ขอขอบคุณที่เยี่ยมชม Nature.com คุณกำลังใช้เบราว์เซอร์เวอร์ชันที่รองรับ CSS ได้จำกัด เพื่อประสบการณ์ที่ดีที่สุด เราขอแนะนำให้คุณใช้เบราว์เซอร์ที่อัปเดตแล้ว (หรือปิดใช้งานโหมดความเข้ากันได้ใน Internet Explorer) นอกจากนี้ เพื่อให้มั่นใจว่าจะได้รับการสนับสนุนอย่างต่อเนื่อง เราจึงแสดงเว็บไซต์โดยไม่ใช้รูปแบบและ JavaScript
แสดงสไลด์ 3 สไลด์พร้อมกัน ใช้ปุ่ม Previous และ Next เพื่อเลื่อนดูสไลด์ 3 สไลด์พร้อมกัน หรือใช้ปุ่ม Slider ที่ท้ายสไลด์เพื่อเลื่อนดูสไลด์ 3 สไลด์พร้อมกัน
อนุภาคซิลิกาที่มีรูพรุนถูกเตรียมโดยวิธีโซลเจลพร้อมการปรับเปลี่ยนบางอย่างเพื่อให้ได้อนุภาคที่มีรูพรุนกว้าง อนุภาคเหล่านี้ถูกทำให้เป็นอนุพันธ์ด้วย N-ฟีนิลมาเลอิไมด์-เมทิลไวนิลไอโซไซยาเนต (PMI) และสไตรีนผ่านกระบวนการโพลีเมอไรเซชันแบบถ่ายโอนโซ่ย้อนกลับ (RAFT) เพื่อผลิตโพลีเอไมด์ที่แทรกด้วย N-ฟีนิลมาเลอิไมด์ เฟสคงที่สไตรีน (PMP) คอลัมน์สเตนเลสที่มีรูเจาะแคบ (เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 100 × 1.8 มม.) ถูกบรรจุด้วยสารบรรจุแบบสลารี ประสิทธิภาพทางโครมาโตกราฟีของคอลัมน์ PMP ได้รับการประเมินเพื่อแยกส่วนผสมของเปปไทด์สังเคราะห์ที่ประกอบด้วยเปปไทด์ 5 ชนิด (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) และไฮโดรไลเซตทริปติกของอัลบูมินในซีรัมของมนุษย์ (HAS) ภายใต้เงื่อนไขการสกัดที่เหมาะสม จำนวนแผ่นเพลทที่มีส่วนผสมของเปปไทด์ตามทฤษฎีจะถึง 280,000 แผ่นต่อตารางเมตร เมื่อเปรียบเทียบประสิทธิภาพการแยกของคอลัมน์ที่พัฒนาขึ้นกับคอลัมน์ RP-Amide เชิงพาณิชย์ของ Ascentis Express พบว่าประสิทธิภาพการแยกของคอลัมน์ PMP เหนือกว่าคอลัมน์เชิงพาณิชย์ในแง่ของประสิทธิภาพการแยกและความละเอียด
อุตสาหกรรมชีวเภสัชกรรมได้กลายมาเป็นตลาดโลกที่กำลังขยายตัว โดยมีส่วนแบ่งการตลาดที่เพิ่มขึ้นอย่างมากในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา ด้วยการเติบโตอย่างรวดเร็วของอุตสาหกรรมชีวเภสัชกรรม1,2,3 ทำให้มีความต้องการการวิเคราะห์เปปไทด์และโปรตีนเป็นอย่างมาก นอกจากเปปไทด์เป้าหมายแล้ว ยังมีสิ่งเจือปนต่างๆ ที่เกิดขึ้นระหว่างการสังเคราะห์เปปไทด์ ดังนั้น จึงจำเป็นต้องมีการทำให้บริสุทธิ์ด้วยโครมาโตกราฟีเพื่อให้ได้เปปไทด์ที่มีความบริสุทธิ์ตามต้องการ การวิเคราะห์และจำแนกลักษณะโปรตีนในของเหลวในร่างกาย เนื้อเยื่อ และเซลล์เป็นงานที่ท้าทายอย่างยิ่ง เนื่องจากมีสปีชีส์ที่อาจตรวจพบได้จำนวนมากในตัวอย่างหนึ่ง แม้ว่าการสเปกโตรมิเตอร์มวลจะเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพในการจัดลำดับเปปไทด์และโปรตีน แต่ถ้าตัวอย่างดังกล่าวถูกนำเข้าสู่เครื่องสเปกโตรมิเตอร์มวลโดยตรง การแยกสารก็จะไม่น่าพอใจ ปัญหานี้สามารถแก้ไขได้โดยการทำโครมาโตกราฟีของเหลว (LC) ก่อนการวิเคราะห์ MS ซึ่งจะลดปริมาณสารวิเคราะห์ที่เข้าสู่เครื่องสเปกโตรมิเตอร์มวลในช่วงเวลาที่กำหนด4,5,6 นอกจากนี้ สารวิเคราะห์สามารถรวมตัวในบริเวณแคบๆ ระหว่างการแยกเฟสของเหลว ซึ่งจะทำให้สารวิเคราะห์เหล่านี้มีความเข้มข้นมากขึ้นและเพิ่มความไวในการตรวจจับ MS โครมาโทกราฟีของเหลว (LC) มีความก้าวหน้าอย่างมากในช่วงทศวรรษที่ผ่านมา และได้กลายเป็นวิธีการที่ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการวิเคราะห์โปรตีโอมิกส์7,8,9,10
โครมาโทกราฟีของเหลวแบบเฟสย้อนกลับ (RP-LC) ใช้กันอย่างแพร่หลายในการทำให้บริสุทธิ์และแยกส่วนผสมของเปปไทด์โดยใช้ซิลิกาที่ดัดแปลงด้วยออกตาเดซิล (ODS) เป็นเฟสคงที่11,12,13 อย่างไรก็ตาม เนื่องจากโครงสร้างที่ซับซ้อนและลักษณะแอมโฟเทอริกของเฟสคงที่14,15 ของ RP จึงไม่สามารถแยกเปปไทด์และโปรตีนออกจากกันได้อย่างน่าพอใจ ดังนั้น การวิเคราะห์เปปไทด์และโปรตีนที่มีชิ้นส่วนที่มีขั้วและไม่มีขั้วจึงต้องใช้เฟสคงที่ที่ออกแบบมาเป็นพิเศษเพื่อโต้ตอบและรักษาสารวิเคราะห์เหล่านี้ไว้16 โครมาโทกราฟีแบบผสมซึ่งมีปฏิสัมพันธ์หลายโหมดสามารถเป็นทางเลือกแทน RP-LC สำหรับการแยกเปปไทด์ โปรตีน และส่วนผสมที่ซับซ้อนอื่นๆ ได้ มีการเตรียมเฟสคงที่แบบผสมหลายแบบและใช้คอลัมน์ที่เต็มไปด้วยเฟสคงที่เหล่านี้เพื่อแยกเปปไทด์และโปรตีน17,18,19,20,21 เนื่องจากมีกลุ่มขั้วและไม่มีขั้ว เฟสคงที่โหมดผสม (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, การแทรกสอดแบบขั้ว/RPLC) จึงเหมาะสำหรับการแยกเปปไทด์และโปรตีน22,23,24,25,26,27,28 เฟสคงที่ที่มีการแทรกสอดแบบขั้วพร้อมกลุ่มขั้วที่มีพันธะโควาเลนต์แสดงความสามารถในการแยกที่ดีและการคัดเลือกเฉพาะสำหรับสารวิเคราะห์แบบขั้วและไม่มีขั้วเนื่องจากการแยกขึ้นอยู่กับปฏิสัมพันธ์ระหว่างสารวิเคราะห์และเฟสคงที่ ปฏิสัมพันธ์หลายโหมด 29,30,31,32 เมื่อไม่นานมานี้ Zhang et al. ได้เฟสคงที่ที่ปลายเบเฮนิลของโพลีเอมีนและแยกไฮโดรคาร์บอน สารต้านอาการซึมเศร้า ฟลาโวนอยด์ นิวคลีโอไซด์ เอสโตรเจน และสารวิเคราะห์อื่นๆ ได้สำเร็จ วัสดุคงที่ฝังแบบขั้วมีทั้งกลุ่มขั้วและไม่มีขั้ว จึงสามารถใช้แยกเปปไทด์และโปรตีนออกเป็นส่วนที่ชอบน้ำและไม่ชอบน้ำได้ คอลัมน์อินไลน์แบบโพลา (เช่น คอลัมน์ C18 พร้อมอินไลน์อะไมด์) มีจำหน่ายภายใต้ชื่อทางการค้าว่าคอลัมน์ Ascentis Express RP-Amide แต่คอลัมน์เหล่านี้ใช้เพื่อการวิเคราะห์อะไมด์ 33 เท่านั้น
ในการศึกษาปัจจุบัน เฟสคงที่ฝังตัวแบบมีขั้ว (N-phenylmaleimide, embedding polystyrene) ได้รับการเตรียมและประเมินผลสำหรับการแยกเปปไทด์และการแยก HSA ด้วยทริปติก กลยุทธ์ต่อไปนี้ถูกใช้เพื่อเตรียมเฟสคงที่ อนุภาคซิลิกาที่มีรูพรุนได้รับการเตรียมตามขั้นตอนที่อธิบายไว้ในเอกสารเผยแพร่ก่อนหน้านี้ของเรา โดยมีการเปลี่ยนแปลงบางส่วนในรูปแบบการเตรียม 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39 อัตราส่วนของยูเรีย โพลีเอทิลีนไกลคอล (PEG), TMOS และกรดอะซิติกในน้ำได้รับการปรับเพื่อให้ได้อนุภาคซิลิกาที่มีขนาดรูพรุนขนาดใหญ่ ประการที่สอง ลิแกนด์ฟีนิลมาเลอิไมด์-เมทิลไวนิลไอโซไซยาเนตชนิดใหม่ได้รับการสังเคราะห์ และอนุภาคซิลิกาที่อนุพันธ์ได้ถูกนำมาใช้เพื่อเตรียมเฟสคงที่ฝังตัวแบบมีขั้ว เฟสคงที่ที่ได้จะถูกบรรจุลงในคอลัมน์สแตนเลส (เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 100 × 1.8 มม.) ตามรูปแบบการบรรจุที่เหมาะสมที่สุด การบรรจุของคอลัมน์ได้รับความช่วยเหลือจากการสั่นสะเทือนทางกลเพื่อให้แน่ใจว่ามีชั้นที่สม่ำเสมอภายในคอลัมน์ คอลัมน์ที่บรรจุได้รับการประเมินสำหรับการแยกส่วนผสมของเปปไทด์ที่ประกอบด้วยเปปไทด์ห้าชนิด (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, เปปไทด์ leucine-enkephalin) และไฮโดรไลเซตทริปซินของอัลบูมินในซีรัมของมนุษย์ (HSA) พบว่าส่วนผสมของเปปไทด์และสารสกัดทริปซินของ HSA แยกออกจากกันด้วยความละเอียดและประสิทธิภาพที่ดี ประสิทธิภาพการแยกของคอลัมน์ PMP ถูกเปรียบเทียบกับประสิทธิภาพของคอลัมน์ Ascentis Express RP-Amide พบว่าเปปไทด์และโปรตีนมีความละเอียดที่ดีและประสิทธิภาพการแยกสูงบนคอลัมน์ PMP และประสิทธิภาพการแยกของคอลัมน์ PMP สูงกว่าของคอลัมน์ Ascentis Express RP-Amide
PEG (โพลีเอทิลีนไกลคอล) ยูเรีย กรดอะซิติก ไตรเมทอกซีออร์โธซิลิเกต (TMOS) ไตรเมทิลคลอโรซิเลน (TMCS) ทริปซิน อัลบูมินในซีรัมของมนุษย์ (HSA) แอมโมเนียมคลอไรด์ ยูเรีย เฮกซาเมทิลเมทาคริลอยล์ไดซิลาเซน (HMDS) เมทาคริลอยล์คลอไรด์ (MC) สไตรีน 4-ไฮดรอกซี- TEMPO เบนโซอิลเปอร์ออกไซด์ (BPO) อะซีโตไนไตรล์ (ACN) สำหรับ HPLC เมทานอล 2-โพรพานอล และอะซิโตน บริษัท Sigma-Aldrich (เซนต์หลุยส์ รัฐมิสซูรี สหรัฐอเมริกา)
ผสมยูเรีย (8 กรัม) โพลีเอทิลีนไกลคอล (8 กรัม) และกรดอะซิติก 0.01 N 8 มล. เป็นเวลา 10 นาที จากนั้นเติม TMOS 24 มล. ลงไปภายใต้การทำให้เย็นด้วยน้ำแข็ง ผสมปฏิกิริยาให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 40°C เป็นเวลา 6 ชั่วโมง จากนั้นที่อุณหภูมิ 120°C เป็นเวลา 8 ชั่วโมงในหม้ออัดไอน้ำสแตนเลส เทน้ำออกแล้วทำให้สารตกค้างแห้งที่อุณหภูมิ 70°C เป็นเวลา 12 ชั่วโมง บดบล็อกนิ่มแห้งให้เรียบและเผาในเตาอบที่อุณหภูมิ 550°C เป็นเวลา 12 ชั่วโมง เตรียมชุดทดสอบ 3 ชุดและกำหนดลักษณะเพื่อทดสอบความสามารถในการทำซ้ำของขนาดอนุภาค ขนาดรูพรุน และพื้นที่ผิว
กลุ่มขั้วและเฟสคงที่สำหรับโซ่โพลีสไตรีน ขั้นตอนการเตรียมอธิบายไว้ด้านล่าง
N-phenylmaleimide (200 มก.) และเมทิลไวนิลไอโซไซยาเนต (100 มก.) ถูกละลายในโทลูอีนที่ปราศจากน้ำ จากนั้นเติม 2,2'-azoisobutyronitrile (AIBN) 0.1 มล. ลงในขวดปฏิกิริยาเพื่อให้ได้โคพอลิเมอร์ของฟีนิลมาเลอิมายด์และเมทิลไวนิลไอโซไซยาเนต (PMCP) จากนั้นให้ความร้อนส่วนผสมที่ 60°C เป็นเวลา 3 ชั่วโมง กรองและทำให้แห้งในเตาอบที่ 40°C เป็นเวลา 3 ชั่วโมง
อนุภาคซิลิกาแห้ง (2 กรัม) ถูกกระจายในโทลูอีนแห้ง (100 มล.) คนและโซนิเคชั่นเป็นเวลา 10 นาทีในขวดก้นกลมขนาด 500 มล. PMCP (10 มก.) ถูกละลายในโทลูอีนและเติมทีละหยดลงในขวดปฏิกิริยาผ่านกรวยเติม ส่วนผสมถูกรีฟลักซ์ที่อุณหภูมิ 100°C เป็นเวลา 8 ชั่วโมง กรอง ล้างด้วยอะซิโตน และทำให้แห้งที่อุณหภูมิ 60°C เป็นเวลา 3 ชั่วโมง จากนั้น อนุภาคซิลิกาที่เกี่ยวข้องกับ PMCP (100 กรัม) ถูกละลายในโทลูอีน (200 มล.) และเติม 4-ไฮดรอกซี-TEMPO (2 มล.) ลงไป โดยมีไดบิวทิลทินไดลอเรต 100 ไมโครลิตรเป็นตัวเร่งปฏิกิริยา ส่วนผสมถูกคนที่อุณหภูมิ 50°C เป็นเวลา 8 ชั่วโมง กรองและทำให้แห้งที่อุณหภูมิ 50°C เป็นเวลา 3 ชั่วโมง
สไตรีน (1 มล.) เบนโซอิลเปอร์ออกไซด์ BPO (0.5 มล.) และอนุภาคซิลิกาที่ติดอยู่กับ TEMPO-PMCP (1.5 กรัม) ถูกกระจายในโทลูอีนและไล่ออกด้วยไนโตรเจน การเกิดพอลิเมอไรเซชันของสไตรีนดำเนินการที่อุณหภูมิ 100°C เป็นเวลา 12 ชั่วโมง ผลิตภัณฑ์ที่ได้ถูกล้างด้วยเมทานอลและทำให้แห้งข้ามคืนที่อุณหภูมิ 60°C แผนภาพทั่วไปของปฏิกิริยาแสดงไว้ในรูปที่ 1
ตัวอย่างถูกทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิ 393 K เป็นเวลา 1 ชั่วโมง จนกระทั่งได้ความดันตกค้างน้อยกว่า 10–3 Torr ใช้ปริมาณ N2 ที่ดูดซับที่ความดันสัมพันธ์ P/P0 = 0.99 เพื่อกำหนดปริมาตรรูพรุนทั้งหมด ศึกษาสัณฐานวิทยาของอนุภาคซิลิกาบริสุทธิ์และอนุภาคซิลิกาที่จับกับลิแกนด์โดยใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด (Hitachi High Technologies, โตเกียว ประเทศญี่ปุ่น) วางตัวอย่างแห้ง (ซิลิกาบริสุทธิ์และอนุภาคซิลิกาที่จับกับลิแกนด์) บนแท่งอะลูมิเนียมโดยใช้เทปคาร์บอน วางทองบนตัวอย่างโดยใช้เครื่องสปัตเตอร์ Q150T และวางชั้นทองคำหนา 5 นาโนเมตรบนตัวอย่าง วิธีนี้ช่วยปรับปรุงประสิทธิภาพของกระบวนการแรงดันต่ำและให้การพ่นเย็นที่ละเอียด การวิเคราะห์ธาตุดำเนินการโดยใช้เครื่องวิเคราะห์องค์ประกอบธาตุ Flash EA1112 ของ Thermo Electron (Waltham, MA, USA) เครื่องวิเคราะห์ขนาดอนุภาค Mastersizer 2000 จาก Malvern (Worcestershire, UK) ถูกนำมาใช้เพื่อหาการกระจายขนาดอนุภาค โดยอนุภาคซิลิกาที่ไม่ได้เคลือบและอนุภาคซิลิกาที่ผูกกับลิแกนด์ (อนุภาคละ 5 มก.) จะถูกกระจายในไอโซโพรพานอล 5 มล. โซนิเคตเป็นเวลา 10 นาที เขย่าเป็นเวลา 5 นาที แล้ววางบนโต๊ะออปติก Mastersizer การวิเคราะห์เทอร์โมกราวิเมทริกจะดำเนินการด้วยอัตรา 5 °C ต่อหนึ่งนาทีในช่วงอุณหภูมิตั้งแต่ 30 ถึง 800 °C
เสาเหล็กกล้าไร้สนิมที่มีรูเจาะแคบบุด้วยใยแก้วที่มีขนาด (ID 100 × 1.8 มม.) ถูกบรรจุโดยวิธีการเติมสารละลายโดยปฏิบัติตามขั้นตอนเดียวกันกับในเอกสารอ้างอิง 31 เสาเหล็กกล้าไร้สนิม (บุด้วยใยแก้ว ID 100 × 1.8 มม.) และทางออกที่มีฟริต 1 µm ถูกเชื่อมต่อกับเครื่องบรรจุสารละลาย (Alltech Deerfield, IL, USA) เตรียมสารแขวนลอยของเฟสคงที่โดยแขวนลอยเฟสคงที่ 150 มก. ในเมทานอล 1.2 มล. และป้อนลงในคอลัมน์อ่างเก็บน้ำ ใช้เมทานอลเป็นตัวทำละลายสารละลายและตัวทำละลายควบคุม บรรจุคอลัมน์โดยใช้ลำดับความดัน 100 MP เป็นเวลา 10 นาที 80 MP เป็นเวลา 15 นาที และ 60 MP เป็นเวลา 30 นาที กระบวนการบรรจุใช้เครื่องสั่นคอลัมน์แก๊สโครมาโตกราฟีสองเครื่อง (Alltech, Deerfield, IL, USA) สำหรับการสั่นสะเทือนทางกลเพื่อให้แน่ใจว่าการบรรจุคอลัมน์สม่ำเสมอ ปิดเครื่องบรรจุสารละลายและปล่อยแรงดันอย่างช้าๆ เพื่อป้องกันไม่ให้สายเสียหาย ถอดคอลัมน์ออกจากหัวฉีดสารละลายและติดตั้งอุปกรณ์ต่ออีกชิ้นหนึ่งเข้ากับทางเข้าและต่อเข้ากับระบบ LC เพื่อทดสอบการทำงานของระบบ
MLC แบบกำหนดเองถูกสร้างขึ้นโดยใช้ปั๊ม LC (10AD Shimadzu, ญี่ปุ่น) เครื่องเก็บตัวอย่างที่มีห่วงฉีด 50 nL (Valco (สหรัฐอเมริกา) C14 W.05) เครื่องไล่แก๊สเมมเบรน (Shimadzu DGU-14A) และหน้าต่างแคปิลลารี UV-VIS อุปกรณ์ตรวจจับ (UV-2075) และไมโครคอลัมน์เคลือบอีนาเมล ใช้ท่อเชื่อมต่อที่แคบและสั้นมากเพื่อลดผลของการขยายตัวของคอลัมน์เพิ่มเติม หลังจากเติมคอลัมน์แล้ว ให้ติดตั้งแคปิลลารี (50 µm id 365) ที่ทางออกของรอยต่อรีดิวซ์ 1/16″ และติดตั้งแคปิลลารี (50 µm) ของรอยต่อรีดิวซ์ การรวบรวมข้อมูลและการประมวลผลโครมาโตแกรมดำเนินการโดยใช้ซอฟต์แวร์ Multichro 2000 ที่ 254 นาโนเมตร การดูดกลืน UV ของสารวิเคราะห์ของวัตถุจะถูกตรวจสอบที่ 0 ข้อมูลโครมาโตกราฟีถูกวิเคราะห์โดยใช้ OriginPro8 (นอร์แทมป์ตัน, รัฐแมสซาชูเซตส์)
อัลบูมินในซีรั่มของมนุษย์ ผงแห้ง ≥ 96% (อิเล็กโทรโฟรีซิสเจลอะกาโรส) 3 มก. ผสมกับทริปซิน (1.5 มก.) ยูเรีย 4.0 M (1 มล.) และแอมโมเนียมไบคาร์บอเนต 0.2 M (1 มล.) คนสารละลายเป็นเวลา 10 นาที แล้วเก็บไว้ในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 6 ชม. จากนั้นดับด้วย TFA 0.1% 1 มล. กรองสารละลายแล้วเก็บที่อุณหภูมิต่ำกว่า 4°C
การแยกส่วนผสมของเปปไทด์และ HSA ที่ได้จากการย่อยด้วยทริปซินในคอลัมน์ PMP ได้รับการประเมินแยกกัน ตรวจสอบการไฮโดรไลซิสด้วยทริปซินของส่วนผสมของเปปไทด์และ HSA ที่แยกจากกันด้วยคอลัมน์ PMP และเปรียบเทียบผลลัพธ์กับคอลัมน์ RP-Amide ของ Ascentis Express คำนวณจำนวนเพลตเชิงทฤษฎีโดยใช้สมการต่อไปนี้:
ภาพ SEM ของอนุภาคซิลิกาบริสุทธิ์และอนุภาคซิลิกาที่ผูกกับลิแกนด์แสดงอยู่ในรูปที่ 2 ภาพ SEM ของอนุภาคซิลิกาบริสุทธิ์ (A, B) แสดงให้เห็นรูปทรงกลมซึ่งอนุภาคมีลักษณะยาวหรือสมมาตรไม่สม่ำเสมอเมื่อเปรียบเทียบกับการศึกษาครั้งก่อนของเรา พื้นผิวของอนุภาคซิลิกาที่ผูกกับลิแกนด์ (C, D) จะเรียบเนียนกว่าพื้นผิวของอนุภาคซิลิกาบริสุทธิ์ ซึ่งอาจเกิดจากโซ่โพลีสไตรีนที่ปกคลุมพื้นผิวของอนุภาคซิลิกา
ภาพถ่ายกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราดของอนุภาคซิลิกาบริสุทธิ์ (A, B) และอนุภาคซิลิกาที่ถูกผูกด้วยลิแกนด์ (C, D)
การกระจายขนาดอนุภาคของอนุภาคซิลิกาบริสุทธิ์และอนุภาคซิลิกาที่ผูกกับลิแกนด์แสดงอยู่ในรูปที่ 2.3(A) กราฟการกระจายขนาดอนุภาคเชิงปริมาตรแสดงให้เห็นว่าขนาดอนุภาคซิลิกาเพิ่มขึ้นหลังจากการปรับเปลี่ยนทางเคมี (รูปที่ 3A) ข้อมูลการกระจายขนาดอนุภาคซิลิกาจากการศึกษาปัจจุบันและการศึกษาครั้งก่อนจะถูกเปรียบเทียบในตารางที่ 1(A) ขนาดอนุภาคเชิงปริมาตร d(0.5) ของ PMP เท่ากับ 3.36 µm เมื่อเทียบกับค่า ad(0.5) ที่ 3.05 µm ในการศึกษาครั้งก่อนของเรา (อนุภาคซิลิกาที่ผูกกับโพลีสไตรีน)34 เนื่องจากการเปลี่ยนแปลงอัตราส่วนของ PEG ยูเรีย TMOS และกรดอะซิติกในส่วนผสมปฏิกิริยา การกระจายขนาดอนุภาคของชุดนี้จะแคบลงเมื่อเทียบกับการศึกษาครั้งก่อนของเรา ขนาดอนุภาคของเฟส PMP มีขนาดใหญ่กว่าเฟสอนุภาคซิลิกาที่ผูกกับโพลีสไตรีนเล็กน้อยที่เราศึกษาก่อนหน้านี้ ซึ่งหมายความว่าการทำฟังก์ชันบนพื้นผิวของอนุภาคซิลิกาด้วยสไตรีนจะสะสมเพียงชั้นโพลีสไตรีน (0.97 µm) บนพื้นผิวซิลิกาเท่านั้น ในขณะที่ในเฟส PMP ความหนาของชั้นอยู่ที่ 1.38 µm
การกระจายขนาดอนุภาค (A) และการกระจายขนาดรูพรุน (B) ของอนุภาคซิลิกาบริสุทธิ์และอนุภาคซิลิกาที่ผูกกับลิแกนด์
ขนาดรูพรุน ปริมาตรรูพรุน และพื้นที่ผิวของอนุภาคซิลิกาที่ใช้ในการศึกษานี้แสดงอยู่ในตารางที่ 1 (B) โปรไฟล์ PSD ของอนุภาคซิลิกาบริสุทธิ์และอนุภาคซิลิกาที่ถูกจับกับลิแกนด์แสดงอยู่ในรูปที่ 3 (B) ผลลัพธ์นั้นเทียบได้กับการศึกษาครั้งก่อนของเรา34 ขนาดรูพรุนของอนุภาคซิลิกาบริสุทธิ์และอนุภาคซิลิกาที่ถูกจับกับลิแกนด์คือ 310 Å และ 241 Å ตามลำดับ ซึ่งบ่งชี้ว่าหลังจากการดัดแปลงทางเคมีแล้ว ขนาดรูพรุนลดลง 69 Å ดังที่แสดงในตารางที่ 1 (B) และเส้นโค้งการเลื่อนจะแสดงในรูปที่ พื้นที่ผิวจำเพาะของอนุภาคซิลิกาในการศึกษานี้คือ 116 m2/g ซึ่งเทียบได้กับการศึกษาครั้งก่อนของเรา (124 m2/g) ดังที่แสดงในตารางที่ 1 (B) พื้นที่ผิว (m2/g) ของอนุภาคซิลิกาหลังจากการดัดแปลงทางเคมีก็ลดลงจาก 116 m2/g เป็น 105 m2/g
ผลการวิเคราะห์ธาตุของเฟสคงที่แสดงไว้ในตารางที่ 2 ปริมาณคาร์บอนของเฟสคงที่ในปัจจุบันคือ 6.35% ซึ่งต่ำกว่าในงานวิจัยก่อนหน้านี้ของเรา (อนุภาคซิลิกาที่เกี่ยวข้องกับโพลีสไตรีน 7.93%35 และ 10.21% ตามลำดับ) 42 ปริมาณคาร์บอนของเฟสคงที่ในปัจจุบันด้านล่างเนื่องจากลิแกนด์ที่มีขั้วบางชนิดเช่นฟีนิลมาเลอิมายด์เมทิลไวนิลไอโซไซยาเนต (PCMP) และ 4-ไฮดรอกซี-TEMPO ถูกนำมาใช้ร่วมกับสไตรีนในการเตรียม SP เปอร์เซ็นต์น้ำหนักของไนโตรเจนในเฟสคงที่ในปัจจุบันคือ 2.21% เมื่อเทียบกับ 0.1735 และ 0.85% ในงานวิจัยก่อนหน้านี้42 ซึ่งหมายความว่าเฟสคงที่ในปัจจุบันมีเปอร์เซ็นต์น้ำหนักของไนโตรเจนสูงเนื่องจากฟีนิลมาเลอิมายด์ ในทำนองเดียวกัน ผลิตภัณฑ์ (4) และ (5) มีปริมาณคาร์บอน 2.7% และ 2.9% ตามลำดับ ในขณะที่ผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้าย (6) มีปริมาณคาร์บอน 6.35% ดังที่แสดงในตารางที่ 2 การวิเคราะห์เทอร์โมกราวิเมทริก (TGA) ถูกใช้ในเฟสคงที่ของ PMP เพื่อทดสอบการสูญเสียน้ำหนัก และเส้นโค้ง TGA จะแสดงในรูปที่ 4 เส้นโค้ง TGA แสดงการสูญเสียน้ำหนัก 8.6% ซึ่งสอดคล้องกับปริมาณคาร์บอน (6.35%) เนื่องจากลิแกนด์มีไม่เพียงแค่ C เท่านั้น แต่ยังมี N, O และ H อีกด้วย
ลิแกนด์ฟีนิลมาเลอิมายด์-เมทิลไวนิลไอโซไซยาเนตถูกเลือกเพื่อปรับเปลี่ยนพื้นผิวของอนุภาคซิลิกาเนื่องจากมีกลุ่มฟีนิลมาเลอิมายด์และไวนิลไอโซไซยาเนตที่มีขั้ว กลุ่มไวนิลไอโซไซยาเนตสามารถทำปฏิกิริยากับสไตรีนเพิ่มเติมโดยการเกิดพอลิเมอไรเซชันของอนุมูลอิสระที่มีชีวิต เหตุผลที่สองคือการแทรกกลุ่มที่มีปฏิสัมพันธ์ปานกลางกับสารวิเคราะห์และไม่มีปฏิสัมพันธ์ไฟฟ้าสถิตที่รุนแรงระหว่างสารวิเคราะห์และเฟสคงที่ เนื่องจากกลุ่มฟีนิลมาเลอิมายด์ไม่มีประจุเสมือนที่ค่า pH ปกติ ความเป็นขั้วของเฟสคงที่สามารถควบคุมได้ด้วยปริมาณสไตรีนที่เหมาะสมและเวลาปฏิกิริยาของการเกิดพอลิเมอไรเซชันของอนุมูลอิสระ ขั้นตอนสุดท้ายของปฏิกิริยา (การเกิดพอลิเมอไรเซชันของอนุมูลอิสระ) มีความสำคัญเนื่องจากจะเปลี่ยนความเป็นขั้วของเฟสคงที่ การวิเคราะห์ธาตุดำเนินการเพื่อตรวจสอบปริมาณคาร์บอนในเฟสคงที่เหล่านี้ พบว่าการเพิ่มปริมาณสไตรีนและเวลาปฏิกิริยาจะเพิ่มปริมาณคาร์บอนในเฟสคงที่และในทางกลับกัน SP ที่เตรียมด้วยสไตรีนที่มีความเข้มข้นต่างกันจะมีปริมาณคาร์บอนต่างกัน ในทำนองเดียวกัน เฟสคงที่เหล่านี้จะถูกวางบนคอลัมน์สแตนเลส และตรวจสอบลักษณะทางโครมาโตกราฟี (การเลือก ความละเอียด ค่า N เป็นต้น) จากการทดลองเหล่านี้ จึงได้เลือกองค์ประกอบที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการเตรียมเฟสคงที่ PMP เพื่อให้มีขั้วที่ควบคุมได้และรักษาสารวิเคราะห์ได้ดี
คอลัมน์ PMP ยังได้รับการประเมินสำหรับการวิเคราะห์ส่วนผสมของเปปไทด์ห้าชนิด (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) โดยใช้ความจุของเฟสเคลื่อนที่ 60/40 (v/v) ACN/น้ำ (0.1% TFA) ที่อัตราการไหล 80 µl/นาที ภายใต้สภาวะการชะที่เหมาะสมที่สุด (200,000 แผ่น/ม.) จำนวนแผ่นเชิงทฤษฎี (N) ต่อคอลัมน์ (100 × 1.8 มม.) คือ 20,000 ± 100 ค่า N สำหรับคอลัมน์ PMP ทั้งสามจะแสดงในตารางที่ 3 และโครมาโทแกรมจะแสดงในรูปที่ 5A การวิเคราะห์อย่างรวดเร็วด้วยอัตราการไหลสูง (700 µl/min) ในคอลัมน์ PMP เปปไทด์ 5 ตัวถูกชะออกภายใน 1 นาที ค่า N ที่ยอดเยี่ยมคือ 13,500 ± 330 ต่อคอลัมน์ (เส้นผ่านศูนย์กลาง 100 x 1.8 มม.) เทียบเท่ากับ 135,000 แผ่น/ม. (รูปที่ 5B) คอลัมน์ 3 คอลัมน์ที่มีขนาดเท่ากัน (เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 100 x 1.8 มม.) ถูกเติมด้วยเฟสคงที่ PMP สามชุดที่แตกต่างกันเพื่อทดสอบความสามารถในการทำซ้ำได้ บันทึกสารวิเคราะห์สำหรับแต่ละคอลัมน์โดยแยกส่วนผสมทดสอบเดียวกันในแต่ละคอลัมน์โดยใช้เงื่อนไขการชะออกที่เหมาะสม จำนวนแผ่น N ตามทฤษฎี และเวลาการคงอยู่ ข้อมูลความสามารถในการทำซ้ำได้สำหรับคอลัมน์ PMP แสดงอยู่ในตารางที่ 4 ความสามารถในการทำซ้ำได้ของคอลัมน์ PMP มีความสัมพันธ์ที่ดีกับค่า %RSD ที่ต่ำมาก ดังที่แสดงในตารางที่ 3
การแยกส่วนผสมของเปปไทด์ในคอลัมน์ PMP (B) และคอลัมน์ Ascentis Express RP-Amide (A), เฟสเคลื่อนที่ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), ขนาดคอลัมน์ PMP (เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 100 x 1.8 มม.) การวิเคราะห์ลำดับการชะของสารประกอบ: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) และ 5 (leucic acid enkephalin)
คอลัมน์ PMP (เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 100 x 1.8 มม.) ได้รับการประเมินสำหรับการแยกไฮโดรไลเซตทริปซินของอัลบูมินในซีรั่มของมนุษย์ด้วย HPLC โครมาโทแกรมในรูปที่ 6 แสดงให้เห็นว่าตัวอย่างถูกแยกออกได้ดีด้วยความละเอียดที่ดีมาก สารละลาย HSA ถูกวิเคราะห์โดยใช้อัตราการไหล 100 μl/นาที เฟสเคลื่อนที่ 70/30 อะซีโตไนไตรล์/น้ำ และ 0.1% TFA การแยก HSA ถูกแบ่งออกเป็น 17 พีคตามที่แสดงในโครมาโทแกรม (รูปที่ 6) ซึ่งสอดคล้องกับเปปไทด์ 17 ตัว ประสิทธิภาพการแยกพีคแต่ละพีคจากไฮโดรไลเซต HSA ได้รับการคำนวณและค่าต่างๆ จะแสดงในตารางที่ 5
ไฮโดรไลเสตทริปติก HSA ถูกแยกบนคอลัมน์ PMP (เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 100 x 1.8 มม.) อัตราการไหล (100 μl/นาที) เฟสเคลื่อนที่ 60/40 อะซีโตไนไตรล์/น้ำ และ TFA 0.1%
โดยที่ L คือความยาวคอลัมน์ η คือความหนืดของเฟสเคลื่อนที่ ΔP คือแรงดันด้านหลังของคอลัมน์ และ u คือความเร็วเชิงเส้นของเฟสเคลื่อนที่ ค่าการซึมผ่านของคอลัมน์ PMP คือ 2.5 × 10–14 m2 อัตราการไหลคือ 25 µl/min ใช้ 60/40 v/v ACN/น้ำ ค่าการซึมผ่านของคอลัมน์ PMP (ID 100 × 1.8 mm) ใกล้เคียงกับค่าการซึมผ่านของการศึกษา Ref.34 ครั้งก่อนของเรา ค่าการซึมผ่านของคอลัมน์ที่เต็มไปด้วยอนุภาคที่มีรูพรุนผิวเผินคือ 1.7×10 .6 µm, 2.5×10-14 m2 สำหรับอนุภาค 5 µm43 ดังนั้น ค่าการซึมผ่านของเฟส PMP จึงใกล้เคียงกับค่าการซึมผ่านของอนุภาคแกน-เปลือกที่มีขนาด 5 µm
โดยที่ Wx คือมวลของคอลัมน์ที่เติมคลอโรฟอร์ม Wy คือมวลของคอลัมน์ที่เติมเมทานอล และ ρ คือความหนาแน่นของตัวทำละลาย ความหนาแน่นของเมทานอล (ρ = 0.7866) และคลอโรฟอร์ม (ρ = 1.484) ความพรุนรวมของคอลัมน์อนุภาคซิลิกา-C18 (เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 100 × 1.8 มม.)34 และคอลัมน์ C18-ยูเรีย31 ที่เราศึกษาก่อนหน้านี้คือ 0.63 และ 0.55 ตามลำดับ ซึ่งหมายความว่าการมีลิแกนด์ยูเรียจะลดการซึมผ่านของเฟสคงที่ ในทางกลับกัน ความพรุนรวมของคอลัมน์ PMP (เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 100 × 1.8 มม.) คือ 0.60 คอลัมน์ PMP มีความซึมผ่านได้น้อยกว่าคอลัมน์ที่อัดแน่นไปด้วยอนุภาคซิลิกาที่จับกับ C18 เนื่องจากในเฟสคงที่ประเภท C18 ลิแกนด์ C18 จะยึดติดกับอนุภาคซิลิกาเป็นสายตรง ในขณะที่ในเฟสคงที่ประเภทโพลีสไตรีน โพลีเมอร์ที่ค่อนข้างหนาจะก่อตัวขึ้นรอบ ๆ อนุภาค ชั้น A ในการทดลองทั่วไป จะคำนวณรูพรุนของคอลัมน์ได้ดังนี้:
ในรูปที่ 7A, B แสดงกราฟ Van Deemter สำหรับคอลัมน์ PMP (id 100 x 1.8 mm) และคอลัมน์ Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) ภายใต้เงื่อนไขการชะแบบเดียวกัน คือ 60/40 ACN/H2O และ 0.1% TFA 20 µl/min ถึง 800 µl/min บนคอลัมน์ทั้งสอง ค่า HETP ขั้นต่ำที่อัตราการไหลที่เหมาะสม (80 µl/min) คือ 2.6 µm และ 3.9 µm สำหรับคอลัมน์ PMP และคอลัมน์ Ascentis Express RP-Amide ตามลำดับ ค่า HETP แสดงให้เห็นว่าประสิทธิภาพการแยกของคอลัมน์ PMP (id 100 x 1.8 mm) สูงกว่าคอลัมน์ Ascentis Express RP-Amide ที่มีจำหน่ายในท้องตลาด (id 100 x 1.8 mm) มาก กราฟแวนดีมเตอร์ในรูปที่ 7(A) แสดงให้เห็นว่าการลดลงของค่า N นั้นไม่ได้เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่ออัตราการไหลเพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับการศึกษาครั้งก่อนของเรา ประสิทธิภาพการแยกที่สูงขึ้นของคอลัมน์ PMP (id 100 × 1.8 มม.) เมื่อเปรียบเทียบกับคอลัมน์ Ascentis Express RP-Amide นั้นขึ้นอยู่กับรูปร่างและขนาดของอนุภาคที่ได้รับการปรับปรุงและขั้นตอนการบรรจุคอลัมน์ที่ซับซ้อนที่ใช้ในงานปัจจุบัน34
(A) กราฟ Van Deemter (HETP เทียบกับความเร็วเชิงเส้นของเฟสเคลื่อนที่) ที่ได้จากคอลัมน์ PMP (id 100 x 1.8 มม.) ใน 60/40 ACN/H2O โดยมี TFA 0.1% (B) กราฟ Van Deemter (HETP เทียบกับความเร็วเชิงเส้นของเฟสเคลื่อนที่) ที่ได้จากคอลัมน์ Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 มม.) ใน 60/40 ACN/H2O โดยมี TFA 0.1%
เฟสคงที่แบบโพลาของโพลีสไตรีนที่แทรกเข้าไปได้รับการเตรียมและประเมินผลสำหรับการแยกส่วนผสมของเปปไทด์สังเคราะห์และไฮโดรไลเซตทริปติกของอัลบูมินในซีรัมของมนุษย์ (HSA) ในโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ประสิทธิภาพโครมาโทกราฟีของคอลัมน์ PMP สำหรับส่วนผสมของเปปไทด์นั้นยอดเยี่ยมในแง่ของประสิทธิภาพการแยกและความละเอียด ประสิทธิภาพการแยกที่ปรับปรุงของคอลัมน์ PMP นั้นเกิดจากหลายสาเหตุ เช่น ขนาดอนุภาคซิลิกาและขนาดรูพรุน การสังเคราะห์เฟสคงที่ที่ควบคุมได้ และวัสดุบรรจุคอลัมน์ที่ซับซ้อน นอกเหนือจากประสิทธิภาพการแยกที่สูงแล้ว ข้อดีอีกประการของเฟสคงที่นี้คือแรงดันย้อนกลับของคอลัมน์ต่ำที่อัตราการไหลสูง คอลัมน์ PMP สามารถทำซ้ำได้สูงและสามารถใช้ในการวิเคราะห์ส่วนผสมของเปปไทด์และการย่อยด้วยทริปติกของโปรตีนต่างๆ เราตั้งใจที่จะใช้คอลัมน์นี้สำหรับการแยกสารประกอบชีวภาพจากผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติ สารสกัดจากพืชสมุนไพรและเห็ดในโครมาโทกราฟีของเหลว ในอนาคต คอลัมน์ PMP จะถูกประเมินสำหรับการแยกโปรตีนและแอนติบอดีโมโนโคลนัลด้วย
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. และ Petersson, P. การศึกษาวิจัยระบบการแยกเปปไทด์โดยโครมาโทกราฟีเฟสย้อนกลับ ตอนที่ 1: การพัฒนาโปรโตคอลสำหรับการจำแนกลักษณะคอลัมน์ Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. และ Petersson, P. การศึกษาวิจัยระบบการแยกเปปไทด์โดยโครมาโทกราฟีเฟสย้อนกลับ ตอนที่ 1: การพัฒนาโปรโตคอลสำหรับการจำแนกลักษณะคอลัมน์Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., และ Petersson, P. การตรวจสอบระบบการแยกเปปไทด์โดยโครมาโทกราฟีเฟสย้อนกลับ ส่วนที่ 1: การพัฒนาโปรโตคอลสำหรับการจำแนกลักษณะคอลัมน์ Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. และ Petersson, P. การศึกษาวิจัยระบบการแยกเปปไทด์โดยโครมาโทกราฟีเฟสย้อนกลับ ตอนที่ 1: การพัฒนาโปรโตคอลสำหรับลักษณะเฉพาะของคอลัมน์ Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. และ Petersson, P. การศึกษาวิจัยระบบการแยกเปปไทด์โดยโครมาโทกราฟีเฟสย้อนกลับ ตอนที่ 1: การพัฒนาโปรโตคอลสำหรับลักษณะเฉพาะของคอลัมน์Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., และ Petersson, P. การตรวจสอบระบบการแยกเปปไทด์โดยโครมาโทกราฟีเฟสย้อนกลับ ส่วนที่ 1: การพัฒนาโปรโตคอลสำหรับการจำแนกลักษณะคอลัมน์J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)。
Gomez, B. et al. วิธีการสร้างเปปไทด์ที่ใช้งานได้ดีขึ้นสำหรับการรักษาโรคติดเชื้อ เทคโนโลยีชีวภาพ ความสำเร็จ 36(2), 415–429 https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. และ Khrestchatisky, M. เปปไทด์สังเคราะห์เพื่อการบำบัด: วิทยาศาสตร์และตลาด Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. และ Khrestchatisky, M. เปปไทด์สังเคราะห์เพื่อการบำบัด: วิทยาศาสตร์และตลาดVliege P, Lisowski V, Martinez J และ Chreschatyski M. เปปไทด์สังเคราะห์เพื่อการบำบัด: วิทยาศาสตร์และตลาดVliege P, Lisowski V, Martinez J และ Khreschatsky M. เปปไทด์สังเคราะห์เพื่อการบำบัด: วิทยาศาสตร์และตลาด การค้นพบยา วันนี้ 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010)
Xie, F., Smith, RD และ Shen, Y. โครมาโตกราฟีของเหลวโปรตีโอมิกส์ขั้นสูง Xie, F., Smith, RD และ Shen, Y. โครมาโตกราฟีของเหลวโปรตีโอมิกส์ขั้นสูงดู F., Smith RD และ Shen Yu โครมาโตกราฟีของเหลวโปรตีโอมิกขั้นสูง Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. องค์ประกอบโปรตีนขั้นสูง 液相色谱。ดู F., Smith RD และ Shen Yu โครมาโตกราฟีของเหลวโปรตีโอมิกขั้นสูงJ. โครมาโทกราฟี A 1261, 78–90 (2012)
Liu, W. et al. โครมาโทกราฟีของเหลวขั้นสูง-สเปกโตรมิเตอร์มวลสามารถรวมเมตาโบโลมิกส์และโปรตีโอมิกส์แบบกว้างๆ ได้ ทวารหนัก Chim. Acta 1069, 89–97 (2019)
Chesnut, SM และ Salisbury, JJ บทบาทของ UHPLC ในการพัฒนาเภสัชกรรม Chesnut, SM และ Salisbury, JJ บทบาทของ UHPLC ในการพัฒนาเภสัชกรรมChesnut, SM และ Salisbury, JJ บทบาทของ UHPLC ในการพัฒนาเภสัชกรรมChesnut, SM และ Salisbury, JJ บทบาทของ UHPLC ในการพัฒนายา J. Sept Science. 30(8), 1183–1190 (2007)
Wu, N. และ Clausen, AM แง่มุมพื้นฐานและเชิงปฏิบัติของโครมาโทกราฟีของเหลวแรงดันสูงพิเศษเพื่อการแยกสารอย่างรวดเร็ว Wu, N. และ Clausen, AM แง่มุมพื้นฐานและเชิงปฏิบัติของโครมาโทกราฟีของเหลวแรงดันสูงพิเศษเพื่อการแยกสารอย่างรวดเร็วWu, N. และ Clausen, AM แง่มุมพื้นฐานและเชิงปฏิบัติของโครมาโทกราฟีของเหลวแรงดันสูงเพื่อการแยกอย่างรวดเร็ว Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方เลดี้。 Wu, N. และ Clausen, AM แง่มุมพื้นฐานและเชิงปฏิบัติของโครมาโทกราฟีของเหลวแรงดันสูงพิเศษสำหรับการแยกอย่างรวดเร็วWu, N. และ Clausen, AM แง่มุมพื้นฐานและเชิงปฏิบัติของโครมาโทกราฟีของเหลวแรงดันสูงเพื่อการแยกอย่างรวดเร็วJ. Sept. วิทยาศาสตร์. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA และ Tchelitcheff, P. การใช้โครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงในการพัฒนาเภสัชกรรม Wren, SA และ Tchelitcheff, P. การใช้โครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงในการพัฒนาเภสัชกรรมRen, SA และ Chelischeff, P. การใช้โครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงพิเศษในการพัฒนาเภสัชกรรม Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物เปิด发中的应用。 เรน, SA และ Tchelitcheff, P.Ren, SA และ Chelischeff, P. การประยุกต์ใช้โครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงในการพัฒนายาเจ. โครมาโตกราฟี 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2549).
Gu, H. et al. ไฮโดรเจลขนาดใหญ่ที่มีรูพรุนแบบโมโนลิธิกที่ได้จากอิมัลชันน้ำมันในน้ำที่มีเฟสภายในสูงเพื่อการฟอกเอนเทอโรไวรัส 71 อย่างมีประสิทธิภาพ โครงการเคมี วารสาร 401, 126051 (2020)
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA บทบาทของโครมาโตกราฟีของเหลวในโปรตีโอมิกส์ Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA บทบาทของโครมาโตกราฟีของเหลวในโปรตีโอมิกส์Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. และ Wilkins, JA บทบาทของโครมาโตกราฟีของเหลวในโปรตีโอมิกส์ Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. และ Wilkins, JA บทบาทของโครมาโตกราฟีของเหลวในโปรตีโอมิกส์J. โครมาโทกราฟี. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
เฟเคเต้, เอส., วูเตย์, เจ.-แอล. & Guillarme, D. แนวโน้มใหม่ในการแยกเปปไทด์และโปรตีนที่ใช้ในการรักษาโดยโครมาโทกราฟีของเหลวเฟสย้อนกลับ: ทฤษฎีและการประยุกต์ใช้ & Guillarme, D. แนวโน้มใหม่ในการแยกเปปไทด์และโปรตีนที่ใช้ในการรักษาโดยโครมาโทกราฟีของเหลวเฟสย้อนกลับ: ทฤษฎีและการประยุกต์ใช้ & Guillarme, D. Новые тенденции в разделении терапевтических пептидов и белков с помощью жидкостной хроматографии с обращенной фазой: теория и приложения. & Guillarme, D. แนวโน้มใหม่ในการแยกเปปไทด์และโปรตีนที่ใช้ในการรักษาโดยใช้โครมาโทกราฟีของเหลวแบบเฟสย้อนกลับ: ทฤษฎีและการประยุกต์ใช้ & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 และ กิลลาร์เม, ดี.และ Guillarmé, D. แนวโน้มใหม่ในการแยกเปปไทด์และโปรตีนที่ใช้ในการรักษาโดยใช้โครมาโทกราฟีของเหลวแบบเฟสย้อนกลับ: ทฤษฎีและการประยุกต์ใช้J. Pharm. Biomedical Science. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC การแยกเปปไทด์สองมิติโดยใช้ระบบ RP-RP-HPLC ที่มีค่า pH ต่างกันในมิติของการแยกครั้งแรกและครั้งที่สอง Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC การแยกเปปไทด์สองมิติโดยใช้ระบบ RP-RP-HPLC ที่มีค่า pH ต่างกันในมิติของการแยกครั้งแรกและครั้งที่สองGilar M., Olivova P., Dali AE และ Gebler JK การแยกเปปไทด์สองมิติโดยใช้ระบบ RP-RP-HPLC ที่มีค่า pH ต่างกันในมิติของการแยกครั้งแรกและครั้งที่สองGilar M., Olivova P., Dali AE และ Gebler JK การแยกเปปไทด์สองมิติโดยใช้ค่า pH ที่แตกต่างกันในมิติการแยกครั้งแรกและครั้งที่สองโดยใช้ระบบ RP-RP-HPLC J. Sept Science. 28 (14), 1694–1703 (2005)
Fellitti, S. et al. การตรวจสอบการถ่ายเทมวลและลักษณะจลนศาสตร์ของคอลัมน์โครมาโทกราฟีสมรรถนะสูงที่บรรจุด้วยอนุภาค C18 ที่มีรูพรุนเต็มที่และมีรูพรุนผิวเผินที่มีขนาดเล็กกว่า 2 µm J. Sept Science. 43 (9–10), 1737–1745 (2020)
Piovesana, S. et al. แนวโน้มล่าสุดและความท้าทายในการวิเคราะห์ในการแยก การระบุ และการตรวจสอบความถูกต้องของเปปไทด์ชีวภาพจากพืช anus. Creature anal. Chemical. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. ภูมิทัศน์โปรตีโอมิกส์ของอาณาจักรแห่งชีวิต Nature 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)
De Luca, K. et al. Post-treatment of therapeutic peptides by preparative liquid chromatography. Molecules (Basel, Switzerland) 26(15), 4688 (2021)
หยาง, วาย. และเกิง, เอ็กซ์. โครมาโทกราฟีแบบผสมโหมดและการประยุกต์ใช้กับไบโอโพลีเมอร์ หยาง, วาย. และเกิง, เอ็กซ์. โครมาโทกราฟีแบบผสมโหมดและการประยุกต์ใช้กับไบโอโพลีเมอร์หยาง, หยู และเกิง, เอ็กซ์ โครมาโทกราฟีโหมดผสมและการประยุกต์ใช้กับไบโอโพลีเมอร์ Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 หยาง, วาย. และเกิง, เอ็กซ์. โครมาโทกราฟีโหมดผสมและการประยุกต์ใช้ในไบโอโพลีเมอร์หยาง, หยู และยีน, เอ็กซ์ โครมาโทกราฟีโหมดผสมและการประยุกต์ใช้กับไบโอโพลีเมอร์J. โครมาโทกราฟี A 1218(49), 8813–8825 (2011)