Nature.com ని సందర్శించినందుకు ధన్యవాదాలు. మీరు ఉపయోగిస్తున్న బ్రౌజర్ వెర్షన్ CSS కి పరిమిత మద్దతును కలిగి ఉంది. ఉత్తమ అనుభవం కోసం, మీరు నవీకరించబడిన బ్రౌజర్‌ను ఉపయోగించాలని మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము (లేదా ఇంటర్నెట్ ఎక్స్‌ప్లోరర్‌లో అనుకూలత మోడ్‌ను ఆఫ్ చేయండి). ఈలోగా, నిరంతర మద్దతును నిర్ధారించడానికి, మేము శైలులు మరియు జావాస్క్రిప్ట్ లేకుండా సైట్‌ను ప్రదర్శిస్తాము.
మాక్రోపోరస్ కణాలను పొందడానికి కొన్ని మార్పులతో సోల్-జెల్ పద్ధతి ద్వారా పోరస్ సిలికా కణాలను తయారు చేశారు. ఈ కణాలను N-ఫినైల్మలైమైడ్-మిథైల్వినైలిసోసైనేట్ (PMI) మరియు స్టైరీన్‌తో రివర్సిబుల్ అడిషన్ ఫ్రాగ్మెంటేషన్ చైన్ ట్రాన్స్‌ఫర్ (RAFT) పాలిమరైజేషన్ ద్వారా ఉత్పన్నం చేసి, పాలీస్టైరిన్ (PMP) స్థిర దశ యొక్క N-ఫినైల్మలైమైడ్ ఇంటర్‌కలేషన్‌ను తయారు చేశారు. ఇరుకైన-బోర్ స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ స్తంభాలను (100 × 1.8 mm id) స్లర్రీ ప్యాకింగ్ ద్వారా ప్యాక్ చేశారు. ఐదు పెప్టైడ్‌లు (గ్లై-టైర్, గ్లై-ల్యూ-టైర్, గ్లై-గ్లై-టైర్-ఆర్గ్, టైర్-ఇల్-గ్లై-సెర్-ఆర్గ్, ల్యూసిన్ ఎన్‌కెఫాలిన్) క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పనితీరు) మరియు మానవ సీరం అల్బుమిన్ (HAS) యొక్క ట్రిప్సిన్ జీర్ణక్రియతో కూడిన పెప్టైడ్ మిశ్రమం యొక్క PMP కాలమ్ విభజనను అంచనా వేశారు. సరైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితులలో, పెప్టైడ్ మిశ్రమం యొక్క సైద్ధాంతిక ప్లేట్ కౌంట్ 280,000 ప్లేట్లు/m² వరకు ఉంటుంది. విభజన పనితీరును పోల్చడం వాణిజ్య అసెన్టిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్‌తో అభివృద్ధి చేయబడిన కాలమ్‌లో, PMP కాలమ్ యొక్క విభజన పనితీరు విభజన సామర్థ్యం మరియు రిజల్యూషన్ పరంగా వాణిజ్య కాలమ్ కంటే మెరుగ్గా ఉందని గమనించబడింది.
ఇటీవలి సంవత్సరాలలో, బయోఫార్మాస్యూటికల్ పరిశ్రమ మార్కెట్ వాటాలో గణనీయమైన పెరుగుదలతో విస్తరిస్తున్న ప్రపంచ మార్కెట్‌గా మారింది. బయోఫార్మాస్యూటికల్ పరిశ్రమ యొక్క పేలుడు పెరుగుదలతో1,2,3, పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల విశ్లేషణ చాలా అవసరం. లక్ష్య పెప్టైడ్‌తో పాటు, పెప్టైడ్ సంశ్లేషణ సమయంలో అనేక మలినాలు ఉత్పత్తి అవుతాయి, అందువల్ల కావలసిన స్వచ్ఛత యొక్క పెప్టైడ్‌లను పొందటానికి క్రోమాటోగ్రాఫిక్ శుద్దీకరణ అవసరం. ఒకే నమూనాలో పెద్ద సంఖ్యలో సంభావ్యంగా గుర్తించదగిన జాతులు ఉండటం వల్ల శరీర ద్రవాలు, కణజాలాలు మరియు కణాలలో ప్రోటీన్‌ల విశ్లేషణ మరియు లక్షణం చాలా సవాలుతో కూడుకున్న పని. పెప్టైడ్ మరియు ప్రోటీన్ సీక్వెన్సింగ్‌కు మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ ప్రభావవంతమైన సాధనం అయినప్పటికీ, అటువంటి నమూనాలను ఒకే పాస్‌లో మాస్ స్పెక్ట్రోమీటర్‌లోకి ఇంజెక్ట్ చేస్తే, విభజన అనువైనది కాదు. MS విశ్లేషణకు ముందు లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (LC) విభజనలను అమలు చేయడం ద్వారా ఈ సమస్యను తగ్గించవచ్చు, ఇది ఇచ్చిన సమయంలో మాస్ స్పెక్ట్రోమీటర్‌లోకి ప్రవేశించే విశ్లేషణల సంఖ్యను తగ్గిస్తుంది4,5,6. అదనంగా, ద్రవ దశ విభజన సమయంలో, విశ్లేషణలను ఇరుకైన ప్రాంతాలలో కేంద్రీకరించవచ్చు, తద్వారా ఈ విశ్లేషణలను కేంద్రీకరించవచ్చు మరియు MS గుర్తింపు సున్నితత్వాన్ని మెరుగుపరుస్తుంది. గత దశాబ్దంలో లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (LC) గణనీయంగా అభివృద్ధి చెందింది మరియు ప్రోటీమిక్ విశ్లేషణలో ఒక ప్రసిద్ధ సాంకేతికతగా మారింది7,8,9,10.
ఆక్టాడెసిల్-మోడిఫైడ్ సిలికా (ODS) ను స్టేషనరీ దశగా ఉపయోగించి పెప్టైడ్ మిశ్రమాలను శుద్ధి చేయడానికి మరియు వేరు చేయడానికి రివర్స్డ్-ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (RP-LC) విస్తృతంగా ఉపయోగించబడుతుంది. అయితే, RP స్టేషనరీ దశలు వాటి సంక్లిష్ట నిర్మాణం మరియు యాంఫిఫిలిక్ స్వభావం కారణంగా పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల సంతృప్తికరమైన విభజనను అందించవు. 14,15 . అందువల్ల, ఈ విశ్లేషణలతో సంకర్షణ చెందడానికి మరియు నిలుపుకోవడానికి ధ్రువ మరియు ధ్రువేతర భాగాలతో పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌లను విశ్లేషించడానికి ప్రత్యేకంగా రూపొందించిన స్టేషనరీ దశలు అవసరం. మల్టీమోడల్ పరస్పర చర్యలను అందించే మిశ్రమ-మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ, పెప్టైడ్‌లు, ప్రోటీన్లు మరియు ఇతర సంక్లిష్ట మిశ్రమాలను వేరు చేయడానికి RP-LC కి ప్రత్యామ్నాయంగా ఉంటుంది. అనేక మిశ్రమ-మోడ్ స్టేషనరీ దశలు తయారు చేయబడ్డాయి మరియు ఈ దశలతో ప్యాక్ చేయబడిన నిలువు వరుసలు పెప్టైడ్ మరియు ప్రోటీన్ విభజనల కోసం ఉపయోగించబడ్డాయి17,18,19,20,21. మిశ్రమ-మోడ్ స్టేషనరీ దశలు (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ధ్రువ ఇంటర్‌కలేషన్/RPLC) ధ్రువ మరియు ధ్రువేతర సమూహాల ఉనికి కారణంగా పెప్టైడ్ మరియు ప్రోటీన్ విభజనలకు అనుకూలం22,23,24,25,26,27,28 .అదేవిధంగా, సమయోజనీయ బంధం కలిగిన ధ్రువ సమూహాలతో ధ్రువ ఇంటర్‌కలేటింగ్ స్థిర దశలు ధ్రువ మరియు ధ్రువేతర విశ్లేషణలకు మంచి విభజన శక్తిని మరియు ప్రత్యేకమైన ఎంపికను చూపుతాయి, ఎందుకంటే విభజన విశ్లేషణాత్మక మరియు స్థిర దశల మధ్య పరస్పర చర్యపై ఆధారపడి ఉంటుంది. మల్టీమోడల్ పరస్పర చర్యలు 29, 30, 31, 32. ఇటీవల, జాంగ్ మరియు ఇతరులు. 30 డోడెసిల్-టెర్మినేటెడ్ పాలిమైన్ స్టేషనరీ దశను తయారు చేసి, హైడ్రోకార్బన్లు, యాంటిడిప్రెసెంట్స్, ఫ్లేవనాయిడ్లు, న్యూక్లియోసైడ్లు, ఈస్ట్రోజెన్లు మరియు అనేక ఇతర విశ్లేషణలను విజయవంతంగా వేరు చేసింది. ధ్రువ ఇంటర్కలేటర్ ధ్రువ మరియు ధ్రువేతర సమూహాలను కలిగి ఉంటుంది, కాబట్టి దీనిని హైడ్రోఫోబిక్ మరియు హైడ్రోఫిలిక్ భాగాలను కలిగి ఉన్న పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌లను వేరు చేయడానికి ఉపయోగించవచ్చు. ధ్రువ-ఎంబెడెడ్ స్తంభాలు (ఉదా., అమైడ్-ఎంబెడెడ్ C18 స్తంభాలు) వాణిజ్యపరంగా అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ స్తంభాలు అనే వాణిజ్య పేరుతో అందుబాటులో ఉన్నాయి, కానీ ఈ నిలువు వరుసలు అమైన్ 33 యొక్క విశ్లేషణకు మాత్రమే ఉపయోగించబడతాయి.
ప్రస్తుత అధ్యయనంలో, HSA యొక్క పెప్టైడ్‌లు మరియు ట్రిప్సిన్ డైజెస్ట్‌లను వేరు చేయడానికి ఒక పోలార్-ఎంబెడెడ్ స్టేషనరీ ఫేజ్ (N-ఫినైల్‌మలైమైడ్-ఎంబెడెడ్ పాలీస్టైరిన్) తయారు చేయబడింది మరియు మూల్యాంకనం చేయబడింది. స్థిర దశను క్రింది వ్యూహాన్ని ఉపయోగించి తయారు చేయబడింది. తయారీ ప్రోటోకాల్‌కు కొన్ని మార్పులతో మా మునుపటి ప్రచురణలో ఇవ్వబడిన విధానం ప్రకారం పోరస్ సిలికా కణాలు తయారు చేయబడ్డాయి. యూరియా, పాలిథిలిన్ గ్లైకాల్ (PEG), TMOS, వాటర్ ఎసిటిక్ యాసిడ్ నిష్పత్తిని పెద్ద రంధ్ర పరిమాణంతో సిలికా కణాలను తయారు చేయడానికి సర్దుబాటు చేశారు. రెండవది, ఒక కొత్త లిగాండ్, ఫినైల్‌మలైమైడ్-మిథైల్ వినైల్ ఐసోసైనేట్‌ను సంశ్లేషణ చేసి, ధ్రువ ఎంబెడెడ్ స్టేషనరీ ఫేజ్‌ను సిద్ధం చేయడానికి సిలికా కణాలను ఉత్పన్నం చేయడానికి ఉపయోగించారు. ఫలితంగా వచ్చిన స్టేషనరీ ఫేజ్‌ను ఆప్టిమైజ్ చేసిన ప్యాకింగ్ స్కీమ్‌ను ఉపయోగించి స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ కాలమ్ (100 × 1.8 mm id)లో ప్యాక్ చేశారు. కాలమ్ లోపల ఒక సజాతీయ బెడ్ ఏర్పడిందని నిర్ధారించుకోవడానికి కాలమ్ ప్యాకింగ్ యాంత్రిక వైబ్రేషన్‌తో సహాయపడుతుంది. ఐదు పెప్టైడ్‌లతో కూడిన పెప్టైడ్ మిశ్రమాల ప్యాక్డ్ కాలమ్ విభజనను అంచనా వేయండి; (గ్లై-టైర్, గ్లై-ల్యూ-టైర్, గ్లై-గ్లై-టైర్-ఆర్గ్, టైర్-ఇల్-గ్లై-సెర్-ఆర్గ్, ల్యూసిన్ ఎన్‌కెఫాలిన్) మరియు ట్రిప్సిన్ డైజెస్ట్ ఆఫ్ హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ (HAS) గమనించబడ్డాయి. HSA యొక్క పెప్టైడ్ మిశ్రమం మరియు ట్రిప్సిన్ డైజెస్ట్ మంచి రిజల్యూషన్ మరియు సామర్థ్యంతో వేరు చేయబడటం గమనించబడింది. PMP కాలమ్ యొక్క విభజన పనితీరును అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్‌తో పోల్చారు. పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్లు రెండూ PMP కాలమ్‌లో బాగా పరిష్కరించబడినవి మరియు సమర్థవంతంగా ఉన్నట్లు గమనించబడ్డాయి, ఇది అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్ కంటే మరింత సమర్థవంతంగా ఉంది.
PEG (పాలిథిలిన్ గ్లైకాల్), యూరియా, ఎసిటిక్ యాసిడ్, ట్రైమెథాక్సీ ఆర్థోసిలికేట్ (TMOS), ట్రైమిథైల్ క్లోరోసిలేన్ (TMCS), ట్రిప్సిన్, హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ (HSA), అమ్మోనియం క్లోరైడ్, యూరియా, హెక్సేన్ మిథైల్డిసిలాజేన్ (HMDS), మెథాక్రిలోయిల్ క్లోరైడ్ (MC), స్టైరీన్, 4-హైడ్రాక్సీ-టెంపో, బెంజాయిల్ పెరాక్సైడ్ (BPO), HPLC గ్రేడ్ అసిటోనిట్రైల్ (ACN), మిథనాల్, 2-ప్రొపనాల్ మరియు అసిటోన్‌లను సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్ (సెయింట్ లూయిస్, MO, USA) నుండి కొనుగోలు చేశారు.
యూరియా (8 గ్రా), పాలిథిలిన్ గ్లైకాల్ (8 గ్రా), మరియు 8 మి.లీ. 0.01 N ఎసిటిక్ యాసిడ్ మిశ్రమాన్ని 10 నిమిషాలు కదిలించి, ఆపై 24 మి.లీ. TMOS ను మంచు-చల్లని పరిస్థితులలో జోడించారు. ప్రతిచర్య మిశ్రమాన్ని 40°C వద్ద 6 గంటలు మరియు తరువాత 120°C వద్ద 8 గంటలు స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ ఆటోక్లేవ్‌లో వేడి చేశారు. నీటిని పోసి, అవశేష పదార్థాన్ని 70°C వద్ద 12 గంటలు ఎండబెట్టారు. ఎండిన మృదువైన ద్రవ్యరాశిని ఓవెన్‌లో నునుపుగా రుబ్బి, 550°C వద్ద 12 గంటలు కాల్చారు. కణ పరిమాణం, రంధ్రాల పరిమాణం మరియు ఉపరితల వైశాల్యంలో పునరుత్పత్తి సామర్థ్యాన్ని పరిశీలించడానికి మూడు బ్యాచ్‌లను తయారు చేసి వర్గీకరించారు.
ప్రీ-సింథసైజ్డ్ లిగాండ్ ఫినైల్మలైమైడ్-మిథైల్వినైలిసోసైనేట్ (PCMP) తో సిలికా కణాల ఉపరితల మార్పు ద్వారా, తరువాత స్టైరీన్‌తో రేడియల్ పాలిమరైజేషన్ ద్వారా, ఒక ధ్రువ సమూహ-కలిగిన సమ్మేళనం తయారు చేయబడింది. అగ్రిగేట్‌లు మరియు పాలీస్టైరిన్ గొలుసులకు స్థిర దశ. తయారీ ప్రక్రియ క్రింద వివరించబడింది.
N-ఫినైల్మలైమైడ్ (200 mg) మరియు మిథైల్ వినైల్ ఐసోసైనేట్ (100 mg) లను పొడి టోలుయెన్‌లో కరిగించి, 0.1 mL 2,2′-అజోయిసోబ్యూటిరోనిట్రైల్ (AIBN) ను రియాక్షన్ ఫ్లాస్క్‌కు జోడించి ఫినైల్మలైమైడ్-మిథైల్ వినైల్ ఐసోసైనేట్ కోపాలిమర్ (PMCP) ను తయారు చేశారు. ఈ మిశ్రమాన్ని 60°C వద్ద 3 గంటలు వేడి చేసి, ఫిల్టర్ చేసి 40°C వద్ద ఓవెన్‌లో 3 గంటలు ఆరబెట్టారు.
ఎండిన సిలికా కణాలను (2 గ్రా) పొడి టోలుయెన్ (100 మి.లీ) లో చెదరగొట్టి, 500 మి.లీ రౌండ్ బాటమ్ ఫ్లాస్క్‌లో 10 నిమిషాలు కదిలించి సోనికేట్ చేశారు. పిఎంసిపి (10 మి.గ్రా) ను టోలుయెన్‌లో కరిగించి, డ్రాపింగ్ ఫన్నెల్ ద్వారా రియాక్షన్ ఫ్లాస్క్‌కు డ్రాప్‌వైస్‌గా జోడించారు. మిశ్రమాన్ని 100°C వద్ద 8 గంటలు రిఫ్లక్స్ చేసి, ఫిల్టర్ చేసి అసిటోన్‌తో కడిగి, 60°C వద్ద 3 గంటలు ఎండబెట్టారు. తరువాత, పిఎంసిపి-బంధిత సిలికా కణాలను (100 గ్రా) టోలుయెన్ (200 మి.లీ) లో కరిగించి, 100 µL డైబ్యూటిల్టిన్ డైలారేట్ సమక్షంలో 4-హైడ్రాక్సీ-టెంపో (2 మి.లీ) ను ఉత్ప్రేరకంగా జోడించారు. మిశ్రమాన్ని 50°C వద్ద 8 గంటలు కదిలించి, ఫిల్టర్ చేసి 50°C వద్ద 3 గంటలు ఎండబెట్టారు.
స్టైరీన్ (1 mL), బెంజాయిల్ పెరాక్సైడ్ BPO (0.5 mL), మరియు TEMPO-PMCP-అటాచ్డ్ సిలికా కణాలు (1.5 గ్రా) టోలుయిన్‌లో చెదరగొట్టబడి నైట్రోజన్‌తో శుద్ధి చేయబడ్డాయి. స్టైరీన్ యొక్క పాలిమరైజేషన్ 100°C వద్ద 12 గంటలు నిర్వహించబడింది. ఫలితంగా వచ్చిన ఉత్పత్తిని మిథనాల్‌తో కడిగి రాత్రిపూట 60°C వద్ద ఎండబెట్టారు. మొత్తం ప్రతిచర్య పథకం చిత్రం 1లో చూపబడింది.
10-3 టోర్ కంటే తక్కువ అవశేష పీడనాన్ని పొందడానికి నమూనాలను 1 గంట పాటు 393 K వద్ద డీగ్యాస్ చేశారు. P/P0 = 0.99 సాపేక్ష పీడనం వద్ద శోషించబడిన N2 మొత్తాన్ని మొత్తం పోర్ వాల్యూమ్‌ను నిర్ణయించడానికి ఉపయోగించారు. బేర్ మరియు లిగాండ్-బాండెడ్ సిలికా కణాల స్వరూపాన్ని స్కానింగ్ ఎలక్ట్రాన్ మైక్రోస్కోపీ (హిటాచి హై టెక్నాలజీస్, టోక్యో, జపాన్)తో పరిశీలించారు. ఎండిన నమూనాలను (బేర్ సిలికా మరియు లిగాండ్-బాండెడ్ సిలికా కణాలు) అంటుకునే కార్బన్ టేప్ ఉపయోగించి అల్యూమినియం స్తంభంపై ఉంచారు. Q150T స్పుటర్ కోటర్ ఉపయోగించి నమూనాలపై బంగారాన్ని పూత పూశారు మరియు నమూనాలపై 5 nm Au పొరను జమ చేశారు. ఇది తక్కువ వోల్టేజ్‌లను ఉపయోగించి ప్రక్రియ సామర్థ్యాన్ని మెరుగుపరుస్తుంది మరియు చక్కటి గ్రెయిన్, కోల్డ్ స్పట్టరింగ్‌ను అందిస్తుంది. థర్మో ఎలక్ట్రాన్ (వాల్తామ్, MA, USA) ఫ్లాష్ EA1112 ఎలిమెంటల్ ఎనలైజర్‌ను ఎలిమెంటల్ విశ్లేషణ కోసం ఉపయోగించారు. మాల్వెర్న్ (వోర్సెస్టర్‌షైర్, UK) మాస్టర్‌సైజర్ 2000 పార్టికల్ సైజు ఎనలైజర్‌ను కణ పరిమాణ పంపిణీని పొందడానికి ఉపయోగించారు. నేకెడ్ సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బంధిత సిలికా కణాలు (ఒక్కొక్కటి 5 mg) 5 mL ఐసోప్రొపనాల్‌లో చెదరగొట్టబడ్డాయి, 10 నిమిషాలు సోనికేట్ చేయబడ్డాయి, 5 నిమిషాలు వోర్టెక్స్ చేయబడ్డాయి మరియు మాస్టర్‌సైజర్ యొక్క ఆప్టికల్ బెంచ్‌పై ఉంచబడ్డాయి. థర్మోగ్రావిమెట్రిక్ విశ్లేషణ 30 నుండి 800 °C ఉష్ణోగ్రత పరిధిలో నిమిషానికి 5 °C చొప్పున నిర్వహించబడింది.
గ్లాస్-లైన్డ్ స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ ఇరుకైన-బోర్ స్తంభాల కొలతలు (100 × 1.8 మిమీ ఐడి) స్లర్రీ ప్యాకింగ్ పద్ధతిని ఉపయోగించి ప్యాక్ చేయబడ్డాయి, Ref లో ఉపయోగించిన అదే విధానాన్ని వర్తింపజేసాయి. 31. 1 µm ఫ్రిట్ కలిగిన అవుట్‌లెట్ ఫిట్టింగ్‌తో కూడిన స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ కాలమ్ (గ్లాస్-లైన్డ్, 100 × 1.8 mm id) స్లర్రీ ప్యాకర్‌కు (ఆల్టెక్ డీర్‌ఫీల్డ్, IL, USA) అనుసంధానించబడింది. 1.2 mL మిథనాల్‌లో 150 mg స్టేషనరీ ఫేజ్‌ను సస్పెండ్ చేయడం ద్వారా స్టేషనరీ ఫేజ్ స్లర్రీని సిద్ధం చేసి నిల్వ కాలమ్‌కు పంపండి. మిథనాల్‌ను స్లర్రీ ద్రావకం వలె అలాగే ప్రొపెల్లింగ్ ద్రావకం వలె ఉపయోగించారు. 10 నిమిషాల పాటు 100 MP, 15 నిమిషాల పాటు 80 MP మరియు 30 నిమిషాల పాటు 60 MP ఒత్తిడిని వర్తింపజేయడం ద్వారా కాలమ్‌ను వరుసగా నింపండి. ప్యాకింగ్ సమయంలో, కాలమ్ యొక్క ఏకరీతి ప్యాకింగ్‌ను నిర్ధారించడానికి రెండు GC కాలమ్ షేకర్‌లతో (ఆల్టెక్, డీర్‌ఫీల్డ్, IL, USA) యాంత్రిక వైబ్రేషన్‌ను వర్తింపజేసారు. స్లర్రీ ప్యాకర్‌ను మూసివేసి, కాలమ్ లోపల ఏదైనా నష్టాన్ని నివారించడానికి ఒత్తిడిని నెమ్మదిగా విడుదల చేయండి. స్లర్రీ ప్యాకింగ్ యూనిట్ నుండి కాలమ్‌ను డిస్‌కనెక్ట్ చేయండి మరియు దాని పనితీరును తనిఖీ చేయడానికి ఇన్‌లెట్ మరియు LC సిస్టమ్‌కు మరొక ఫిట్టింగ్‌ను కనెక్ట్ చేయండి.
50nL ఇంజెక్షన్ లూప్‌తో కూడిన LC పంప్ (10AD షిమాడ్జు, జపాన్), ఇంజెక్టర్ (వాల్కో (USA) C14 W.05), మెమ్బ్రేన్ డీగాస్సర్ (షిమాడ్జు DGU-14A), UV-VIS క్యాపిల్లరీ విండోను నిర్మించారు. ప్రత్యేక µLC పరికర డిటెక్టర్ (UV-2075) మరియు గాజుతో కప్పబడిన మైక్రోకాలమ్‌లు. అదనపు కాలమ్ బ్యాండ్ విస్తరణ ప్రభావాన్ని తగ్గించడానికి చాలా ఇరుకైన మరియు చిన్న కనెక్టింగ్ ట్యూబింగ్‌ను ఉపయోగించండి. ప్యాకేజింగ్ తర్వాత, రిడ్యూసింగ్ యూనియన్ యొక్క 1/16″ అవుట్‌లెట్ వద్ద కేశనాళికలు (50 μm id 365 మరియు రిడ్యూసింగ్ యూనియన్ క్యాపిల్లరీలు (50 μm) వ్యవస్థాపించబడ్డాయి. మల్టీక్రో 2000 సాఫ్ట్‌వేర్‌ను ఉపయోగించి డేటా సేకరణ మరియు క్రోమాటోగ్రాఫిక్ ప్రాసెసింగ్ జరిగింది. 254 nm వద్ద పర్యవేక్షణ UV శోషణ కోసం విశ్లేషణలను పరీక్షించారు. క్రోమాటోగ్రాఫిక్ డేటాను OriginPro8 (నార్తాంప్టన్, MA) విశ్లేషించింది.
హ్యూమన్ సీరం నుండి అల్బుమిన్, లైయోఫైలైజ్డ్ పౌడర్, ≥ 96% (అగరోస్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్) 3 mg ట్రిప్సిన్ (1.5 mg), 4.0 M యూరియా (1 mL), మరియు 0.2 M అమ్మోనియం బైకార్బోనేట్ (1 mL) తో కలిపి. ద్రావణాన్ని 10 నిమిషాలు కదిలించి, 37°C వద్ద 6 గంటల పాటు నీటి స్నానంలో ఉంచి, ఆపై 1 mL 0.1% TFA తో చల్లబరిచారు. ద్రావణాన్ని ఫిల్టర్ చేసి 4°C కంటే తక్కువ ఉష్ణోగ్రత వద్ద నిల్వ చేయండి.
పెప్టైడ్ మిశ్రమాలు మరియు HSA ట్రిప్సిన్ డైజెస్ట్‌ల విభజనను PMP నిలువు వరుసలపై విడిగా మూల్యాంకనం చేశారు. PMP నిలువు వరుస ద్వారా పెప్టైడ్ మిశ్రమం మరియు HSA యొక్క ట్రిప్సిన్ డైజెస్ట్ యొక్క విభజనను తనిఖీ చేయండి మరియు ఫలితాలను అసెన్టిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ నిలువు వరుసతో పోల్చండి. సైద్ధాంతిక ప్లేట్ సంఖ్యను ఈ క్రింది విధంగా లెక్కించారు:
బేర్ సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బంధిత సిలికా కణాల SEM చిత్రాలు FIG. 2 లో చూపించబడ్డాయి. బేర్ సిలికా కణాల (A, B) యొక్క SEM చిత్రాలు, మా మునుపటి అధ్యయనాలకు భిన్నంగా, ఈ కణాలు గోళాకారంగా ఉన్నాయని, దీనిలో కణాలు పొడుగుగా ఉంటాయి లేదా క్రమరహిత సమరూపతను కలిగి ఉన్నాయని చూపిస్తున్నాయి. లిగాండ్-బంధిత సిలికా కణాల (C, D) ఉపరితలం బేర్ సిలికా కణాల కంటే సున్నితంగా ఉంటుంది, ఇది సిలికా కణాల ఉపరితలంపై పాలీస్టైరిన్ గొలుసుల పూత వల్ల కావచ్చు.
బేర్ సిలికా కణాలు (A, B) మరియు లిగాండ్-బంధిత సిలికా కణాలు (C, D) యొక్క ఎలక్ట్రాన్ మైక్రోస్కోప్ చిత్రాలను స్కాన్ చేస్తోంది.
బేర్ సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బంధిత సిలికా కణాల కణ పరిమాణ పంపిణీలు చిత్రం 3(A)లో చూపబడ్డాయి. రసాయన మార్పు తర్వాత సిలికా కణాల పరిమాణం పెరిగిందని వాల్యూమ్-ఆధారిత కణ పరిమాణ పంపిణీ వక్రతలు చూపించాయి (Fig. 3A). ప్రస్తుత అధ్యయనం మరియు మునుపటి అధ్యయనం నుండి సిలికా కణాల కణ పరిమాణ పంపిణీ డేటాను టేబుల్ 1(A)లో పోల్చారు. ad(0.5) విలువ 3.05 μm (పాలీస్టైరిన్-బౌండ్ సిలికా కణాలు)34తో మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోలిస్తే PMP యొక్క వాల్యూమ్-ఆధారిత కణ పరిమాణం 3.36 μm. ప్రతిచర్య మిశ్రమంలో PEG, యూరియా, TMOS మరియు ఎసిటిక్ ఆమ్లం యొక్క విభిన్న నిష్పత్తుల కారణంగా ఈ బ్యాచ్ మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోలిస్తే ఇరుకైన కణ పరిమాణ పంపిణీని కలిగి ఉంది. PMP దశ యొక్క కణ పరిమాణం మేము గతంలో అధ్యయనం చేసిన పాలీస్టైరిన్-బౌండ్ సిలికా కణ దశ కంటే కొంచెం పెద్దది. దీని అర్థం స్టైరీన్‌తో సిలికా కణాల ఉపరితల కార్యాచరణ సిలికా ఉపరితలంపై పాలీస్టైరిన్ పొరను (0.97 µm) మాత్రమే జమ చేసింది, అయితే PMP దశలో పొర మందం 1.38 µm.
బేర్ సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాల కణ పరిమాణం పంపిణీ (A) మరియు రంధ్ర పరిమాణం పంపిణీ (B).
ప్రస్తుత అధ్యయనంలో సిలికా కణాల యొక్క రంధ్ర పరిమాణం, రంధ్ర పరిమాణం మరియు ఉపరితల వైశాల్యం పట్టిక 1(B)లో ఇవ్వబడ్డాయి. బేర్ సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బంధిత సిలికా కణాల PSD ప్రొఫైల్‌లు చిత్రం 3(B)లో చూపబడ్డాయి. ఫలితాలు మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోల్చదగినవి. బేర్ మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాల రంధ్ర పరిమాణాలు వరుసగా 310 మరియు 241, ఇది టేబుల్ 1(B)లో చూపిన విధంగా రసాయన మార్పు తర్వాత రంధ్ర పరిమాణం 69 తగ్గుతుందని సూచిస్తుంది మరియు వక్రత యొక్క మార్పు చిత్రం 3(B)లో చూపబడింది. అదేవిధంగా, రసాయన మార్పు తర్వాత సిలికా కణాల రంధ్ర పరిమాణం 0.67 నుండి 0.58 cm3/gకి తగ్గింది. ప్రస్తుతం అధ్యయనం చేయబడిన సిలికా కణాల యొక్క నిర్దిష్ట ఉపరితల వైశాల్యం 116 m2/g, ఇది మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోల్చదగినది (124 m2/g). పట్టిక 1(B)లో చూపిన విధంగా, సిలికా కణాల ఉపరితల వైశాల్యం (m2/g) కూడా 116 m2/g నుండి తగ్గింది రసాయన మార్పు తర్వాత 105 మీ2/గ్రా.
స్థిర దశ యొక్క మూలక విశ్లేషణ ఫలితాలు పట్టిక 2లో చూపబడ్డాయి. ప్రస్తుత స్థిర దశ యొక్క కార్బన్ లోడింగ్ 6.35%, ఇది మా మునుపటి అధ్యయనం యొక్క కార్బన్ లోడింగ్ కంటే తక్కువ (పాలీస్టైరిన్ బంధిత సిలికా కణాలు, వరుసగా 7.93%35 మరియు 10.21%) 42. ప్రస్తుత స్థిర దశ యొక్క కార్బన్ లోడింగ్ తక్కువగా ఉంది, ఎందుకంటే ప్రస్తుత SP తయారీలో, స్టైరీన్‌తో పాటు, ఫినైల్‌మలైమైడ్-మిథైల్‌వినైలిసోసైనేట్ (PCMP) మరియు 4-హైడ్రాక్సీ-టెంపో వంటి కొన్ని ధ్రువ లిగాండ్‌లు ఉపయోగించబడ్డాయి. ప్రస్తుత స్థిర దశ యొక్క నత్రజని బరువు శాతం 2.21%, మునుపటి అధ్యయనాలలో నత్రజని బరువు ప్రకారం వరుసగా 0.1735 మరియు 0.85% తో పోలిస్తే. దీని అర్థం ఫినైల్‌మలైమైడ్ కారణంగా ప్రస్తుత స్థిర దశలో నత్రజని యొక్క wt % ఎక్కువగా ఉంటుంది. అదేవిధంగా, ఉత్పత్తుల (4) మరియు (5) కార్బన్ లోడింగ్‌లు 2.7% మరియు వరుసగా 2.9%, తుది ఉత్పత్తి (6) యొక్క కార్బన్ లోడింగ్ 6.35%, పట్టిక 2లో చూపిన విధంగా. బరువు తగ్గడాన్ని PMP స్థిర దశతో తనిఖీ చేశారు మరియు TGA వక్రరేఖ చిత్రం 4లో చూపబడింది. TGA వక్రరేఖ 8.6% బరువు తగ్గడాన్ని చూపిస్తుంది, ఇది కార్బన్ లోడింగ్ (6.35%)తో మంచి ఒప్పందంలో ఉంది ఎందుకంటే లిగాండ్‌లు C మాత్రమే కాకుండా N, O మరియు H కూడా కలిగి ఉంటాయి.
ఫినైల్మలైమైడ్-మిథైల్వినైలిసోసైనేట్ లిగాండ్ సిలికా కణాల ఉపరితల మార్పు కోసం ఎంపిక చేయబడింది ఎందుకంటే ఇది ధ్రువ ఫినైల్మలైమైడ్ సమూహాలు మరియు వినైలిసోసైనేట్ సమూహాలను కలిగి ఉంటుంది. వినైల్ ఐసోసైనేట్ సమూహాలు లివింగ్ రాడికల్ పాలిమరైజేషన్ ద్వారా స్టైరీన్‌తో మరింత చర్య జరపగలవు. రెండవ కారణం ఏమిటంటే, అనలైట్‌తో మితమైన పరస్పర చర్య మరియు అనలైట్ మరియు స్థిర దశ మధ్య బలమైన ఎలెక్ట్రోస్టాటిక్ పరస్పర చర్య లేని సమూహాన్ని చొప్పించడం, ఎందుకంటే ఫినైల్మలైమైడ్ భాగం సాధారణ pH వద్ద వర్చువల్ ఛార్జ్ కలిగి ఉండదు. స్థిర దశ యొక్క ధ్రువణతను స్టైరీన్ యొక్క సరైన మొత్తం మరియు ఫ్రీ రాడికల్ పాలిమరైజేషన్ యొక్క ప్రతిచర్య సమయం ద్వారా నియంత్రించవచ్చు. ప్రతిచర్య యొక్క చివరి దశ (ఫ్రీ-రాడికల్ పాలిమరైజేషన్) చాలా కీలకం మరియు స్థిర దశ యొక్క ధ్రువణతను మార్చగలదు. ఈ స్థిర దశల కార్బన్ లోడింగ్‌ను తనిఖీ చేయడానికి ప్రాథమిక విశ్లేషణ జరిగింది. స్టైరీన్ మొత్తాన్ని మరియు ప్రతిచర్య సమయాన్ని పెంచడం వల్ల స్థిర దశ యొక్క కార్బన్ లోడింగ్ పెరుగుతుందని మరియు దీనికి విరుద్ధంగా ఉంటుందని గమనించబడింది. స్టైరీన్ యొక్క వివిధ సాంద్రతలతో తయారు చేయబడిన SPలు వేర్వేరు కార్బన్ లోడింగ్‌లను కలిగి ఉంటాయి. మళ్ళీ, ఈ స్థిర దశలను స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ స్తంభాలలోకి లోడ్ చేయండి. మరియు వాటి క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పనితీరును (సెలెక్టివిటీ, రిజల్యూషన్, N విలువ మొదలైనవి) తనిఖీ చేయండి. ఈ ప్రయోగాల ఆధారంగా, నియంత్రిత ధ్రువణత మరియు మంచి విశ్లేషణ నిలుపుదలని నిర్ధారించడానికి PMP స్థిర దశను సిద్ధం చేయడానికి ఆప్టిమైజ్ చేయబడిన సూత్రీకరణను ఎంపిక చేశారు.
మొబైల్ దశను ఉపయోగించి PMP కాలమ్‌ను ఉపయోగించి ఐదు పెప్టైడ్ మిశ్రమాలను (గ్లై-టైర్, గ్లై-ల్యూ-టైర్, గ్లై-గ్లై-టైర్-ఆర్గ్, టైర్-ఐల్-గ్లై-సెర్-ఆర్గ్, ల్యూసిన్ ఎన్‌కెఫాలిన్) కూడా మూల్యాంకనం చేశారు; 80 μL/min ప్రవాహం రేటు వద్ద 60/40 (v/v) అసిటోనిట్రైల్/నీరు (0.1% TFA). సరైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితులలో, ప్రతి కాలమ్‌కు సైద్ధాంతిక ప్లేట్ సంఖ్య (N) (100 × 1.8 mm id) 20,000 ± 100 (200,000 ప్లేట్లు/m²). టేబుల్ 3 మూడు PMP నిలువు వరుసలకు N విలువలను ఇస్తుంది మరియు క్రోమాటోగ్రామ్‌లు చిత్రం 5Aలో చూపబడ్డాయి. అధిక ప్రవాహ రేటు (700 μL/min) వద్ద PMP కాలమ్‌పై వేగవంతమైన విశ్లేషణ, ఒక నిమిషంలోపు ఐదు పెప్టైడ్‌లు తొలగించబడ్డాయి, N విలువలు చాలా బాగున్నాయి, కాలమ్‌కు 13,500 ± 330 (100 × 1.8 mm id), 135,000 ప్లేట్లు/m (మూర్తి 5B)కి అనుగుణంగా ఉంటుంది. ఒకేలాంటి పరిమాణంలో ఉన్న మూడు నిలువు వరుసలు (100 × 1.8 mm id) మూడు వేర్వేరు లాట్‌ల PMP స్టేషనరీ దశతో ప్యాక్ చేయబడ్డాయి. పునరుత్పాదకతను తనిఖీ చేయండి. ప్రతి నిలువు వరుసలో ఒకే పరీక్ష మిశ్రమాన్ని వేరు చేయడానికి సరైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితులు మరియు సైద్ధాంతిక ప్లేట్ల సంఖ్య N మరియు నిలుపుదల సమయాన్ని ఉపయోగించి ప్రతి నిలువు వరుసకు విశ్లేషణాత్మక సాంద్రత నమోదు చేయబడింది. PMP నిలువు వరుసల పునరుత్పాదకత డేటా పట్టిక 4లో చూపబడింది. PMP నిలువు వరుస యొక్క పునరుత్పాదకత పట్టిక 3లో చూపిన విధంగా చాలా తక్కువ %RSD విలువలతో బాగా సంబంధం కలిగి ఉంది.
PMP కాలమ్ (B) మరియు Ascentis Express RP-Amide కాలమ్ (A) పై పెప్టైడ్ మిశ్రమాన్ని వేరు చేయడం; మొబైల్ దశ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP కాలమ్ కొలతలు (100 × 1.8 mm id); విశ్లేషణాత్మక సమ్మేళనాల ఎల్యూషన్ క్రమం: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) మరియు 5 (leucine) యాసిడ్ enkephalin)).
హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీలో హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ యొక్క ట్రిప్టిక్ డైజెస్ట్‌లను వేరు చేయడానికి ఒక PMP కాలమ్ (100 × 1.8 mm id) మూల్యాంకనం చేయబడింది. చిత్రం 6 లోని క్రోమాటోగ్రామ్ నమూనా బాగా వేరు చేయబడిందని మరియు రిజల్యూషన్ చాలా బాగుందని చూపిస్తుంది. HSA డైజెస్ట్‌లను 100 µL/నిమిషం, మొబైల్ ఫేజ్ 70/30 అసిటోనిట్రైల్/నీరు మరియు 0.1% TFA ఫ్లో రేట్ ఉపయోగించి విశ్లేషించారు. క్రోమాటోగ్రామ్ (మూర్తి 6)లో చూపినట్లుగా, HSA డైజెస్ట్‌ను 17 పెప్టైడ్‌లకు అనుగుణంగా 17 శిఖరాలుగా విభజించారు. HSA డైజెస్ట్‌లోని ప్రతి శిఖరం యొక్క విభజన సామర్థ్యాన్ని లెక్కించారు మరియు విలువలు టేబుల్ 5లో ఇవ్వబడ్డాయి.
PMP కాలమ్‌పై HSA (100 × 1.8 mm id) యొక్క ట్రిప్టిక్ డైజెస్ట్ వేరు చేయబడింది; ప్రవాహ రేటు (100 µL/నిమిషం), మొబైల్ దశ 60/40 అసిటోనిట్రైల్/నీరు 0.1% TFAతో.
ఇక్కడ L అనేది కాలమ్ పొడవు, η అనేది మొబైల్ దశ యొక్క స్నిగ్ధత, ΔP అనేది కాలమ్ బ్యాక్ ప్రెజర్, మరియు u అనేది మొబైల్ దశ యొక్క లీనియర్ వేగం. PMP కాలమ్ యొక్క పారగమ్యత 2.5 × 10-14 m2, ప్రవాహ రేటు 25 μL/నిమిషం, మరియు 60/40 v/v ACN/నీరు ఉపయోగించబడింది. PMP కాలమ్ యొక్క పారగమ్యత (100 × 1.8 mm id) మా మునుపటి అధ్యయనం Ref.34 కి సమానంగా ఉంది. ఉపరితల పోరస్ కణాలతో నిండిన కాలమ్ యొక్క పారగమ్యత: 1.3 μm కణాలకు 1.7 × 10-15, 1.7 μm కణాలకు 3.1 × 10-15, 2.6 μm కణాలకు 5.2 × 10-15 మరియు 2.5 × 10-14 m2 5 μm కణాలకు 43. అందువల్ల, PMP దశ యొక్క పారగమ్యత 5 μm కు సమానంగా ఉంటుంది. కోర్-షెల్ కణాలు.
ఇక్కడ Wx అనేది క్లోరోఫామ్‌తో నిండిన కాలమ్ యొక్క బరువు, Wy అనేది మిథనాల్‌తో నిండిన కాలమ్ యొక్క బరువు మరియు ρ అనేది ద్రావకం యొక్క సాంద్రత. మిథనాల్ (ρ = 0.7866) మరియు క్లోరోఫామ్ (ρ = 1.484) యొక్క సాంద్రతలు. మనం గతంలో అధ్యయనం చేసిన SILICA PARTICLES-C18 నిలువు వరుసల (100 × 1.8 mm id) 34 మరియు C18-యూరియా నిలువు వరుసల 31 యొక్క మొత్తం సచ్ఛిద్రత వరుసగా 0.63 మరియు 0.55. దీని అర్థం యూరియా లిగాండ్ల ఉనికి స్థిర దశ యొక్క పారగమ్యతను తగ్గిస్తుంది. మరోవైపు, PMP నిలువు వరుస (100 × 1.8 mm id) యొక్క మొత్తం సచ్ఛిద్రత 0.60. PMP నిలువు వరుసల పారగమ్యత C18-బంధిత సిలికా కణాలతో నిండిన నిలువు వరుసల కంటే తక్కువగా ఉంటుంది ఎందుకంటే C18-రకం స్థిర దశలలో C18 లిగాండ్‌లు సిలికా కణాలకు లీనియర్ గొలుసులుగా జతచేయబడతాయి, అయితే పాలీస్టైరిన్-రకం స్థిర దశలలో, దాని చుట్టూ సాపేక్షంగా మందపాటి పాలిమర్ పొర ఏర్పడుతుంది. ఒక సాధారణ ప్రయోగంలో, స్తంభ సచ్ఛిద్రతను ఇలా లెక్కించారు:
చిత్రం 7A,B వాన్ డీమ్టర్ ప్లాట్ యొక్క అదే ఎలుషన్ పరిస్థితులను (అంటే, 60/40 ACN/H2O మరియు 0.1% TFA) ఉపయోగించి PMP కాలమ్ (100 × 1.8 mm id) మరియు అసెన్టిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్ (100 × 1.8 mm id) ను చూపిస్తుంది. ఎంచుకున్న పెప్టైడ్ మిశ్రమాలను (గ్లై-టైర్, గ్లై-ల్యూ-టైర్, గ్లై-గ్లై-టైర్-ఆర్గ్, టైర్-ఇల్-గ్లై-సెర్-ఆర్గ్, ల్యూసిన్ ఎన్‌కెఫాలిన్) 20 µL/ లో తయారు చేశారు. రెండు నిలువు వరుసలకు కనీస ప్రవాహ రేటు 800 µL/నిమిషం. PMP కాలమ్ మరియు అసెన్టిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్‌కు వాంఛనీయ ప్రవాహ రేటు (80 µL/నిమిషం) వద్ద కనీస HETP విలువలు వరుసగా 2.6 µm మరియు 3.9 µm. HETP విలువలు PMP కాలమ్ (100 × 1.8 mm id) యొక్క విభజన సామర్థ్యం వాణిజ్యపరంగా అందుబాటులో ఉన్న అసెన్టిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్ (100 × 1.8 mm id) కంటే చాలా మెరుగ్గా ఉందని సూచిస్తున్నాయి. Fig. 7(A) లోని వాన్ డీమ్టర్ ప్లాట్ మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోలిస్తే పెరుగుతున్న ప్రవాహంతో N విలువలో తగ్గుదల గణనీయంగా లేదని చూపిస్తుంది. అధిక విభజన సామర్థ్యం అసెన్టిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్‌తో పోలిస్తే PMP కాలమ్ (100 × 1.8 mm id) యొక్క కొలత ప్రస్తుత పనిలో ఉపయోగించే కణ ఆకారం, పరిమాణం మరియు సంక్లిష్ట కాలమ్ ప్యాకింగ్ విధానాలలో మెరుగుదలలపై ఆధారపడి ఉంటుంది34.
(A) 0.1% TFAతో 60/40 ACN/H2Oలో PMP కాలమ్ (100 × 1.8 mm id) ఉపయోగించి పొందిన వాన్ డీమ్టర్ ప్లాట్ (HETP వర్సెస్ మొబైల్ ఫేజ్ లీనియర్ వెలాసిటీ).(B) 0.1% TFAతో 60/40 ACN/H2Oలో అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్ (100 × 1.8 mm id) ఉపయోగించి పొందిన వాన్ డీమ్టర్ ప్లాట్ (HETP వర్సెస్ మొబైల్ ఫేజ్ లీనియర్ వెలాసిటీ).
అధిక పనితీరు గల లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీలో సింథటిక్ పెప్టైడ్ మిశ్రమాలు మరియు హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ (HAS) యొక్క ట్రిప్సిన్ డైజెస్ట్‌లను వేరు చేయడానికి ఒక ధ్రువ-ఎంబెడెడ్ పాలీస్టైరిన్ స్టేషనరీ దశను తయారు చేసి మూల్యాంకనం చేశారు. పెప్టైడ్ మిశ్రమాలకు PMP స్తంభాల క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పనితీరు విభజన సామర్థ్యం మరియు స్పష్టతలో అద్భుతమైనది. PMP స్తంభాల మెరుగైన విభజన పనితీరు సిలికా కణాల కణ పరిమాణం మరియు రంధ్ర పరిమాణం, స్థిర దశ యొక్క నియంత్రిత సంశ్లేషణ మరియు సంక్లిష్ట కాలమ్ ప్యాకింగ్ వంటి వివిధ కారణాల వల్ల ఏర్పడింది. అధిక విభజన సామర్థ్యంతో పాటు, అధిక ప్రవాహ రేట్ల వద్ద తక్కువ కాలమ్ బ్యాక్ ప్రెజర్ ఈ స్థిర దశ యొక్క మరొక ప్రయోజనం. PMP స్తంభాలు మంచి పునరుత్పత్తి సామర్థ్యాన్ని ప్రదర్శిస్తాయి మరియు పెప్టైడ్ మిశ్రమాల విశ్లేషణ మరియు వివిధ ప్రోటీన్ల ట్రిప్సిన్ జీర్ణక్రియ కోసం ఉపయోగించవచ్చు. ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీలో సహజ ఉత్పత్తులను, ఔషధ మొక్కల నుండి బయోయాక్టివ్ సమ్మేళనాలను మరియు శిలీంధ్ర సారాలను వేరు చేయడానికి మేము ఈ కాలమ్‌ను ఉపయోగించాలని భావిస్తున్నాము. భవిష్యత్తులో, ప్రోటీన్లు మరియు మోనోక్లోనల్ యాంటీబాడీలను వేరు చేయడానికి PMP స్తంభాలను కూడా మూల్యాంకనం చేస్తారు.
ఫీల్డ్, JK, యూర్బీ, MR, లావు, J., థోగెర్సెన్, H. & పీటర్సన్, P. రివర్స్డ్ ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా పెప్టైడ్ సెపరేషన్ సిస్టమ్స్‌పై పరిశోధన పార్ట్ I: డెవలప్‌మెంట్ ఆఫ్ ఎ కాలమ్ క్యారెక్టరైజేషన్ ప్రోటోకాల్.J. క్రోమాటోగ్రఫీ.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
గోమెజ్, బి. మరియు ఇతరులు. అంటు వ్యాధుల చికిత్స కోసం రూపొందించిన మెరుగైన క్రియాశీల పెప్టైడ్‌లు. బయోటెక్నాలజీ. అడ్వాన్స్‌డ్.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
వ్లీఘే, పి., లిసోవ్స్కీ, వి., మార్టినెజ్, జె. & క్రెస్ట్‌చాటిస్కీ, ఎం. సింథటిక్ థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్స్: సైన్స్ అండ్ ది మార్కెట్. డ్రగ్ డిస్కవరీ.15 (1-2) ఈరోజు, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
జియే, ఎఫ్., స్మిత్, ఆర్డీ & షెన్, వై. అడ్వాన్స్‌డ్ ప్రోటీమిక్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ.జె. క్రోమాటోగ్రఫీ.ఎ 1261, 78–90 (2012).
లియు, డబ్ల్యూ. మరియు ఇతరులు. అధునాతన లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ-మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ విస్తృతంగా లక్ష్యంగా చేసుకున్న జీవక్రియ మరియు ప్రోటీమిక్స్ యొక్క విలీనంను అనుమతిస్తుంది.అనస్.చిమ్.ఆక్టా 1069, 89–97 (2019).
చెస్నట్, SM & సాలిస్బరీ, JJ ఔషధ అభివృద్ధిలో UHPLC పాత్ర.J. సెప్టెంబర్ సైన్స్.30(8), 1183-1190 (2007).
వు, ఎన్. & క్లాసెన్, ఎఎమ్. వేగవంతమైన విభజనల కోసం అల్ట్రాహై ప్రెజర్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క ప్రాథమిక మరియు ఆచరణాత్మక అంశాలు.జె. సెప్. సైన్స్.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
రెన్, SA & Tchelitcheff, P. ఔషధ అభివృద్ధిలో అల్ట్రా-హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క అప్లికేషన్.J. క్రోమాటోగ్రఫీ.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
గు, హెచ్. మరియు ఇతరులు.ఎంటర్‌వైరస్‌ల సమర్థవంతమైన శుద్ధీకరణ కోసం ఆయిల్-ఇన్-వాటర్ హై ఇంటర్నల్ ఫేజ్ ఎమల్షన్‌ల నుండి తయారు చేయబడిన మోనోలిథిక్ మాక్రోపోరస్ హైడ్రోజెల్స్.కెమికల్.బ్రిటన్.జె. 401, 126051 (2020).
షి, వై., జియాంగ్, ఆర్., హోర్వాత్, సి. & విల్కిన్స్, జెఎ ప్రోటీమిక్స్‌లో ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీ పాత్ర.జె. క్రోమాటోగ్రఫీ.ఎ 1053(1-2), 27-36 (2004).
ఫెకెటే, ఎస్., వెయుతే, జె.-ఎల్. & గిల్లార్మే, డి. థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల రివర్స్డ్-ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ విభజనలలో ఉద్భవిస్తున్న ట్రెండ్‌లు: సిద్ధాంతం మరియు అనువర్తనాలు.జె. ఫార్మసీ.బయోమెడికల్ సైన్స్.అనస్.69, 9-27 (2012).
గిలార్, ఎం., ఒలివోవా, పి., డాలీ, ఎఇ & గెబ్లర్, జెసి మొదటి మరియు రెండవ విభజన కొలతలలో వేర్వేరు pH విలువలను ఉపయోగించి RP-RP-HPLC వ్యవస్థను ఉపయోగించి పెప్టైడ్‌ల యొక్క రెండు-డైమెన్షనల్ విభజన.జె. సెప్టెంబర్ సైన్స్.28(14), 1694-1703 (2005).
ఫెలెట్టి, ఎస్. మరియు ఇతరులు. C18 సబ్-2 μm పూర్తిగా మరియు ఉపరితల పోరస్ కణాలతో నిండిన అధిక-సామర్థ్య క్రోమాటోగ్రాఫిక్ స్తంభాల ద్రవ్యరాశి బదిలీ లక్షణాలు మరియు గతిశీల పనితీరును పరిశోధించారు. జె. సెప్టెంబర్ సైన్స్.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
పియోవేసానా, ఎస్. మరియు ఇతరులు. మొక్కల బయోయాక్టివ్ పెప్టైడ్‌ల ఐసోలేషన్, గుర్తింపు మరియు ధ్రువీకరణలో ఇటీవలి పోకడలు మరియు విశ్లేషణాత్మక సవాళ్లు.అనస్.బయోలాజికల్ అనస్.కెమికల్.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
ముల్లెర్, JB మరియు ఇతరులు. జీవిత రాజ్యం యొక్క ప్రోటీమిక్ ల్యాండ్‌స్కేప్. ప్రకృతి 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
డెలూకా, సి. మరియు ఇతరులు. ప్రిపరేటివ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా చికిత్సా పెప్టైడ్‌ల డౌన్‌స్ట్రీమ్ ప్రాసెసింగ్. మాలిక్యూల్ (బాసెల్, స్విట్జర్లాండ్) 26(15), 4688(2021).
యాంగ్, వై. & జెంగ్, ఎక్స్. బయోపాలిమర్‌లకు మిశ్రమ-మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు దాని అప్లికేషన్.జె. క్రోమాటోగ్రఫీ.ఎ 1218(49), 8813–8825 (2011).
జావో, జి., డాంగ్, ఎక్స్.-వై. & సన్, వై. లిగాండ్స్ ఫర్ మిక్స్డ్-మోడ్ ప్రోటీన్ క్రోమాటోగ్రఫీ: సూత్రం, క్యారెక్టరైజేషన్ మరియు డిజైన్.జె. బయోటెక్నాలజీ.144(1), 3-11 (2009).