Nature.comని సందర్శించినందుకు ధన్యవాదాలు.మీరు ఉపయోగిస్తున్న బ్రౌజర్ సంస్కరణ CSSకి పరిమిత మద్దతును కలిగి ఉంది.ఉత్తమ అనుభవం కోసం, మీరు నవీకరించబడిన బ్రౌజర్‌ని (లేదా Internet Explorerలో అనుకూలత మోడ్‌ని ఆఫ్ చేయండి)ని ఉపయోగించాలని మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము. ఈలోపు, నిరంతర మద్దతుని నిర్ధారించడానికి, మేము స్టైల్స్ మరియు JavaScript లేకుండా సైట్‌ని ప్రదర్శిస్తాము.
పోరస్ సిలికా కణాలు స్థూల పోరస్ కణాలను పొందేందుకు కొన్ని మార్పులతో సోల్-జెల్ పద్ధతి ద్వారా తయారు చేయబడ్డాయి. ఈ కణాలు N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI)తో రివర్సిబుల్ అడిషన్ ఫ్రాగ్మెంటేషన్ చైన్ ట్రాన్స్‌ఫర్ (RAFT) పాలిమరైజేషన్ ద్వారా ఉత్పన్నం చేయబడ్డాయి. బాణం-బోర్ స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ స్తంభాలు (100 × 1.8 మిమీ ఐడి) స్లర్రీ ప్యాకింగ్ ద్వారా ప్యాక్ చేయబడ్డాయి. ఐదు పెప్టైడ్‌లు (గ్లై-టైర్, గ్లై-లెయు-టైర్, గ్లై-గ్లై-టైర్-ఐఆర్గ్, టిఆర్‌గ్లీ-ఎర్గ్-ఇన్-గ్లైర్-ఆర్గ్, గ్లైర్-ఆర్గ్-ఇన్-గ్లైర్-ఆర్గ్-ఇన్-గ్లైర్-ఆర్గ్, గ్లైర్-కె-ఆర్గ్-ఇన్-గ్లైర్-కె-ఆర్గ్-ఇన్-గ్లైర్-ఆర్గ్-ఇన్-గ్లైర్-ఆర్గ్-ఇన్-గ్లీ-ఆర్గ్-ఇన్-గ్లీ-ఆర్గ్-ఇన్-గ్లీర్-ఆర్గ్-ఇన్, మ్యాటోగ్రాఫిక్ పనితీరు) మరియు హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ (HAS) యొక్క ట్రిప్సిన్ జీర్ణక్రియ. సరైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితులలో, పెప్టైడ్ మిశ్రమం యొక్క సైద్ధాంతిక ప్లేట్ కౌంట్ 280,000 ప్లేట్లు/m² వరకు ఉంటుంది. అభివృద్ధి చెందిన కాలమ్ యొక్క విభజన పనితీరును వాణిజ్య అస్సెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్‌తో పోల్చి చూస్తే, ఇది PMP కాలమ్ నుండి వేరుచేయబడిన కాలమ్ నుండి వేరుచేయబడిన కాలమ్‌ని వేరుచేస్తుంది. మరియు స్పష్టత.
ఇటీవలి సంవత్సరాలలో, బయోఫార్మాస్యూటికల్ పరిశ్రమ మార్కెట్ వాటాలో గణనీయమైన పెరుగుదలతో విస్తరిస్తున్న ప్రపంచ మార్కెట్‌గా మారింది. బయోఫార్మాస్యూటికల్ పరిశ్రమ 1,2,3 యొక్క పేలుడు వృద్ధితో, పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల విశ్లేషణ ఎక్కువగా కోరబడుతుంది. టార్గెట్ పెప్టైడ్‌తో పాటు, పెప్టైడ్ సంశ్లేషణ సమయంలో అనేక మలినాలను ఉత్పత్తి చేస్తారు. శరీర ద్రవాలు, కణజాలాలు మరియు కణాలలో ప్రోటీన్ల యొక్క విశ్లేషణ మరియు వర్గీకరణ అనేది ఒక నమూనాలో పెద్ద సంఖ్యలో సంభావ్యంగా గుర్తించదగిన జాతులు ఉండటం వలన చాలా సవాలుతో కూడుకున్న పని. పెప్టైడ్ మరియు ప్రోటీన్ సీక్వెన్సింగ్ కోసం మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ ఒక ప్రభావవంతమైన సాధనం అయినప్పటికీ, అటువంటి నమూనాలను మాస్ స్పెక్ట్రోమీటర్‌లోకి ఒక పాస్‌లో ఇంజెక్ట్ చేస్తే, లిక్విడ్‌గ్రఫీ ద్వారా వేరుచేయడం సరైనది కాదు. MS విశ్లేషణ, ఇది ఒక నిర్దిష్ట సమయంలో మాస్ స్పెక్ట్రోమీటర్‌లోకి ప్రవేశించే విశ్లేషణల సంఖ్యను తగ్గిస్తుంది4,5,6. అదనంగా, ద్రవ దశ విభజన సమయంలో, విశ్లేషణలను ఇరుకైన ప్రాంతాలలో కేంద్రీకరించవచ్చు, తద్వారా ఈ విశ్లేషణలను కేంద్రీకరించవచ్చు మరియు MS గుర్తింపును సున్నితత్వం మెరుగుపరుస్తుంది. లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (LC) గతం కంటే బాగా ప్రాచుర్యం పొందింది.
రివర్స్‌డ్-ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (RP-LC) పెప్టైడ్ మిశ్రమాలను శుద్ధి చేయడానికి మరియు వేరు చేయడానికి ఆక్టాడెసిల్-మాడిఫైడ్ సిలికా (ODS)ని స్థిరమైన దశగా 11,12,13గా ఉపయోగిస్తుంది. అయితే, RP స్టేషనరీ ఫేజ్‌లు పెప్టైడ్‌లు, కాంప్లెక్స్ స్ట్రక్చర్ యాంఫిప్ 1 5 స్టేషన్ల కారణంగా సంతృప్తికరమైన విభజనను అందించవు. ఈ విశ్లేషణలతో సంకర్షణ చెందడానికి మరియు నిలుపుకోవడానికి ధ్రువ మరియు ధ్రువేతర కదలికలతో పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌లను విశ్లేషించడానికి ary దశలు అవసరమవుతాయి ప్రోటీన్ విభజనలు17,18,19,20,21.మిశ్రమ-మోడ్ స్టేషనరీ ఫేజ్‌లు (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, పోలార్ ఇంటర్‌కలేషన్/RPLC) పెప్టైడ్ మరియు ప్రొటీన్ విభజనలకు అనువుగా ఉంటాయి, ఇవి ధ్రువ మరియు నాన్-పోలార్ గ్రూపులు రెండూ ఉండటం వలన పెప్టైడ్ మరియు ప్రొటీన్ విభజనలకు అనుకూలంగా ఉంటాయి22,23,24,25,26,28. lar సమూహాలు ధ్రువ మరియు నాన్-పోలార్ విశ్లేషణల కోసం మంచి విభజన శక్తిని మరియు ప్రత్యేక ఎంపికను చూపుతాయి, ఎందుకంటే విభజన విశ్లేషణ మరియు స్థిర దశ మధ్య పరస్పర చర్యపై ఆధారపడి ఉంటుంది.మల్టీమోడల్ పరస్పర చర్యలు 29, 30, 31, 32. ఇటీవల, జాంగ్ మరియు ఇతరులు.30 డోడెసిల్-టెర్మినేటెడ్ పాలిమైన్ స్టేషనరీ ఫేజ్‌ను సిద్ధం చేసింది మరియు హైడ్రోకార్బన్‌లు, యాంటిడిప్రెసెంట్స్, ఫ్లేవనాయిడ్స్, న్యూక్లియోసైడ్‌లు, ఈస్ట్రోజెన్‌లు మరియు అనేక ఇతర విశ్లేషణలను విజయవంతంగా వేరు చేసింది. పోలార్ ఇంటర్‌కలేటర్‌లో పోలార్ మరియు నాన్-పోలార్ గ్రూపులు ఉన్నాయి, కాబట్టి దీనిని పెప్టైడ్‌లు మరియు హైడ్రోఫోబ్ ప్రొటీన్‌లను వేరు చేయడానికి ఉపయోగించవచ్చు. ide-ఎంబెడెడ్ C18 నిలువు వరుసలు) వాణిజ్య పేరుతో Ascentis Express RP-Amide నిలువు వరుసల క్రింద అందుబాటులో ఉన్నాయి, అయితే ఈ నిలువు వరుసలు అమైన్ 33 యొక్క విశ్లేషణ కోసం మాత్రమే ఉపయోగించబడతాయి.
ప్రస్తుత అధ్యయనంలో, HSA యొక్క పెప్టైడ్‌లు మరియు ట్రిప్సిన్ డైజెస్ట్‌లను వేరు చేయడం కోసం ధ్రువ-ఎంబెడెడ్ స్టేషనరీ ఫేజ్ (N-phenylmaleimide-ఎంబెడెడ్ పాలీస్టైరిన్) తయారు చేయబడింది మరియు మూల్యాంకనం చేయబడింది. ఈ క్రింది వ్యూహాన్ని ఉపయోగించి స్థిరమైన దశను తయారు చేశారు. లైకాల్ (PEG), TMOS, వాటర్ ఎసిటిక్ యాసిడ్ పెద్ద రంధ్ర పరిమాణంతో సిలికా కణాలను సిద్ధం చేయడానికి సర్దుబాటు చేయబడింది. రెండవది, కొత్త లిగాండ్, ఫినైల్‌మలైమైడ్-మిథైల్ వినైల్ ఐసోసైనేట్, సంశ్లేషణ చేయబడింది మరియు సిలికా కణాలను ఉత్పన్నం చేయడానికి ఉపయోగించబడింది. ఐడి) ఆప్టిమైజ్ చేసిన ప్యాకింగ్ స్కీమ్‌ని ఉపయోగించడం. కాలమ్‌లో ఒక సజాతీయ మంచం ఏర్పడిందని నిర్ధారించడానికి కాలమ్ ప్యాకింగ్ మెకానికల్ వైబ్రేషన్‌తో సహాయపడుతుంది. ఐదు పెప్టైడ్‌లతో కూడిన పెప్టైడ్ మిశ్రమాల ప్యాక్ చేసిన కాలమ్ విభజనను అంచనా వేయండి;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) మరియు ట్రిప్సిన్ డైజెస్ట్ ఆఫ్ హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ (HAS).పెప్టైడ్ మిశ్రమం మరియు HSA యొక్క ట్రిప్సిన్ డైజెస్ట్‌లు PMP యొక్క మంచి రిజల్యూషన్ మరియు ట్రిప్సిన్ డైజెస్ట్‌తో పోల్చి చూడబడ్డాయి. RP-Amide కాలమ్. PMP కాలమ్‌లో పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రొటీన్‌లు రెండూ బాగా పరిష్కరించబడ్డాయి మరియు సమర్థవంతంగా ఉన్నట్లు గమనించబడింది, ఇది Ascentis Express RP-Amide కాలమ్ కంటే మరింత ప్రభావవంతంగా ఉంటుంది.
PEG (పాలిథిలిన్ గ్లైకాల్), యూరియా, ఎసిటిక్ యాసిడ్, ట్రిమెథాక్సీ ఆర్థోసిలికేట్ (TMOS), ట్రిమెథైల్ క్లోరోసిలేన్ (TMCS), ట్రిప్సిన్, హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ (HSA), అమ్మోనియం క్లోరైడ్, యూరియా, హెక్సేన్ మిథైల్డిసిలాజేన్ (HMDS), మెథాక్రిలోయ్ల్-ఎంసిటీఈ-4 ide (BPO), HPLC గ్రేడ్ ఎసిటోనిట్రైల్ (ACN), మిథనాల్, 2-ప్రొపనాల్ మరియు అసిటోన్ సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్ (సెయింట్ లూయిస్, MO, USA) నుండి కొనుగోలు చేయబడింది.
యూరియా (8 గ్రా), పాలిథిలిన్ గ్లైకాల్ (8 గ్రా), మరియు 8 ఎంఎల్ 0.01 ఎన్ ఎసిటిక్ యాసిడ్ మిశ్రమాన్ని 10 నిమిషాల పాటు కదిలించి, ఆపై 24 ఎంఎల్ టిఎంఓఎస్‌ను మంచు-చల్లని పరిస్థితులలో చేర్చారు. రియాక్షన్ మిశ్రమాన్ని 40 డిగ్రీల సెల్సియస్ వద్ద 6 గంటల పాటు వేడి చేసి, ఆపై 120 డిగ్రీల సెల్సియస్ ఉష్ణోగ్రత వద్ద 120 డిగ్రీల సెల్సియస్ ఉష్ణోగ్రత వద్ద నీరు చల్లారు. 12 గంటల పాటు 70°C వద్ద ద్వంద్వ పదార్థం ఎండబెట్టబడింది. ఎండిన మెత్తని ద్రవ్యరాశిని ఓవెన్‌లో మెత్తగా చేసి, 550°C వద్ద 12 గంటల పాటు లెక్కించబడుతుంది. మూడు బ్యాచ్‌లు తయారు చేయబడ్డాయి మరియు కణ పరిమాణం, రంధ్ర పరిమాణం మరియు ఉపరితల వైశాల్యంలో పునరుత్పత్తి సామర్థ్యాన్ని పరిశీలించడానికి రూపొందించబడ్డాయి.
ప్రీ-సింథసైజ్డ్ లిగాండ్ ఫినైల్‌మలైమైడ్-మిథైల్వినైలిసోసైనేట్ (PCMP)తో సిలికా రేణువులను ఉపరితల మార్పు చేయడం ద్వారా స్టైరిన్‌తో రేడియల్ పాలిమరైజేషన్, ధ్రువ సమూహం-కలిగిన సమ్మేళనం తయారు చేయబడింది.కంకర మరియు పాలీస్టైరిన్ గొలుసుల కోసం నిశ్చల దశ. తయారీ ప్రక్రియ క్రింద వివరించబడింది.
N-phenylmaleimide (200 mg) మరియు మిథైల్ వినైల్ ఐసోసైనేట్ (100 mg) డ్రై టోల్యూన్‌లో కరిగించబడ్డాయి మరియు 0.1 mL 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) రియాక్షన్ ఫ్లాస్క్‌కు జోడించబడి ఫినైల్‌మలైమైడ్-మిథైల్ ఐసోసిపి వద్ద హీట్‌మెరోసైన్‌సిపి 6. 3 గంటలు, 3 గంటలు 40 ° C వద్ద ఓవెన్‌లో ఫిల్టర్ చేసి ఎండబెట్టాలి.
ఎండిన సిలికా రేణువులు (2 గ్రా) డ్రై టోల్యూన్ (100 ఎంఎల్)లో చెదరగొట్టబడి, 500 ఎంఎల్ రౌండ్ బాటమ్ ఫ్లాస్క్‌లో 10 నిమిషాల పాటు కదిలించబడ్డాయి మరియు సోనికేట్ చేయబడ్డాయి. పిఎమ్‌సిపి (10 మి.గ్రా) టోల్యున్‌లో కరిగించి, డ్రాపింగ్ ఫన్నెల్ ద్వారా రియాక్షన్ ఫ్లాస్క్‌కి డ్రాప్‌వైస్‌గా జోడించబడింది. ఈ మిశ్రమాన్ని 10 గంటలకు రిఫ్లక్స్‌తో రిఫ్లక్స్‌లో ఎండబెట్టి, 10 గంటలకు రిఫ్లక్స్‌లో రిఫ్లక్స్ చేయాలి 3 గంటలకు 60°C. తర్వాత, PMCP-బంధిత సిలికా కణాలు (100 గ్రా) టోలుయెన్ (200 ml)లో కరిగించబడతాయి మరియు 4-హైడ్రాక్సీ-TEMPO (2 mL) 100 µL డైబుటిల్టిన్ డైలౌరేట్ సమక్షంలో ఒక ఉత్ప్రేరకం వలె జోడించబడింది. ఈ మిశ్రమాన్ని 5 ° C వద్ద 5 గంటలపాటు ఎండబెట్టి, 5 గంటలపాటు 5 గంటలపాటు ఎండబెట్టాలి.
స్టైరీన్ (1 mL), బెంజాయిల్ పెరాక్సైడ్ BPO (0.5 mL), మరియు TEMPO-PMCP-అటాచ్డ్ సిలికా పార్టికల్స్ (1.5 గ్రా) టోలున్‌లో చెదరగొట్టబడ్డాయి మరియు నత్రజనితో ప్రక్షాళన చేయబడ్డాయి. స్టైరీన్ యొక్క పాలిమరైజేషన్ 100 ° C వద్ద నిర్వహించబడింది. ఫలితంగా 12 గంటల కంటే °Cతో 6 కంటే ఎక్కువ సమయం ఆరబెట్టబడింది. మూర్తి 1 లో.
నమూనాలు 10-3 టోర్ కంటే తక్కువ అవశేష పీడనాన్ని పొందేందుకు 1 గంటకు 393 K వద్ద డీగ్యాస్ చేయబడ్డాయి. P/P0 = 0.99 సాపేక్ష పీడనం వద్ద శోషించబడిన N2 మొత్తం రంధ్ర పరిమాణాన్ని నిర్ణయించడానికి ఉపయోగించబడింది. బేర్ మరియు లిగాండ్-బాండెడ్ సిలికా స్కానింగ్‌తో కూడిన స్కానింగ్‌తో కూడిన ఎలెక్ట్రానినిటా ఎలక్ట్రోనికీస్ ఎగ్జామినేజ్ మైక్రోటెక్ , జపాన్).అంటుకునే కార్బన్ టేప్‌ని ఉపయోగించి ఒక అల్యూమినియం కాలమ్‌పై ఎండిన నమూనాలను (బేర్ సిలికా మరియు లిగాండ్-బంధిత సిలికా కణాలు) ఉంచారు. Q150T స్పుటర్ కోటర్‌ని ఉపయోగించి నమూనాలపై బంగారం పూత పూయబడింది మరియు నమూనాలపై 5 nm Au పొరను నిక్షిప్తం చేయడం జరిగింది. థామ్, MA, USA) ఫ్లాష్ EA1112 ఎలిమెంటల్ ఎనలైజర్ మౌళిక విశ్లేషణ కోసం ఉపయోగించబడింది. A Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 పార్టికల్ సైజు ఎనలైజర్ కణ పరిమాణం పంపిణీని పొందేందుకు ఉపయోగించబడింది. నేకెడ్ సిలికా పార్టికల్స్ మరియు లిగాండ్-బంధిత సిలికా పార్టికల్స్ 5 మి.మీ.లో 5 మి.గ్రా. , 5 నిమిషాలు వోర్టెక్స్ చేయబడింది మరియు మాస్టర్‌సైజర్ యొక్క ఆప్టికల్ బెంచ్‌పై ఉంచబడింది. థర్మోగ్రావిమెట్రిక్ విశ్లేషణ 30 నుండి 800 °C ఉష్ణోగ్రత పరిధిలో నిమిషానికి 5 °C చొప్పున నిర్వహించబడుతుంది.
గ్లాస్-లైన్డ్ స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ నారో-బోర్ కాలమ్‌ల కొలతలు (100 × 1.8 మిమీ ఐడి) స్లర్రీ ప్యాకింగ్ పద్ధతిని ఉపయోగించి ప్యాక్ చేయబడ్డాయి, అదే విధానాన్ని Refలో ఉపయోగించారు.31.ఒక స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ కాలమ్ (గ్లాస్-లైన్డ్, 100 × 1.8 మిమీ ఐడి) 1 µm ఫ్రిట్‌తో కూడిన అవుట్‌లెట్ ఫిట్టింగ్‌ను స్లర్రీ ప్యాకర్‌కి (ఆల్‌టెక్ డీర్‌ఫీల్డ్, IL, USA) కనెక్ట్ చేశారు. 150 mg కంటే 150 mg కంటే 150 mg స్టోరేజ్‌లో స్టేషనరీ ఫేజ్ స్లర్రీని సిద్ధం చేయండి. స్లర్రీ ద్రావకం వలె అలాగే ప్రొపెల్లింగ్ ద్రావకం వలె ఉపయోగించబడుతుంది. 10 నిమిషాలకు 100 MP, 15 నిమిషాలకు 80 MP, మరియు 30 నిమిషాలకు 60 MP ఒత్తిడిని వర్తింపజేయడం ద్వారా కాలమ్‌ను వరుసగా పూరించండి. ప్యాకింగ్ సమయంలో, మెకానికల్ వైబ్రేషన్ రెండు GC కాలమ్ షేకర్‌లతో వర్తించబడుతుంది (Alltech, Deerfield, IL, USAform యొక్క ప్రెజర్ ప్యాక్ ప్యాక్ మరియు sluni కాలమ్‌ని నెమ్మదిగా విడుదల చేయడానికి. కాలమ్ లోపల ఏదైనా నష్టం జరగకుండా నిరోధించడానికి. స్లర్రి ప్యాకింగ్ యూనిట్ నుండి కాలమ్‌ను డిస్‌కనెక్ట్ చేయండి మరియు దాని పనితీరును తనిఖీ చేయడానికి ఇన్‌లెట్ మరియు LC సిస్టమ్‌కు మరొక ఫిట్టింగ్‌ను కనెక్ట్ చేయండి.
LC పంప్ (10AD షిమాడ్జు, జపాన్), 50nL ఇంజెక్షన్ లూప్‌తో కూడిన ఇంజెక్టర్ (వాల్కో (USA) C14 W.05), మెమ్బ్రేన్ డీగాసర్ (షిమాడ్జు DGU-14A), UV-VIS కేశనాళిక విండో నిర్మించబడింది, ప్రత్యేక µLC పరికరాన్ని గుర్తించే సాధనం (UV-2075) మరియు గ్లాస్ మినీ క్లాస్‌కి కనెక్టింగ్ చాలా చిన్నది. అదనపు కాలమ్ బ్యాండ్ విస్తరణ ప్రభావాన్ని అంచనా వేయండి. ప్యాకేజింగ్ తర్వాత, కేశనాళికలు (50 μm id 365 మరియు తగ్గించే యూనియన్ కేశనాళికలు (50 μm) తగ్గించే యూనియన్ యొక్క 1/16″ అవుట్‌లెట్‌లో ఇన్‌స్టాల్ చేయబడ్డాయి. Multichro 2000 Multichro 2000 పరీక్ష సాఫ్ట్‌వేర్‌లో Multichro 2000 శోషక సాఫ్ట్‌వేర్‌ని ఉపయోగించి డేటా సేకరణ మరియు క్రోమాటోగ్రాఫిక్ ప్రాసెసింగ్ జరిగింది. గ్రాఫిక్ డేటాను OriginPro8 (నార్థాంప్టన్, MA) విశ్లేషించింది.
హ్యూమన్ సీరం నుండి అల్బుమిన్, లైయోఫైలైజ్డ్ పౌడర్, ≥ 96% (అగరోస్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్) 3 mg ట్రిప్సిన్ (1.5 mg), 4.0 M యూరియా (1 mL), మరియు 0.2 M అమ్మోనియం బైకార్బోనేట్ (1 mL)తో కలుపుతారు. ఈ ద్రావణాన్ని 10 నిమిషాల పాటు కదిలించి, 10 నిమిషాలకు 1 ° C తర్వాత 3 గంటలు, 7 గంటల నీటి స్నానంలో ఉంచారు. 1% TFA. ద్రావణాన్ని ఫిల్టర్ చేసి 4 °C కంటే తక్కువ నిల్వ చేయండి.
పెప్టైడ్ మిశ్రమాలు మరియు HSA ట్రిప్సిన్ డైజెస్ట్‌ల విభజన PMP నిలువు వరుసలపై విడిగా మూల్యాంకనం చేయబడింది. PMP కాలమ్ ద్వారా HSA యొక్క పెప్టైడ్ మిశ్రమం మరియు ట్రిప్సిన్ డైజెస్ట్‌ల విభజనను తనిఖీ చేయండి మరియు ఫలితాలను Ascentis Express RP-Amide కాలమ్‌తో సరిపోల్చండి. సైద్ధాంతిక ప్లేట్ సంఖ్య ఈ క్రింది విధంగా లెక్కించబడుతుంది:
బేర్ సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బంధిత సిలికా కణాల SEM చిత్రాలు FIGలో చూపబడ్డాయి.2 .బేర్ సిలికా కణాల (A, B) యొక్క SEM చిత్రాలు, మా మునుపటి అధ్యయనాలకు భిన్నంగా, ఈ కణాలు గోళాకారంలో ఉంటాయి, ఇందులో కణాలు పొడుగుగా లేదా క్రమరహిత సమరూపతను కలిగి ఉంటాయి. లిగాండ్-బంధిత సిలికా కణాల ఉపరితలం (C, D) ఉపరితలం కంటే సున్నితంగా ఉంటుంది. సిలికా కణాలు.
బేర్ సిలికా కణాలు (A, B) మరియు లిగాండ్-బంధిత సిలికా కణాలు (C, D) యొక్క ఎలక్ట్రాన్ మైక్రోస్కోప్ చిత్రాలను స్కాన్ చేయడం.
బేర్ సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బంధిత సిలికా రేణువుల కణ పరిమాణం పంపిణీలు మూర్తి 3(A)లో చూపబడ్డాయి. రసాయన సవరణ తర్వాత సిలికా కణాల పరిమాణం పెరిగినట్లు వాల్యూమ్ ఆధారిత కణ పరిమాణం పంపిణీ వక్రతలు చూపించాయి (Fig. 3A). కణ పరిమాణం పంపిణీ డేటా ప్రస్తుత అధ్యయనం (పరిమాణం-0 ఆధారిత సిలికా కణాల పంపిణీ డేటా). .5), PMP 3.36 μm, మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోలిస్తే ప్రకటన (0.5) విలువ 3.05 μm (పాలీస్టైరిన్-బౌండ్ సిలికా పార్టికల్స్) 34. ఈ బ్యాచ్ మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోలిస్తే సన్నగా కణ పరిమాణం పంపిణీని కలిగి ఉంది, దీనికి కారణం PEG, యూరియా మరియు మిశ్రమం యొక్క పెద్ద పరిమాణంలో PEG, యూరియా మరియు AC TMOS యొక్క రియాక్షన్ పరిమాణాల పరిమాణం కంటే పెద్దది. పాలీస్టైరిన్-బౌండ్ సిలికా పార్టికల్ ఫేజ్ మేము ఇంతకుముందు అధ్యయనం చేసాము. దీని అర్థం స్టైరీన్‌తో సిలికా కణాల ఉపరితల కార్యాచరణ సిలికా ఉపరితలంపై పాలీస్టైరిన్ పొరను (0.97 µm) మాత్రమే నిక్షిప్తం చేస్తుంది, అయితే PMP దశలో పొర మందం 1.38 µm.
బేర్ సిలికా పార్టికల్స్ మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా పార్టికల్స్ యొక్క కణ పరిమాణం పంపిణీ (A) మరియు పోర్ సైజు పంపిణీ (B).
ప్రస్తుత అధ్యయనం యొక్క సిలికా కణాల యొక్క రంధ్ర పరిమాణం, రంధ్ర పరిమాణం మరియు ఉపరితల వైశాల్యం టేబుల్ 1(B)లో ఇవ్వబడ్డాయి. బేర్ సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బంధిత సిలికా కణాల యొక్క PSD ప్రొఫైల్‌లు మూర్తి 3(B)లో చూపబడ్డాయి. ఫలితాలు మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోల్చవచ్చు. ఫలితాలు బేర్ మరియు 1 లిగాండ్ యొక్క సంబంధిత పరిమాణాలు 2, 1 లిగాండ్-బౌండ్, 2, 1 లిగాండ్ యొక్క సంబంధిత పరిమాణాలు సూచిస్తాయి. టేబుల్ 1(B)లో చూపిన విధంగా రసాయన సవరణ తర్వాత రంధ్ర పరిమాణం 69 తగ్గుతుంది మరియు వక్రరేఖ యొక్క మార్పు అంజీర్ 3(B)లో చూపబడింది .అదే విధంగా, రసాయన మార్పు తర్వాత సిలికా కణాల రంధ్ర పరిమాణం 0.67 నుండి 0.58 cm3/g వరకు తగ్గింది. ప్రస్తుతం అధ్యయనం చేసిన సిలికా 1వ భాగం యొక్క నిర్దిష్ట ఉపరితల వైశాల్యం ప్రస్తుతం అధ్యయనం చేసిన 1 g/2 భాగము యొక్క నిర్దిష్ట ఉపరితల వైశాల్యం. 4 m2/g).టేబుల్ 1(B)లో చూపిన విధంగా, సిలికా కణాల ఉపరితల వైశాల్యం (m2/g) కూడా రసాయన మార్పు తర్వాత 116 m2/g నుండి 105 m2/gకి తగ్గింది.
నిశ్చల దశ యొక్క మౌళిక విశ్లేషణ ఫలితాలు టేబుల్ 2లో చూపబడ్డాయి. ప్రస్తుత నిశ్చల దశ యొక్క కార్బన్ లోడింగ్ 6.35%, ఇది మా మునుపటి అధ్యయనం యొక్క కార్బన్ లోడింగ్ కంటే తక్కువగా ఉంది (పాలీస్టైరిన్ బంధిత సిలికా కణాలు, వరుసగా 7.93% 35 మరియు 10.21%) 42. ప్రస్తుత దశలో SP యొక్క తయారీలో తక్కువ, ప్రస్తుత దశలో కార్బన్ లోడ్ చేయడంలో తక్కువ. స్టైరీన్, ఫినైల్‌మలైమైడ్-మిథైల్వినైలిసోసైనేట్ (PCMP) మరియు 4-హైడ్రాక్సీ-TEMPO వంటి కొన్ని ధ్రువ లిగాండ్‌లు ఉపయోగించబడ్డాయి. ప్రస్తుత నిశ్చల దశలో నత్రజని బరువు శాతం 2.21%, ఇది 0.1735 మరియు 0.85%తో పోల్చితే, మునుపటి దశల ప్రకారం, ఇది ప్రస్తుత దశలో ఉన్న నత్రజని యొక్క బరువును బట్టి 0.85%. phenylmaleimide. అదేవిధంగా, ఉత్పత్తుల కార్బన్ లోడింగ్‌లు (4) మరియు (5) వరుసగా 2.7% మరియు 2.9%, అయితే తుది ఉత్పత్తి (6) యొక్క కార్బన్ లోడింగ్ 6.35%, టేబుల్ 2లో చూపబడింది. బరువు తగ్గడం PMP స్టేషనరీ ఫేజ్‌తో తనిఖీ చేయబడింది మరియు TGA 8 వక్రరేఖలో చూపబడిన బరువు తగ్గింపు వక్రరేఖ 4లో చూపబడింది. కార్బన్ లోడింగ్ (6.35%)తో మంచి ఒప్పందం ఎందుకంటే లిగాండ్‌లు C మాత్రమే కాకుండా N, O మరియు H కూడా కలిగి ఉంటాయి.
ఫినైల్‌మలైమైడ్-మిథైల్వినైలిసోసైనేట్ లిగాండ్‌ను సిలికా కణాల ఉపరితల మార్పు కోసం ఎంచుకున్నారు ఎందుకంటే ఇది ధ్రువ ఫినైల్‌మలైమైడ్ సమూహాలు మరియు వినైలిసోసైనేట్ సమూహాలను కలిగి ఉంటుంది. వినైల్ ఐసోసైనేట్ సమూహాలు రాడికల్ పాలిమరైజేషన్ ద్వారా స్టైరీన్‌తో మరింత ప్రతిస్పందించగలవు. రెండవ కారణం ఏమిటంటే, మధ్యస్థమైన పాలీమరైజేషన్ మరియు బలమైన సంకర్షణ సమూహంతో మితమైన పరస్పర చర్యను చొప్పించడం. స్థిరమైన దశ, సాధారణ pH వద్ద phenylmaleimide మోయిటీకి వర్చువల్ ఛార్జ్ ఉండదు. నిశ్చల దశ యొక్క ధ్రువణత స్టైరీన్ యొక్క సరైన మొత్తం మరియు ఫ్రీ రాడికల్ పాలిమరైజేషన్ యొక్క ప్రతిచర్య సమయం ద్వారా నియంత్రించబడుతుంది. ప్రతిచర్య యొక్క చివరి దశ (ఫ్రీ-రాడికల్ పాలిమరైజేషన్) కీలకం మరియు ఇది స్థిరమైన దశ యొక్క ధ్రువణతను మార్చగలదు. స్టైరిన్ మొత్తం మరియు ప్రతిచర్య సమయం స్థిరమైన దశ యొక్క కార్బన్ లోడింగ్‌ను పెంచింది మరియు దీనికి విరుద్ధంగా. స్టైరీన్ యొక్క వివిధ సాంద్రతలతో తయారు చేయబడిన SPలు వేర్వేరు కార్బన్ లోడింగ్‌లను కలిగి ఉంటాయి. మళ్లీ, ఈ స్థిరమైన దశలను స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ నిలువు వరుసలలోకి లోడ్ చేయండి మరియు వాటి క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పనితీరును తనిఖీ చేయండి (పీఎంపీని నియంత్రించడానికి దశలవారీగా ఎంపిక చేయబడింది. ధ్రువణత మరియు మంచి విశ్లేషణ నిలుపుదల.
ఐదు పెప్టైడ్ మిశ్రమాలు (గ్లై-టైర్, గ్లై-లెయు-టైర్, గ్లై-గ్లై-టైర్-ఆర్గ్, టైర్-ఇల్-గ్లై-సెర్-ఆర్గ్, ల్యూసిన్ ఎన్‌కెఫాలిన్) కూడా మొబైల్ ఫేజ్‌ని ఉపయోగించి PMP కాలమ్‌ని ఉపయోగించి మూల్యాంకనం చేయబడ్డాయి;60/40 (v/v) అసిటోనిట్రైల్/నీరు (0.1% TFA) 80 μL/min ప్రవాహం రేటుతో ఉంటుంది. సరైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితుల్లో, సైద్ధాంతిక ప్లేట్ సంఖ్య (N) ప్రతి నిలువు వరుస (100 × 1.8 మిమీ ఐడి) 20,000 ± 100 ² 3 ప్లేట్‌కు P 3/m విలువను ఇస్తుంది (200 ²). MP నిలువు వరుసలు మరియు క్రోమాటోగ్రామ్‌లు మూర్తి 5Aలో చూపబడ్డాయి. అధిక ప్రవాహం రేటు (700 μL/min) వద్ద PMP కాలమ్‌పై వేగవంతమైన విశ్లేషణ, ఒక నిమిషంలో ఐదు పెప్టైడ్‌లు ఎల్యూట్ చేయబడ్డాయి, N విలువలు చాలా బాగున్నాయి, ప్రతి కాలమ్‌కు 13,500 ± 330 (100 × 1.8 mm id వరకు) (100 × 1.8 mm id వరకు), పునరుత్పత్తిని తనిఖీ చేయడానికి ఒకే పరిమాణంలో ఉన్న నిలువు వరుసలు (100 × 1.8 mm id) మూడు వేర్వేరు PMP స్టేషనరీ ఫేజ్‌తో ప్యాక్ చేయబడ్డాయి. ప్రతి కాలమ్‌కు సంబంధించిన విశ్లేషణ ఏకాగ్రత సరైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితులు మరియు సైద్ధాంతిక ప్లేట్ల సంఖ్య N మరియు ప్రతి నిలువు వరుసలో ఒకే పరీక్ష మిశ్రమాన్ని వేరు చేయడానికి నిలుపుదల సమయాన్ని ఉపయోగించి రికార్డ్ చేయబడింది. టేబుల్ 3లో చూపిన విధంగా చాలా తక్కువ %RSD విలువలతో బాగా సంబంధం కలిగి ఉంటుంది.
PMP కాలమ్ (B) మరియు Ascentis Express RP-Amide కాలమ్ (A)పై పెప్టైడ్ మిశ్రమాన్ని వేరు చేయడం;మొబైల్ దశ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP కాలమ్ కొలతలు (100 × 1.8 mm id);విశ్లేషణాత్మక సమ్మేళనాల ఎలుషన్ క్రమం: 1 (గ్లై-టైర్), 2 (గ్లై-లెయు-టైర్), 3 (గ్లై-గ్లై-టైర్-ఆర్గ్), 4 (టైర్-ఇల్-గ్లై-సెర్-ఆర్గ్) మరియు 5 (ల్యూసిన్) యాసిడ్ ఎన్‌కెఫాలిన్)).
ఒక PMP కాలమ్ (100 × 1.8 mm id) అధిక పనితీరు గల లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీలో హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ యొక్క ట్రిప్టిక్ డైజెస్ట్‌లను వేరు చేయడం కోసం మూల్యాంకనం చేయబడింది. మూర్తి 6లోని క్రోమాటోగ్రామ్ నమూనా బాగా వేరు చేయబడిందని మరియు రిజల్యూషన్ చాలా బాగుందని చూపిస్తుంది. HSA డైజెస్ట్‌లు 100 µL/it3 నీటి ఫేజ్ మరియు 100 µL/0% నీటి దశ, క్రోమాటోగ్రామ్ (మూర్తి 6)లో చూపిన విధంగా, HSA జీర్ణక్రియ 17 పెప్టైడ్‌లకు అనుగుణంగా 17 శిఖరాలుగా విభజించబడింది. HSA డైజెస్ట్‌లోని ప్రతి శిఖరం యొక్క విభజన సామర్థ్యం లెక్కించబడుతుంది మరియు విలువలు టేబుల్ 5లో ఇవ్వబడ్డాయి.
HSA (100 × 1.8 mm id) యొక్క ట్రిప్టిక్ డైజెస్ట్ PMP కాలమ్‌పై వేరు చేయబడింది;ప్రవాహం రేటు (100 µL/నిమి), మొబైల్ ఫేజ్ 60/40 అసిటోనిట్రైల్/నీరు 0.1% TFA.
ఇక్కడ L అనేది కాలమ్ పొడవు, η అనేది మొబైల్ దశ యొక్క స్నిగ్ధత, ΔP అనేది కాలమ్ బ్యాక్ ప్రెజర్, మరియు u అనేది మొబైల్ దశ యొక్క సరళ వేగం. PMP కాలమ్ యొక్క పారగమ్యత 2.5 × 10-14 m2, ప్రవాహం రేటు 25 μL/min, మరియు 60/40 v/v కాలమ్ 1 MP నీటికి 1 MP సామర్థ్యం. 8 మిమీ ఐడి) మా మునుపటి అధ్యయనం మాదిరిగానే ఉంది Ref.34. ఉపరితల పోరస్ కణాలతో ప్యాక్ చేయబడిన నిలువు వరుస యొక్క పారగమ్యత: 1.3 μm కణాలకు 1.7 × 10-15, 1.7 μm కణాలకు 3.1 × 10-15, 1.7 μm కణాలకు 5.2 × 5 మరియు 10-2 × 10-2 × కణాలు 5 μm కణాలకు 43. కాబట్టి, PMP దశ యొక్క పారగమ్యత 5 μm కోర్-షెల్ కణాల మాదిరిగానే ఉంటుంది.
ఇక్కడ Wx అనేది క్లోరోఫామ్‌తో ప్యాక్ చేయబడిన కాలమ్ యొక్క బరువు, Wy అనేది మిథనాల్‌తో ప్యాక్ చేయబడిన కాలమ్ యొక్క బరువు, మరియు ρ అనేది ద్రావకం యొక్క సాంద్రత. మిథనాల్ (ρ = 0.7866) మరియు క్లోరోఫామ్ (ρ = 1.484) సాంద్రతలు (ρ = 1.484).సిలికా యొక్క మొత్తం సచ్ఛిద్రత 1.3 సిలికా PARTIC 8 మిమీలు (1.3 C10 mm) మేము ఇంతకుముందు అధ్యయనం చేసిన C18-యూరియా నిలువు వరుసలు 31 వరుసగా 0.63 మరియు 0.55. దీనర్ధం యూరియా లిగాండ్‌ల ఉనికి నిశ్చల దశ యొక్క పారగమ్యతను తగ్గిస్తుంది. మరోవైపు, PMP కాలమ్ యొక్క మొత్తం సచ్ఛిద్రత (100 × 1.8 mm id) 0.60 స్తంభాల CMP 1 భాగం కంటే తక్కువ PMP సిల్‌బ్యాండ్‌తో ఉంటుంది. icles ఎందుకంటే C18-రకం స్థిర దశల్లో C18 లిగాండ్‌లు సిలికా కణాలకు సరళ గొలుసులుగా జతచేయబడతాయి, అయితే పాలీస్టైరిన్-రకం స్థిర దశల్లో, సాపేక్షంగా మందపాటి పాలిమర్ పొర దాని చుట్టూ ఏర్పడుతుంది. ఒక సాధారణ ప్రయోగంలో, నిలువు సారంధ్రత ఇలా గణించబడుతుంది:
మూర్తి 7A,B అదే ఎలుషన్ షరతులను (అంటే, 60/40 ACN/H2O మరియు 0.1% TFA) ఉపయోగించి PMP కాలమ్ (100 × 1.8 mm id) మరియు Ascentis Express RP-Amide నిలువు వరుస (100 × 1.8 mm id) చూపుతుంది.) వాన్ డీమ్టర్ ప్లాట్లు.ఎంచుకున్న పెప్టైడ్ మిశ్రమాలు (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/లో తయారు చేయబడ్డాయి/ రెండు నిలువు వరుసల కనిష్ట ప్రవాహం రేటు 800 µL µL/నిమి ) PMP కాలమ్ మరియు Ascentis ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-Amide నిలువు వరుసలు వరుసగా 2.6 µm మరియు 3.9 µm ఉన్నాయి. HETP విలువలు PMP నిలువు (100 × 1.8 mm id) యొక్క విభజన సామర్థ్యం వాణిజ్యపరంగా అందుబాటులో ఉన్న Ascentis Express Demide × 1000 కాలమ్‌లో ఉన్న అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ వాన్‌లోట్ × 1.Am0 కాలమ్‌లో చాలా మెరుగ్గా ఉందని సూచిస్తున్నాయి. 7(A) మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోలిస్తే పెరుగుతున్న ప్రవాహంతో N విలువలో తగ్గుదల గణనీయంగా లేదని చూపిస్తుంది. Ascentis Express RP-Amide కాలమ్‌తో పోలిస్తే PMP కాలమ్ (100 × 1.8 mm id) యొక్క అధిక విభజన సామర్థ్యం ప్రస్తుత పనిలో ఉపయోగించిన కణ ఆకారం, పరిమాణం మరియు సంక్లిష్ట కాలమ్ ప్యాకింగ్ విధానాలలో మెరుగుదలలపై ఆధారపడి ఉంటుంది.
(A) 0.1% TFAతో 60/40 ACN/H2Oలో PMP కాలమ్ (100 × 1.8 mm id) ఉపయోగించి పొందిన వాన్ డీమ్‌టర్ ప్లాట్ (HETP వర్సెస్ మొబైల్ ఫేజ్ లీనియర్ వెలాసిటీ) 0.1% TFAతో 60/40 ACN/H2Oలో.
హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీలో హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ (HAS) యొక్క సింథటిక్ పెప్టైడ్ మిశ్రమాలు మరియు ట్రైప్సిన్ డైజెస్ట్‌లను వేరు చేయడానికి ధ్రువ-ఎంబెడెడ్ పాలీస్టైరిన్ స్టేషనరీ ఫేజ్ తయారు చేయబడింది మరియు మూల్యాంకనం చేయబడింది. సిలికా కణాలు, నిశ్చల దశ యొక్క నియంత్రిత సంశ్లేషణ మరియు సంక్లిష్ట కాలమ్ ప్యాకింగ్. అధిక విభజన సామర్థ్యంతో పాటు, అధిక ప్రవాహ రేటులో తక్కువ కాలమ్ బ్యాక్ ప్రెజర్ ఈ స్థిర దశ యొక్క మరొక ప్రయోజనం.PMP నిలువు మంచి పునరుత్పత్తిని ప్రదర్శిస్తాయి మరియు పెప్టైడ్ మిశ్రమాలను మరియు ట్రిప్సిన్ జీర్ణక్రియను విశ్లేషించడానికి ఉపయోగించవచ్చు. లు లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీలో ఉన్నాయి. భవిష్యత్తులో, ప్రోటీన్లు మరియు మోనోక్లోనల్ యాంటీబాడీల విభజన కోసం PMP నిలువు వరుసలు కూడా మూల్యాంకనం చేయబడతాయి.
ఫీల్డ్, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. రివర్స్డ్ ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా పెప్టైడ్ సెపరేషన్ సిస్టమ్స్ పై పరిశోధన పార్ట్ I: డెవలప్‌మెంట్ ఆఫ్ ఎ కాలమ్ క్యారెక్టరైజేషన్ ప్రోటోకాల్.J.క్రోమాటోగ్రఫీ.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
గోమెజ్, బి. మరియు ఇతరులు. అంటు వ్యాధుల చికిత్స కోసం రూపొందించిన మెరుగైన క్రియాశీల పెప్టైడ్‌లు.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. సింథటిక్ థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్స్: సైన్స్ అండ్ ది మార్కెట్. డ్రగ్ డిస్కవరీ.15 (1-2) ఈరోజు, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.009.1009.1009.
Xie, F., స్మిత్, RD & షెన్, Y. అడ్వాన్స్‌డ్ ప్రోటీమిక్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ.J.క్రోమాటోగ్రఫీ.A 1261, 78–90 (2012).
లియు, W. et al.అధునాతన లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ-మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ విస్తృతంగా లక్ష్యంగా ఉన్న జీవక్రియలు మరియు ప్రోటీమిక్స్.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019) యొక్క విలీనాన్ని అనుమతిస్తుంది.
చెస్నట్, SM & సాలిస్‌బరీ, JJ డ్రగ్ డెవలప్‌మెంట్‌లో UHPLC పాత్ర.J.సెప్టెంబరు. సైన్స్.30(8), 1183-1190 (2007).
వు, N. & క్లాసెన్, AM వేగవంతమైన విభజనల కోసం అల్ట్రాహై ప్రెజర్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క ప్రాథమిక మరియు ఆచరణాత్మక అంశాలు.J.సెప్టెంబరు. సైన్స్.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
రెన్, SA & Tchelitcheff, P. డ్రగ్ డెవలప్‌మెంట్‌లో అల్ట్రా-హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ అప్లికేషన్.J.క్రోమాటోగ్రఫీ.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.ఎంట్రోవైరస్‌ల సమర్థవంతమైన శుద్దీకరణ కోసం ఆయిల్-ఇన్-వాటర్ హై ఇంటర్నల్ ఫేజ్ ఎమల్షన్‌ల నుండి తయారు చేయబడిన మోనోలిథిక్ మాక్రోపోరస్ హైడ్రోజెల్స్.కెమికల్.బ్రిటన్.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA ప్రోటీమిక్స్‌లో లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పాత్ర.J.క్రోమాటోగ్రఫీ.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్స్ మరియు ప్రొటీన్‌ల రివర్స్డ్-ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ విభజనలలో ఎమర్జింగ్ ట్రెండ్స్: థియరీ అండ్ అప్లికేషన్స్.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC మొదటి మరియు రెండవ విభజన కొలతలలో వేర్వేరు pH విలువలను ఉపయోగించి RP-RP-HPLC వ్యవస్థను ఉపయోగించి పెప్టైడ్‌ల యొక్క రెండు-డైమెన్షనల్ విభజన.J.సెప్టెంబరు సైన్స్.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. C18 సబ్-2 μm పూర్తిగా మరియు ఉపరితలంగా పోరస్ కణాలతో ప్యాక్ చేయబడిన అధిక-సామర్థ్య క్రోమాటోగ్రాఫిక్ నిలువు వరుసల యొక్క మాస్ బదిలీ లక్షణాలు మరియు గతిశీల పనితీరు పరిశోధించబడ్డాయి.J.సెప్టెంబరు సైన్స్.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
పియోవేసానా, S. et al. ప్లాంట్ బయోయాక్టివ్ పెప్టైడ్స్.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/02021801801801801801801801801801801801801801800180180180180180180180180160000000000000000000000000000000000000000006
ముల్లెర్, JB మరియు ఇతరులు. ది కింగ్‌డమ్ ఆఫ్ లైఫ్. ప్రకృతి 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.సన్నాహక లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్‌ల డౌన్‌స్ట్రీమ్ ప్రాసెసింగ్. మాలిక్యూల్ (బాసెల్, స్విట్జర్లాండ్) 26(15), 4688(2021).
యాంగ్, Y. & జెంగ్, X. మిక్స్‌డ్-మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు బయోపాలిమర్‌లకు దాని అప్లికేషన్.J.క్రోమాటోగ్రఫీ.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
జావో, G., డాంగ్, X.-Y.& Sun, Y. మిశ్రమ-మోడ్ ప్రోటీన్ క్రోమాటోగ్రఫీ కోసం లిగాండ్స్: సూత్రం, క్యారెక్టరైజేషన్ మరియు డిజైన్.J.బయోటెక్నాలజీ.144(1), 3-11 (2009).