Баъзе мавзӯъҳои ҳалли мушкилоти LC ҳеҷ гоҳ кӯҳна намешаванд, зеро дар амалияи LC мушкилот вуҷуд доранд, ҳатто вақте ки технологияи асбоб бо мурури замон беҳтар мешавад. Роҳҳои зиёде мавҷуданд, ки мушкилот дар системаи LC метавонанд ба миён оянд ва дар шакли авҷи бад ба вуҷуд оянд. Вақте ки масъалаҳои марбут ба шакли қуллаи авҷ пайдо мешаванд, рӯйхати кӯтоҳи сабабҳои эҳтимолии ин натиҷаҳо ба содда кардани таҷрибаи бартарафсозии мушкилоти мо кӯмак мекунад.
Навиштани ин сутуни "LC Troubleshooting" ва фикр кардан дар бораи мавзӯъҳо ҳар моҳ шавқовар буд, зеро баъзе мавзӯъҳо ҳеҷ гоҳ аз услуб берун намераванд. Дар ҳоле ки дар соҳаи тадқиқоти хроматография баъзе мавзӯъҳо ё ғояҳо кӯҳна мешаванд, зеро онҳоро ғояҳои навтар ва беҳтар иваз мекунанд, дар соҳаи ҳалли мушкилот, зеро мақолаи аввалин оид ба бартарафсозии мушкилот дар ин маҷалла нашр шуда буд (дар LC Journal) дар баъзе мавридҳо (мавзуъҳои LC Journal 18) дар гузашта ҷойгузин мешаванд. чанд сол, ман якчанд бахшҳои LC Troubleshooting ба тамоюлҳои муосир, ки ба хроматографияи моеъ (LC) таъсир мерасонанд, тамаркуз кардам (масалан, муқоисаи нисбии фаҳмиши мо дар бораи таъсири фишор ба нигоҳдорӣ [2] Пешрафтҳои нав) Тафсири мо аз натиҷаҳои LC ва чӣ гуна бартараф кардани мушкилот бо асбобҳои муосири LC. Дар қисмати ин моҳи худ, ман ба силсилаи ин моҳ, ки дар моҳи декабри соли 320 оғоз шудаам, (давом додани силсилаи 321), ва марг” мавзӯҳои бартарафсозии носозиҳои LC — унсурҳое, ки барои ҳар як ҳалли мушкилот, новобаста аз синну соли системае, ки мо истифода мебарем, муҳиманд. Мавзӯи асосии ин силсила ба ҷадвали девории машҳури LCGC “Дастури бартарафсозии носозиҳои LC” (4) овезон аст, ки дар бисёр лабораторияҳо овезон аст. Барои қисми сеюми ин силсила, ман диққати худро ба масъалаҳои марбут ба шакл ё хусусиятҳои эҳтимолии онҳо дар рӯйхат интихоб кардам. аз шакли қуллаи бад!Мо наметавонем ҳамаи ин масъалаҳоро ба таври муфассал дар як мақола баррасӣ кунем, аз ин рӯ, дар ин қисмати аввал дар мавзӯъ, ман ба баъзе аз онҳое, ки аксар вақт мебинам, тамаркуз мекунам. Умедворам, ки корбарони ҷавону пиронсол LC оид ба ин мавзӯи муҳим маслиҳатҳои муфид ва ёдраскуниҳо пайдо мекунанд.
Ман худам бештар ба саволҳои ҳалли мушкилот бо "ҳама чиз имконпазир аст" ҷавоб медиҳам. Ин посух ҳангоми баррасии мушоҳидаҳое, ки тафсирашон душвор аст, метавонад осон ба назар расад, аммо ман онро аксар вақт мувофиқ меҳисобам. Бо сабабҳои зиёди эҳтимолии шакли авҷи паст, ҳангоми баррасии он чӣ мушкилот буда метавонад, ақидаи кушодро нигоҳ доштан муҳим аст ва қодир будан ба авлавият додани сабабҳои эҳтимолӣ барои оғози кӯшишҳои бартарафсозии мушкилот мебошад.
Қадами калидӣ дар ҳама гуна машқҳои бартарафсозии мушкилот - аммо он чизе, ки ба назари ман ночиз аст - эътирофи он аст, ки мушкилоте вуҷуд дорад, ки бояд ҳал шавад. Эътироф кардани он, ки мушкилот вуҷуд дорад, аксар вақт маънои эътироф кардани он аст, ки он чизе, ки бо асбоб рух медиҳад, аз интизориҳои мо фарқ мекунад, ки аз рӯи назария, донишҳои таҷрибавӣ ва таҷриба ташаккул ёфтааст (5). ffy, канори пешбар, думдор ва ғ.), балки инчунин ба паҳнои. Интизориҳои мо дар бораи шакли қуллаи воқеии оддӣ мебошанд. Назария (6) интизории китоби дарсиро хуб дастгирӣ мекунад, ки дар аксари ҳолатҳо қуллаҳои хроматографӣ бояд симметрӣ бошанд ва ба шакли тақсимоти Гаусс мувофиқ бошанд, тавре ки дар расми 1а нишон дода шудааст. Он чизе, ки мо дар ин мақола бештар интизор ҳастем, дар ин мақола дар қуллаи бештар интизорем. Дар расми 1 баъзе имкониятҳои дигареро, ки мушоҳида кардан мумкин аст, нишон медиҳад, ба ибораи дигар, баъзе роҳҳое, ки корҳо метавонанд хато кунанд. Дар боқимондаи ин қисм, мо вақтро барои муҳокимаи баъзе мисолҳои мушаххаси ҳолатҳое, ки метавонанд ба ин шаклҳо оварда расонанд, сарф мекунем.
Баъзан дар хроматограмма қуллаҳо умуман мушоҳида намешаванд, ки дар он ҷое, ки онҳо бояд хориҷ карда шаванд. Диаграммаи девории дар боло зикршуда нишон медиҳад, ки мавҷуд набудани қулла (бо назардошти он ки намуна воқеан таҳлилгари мавриди ҳадафро дар консентратсия дар бар мегирад, ки бояд аксуламали детекторро барои дидани он дар болои садо кофӣ кунад) одатан ба баъзе мушкилоти асбоб ё шароити нодурусти марҳилаи мобилӣ (агар мушоҳида карда шавад) алоқаманд аст.қуллаҳо, одатан хеле “заиф”). Рӯйхати мухтасари мушкилоти эҳтимолӣ ва роҳҳои ҳалли ин категорияро дар Ҷадвали I пайдо кардан мумкин аст.
Тавре ки дар боло зикр гардид, масъалаи то чӣ андоза васеъшавии қулларо пеш аз таваҷҷӯҳ кардан ва кӯшиши ислоҳ кардани он бояд таҳаммул кард, як мавзӯи мураккабест, ки ман дар мақолаи оянда баррасӣ хоҳам кард. Таҷрибаи ман ин аст, ки васеъшавии назарраси қулла аксар вақт бо тағирёбии назаррас дар шакли қулла ҳамроҳ мешавад ва думҳои қуллаҳо нисбат ба қуллаҳои пеш аз қулла ё тақсимшавӣ бештар маъмуланд. :
Ҳар яке аз ин масъалаҳо дар шумораҳои қаблии Troubleshooting LC ба таври муфассал баррасӣ шудааст ва хонандагоне, ки ба ин мавзӯъҳо таваҷҷӯҳ доранд, метавонанд ба ин мақолаҳои қаблӣ барои маълумот дар бораи сабабҳои аслӣ ва роҳҳои ҳалли эҳтимолии ин мушкилот муроҷиат кунанд.Тафсилоти бештар.
Қуллаи думдор, пешрафт ва тақсимшавӣ ҳама метавонанд аз падидаҳои кимиёвӣ ё физикӣ ба вуҷуд оянд ва рӯйхати роҳҳои ҳалли эҳтимолии ин мушкилот вобаста ба он ки мо бо мушкилоти кимиёвӣ ё физикӣ сару кор дорем, ба таври васеъ фарқ мекунад. Аксар вақт, бо муқоисаи қуллаҳои гуногун дар хроматограмма, шумо метавонед маслиҳатҳои муҳимро дар бораи он пайдо кунед, ки кадоме аз ҳама гунаҳкортарин шакли зоҳирии физикӣ аст. Агар танҳо як ё якчанд қуллаҳо таъсир расонанд, аммо боқимондаҳо хуб ба назар мерасанд, сабаб эҳтимолан кимиёвӣ аст.
Сабабҳои кимиёвии пайдоиши думболи қуллаҳо хеле мураккабанд, то дар ин ҷо ба таври мухтасар муҳокима кунем. Хонандаи шавқманд барои муҳокимаи амиқтар ба шумораи ахири “LC Troubleshooting” муроҷиат мекунад (10). Аммо, як чизи осон барои кӯшиш кардан аст, ки кам кардани массаи таҳлилгари воридшуда ва бубинад, ки оё шакли қулла беҳтар мешавад. массаҳои хурди таҳлилшаванда ё шароити хроматографиро бояд тағир дод, то шаклҳои беҳтарини қуллаҳо ҳатто ҳангоми ворид кардани массаҳои калонтар ба даст оварда шаванд.
Инчунин сабабҳои зиёди физикии эҳтимолии пайдоиши думҳои қуллаи баланд вуҷуд доранд. Хонандагоне, ки ба муҳокимаи муфассали имкониятҳо таваҷҷӯҳ доранд, ба шумораи дигари охирини "LC Troubleshooting" (11) ишора мекунанд. Яке аз сабабҳои маъмултарини физикии думболии қуллаи авҷ пайвасти заиф дар нуқта байни инжектор ва детектор аст (12). Мисоли шадид дар ин система дар чанд ҳафта пеш сохта шудааст, ки дар расми 1 сохта шудааст. клапани тазриќї, ки мо пештар истифода набурда будем, ва як ҳалқаи тазриќї ҳаҷми хурд бо ферруле, ки ба як капилляри аз пӯлоди зангногир қолаб шуда буд, насб кард. Пас аз чанд таҷрибаҳои ибтидоии бартараф кардани мушкилот, мо фаҳмидем, ки умқи бандар дар статори клапан тазриќї хеле амиқтар аз он буд, ки мо одат карда будем, ки дар натиҷа ҳаҷми мурдаи калон дар поёни он мушкили дигар, мо метавонем ба осонӣ дар қубури он танзим карда, дар бандар ҳал карда шавад. ferrule ба мавқеи дуруст барои нест кардани ҳаҷми мурда дар поёни бандар.
Қуллаҳои ҷабҳаҳо, ба монанди онҳое, ки дар расми 1е нишон дода шудаанд, инчунин метавонанд бо мушкилоти физикӣ ё химиявӣ ба вуҷуд оянд. Сабаби умумии физикии канори пешрав дар он аст, ки қабати зарраҳои сутун хуб баста нашудаанд ё зарраҳо бо мурури замон аз нав ташкил шудаанд. Тавре ки дар натиҷаи думболи қуллаи ин падидаи физикӣ ба вуҷуд омадааст, роҳи беҳтарини ислоҳи ин иваз кардани сутун ва идома додани пайдоиши он аст. Дар шароити идеалӣ (хаттӣ) миқдори аналитие, ки дар марҳилаи стационарӣ нигоҳ дошта мешавад (аз ин рӯ, омили нигоҳдорӣ) ба консентратсияи моддаи таҳлилшаванда дар сутун вобаста аст. r чун массаи бештар ворид карда мешавад. Илова бар ин, шаклҳои ғайрихаттӣ шакли қуллаҳои хроматографиро муайян мекунанд, ки дар натиҷа кунҷҳои пешбаранда ё пасипарӣ ба вуҷуд меоянд. Тавре ки ҳангоми изофабории оммавӣ, ки боиси ҷамъшавии қуллаи баланд мегардад (10), қуллаи пешравиро, ки дар натиҷаи нигоҳдории ғайрихаттӣ ба вуҷуд омадааст, инчунин метавонад бо роҳи кам кардани массаи таҳлили воридшаванда ташхис кард. Барои кам кардани ин рафтор шароити хроматографӣ бояд тағир дода шавад.
Баъзан мо он чизеро мушоҳида мекунем, ки дар расми 1f нишон дода шудааст, ки қуллаи “тақсимшуда” ба назар мерасад. Қадами аввал дар ҳалли ин мушкилот муайян кардани он аст, ки оё шакли қулла аз сабаби коэлюцияи қисман аст (яъне мавҷудияти ду пайвастагиҳои алоҳида, вале ба ҳам наздик). Қуллаҳои "тақсим" бо физикӣ алоқаманданд. Иҷрои кор ба худи сутун ҳеҷ иртиботе надорад. Аксар вақт, муҳимтарин далели ин тасмим ин аст, ки оё ҳама қуллаҳо дар хроматограмма шаклҳои тақсимшударо нишон медиҳанд ё танҳо як ё ду.агар ҳамаи қуллаҳо тақсим карда шаванд, ин эҳтимол як масъалаи ҷисмонӣ аст, эҳтимолан ба худи сутун вобаста аст.
Қуллаҳои тақсимшуда вобаста ба хосиятҳои физикии сутуни худи сутун одатан аз сабаби қисман басташуда ё аз нав ташкил кардани зарраҳо дар сутун, имкон медиҳад, ки марҳилаи мобилӣ нисбат ба марҳилаи мобилӣ дар минтақаҳои муайяни ташаккули канали сутун .дар дигар минтақаҳо (11) ҷараён гирад.аммо, дар таҷрибаи ман, ин одатан кӯтоҳмуддат аст, на ҳалли дарозмуддат. Ин аксар вақт бо сутунҳои муосир марговар аст, агар зарраҳо дар дохили сутун дубора якҷоя шаванд. Дар ин лаҳза, беҳтар аст, ки сутунро иваз кунед ва идома диҳед.
Қуллаи дар расми 1g, инчунин аз як мисоли ба наздикӣ дар лабораторияи шахсии ман, одатан нишон медиҳад, ки сигнал он қадар баланд аст, ки он ба охири баландии диапазони вокуниш расидааст. Барои детекторҳои абсорбенси оптикӣ (дар ин ҳолат UV), вақте ки консентратсияи таҳлилгар хеле баланд аст, таҳлилшаванда қисми зиёди нури аз ҳуҷайраи ҷараёни детектор гузаштаро ҷаббида мекунад ва аз ин шароит нури хеле кам боқӣ мемонад. манбаъҳои гуногуни садо, аз қабили нури бесарпаноҳ ва "ҷараёни торик", сигналро аз ҷиҳати намуди зоҳирӣ хеле "норанҷ" мегардонанд ва аз консентратсияи таҳлилгарон новобаста аз он.Вақте ки ин рӯй медиҳад, мушкилотро аксар вақт тавассути кам кардани ҳаҷми сӯзандоруи таҳлилшаванда ба осонӣ ҳал кардан мумкин аст - кам кардани ҳаҷми тазриқ, ҳал кардани намуна ё ҳарду.
Дар мактаби хроматография, мо сигнали детекторро (яъне меҳвари y дар хроматограмма) ҳамчун нишондиҳандаи консентратсияи таҳлилшаванда дар намуна истифода мебарем. Бинобар ин дидани хроматограмма бо сигнали зери сифр ба назар аҷиб менамояд, зеро тафсири оддӣ ин аст, ки ин консентратсияи манфии таҳлилро нишон медиҳад - ин албатта аз ҷиҳати ҷисмонӣ имконнопазир аст.
Дар ин ҳолат, қуллаи манфӣ танҳо маънои онро дорад, ки молекулаҳое, ки аз сутун ҷудо мешаванд, нури камтар аз худи фазаи мобилиро дарҳол пеш аз қулла ва баъд аз қулла мегиранд. Ин метавонад, масалан, ҳангоми истифодаи дарозии мавҷҳои нисбатан пасти муайянкунанда (<230 нм) ва иловаҳои фазаи мобилӣ, ки қисми зиёди нурро дар ин дарозии мавҷҳо бирӯяд. Барои омода кардани каҷи калибрченкунӣ ва ба даст овардани маълумоти дақиқи миқдорӣ, воқеан қуллаҳои манфиро истифода бурдан мумкин аст, аз ин рӯ, ҳеҷ як сабаби асосии пешгирӣ аз онҳо вуҷуд надорад (ин усулро баъзан “муайянкунии ғайримустақими ултрабунафш” меноманд) (13). Аммо, агар мо дар ҳақиқат мехоҳем, ки аз қуллаҳои манфӣ комилан канорагирӣ кунем, дар ҳолати муайян кардани ҷаббида, ҳалли беҳтарин ин аст, ки аз ҷабби дигар аз таркиби мавҷҳои дигар истифода баранд. фазаи мобилӣ, то ки онҳо нисбат ба таҳлилгарон нури камтар гиранд.
Қуллаҳои манфӣ инчунин метавонанд ҳангоми истифодаи муайянкунии шохиси шикастани (RI) вақте пайдо шаванд, ки шохиси шикастани ҷузъҳои ғайр аз моддаи таҳлилшаванда дар намуна, ба монанди матритсаи ҳалкунанда, аз шохиси шикастани фазаи мобилӣ фарқ мекунад. Ин инчунин ҳангоми муайян кардани нури ултрабунафш ба амал меояд, аммо ин таъсир нисбат ба ҳарду ҳолат бо роҳи кам кардани мувофиқати манфии намуна кам карда мешавад. матритса ба марҳилаи мобилӣ.
Дар қисми сеюм дар мавзӯи асосии ҳалли мушкилоти LC, ман ҳолатҳоеро муҳокима кардам, ки дар онҳо шакли қуллаи мушоҳидашуда аз шакли қуллаи пешбинишуда ё муқаррарӣ фарқ мекунад. Бартарафсозии самараноки чунин мушкилот аз донистани шаклҳои қуллаи интизоршуда оғоз мешавад (дар асоси назария ё таҷрибаи қаблӣ бо усулҳои мавҷуда), аз ин рӯ, дуршавӣ аз ин интизориҳо аён аст. Мушкилоти шакли қуллаи онҳо дорои потенсиали зиёди гуногун доранд, дар ин, тафсилоти гуногуни насбкунӣ, дар ин ва ғайра. сабабҳоеро, ки ман аксар вақт мебинам. Донистани ин тафсилот ҷои хубе барои оғози ҳалли мушкилот фароҳам меорад, аммо ҳамаи имкониятҳоро дар бар намегирад. Хонандагоне, ки ба рӯйхати амиқтари сабабҳо ва роҳҳои ҳалли онҳо таваҷҷӯҳ доранд, метавонанд ба диаграммаи девории LCGC “Дастури бартарафсозии носозиҳо” муроҷиат кунанд.
(4) Диаграммаи девории LCGC "Дастур оид ба ҳалли мушкилот".https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) А. Фелингер, Таҳлили маълумот ва коркарди сигнал дар хроматография (Elsevier, New York, NY, 1998), саҳ. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF and Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.