కొన్ని LC ట్రబుల్షూటింగ్ అంశాలు ఎప్పుడూ పాతవి కావు, ఎందుకంటే LC ప్రాక్టీస్‌లో సమస్యలు ఉన్నాయి, కాలక్రమేణా ఇన్‌స్ట్రుమెంట్ టెక్నాలజీ మెరుగుపడినప్పటికీ. LC వ్యవస్థలో సమస్యలు తలెత్తడానికి మరియు పేలవమైన పీక్ ఆకారంలో ముగియడానికి అనేక మార్గాలు ఉన్నాయి. పీక్ ఆకారానికి సంబంధించిన సమస్యలు తలెత్తినప్పుడు, ఈ ఫలితాలకు గల కారణాల యొక్క చిన్న జాబితా మా ట్రబుల్షూటింగ్ అనుభవాన్ని సులభతరం చేయడంలో సహాయపడుతుంది.
ఈ “LC ట్రబుల్షూటింగ్” కాలమ్ రాయడం మరియు ప్రతి నెలా అంశాల గురించి ఆలోచించడం సరదాగా ఉంది, ఎందుకంటే కొన్ని అంశాలు ఎప్పుడూ శైలి నుండి బయటపడవు. క్రోమాటోగ్రఫీ పరిశోధన రంగంలో కొన్ని అంశాలు లేదా ఆలోచనలు కొత్త మరియు మెరుగైన ఆలోచనలతో భర్తీ చేయబడినందున వాడుకలో లేవు, ట్రబుల్షూటింగ్ రంగంలో, మొదటి ట్రబుల్షూటింగ్ వ్యాసం ఈ జర్నల్‌లో (ఆ సమయంలో LC జర్నల్) 1983లో (1) కనిపించినప్పటి నుండి కొన్ని అంశాలు ఇప్పటికీ సంబంధితంగా ఉన్నాయి. గత కొన్ని సంవత్సరాలుగా, నేను లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (LC)ని ప్రభావితం చేసే సమకాలీన ధోరణులపై అనేక LC ట్రబుల్షూటింగ్ విభాగాలను కేంద్రీకరించాను (ఉదాహరణకు, నిలుపుదలపై ఒత్తిడి ప్రభావం గురించి మన అవగాహన యొక్క సాపేక్ష పోలిక [2] కొత్త పురోగతులు) LC ఫలితాల యొక్క మా వివరణ మరియు ఆధునిక LC సాధనాలతో ట్రబుల్షూట్ చేయడం ఎలా. ఈ నెల విడతలో, నేను డిసెంబర్ 2021లో ప్రారంభమైన నా సిరీస్ (3)ని కొనసాగిస్తున్నాను, ఇది LC ట్రబుల్షూటింగ్ యొక్క కొన్ని “జీవితం మరియు మరణం” అంశాలపై దృష్టి పెట్టింది — మనం ఉపయోగిస్తున్న వ్యవస్థ వయస్సుతో సంబంధం లేకుండా, ఏదైనా ట్రబుల్షూటర్‌కు గొప్పగా ఉండే అంశాలు అవసరం. దీని యొక్క ప్రధాన అంశం ఈ సిరీస్ అనేక ప్రయోగశాలలలో వేలాడుతున్న LCGC యొక్క ప్రసిద్ధ “LC ట్రబుల్షూటింగ్ గైడ్” వాల్ చార్ట్ (4) కు చాలా సందర్భోచితంగా ఉంటుంది. ఈ సిరీస్ యొక్క మూడవ భాగం కోసం, నేను పీక్ ఆకారం లేదా పీక్ లక్షణాలకు సంబంధించిన సమస్యలపై దృష్టి పెట్టాలని ఎంచుకున్నాను. నమ్మశక్యం కాని విధంగా, వాల్ చార్ట్ పేలవమైన పీక్ ఆకారం యొక్క 44 విభిన్న సంభావ్య కారణాలను జాబితా చేస్తుంది! మేము ఈ సమస్యలన్నింటినీ ఒకే వ్యాసంలో వివరంగా పరిగణించలేము, కాబట్టి ఈ అంశంపై ఈ మొదటి విడతలో, నేను తరచుగా చూసే కొన్నింటిపై దృష్టి పెడతాను. యువకులు మరియు వృద్ధులు LC వినియోగదారులు ఈ ముఖ్యమైన అంశంపై కొన్ని ఉపయోగకరమైన చిట్కాలు మరియు రిమైండర్‌లను కనుగొంటారని నేను ఆశిస్తున్నాను.
"ఏదైనా సాధ్యమే" అనే ట్రబుల్షూటింగ్ ప్రశ్నలకు నేను ఎక్కువగా సమాధానమిస్తున్నాను. అర్థం చేసుకోవడానికి కష్టతరమైన పరిశీలనలను పరిగణనలోకి తీసుకున్నప్పుడు ఈ ప్రతిస్పందన తేలికగా అనిపించవచ్చు, కానీ నేను తరచుగా దీనిని సముచితంగా భావిస్తాను. పేలవమైన శిఖరాగ్ర ఆకృతికి అనేక కారణాలు ఉన్నందున, సమస్య ఏమిటో పరిగణనలోకి తీసుకునేటప్పుడు ఓపెన్ మైండ్ ఉంచుకోవడం ముఖ్యం మరియు మా ట్రబుల్షూటింగ్ ప్రయత్నాలను ప్రారంభించడానికి సంభావ్య కారణాలను ప్రాధాన్యతనివ్వగలగడం, ఆ అత్యంత సాధారణ అవకాశాలపై దృష్టి సారించడం, ఈ అంశం చాలా ముఖ్యమైనది.
ఏదైనా ట్రబుల్షూటింగ్ వ్యాయామంలో కీలకమైన దశ - కానీ నేను తక్కువగా అంచనా వేసినది - పరిష్కరించాల్సిన సమస్య ఉందని గుర్తించడం. సమస్య ఉందని గుర్తించడం అంటే తరచుగా సాధనానికి ఏమి జరుగుతుందో మన అంచనాలకు భిన్నంగా ఉందని గుర్తించడం, ఇవి సిద్ధాంతం, అనుభావిక జ్ఞానం మరియు అనుభవం ద్వారా రూపొందించబడ్డాయి (5). ఇక్కడ సూచించబడిన "పీక్ ఆకారం" వాస్తవానికి శిఖరం యొక్క ఆకారాన్ని (సుష్ట, అసమాన, మృదువైన, మెత్తటి, లీడింగ్ ఎడ్జ్, టైలింగ్, మొదలైనవి) మాత్రమే కాకుండా వెడల్పును కూడా సూచిస్తుంది. వాస్తవ శిఖర ఆకారం కోసం మా అంచనాలు సరళమైనవి. చాలా సందర్భాలలో, క్రోమాటోగ్రాఫిక్ శిఖరాలు సుష్టంగా ఉండాలి మరియు గాస్సియన్ పంపిణీ ఆకారానికి అనుగుణంగా ఉండాలి అనే పాఠ్యపుస్తక అంచనాకు సిద్ధాంతం (6) బాగా మద్దతు ఇస్తుంది, చిత్రం 1aలో చూపిన విధంగా. శిఖర వెడల్పుల నుండి మనం ఆశించేది మరింత సంక్లిష్టమైన సమస్య, మరియు మేము ఈ అంశాన్ని భవిష్యత్ వ్యాసంలో చర్చిస్తాము. చిత్రం 1లోని ఇతర శిఖర ఆకారాలు గమనించగల కొన్ని ఇతర అవకాశాలను చూపుతాయి - మరో మాటలో చెప్పాలంటే, విషయాలు తప్పుగా జరిగే కొన్ని మార్గాలు. ఈ విడతలో మిగిలిన భాగంలో, మేము చర్చించడానికి సమయాన్ని వెచ్చిస్తాము. ఈ ఆకార రకాలకు దారితీసే పరిస్థితుల యొక్క కొన్ని నిర్దిష్ట ఉదాహరణలు.
కొన్నిసార్లు క్రోమాటోగ్రామ్‌లో శిఖరాలు అస్సలు గమనించబడవు, అక్కడ అవి తొలగించబడతాయని భావిస్తున్నారు. పైన పేర్కొన్న గోడ చార్ట్ శిఖరం లేకపోవడం (నమూనా వాస్తవానికి లక్ష్య విశ్లేషణను ఏకాగ్రత వద్ద కలిగి ఉందని ఊహిస్తే, అది డిటెక్టర్ ప్రతిస్పందనను శబ్దం పైన చూడటానికి సరిపోతుంది) సాధారణంగా కొన్ని పరికర సమస్య లేదా తప్పు మొబైల్ దశ పరిస్థితులకు సంబంధించినదని సూచిస్తుంది (అన్నీ గమనించినట్లయితే). శిఖరాలు, సాధారణంగా చాలా "బలహీనమైనవి"). ఈ వర్గంలో సంభావ్య సమస్యలు మరియు పరిష్కారాల యొక్క చిన్న జాబితాను పట్టిక Iలో చూడవచ్చు.
పైన చెప్పినట్లుగా, శ్రద్ధ వహించి దాన్ని పరిష్కరించడానికి ప్రయత్నించే ముందు ఎంత పీక్ బ్రాడనింగ్‌ను తట్టుకోవాలి అనే ప్రశ్న నేను భవిష్యత్ వ్యాసంలో చర్చిస్తాను. నా అనుభవం ఏమిటంటే, ముఖ్యమైన పీక్ బ్రాడనింగ్ తరచుగా పీక్ ఆకారంలో గణనీయమైన మార్పుతో కూడి ఉంటుంది మరియు పీక్ టైలింగ్ ప్రీ-పీక్ లేదా స్ప్లిటింగ్ కంటే సర్వసాధారణం. అయితే, నామమాత్రంగా సుష్ట శిఖరాలు కూడా విస్తరించబడతాయి, ఇది కొన్ని విభిన్న కారణాల వల్ల సంభవించవచ్చు:
ఈ సమస్యలలో ప్రతి ఒక్కటి ట్రబుల్షూటింగ్ LC యొక్క మునుపటి సంచికలలో వివరంగా చర్చించబడింది మరియు ఈ అంశాలపై ఆసక్తి ఉన్న పాఠకులు ఈ సమస్యలకు మూల కారణాలు మరియు సంభావ్య పరిష్కారాల గురించి సమాచారం కోసం ఈ మునుపటి కథనాలను చూడవచ్చు. మరిన్ని వివరాలు.
పీక్ టైలింగ్, పీక్ ఫ్రంటింగ్ మరియు స్ప్లిటింగ్ అన్నీ రసాయన లేదా భౌతిక దృగ్విషయాల వల్ల సంభవించవచ్చు మరియు ఈ సమస్యలకు సంభావ్య పరిష్కారాల జాబితా మనం రసాయన లేదా భౌతిక సమస్యను ఎదుర్కొంటున్నామా లేదా అనే దానిపై ఆధారపడి విస్తృతంగా మారుతుంది. తరచుగా, క్రోమాటోగ్రామ్‌లోని వివిధ శిఖరాలను పోల్చడం ద్వారా, అపరాధి ఎవరో మీరు ముఖ్యమైన ఆధారాలను కనుగొనవచ్చు. క్రోమాటోగ్రామ్‌లోని అన్ని శిఖరాలు ఒకే విధమైన ఆకారాలను ప్రదర్శిస్తే, కారణం భౌతికంగా ఉండకపోవచ్చు. ఒకటి లేదా కొన్ని శిఖరాలు మాత్రమే ప్రభావితమై, మిగిలినవి బాగానే కనిపిస్తే, కారణం ఎక్కువగా రసాయనంగా ఉంటుంది.
పీక్ టైలింగ్ యొక్క రసాయన కారణాలు ఇక్కడ క్లుప్తంగా చర్చించడానికి చాలా క్లిష్టంగా ఉన్నాయి. ఆసక్తిగల పాఠకుడిని మరింత లోతైన చర్చ కోసం "LC ట్రబుల్షూటింగ్" యొక్క ఇటీవలి సంచికను సూచిస్తారు (10). అయితే, ప్రయత్నించడానికి సులభమైన విషయం ఏమిటంటే, ఇంజెక్ట్ చేయబడిన అనలైట్ యొక్క ద్రవ్యరాశిని తగ్గించడం మరియు పీక్ ఆకారం మెరుగుపడుతుందో లేదో చూడటం. అలా అయితే, సమస్య "మాస్ ఓవర్‌లోడ్" అని చెప్పడానికి ఇది మంచి క్లూ. ఈ సందర్భంలో, ఈ పద్ధతిని చిన్న అనలైట్ ద్రవ్యరాశిని ఇంజెక్ట్ చేయడానికి పరిమితం చేయాలి లేదా క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పరిస్థితులను మార్చాలి, తద్వారా పెద్ద ద్రవ్యరాశిని ఇంజెక్ట్ చేసినప్పటికీ మంచి పీక్ ఆకారాలను పొందవచ్చు.
పీక్ టైలింగ్ కు అనేక సంభావ్య భౌతిక కారణాలు కూడా ఉన్నాయి. అవకాశాల యొక్క వివరణాత్మక చర్చలో ఆసక్తి ఉన్న పాఠకులు "LC ట్రబుల్షూటింగ్" (11) యొక్క మరొక ఇటీవలి సంచికను సూచిస్తారు. పీక్ టైలింగ్ యొక్క అత్యంత సాధారణ భౌతిక కారణాలలో ఒకటి ఇంజెక్టర్ మరియు డిటెక్టర్ (12) మధ్య ఒక పాయింట్ వద్ద పేలవమైన కనెక్షన్. కొన్ని వారాల క్రితం నా ల్యాబ్‌లో పొందిన ఒక తీవ్రమైన ఉదాహరణ Figure 1dలో చూపబడింది. ఈ సందర్భంలో, మేము ఇంతకు ముందు ఉపయోగించని కొత్త ఇంజెక్షన్ వాల్వ్‌తో ఒక వ్యవస్థను నిర్మించాము మరియు స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ క్యాపిల్లరీపై అచ్చు వేయబడిన ఫెర్రూల్‌తో ఒక చిన్న వాల్యూమ్ ఇంజెక్షన్ లూప్‌ను ఇన్‌స్టాల్ చేసాము. కొన్ని ప్రారంభ ట్రబుల్షూటింగ్ ప్రయోగాల తర్వాత, ఇంజెక్షన్ వాల్వ్ స్టేటర్‌లోని పోర్ట్ లోతు మనం ఉపయోగించిన దానికంటే చాలా లోతుగా ఉందని, ఫలితంగా పోర్ట్ దిగువన పెద్ద డెడ్ వాల్యూమ్ ఏర్పడిందని మేము గ్రహించాము. ఇంజెక్షన్ లూప్‌ను మరొక ట్యూబ్‌తో భర్తీ చేయడం ద్వారా ఈ సమస్య సులభంగా పరిష్కరించబడుతుంది, పోర్ట్ దిగువన ఉన్న డెడ్ వాల్యూమ్‌ను తొలగించడానికి మేము ఫెర్రూల్‌ను సరైన స్థానానికి సర్దుబాటు చేయవచ్చు.
Figure 1e లో చూపిన విధంగా పీక్ ఫ్రంట్‌లు భౌతిక లేదా రసాయన సమస్యల వల్ల కూడా సంభవించవచ్చు. లీడింగ్ ఎడ్జ్‌కి ఒక సాధారణ భౌతిక కారణం ఏమిటంటే, కాలమ్ యొక్క పార్టికల్ బెడ్ బాగా ప్యాక్ చేయబడకపోవడం లేదా కణాలు కాలక్రమేణా పునర్వ్యవస్థీకరించబడటం. ఈ భౌతిక దృగ్విషయం వల్ల కలిగే పీక్ టైలింగ్ లాగా, దీన్ని పరిష్కరించడానికి ఉత్తమ మార్గం కాలమ్‌ను భర్తీ చేయడం మరియు కొనసాగించడం. ప్రాథమికంగా, రసాయన మూలంతో లీడింగ్ ఎడ్జ్ పీక్ ఆకారాలు తరచుగా మనం "నాన్-లీనియర్" రిటెన్షన్ పరిస్థితులను పిలిచే వాటి నుండి ఉత్పన్నమవుతాయి. ఆదర్శ (లీనియర్) పరిస్థితులలో, స్థిర దశ (అందుకే, రిటెన్షన్ ఫ్యాక్టర్) ద్వారా నిలుపుకున్న విశ్లేషణ మొత్తం కాలమ్‌లోని విశ్లేషణ యొక్క ఏకాగ్రతకు సరళంగా సంబంధం కలిగి ఉంటుంది. క్రోమాటోగ్రాఫికల్‌గా, దీని అర్థం కాలమ్‌లోకి ఇంజెక్ట్ చేయబడిన విశ్లేషణ ద్రవ్యరాశి పెరిగేకొద్దీ, శిఖరం పొడవుగా మారుతుంది, కానీ వెడల్పుగా ఉండదు. నిలుపుదల ప్రవర్తన నాన్-లీనియర్ అయినప్పుడు ఈ సంబంధం విచ్ఛిన్నమవుతుంది మరియు ఎక్కువ ద్రవ్యరాశి ఇంజెక్ట్ చేయబడినందున శిఖరాలు పొడవుగా ఉండటమే కాకుండా వెడల్పుగా మారుతాయి. అదనంగా, నాన్ లీనియర్ ఆకారాలు క్రోమాటోగ్రాఫిక్ శిఖరాల ఆకారాన్ని నిర్ణయిస్తాయి, ఫలితంగా లీడింగ్ లేదా ట్రెయిలింగ్ అంచులు ఏర్పడతాయి. మాస్ ఓవర్‌లోడ్ లాగా పీక్ టైలింగ్‌కు కారణమయ్యేది (10), నాన్‌లీనియర్ రిటెన్షన్ వల్ల కలిగే పీక్ లీడింగ్‌ను ఇంజెక్ట్ చేయబడిన అనలైట్ ద్రవ్యరాశిని తగ్గించడం ద్వారా కూడా నిర్ధారణ చేయవచ్చు. పీక్ ఆకారం మెరుగుపడితే, లీడింగ్ ఎడ్జ్‌కు కారణమయ్యే ఇంజెక్షన్ నాణ్యతను మించకుండా పద్ధతిని సవరించాలి లేదా ఈ ప్రవర్తనను తగ్గించడానికి క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పరిస్థితులను మార్చాలి.
కొన్నిసార్లు మనం "స్ప్లిట్" శిఖరంలా కనిపించే దానిని గమనిస్తాము, ఇది Figure 1fలో చూపబడింది. ఈ సమస్యను పరిష్కరించడంలో మొదటి దశ శిఖర ఆకారం పాక్షిక సహ-ఎల్యూషన్ (అంటే, రెండు విభిన్నమైన కానీ దగ్గరగా ఎల్యూటింగ్ సమ్మేళనాల ఉనికి) వల్ల జరిగిందో లేదో నిర్ణయించడం. వాస్తవానికి రెండు వేర్వేరు విశ్లేషణలు దగ్గరగా ఎల్యూట్ అవుతుంటే, వాటి రిజల్యూషన్‌ను మెరుగుపరచడం (ఉదాహరణకు, సెలెక్టివిటీ, నిలుపుదల లేదా ప్లేట్ కౌంట్‌ను పెంచడం ద్వారా), మరియు స్పష్టమైన "స్ప్లిట్" శిఖరాలు భౌతికానికి సంబంధించినవి. పనితీరుకు కాలమ్‌తో ఎటువంటి సంబంధం లేదు. తరచుగా, ఈ నిర్ణయానికి అతి ముఖ్యమైన క్లూ ఏమిటంటే, క్రోమాటోగ్రామ్‌లోని అన్ని శిఖరాలు స్ప్లిట్ ఆకారాలను ప్రదర్శిస్తాయా లేదా ఒకటి లేదా రెండు మాత్రమే. ఇది కేవలం ఒకటి లేదా రెండు అయితే, ఇది బహుశా సహ-ఎల్యూషన్ సమస్య కావచ్చు; అన్ని శిఖరాలు విభజించబడితే, ఇది బహుశా భౌతిక సమస్య కావచ్చు, చాలావరకు కాలమ్‌కే సంబంధించినది.
కాలమ్ యొక్క భౌతిక లక్షణాలకు సంబంధించిన స్ప్లిట్ శిఖరాలు సాధారణంగా పాక్షికంగా నిరోధించబడిన ఇన్లెట్ లేదా అవుట్‌లెట్ ఫ్రిట్‌లు లేదా కాలమ్‌లోని కణాల పునర్వ్యవస్థీకరణ కారణంగా ఉంటాయి, ఇది కాలమ్ ఛానల్ నిర్మాణంలోని కొన్ని ప్రాంతాలలో మొబైల్ దశ కంటే మొబైల్ దశ వేగంగా ప్రవహించడానికి వీలు కల్పిస్తుంది. ఇతర ప్రాంతాలలో (11). పాక్షికంగా అడ్డుపడే ఫ్రిట్‌ను కొన్నిసార్లు కాలమ్ ద్వారా ప్రవాహాన్ని తిప్పికొట్టడం ద్వారా క్లియర్ చేయవచ్చు; అయితే, నా అనుభవంలో, ఇది సాధారణంగా దీర్ఘకాలిక పరిష్కారం కంటే స్వల్పకాలికం. కణాలు కాలమ్ లోపల తిరిగి కలిసితే ఇది తరచుగా ఆధునిక నిలువు వరుసలతో ప్రాణాంతకం. ఈ సమయంలో, కాలమ్‌ను భర్తీ చేసి కొనసాగించడం ఉత్తమం.
Figure 1g లోని శిఖరం, నా స్వంత ప్రయోగశాలలో ఇటీవలి ఉదాహరణ నుండి కూడా, సాధారణంగా సిగ్నల్ చాలా ఎక్కువగా ఉందని సూచిస్తుంది, అది ప్రతిస్పందన పరిధి యొక్క అధిక ముగింపుకు చేరుకుంది. ఆప్టికల్ శోషణ డిటెక్టర్ల కోసం (ఈ సందర్భంలో UV-vis), విశ్లేషణాత్మక సాంద్రత చాలా ఎక్కువగా ఉన్నప్పుడు, విశ్లేషణాత్మక డిటెక్టర్ ప్రవాహ కణం గుండా వెళుతున్న కాంతిలో ఎక్కువ భాగాన్ని గ్రహిస్తుంది, చాలా తక్కువ కాంతిని గుర్తించకుండా వదిలివేస్తుంది. ఈ పరిస్థితులలో, ఫోటోడెటెక్టర్ నుండి వచ్చే విద్యుత్ సిగ్నల్ విచ్చలవిడి కాంతి మరియు "డార్క్ కరెంట్" వంటి వివిధ శబ్ద వనరులచే ఎక్కువగా ప్రభావితమవుతుంది, ఇది సిగ్నల్‌ను చాలా "మసకగా" కనిపించేలా చేస్తుంది మరియు విశ్లేషణాత్మక సాంద్రత నుండి స్వతంత్రంగా చేస్తుంది. ఇది జరిగినప్పుడు, విశ్లేషణ యొక్క ఇంజెక్షన్ వాల్యూమ్‌ను తగ్గించడం ద్వారా సమస్యను తరచుగా సులభంగా పరిష్కరించవచ్చు - ఇంజెక్షన్ వాల్యూమ్‌ను తగ్గించడం, నమూనాను పలుచన చేయడం లేదా రెండూ.
క్రోమాటోగ్రఫీ పాఠశాలలో, మేము నమూనాలోని విశ్లేషణాత్మక గాఢతకు సూచికగా డిటెక్టర్ సిగ్నల్ (అంటే, క్రోమాటోగ్రామ్‌లోని y-అక్షం) ను ఉపయోగిస్తాము. కాబట్టి సున్నా కంటే తక్కువ సిగ్నల్ ఉన్న క్రోమాటోగ్రామ్‌ను చూడటం వింతగా అనిపిస్తుంది, ఎందుకంటే ఇది ప్రతికూల విశ్లేషణాత్మక గాఢతను సూచిస్తుంది - ఇది భౌతికంగా సాధ్యం కాదు. నా అనుభవంలో, ఆప్టికల్ శోషణ డిటెక్టర్లను (ఉదాహరణకు, UV-vis) ఉపయోగిస్తున్నప్పుడు ప్రతికూల శిఖరాలు చాలా తరచుగా గమనించబడతాయి.
ఈ సందర్భంలో, ప్రతికూల శిఖరం అంటే కాలమ్ నుండి బయటకు వచ్చే అణువులు శిఖరానికి ముందు మరియు తరువాత వెంటనే మొబైల్ దశ కంటే తక్కువ కాంతిని గ్రహిస్తాయి. ఉదాహరణకు, సాపేక్షంగా తక్కువ గుర్తింపు తరంగదైర్ఘ్యాలు (<230 nm) మరియు ఈ తరంగదైర్ఘ్యాల వద్ద ఎక్కువ కాంతిని గ్రహించే మొబైల్ దశ సంకలనాలను ఉపయోగిస్తున్నప్పుడు ఇది సంభవించవచ్చు. ఇటువంటి సంకలనాలు మిథనాల్ వంటి మొబైల్ దశ ద్రావణి భాగాలు లేదా అసిటేట్ లేదా ఫార్మేట్ వంటి బఫర్ భాగాలు కావచ్చు. క్రమాంకనం వక్రతను సిద్ధం చేయడానికి మరియు ఖచ్చితమైన పరిమాణాత్మక సమాచారాన్ని పొందడానికి ప్రతికూల శిఖరాలను ఉపయోగించవచ్చు, కాబట్టి వాటిని స్వయంగా నివారించడానికి ఎటువంటి ప్రాథమిక కారణం లేదు (ఈ పద్ధతిని కొన్నిసార్లు "పరోక్ష UV గుర్తింపు" అని పిలుస్తారు) (13). అయితే, శోషణ గుర్తింపు విషయంలో మనం నిజంగా ప్రతికూల శిఖరాలను పూర్తిగా నివారించాలనుకుంటే, విశ్లేషణ మొబైల్ దశ కంటే ఎక్కువగా గ్రహిస్తుంది, లేదా మొబైల్ దశ యొక్క కూర్పును మార్చడం ఉత్తమ పరిష్కారం, తద్వారా అవి విశ్లేషణల కంటే తక్కువ కాంతిని గ్రహిస్తాయి.
నమూనాలోని విశ్లేషణ కాకుండా ఇతర భాగాల వక్రీభవన సూచిక, ద్రావణి మాతృక వంటిది, మొబైల్ దశ యొక్క వక్రీభవన సూచిక నుండి భిన్నంగా ఉన్నప్పుడు వక్రీభవన సూచిక (RI) గుర్తింపును ఉపయోగిస్తున్నప్పుడు కూడా ప్రతికూల శిఖరాలు కనిపించవచ్చు. ఇది UV-vis గుర్తింపుతో కూడా జరుగుతుంది, కానీ ఈ ప్రభావం RI గుర్తింపుకు సంబంధించి అటెన్యూయేటెడ్‌గా ఉంటుంది. రెండు సందర్భాల్లోనూ, నమూనా మాతృక యొక్క కూర్పును మొబైల్ దశకు మరింత దగ్గరగా సరిపోల్చడం ద్వారా ప్రతికూల శిఖరాలను తగ్గించవచ్చు.
LC ట్రబుల్షూటింగ్ యొక్క ప్రాథమిక అంశంపై మూడవ భాగంలో, గమనించిన పీక్ ఆకారం ఆశించిన లేదా సాధారణ పీక్ ఆకారం నుండి భిన్నంగా ఉండే పరిస్థితులను నేను చర్చించాను. అటువంటి సమస్యల యొక్క ప్రభావవంతమైన ట్రబుల్షూటింగ్ ఆశించిన పీక్ ఆకారాల జ్ఞానంతో ప్రారంభమవుతుంది (సిద్ధాంతం లేదా ఇప్పటికే ఉన్న పద్ధతులతో ముందస్తు అనుభవం ఆధారంగా), కాబట్టి ఈ అంచనాల నుండి విచలనాలు స్పష్టంగా ఉన్నాయి. పీక్ ఆకార సమస్యలకు అనేక విభిన్న సంభావ్య కారణాలు ఉన్నాయి (చాలా వెడల్పు, టైలింగ్, లీడింగ్ ఎడ్జ్, మొదలైనవి). ఈ విడతలో, నేను తరచుగా చూసే కొన్ని కారణాలను వివరంగా చర్చిస్తాను. ఈ వివరాలను తెలుసుకోవడం ట్రబుల్షూటింగ్ ప్రారంభించడానికి మంచి స్థలాన్ని అందిస్తుంది, కానీ అన్ని అవకాశాలను సంగ్రహించదు. కారణాలు మరియు పరిష్కారాల యొక్క మరింత లోతైన జాబితాలో ఆసక్తి ఉన్న పాఠకులు LCGC “LC ట్రబుల్షూటింగ్ గైడ్” వాల్ చార్ట్‌ను చూడవచ్చు.
(4) LCGC “LC ట్రబుల్షూటింగ్ గైడ్” వాల్ చార్ట్. https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) ఎ. ఫెలింజర్, డేటా అనాలిసిస్ అండ్ సిగ్నల్ ప్రాసెసింగ్ ఇన్ క్రోమాటోగ్రఫీ (ఎల్సెవియర్, న్యూయార్క్, NY, 1998), పేజీలు 43-96.
(8) వహాబ్ MF, దాస్‌గుప్తా PK, కడ్జో AF మరియు ఆర్మ్‌స్ట్రాంగ్ DW, అనల్.చిమ్.జర్నల్.రెవ్. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.