்வொன்றும் வெவ்வேறு பன்றிகள், ஒரு-வழி ANOVA சோதனை; ####p<0.0001 vs .D0001 க்கு ஒப்பிடும்போது ****p0. c மாசனின் ட்ரைக்ரோம் கறை படிந்த இதயத் துண்டுகளுக்கான பிரதிநிதிப் படங்கள் (இடது) மற்றும் அளவு (வலது) trl). c மாசனின் ட்ரைக்ரோம் ஸ்டைன் (ஸ்கேல் பேர் = 500 µm) (n = 10 ஸ்லைஸ்கள்/வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து ஒவ்வொரு குழுவாகவும், ஒரு-வழி ANOVA சோதனை செய்யப்படுகிறது; D0#00 p <0 1 க்கு ஒப்பிடும்போது, ​​மாசனின் ட்ரைக்ரோம் கறை படிந்த இதயத் துண்டுகளுக்கான பிரதிநிதிப் படங்கள் (இடது) மற்றும் அளவீடு (வலது). Ctrl). கேட்ச் மாசோனா (மாஸ்தோனா 01 по сравнению с D0 и ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c மாசனின் ட்ரைக்ரோம் கறை படிந்த இதயப் பிரிவுகளின் பிரதிநிதிப் படங்கள் (இடது) மற்றும் அளவீடு (வலதுபுறம்) l). c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（剳）个切片/组,每组来自不同的猪,进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001 与D0 相比,001 与D0 相比,0012 C 用 மாஸன் 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代 表性 （左 左） 量化 （右度 = 500 m比,***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）。 கேட்ச். மசோனா (சிஸ்தயா சகல = 500 எம்.கே.எம்.) (n = 10 ஸ்ரேசோவ்/க்ருப்பா, ட்ருகோய் ஸ்வினியில் இருந்து கஜிடி, ப்ரோடெஸ்டிரோவானோஸ் сперсионного анализа ;### #p <0,0001 по сравнению с D0, ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c மாசனின் ட்ரைக்ரோம் கறை (வெற்று = 500 µm) படிந்த இதயப் பிரிவுகளின் பிரதிநிதி படங்கள் (இடது) மற்றும் அளவு (வலது) (n = 10 பிரிவுகள்/குழு, ஒவ்வொன்றும் வெவ்வேறு பன்றியிலிருந்து, ஒரு வழி பகுப்பாய்வு மூலம் சோதிக்கப்பட்டது. Ctrl).பிழை பார்கள் சராசரி ± நிலையான விலகலைக் குறிக்கின்றன.
கலாச்சார ஊடகத்தில் சிறிய மூலக்கூறுகளைச் சேர்ப்பதன் மூலம், கார்டியோமயோசைட் ஒருமைப்பாடு மேம்படுத்தப்படலாம் மற்றும் CTCM கலாச்சாரத்தின் போது ஃபைப்ரோஸிஸ் வளர்ச்சி குறைக்கப்படலாம் என்று நாங்கள் கருதுகிறோம்.எனவே சிறிய எண்ணிக்கையிலான குழப்பமான காரணிகள் காரணமாக எங்கள் நிலையான கட்டுப்பாட்டு கலாச்சாரங்களைப் பயன்படுத்தி சிறிய மூலக்கூறுகளை நாங்கள் திரையிட்டோம்.டெக்ஸாமெதாசோன் (டெக்ஸ்), ட்ரையோடோதைரோனைன் (டி3), மற்றும் எஸ்பி431542 (எஸ்பி) ஆகியவை இந்தத் திரைக்குத் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டன.இந்த சிறிய மூலக்கூறுகள் முன்பு hiPSC-CM கலாச்சாரங்களில் சர்கோமர் நீளம், டி-குழாய்கள் மற்றும் கடத்தல் வேகத்தை அதிகரிப்பதன் மூலம் கார்டியோமயோசைட்டுகளின் முதிர்ச்சியைத் தூண்டுவதற்குப் பயன்படுத்தப்பட்டன.கூடுதலாக, Dex (ஒரு குளுக்கோகார்டிகாய்டு) மற்றும் SB இரண்டும் வீக்கத்தை அடக்குவதாக அறியப்படுகிறது29,30.எனவே, இந்த சிறிய மூலக்கூறுகளின் ஒன்று அல்லது கலவையைச் சேர்ப்பது இதயப் பிரிவுகளின் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டை மேம்படுத்துமா என்பதை நாங்கள் சோதித்தோம்.ஆரம்பத் திரையிடலுக்கு, செல் வளர்ப்பு மாதிரிகளில் (1 μM Dex27, 100 nM T327, மற்றும் 2.5 μM SB31) பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் செறிவுகளின் அடிப்படையில் ஒவ்வொரு கலவையின் டோஸ் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது.12 நாட்கள் கலாச்சாரத்திற்குப் பிறகு, T3 மற்றும் Dex ஆகியவற்றின் கலவையானது உகந்த கார்டியோமயோசைட் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாடு மற்றும் குறைந்தபட்ச நார்ச்சத்து மறுவடிவமைப்பை ஏற்படுத்தியது (துணை புள்ளிவிவரங்கள் 4 மற்றும் 5).கூடுதலாக, T3 மற்றும் Dex இன் இந்த செறிவுகளை இரட்டை அல்லது இரட்டிப்பாக பயன்படுத்துவது சாதாரண செறிவுகளுடன் ஒப்பிடும்போது தீங்கு விளைவிக்கும் விளைவுகளை உருவாக்கியது (துணை படம். 6a,b).
ஆரம்ப ஸ்கிரீனிங்கிற்குப் பிறகு, நாங்கள் 4 கலாச்சார நிலைமைகளை (படம் 4a) தலைக்கு-தலையாக ஒப்பிட்டுப் பார்த்தோம்: Ctrl: எங்களின் உகந்த ஊடகத்தைப் பயன்படுத்தி முன்னர் விவரிக்கப்பட்ட நிலையான கலாச்சாரத்தில் வளர்க்கப்பட்ட இதயப் பிரிவுகள்;20.21 TD: T3 மற்றும் Ctrl கள் புதன்கிழமை சேர்க்கப்பட்டது Dex;MC: இதயப் பிரிவுகள் CTCM இல் வளர்க்கப்பட்ட எங்களின் முன்பு உகந்த ஊடகத்தைப் பயன்படுத்தி;மற்றும் MT: CTCM உடன் T3 மற்றும் Dex மீடியத்தில் சேர்க்கப்பட்டது.12 நாட்கள் சாகுபடிக்குப் பிறகு, MS மற்றும் MT திசுக்களின் நம்பகத்தன்மை MTT மதிப்பீட்டால் மதிப்பிடப்பட்ட புதிய திசுக்களில் இருந்ததைப் போலவே இருந்தது (படம் 4b).சுவாரஸ்யமாக, டிரான்ஸ்வெல் கலாச்சாரங்களில் (TD) T3 மற்றும் Dex சேர்ப்பது Ctrl நிலைமைகளுடன் ஒப்பிடும்போது நம்பகத்தன்மையில் குறிப்பிடத்தக்க முன்னேற்றத்தை ஏற்படுத்தவில்லை, இது இதயப் பிரிவுகளின் நம்பகத்தன்மையை பராமரிப்பதில் இயந்திர தூண்டுதலின் முக்கிய பங்கைக் குறிக்கிறது.
12 நாட்களுக்கு நடுத்தரத்தில் இயந்திர தூண்டுதல் மற்றும் T3/Dex கூடுதல் ஆகியவற்றின் விளைவுகளை மதிப்பிடுவதற்குப் பயன்படுத்தப்படும் நான்கு கலாச்சார நிலைமைகளை சித்தரிக்கும் ஒரு சோதனை வடிவமைப்பு வரைபடம். புதிய இதயத் துண்டுகள் (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD மற்றும் D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 MT மற்றும் D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 MT), 12 (D12 # group-ஆல் 4 பண்பாடு நிலைகளிலும் (Ctrl, TD, MC, மற்றும் MT) 12 நாட்களுக்குப் பின் கலாச்சாரத்தின் நம்பகத்தன்மையின் அளவைக் காட்டுகிறது. p <0.0001, ###p <0.001 D0 உடன் ஒப்பிடும்போது மற்றும் **p <0.01 D12 Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது). புதிய இதயத் துண்டுகள் (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD மற்றும் D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 MT மற்றும் D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 MT), 12 (D12 # group-ஆல் 4 பண்பாடு நிலைகளிலும் (Ctrl, TD, MC, மற்றும் MT) 12 நாட்களுக்குப் பின் கலாச்சாரத்தின் நம்பகத்தன்மையின் அளவைக் காட்டுகிறது. p <0.0001, D0 உடன் ஒப்பிடும்போது ###p <0.001 மற்றும் D12 ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது **p <0.01). b ஜிஸ்டோகிராம்மா போகாஸிவாட் கோலிசெஸ்ட்வென்னுயு ஒஸ்ஸெங்கு ஜிஸ்னெஸ்போசோப்னோஸ்டி செரஸ் 12 நள்ளிரவு செய்திகள் பற்றிய தகவல்4 குல்டிவிரோவானியா (கான்ட்ரோல், டிடி, எம்சி மற்றும் எம்டி) ஸ்ராவ்னேனியூ மூலம் ஸ்வீஜிமி ஸ்ரேஜாமி செர்டா (டி0) (என் = 18 (டிடி, டி 12 சிடிடி), 125 (டிஎல்டி, 12 டிடி), 12 2 எம்சி) ஸ்ரேஸோவ்/கிராப்பு அவுட் ராஸ்னிக்ஸ் ஸ்வினி, புரோவோடிட்ஸிய ஒட்னோஸ்டோரோன்னி டேஸ்ட் அனோவா; ####p <0,0001, ###p <0,0001, ##p <0,001 1 по сравнению с D12 Ctrl). b பார் வரைபடம், புதிய இதயப் பிரிவுகளுடன் (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, மற்றும் D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 TD, மற்றும் D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 MT) வெவ்வேறு பிரிவுகளில் இருந்து 12 (D12 குரூப், AGV 0.0001, ###p <0.001 vs. D0 மற்றும் **p <0.01 by D12 Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது). b和D12 MT), 来自不同猪的12 (D12 MC)与D12控制).b 4 12 (D12 MC) b கிஸ்டோகிராம்மா, போகாஸிவாயுஷ்யா முதல் 4 யூஸ்லோவிய குல்டிவிரோவானியா (கண்ட்ரோல், டிடி, எம்சி மற்றும் எம்டி) மூலம் உருவாக்கம் (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD மற்றும் D12 MT) 001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с контролем D12). b புதிய இதயப் பிரிவுகளுடன் (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD மற்றும் D12 MT) ஒப்பிடும்போது அனைத்து 4 கலாச்சார நிலைகளையும் (கட்டுப்பாடு, TD, MC மற்றும் MT) காட்டும் ஹிஸ்டோகிராம், வெவ்வேறு பன்றிகள் 12 (D12 MC) பிரிவுகள்/குழு, v.##01p, ஒரு-வழி ANOVA சோதனை. . D0, **p<0.01 vs. கட்டுப்பாடு D12). c பார் வரைபடம் புதிய இதயத் துண்டுகளுடன் (D0) ஒப்பிடும்போது அனைத்து 4 கலாச்சார நிலைகளிலும் (Ctrl, TD, MC, மற்றும் MT) குளுக்கோஸ் ஃப்ளக்ஸ் 12 நாட்களுக்குப் பின் கலாச்சாரத்தின் அளவைக் காட்டுகிறது (n = 6 துண்டுகள்/வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து ஒரு குழு ANOVA சோதனை செய்யப்படுகிறது; ###p <0.001 உடன் ஒப்பிடுகையில், l). c பார் வரைபடம் புதிய இதயத் துண்டுகளுடன் (D0) ஒப்பிடும்போது அனைத்து 4 கலாச்சார நிலைகளிலும் (Ctrl, TD, MC, மற்றும் MT) குளுக்கோஸ் ஃப்ளக்ஸ் 12 நாட்களுக்குப் பின் கலாச்சாரத்தின் அளவைக் காட்டுகிறது (n = 6 துண்டுகள்/வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து ஒரு குழு ANOVA சோதனை செய்யப்படுகிறது; ###p <0.001 உடன் ஒப்பிடுகையில், l). c கிஸ்டோகிராம்மா போகாஸிவாட் கோலிசெஸ்ட்வென்னுயு ஓசெங்கு போடோகா கிளுகோஸி செர்சஸ் 12 நள்ளிரவு போஸ்லெவ் குல்டிவ்ஸ்4 உல்டிவிரோவானியா (கான்ட்ரோல், டிடி, எம்சி மற்றும் எம்டி) ஸ்ராவ்னேனியூ மூலம் ஸ்வேஜிமி ஸ்ரேஜாமி சேர்ட்சா (டி0) (n = 6 வரிசைகள்/நடைமுறைகள் торонний Выполняется тест ANOVA; ###p <0,001 по сравнению с D0 மற்றும் ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c ஹிஸ்டோகிராம் புதிய இதயப் பிரிவுகளுடன் (D0) ஒப்பிடும்போது அனைத்து 4 கலாச்சார நிலைமைகளின் (கட்டுப்பாடு, TD, MC மற்றும் MT) 12 நாட்களுக்கு பிந்தைய கலாச்சாரத்தின் குளுக்கோஸ் ஃப்ளக்ஸ் அளவைக் காட்டுகிறது. c.糖通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；###p <0.001,与D0 r,0.001,与D0, 0.120.比). C.后 后 12 天 的 通量 定量 （n = 6与D0 相比,***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）。 கேட்ச் கிஸ்டோகிராம்மா, பொகசிவயுஷ்யா கொலிசெஸ்ட்வென்னுயூ ஒஷென்கு போடோகா கிளுகோஸி செரஸ் 12 டிநேவ் போஸ்லே குல்டு4 вий культивирования (கான்ட்ரோல், TD, MC மற்றும் MT) ஸ்ராவ்னெனியூ மூலம் ஸ்வேஜிமி ஸ்ரேஜாமி சேர்ட்சா (D0) (n = 6/பொருத்தம் அனோவா c ஹிஸ்டோகிராம், புதிய இதயப் பிரிவுகளுடன் (D0) (n = 6 பிரிவுகள்/குழு, வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து, ஒருதலைப்பட்சமாக ANOVA சோதனைகள் செய்யப்பட்டன, D0001,00 க்கு ஒப்பிடும்போது, ​​12 நாட்களில் 4 கலாச்சார நிலைகளுக்குப் பிந்தைய கலாச்சாரத்திற்குப் பிந்தைய காலத்தில் குளுக்கோஸ் ஃப்ளக்ஸ் அளவைக் காட்டுகிறது. (கட்டுப்பாடு).d புதிய (நீலம்), நாள் 12 MC (பச்சை), மற்றும் நாள் 12 MT (சிவப்பு) திசுக்களின் திரிபு பகுப்பாய்வு அடுக்குகள் பத்து பிராந்திய திசு பிரிவு புள்ளிகளில் (n = 4 துண்டுகள்/குழு, ஒரு வழி ANOVA சோதனை; குழுக்களிடையே குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடு இல்லை).e எரிமலை சதி, 10-12 நாட்களுக்கு நிலையான நிலைகளில் (Ctrl) அல்லது MT நிலைமைகளின் கீழ் (MT) வளர்க்கப்பட்ட இதயப் பிரிவுகளுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​புதிய இதயப் பிரிவுகளில் (D0) வித்தியாசமாக வெளிப்படுத்தப்பட்ட மரபணுக்களைக் காட்டுகிறது.f இதயப் பிரிவுகளுக்கான சர்கோமியர் மரபணுக்களின் ஹீட்மேப் ஒவ்வொரு கலாச்சார நிலைமைகளின் கீழும் வளர்க்கப்படுகிறது.பிழை பார்கள் சராசரி ± நிலையான விலகலைக் குறிக்கின்றன.
கொழுப்பு அமில ஆக்சிஜனேற்றத்திலிருந்து கிளைகோலிசிஸுக்கு மாறுவதைச் சார்ந்திருக்கும் வளர்சிதை மாற்றத்தைச் சார்ந்திருப்பது கார்டியோமயோசைட் டிஃபரென்சியேஷனின் ஒரு அடையாளமாகும்.முதிர்ச்சியடையாத கார்டியோமயோசைட்டுகள் முதன்மையாக ஏடிபி உற்பத்திக்கு குளுக்கோஸைப் பயன்படுத்துகின்றன மற்றும் சில கிறிஸ்டே5,32 உடன் ஹைப்போபிளாஸ்டிக் மைட்டோகாண்ட்ரியாவைக் கொண்டுள்ளன.குளுக்கோஸ் பயன்பாட்டு பகுப்பாய்வுகள் MC மற்றும் MT நிலைமைகளின் கீழ், குளுக்கோஸ் பயன்பாடு நாள் 0 திசுக்களில் உள்ளதைப் போலவே இருந்தது (படம் 4c).இருப்பினும், Ctrl மாதிரிகள் புதிய திசுக்களுடன் ஒப்பிடும்போது குளுக்கோஸ் பயன்பாட்டில் குறிப்பிடத்தக்க அதிகரிப்பைக் காட்டியது.CTCM மற்றும் T3/Dex ஆகியவற்றின் கலவையானது திசு நம்பகத்தன்மையை மேம்படுத்துகிறது மற்றும் 12-நாள் வளர்ப்பு இதயப் பிரிவுகளின் வளர்சிதை மாற்ற பினோடைப்பைப் பாதுகாக்கிறது என்பதை இது குறிக்கிறது.கூடுதலாக, ஸ்ட்ரெய்ன் பகுப்பாய்வு MT மற்றும் MS நிலைமைகளின் கீழ் 12 நாட்களுக்கு புதிய இதய திசுக்களில் உள்ளதைப் போலவே திரிபு அளவுகள் இருப்பதைக் காட்டியது (படம் 4d).
கார்டியாக் ஸ்லைஸ் திசுக்களின் உலகளாவிய டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனல் நிலப்பரப்பில் CTCM மற்றும் T3/Dex இன் ஒட்டுமொத்த தாக்கத்தை பகுப்பாய்வு செய்ய, நான்கு வெவ்வேறு கலாச்சார நிலைகளிலிருந்தும் இதயத் துண்டுகளில் RNAseq ஐச் செய்தோம் (துணைத் தரவு 1).சுவாரஸ்யமாக, MT பிரிவுகள் புதிய இதய திசுக்களுக்கு உயர் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனல் ஒற்றுமையைக் காட்டின, 13,642 மரபணுக்களில் 16 வித்தியாசமாக வெளிப்படுத்தப்பட்டுள்ளன.இருப்பினும், நாம் முன்பு காட்டியது போல், Ctrl துண்டுகள் கலாச்சாரத்தில் 10-12 நாட்களுக்குப் பிறகு 1229 வித்தியாசமாக வெளிப்படுத்தப்பட்ட மரபணுக்களைக் காட்டியது (படம் 4e).இந்தத் தரவு இதயம் மற்றும் ஃபைப்ரோபிளாஸ்ட் மரபணுக்களின் qRT-PCR ஆல் உறுதிப்படுத்தப்பட்டது (துணை படம். 7a-c).சுவாரஸ்யமாக, Ctrl பிரிவுகள் இதய மற்றும் செல் சுழற்சி மரபணுக்களின் குறைப்பு மற்றும் அழற்சி மரபணு திட்டங்களை செயல்படுத்துவதைக் காட்டியது.இந்த தரவுகள், பொதுவாக நீண்ட கால வளர்ப்பிற்குப் பிறகு நிகழும் டிஃபரன்ஷியேஷன், MT நிலைமைகளின் கீழ் முழுமையாகக் குறைக்கப்படுகிறது (துணை படம். 8a,b).சர்கோமியர் மரபணுக்களை கவனமாக ஆய்வு செய்ததில், MT நிலைமைகளின் கீழ் மட்டுமே சர்கோமெர் (படம். 4f) மற்றும் அயன் சேனல் (துணை படம் 9) ஆகியவற்றை குறியாக்கம் செய்யும் மரபணுக்கள் பாதுகாக்கப்பட்டு, அவற்றை Ctrl, TD மற்றும் MC நிலைமைகளின் கீழ் ஒடுக்கப்படாமல் பாதுகாக்கின்றன.இயந்திர மற்றும் நகைச்சுவைத் தூண்டுதலின் (T3/Dex) கலவையுடன், இதயத் துண்டு டிரான்ஸ்கிரிப்டோம் கலாச்சாரத்தில் 12 நாட்களுக்குப் பிறகு புதிய இதயத் துண்டுகளைப் போலவே இருக்கும் என்பதை இந்தத் தரவு நிரூபிக்கிறது.
இந்த டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனல் கண்டுபிடிப்புகள் இதயப் பிரிவுகளில் உள்ள கார்டியோமயோசைட்டுகளின் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாடு MT நிலைமைகளின் கீழ் 12 நாட்களுக்கு சிறப்பாகப் பாதுகாக்கப்படுகிறது, இது அப்படியே மற்றும் உள்ளூர்மயமாக்கப்பட்ட கனெக்சின் 43 (படம் 5a) மூலம் காட்டப்பட்டுள்ளது.கூடுதலாக, MT நிலைமைகளின் கீழ் இதயப் பிரிவுகளில் ஃபைப்ரோஸிஸ் Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது கணிசமாகக் குறைக்கப்பட்டது மற்றும் புதிய இதயப் பிரிவுகளைப் போன்றது (படம் 5b).இயந்திர தூண்டுதல் மற்றும் T3/Dex சிகிச்சையின் கலவையானது கலாச்சாரத்தில் இதயப் பிரிவுகளில் இதய அமைப்பை திறம்பட பாதுகாக்கிறது என்பதை இந்தத் தரவு நிரூபிக்கிறது.
ட்ரோபோனின்-டி (பச்சை), கனெக்சின் 43 (சிவப்பு) மற்றும் டிஏபிஐ (நீலம்) ஆகியவற்றின் பிரதிநிதி இம்யூனோஃப்ளோரெசன்ஸ் படங்கள் புதிதாக தனிமைப்படுத்தப்பட்ட இதயப் பிரிவுகளில் (D0) அல்லது நான்கு இதயப் பிரிவு கலாச்சார நிலைகளிலும் 12 நாட்களுக்கு வளர்க்கப்படுகின்றன (அளவுகோல் = 100 µm).) இதயத் திசு கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டின் செயற்கை நுண்ணறிவு அளவீடு (n = 7 (D0 மற்றும் D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC மற்றும் D12 MT) துண்டுகள்/குழு வெவ்வேறு பன்றிகள், ஒரு வழி ANOVA சோதனை செய்யப்படுகிறது; ####p <0.0001 ஒப்பிடும்போது. ed to D12 Ctrl). இதயத் திசு கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டின் செயற்கை நுண்ணறிவு அளவீடு (n = 7 (D0 மற்றும் D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC மற்றும் D12 MT) துண்டுகள்/குழு வெவ்வேறு பன்றிகள், ஒருவழி ANOVA சோதனை செய்யப்படுகிறது; #### p <0.0001 ஒப்பிடும்போது. ed to D12 Ctrl). கோலிசெஸ்ட்வென்னாயா ஓசென்கா ஸ்ட்ரக்டர்னோய் இஸ்லோஸ்ட்னோஸ்டி ட்கானி செர்டிசாஸ் போமோஷ்யு இஸ்குஸ்ட்வென்னோகோ டிஎல்டிஎல் (20DL =7), 12 TD, D12 MC மற்றும் D12 MT) ஸ்ரேஸோவ்/க்ருப்பு ஆஃப் ராஸ்னிக்ஸ் ஸ்வினி, ப்ரோவெடன் ஒட்னோஃபாக்டர் டெக்ஸ் அனோவா; ### ப <0,0001 5 или ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). செயற்கை நுண்ணறிவு (n = 7 (D0 மற்றும் D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC மற்றும் D12 MT) வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து பிரிவுகள்/குழுவைப் பயன்படுத்தி இதயத் திசுக்களின் கட்டமைப்பின் ஒருமைப்பாட்டின் அளவீடு, ஒருவழி ANOVA சோதனை செய்யப்பட்டது; #### p <0.0001 உடன் ஒப்பிடும்போது D0.0 மற்றும் <0 2 Ctrl).对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 மற்றும்D12 Ctrl）、5（D12 TD,D12 MC人工智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001 与D0 和*p <0.05 相比,或****p <0.05 相比，或****p <0.00மேலும்工 向rl 相比).வெவ்வேறு பன்றிகளில் செயற்கை நுண்ணறிவைப் பயன்படுத்தி இதய திசுக்களின் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாட்டின் அளவீடு (n = 7 (D0 மற்றும் D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC மற்றும் D12 MT) பிரிவுகள்/குழு) ஒரு வழி ANOVA சோதனை;#### p < 0,0001 по сравнению с D0 и *p < 0,05 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). D0 உடன் ஒப்பிடும்போது #### p <0.0001 மற்றும் D12 Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது *p <0.05 அல்லது ****p <0.0001). b மாசனின் ட்ரைக்ரோம் ஸ்டைன் (ஸ்கேல் பார் = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, மற்றும் D12 MC), 9 (D12 MT), 9 (D12 MT) 9 (D12 MT) வெவ்வேறு ஸ்லைஸ்கள் மூலம் படிந்த இதயத் துண்டுகளுக்கான அளவீடு மற்றும் அளவீடு. 001 D0 மற்றும் ***p <0.001, அல்லது ****p <0.0001 D12 Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது). b மாசனின் ட்ரைக்ரோம் ஸ்டைன் (ஸ்கேல் பார் = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, மற்றும் D12 MC), 9 (D12 MT), 9 (D12 MT) 9 (D12 MT) வெவ்வேறு ஸ்லைஸ்கள் மூலம் படிந்த இதயத் துண்டுகளுக்கான அளவீடு மற்றும் அளவீடு. 001 D0 மற்றும் ***p <0.001, அல்லது ****p <0.0001 D12 Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது). b ரெப்ரெசென்டடிவ்ன்ய் இசோபிராஜெனியா மற்றும் கோலிசெஸ்ட்வென்னாயா ஓசென்கா ஸ்ரேசோவ் செர்ட்சா, ஓக்ரசென்னிக் ட்ரைம்ஸ்னாஸ் бная линейка = 500 MCM) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD மற்றும் D12 MC), 9 (D12 MT) т ANOVA; ####p <0,0001 по сравнению с D0 и ***p <0,001 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b மாசனின் ட்ரைக்ரோம் ஸ்டைன் (ஸ்கேல் பார் = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD மற்றும் D12 MC), 9 (D12 MT) பிரிவுகள்/குழுவில் இருந்து படிந்த இதயப் பிரிவுகளின் பிரதிநிதிப் படங்கள் மற்றும் அளவுகள். 0 மற்றும் ***p <0.001 அல்லது ****p <0.0001 vs. D12 Ctrl). b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺= 500 µm TD 和D12 MC），来自不同猪的9 个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分析； ，0.000p 001,或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 பி ctrl 、 d12 td மற்றும் d12 mc） 来自 不同 的 9 个 d12 mt 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片மேலும் ***p <0.001，或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 b. 500 மை.கி.ம்) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD மற்றும் D12 MC), 9 (D12 MT) வரிசைப்படுத்துதல் ию с D0, ***p <0,001 или ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b மாசனின் ட்ரைக்ரோம் (ஸ்கேல் பார் = 500 µm) படிந்த இதயப் பிரிவுகளின் பிரதிநிதிப் படங்கள் மற்றும் அளவுகள் <0.001 அல்லது ****p <0.0001 D12 Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது).பிழை பார்கள் சராசரி ± நிலையான விலகலைக் குறிக்கின்றன.
இறுதியாக, கார்டியாக் ஹைபர்டிராபியைப் பிரதிபலிக்கும் CTCM இன் திறன் இதய திசு நீட்டிப்பை அதிகரிப்பதன் மூலம் மதிப்பிடப்பட்டது.CTCM இல், உச்ச காற்று அறை அழுத்தம் 80 mmHg இலிருந்து 80 mmHg ஆக அதிகரித்தது.கலை.(சாதாரண நீட்சி) 140 mmHg வரை கலை.(படம் 6a).இது 32% நீட்டிப்பு அதிகரிப்புக்கு ஒத்திருக்கிறது (படம். 6b), இது முன்னர் ஹைபர்டிராபியில் காணப்படுவதைப் போன்ற ஒரு சர்கோமியர் நீளத்தை அடைய இதயப் பிரிவுகளுக்குத் தேவையான சதவீத நீட்டிப்பாகக் காட்டப்பட்டது.சுருங்குதல் மற்றும் தளர்வு ஆகியவற்றின் போது இதய திசுக்களின் நீட்சி மற்றும் வேகம் ஆறு நாட்கள் கலாச்சாரத்தின் போது மாறாமல் இருந்தது (படம் 6c).எம்டி நிலைகளில் இருந்து இதயத் திசு ஆறு நாட்களுக்கு சாதாரண நீட்டிப்பு (எம்டி (இயல்பு)) அல்லது ஓவர்ஸ்ட்ரெட்ச் நிலைமைகளுக்கு (எம்டி (ஓஎஸ்)) உட்படுத்தப்பட்டது.கலாச்சாரத்தில் ஏற்கனவே நான்கு நாட்களுக்குப் பிறகு, MT (சாதாரண) நிலைமைகளுடன் (படம் 7a) ஒப்பிடும்போது, ​​MT (OS) நிலைமைகளின் கீழ், ஹைபர்டிராஃபிக் பயோமார்க்கர் NT-ProBNP ஊடகத்தில் கணிசமாக உயர்த்தப்பட்டது.கூடுதலாக, ஆறு நாட்கள் வளர்ப்பிற்குப் பிறகு, MT இதயத்தின் (சாதாரண) பிரிவுகளுடன் ஒப்பிடும்போது MT (OS) (படம் 7b) இல் உள்ள செல் அளவு கணிசமாக அதிகரித்தது.கூடுதலாக, NFATC4 அணுக்கரு இடமாற்றம் மிகைப்படுத்தப்பட்ட திசுக்களில் கணிசமாக அதிகரிக்கப்பட்டது (படம் 7c).இந்த முடிவுகள் ஹைபர்டைஸ்டென்ஷனுக்குப் பிறகு நோயியல் மறுவடிவமைப்பின் முற்போக்கான வளர்ச்சியைக் காட்டுகின்றன மற்றும் நீட்டிக்கப்பட்ட இதய ஹைபர்டிராபி சிக்னலைப் படிக்க CTCM சாதனம் ஒரு தளமாகப் பயன்படுத்தப்படலாம் என்ற கருத்தை ஆதரிக்கிறது.
காற்று அறை அழுத்தம், திரவ அறை அழுத்தம் மற்றும் திசு இயக்க அளவீடுகள் ஆகியவற்றின் பிரதிநிதி தடயங்கள், அறை அழுத்தம் திரவ அறை அழுத்தத்தை மாற்றுகிறது என்பதை உறுதிப்படுத்துகிறது, இதனால் திசு துண்டுகளின் இயக்கம் ஏற்படுகிறது.b பிரதிநிதித்துவ நீட்டிப்பு சதவீதம் மற்றும் நீட்டிக்கப்பட்ட விகிதம் வளைவுகள் பொதுவாக நீட்டிக்கப்பட்ட (ஆரஞ்சு) மற்றும் மிகைப்படுத்தப்பட்ட (நீலம்) திசுப் பிரிவுகளுக்கு.c பட்டை வரைபடம் சுழற்சி நேரத்தைக் காட்டுகிறது (ஒரு குழுவிற்கு n = 19 துண்டுகள், வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து), சுருங்கும் நேரம் (ஒரு குழுவிற்கு n = 18-19 துண்டுகள், வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து), தளர்வு நேரம் (ஒரு குழுவிற்கு n = 19 துண்டுகள், வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து) ), திசு இயக்கத்தின் வீச்சு (n = 14 துண்டுகள்/குழு, வெவ்வேறு பன்றிகளின் உச்சநிலை வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து) மற்றும் உச்ச தளர்வு விகிதம் (n = 14 (D0), 15 (D6) ) பிரிவுகள்/குழுக்கள்) வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து, இரு வால் மாணவர்களின் t- சோதனை எந்த அளவுருவிலும் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாட்டைக் காட்டவில்லை.பிழை பார்கள் சராசரி ± நிலையான விலகலைக் குறிக்கின்றன.
கலாச்சார ஊடகத்தில் NT-ProBNP செறிவூட்டலின் ஒரு பார் வரைபட அளவீடு MT சாதாரண நீட்டிப்பு (நெறி) அல்லது ஓவர் ஸ்ட்ரெச்சிங் (OS) நிலைமைகளின் கீழ் வளர்க்கப்பட்ட இதயத் துண்டுகளிலிருந்து (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, மற்றும் D4 MTOS) துண்டுகள்/குழுவாக இரண்டு- *ஆகியவற்றிலிருந்து 0 வரை ஒப்பிடப்படுகிறது. எம்டி சாதாரண நீட்சி (நெறிமுறை) அல்லது அதிகப்படியான நீட்டிப்பு (ஓஎஸ்) நிலைமைகளின் கீழ் வளர்க்கப்பட்ட இதய துண்டுகளிலிருந்து கலாச்சார ஊடகங்களில் என்.டி-புரோப்என்பி செறிவின் ஒரு பார் வரைபட அளவு (n = 4 (d2 mtnorm), 3 (d2 mtos, d4 mtnorm, மற்றும் d4 mtos) துண்டுகள்/வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து, இரண்டு-வழி அல்ல)சாதாரண MT நீட்டிப்பு (விதிமுறை) அல்லது ஓவர்ஸ்ட்ரெட்ச் (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, மற்றும் D4) ஆகியவற்றின் கீழ் வளர்க்கப்பட்ட இதயத் துண்டுகளிலிருந்து கலாச்சார ஊடகத்தில் NT-ProBNP செறிவூட்டலின் அளவு விளக்கப்படம்.**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p <0.01 சாதாரண நீட்டிப்புடன் ஒப்பிடும்போது). a 在MT 正常拉伸(நெறி) = 4 (D2 MTNorm)、3（D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS ,ப <0.01). வெவ்வேறு 猪的切片/猪廏廇/疌廇/疌廏/疌廇/疌廇/疌廏/疌廇/疌廇/疌廇/疌廇/疌廇/经/疌廇/珮发动; ** சாதாரண நீட்சியுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​ப <0.01).ஹிஸ்டோகிராம் இதயத் துண்டுகளில் உள்ள NT-ProBNP செறிவுகளின் அளவீடு, சாதாரண MT ஸ்ட்ரெச் (விதிமுறை) அல்லது ஓவர்ஸ்ட்ரெட்ச் (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) மற்றும் D4 MTOS) வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து துண்டுகள்/குழு, இருவழி பகுப்பாய்வு;**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p <0.01 சாதாரண நீட்டிப்புடன் ஒப்பிடும்போது). b troponin-T மற்றும் WGA (இடது) மற்றும் செல் அளவு அளவு (வலது) படிந்த இதயத் துண்டுகளுக்கான பிரதிநிதி படங்கள் (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) செல்கள்/குழு வெவ்வேறு பன்றிகளில் இருந்து 10 வெவ்வேறு துண்டுகளிலிருந்து, இரண்டு-வால் மாணவர் <0 t-0test 1 வரை நீட்டிக்கப்படுகிறது). b ட்ரோபோனின்-டி மற்றும் டபிள்யூஜிஏ (இடது) மற்றும் செல் அளவு அளவு (வலது) ஆகியவற்றால் கறை படிந்த இதயத் துண்டுகளுக்கான பிரதிநிதி படங்கள் (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) செல்கள்/குழு வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து 10 வெவ்வேறு துண்டுகளிலிருந்து, இரண்டு- வால் கொண்ட மாணவர் <0 வரை நீட்டிக்கப்பட்டுள்ளது. b. அஸ்மேரா கிளெடோக் (ஸ்ப்ரவா) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) க்ளெடோக்/குருப்பு 10 ரஜனிஷ் ஸ்ரேஸோவ், ஸ்வீட், ஸ்வீட் ой t-критерий Стьюдента; ****p <0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b troponin-T மற்றும் AZP (இடது) மற்றும் செல் அளவு அளவு (வலது) கறை படிந்த இதயப் பிரிவுகளின் பிரதிநிதி படங்கள் (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) செல்கள்/குழு வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து 10 வெவ்வேறு பிரிவுகளில் இருந்து, இரண்டு-வால் கொண்ட மாணவர்களின் <0 0 வரை ஒப்பிடப்பட்டது. ப ）,来自不同猪的10 个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组,两进行有尾学生与检检ப <0.0001). b கால்கேரின்-டி மற்றும் டபிள்யூஜிஏ (இடது) மற்றும் செல் அளவு (வலது) (n = 330 (D6 MTOS), 369 10 வெவ்வேறு ஸ்லைஸ்கள் (D6 MTNorm)) மூலம் கறை படிந்த இதயத் துண்டுகளின் பிரதிநிதி படங்கள். 0001) b ரெப்ரெசென்டடிவ்னி இஸோப்ராஜெனியா ஸ்ரேசோவ் செர்டிசா, ஒக்ரசென்னிக் ட்ரோபோனிம்-டா மற்றும் அன்காட் (ஸ்லேவா) மற்றும் கோலங்கள் கிளெடோக் (ஸ்ப்ராவா) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных свиней клетки/групупс, юдента; ****p <0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b troponin-T மற்றும் AZP (இடது) கறை படிந்த இதயப் பிரிவுகளின் பிரதிநிதி படங்கள் மற்றும் செல் அளவு (வலது) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) வெவ்வேறு பன்றிகளிலிருந்து 10 வெவ்வேறு பிரிவுகளிலிருந்து) செல்கள்/குழு, இரு-வால் கொண்ட அளவுகோல்;****p <0.0001 சாதாரண விகாரத்துடன் ஒப்பிடும்போது). c ட்ரோபோனின்-T மற்றும் NFATC4 க்கு immunolabeled நாள் 0 மற்றும் நாள் 6 MTOS இதயத் துண்டுகளுக்கான பிரதிநிதிப் படங்கள் மற்றும் CMகளின் கருக்களுக்கு NFATC4 இடமாற்றத்தின் அளவீடு (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ஸ்லைஸ்கள்/குரூப் வெவ்வேறு பன்றிகள், இரண்டு-t-0 Stud. c ட்ரோபோனின்-T மற்றும் NFATC4 க்கான immunolabeled நாள் 0 மற்றும் நாள் 6 MTOS இதயத் துண்டுகளுக்கான பிரதிநிதிப் படங்கள் மற்றும் CMகளின் கருக்களுக்கு NFATC4 இடமாற்றத்தின் அளவு (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ஸ்லைஸ்கள்/குரூப் இரண்டு t-tailed St. கேட்ச் டென்கா டிரான்ஸ்லோகாசிகள் NFATC4 மற்றும் யாத்ரா காவர்னோஸ்னிக் கிளெடோக் (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ஸ்ரேசோவ்/கிருப்பு, ரேசண்ட்ஸ் ஸ்வீட் ий t-критерий Стьюдента; *p <0,05). c 0 மற்றும் 6 நாட்களில் இதயப் பிரிவுகளுக்கான பிரதிநிதி படங்கள், ட்ரோபோனின்-T மற்றும் NFATC4 க்கு இம்யூனோலேபிள் செய்யப்பட்டவை, மற்றும் குகை செல்களின் கருவில் NFATC4 இடமாற்றத்தின் அளவீடு (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ஸ்லைஸ்கள்/வெவ்வேறு பன்றிகள்-இரண்டு-வால்-பன்றிகள்-குழு*ப <0.05). c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4的NFATC4 易位至CM 细胞核的量化（n = 4 (D0)、3 (D6 MTOS) c calcanin-T மற்றும் NFATC4 இம்யூனோலேபிளிங் 第0天和第6天MTOS இதயத் துண்டுகள் மற்றும் NFATC4 ஆகியவற்றின் வெவ்வேறு NFATC4 易位至CM செல் நியூக்ளியஸ் 的quantity化的quantity化 (n = 3 (D0)间双尾学生et 电影；*p <0.05). கேட்ச் 0 மற்றும் 6 தேதிகளில் இம்முனோமார்கிரோவ்கி ட்ரோபோன்சினோம்-4 டென்கா டிரான்ஸ்லோகாசிகள் NFATC4 в yadra CM லிருந்து RAZNыh ஸ்வினி (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ஸ்ரேஸ்/கிருப்பா, два- хвостатий; ,05). c வெவ்வேறு பன்றிகள் (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) துண்டுகள்/குழுபிழை பார்கள் சராசரி ± நிலையான விலகலைக் குறிக்கின்றன.
மொழிபெயர்ப்பு இருதய ஆராய்ச்சிக்கு இதயச் சூழலைத் துல்லியமாக இனப்பெருக்கம் செய்யும் செல்லுலார் மாதிரிகள் தேவை.இந்த ஆய்வில், இதயத்தின் அல்ட்ராதின் பிரிவுகளைத் தூண்டக்கூடிய CTCM சாதனம் உருவாக்கப்பட்டு வகைப்படுத்தப்பட்டது.CTCM அமைப்பில் உடலியல் ரீதியாக ஒத்திசைக்கப்பட்ட எலக்ட்ரோ மெக்கானிக்கல் தூண்டுதல் மற்றும் T3 மற்றும் டெக்ஸ் திரவ செறிவூட்டல் ஆகியவை அடங்கும்.இந்த காரணிகளுக்கு போர்சின் இதயப் பிரிவுகள் வெளிப்படும் போது, ​​அவற்றின் நம்பகத்தன்மை, கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாடு, வளர்சிதை மாற்ற செயல்பாடு மற்றும் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனல் வெளிப்பாடு ஆகியவை 12 நாட்கள் கலாச்சாரத்திற்குப் பிறகு புதிய இதய திசுக்களில் இருந்ததைப் போலவே இருந்தன.கூடுதலாக, இதயத் திசுக்களின் அதிகப்படியான நீட்சி, ஹைப்பர் எக்ஸ்டென்ஷனால் ஏற்படும் இதயத்தின் ஹைபர்டிராபியை ஏற்படுத்தும்.ஒட்டுமொத்தமாக, இந்த முடிவுகள் ஒரு சாதாரண இதய பினோடைப்பை பராமரிப்பதில் உடலியல் கலாச்சார நிலைமைகளின் முக்கிய பங்கை ஆதரிக்கின்றன மற்றும் மருந்து பரிசோதனைக்கான தளத்தை வழங்குகின்றன.
கார்டியோமயோசைட்டுகளின் செயல்பாடு மற்றும் உயிர்வாழ்வதற்கான உகந்த சூழலை உருவாக்க பல காரணிகள் பங்களிக்கின்றன.இந்த காரணிகளில் மிகவும் வெளிப்படையானவை (1) செல்களுக்கு இடையேயான தொடர்புகள், (2) எலக்ட்ரோ மெக்கானிக்கல் தூண்டுதல், (3) நகைச்சுவை காரணிகள் மற்றும் (4) வளர்சிதை மாற்ற அடி மூலக்கூறுகளுடன் தொடர்புடையவை.உடலியல் செல்-க்கு-செல் இடைவினைகளுக்கு ஒரு எக்ஸ்ட்ராசெல்லுலர் மேட்ரிக்ஸால் ஆதரிக்கப்படும் பல செல் வகைகளின் சிக்கலான முப்பரிமாண நெட்வொர்க்குகள் தேவைப்படுகின்றன.இத்தகைய சிக்கலான செல்லுலார் தொடர்புகளை தனிப்பட்ட உயிரணு வகைகளின் இணை-பண்பாட்டின் மூலம் விட்ரோவில் மறுகட்டமைப்பது கடினம், ஆனால் இதயப் பிரிவுகளின் ஆர்கனோடைபிக் தன்மையைப் பயன்படுத்தி எளிதாக அடைய முடியும்.
கார்டியாக் பினோடைப் 33,34,35 ஐ பராமரிக்க கார்டியோமயோசைட்டுகளின் இயந்திர நீட்சி மற்றும் மின் தூண்டுதல் மிகவும் முக்கியமானவை.ஹைபிஎஸ்சி-சிஎம் கண்டிஷனிங் மற்றும் முதிர்ச்சிக்கு மெக்கானிக்கல் தூண்டுதல் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்பட்டாலும், பல நேர்த்தியான ஆய்வுகள் சமீபத்தில் கலாச்சாரத்தில் இதயத் துண்டுகளின் இயந்திரத் தூண்டுதலை யூனிஆக்சியல் லோடிங்கைப் பயன்படுத்தி முயற்சித்தன.பண்பாட்டின் போது இதயத்தின் பினோடைப்பில் 2டி ஒற்றை ஆக்சியல் மெக்கானிக்கல் லோடிங் நேர்மறையான விளைவைக் கொண்டிருப்பதை இந்த ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன.இந்த ஆய்வுகளில், இதயத்தின் பிரிவுகள் ஐசோமெட்ரிக் இழுவிசை விசைகள்17, நேரியல் ஆக்ஸோடோனிக் ஏற்றுதல் 18 ஆகியவற்றுடன் ஏற்றப்பட்டன, அல்லது கார்டியாக் சுழற்சியானது ஃபோர்ஸ் டிரான்ஸ்யூசர் பின்னூட்டம் மற்றும் டென்ஷன் டிரைவ்களைப் பயன்படுத்தி மீண்டும் உருவாக்கப்படுகிறது.எவ்வாறாயினும், இந்த முறைகள் சுற்றுச்சூழல் மேம்படுத்தல் இல்லாமல் ஒற்றைத் திசு நீட்டிப்பைப் பயன்படுத்துகின்றன, இதன் விளைவாக பல இதய மரபணுக்கள் ஒடுக்கப்படுகின்றன அல்லது அசாதாரண நீட்டிப்பு பதில்களுடன் தொடர்புடைய மரபணுக்களின் அதிகப்படியான வெளிப்பாடு ஏற்படுகிறது.இங்கே விவரிக்கப்பட்டுள்ள CTCM ஆனது சுழற்சி நேரம் மற்றும் உடலியல் நீட்சி (25% நீட்சி, 40% சிஸ்டோல், 60% டயஸ்டோல் மற்றும் நிமிடத்திற்கு 72 துடிப்புகள்) ஆகியவற்றின் அடிப்படையில் இயற்கையான இதய சுழற்சியைப் பிரதிபலிக்கும் ஒரு 3D எலக்ட்ரோ மெக்கானிக்கல் தூண்டுதலை வழங்குகிறது.திசு ஒருமைப்பாட்டை பராமரிக்க இந்த முப்பரிமாண இயந்திர தூண்டுதல் மட்டும் போதுமானதாக இல்லை என்றாலும், திசு நம்பகத்தன்மை, செயல்பாடு மற்றும் ஒருமைப்பாடு ஆகியவற்றை போதுமான அளவில் பராமரிக்க T3/Dex ஐப் பயன்படுத்தி நகைச்சுவை மற்றும் இயந்திர தூண்டுதலின் கலவை தேவைப்படுகிறது.
வயது வந்தோருக்கான இதய பினோடைப்பை மாற்றியமைப்பதில் நகைச்சுவை காரணிகள் முக்கிய பங்கு வகிக்கின்றன.இது HiPS-CM ஆய்வுகளில் எடுத்துக்காட்டப்பட்டது, இதில் T3 மற்றும் Dex ஆகியவை செல் முதிர்ச்சியை துரிதப்படுத்த கலாச்சார ஊடகத்தில் சேர்க்கப்பட்டது.உயிரணு சவ்வுகளில் அமினோ அமிலங்கள், சர்க்கரைகள் மற்றும் கால்சியம் ஆகியவற்றின் போக்குவரத்தை T3 பாதிக்கலாம்.கூடுதலாக, T3 MHC-α வெளிப்பாடு மற்றும் MHC-β குறைப்பு ஆகியவற்றை ஊக்குவிக்கிறது, இது கருவின் CM இல் மெதுவாக இழுக்கும் மயோபிப்ரில்களுடன் ஒப்பிடும்போது முதிர்ந்த கார்டியோமயோசைட்டுகளில் வேகமாக இழுக்கும் மயோபிப்ரில்களை உருவாக்குவதை ஊக்குவிக்கிறது.ஹைப்போ தைராய்டு நோயாளிகளுக்கு T3 குறைபாடு myofibrillar பட்டைகள் இழப்பு மற்றும் தொனி வளர்ச்சி விகிதம் குறைகிறது37.டெக்ஸ் குளுக்கோகார்டிகாய்டு ஏற்பிகளில் செயல்படுகிறது மற்றும் தனிமைப்படுத்தப்பட்ட துளையிடப்பட்ட இதயங்களில் மாரடைப்பு சுருக்கத்தை அதிகரிப்பதாகக் காட்டப்பட்டுள்ளது;38 இந்த முன்னேற்றம் கால்சியம் வைப்பு-உந்துதல் நுழைவு (SOCE) 39,40 மீதான விளைவுடன் தொடர்புடையதாக கருதப்படுகிறது.கூடுதலாக, டெக்ஸ் அதன் ஏற்பிகளுடன் பிணைக்கிறது, இது நோயெதிர்ப்பு செயல்பாடு மற்றும் வீக்கத்தை அடக்கும் ஒரு பரந்த உள்செல்லுலார் பதிலை ஏற்படுத்துகிறது.
Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது இயற்பியல் இயந்திர தூண்டுதல் (MS) ஒட்டுமொத்த கலாச்சார செயல்திறனை மேம்படுத்தியுள்ளது என்பதை எங்கள் முடிவுகள் குறிப்பிடுகின்றன, ஆனால் கலாச்சாரத்தில் 12 நாட்களுக்கு மேல் நம்பகத்தன்மை, கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாடு மற்றும் இதய வெளிப்பாடு ஆகியவற்றை பராமரிக்கத் தவறிவிட்டது.Ctrl உடன் ஒப்பிடும்போது, ​​CTCM (MT) கலாச்சாரங்களில் T3 மற்றும் Dex சேர்ப்பது நம்பகத்தன்மையை மேம்படுத்தியது மற்றும் 12 நாட்களுக்கு புதிய இதய திசுக்களுடன் ஒத்த டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் சுயவிவரங்கள், கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாடு மற்றும் வளர்சிதை மாற்ற செயல்பாடுகளை பராமரித்தது.கூடுதலாக, திசு நீட்சியின் அளவைக் கட்டுப்படுத்துவதன் மூலம், STCM ஐப் பயன்படுத்தி ஹைப்பர் எக்ஸ்டென்ஷன்-தூண்டப்பட்ட இதய ஹைபர்டிராபி மாதிரி உருவாக்கப்பட்டது, இது STCM அமைப்பின் பல்துறைத் திறனை விளக்குகிறது.இதய மறுவடிவமைப்பு மற்றும் ஃபைப்ரோஸிஸ் ஆகியவை பொதுவாக சீரான உறுப்புகளை உள்ளடக்கியிருந்தாலும், அதன் சுழற்சி செல்கள் பொருத்தமான சைட்டோகைன்கள் மற்றும் பாகோசைட்டோசிஸ் மற்றும் பிற மறுவடிவமைப்பு காரணிகளை வழங்க முடியும் என்றாலும், இதயத்தின் பிரிவுகள் மன அழுத்தம் மற்றும் அதிர்ச்சிக்கு பதிலளிக்கும் வகையில் ஃபைப்ரோடிக் செயல்முறையை இன்னும் பிரதிபலிக்கும் என்பதை கவனத்தில் கொள்ள வேண்டும்.myofibroblasts ஆக.இந்த கார்டியாக் ஸ்லைஸ் மாதிரியில் இது முன்னர் மதிப்பிடப்பட்டது.டாக்ரிக்கார்டியா, பிராடி கார்டியா மற்றும் மெக்கானிக்கல் சுற்றோட்ட ஆதரவு (இயந்திர இறக்கப்பட்ட இதயம்) போன்ற பல நிலைமைகளை உருவகப்படுத்த, அழுத்தம்/மின் அலைவீச்சு மற்றும் அதிர்வெண்ணை மாற்றுவதன் மூலம் CTCM அளவுருக்கள் மாற்றியமைக்கப்படலாம் என்பதைக் கவனத்தில் கொள்ள வேண்டும்.இது மருந்துப் பரிசோதனைக்கான ஒரு நடுத்தர செயல்திறன் அமைப்பை உருவாக்குகிறது.சி.டி.சி.எம்-ன் திறன், அதிகப்படியான உடல் உழைப்பால் தூண்டப்பட்ட கார்டியாக் ஹைபர்டிராபியை மாதிரியாக்குவது, தனிப்பயனாக்கப்பட்ட சிகிச்சைக்காக இந்த அமைப்பைச் சோதிக்க வழி வகுக்கிறது.முடிவில், இதய திசு பிரிவுகளின் கலாச்சாரத்தை பராமரிக்க இயந்திர நீட்சி மற்றும் நகைச்சுவை தூண்டுதல் ஆகியவை முக்கியமானவை என்பதை தற்போதைய ஆய்வு நிரூபிக்கிறது.
இங்கே வழங்கப்பட்ட தரவு, CTCM ஆனது மாடலிங் செய்ய மிகவும் நம்பிக்கைக்குரிய தளம் என்று கூறினாலும், இந்த கலாச்சார முறைக்கு சில வரம்புகள் உள்ளன.CTCM கலாச்சாரத்தின் முக்கிய வரம்பு என்னவென்றால், ஒவ்வொரு சுழற்சியின்போதும் இதயத் துண்டுச் சுருக்கங்களைத் தீவிரமாகக் கண்காணிக்கும் திறனை இது தடுக்கிறது.கூடுதலாக, இதயப் பிரிவுகளின் சிறிய அளவு (7 மிமீ), பாரம்பரிய விசை உணரிகளைப் பயன்படுத்தி கலாச்சார அமைப்புகளுக்கு வெளியே சிஸ்டாலிக் செயல்பாட்டை மதிப்பிடும் திறன் குறைவாக உள்ளது.தற்போதைய கையெழுத்துப் பிரதியில், சுருக்க செயல்பாட்டின் குறிகாட்டியாக ஆப்டிகல் மின்னழுத்தத்தை மதிப்பிடுவதன் மூலம் இந்த வரம்பை ஓரளவு சமாளிக்கிறோம்.எவ்வாறாயினும், இந்த வரம்புக்கு மேலும் வேலை தேவைப்படும் மற்றும் எதிர்காலத்தில் கால்சியம் மற்றும் மின்னழுத்த உணர்திறன் சாயங்களைப் பயன்படுத்தி ஆப்டிகல் மேப்பிங் போன்ற கலாச்சாரத்தில் இதயத் துண்டுகளின் செயல்பாட்டை ஒளியியல் கண்காணிப்பு முறைகளை அறிமுகப்படுத்துவதன் மூலம் நிவர்த்தி செய்யப்படலாம்.CTCM இன் மற்றொரு வரம்பு என்னவென்றால், வேலை செய்யும் மாதிரி உடலியல் அழுத்தத்தைக் கையாளாது (முன் ஏற்றுதல் மற்றும் பின் சுமை).CTCM இல், மிகப் பெரிய திசுக்களில் டயஸ்டோல் (முழு நீட்சி) மற்றும் சிஸ்டோல் (மின் தூண்டுதலின் போது சுருக்கத்தின் நீளம்) ஆகியவற்றில் 25% உடலியல் நீட்சியை இனப்பெருக்கம் செய்ய எதிர் திசைகளில் அழுத்தம் தூண்டப்பட்டது.இந்த வரம்பு எதிர்கால CTCM வடிவமைப்புகளில் இரு பக்கங்களிலிருந்தும் இதய திசுக்களில் போதுமான அழுத்தம் மற்றும் இதய அறைகளில் ஏற்படும் சரியான அழுத்தம்-தொகுதி உறவுகளைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் அகற்றப்பட வேண்டும்.
இந்த கையெழுத்துப் பிரதியில் கூறப்பட்டுள்ள ஓவர்ஸ்ட்ரெட்ச்-தூண்டப்பட்ட மறுவடிவமைப்பு ஹைபர்டிராஃபிக் ஹைப்பர்ஸ்ட்ரெட்ச் சிக்னல்களைப் பிரதிபலிப்பதில் மட்டுமே உள்ளது.எனவே, நகைச்சுவை அல்லது நரம்பியல் காரணிகள் (இந்த அமைப்பில் இல்லாத) தேவையில்லாமல் நீட்டிக்கப்பட்ட ஹைபர்டிராஃபிக் சிக்னலிங் ஆய்வுக்கு இந்த மாதிரி உதவும்.CTCM இன் பெருக்கத்தை அதிகரிக்க கூடுதல் ஆய்வுகள் தேவை, எடுத்துக்காட்டாக, நோயெதிர்ப்பு உயிரணுக்களுடன் இணை வளர்ப்பு, பிளாஸ்மா நகைச்சுவை காரணிகளைப் பரப்புதல், மற்றும் நியூரானல் செல்களுடன் இணைந்து வளர்க்கும் போது கண்டுபிடிப்பு ஆகியவை CTCM உடன் நோய் மாதிரியாக்கத்தின் சாத்தியங்களை மேம்படுத்தும்.
இந்த ஆய்வில் பதின்மூன்று பன்றிகள் பயன்படுத்தப்பட்டன.அனைத்து விலங்கு நடைமுறைகளும் நிறுவன வழிகாட்டுதல்களின்படி செய்யப்பட்டன மற்றும் லூயிஸ்வில் பல்கலைக்கழகத்தின் நிறுவன விலங்கு பராமரிப்பு மற்றும் பயன்பாட்டுக் குழுவால் அங்கீகரிக்கப்பட்டது.பெருநாடி வளைவு இறுக்கப்பட்டு, இதயமானது 1 எல் மலட்டு இதயத் துடிப்பு (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL ஹெப்பரின், pH வரை 7.4) மூலம் துளைக்கப்பட்டது; பொதுவாக <10 நிமிடம் இருக்கும் பனிக்கட்டியில் உள்ள ஆய்வகத்திற்கு கொண்டு செல்லப்படும் வரை இதயங்கள் பனிக்கட்டி கார்டியோபிளஜிக் கரைசலில் பாதுகாக்கப்பட்டன. பொதுவாக <10 நிமிடம் இருக்கும் பனிக்கட்டியில் உள்ள ஆய்வகத்திற்கு கொண்டு செல்லப்படும் வரை இதயங்கள் பனிக்கட்டி கார்டியோபிளஜிக் கரைசலில் பாதுகாக்கப்பட்டன. செர்டா க்ரானிலி வ லெடியனோம் கார்டியோபிளேகிசெஸ்கோம் ராஸ்ட்வோரே டூ டிரான்ஸ்போர்டிரோவ்கி வ லாபோரடோரிசு ந ல்டுட்யூ, லோடு, 1 . பொதுவாக <10 நிமிடம் எடுக்கும் பனியில் உள்ள ஆய்வகத்திற்கு கொண்டு செல்லும் வரை இதயங்கள் ஐஸ்-குளிர் கார்டியோபிளஜிக் கரைசலில் சேமிக்கப்படும்.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。 டெர்சைட் செர்டிசா மற்றும் லெடியனோய் கார்டியோபிளேகி டோ டிரான்ஸ்போர்டிரோவ்கி வ லாபோரடோரியூ நா ல்டு, ஓபிசினோ <10 மணி. பொதுவாக <10 நிமிடம், பனியில் உள்ள ஆய்வகத்திற்கு கொண்டு செல்லும் வரை இதயங்களை ஐஸ் கார்டியோபிலீஜியாவில் வைத்திருங்கள்.
CTCM சாதனம் SolidWorks கணினி உதவி வடிவமைப்பு (CAD) மென்பொருளில் உருவாக்கப்பட்டது.கலாச்சார அறைகள், பிரிப்பான்கள் மற்றும் காற்று அறைகள் CNC தெளிவான அக்ரிலிக் பிளாஸ்டிக்கால் செய்யப்பட்டவை.7 மிமீ விட்டம் கொண்ட பேக்-அப் வளையமானது மையத்தில் அதிக அடர்த்தி கொண்ட பாலிஎதிலினால் (HDPE) உருவாக்கப்பட்டுள்ளது மற்றும் அடியில் மீடியாவை மூடுவதற்குப் பயன்படுத்தப்படும் சிலிகான் ஓ-ரிங் இடமளிக்க ஓ-ரிங் பள்ளம் உள்ளது.ஒரு மெல்லிய சிலிக்கா சவ்வு பண்பாட்டு அறையை பிரிக்கும் தட்டிலிருந்து பிரிக்கிறது.சிலிகான் சவ்வு 0.02″ தடித்த சிலிகான் தாளில் இருந்து லேசர் வெட்டப்பட்டு 35A கடினத்தன்மை கொண்டது.கீழ் மற்றும் மேல் சிலிகான் கேஸ்கட்கள் 1/16″ தடிமனான சிலிகான் தாளில் இருந்து லேசர் வெட்டப்பட்டு 50A கடினத்தன்மை கொண்டது.316L துருப்பிடிக்காத எஃகு திருகுகள் மற்றும் இறக்கை நட்டுகள் தடுப்பை கட்டுவதற்கும் காற்று புகாத முத்திரையை உருவாக்குவதற்கும் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
பிரத்யேக அச்சிடப்பட்ட சர்க்யூட் போர்டு (PCB) C-PACE-EM அமைப்புடன் ஒருங்கிணைக்க வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது.PCB இல் உள்ள சுவிஸ் இயந்திரம் இணைப்பான் சாக்கெட்டுகள் வெள்ளி பூசப்பட்ட செப்பு கம்பிகள் மற்றும் மின்முனைகளில் திருகப்பட்ட வெண்கல 0-60 திருகுகள் மூலம் கிராஃபைட் மின்முனைகளுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன.அச்சிடப்பட்ட சர்க்யூட் போர்டு 3D பிரிண்டரின் அட்டையில் வைக்கப்பட்டுள்ளது.
CTCM சாதனம் ஒரு புரோகிராம் செய்யக்கூடிய நியூமேடிக் ஆக்சுவேட்டரால் (PPD) கட்டுப்படுத்தப்படுகிறது, இது இதய சுழற்சியைப் போன்ற கட்டுப்படுத்தப்பட்ட சுற்றோட்ட அழுத்தத்தை உருவாக்குகிறது.காற்று அறைக்குள் அழுத்தம் அதிகரிக்கும் போது, ​​நெகிழ்வான சிலிகான் சவ்வு மேல்நோக்கி விரிவடைகிறது, திசு தளத்தின் கீழ் நடுத்தரத்தை கட்டாயப்படுத்துகிறது.டயஸ்டோலின் போது இதயத்தின் உடலியல் விரிவாக்கத்தைப் போன்று திரவத்தை வெளியேற்றுவதன் மூலம் திசுக்களின் பகுதி நீட்டப்படும்.தளர்வின் உச்சத்தில், கிராஃபைட் மின்முனைகள் மூலம் மின் தூண்டுதல் பயன்படுத்தப்பட்டது, இது காற்று அறையில் அழுத்தத்தை குறைத்து திசு பிரிவுகளின் சுருக்கத்தை ஏற்படுத்தியது.குழாயின் உள்ளே காற்று அமைப்பில் உள்ள அழுத்தத்தைக் கண்டறிய அழுத்தம் சென்சார் கொண்ட ஒரு ஹீமோஸ்டேடிக் வால்வு உள்ளது.பிரஷர் சென்சார் உணரும் அழுத்தம் மடிக்கணினியுடன் இணைக்கப்பட்ட தரவு சேகரிப்பாளருக்குப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.இது வாயு அறைக்குள் அழுத்தத்தை தொடர்ந்து கண்காணிக்க அனுமதிக்கிறது.அதிகபட்ச அறை அழுத்தத்தை (நிலையான 80 mmHg, 140 mmHg OS) அடைந்ததும், தரவு கையகப்படுத்தும் சாதனம் 2 msக்கு ஒரு பைபாசிக் வோல்டேஜ் சிக்னலை உருவாக்க C-PACE-EM அமைப்புக்கு ஒரு சிக்னலை அனுப்ப உத்தரவிட்டது, 4 V ஆக அமைக்கப்பட்டது.
இதயப் பிரிவுகள் பெறப்பட்டன மற்றும் 6 கிணறுகளில் கலாச்சார நிலைமைகள் பின்வருமாறு நிகழ்த்தப்பட்டன: அறுவடை செய்யப்பட்ட இதயங்களை பரிமாற்ற பாத்திரத்தில் இருந்து குளிர்ந்த (4 ° C.) கார்டியோபிலீஜியா கொண்ட தட்டுக்கு மாற்றவும்.இடது வென்ட்ரிக்கிள் ஒரு மலட்டு பிளேடுடன் தனிமைப்படுத்தப்பட்டு 1-2 செமீ 3 துண்டுகளாக வெட்டப்பட்டது.இந்த திசுத் தொகுதிகள் திசு பிசின் மூலம் திசு ஆதரவுடன் இணைக்கப்பட்டு, டைரோடின் கரைசலைக் கொண்ட அதிர்வுறும் மைக்ரோடோம் திசு குளியலில் வைக்கப்பட்டு, தொடர்ந்து ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட (3 g/L 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g) . ), 6 mM KCl (0.18 gMse), 6 mM KCl (0.18 m1 gMse), 0.46 m1 HEPES (2.38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M தீர்வு), 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M தீர்வு), 1 L ddH2O வரை).அதிர்வுறும் மைக்ரோடோம் 300 µm தடிமனான துண்டுகளை 80 ஹெர்ட்ஸ் அதிர்வெண்ணிலும், கிடைமட்ட அதிர்வு வீச்சு 2 மிமீ மற்றும் 0.03 மிமீ/வி முன்கூட்டிய வீதத்திலும் வெட்டும்படி அமைக்கப்பட்டது.கரைசலை குளிர்ச்சியாக வைத்திருக்க திசு குளியல் பனியால் சூழப்பட்டது மற்றும் வெப்பநிலை 4 ° C இல் பராமரிக்கப்பட்டது.மைக்ரோடோம் குளியலில் இருந்து திசுப் பிரிவுகளை ஒரு வளர்ப்புத் தட்டுக்கு போதுமான பகுதிகள் கிடைக்கும் வரை பனியில் தொடர்ந்து ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட டைரோட் கரைசலைக் கொண்ட அடைகாக்கும் குளியலுக்கு மாற்றவும்.டிரான்ஸ்வெல் கலாச்சாரங்களுக்கு, திசுப் பிரிவுகள் மலட்டு 6 மிமீ அகலமுள்ள பாலியூரிதீன் ஆதரவுடன் இணைக்கப்பட்டு, 6 மில்லி உகந்த ஊடகத்தில் (199 நடுத்தர, 1x ITS கூடுதல், 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF- அல்கலைன் மற்றும் 2X ஆண்டிபயாடிக்-ஆன்ட்) வைக்கப்பட்டன.மின் தூண்டுதல் (10 V, அதிர்வெண் 1.2 ஹெர்ட்ஸ்) சி-பேஸ் மூலம் திசு பிரிவுகளுக்கு பயன்படுத்தப்பட்டது.TD நிலைமைகளுக்கு, ஒவ்வொரு நடுத்தர மாற்றத்திலும் புதிய T3 மற்றும் Dex 100 nM மற்றும் 1 μM இல் சேர்க்கப்பட்டது.ஊடகம் ஒரு நாளைக்கு 3 முறை மாற்றுவதற்கு முன் ஆக்ஸிஜனுடன் நிறைவுற்றது.திசுப் பிரிவுகள் 37 ° C மற்றும் 5% CO2 இல் ஒரு காப்பகத்தில் வளர்க்கப்பட்டன.
CTCM கலாச்சாரங்களுக்கு, திசுப் பிரிவுகள் தனிப்பயனாக்கப்பட்ட 3D பிரிண்டரில் மாற்றியமைக்கப்பட்ட டைரோடின் கரைசலைக் கொண்ட பெட்ரி டிஷில் வைக்கப்பட்டன.ஆதரவு வளையத்தின் பரப்பளவில் 25% இதயத் துண்டின் அளவை அதிகரிக்க சாதனம் வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது.டைரோடின் கரைசலில் இருந்து நடுத்தரத்திற்கு மாற்றப்பட்ட பிறகு மற்றும் டயஸ்டோலின் போது இதயத்தின் பகுதிகள் நீட்டப்படாமல் இருக்க இது செய்யப்படுகிறது.ஹிஸ்டோஅக்ரிலிக் பசையைப் பயன்படுத்தி, 300 µm தடிமன் கொண்ட பிரிவுகள் 7 மிமீ விட்டம் கொண்ட ஒரு ஆதரவு வளையத்தில் பொருத்தப்பட்டன.திசுப் பகுதிகளை ஆதரவு வளையத்துடன் இணைத்த பிறகு, அதிகப்படியான திசுப் பகுதிகளைத் துண்டித்து, இணைக்கப்பட்ட திசுப் பகுதிகளை ஒரு சாதனத்திற்குப் போதுமான பகுதிகள் தயாரிக்கப்படும் வரை பனியில் (4°C) டைரோட் கரைசலின் குளியலில் மீண்டும் வைக்கவும்.அனைத்து சாதனங்களுக்கும் மொத்த செயலாக்க நேரம் 2 மணிநேரத்திற்கு மிகாமல் இருக்க வேண்டும்.6 திசு பிரிவுகள் அவற்றின் ஆதரவு வளையங்களுடன் இணைக்கப்பட்ட பிறகு, CTCM சாதனம் கூடியது.CTCM கலாச்சார அறை 21 மில்லி முன்-ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட ஊடகத்தால் நிரப்பப்பட்டுள்ளது.திசுப் பகுதிகளை வளர்ப்பு அறைக்கு மாற்றவும் மற்றும் ஒரு குழாய் மூலம் காற்று குமிழ்களை கவனமாக அகற்றவும்.திசுப் பகுதி பின்னர் துளைக்குள் வழிநடத்தப்பட்டு மெதுவாக அழுத்தும் இடத்தில் வைக்கப்படுகிறது.இறுதியாக, சாதனத்தில் எலக்ட்ரோடு தொப்பியை வைத்து, சாதனத்தை இன்குபேட்டருக்கு மாற்றவும்.பின்னர் CTCM ஐ காற்று குழாய் மற்றும் C-PACE-EM அமைப்புடன் இணைக்கவும்.நியூமேடிக் ஆக்சுவேட்டர் திறக்கிறது மற்றும் காற்று வால்வு CTCM ஐ திறக்கிறது.C-PACE-EM அமைப்பு 2 msக்கு பைபாசிக் வேகத்தின் போது 1.2 ஹெர்ட்ஸில் 4 V வழங்க கட்டமைக்கப்பட்டது.மின்முனைகளில் கிராஃபைட் குவிவதைத் தவிர்ப்பதற்காக ஒரு நாளைக்கு இரண்டு முறை ஊடகம் மாற்றப்பட்டது மற்றும் மின்முனைகள் ஒரு நாளைக்கு ஒரு முறை மாற்றப்பட்டது.தேவைப்பட்டால், திசுப் பகுதிகளை அவற்றின் கலாச்சாரக் கிணறுகளிலிருந்து அகற்றி, அவற்றின் கீழ் விழுந்திருக்கும் காற்றுக் குமிழ்களை வெளியேற்றலாம்.MT சிகிச்சை நிலைமைகளுக்கு, 100 nM T3 மற்றும் 1 μM Dex உடன் ஒவ்வொரு நடுத்தர மாற்றத்திலும் T3/Dex புதிதாக சேர்க்கப்பட்டது.CTCM சாதனங்கள் இன்குபேட்டரில் 37°C மற்றும் 5% CO2 இல் வளர்க்கப்பட்டன.
இதயத் துண்டுகளின் நீட்டிக்கப்பட்ட பாதைகளைப் பெற, ஒரு சிறப்பு கேமரா அமைப்பு உருவாக்கப்பட்டது.ஒரு SLR கேமரா (Canon Rebel T7i, Canon, Tokyo, Japan) Navitar Zoom 7000 18-108mm மேக்ரோ லென்ஸுடன் (Navitar, San Francisco, CA) பயன்படுத்தப்பட்டது.புதிய ஊடகத்துடன் ஊடகத்தை மாற்றிய பின் அறை வெப்பநிலையில் காட்சிப்படுத்தல் செய்யப்பட்டது.கேமரா 51° கோணத்தில் நிலைநிறுத்தப்பட்டு, வினாடிக்கு 30 பிரேம்களில் வீடியோ பதிவு செய்யப்படுகிறது.முதலாவதாக, இதயத் துண்டுகளின் இயக்கத்தை அளவிடுவதற்கு திறந்த மூல மென்பொருள் (MUSCLEMOTION43) Image-J உடன் பயன்படுத்தப்பட்டது.இரைச்சலைத் தவிர்க்க இதயத் துண்டுகளைத் துடிக்க ஆர்வமுள்ள பகுதிகளை வரையறுக்க MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ஐப் பயன்படுத்தி முகமூடி உருவாக்கப்பட்டது.கைமுறையாகப் பிரிக்கப்பட்ட முகமூடிகள் ஒரு சட்ட வரிசையில் அனைத்து படங்களுக்கும் பயன்படுத்தப்பட்டு பின்னர் MUSCLEMOTION செருகுநிரலுக்கு அனுப்பப்படும்.தசை இயக்கமானது, ஒவ்வொரு சட்டகத்திலும் உள்ள பிக்சல்களின் சராசரித் தீவிரத்தைப் பயன்படுத்தி, குறிப்புச் சட்டத்துடன் தொடர்புடைய அதன் இயக்கத்தைக் கணக்கிடுகிறது.தரவு பதிவு செய்யப்பட்டு, வடிகட்டப்பட்டு, சுழற்சி நேரத்தை அளவிடவும், இதய சுழற்சியின் போது திசுக்களின் நீட்டிப்பை மதிப்பிடவும் பயன்படுத்தப்பட்டது.பதிவுசெய்யப்பட்ட வீடியோ, முதல்-வரிசை பூஜ்ஜிய-கட்ட டிஜிட்டல் வடிப்பானைப் பயன்படுத்தி பின்னர் செயலாக்கப்பட்டது.திசு நீட்டிப்பை (உச்சத்திலிருந்து உச்சம் வரை) அளவிட, பதிவுசெய்யப்பட்ட சிக்னலில் சிகரங்கள் மற்றும் தொட்டிகளை வேறுபடுத்துவதற்கு உச்சத்திலிருந்து உச்சநிலை பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.கூடுதலாக, சிக்னல் ட்ரிஃப்ட்டை அகற்ற 6வது வரிசை பல்லுறுப்புக்கோவையைப் பயன்படுத்தி டிரெண்டிங் செய்யப்படுகிறது.உலகளாவிய திசு இயக்கம், சுழற்சி நேரம், தளர்வு நேரம் மற்றும் சுருக்க நேரம் (துணை நிரல் குறியீடு 44) ஆகியவற்றை தீர்மானிக்க MATLAB இல் நிரல் குறியீடு உருவாக்கப்பட்டது.
திரிபு பகுப்பாய்விற்கு, மெக்கானிக்கல் நீட்டிப்பு மதிப்பீட்டிற்காக உருவாக்கப்பட்ட அதே வீடியோக்களைப் பயன்படுத்தி, MUSCLEMOTION மென்பொருளின் படி இயக்கத்தின் உச்சங்களை (அதிக (மேல்) மற்றும் குறைந்த (கீழ்) இயக்கப் புள்ளிகளைக் குறிக்கும் இரண்டு படங்களை முதலில் கண்டறிந்தோம்.நாங்கள் திசு பகுதிகளைப் பிரித்து, பிரிக்கப்பட்ட திசுக்களுக்கு நிழல் படிமுறையின் வடிவத்தைப் பயன்படுத்தினோம் (துணை படம் 2a).பிரிக்கப்பட்ட திசு பின்னர் பத்து துணை மேற்பரப்புகளாகப் பிரிக்கப்பட்டது, மேலும் ஒவ்வொரு மேற்பரப்பின் அழுத்தமும் பின்வரும் சமன்பாட்டைப் பயன்படுத்தி கணக்கிடப்பட்டது: ஸ்ட்ரெய்ன் = (Sup-Sdown)/Sdown, இதில் Sup மற்றும் Sdown என்பது முறையே துணியின் மேல் மற்றும் கீழ் நிழல்களிலிருந்து வடிவத்தின் தூரமாகும் (துணை படம். .2b).
48 மணிநேரத்திற்கு 4% பாராஃபோர்மால்டிஹைடில் இதயப் பிரிவுகள் சரி செய்யப்பட்டன.நிலையான திசுக்கள் 1 மணிநேரத்திற்கு 10% மற்றும் 20% சுக்ரோஸில் நீரிழப்பு செய்யப்பட்டன, பின்னர் ஒரே இரவில் 30% சுக்ரோஸில்.பிரிவுகள் பின்னர் உகந்த வெட்டு வெப்பநிலை கலவையில் (OCT கலவை) உட்பொதிக்கப்பட்டன மற்றும் படிப்படியாக ஒரு ஐசோபென்டேன்/உலர் பனிக் குளியலில் உறைந்தன.OCT உட்பொதிப்பு தொகுதிகளை -80 °C இல் பிரிக்கும் வரை சேமிக்கவும்.ஸ்லைடுகள் 8 μm தடிமன் கொண்ட பிரிவுகளாகத் தயாரிக்கப்பட்டன.
இதயப் பிரிவுகளில் இருந்து OCTஐ அகற்ற, ஸ்லைடுகளை ஹீட்டிங் பிளாக்கில் 95 °C வெப்பநிலையில் 5 நிமிடம் சூடாக்கவும்.ஒவ்வொரு ஸ்லைடிலும் 1 மில்லி பிபிஎஸ் சேர்த்து அறை வெப்பநிலையில் 30 நிமிடங்கள் அடைகாக்கவும், பின்னர் அறை வெப்பநிலையில் 15 நிமிடங்களுக்கு பிபிஎஸ்ஸில் 0.1% டிரைடன்-எக்ஸ் அமைப்பதன் மூலம் பிரிவுகளை ஊடுருவவும்.குறிப்பிட்ட அல்லாத ஆன்டிபாடிகள் மாதிரியுடன் பிணைக்கப்படுவதைத் தடுக்க, 1 மில்லி 3% BSA கரைசலை ஸ்லைடுகளில் சேர்த்து அறை வெப்பநிலையில் 1 மணிநேரம் அடைகாக்கவும்.பிஎஸ்ஏ பின்னர் அகற்றப்பட்டது மற்றும் ஸ்லைடுகள் பிபிஎஸ் மூலம் கழுவப்பட்டன.ஒவ்வொரு மாதிரியையும் பென்சிலால் குறிக்கவும்.முதன்மை ஆன்டிபாடிகள் (1% BSA இல் 1:200 நீர்த்த) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) மற்றும் troponin-T (தெர்மோ சயின்டிஃபிக்; #MA5-12960) பின்னர் 90 நிமிடங்களுக்கு மேல் BSA எதிர்ப்பு 1 சேர்க்கப்பட்டது (20% ஆண்டிபோட்கள்: மவுஸ் அலெக்சா ஃப்ளூர் 488 (தெர்மோ சயின்டிஃபிக்; #A16079), முயல்களுக்கு எதிராக அலெக்சா ஃப்ளூர் 594 (தெர்மோ சயின்டிஃபிக்; #T6391) கூடுதலாக 90 நிமிடங்களுக்கு பிபிஎஸ் மூலம் 3 முறை கழுவி, இலக்கு கறையை பின்னணியில் இருந்து வேறுபடுத்தி அறிய, கடைசியாக நியூக்ளியர் ஸ்டெயின், நியூக்ளியர் ஆன்டிபாடியாக PI ஐ மட்டும் பயன்படுத்தினோம். ield (Vector Laboratories) மற்றும் நெயில் பாலிஷ் மூலம் சீல் செய்யப்பட்டது -x உருப்பெருக்கம்) மற்றும் 40x உருப்பெருக்கம் கொண்ட கீயன்ஸ் நுண்ணோக்கி.
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) PBS இல் 5 μg/ml இல் WGA ஸ்டைனிங்கிற்குப் பயன்படுத்தப்பட்டது மற்றும் அறை வெப்பநிலையில் 30 நிமிடங்களுக்கு நிலையான பிரிவுகளுக்குப் பயன்படுத்தப்பட்டது.ஸ்லைடுகள் பிபிஎஸ் மூலம் கழுவப்பட்டு ஒவ்வொரு ஸ்லைடிலும் சூடான் கருப்பு சேர்க்கப்பட்டு 30 நிமிடங்களுக்கு அடைகாக்கப்பட்டது.ஸ்லைடுகள் பின்னர் பிபிஎஸ் மூலம் கழுவப்பட்டு வெக்டாஷீல்ட் உட்பொதிக்கும் ஊடகம் சேர்க்கப்பட்டது.ஸ்லைடுகள் கீயன்ஸ் நுண்ணோக்கியில் 40x உருப்பெருக்கத்தில் காட்சிப்படுத்தப்பட்டன.
மேலே விவரிக்கப்பட்ட மாதிரிகளிலிருந்து OCT அகற்றப்பட்டது.OCT ஐ அகற்றிய பிறகு, ஸ்லைடுகளை ஒரே இரவில் Bouin இன் கரைசலில் மூழ்க வைக்கவும்.ஸ்லைடுகள் பின்னர் 1 மணிநேரம் காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரில் கழுவப்பட்டு, பின்னர் 10 நிமிடங்களுக்கு பிப்ரிச் அலோ அமில ஃபுச்சின் கரைசலில் வைக்கப்பட்டன.பின்னர் ஸ்லைடுகள் காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரில் கழுவப்பட்டு, 5% பாஸ்போமாலிப்டினம்/5% பாஸ்போடங்ஸ்டிக் அமிலத்தின் கரைசலில் 10 நிமிடங்களுக்கு வைக்கப்பட்டன.துவைக்காமல், ஸ்லைடுகளை நேரடியாக அனிலின் நீல கரைசலில் 15 நிமிடங்களுக்கு மாற்றவும்.பின்னர் ஸ்லைடுகள் காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரில் கழுவப்பட்டு 1% அசிட்டிக் அமிலக் கரைசலில் 2 நிமிடங்களுக்கு வைக்கப்பட்டன.ஸ்லைடுகள் 200 N எத்தனாலில் உலர்த்தப்பட்டு சைலீனுக்கு மாற்றப்பட்டன.கறை படிந்த ஸ்லைடுகள் 10x நோக்கத்துடன் கீயன்ஸ் நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தி காட்சிப்படுத்தப்பட்டன.கீயன்ஸ் அனலைசர் மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி ஃபைப்ரோஸிஸ் பகுதி சதவீதம் அளவிடப்பட்டது.
CyQUANT™ MTT Cell Viability Assay (Invitrogen, Carlsbad, CA), பட்டியல் எண் V13154, சில மாற்றங்களுடன் உற்பத்தியாளரின் நெறிமுறையின்படி.குறிப்பாக, எம்டிடி பகுப்பாய்வின் போது சீரான திசு அளவை உறுதிப்படுத்த 6 மிமீ விட்டம் கொண்ட ஒரு அறுவை சிகிச்சை பஞ்ச் பயன்படுத்தப்பட்டது.உற்பத்தியாளரின் நெறிமுறையின்படி MTT அடி மூலக்கூறு கொண்ட 12-கிணறு தட்டின் கிணறுகளில் திசுக்கள் தனித்தனியாக பூசப்பட்டன.பிரிவுகள் 37° C. வெப்பநிலையில் 3 மணி நேரம் அடைகாத்து, உயிருள்ள திசு MTT அடி மூலக்கூறை வளர்சிதைமாக்கி ஊதா நிற ஃபார்மசான் கலவையை உருவாக்குகிறது.MTT கரைசலை 1 மில்லி DMSO உடன் மாற்றி, 37 °C வெப்பநிலையில் 15 நிமிடங்களுக்கு அடைகாத்து, இதயப் பகுதிகளிலிருந்து ஊதா ஃபார்மசானைப் பிரித்தெடுக்கவும்.மாதிரிகள் 1:10 டிஎம்எஸ்ஓவில் 96-கிணறு தெளிவான அடிமட்ட தட்டுகளில் நீர்த்தப்பட்டன மற்றும் சைட்டேஷன் பிளேட் ரீடரை (பயோடெக்) பயன்படுத்தி 570 என்எம் இல் அளவிடப்படும் ஊதா நிற அடர்த்தி.இதயத்தின் ஒவ்வொரு துண்டின் எடைக்கும் அளவீடுகள் இயல்பாக்கப்பட்டன.
ஹார்ட் ஸ்லைஸ் மீடியா 1 μCi/ml [5-3H]-குளுக்கோஸ் (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) கொண்ட மீடியாவுடன் முன்பு விவரிக்கப்பட்டபடி குளுக்கோஸ் பயன்பாட்டு மதிப்பீட்டிற்காக மாற்றப்பட்டது.4 மணி நேரம் அடைகாத்த பிறகு, 100 µl 0.2 N HCl உள்ள 100 µl கொண்ட திறந்த மைக்ரோ சென்ட்ரிஃப்யூஜ் குழாயில் 100 μl மீடியம் சேர்க்கவும்.பின்னர் குழாய் 500 μl dH2O ஐக் கொண்ட ஒரு சிண்டிலேஷன் குழாயில் [3H] 2O ஐ 72 மணிநேரத்திற்கு 37 ° C இல் ஆவியாக்கியது.பின்னர் சிண்டிலேஷன் குழாயிலிருந்து மைக்ரோசென்ட்ரிஃப்யூஜ் குழாயை அகற்றி, 10 மி.லி.ட்ரை-கார்ப் 2900டிஆர் திரவ சிண்டிலேஷன் பகுப்பாய்வியைப் பயன்படுத்தி சிண்டிலேஷன் எண்ணிக்கைகள் செய்யப்பட்டன (பேக்கர்ட் பயோசயின்ஸ் நிறுவனம், மெரிடன், சிடி, அமெரிக்கா).[5-3H]-குளுக்கோஸ் குறிப்பிட்ட செயல்பாடு, முழுமையடையாத சமநிலை மற்றும் பின்னணி, [5-3H]-க்கு லேபிளிடப்படாத குளுக்கோஸை நீர்த்துப்போகச் செய்தல் மற்றும் சிண்டிலேஷன் கவுண்டர் செயல்திறன் ஆகியவற்றைக் கருத்தில் கொண்டு குளுக்கோஸ் பயன்பாடு கணக்கிடப்பட்டது.தரவு இதயத்தின் பிரிவுகளின் வெகுஜனத்திற்கு இயல்பாக்கப்படுகிறது.
டிரிசோலில் திசு ஒத்திசைவுக்குப் பிறகு, உற்பத்தியாளரின் நெறிமுறையின்படி Qiagen miRNeasy மைக்ரோ கிட் #210874 ஐப் பயன்படுத்தி இதயப் பிரிவுகளிலிருந்து RNA தனிமைப்படுத்தப்பட்டது.RNAsec நூலகத் தயாரிப்பு, வரிசைப்படுத்துதல் மற்றும் தரவு பகுப்பாய்வு ஆகியவை பின்வருமாறு நிகழ்த்தப்பட்டன:
ஒரு மாதிரிக்கு 1 μg ஆர்.என்.ஏ., ஆர்.என்.ஏ நூலகத்தைத் தயாரிப்பதற்கான தொடக்கப் பொருளாகப் பயன்படுத்தப்பட்டது.உற்பத்தியாளரின் பரிந்துரைகளைப் பின்பற்றி இல்லுமினா (NEB, USA) க்கான NEBNext UltraTM RNA நூலகத் தயாரிப்புக் கருவியைப் பயன்படுத்தி வரிசைப்படுத்தல் நூலகங்கள் உருவாக்கப்பட்டன, மேலும் ஒவ்வொரு மாதிரியின் பண்புக்கூறு வரிசைகளிலும் குறியீட்டு குறியீடுகள் சேர்க்கப்பட்டன.சுருக்கமாக, பாலி-டி ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகளுடன் இணைக்கப்பட்ட காந்த மணிகளைப் பயன்படுத்தி மொத்த RNA இலிருந்து mRNA சுத்திகரிக்கப்பட்டது.NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X) இல் உயர் வெப்பநிலையில் divalent cations ஐப் பயன்படுத்தி துண்டு துண்டானது மேற்கொள்ளப்படுகிறது.ரேண்டம் ஹெக்ஸாமர் ப்ரைமர்கள் மற்றும் M-MuLV ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் (RNase H-) ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி முதல் ஸ்ட்ராண்ட் சிடிஎன்ஏ ஒருங்கிணைக்கப்பட்டது.இரண்டாவது இழை cDNA ஆனது DNA பாலிமரேஸ் I மற்றும் RNase H ஐப் பயன்படுத்தி ஒருங்கிணைக்கப்படுகிறது. மீதமுள்ள ஓவர்ஹேங்க்கள் எக்ஸானூக்லீஸ்/பாலிமரேஸ் செயல்பாட்டின் மூலம் மழுங்கிய முனைகளாக மாற்றப்படுகின்றன.டிஎன்ஏ துண்டின் 3′ முனையின் அடினிலேஷனுக்குப் பிறகு, ஒரு ஹேர்பின் லூப் அமைப்பைக் கொண்ட ஒரு NEBNext அடாப்டர் அதனுடன் இணைக்கப்பட்டு, அதை கலப்பினத்திற்கு தயார்படுத்துகிறது.விருப்பமான நீளம் 150-200 bp உடைய cDNA துண்டுகளைத் தேர்ந்தெடுப்பதற்கு.AMPure XP அமைப்பைப் பயன்படுத்தி நூலகத் துண்டுகள் சுத்திகரிக்கப்பட்டன (Beckman Coulter, Beverly, USA).பின்னர், 3 μl USER என்சைம் (NEB, USA) அளவு-தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட cDNA ஒரு அடாப்டருடன் இணைக்கப்பட்டது, 15 நிமிடங்களுக்கு 37 ° C இல் பயன்படுத்தப்பட்டது, பின்னர் PCR க்கு முன் 95 ° C இல் 5 நிமிடங்கள் பயன்படுத்தப்பட்டது.பிசிஆர் பின்னர் பியூஷன் ஹை-ஃபிடிலிட்டி டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ், யுனிவர்சல் பிசிஆர் ப்ரைமர்கள் மற்றும் இன்டெக்ஸ் (எக்ஸ்) ப்ரைமர்களைப் பயன்படுத்தி செய்யப்பட்டது.இறுதியாக, PCR தயாரிப்புகள் சுத்திகரிக்கப்பட்டன (AMPure XP அமைப்பு) மற்றும் நூலகத்தின் தரம் அஜிலன்ட் பயோஅனாலைசர் 2100 அமைப்பில் மதிப்பிடப்பட்டது.சிடிஎன்ஏ நூலகம் நோவாசெக் சீக்வென்சரைப் பயன்படுத்தி வரிசைப்படுத்தப்பட்டது.Illumina இலிருந்து மூலப் படக் கோப்புகள் CASAVA Base Calling ஐப் பயன்படுத்தி raw Reads ஆக மாற்றப்பட்டன.மூலத் தரவு FASTQ(fq) வடிவக் கோப்புகளில் சேமிக்கப்படுகிறது, அவை வாசிப்பு வரிசைகள் மற்றும் தொடர்புடைய அடிப்படை குணங்களைக் கொண்டிருக்கின்றன.Sscrofa11.1 குறிப்பு மரபணுவுடன் வடிகட்டப்பட்ட வரிசைமுறை வாசிப்புகளைப் பொருத்த HISAT2 ஐத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.பொதுவாக, HISAT2 எந்த அளவிலான மரபணுக்களையும் ஆதரிக்கிறது, இதில் 4 பில்லியனுக்கும் அதிகமான அடிப்படைகள் உள்ளன, மேலும் இயல்புநிலை மதிப்புகள் பெரும்பாலான அளவுருக்களுக்கு அமைக்கப்பட்டுள்ளன.RNA Seq தரவுகளில் இருந்து ஸ்பிளிசிங் ரீட்களை HISAT2 ஐப் பயன்படுத்தி திறமையாக சீரமைக்க முடியும், இது தற்போது கிடைக்கும் வேகமான அமைப்பாகும், வேறு எந்த முறையையும் விட அதே அல்லது சிறந்த துல்லியத்துடன்.
டிரான்ஸ்கிரிப்டுகளின் மிகுதியானது மரபணு வெளிப்பாட்டின் அளவை நேரடியாக பிரதிபலிக்கிறது.மரபணு வெளிப்பாடு நிலைகள் மரபணு அல்லது எக்ஸான்களுடன் தொடர்புடைய டிரான்ஸ்கிரிப்ட்களின் (வரிசைமுறை எண்ணிக்கை) மூலம் மதிப்பிடப்படுகிறது.வாசிப்புகளின் எண்ணிக்கை மரபணு வெளிப்பாடு நிலைகள், மரபணு நீளம் மற்றும் வரிசைமுறை ஆழம் ஆகியவற்றிற்கு விகிதாசாரமாகும்.FPKM (ஒரு மில்லியன் அடிப்படை ஜோடிகளுக்கு வரிசைப்படுத்தப்பட்ட டிரான்ஸ்கிரிப்ட்டின் ஆயிரம் அடிப்படை ஜோடிகளுக்கு துண்டுகள்) கணக்கிடப்பட்டது மற்றும் DESeq2 தொகுப்பைப் பயன்படுத்தி வேறுபட்ட வெளிப்பாட்டின் P- மதிப்புகள் தீர்மானிக்கப்பட்டது."p.adjust" என்ற உள்ளமைக்கப்பட்ட R-செயல்பாட்டின் அடிப்படையில் Benjamini-Hochberg method9ஐப் பயன்படுத்தி ஒவ்வொரு P மதிப்பிற்கும் தவறான கண்டுபிடிப்பு விகிதத்தை (FDR) கணக்கிட்டோம்.
இதயப் பிரிவுகளிலிருந்து பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ, தெர்மோவிலிருந்து சூப்பர்ஸ்கிரிப்ட் IV விலோ மாஸ்டர் கலவையைப் பயன்படுத்தி 200 ng/μl செறிவில் cDNA ஆக மாற்றப்பட்டது (தெர்மோ, பூனை எண். 11756050).அளவீட்டு RT-PCR ஒரு அப்ளைடு பயோசிஸ்டம்ஸ் எண்டூரா பிளேட் மைக்ரோஆம்ப் 384-கிணறு வெளிப்படையான எதிர்வினை தகடு (தெர்மோ, பூனை எண். 4483319) மற்றும் மைக்ரோஆம்ப் ஆப்டிகல் பிசின் (தெர்மோ, பூனை எண். 4311971) ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி நிகழ்த்தப்பட்டது.எதிர்வினை கலவையானது 5 µl தக்மான் ஃபாஸ்ட் அட்வான்ஸ்டு மாஸ்டர் கலவை (தெர்மோ, கேட் # 4444557), 0.5 µl தக்மான் ப்ரைமர் மற்றும் ஒரு கிணற்றுக்கு 3.5 µl H2O ஆகியவற்றைக் கொண்டிருந்தது.நிலையான qPCR சுழற்சிகள் இயக்கப்பட்டன மற்றும் CT மதிப்புகள் ஒரு அப்ளைடு பயோசிஸ்டம்ஸ் குவாண்ட்ஸ்டுடியோ 5 நிகழ்நேர PCR கருவியைப் பயன்படுத்தி அளவிடப்பட்டன (384-வெல் தொகுதி; தயாரிப்பு # A28135).Taqman ப்ரைமர்கள் தெர்மோ (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (S801680) 8_mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1 ), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss0424 க்கு அனைத்து மாதிரிகளின் மதிப்பு சாதாரணமாக இருந்தது) மரபணு GAPDH.
NT-ProBNP இன் ஊடக வெளியீடு, உற்பத்தியாளரின் நெறிமுறையின்படி NT-ProBNP கிட் (பன்றி) (பூனை எண். MBS2086979, MyBioSource) ஐப் பயன்படுத்தி மதிப்பிடப்பட்டது.சுருக்கமாக, ஒவ்வொரு மாதிரி மற்றும் தரத்தின் 250 μl ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் நகல் சேர்க்கப்பட்டது.மாதிரியைச் சேர்த்த உடனேயே, ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் 50 µl Assay Reagent A ஐச் சேர்க்கவும்.மெதுவாக தட்டு குலுக்கி மற்றும் முத்திரை குத்த பயன்படும் மெழுகு போன்ற ஒரு வகை பொருள் கொண்டு சீல்.பின்னர் மாத்திரைகள் 37 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 1 மணி நேரம் அடைக்கப்படுகின்றன.பின்னர் கரைசலை உறிஞ்சி, 350 µl 1X வாஷ் கரைசலைக் கொண்டு 4 முறை கிணறுகளைக் கழுவவும், ஒவ்வொரு முறையும் 1-2 நிமிடங்கள் கழுவும் கரைசலை அடைகாக்கவும்.பின்னர் ஒரு கிணற்றுக்கு 100 µl Assay Reagent B ஐ சேர்த்து, தட்டு முத்திரை குத்த பயன்படும் மெழுகு போன்ற ஒரு வகை சீலண்ட் மூலம் மூடவும்.டேப்லெட் மெதுவாக அசைக்கப்பட்டு 37 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 30 நிமிடங்களுக்கு அடைகாக்கப்பட்டது.கரைசலை உறிஞ்சி, கிணறுகளை 350 µl 1X கழுவும் கரைசலில் 5 முறை கழுவவும்.ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் 90 µl அடி மூலக்கூறு கரைசலைச் சேர்த்து தட்டை மூடவும்.10-20 நிமிடங்களுக்கு 37°C வெப்பநிலையில் தட்டை அடைகாக்கவும்.ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் 50 µl ஸ்டாப் தீர்வு சேர்க்கவும்.450 nm இல் அமைக்கப்பட்ட சைட்டேஷன் (பயோடெக்) பிளேட் ரீடரைப் பயன்படுத்தி தட்டு உடனடியாக அளவிடப்பட்டது.
5% வகை I பிழை விகிதத்துடன் அளவுருவில் 10% முழுமையான மாற்றத்தைக் கண்டறிய > 80% ஆற்றலை வழங்கும் குழு அளவுகளைத் தேர்வுசெய்ய பவர் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. 5% வகை I பிழை விகிதத்துடன் அளவுருவில் 10% முழுமையான மாற்றத்தைக் கண்டறிய > 80% ஆற்றலை வழங்கும் குழு அளவுகளைத் தேர்வுசெய்ய பவர் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. அனாலிஸ் மோஸ்னோஸ்டி பைல் வைபோல்னென் டிலை வைபோரா ராஸ்மெரோவ் க்ரூப், கோட்டரி ஓபெஸ்பெச்சட் >80% மாசுனோஸ்டி %01000 5% தொழில்நுட்ப கருவிகள் 5% வகை I பிழை விகிதத்துடன் 10% முழுமையான அளவுரு மாற்றத்தைக் கண்டறிய > 80% ஆற்றலை வழங்கும் குழு அளவுகளைத் தேர்ந்தெடுக்க பவர் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5 பைல் ப்ரோவேடன் அனாலிஸ் மோஸ்னோஸ்டி டிலியா வைபோரா ராஸ்மேரா க்ரூப்பி, கோடோரி ஆஸ்பெக்ட் பியூ > 80% மாசுனோஸ்டி %010 நோகோ இஸ்மெனியா பராமெட்ரோவ் மற்றும் 5% சாஸ்டோட் ஓஷிபோக் டிபா I. 10% முழுமையான அளவுரு மாற்றத்தையும் 5% வகை I பிழை விகிதத்தையும் கண்டறிய > 80% ஆற்றலை வழங்கும் குழு அளவைத் தேர்ந்தெடுக்க சக்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.சோதனைக்கு முன் திசுப் பிரிவுகள் தோராயமாகத் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டன.அனைத்து பகுப்பாய்வுகளும் கண்மூடித்தனமானவை மற்றும் எல்லா தரவும் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்ட பின்னரே மாதிரிகள் டிகோட் செய்யப்பட்டன.கிராப்பேட் ப்ரிசம் மென்பொருள் (சான் டியாகோ, சிஏ) அனைத்து புள்ளிவிவர பகுப்பாய்வுகளையும் செய்ய பயன்படுத்தப்பட்டது. அனைத்து புள்ளிவிவரங்களுக்கும், p-மதிப்புகள் <0.05 மதிப்புகளில் குறிப்பிடத்தக்கதாகக் கருதப்பட்டன. அனைத்து புள்ளிவிவரங்களுக்கும், p-மதிப்புகள் <0.05 மதிப்புகளில் குறிப்பிடத்தக்கதாகக் கருதப்பட்டன. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. அனைத்து புள்ளிவிவரங்களுக்கும், p-மதிப்புகள் <0.05 மதிப்புகளில் குறிப்பிடத்தக்கதாகக் கருதப்பட்டன.对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。 Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. அனைத்து புள்ளிவிவரங்களுக்கும், p-மதிப்புகள் <0.05 மதிப்புகளில் குறிப்பிடத்தக்கதாகக் கருதப்பட்டன.இரண்டு வால் மாணவர்களின் டி-டெஸ்ட் 2 ஒப்பீடுகளுடன் தரவுகளில் செய்யப்பட்டது.பல குழுக்களுக்கு இடையே உள்ள முக்கியத்துவத்தை தீர்மானிக்க ஒரு வழி அல்லது இரு வழி ANOVA பயன்படுத்தப்பட்டது.பிந்தைய தற்காலிக சோதனைகளைச் செய்யும்போது, ​​பல ஒப்பீடுகளுக்கு டுகேயின் திருத்தம் பயன்படுத்தப்பட்டது.RNAsec தரவு FDR மற்றும் p.அட்ஜஸ்ட் கணக்கிடும் போது சிறப்பு புள்ளியியல் பரிசீலனைகளை முறைகள் பிரிவில் விவரிக்கப்பட்டுள்ளது.
ஆய்வு வடிவமைப்பு பற்றிய கூடுதல் தகவலுக்கு, இந்தக் கட்டுரையுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ள இயற்கை ஆராய்ச்சி அறிக்கையின் சுருக்கத்தைப் பார்க்கவும்.