Nature.com ని సందర్శించినందుకు ధన్యవాదాలు. మీరు పరిమిత CSS మద్దతు ఉన్న బ్రౌజర్ వెర్షన్‌ను ఉపయోగిస్తున్నారు. ఉత్తమ అనుభవం కోసం, మీరు నవీకరించబడిన బ్రౌజర్‌ను ఉపయోగించాలని మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము (లేదా ఇంటర్నెట్ ఎక్స్‌ప్లోరర్‌లో అనుకూలత మోడ్‌ను నిలిపివేయండి). అదనంగా, కొనసాగుతున్న మద్దతును నిర్ధారించడానికి, మేము శైలులు మరియు జావాస్క్రిప్ట్ లేకుండా సైట్‌ను చూపుతాము.
ఒకేసారి మూడు స్లయిడ్‌ల కారౌసెల్‌ను ప్రదర్శిస్తుంది. ఒకేసారి మూడు స్లయిడ్‌ల ద్వారా కదలడానికి మునుపటి మరియు తదుపరి బటన్‌లను ఉపయోగించండి లేదా ఒకేసారి మూడు స్లయిడ్‌ల ద్వారా కదలడానికి చివర ఉన్న స్లయిడర్ బటన్‌లను ఉపయోగించండి.
సోల్-జెల్ పద్ధతి ద్వారా పోరస్ సిలికా కణాలను తయారు చేసి, వైడ్-పోర్ కణాలను పొందేందుకు కొన్ని మార్పులతో తయారు చేశారు. ఈ కణాలను N-ఫీనైల్మలైమైడ్-మిథైల్వినైల్ ఐసోసైనేట్ (PMI) మరియు స్టైరీన్‌తో ఉత్పన్నం చేసి రివర్స్ చైన్ ట్రాన్స్‌ఫర్-ఫ్రాగ్మెంటేషన్ (RAFT) పాలిమరైజేషన్ ద్వారా N-ఫీనైల్మలైమైడ్ ఇంటర్కలేటెడ్ పాలిమైడ్‌లను ఉత్పత్తి చేశారు. స్టైరీన్ (PMP) స్టేషనరీ దశ. ఇరుకైన బోర్ స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ స్తంభాలు (100 × 1.8 మిమీ లోపలి వ్యాసం) స్లర్రీ ప్యాకింగ్‌తో ప్యాక్ చేయబడ్డాయి. ఐదు పెప్టైడ్‌లు (గ్లై-టైర్, గ్లై-ల్యూ-టైర్, గ్లై-గ్లై-టైర్-ఆర్గ్, టైర్-ఇల్-గ్లై-సెర్-ఆర్గ్, ల్యూ అమైనో ఆమ్లం ఎన్‌కెఫాలిన్) మరియు హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ (HAS) యొక్క ట్రిప్టిక్ హైడ్రోలైజేట్‌తో కూడిన సింథటిక్ పెప్టైడ్‌ల మిశ్రమాన్ని వేరు చేయడానికి PMP కాలమ్ యొక్క క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పనితీరును అంచనా వేశారు. సరైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితులలో, పెప్టైడ్‌ల మిశ్రమంతో కూడిన ప్లేట్‌ల సైద్ధాంతిక సంఖ్య 280,000 ప్లేట్లు/చ.మీ.కు చేరుకుంది. అభివృద్ధి చెందిన కాలమ్ యొక్క విభజన పనితీరును వాణిజ్య అసెన్టిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్‌తో పోల్చినప్పుడు, PMP కాలమ్ యొక్క విభజన సామర్థ్యం విభజన సామర్థ్యం మరియు స్పష్టత పరంగా వాణిజ్య కాలమ్ కంటే మెరుగైనదని గమనించబడింది.
ఇటీవలి సంవత్సరాలలో బయోఫార్మాస్యూటికల్ పరిశ్రమ మార్కెట్ వాటాలో గణనీయమైన పెరుగుదలతో విస్తరిస్తున్న ప్రపంచ మార్కెట్‌గా మారింది. బయోఫార్మాస్యూటికల్ పరిశ్రమ యొక్క పేలుడు పెరుగుదలతో1,2,3 పెప్టైడ్ మరియు ప్రోటీన్ విశ్లేషణకు చాలా అవసరం ఉంది. లక్ష్య పెప్టైడ్‌తో పాటు, పెప్టైడ్ సంశ్లేషణ సమయంలో వివిధ మలినాలు ఏర్పడతాయి, కాబట్టి పెప్టైడ్ యొక్క కావలసిన స్వచ్ఛతను పొందడానికి క్రోమాటోగ్రాఫిక్ శుద్దీకరణ అవసరం. ఒకే నమూనాలో పెద్ద సంఖ్యలో గుర్తించదగిన జాతులు ఉండటం వల్ల శరీర ద్రవాలు, కణజాలాలు మరియు కణాలలో ప్రోటీన్ల విశ్లేషణ మరియు లక్షణం చాలా సవాలుతో కూడుకున్న పని. పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌లను క్రమం చేయడానికి మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ ఒక ప్రభావవంతమైన సాధనం అయినప్పటికీ, అటువంటి నమూనాలను నేరుగా మాస్ స్పెక్ట్రోమీటర్‌లోకి ప్రవేశపెడితే, విభజన సంతృప్తికరంగా ఉండదు. MS విశ్లేషణకు ముందు లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (LC) చేయడం ద్వారా ఈ సమస్యను పరిష్కరించవచ్చు, ఇది ఇచ్చిన సమయంలో మాస్ స్పెక్ట్రోమీటర్‌లోకి ప్రవేశించే విశ్లేషణల మొత్తాన్ని తగ్గిస్తుంది4,5,6. అదనంగా, ద్రవ దశ విభజన సమయంలో విశ్లేషణలు ఇరుకైన ప్రాంతంలో కేంద్రీకరించబడతాయి, తద్వారా ఈ విశ్లేషణలను కేంద్రీకరించి MS గుర్తింపు యొక్క సున్నితత్వాన్ని పెంచుతాయి. లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (LC) గత దశాబ్దంలో గణనీయంగా అభివృద్ధి చెందింది మరియు ప్రోటీమిక్ విశ్లేషణకు విస్తృతంగా ఉపయోగించే పద్ధతిగా మారింది7,8,9,10.
ఆక్టాడెసిల్-మోడిఫైడ్ సిలికా (ODS) ను స్థిర దశగా ఉపయోగించి పెప్టైడ్‌ల మిశ్రమాలను శుద్ధి చేయడానికి మరియు వేరు చేయడానికి రివర్స్-ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (RP-LC) విస్తృతంగా ఉపయోగించబడుతుంది. అయితే, వాటి సంక్లిష్ట నిర్మాణం మరియు యాంఫోటెరిక్ స్వభావం కారణంగా,14,15 RP స్థిర దశలు పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల సంతృప్తికరమైన విభజనను అందించలేవు. అందువల్ల, ధ్రువ మరియు ధ్రువేతర భాగాలతో పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల విశ్లేషణకు ఈ విశ్లేషణలను సంకర్షణ చేయడానికి మరియు నిలుపుకోవడానికి ప్రత్యేకంగా రూపొందించిన స్థిర దశలు అవసరం16. మల్టీమోడల్ పరస్పర చర్యలను అందించే మిశ్రమ క్రోమాటోగ్రఫీ, పెప్టైడ్‌లు, ప్రోటీన్లు మరియు ఇతర సంక్లిష్ట మిశ్రమాలను వేరు చేయడానికి RP-LCకి ప్రత్యామ్నాయంగా ఉంటుంది. అనేక మిశ్రమ-రకం స్థిర దశలు తయారు చేయబడ్డాయి మరియు ఈ స్థిర దశలతో నిండిన నిలువు వరుసలను పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌లను వేరు చేయడానికి ఉపయోగించారు17,18,19,20,21. పోలార్ మరియు నాన్-పోలార్ గ్రూపుల ఉనికి కారణంగా, మిశ్రమ మోడ్ స్టేషనరీ దశలు (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, పోలార్ ఇంటర్కలేషన్/RPLC) పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల విభజనకు అనుకూలంగా ఉంటాయి22,23,24,25,26,27,28. , సమయోజనీయ బంధంతో కూడిన పోలార్ గ్రూపులతో పోలార్ ఇంటర్కలేటెడ్ స్టేషనరీ దశలు పోలార్ మరియు నాన్-పోలార్ అనలైట్‌లకు మంచి విభజన సామర్థ్యాలను మరియు ప్రత్యేకమైన ఎంపికను చూపుతాయి ఎందుకంటే విభజన అనలైట్ మరియు స్టేషనరీ దశ మధ్య పరస్పర చర్యపై ఆధారపడి ఉంటుంది మల్టీమోడల్ ఇంటరాక్షన్‌లు 29,30,31,32. ఇటీవల, జాంగ్ మరియు ఇతరులు 30 పాలిమైన్‌ల యొక్క బెహెనిల్-టెర్మినేటెడ్ స్టేషనరీ దశలను పొందారు మరియు హైడ్రోకార్బన్‌లు, యాంటిడిప్రెసెంట్‌లు, ఫ్లేవనాయిడ్‌లు, న్యూక్లియోసైడ్‌లు, ఈస్ట్రోజెన్‌లు మరియు కొన్ని ఇతర అనలైట్‌లను విజయవంతంగా వేరు చేశారు. పోలార్ ఎంబెడెడ్ స్టేషనరీ పదార్థం పోలార్ మరియు నాన్-పోలార్ గ్రూపులను కలిగి ఉంటుంది, కాబట్టి దీనిని పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌లను హైడ్రోఫోబిక్ మరియు హైడ్రోఫిలిక్ భాగాలుగా వేరు చేయడానికి ఉపయోగించవచ్చు. పోలార్ ఇన్‌లైన్ నిలువు వరుసలు (ఉదా., అమైడ్ ఇన్‌లైన్‌తో కూడిన C18 నిలువు వరుసలు) అసెన్టిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ నిలువు వరుసలు అనే వాణిజ్య పేరుతో అందుబాటులో ఉన్నాయి, అయితే ఈ నిలువు వరుసలు అమైన్ 33 విశ్లేషణకు మాత్రమే ఉపయోగించబడ్డాయి.
ప్రస్తుత అధ్యయనంలో, పెప్టైడ్ విభజన మరియు ట్రిప్టిక్ HSA క్లీవేజ్ కోసం ఒక పోలార్ ఎంబెడింగ్ స్టేషనరీ ఫేజ్ (N-phenylmaleimide, ఎంబెడింగ్ పాలీస్టైరిన్) తయారు చేయబడింది మరియు మూల్యాంకనం చేయబడింది. స్థిర దశను సిద్ధం చేయడానికి ఈ క్రింది వ్యూహాన్ని ఉపయోగించారు. తయారీ పథకాలు 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39లో కొన్ని మార్పులతో, మా మునుపటి ప్రచురణలలో వివరించిన విధానాల ప్రకారం పోరస్ సిలికా కణాలు తయారు చేయబడ్డాయి. పెద్ద రంధ్ర పరిమాణాలతో సిలికా కణాలను పొందేందుకు యూరియా, పాలిథిలిన్ గ్లైకాల్ (PEG), TMOS మరియు సజల-ఎసిటిక్ ఆమ్లం యొక్క నిష్పత్తులు సర్దుబాటు చేయబడ్డాయి. రెండవది, ఒక కొత్త ఫినైల్మలేమైడ్-మిథైల్వినైల్ ఐసోసైనేట్ లిగాండ్‌ను సంశ్లేషణ చేశారు మరియు దాని ఉత్పన్నమైన సిలికా కణాలను పోలార్ ఎంబెడెడ్ స్టేషనరీ ఫేజ్‌లను సిద్ధం చేయడానికి ఉపయోగించారు. పొందిన స్టేషనరీ ఫేజ్‌ను ఆప్టిమైజ్ చేసిన ప్యాకింగ్ స్కీమ్ ప్రకారం స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ స్తంభంలో (లోపలి వ్యాసం 100 × 1.8 మిమీ) ప్యాక్ చేశారు. కాలమ్ లోపల ఏకరీతి పొరను నిర్ధారించడానికి కాలమ్ యొక్క ప్యాకింగ్ యాంత్రిక కంపనం ద్వారా సహాయపడుతుంది. ప్యాక్ చేయబడిన కాలమ్‌ను ఐదు పెప్టైడ్‌లతో కూడిన పెప్టైడ్‌ల మిశ్రమాన్ని (గ్లై-టైర్, గ్లై-ల్యూ-టైర్, గ్లై-గ్లై-టైర్-ఆర్గ్, టైర్-ఐల్-గ్లై-సెర్-ఆర్గ్, ల్యూసిన్-ఎన్‌కెఫాలిన్ పెప్టైడ్) వేరు చేయడానికి మూల్యాంకనం చేశారు. మరియు మానవ సీరం అల్బుమిన్ (HSA) యొక్క ట్రిప్టిక్ హైడ్రోలైసేట్‌లు. పెప్టైడ్ మిశ్రమం మరియు HSA ట్రిప్టిక్ డైజెస్ట్ మంచి రిజల్యూషన్ మరియు సామర్థ్యంతో వేరు చేయబడిందని గమనించబడింది. PMP కాలమ్ యొక్క విభజన సామర్థ్యాన్ని Ascentis Express RP-Amide కాలమ్‌తో పోల్చారు. PMP కాలమ్‌పై పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్లు మంచి రిజల్యూషన్ మరియు అధిక విభజన సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉన్నాయని గమనించబడింది మరియు PMP కాలమ్ యొక్క విభజన సామర్థ్యం Ascentis Express RP-Amide కాలమ్ కంటే ఎక్కువగా ఉందని గమనించబడింది.
PEG (పాలిథిలిన్ గ్లైకాల్), యూరియా, ఎసిటిక్ యాసిడ్, ట్రైమెథాక్సీఆర్థోసిలికేట్ (TMOS), ట్రైమెథైల్క్లోరోసిలేన్ (TMCS), ట్రిప్సిన్, హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ (HSA), అమ్మోనియం క్లోరైడ్, యూరియా, హెక్సామెథైల్మెథాక్రిలోయిల్డిసిలాజేన్ (HMDS), మెథాక్రిలోయిల్ క్లోరైడ్ (MC), స్టైరీన్, 4-హైడ్రాక్సీ- టెంపో, బెంజాయిల్ పెరాక్సైడ్ (BPO), HPLC కోసం అసిటోనిట్రైల్ (ACN), మిథనాల్, 2-ప్రొపనాల్ మరియు అసిటోన్. సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్ కంపెనీ (సెయింట్ లూయిస్, మిస్సోరి, USA).
యూరియా (8 గ్రా), పాలిథిలిన్ గ్లైకాల్ (8 గ్రా) మరియు 0.01 N. ఎసిటిక్ ఆమ్లం యొక్క 8 మి.లీ. మిశ్రమాన్ని 10 నిమిషాలు కదిలించి, 24 మి.లీ. TMOS ను ఐస్-కూలింగ్ కింద దానికి జోడించారు. ప్రతిచర్య మిశ్రమాన్ని 40°C వద్ద 6 గంటలు వేడి చేసి, ఆపై 120°C వద్ద 8 గంటలు స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ ఆటోక్లేవ్‌లో వేడి చేశారు. నీటిని డీకాంట్ చేసి, అవశేషాలను 70°C వద్ద 12 గంటలు ఎండబెట్టారు. ఎండిన మృదువైన బ్లాక్‌లను సజావుగా గ్రౌండ్ చేసి, 550°C వద్ద ఓవెన్‌లో 12 గంటలు కాల్సిన్ చేశారు. కణ పరిమాణాలు, రంధ్రాల పరిమాణం మరియు ఉపరితల వైశాల్యం యొక్క పునరుత్పత్తి సామర్థ్యాన్ని పరీక్షించడానికి మూడు బ్యాచ్‌లను తయారు చేసి వర్గీకరించారు.
పాలీస్టైరిన్ గొలుసులకు ధ్రువ సమూహం మరియు స్థిర దశ. తయారీ విధానం క్రింద వివరించబడింది.
N-ఫినైల్మలైమైడ్ (200 mg) మరియు మిథైల్ వినైల్ ఐసోసైనేట్ (100 mg) లను అన్‌హైడ్రస్ టోలుయెన్‌లో కరిగించి, ఆపై 0.1 ml 2,2′-అజోయిసోబ్యూటిరోనిట్రైల్ (AIBN) ను రియాక్షన్ ఫ్లాస్క్‌కు జోడించి ఫినైల్మలైమైడ్ మరియు మిథైల్ వినైల్ ఐసోసైనేట్ (PMCP) యొక్క కోపాలిమర్‌ను పొందారు. ఈ మిశ్రమాన్ని 60°C వద్ద 3 గంటలు వేడి చేసి, ఫిల్టర్ చేసి 40°C వద్ద ఓవెన్‌లో 3 గంటలు ఆరబెట్టారు.
ఎండిన సిలికా కణాలను (2 గ్రా) పొడి టోలుయెన్ (100 మి.లీ) లో చెదరగొట్టి, 500 మి.లీ రౌండ్ బాటమ్ ఫ్లాస్క్‌లో 10 నిమిషాలు కదిలించి సోనికేట్ చేశారు. PMCP (10 mg) ను టోలుయెన్‌లో కరిగించి, అదనపు ఫన్నెల్ ద్వారా రియాక్షన్ ఫ్లాస్క్‌కు డ్రాప్‌వైస్‌గా జోడించారు. మిశ్రమాన్ని 100°C వద్ద 8 గంటలు రిఫ్లక్స్ చేసి, ఫిల్టర్ చేసి, అసిటోన్‌తో కడిగి, 60°C వద్ద 3 గంటలు ఎండబెట్టారు. తరువాత, PMCP (100 గ్రా) తో సంబంధం ఉన్న సిలికా కణాలను టోలుయెన్ (200 మి.లీ) లో కరిగించారు మరియు 100 μl డైబ్యూటిల్టిన్ డైలారేట్ సమక్షంలో 4-హైడ్రాక్సీ-టెంపో (2 మి.లీ) ను దానికి ఉత్ప్రేరకంగా జోడించారు. మిశ్రమాన్ని 50°C వద్ద 8 గంటలు కదిలించి, ఫిల్టర్ చేసి 50°C వద్ద 3 గంటలు ఎండబెట్టారు.
TEMPO-PMCP (1.5 గ్రా) కు అనుసంధానించబడిన స్టైరీన్ (1 మి.లీ), బెంజాయిల్ పెరాక్సైడ్ BPO (0.5 మి.లీ) మరియు సిలికా కణాలను టోలుయిన్‌లో చెదరగొట్టి నైట్రోజన్‌తో శుద్ధి చేశారు. స్టైరీన్ యొక్క పాలిమరైజేషన్ 100°C వద్ద 12 గంటలు నిర్వహించబడింది. ఫలితంగా వచ్చిన ఉత్పత్తిని మిథనాల్‌తో కడిగి, రాత్రిపూట 60°C వద్ద ఎండబెట్టారు. ప్రతిచర్య యొక్క సాధారణ పథకం అంజీర్ 1 లో చూపబడింది.
10–3 టోర్ కంటే తక్కువ అవశేష పీడనం పొందే వరకు నమూనాలను 1 గంట పాటు 393 K వద్ద డీగ్యాస్ చేశారు. సాపేక్ష పీడనం P/P0 = 0.99 వద్ద శోషించబడిన N2 మొత్తాన్ని మొత్తం పోర్ వాల్యూమ్‌ను నిర్ణయించడానికి ఉపయోగించారు. స్కానింగ్ ఎలక్ట్రాన్ మైక్రోస్కోప్ (హిటాచి హై టెక్నాలజీస్, టోక్యో, జపాన్) ఉపయోగించి స్వచ్ఛమైన మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాల స్వరూపాన్ని పరిశీలించారు. కార్బన్ టేప్ ఉపయోగించి అల్యూమినియం రాడ్‌లపై పొడి నమూనాలను (స్వచ్ఛమైన సిలికా మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాలు) ఉంచారు. Q150T స్పట్టరింగ్ పరికరాన్ని ఉపయోగించి నమూనాపై బంగారాన్ని జమ చేశారు మరియు నమూనాపై 5 nm మందపాటి Au పొరను జమ చేశారు. ఇది తక్కువ వోల్టేజ్ ప్రక్రియ యొక్క సామర్థ్యాన్ని మెరుగుపరుస్తుంది మరియు చక్కటి కోల్డ్ స్ప్రేయింగ్‌ను అందిస్తుంది. థర్మో ఎలక్ట్రాన్ (వాల్తామ్, MA, USA) ఫ్లాష్ EA1112 ఎలిమెంటల్ కంపోజిషన్ ఎనలైజర్‌ను ఉపయోగించి ఎలిమెంటల్ విశ్లేషణ జరిగింది. కణ పరిమాణ పంపిణీని పొందడానికి మాల్వెర్న్ పార్టికల్ సైజు ఎనలైజర్ (వోర్సెస్టర్‌షైర్, UK) మాస్టర్‌సైజర్ 2000 ఉపయోగించబడింది. పూత పూయబడని సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాలు (ఒక్కొక్కటి 5 mg) 5 ml ఐసోప్రొపనాల్‌లో చెదరగొట్టబడ్డాయి, 10 నిమిషాలు సోనికేట్ చేయబడ్డాయి, 5 నిమిషాలు కదిలించబడ్డాయి మరియు మాస్టర్‌సైజర్ ఆప్టికల్ బెంచ్‌పై ఉంచబడ్డాయి. థర్మోగ్రావిమెట్రిక్ విశ్లేషణ 30 నుండి 800 °C వరకు ఉష్ణోగ్రత పరిధిలో నిమిషానికి 5 °C చొప్పున నిర్వహించబడుతుంది.
కొలతలు (ID 100 × 1.8 mm) కలిగిన గ్లాస్ ఫైబర్ లైన్ చేయబడిన ఇరుకైన బోర్ స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ స్తంభాలను రిఫరెన్స్ 31లో ఉన్న విధానాన్ని అనుసరించి స్లర్రీ ఫిల్లింగ్ పద్ధతి ద్వారా ప్యాక్ చేశారు. స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ కాలమ్ (గ్లాస్ లైన్డ్, ID 100 × 1 .8 mm) మరియు 1 µm ఫ్రిట్ ఉన్న అవుట్‌లెట్‌ను స్లర్రీ ప్యాకేజింగ్ మెషీన్‌కు (ఆల్టెక్ డీర్‌ఫీల్డ్, IL, USA) అనుసంధానించారు. 1.2 ml మిథనాల్‌లో 150 mg స్టేషనరీ ఫేజ్‌ను సస్పెండ్ చేసి రిజర్వాయర్ కాలమ్‌లోకి ఫీడ్ చేయడం ద్వారా స్టేషనరీ ఫేజ్ యొక్క సస్పెన్షన్‌ను సిద్ధం చేయండి. మిథనాల్‌ను స్లర్రీ ద్రావకం మరియు నియంత్రణ ద్రావకం వలె ఉపయోగించారు. 10 నిమిషాలకు 100 MP, 15 నిమిషాలకు 80 MP మరియు 30 నిమిషాలకు 60 MP పీడన క్రమాన్ని వర్తింపజేయడం ద్వారా కాలమ్‌ను ప్యాక్ చేయండి. ప్యాకింగ్ ప్రక్రియలో ఏకరీతి కాలమ్ ప్యాకింగ్‌ను నిర్ధారించడానికి యాంత్రిక వైబ్రేషన్ కోసం రెండు గ్యాస్ క్రోమాటోగ్రఫీ కాలమ్ వైబ్రేటర్‌లు (ఆల్టెక్, డీర్‌ఫీల్డ్, IL, USA) ఉపయోగించబడ్డాయి. స్లర్రీ ప్యాకర్‌ను మూసివేసి, స్ట్రింగ్‌కు నష్టం జరగకుండా నెమ్మదిగా ఒత్తిడిని విడుదల చేయండి. ఆ కాలమ్‌ను స్లర్రీ నాజిల్ నుండి డిస్‌కనెక్ట్ చేసి, మరొక ఫిట్టింగ్‌ను ఇన్‌లెట్‌కు జోడించి, దాని పనితీరును పరీక్షించడానికి LC సిస్టమ్‌కు కనెక్ట్ చేశారు.
LC పంప్ (10AD షిమాడ్జు, జపాన్), 50 nL ఇంజెక్షన్ లూప్ (వాల్కో (USA) C14 W.05) కలిగిన నమూనా, మెంబ్రేన్ డీగాజర్ (షిమాడ్జు DGU-14A) మరియు UV-VIS క్యాపిల్లరీ విండోను ఉపయోగించి కస్టమ్ MLC నిర్మించబడింది. డిటెక్టర్ పరికరం (UV-2075) మరియు ఎనామెల్డ్ మైక్రోకాలమ్. అదనపు కాలమ్ విస్తరణ ప్రభావాన్ని తగ్గించడానికి చాలా ఇరుకైన మరియు చిన్న కనెక్టింగ్ ట్యూబ్‌లను ఉపయోగించండి. కాలమ్‌ను నింపిన తర్వాత, 1/16″ తగ్గించే జంక్షన్ యొక్క అవుట్‌లెట్ వద్ద క్యాపిల్లరీ (50 µm id 365)ని ఇన్‌స్టాల్ చేయండి మరియు తగ్గించే జంక్షన్ యొక్క క్యాపిల్లరీ (50 µm)ని ఇన్‌స్టాల్ చేయండి. డేటా సేకరణ మరియు క్రోమాటోగ్రామ్ ప్రాసెసింగ్ మల్టీక్రో 2000 సాఫ్ట్‌వేర్‌ను ఉపయోగించి నిర్వహిస్తారు. 254 nm వద్ద, సబ్జెక్ట్ విశ్లేషణల యొక్క UV శోషణను 0 వద్ద పర్యవేక్షించారు. క్రోమాటోగ్రాఫిక్ డేటాను OriginPro8 (నార్తాంప్టన్, MA) ఉపయోగించి విశ్లేషించారు.
హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్, లైయోఫైలైజ్డ్ పౌడర్, ≥ 96% (అగరోస్ జెల్ ఎలక్ట్రోఫోరేసిస్) 3 mg ట్రిప్సిన్ (1.5 mg), 4.0 M యూరియా (1 ml) మరియు 0.2 M అమ్మోనియం బైకార్బోనేట్ (1 ml) తో కలిపి. ద్రావణాన్ని 10 నిమిషాలు కదిలించి, 37°C వద్ద 6 గంటలు నీటి స్నానంలో ఉంచి, తరువాత 1 ml 0.1% TFA తో చల్లబరిచారు. ద్రావణాన్ని ఫిల్టర్ చేసి 4°C కంటే తక్కువ ఉష్ణోగ్రత వద్ద నిల్వ చేయండి.
PMP కాలమ్‌పై పెప్టైడ్‌లు మరియు ట్రిప్టిక్ డైజెస్ట్ HSA మిశ్రమాన్ని వేరు చేయడం విడిగా మూల్యాంకనం చేయబడింది. PMP కాలమ్ ద్వారా వేరు చేయబడిన పెప్టైడ్‌లు మరియు HSA మిశ్రమం యొక్క ట్రిప్టిక్ జలవిశ్లేషణను తనిఖీ చేయండి మరియు ఫలితాలను అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్‌తో పోల్చండి. సైద్ధాంతిక ప్లేట్‌ల సంఖ్యను ఈ క్రింది సమీకరణాన్ని ఉపయోగించి లెక్కించబడుతుంది:
స్వచ్ఛమైన సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్ బంధిత సిలికా కణాల SEM చిత్రాలు చిత్రం 2లో చూపబడ్డాయి. స్వచ్ఛమైన సిలికా కణాల (A, B) SEM చిత్రాలు గోళాకార ఆకారాన్ని చూపుతాయి, దీనిలో కణాలు పొడుగుగా ఉంటాయి లేదా మా మునుపటి అధ్యయనాలతో పోలిస్తే క్రమరహిత సమరూపతను కలిగి ఉంటాయి. లిగాండ్ (C, D) ద్వారా బంధించబడిన సిలికా కణాల ఉపరితలం స్వచ్ఛమైన సిలికా కణాల కంటే సున్నితంగా ఉంటుంది, ఇది సిలికా కణాల ఉపరితలాన్ని కప్పి ఉంచే పాలీస్టైరిన్ గొలుసుల వల్ల కావచ్చు.
స్వచ్ఛమైన సిలికా కణాలు (A, B) మరియు లిగాండ్ బౌండ్ సిలికా కణాలు (C, D) యొక్క ఎలక్ట్రాన్ మైక్రోగ్రాఫ్‌లను స్కాన్ చేస్తోంది.
స్వచ్ఛమైన సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాల కణ పరిమాణ పంపిణీని Fig. 2. 3(A)లో చూపబడింది. రసాయన మార్పు తర్వాత సిలికా కణ పరిమాణం పెరిగిందని ఘనపరిమాణ కణ పరిమాణ పంపిణీ వక్రతలు చూపించాయి (Fig. 3A). ప్రస్తుత అధ్యయనం మరియు మునుపటి అధ్యయనం నుండి సిలికా కణ పరిమాణ పంపిణీ డేటాను టేబుల్ 1(A)లో పోల్చారు. PMP యొక్క ఘనపరిమాణ కణ పరిమాణం d(0.5) 3.36 µm, మా మునుపటి అధ్యయనంలో ad(0.5) విలువ 3.05 µm (పాలీస్టైరిన్ బంధిత సిలికా కణాలు)34తో పోలిస్తే. ప్రతిచర్య మిశ్రమంలో PEG, యూరియా, TMOS మరియు ఎసిటిక్ ఆమ్ల నిష్పత్తిలో మార్పు కారణంగా, ఈ బ్యాచ్ యొక్క కణ పరిమాణం పంపిణీ మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోలిస్తే ఇరుకైనది. PMP దశ యొక్క కణ పరిమాణం మనం ఇంతకు ముందు అధ్యయనం చేసిన పాలీస్టైరిన్ బౌండ్ సిలికా కణ దశ కంటే కొంచెం పెద్దది. దీని అర్థం స్టైరీన్‌తో సిలికా కణాల ఉపరితల కార్యాచరణ సిలికా ఉపరితలంపై పాలీస్టైరిన్ పొర (0.97 µm) మాత్రమే నిక్షిప్తం చేయబడింది, అయితే PMP దశలో పొర మందం 1.38 µm.
స్వచ్ఛమైన సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్ బంధిత సిలికా కణాల కణ పరిమాణం పంపిణీ (A) మరియు రంధ్ర పరిమాణం పంపిణీ (B).
ఈ అధ్యయనంలో ఉపయోగించిన సిలికా కణాల రంధ్ర పరిమాణం, రంధ్ర పరిమాణం మరియు ఉపరితల వైశాల్యం పట్టిక 1 (B)లో చూపబడ్డాయి. స్వచ్ఛమైన సిలికా కణాలు మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాల PSD ప్రొఫైల్‌లు అంజీర్ 3(B)లో చూపబడ్డాయి. ఫలితాలు మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోల్చదగినవి34. స్వచ్ఛమైన మరియు లిగాండ్-బౌండ్ సిలికా కణాల రంధ్ర పరిమాణాలు వరుసగా 310 Å మరియు 241 Å, రసాయన మార్పు తర్వాత, రంధ్ర పరిమాణం టేబుల్ 1 (B)లో చూపిన విధంగా 69 Å తగ్గిందని మరియు షిఫ్ట్ వక్రత అంజీర్‌లో చూపబడిందని సూచిస్తుంది. ప్రస్తుత అధ్యయనంలో సిలికా కణాల నిర్దిష్ట ఉపరితల వైశాల్యం 116 m2/g, ఇది మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోల్చదగినది (124 m2/g). పట్టిక 1(B)లో చూపినట్లుగా, రసాయన మార్పు తర్వాత సిలికా కణాల ఉపరితల వైశాల్యం (m2/g) కూడా 116 m2/g నుండి 105 m2/gకి తగ్గింది.
స్థిర దశ యొక్క మూలక విశ్లేషణ ఫలితాలు పట్టిక 2 లో ప్రదర్శించబడ్డాయి. ప్రస్తుత స్థిర దశ యొక్క కార్బన్ కంటెంట్ 6.35%, ఇది మా మునుపటి అధ్యయనం కంటే తక్కువగా ఉంది (పాలీస్టైరిన్‌తో సంబంధం ఉన్న సిలికా కణాలు, వరుసగా 7.93%35 మరియు 10.21%) 42. ప్రస్తుత స్థిర దశ యొక్క కార్బన్ కంటెంట్ క్రింద ఉంది, ఎందుకంటే ఫినైల్‌మలైమైడ్ మిథైల్ వినైల్ ఐసోసైనేట్ (PCMP) మరియు 4-హైడ్రాక్సీ-TEMPO వంటి కొన్ని ధ్రువ లిగాండ్‌లు SP తయారీలో స్టైరీన్‌తో పాటు ఉపయోగించబడ్డాయి. ప్రస్తుత స్థిర దశలో నైట్రోజన్ బరువు శాతం మునుపటి అధ్యయనాలలో 0.1735 మరియు 0.85% తో పోలిస్తే 2.21%. దీని అర్థం ఫినైల్‌మలైమైడ్ కారణంగా ప్రస్తుత స్థిర దశలో నైట్రోజన్ యొక్క అధిక బరువు శాతం ఉంటుంది. అదేవిధంగా, ఉత్పత్తులు (4) మరియు (5) వరుసగా 2.7% మరియు 2.9% కార్బన్ కంటెంట్‌ను కలిగి ఉంటాయి, అయితే తుది ఉత్పత్తి (6) 6.35% కార్బన్ కంటెంట్‌ను కలిగి ఉంటుంది, ఇది టేబుల్ 2లో చూపబడింది. బరువు తగ్గడాన్ని పరీక్షించడానికి PMP యొక్క స్థిర దశలో థర్మోగ్రావిమెట్రిక్ విశ్లేషణ (TGA) ఉపయోగించబడింది మరియు TGA వక్రరేఖ చిత్రం 4లో చూపబడింది. TGA వక్రరేఖ 8.6% బరువు తగ్గడాన్ని చూపిస్తుంది, ఇది కార్బన్ కంటెంట్ (6.35%)తో మంచి ఒప్పందంలో ఉంది, ఎందుకంటే లిగాండ్‌లు C మాత్రమే కాకుండా N, O మరియు H కూడా కలిగి ఉంటాయి.
సిలికా కణాల ఉపరితలాన్ని సవరించడానికి లిగాండ్ ఫినైల్మలైమైడ్-మిథైల్వినైల్ ఐసోసైనేట్‌ను దాని ధ్రువ ఫినైల్మలైమైడ్ మరియు వినైలిసోసైనేట్ సమూహాల కారణంగా ఎంచుకున్నారు. వినైల్ ఐసోసైనేట్ సమూహాలు లివింగ్ రాడికల్ పాలిమరైజేషన్ ద్వారా స్టైరీన్‌తో మరింత చర్య జరపగలవు. రెండవ కారణం ఏమిటంటే, అనలైట్‌తో మితమైన పరస్పర చర్యలు మరియు అనలైట్ మరియు స్థిర దశ మధ్య బలమైన ఎలెక్ట్రోస్టాటిక్ పరస్పర చర్యలు లేని సమూహాన్ని చొప్పించడం, ఎందుకంటే ఫినైల్మలైమైడ్ భాగం సాధారణ pH వద్ద వర్చువల్ ఛార్జ్‌ను కలిగి ఉండదు. స్థిర దశ యొక్క ధ్రువణతను స్టైరీన్ యొక్క సరైన మొత్తం మరియు ఫ్రీ రాడికల్ పాలిమరైజేషన్ యొక్క ప్రతిచర్య సమయం ద్వారా నియంత్రించవచ్చు. ప్రతిచర్య యొక్క చివరి దశ (ఫ్రీ రాడికల్ పాలిమరైజేషన్) చాలా ముఖ్యమైనది ఎందుకంటే ఇది స్థిర దశ యొక్క ధ్రువణతను మారుస్తుంది. ఈ స్థిర దశలలో కార్బన్ కంటెంట్‌ను తనిఖీ చేయడానికి ఎలిమెంటల్ విశ్లేషణ జరిగింది. స్టైరీన్ మొత్తాన్ని మరియు ప్రతిచర్య సమయాన్ని పెంచడం వల్ల స్థిర దశ యొక్క కార్బన్ కంటెంట్ పెరుగుతుందని మరియు దీనికి విరుద్ధంగా ఉంటుందని గమనించబడింది. స్టైరీన్ యొక్క విభిన్న సాంద్రతలతో తయారు చేయబడిన SPలు వేర్వేరు కార్బన్ లోడ్‌లను కలిగి ఉంటాయి. అదేవిధంగా, ఈ స్థిర దశలను స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ స్తంభాలపై ఉంచారు మరియు వాటి క్రోమాటోగ్రాఫిక్ లక్షణాలు (సెలెక్టివిటీ, రిజల్యూషన్, N విలువ మొదలైనవి) తనిఖీ చేయబడ్డాయి. ఈ ప్రయోగాల ఆధారంగా, నియంత్రిత ధ్రువణత మరియు విశ్లేషణ యొక్క మంచి నిలుపుదలని అందించడానికి PMP స్థిర దశ తయారీకి ఆప్టిమైజ్ చేసిన కూర్పును ఎంచుకున్నారు.
మొబైల్ దశ సామర్థ్యాన్ని ఉపయోగించి ఐదు పెప్టైడ్‌ల మిశ్రమాల (గ్లై-టైర్, గ్లై-ల్యూ-టైర్, గ్లై-గ్లై-టైర్-ఆర్గ్, టైర్-ఐల్-గ్లై-సెర్-ఆర్గ్, ల్యూసిన్-ఎన్‌కెఫాలిన్) విశ్లేషణ కోసం PMP కాలమ్‌ను కూడా మూల్యాంకనం చేశారు. 80 µl/నిమిషం ప్రవాహం రేటు వద్ద 60/40 (v/v) ACN/నీరు (0.1% TFA). సరైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితులలో (200,000 ప్లేట్లు/మీ), కాలమ్‌కు సైద్ధాంతిక ప్లేట్‌ల సంఖ్య (N) (100 × 1.8 మిమీ) 20,000 ± 100. మూడు PMP నిలువు వరుసలకు N విలువలు టేబుల్ 3లో చూపబడ్డాయి మరియు క్రోమాటోగ్రామ్‌లు చిత్రం 5Aలో చూపబడ్డాయి. PMP కాలమ్‌పై అధిక ప్రవాహ రేటు (700 µl/min) వద్ద వేగవంతమైన విశ్లేషణ, ఒక నిమిషంలోనే ఐదు పెప్టైడ్‌లు తొలగించబడ్డాయి, కాలమ్‌కు 13,500 ± 330 యొక్క అద్భుతమైన N విలువ (100 x 1.8 mm వ్యాసం), 135,000 ప్లేట్లు/mకి సమానం (Fig. 5B). పునరుత్పత్తి సామర్థ్యాన్ని పరీక్షించడానికి ఒకే పరిమాణంలోని మూడు నిలువు వరుసలను (లోపలి వ్యాసం 100 x 1.8 mm) PMP స్థిర దశ యొక్క మూడు వేర్వేరు బ్యాచ్‌లతో నింపారు. సరైన ఎల్యూషన్ పరిస్థితులు, సైద్ధాంతిక ప్లేట్‌ల సంఖ్య N మరియు నిలుపుదల సమయాన్ని ఉపయోగించి ప్రతి కాలమ్‌పై ఒకే పరీక్ష మిశ్రమాన్ని వేరు చేయడం ద్వారా ప్రతి కాలమ్‌కు విశ్లేషణలు రికార్డ్ చేయబడ్డాయి. PMP నిలువు వరుసల కోసం పునరుత్పత్తి డేటా టేబుల్ 4లో చూపబడింది. PMP కాలమ్ యొక్క పునరుత్పత్తి సామర్థ్యం టేబుల్ 3లో చూపిన విధంగా చాలా తక్కువ %RSD విలువలతో బాగా సంబంధం కలిగి ఉంది.
PMP కాలమ్ (B) మరియు Ascentis Express RP-Amide కాలమ్ (A) పై పెప్టైడ్ మిశ్రమాలను వేరు చేయడం, మొబైల్ దశ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP కాలమ్ కొలతలు (100 x 1.8 mm id), విశ్లేషణ సమ్మేళనాల ఎల్యూషన్ క్రమం: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) మరియు 5 (leucic acid enkephalin).
HPLC ద్వారా మానవ సీరం అల్బుమిన్ యొక్క ట్రిప్టిక్ హైడ్రోలైజేట్‌ను వేరు చేయడానికి ఒక PMP కాలమ్ (లోపలి వ్యాసం 100 x 1.8 మిమీ) మూల్యాంకనం చేయబడింది. చిత్రం 6 లోని క్రోమాటోగ్రామ్ నమూనాలు చాలా మంచి రిజల్యూషన్‌తో బాగా వేరు చేయబడిందని చూపిస్తుంది. HSA పరిష్కారాలను 100 μl/min ప్రవాహం రేటు, 70/30 అసిటోనిట్రైల్/నీరు మరియు 0.1% TFA ఉపయోగించి విశ్లేషించారు. క్రోమాటోగ్రామ్ (Fig. 6)లో చూపిన విధంగా HSA యొక్క చీలికను 17 శిఖరాలుగా విభజించారు, ఇది 17 పెప్టైడ్‌లకు అనుగుణంగా ఉంటుంది. HSA హైడ్రోలైజేట్ నుండి వ్యక్తిగత శిఖరాల విభజన సామర్థ్యాలను లెక్కించారు మరియు విలువలు టేబుల్ 5లో చూపబడ్డాయి.
HSA ట్రిప్టిక్ హైడ్రోలైసేట్‌లను PMP కాలమ్ (లోపలి వ్యాసం 100 x 1.8 మిమీ), ప్రవాహ రేటు (100 μl/నిమిషం), మొబైల్ ఫేజ్ 60/40 అసిటోనిట్రైల్/నీరు మరియు 0.1% TFA పై వేరు చేశారు.
ఇక్కడ L అనేది కాలమ్ పొడవు, η అనేది మొబైల్ దశ యొక్క స్నిగ్ధత, ΔP అనేది కాలమ్ యొక్క వెనుక పీడనం మరియు u అనేది మొబైల్ దశ యొక్క సరళ వేగం. PMP కాలమ్ యొక్క పారగమ్యత 2.5 × 10–14 m2, ప్రవాహ రేటు 25 µl/min, 60/40 v/v ఉపయోగించబడింది. ACN/నీరు. PMP కాలమ్ యొక్క పారగమ్యత (ID 100 × 1.8 mm) మా మునుపటి Ref.34 అధ్యయనం మాదిరిగానే ఉంది. ఉపరితల పోరస్ కణాలతో నిండిన కాలమ్ యొక్క పారగమ్యత 1.7×10 .6 µm, 5 µm కణాలకు 2.5×10-14 m243. కాబట్టి, PMP దశ యొక్క పారగమ్యత 5 μm పరిమాణంతో కోర్-షెల్ కణాల పారగమ్యతకు సమానంగా ఉంటుంది.
ఇక్కడ Wx అనేది క్లోరోఫామ్‌తో నిండిన స్తంభం యొక్క ద్రవ్యరాశి, Wy అనేది మిథనాల్‌తో నిండిన స్తంభం యొక్క ద్రవ్యరాశి మరియు ρ అనేది ద్రావకం యొక్క సాంద్రత. మిథనాల్ (ρ = 0.7866) మరియు క్లోరోఫామ్ (ρ = 1.484) సాంద్రత. సిలికా-C18 కణ స్తంభం (100 × 1.8 mm ID)34 మరియు మనం గతంలో అధ్యయనం చేసిన C18-యూరియా31 స్తంభం యొక్క మొత్తం సచ్ఛిద్రత వరుసగా 0.63 మరియు 0.55. దీని అర్థం యూరియా లిగాండ్ల ఉనికి స్థిర దశ యొక్క పారగమ్యతను తగ్గిస్తుంది. మరోవైపు, PMP స్తంభం (లోపలి వ్యాసం 100 × 1.8 mm) యొక్క మొత్తం సచ్ఛిద్రత 0.60. C18 బౌండ్ సిలికా కణాలతో నిండిన నిలువు వరుసల కంటే PMP నిలువు వరుసలు తక్కువ పారగమ్యత కలిగి ఉంటాయి ఎందుకంటే C18 రకం స్థిర దశలలో C18 లిగాండ్‌లు సిలికా కణాలకు సరళ గొలుసులలో జతచేయబడతాయి, అయితే పాలీస్టైరిన్ రకం స్థిర దశలలో కణాల చుట్టూ సాపేక్షంగా మందపాటి పాలిమర్ ఏర్పడుతుంది. పొర A. ఒక సాధారణ ప్రయోగంలో, నిలువు సచ్ఛిద్రతను ఈ క్రింది విధంగా లెక్కించబడుతుంది:
చిత్రం 7Aలో, B PMP కాలమ్ (id 100 x 1.8 mm) మరియు Ascentis Express RP-Amide కాలమ్ (id 100 x 1.8 mm) కోసం వాన్ డీమ్టర్ ప్లాట్‌లను ఒకే ఎల్యూషన్ పరిస్థితులలో, 60/40 ACN/H2O మరియు 0 .1% TFA 20 µl/min నుండి 800 µl/min వరకు రెండు నిలువు వరుసలపై చూపిస్తుంది. PMP కాలమ్ మరియు Ascentis Express RP-Amide కాలమ్‌కు సరైన ప్రవాహం రేటు (80 µl/min) వద్ద కనీస HETP విలువలు వరుసగా 2.6 µm మరియు 3.9 µm. HETP విలువలు PMP కాలమ్ (100 x 1.8 mm id) యొక్క విభజన సామర్థ్యం వాణిజ్యపరంగా అందుబాటులో ఉన్న Ascentis Express RP-Amide కాలమ్ (100 x 1.8 mm id) కంటే చాలా ఎక్కువగా ఉందని చూపిస్తున్నాయి. Fig. 7(A) లోని వాన్ డీమ్టర్ గ్రాఫ్ మా మునుపటి అధ్యయనంతో పోలిస్తే పెరుగుతున్న ప్రవాహంతో N విలువలో తగ్గుదల గణనీయంగా ఎక్కువగా లేదని చూపిస్తుంది. Ascentis Express RP-Amide కాలమ్‌తో పోలిస్తే PMP కాలమ్ (id 100 × 1.8 mm) యొక్క అధిక విభజన సామర్థ్యం మెరుగైన కణ ఆకారం మరియు పరిమాణం మరియు ప్రస్తుత పనిలో ఉపయోగించే అధునాతన కాలమ్ ప్యాకింగ్ విధానంపై ఆధారపడి ఉంటుంది34.
(ఎ) 0.1% TFA తో 60/40 ACN/H2O లో PMP కాలమ్ (id 100 x 1.8 mm) పై పొందిన వాన్ డీమ్టర్ ప్లాట్ (HETP vs. మొబైల్ ఫేజ్ లీనియర్ వెలాసిటీ). (బి) 0.1% TFA తో 60/40 ACN/H2O లో అసెంటిస్ ఎక్స్‌ప్రెస్ RP-అమైడ్ కాలమ్ (id 100 x 1.8 mm) పై పొందిన వాన్ డీమ్టర్ ప్లాట్ (HETP vs. మొబైల్ ఫేజ్ లీనియర్ వెలాసిటీ).
అధిక పనితీరు గల లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీలో సింథటిక్ పెప్టైడ్‌లు మరియు హ్యూమన్ సీరం అల్బుమిన్ (HSA) యొక్క ట్రిప్టిక్ హైడ్రోలైజేట్ మిశ్రమాన్ని వేరు చేయడానికి ఇంటర్కలేటెడ్ పాలీస్టైరిన్ యొక్క ధ్రువ స్థిర దశను తయారు చేసి మూల్యాంకనం చేశారు. పెప్టైడ్ మిశ్రమాలకు PMP స్తంభాల క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పనితీరు విభజన సామర్థ్యం మరియు స్పష్టత పరంగా అద్భుతమైనది. సిలికా కణ పరిమాణం మరియు రంధ్ర పరిమాణం, స్థిర దశల నియంత్రిత సంశ్లేషణ మరియు సంక్లిష్ట కాలమ్ ప్యాకింగ్ పదార్థాలు వంటి అనేక కారణాల వల్ల PMP స్తంభాల మెరుగైన విభజన సామర్థ్యం ఉంది. అధిక విభజన సామర్థ్యంతో పాటు, ఈ స్థిర దశ యొక్క మరొక ప్రయోజనం ఏమిటంటే అధిక ప్రవాహ రేట్ల వద్ద తక్కువ కాలమ్ బ్యాక్ ప్రెజర్. PMP స్తంభాలు అధిక పునరుత్పత్తి చేయగలవు మరియు పెప్టైడ్‌ల మిశ్రమాలను మరియు వివిధ ప్రోటీన్ల ట్రిప్టిక్ జీర్ణక్రియను విశ్లేషించడానికి ఉపయోగించవచ్చు. ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీలో సహజ ఉత్పత్తుల నుండి బయోయాక్టివ్ సమ్మేళనాలను, ఔషధ మొక్కల సారం మరియు పుట్టగొడుగులను వేరు చేయడానికి మేము ఈ కాలమ్‌ను ఉపయోగించాలని భావిస్తున్నాము. భవిష్యత్తులో, ప్రోటీన్లు మరియు మోనోక్లోనల్ యాంటీబాడీల విభజన కోసం PMP స్తంభాలను కూడా మూల్యాంకనం చేస్తారు.
ఫీల్డ్, జెకె, యూర్బీ, ఎంఆర్, లా, జె., థోగెర్సెన్, హెచ్. & పీటర్సన్, పి. ఇన్వెస్టిగేషన్ ఇన్ రివర్స్డ్ ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పెప్టైడ్ సెపరేషన్ సిస్టమ్స్ పార్ట్ I: డెవలప్‌మెంట్ ఆఫ్ ఎ ప్రోటోకాల్ ఫర్ కాలమ్ క్యారెక్టరైజేషన్. ఫీల్డ్, JK, యూర్బీ, MR, లావు, J., థోగెర్సెన్, H. & పీటర్సన్, P. ఇన్వెస్టిగేషన్ ఇన్ రివర్స్డ్ ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పెప్టైడ్ సెపరేషన్ సిస్టమ్స్ పార్ట్ I: డెవలప్‌మెంట్ ఆఫ్ ఎ ప్రోటోకాల్ ఫర్ కాలమ్ క్యారెక్టరైజేషన్.ఫీల్డ్, జెకె, ఓవెర్బీ, ఎంఆర్, లా, జె., టోగెర్సెన్, హెచ్., మరియు పీటర్సన్, పి. రివర్స్-ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా పెప్టైడ్ సెపరేషన్ సిస్టమ్స్ యొక్క పరిశోధన, భాగం I: కాలమ్ క్యారెక్టరైజేషన్ కోసం ఒక ప్రోటోకాల్‌ను అభివృద్ధి చేయడం. ఫీల్డ్, JK, యూర్బీ, MR, లావు, J., థోగెర్సెన్, H. & పీటర్సన్, P. ఇన్వెస్టిగేషన్ ఇన్ రివర్స్డ్ ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పెప్టైడ్ సెపరేషన్ సిస్టమ్స్ పార్ట్ I: డెవలప్‌మెంట్ ఆఫ్ ఎ ప్రోటోకాల్ ఫర్ కాలమ్ క్యారెక్టరిస్టిక్స్. ఫీల్డ్, JK, యూర్బీ, MR, లావు, J., థోగెర్సెన్, H. & పీటర్సన్, P. ఇన్వెస్టిగేషన్ ఇన్ రివర్స్డ్ ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ పెప్టైడ్ సెపరేషన్ సిస్టమ్స్ పార్ట్ I: డెవలప్‌మెంట్ ఆఫ్ ఎ ప్రోటోకాల్ ఫర్ కాలమ్ క్యారెక్టరిస్టిక్స్.ఫీల్డ్, జెకె, ఓవెర్బీ, ఎంఆర్, లా, జె., టోగెర్సెన్, హెచ్., మరియు పీటర్సన్, పి. రివర్స్-ఫేజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా పెప్టైడ్ సెపరేషన్ సిస్టమ్స్ యొక్క పరిశోధన, భాగం I: కాలమ్ క్యారెక్టరైజేషన్ కోసం ఒక ప్రోటోకాల్‌ను అభివృద్ధి చేయడం.J.色谱法。 1603,113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)。
గోమెజ్, బి. మరియు ఇతరులు. అంటు వ్యాధుల చికిత్స కోసం మెరుగైన క్రియాశీల పెప్టైడ్‌లను సృష్టించే పద్ధతులు. బయోటెక్నాలజీ. విజయాలు 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
వ్లీఘే, పి., లిసోవ్స్కీ, వి., మార్టినెజ్, జె. & క్రెస్ట్‌చాటిస్కీ, ఎం. సింథటిక్ థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్స్: సైన్స్ అండ్ మార్కెట్. వ్లీఘే, పి., లిసోవ్స్కీ, వి., మార్టినెజ్, జె. & క్రెస్ట్‌చాటిస్కీ, ఎం. సింథటిక్ థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్స్: సైన్స్ అండ్ మార్కెట్.వ్లీజ్ పి, లిసోవ్స్కీ వి, మార్టినెజ్ జె మరియు క్రెస్చాటిస్కి ఎం. సింథటిక్ థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్స్: సైన్స్ అండ్ మార్కెట్.వ్లీజ్ పి, లిసోవ్స్కీ వి, మార్టినెజ్ జె మరియు ఖ్రెస్చాట్స్కీ ఎం. సింథటిక్ థెరప్యూటిక్ పెప్టైడ్స్: సైన్స్ అండ్ మార్కెట్. డ్రగ్ డిస్కవరీ. టుడే 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
జియే, ఎఫ్., స్మిత్, ఆర్డీ & షెన్, వై. అడ్వాన్స్‌డ్ ప్రోటీమిక్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ. జియే, ఎఫ్., స్మిత్, ఆర్డీ & షెన్, వై. అడ్వాన్స్‌డ్ ప్రోటీమిక్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ.F., స్మిత్ RD మరియు షెన్ యు చూడండి. అధునాతన ప్రోటీమిక్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ. Xie, F., స్మిత్, RD & షెన్, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., స్మిత్, RD & షెన్, Y. అధునాతన ప్రోటీన్ కూర్పు 液相色谱。F., స్మిత్ RD మరియు షెన్ యు చూడండి. అధునాతన ప్రోటీమిక్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ.జె. క్రోమాటోగ్రఫీ. ఎ 1261, 78–90 (2012).
లియు, డబ్ల్యూ. మరియు ఇతరులు. అధునాతన లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ-మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ విస్తృత-ఆధారిత జీవక్రియ మరియు ప్రోటీమిక్స్‌లను మిళితం చేయగలదు. ఆనస్. చిమ్. ఆక్టా 1069, 89–97 (2019).
చెస్నట్, SM & సాలిస్బరీ, JJ ఫార్మాస్యూటికల్ అభివృద్ధిలో UHPLC పాత్ర. చెస్నట్, SM & సాలిస్బరీ, JJ ఫార్మాస్యూటికల్ అభివృద్ధిలో UHPLC పాత్ర.చెస్నట్, SM మరియు సాలిస్బరీ, JJ ఫార్మాస్యూటికల్ అభివృద్ధిలో UHPLC పాత్ర.చెస్నట్, SM మరియు సాలిస్బరీ, JJ ఔషధ అభివృద్ధిలో UHPLC పాత్ర. J. సెప్ట్ సైన్స్. 30(8), 1183–1190 (2007).
వు, ఎన్. & క్లాసెన్, ఎఎమ్. వేగవంతమైన విభజనల కోసం అల్ట్రాహై ప్రెజర్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క ప్రాథమిక మరియు ఆచరణాత్మక అంశాలు. వు, ఎన్. & క్లాసెన్, ఎఎమ్. వేగవంతమైన విభజనల కోసం అల్ట్రాహై ప్రెజర్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క ప్రాథమిక మరియు ఆచరణాత్మక అంశాలు.వు, ఎన్. మరియు క్లాసెన్, ఎఎమ్. వేగవంతమైన విభజన కోసం అధిక పీడన ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క ప్రాథమిక మరియు ఆచరణాత్మక అంశాలు. వు, N. & క్లాసెన్, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 వు, ఎన్. & క్లాసెన్, ఎఎమ్ వేగవంతమైన విభజన కోసం అల్ట్రా-హై ప్రెజర్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క ప్రాథమిక మరియు ఆచరణాత్మక అంశాలు.వు, ఎన్. మరియు క్లాసెన్, ఎఎమ్. వేగవంతమైన విభజన కోసం అధిక పీడన ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క ప్రాథమిక మరియు ఆచరణాత్మక అంశాలు.జె. సెప్టెంబర్ సైన్స్. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
రెన్, SA & ట్చెలిట్చెఫ్, P. ఔషధ అభివృద్ధిలో అల్ట్రా-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ వాడకం. రెన్, SA & ట్చెలిట్చెఫ్, P. ఔషధ అభివృద్ధిలో అల్ట్రా-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ వాడకం.రెన్, SA మరియు చెలిస్చెఫ్, P. ఫార్మాస్యూటికల్ డెవలప్‌మెంట్‌లో అల్ట్రా హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ వాడకం. రెన్, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 రెన్, SA & ట్చెలిట్చెఫ్, పి.రెన్, SA మరియు చెలిస్చెఫ్, P. ఔషధ అభివృద్ధిలో అల్ట్రా-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ యొక్క అప్లికేషన్.జె. క్రోమాటోగ్రఫీ. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
గు, హెచ్. మరియు ఇతరులు. ఎంట్రోవైరస్ 71 యొక్క సమర్థవంతమైన శుద్దీకరణ కోసం అధిక అంతర్గత దశ కలిగిన ఆయిల్-ఇన్-వాటర్ ఎమల్షన్ నుండి తీసుకోబడిన మోనోలిథిక్ మాక్రోపోరస్ హైడ్రోజెల్. కెమికల్. ప్రాజెక్ట్. జర్నల్ 401, 126051 (2020).
షి, వై., జియాంగ్, ఆర్., హోర్వాత్, సి. & విల్కిన్స్, జెఎ ప్రోటీమిక్స్‌లో ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీ పాత్ర. షి, వై., జియాంగ్, ఆర్., హోర్వాత్, సి. & విల్కిన్స్, జెఎ ప్రోటీమిక్స్‌లో ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీ పాత్ర.షి, వై., జియాంగ్, ఆర్., హోర్వత్, సి. మరియు విల్కిన్స్, జెఎ ప్రోటీమిక్స్‌లో ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీ పాత్ర. షి, వై., జియాంగ్, ఆర్., హోర్వత్, సి. & విల్కిన్స్, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 షి, Y., జియాంగ్, R., హోర్వాత్, C. & విల్కిన్స్, JAషి, వై., జియాంగ్, ఆర్., హోర్వత్, సి. మరియు విల్కిన్స్, జెఎ ప్రోటీమిక్స్‌లో ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీ పాత్ర.జె. క్రోమాటోగ్రఫీ. ఎ 1053 (1-2), 27-36 (2004).
ఫెకెటే, ఎస్., వుటే, జె.-ఎల్. & గిల్లార్మ్, డి. చికిత్సా పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల రివర్స్డ్-ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రాఫిక్ సెపరేషన్స్‌లో కొత్త ట్రెండ్‌లు: సిద్ధాంతం మరియు అనువర్తనాలు. & గిల్లార్మ్, డి. చికిత్సా పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల రివర్స్డ్-ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రాఫిక్ సెపరేషన్స్‌లో కొత్త ట్రెండ్‌లు: సిద్ధాంతం మరియు అనువర్తనాలు. & గిల్లర్మే, D. నోవి టెండెనిక్స్ మరియు ర్యాజ్డెలెనీ టెరాపెవ్టిచెస్కిహ్ పెప్టిడోవ్ మరియు బెల్కోవ్ స్ పోమోషింగ్ జిడ్కోస్ట్నో ఒబ్రాషెన్నోయ్ ఫాజోయ్: థియోరియా మరియు ప్రిలోజెనియ. & గిల్లార్మే, డి. రివర్స్ ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా చికిత్సా పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల విభజనలో కొత్త పోకడలు: సిద్ధాంతం మరియు అనువర్తనాలు. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & గిల్లార్మ్, డి.మరియు గిల్లార్మే, డి. రివర్స్ ఫేజ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా చికిత్సా పెప్టైడ్‌లు మరియు ప్రోటీన్‌ల విభజనలో కొత్త పోకడలు: సిద్ధాంతం మరియు అనువర్తనాలు.జె. ఫార్మ్. బయోమెడికల్ సైన్స్. ఆనస్. 69, 9–27 (2012).
గిలార్, ఎం., ఒలివోవా, పి., డాలీ, ఎఇ & గెబ్లర్, జెసి మొదటి మరియు రెండవ విభజన కొలతలలో వేర్వేరు pHలతో RP-RP-HPLC వ్యవస్థను ఉపయోగించి పెప్టైడ్‌ల యొక్క రెండు-డైమెన్షనల్ విభజన. గిలార్, ఎం., ఒలివోవా, పి., డాలీ, ఎఇ & గెబ్లర్, జెసి మొదటి మరియు రెండవ విభజన కొలతలలో వేర్వేరు pHలతో RP-RP-HPLC వ్యవస్థను ఉపయోగించి పెప్టైడ్‌ల యొక్క రెండు-డైమెన్షనల్ విభజన.గిలార్ M., ఒలివోవా P., డాలీ AE మరియు గెబ్లర్ JK మొదటి మరియు రెండవ విభజన కొలతలలో వేర్వేరు pHలతో RP-RP-HPLC వ్యవస్థను ఉపయోగించి పెప్టైడ్‌ల యొక్క రెండు-డైమెన్షనల్ విభజన.గిలార్ M., ఒలివోవా P., డాలీ AE మరియు గెబ్లర్ JK RP-RP-HPLC వ్యవస్థను ఉపయోగించి మొదటి మరియు రెండవ విభజన కొలతలలో వేర్వేరు pH విలువలను ఉపయోగించి పెప్టైడ్‌ల యొక్క రెండు-డైమెన్షనల్ విభజన. J. సెప్టెంబర్ సైన్స్. 28 (14), 1694–1703 (2005).
ఫెల్లిట్టి, ఎస్. మరియు ఇతరులు. 2 µm కంటే చిన్నగా పూర్తిగా పోరస్ మరియు ఉపరితల పోరస్ C18 కణాలతో నిండిన అధిక-పనితీరు గల క్రోమాటోగ్రఫీ స్తంభాల ద్రవ్యరాశి బదిలీ మరియు గతి లక్షణాల పరిశోధన. జె. సెప్టెంబర్ సైన్స్. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
పియోవేసానా, ఎస్. మరియు ఇతరులు. మొక్కల బయోయాక్టివ్ పెప్టైడ్‌ల ఐసోలేషన్, గుర్తింపు మరియు ధ్రువీకరణలో ఇటీవలి పోకడలు మరియు విశ్లేషణాత్మక సవాళ్లు. పాయువు. జీవి ఆసన. రసాయన. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
ముల్లర్, JB మరియు ఇతరులు. జీవిత రాజ్యం యొక్క ప్రోటోమిక్ ప్రకృతి దృశ్యం. నేచర్ 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
డి లూకా, కె. మరియు ఇతరులు. ప్రిపరేటివ్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా చికిత్సా పెప్టైడ్‌ల పోస్ట్-ట్రీట్మెంట్. మాలిక్యూల్స్ (బాసెల్, స్విట్జర్లాండ్) 26(15), 4688 (2021).
యాంగ్, వై. & జెంగ్, ఎక్స్. బయోపాలిమర్‌లకు మిశ్రమ-మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు దాని అనువర్తనాలు. యాంగ్, వై. & జెంగ్, ఎక్స్. బయోపాలిమర్‌లకు మిశ్రమ-మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు దాని అనువర్తనాలు.యాంగ్, యు. మరియు జెంగ్, X. మిశ్రమ మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు బయోపాలిమర్‌లకు దాని అప్లికేషన్. యాంగ్, Y. & గెంగ్, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 యాంగ్, వై. & జెంగ్, ఎక్స్. బయోపాలిమర్లలో మిశ్రమ మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు దాని అప్లికేషన్.యాంగ్, యు. మరియు జీన్, X. బయోపాలిమర్‌లకు మిశ్రమ మోడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ మరియు దాని అప్లికేషన్.జె. క్రోమాటోగ్రఫీ. ఎ 1218(49), 8813–8825 (2011).