Nature.com-a gireniňiz üçin sag boluň. Çäkli CSS goldawy bilen brauzer wersiýasyny ulanýarsyňyz. Iň oňat tejribe üçin täzelenen brauzeri ulanmagy maslahat berýäris (ýa-da Internet Explorer-de Gabat geliş tertibini öçüriň). Mundan başga-da, dowamly goldawy üpjün etmek üçin sahypany stil we JavaScript-de görkezýäris.
Birbada üç slaýdyň karuselini görkezýär. Bir gezekde üç slaýddan geçmek üçin Öňki we Indiki düwmelerini ulanyň ýa-da bir gezekde üç slaýddan geçmek üçin slaýder düwmelerini ulanyň.
Gözenekli kremniniň bölejikleri giň gözenekli bölejikleri almak üçin käbir üýtgeşmeler bilen sol-gel usuly bilen taýýarlandy. Bu bölejikler N-fenilmaleimid biri-biri bilen baglanyşykly poliamidleri öndürmek üçin ters zynjyr geçirmek-böleklemek (RAFT) polimerizasiýasy arkaly N-fenilmaleimid-metilwinil izosýanat (PMI) we stirol bilen emele geldi. Stiren (PMP) stasionar fazasy. Dar poslamaýan polat sütünler (içki diametri 100 × 1.8 mm) süýümli gaplama bilen gaplandy. PMP sütüniniň hromatografiki öndürijiligi bäş peptidden (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu aminokislota enkefalin) we adam serumu albumininiň triptiki gidrolizatyndan ybarat sintetiki peptidleriň garyndysyny bölmek üçin baha berildi. Iň amatly elitasiýa şertlerinde, peptidleriň garyndysy bolan tabaklaryň teoretiki sany 280,000 plastinka / inedördül metre ýetdi. Işlenip düzülen sütüniň bölüniş öndürijiligini täjirçilik Ascentis Express RP-Amide sütüni bilen deňeşdireniňde, PMP sütüniniň bölüniş netijeliliginiň aýralyk netijeliligi we çözgüdi taýdan täjirçilik sütüninden has ýokarydygy syn edildi.
Biofarmasewtika pudagy soňky ýyllarda bazar paýynyň ep-esli ýokarlanmagy bilen giňelýän dünýä bazaryna öwrüldi. Biofarmasewtika pudagynyň partlaýjy ösüşi bilen 1,2,3 peptid we belok derňewine uly zerurlyk bar. Maksatly peptidden başga-da, peptid sintezi wagtynda dürli hapalar emele gelýär, şonuň üçin peptidiň islenýän arassalygyny almak üçin hromatografiki arassalama zerur. Beden suwuklyklarynda, dokumalarda we öýjüklerde beloklaryň seljerilmegi we häsiýetlendirilmegi, bir nusgada ýüze çykyp biläýjek görnüşleriň köp bolmagy sebäpli gaty kyn mesele. Köpçülik spektrometri peptidleri we beloklary yzygiderlilikde täsirli gural bolsa-da, şeýle nusgalar köpçülik spektrometrine gönüden-göni girizilse, bölünişik kanagatlanarly bolmaz. Bu mesele, MS analizinden öň suwuk hromatografiýa (LC) ýerine ýetirip, belli bir wagtda köpçülik spektrometrine girýän analitikleriň mukdaryny azaldar4,5,6. Mundan başga-da, analitikler suwuk fazanyň bölünişi wagtynda dar sebitde jemlenip, bu analitikleri jemläp we MS kesgitlemesiniň duýgurlygyny ýokarlandyryp bilerler. Suwuk hromatografiýa (LC) soňky on ýylda ep-esli ösdi we proteomiki derňew üçin giňden ulanylýan usula öwrüldi 7,8,9,10.
Ters fazaly suwuk hromatografiýa (RP-LC), oktadekil üýtgedilen kremnini (ODS) stasionar faza hökmünde peptidleriň garyndylaryny arassalamak we aýyrmak üçin giňden ulanylýar11,12,13. Şeýle-de bolsa, çylşyrymly gurluşy we amfoteriki tebigaty sebäpli 14,15 RP stasionar fazalar peptidleriň we beloklaryň kanagatlanarly bölünmegini üpjün edip bilmeýär. Şonuň üçin peptidleri we beloklary polýar we polýar däl bölekler bilen seljermek, bu analitikleri özara täsir etmek we saklamak üçin ýörite işlenip düzülen stasionar fazalary talap edýär16. Multimodal täsirleri hödürleýän garyşyk hromatografiýa, peptidleri, beloklary we beýleki çylşyrymly garyndylary bölmek üçin RP-LC-e alternatiwa bolup biler. Birnäçe garyşyk görnüşli stasionar fazalar taýýarlandy we bu stasionar fazalar bilen doldurylan sütünler peptidleri we beloklary aýyrmak üçin ulanyldy17,18,19,20,21. Polýar we polýar däl toparlaryň bolmagy sebäpli, garyşyk re stasionar fazalar (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, polýar interkalasiýa / RPLC) peptidleriň we beloklaryň bölünmegi üçin amatlydyr 22,23,24,25,26,27,28. , biri-birine bagly polýar toparlary bilen polýar interkalasiýa stasionar fazalar, polýar we polýar däl analitikler üçin gowy bölüniş mümkinçiliklerini we üýtgeşik seçimliligini görkezýär, sebäbi aýralyk analitigiň we stasionar fazanyň özara täsirine bagly Multimodal täsir 29,30,31,32. Recentlyakynda, Zhangang we başg. 30 poliaminleriň behenil bilen bes edilen stasionar fazalaryny aldy we uglewodorodlary, antidepressantlary, flawonoidleri, nukleozidleri, estrogenleri we käbir beýleki analitikleri üstünlikli aýyrdy. Polýar oturdylan stasionar materialda polýar we polýar däl toparlar bar, şonuň üçin peptidleri we beloklary gidrofob we gidrofil böleklere bölmek üçin ulanylyp bilner. Polýar içerki sütünler (meselem, amid çyzgyly C18 sütünleri) söwda ady Ascentis Express RP-Amide sütünleri bar, ýöne bu sütünler diňe amin 33-iň derňewi üçin ulanylýar.
Häzirki gözlegde, peptidiň bölünmegi we triptiki HSA-nyň bölünmegi üçin polýar oturdylan stasionar faza (N-fenilmaleimid, polistirol goýmak) taýýarlandy we baha berildi. Stasionar tapgyry taýýarlamak üçin aşakdaky strategiýa ulanyldy. Gözenekli kremniniň bölejikleri, 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39 taýýarlyk shemalarynda käbir üýtgeşmeler bilen öňki neşirlerimizde beýan edilen proseduralara laýyklykda taýýarlandy. Karbamid, polietilen glikol (PEG), TMOS we suw-sirke kislotasynyň gatnaşygy uly gözenek ululygyndaky kremniniň bölejiklerini almak üçin düzüldi. Ikinjiden, täze fenilmaleimid-metilwinil izosýanat bagy sintez edildi we polýar oturdylan stasionar fazalary taýýarlamak üçin emele gelen kremniniň bölejikleri ulanyldy. Alnan stasionar faza, optimal gaplama shemasy boýunça poslamaýan polat sütünine (içki diametri 100 × 1.8 mm) gaplandy. Sütüniň gaplanylyşy sütüniň içinde birmeňzeş gatlagy üpjün etmek üçin mehaniki yrgyldy bilen kömek edýär. Gaplanan sütün bäş peptidden (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leýsin-enkefalin peptidi) ybarat bolan peptidleriň garyndysyny bölmek üçin baha berildi. we adam serumu albumininiň (HSA) triptiki gidrolizatlary. Peptid garyndysynyň we HSA triptiki siňdirişiniň oňat çözgüt we netijelilik bilen bölünendigi syn edildi. PMP sütüniniň bölüniş netijeliligi Ascentis Express RP-Amide sütüni bilen deňeşdirildi. Peptidleriň we beloklaryň PMP sütüninde oňat çözgüdi we ýokary bölüniş netijeliligi, PMP sütüniniň bölüniş netijeliligi Ascentis Express RP-Amide sütüninden has ýokarydygy syn edildi.
PEG (polietilen glikol), karbamid, sirke kislotasy, trimetoksiýortosilikat (TMOS), trimetilhlorosilane (TMCS), tripsin, adam serumu albumin (HSA), ammiak hloridi, karbamid, geksametilmetakriloýldisilazan (HMDS), metakrilloil hlorid peroksid (BPO), HPLC üçin asetonitril (ACN), metanol, 2-propanol we aseton. “Sigma-Aldrih” kompaniýasy (Sent-Luis, Missuri, ABŞ).
Karbamid (8 g), polietilen glikol (8 g) we 8 ml 0.01 N. sirke kislotasynyň garyndysy 10 minut garyndy we buz sowadylanda 24 ml TMOS goşuldy. Reaksiýa garyndysy 40 ° C-de 6 sagat, poslamaýan polat awtoklawda bolsa 120 ° C-de 8 sagat gyzdyryldy. Suw dargadyldy we galyndy 70 ° C-de 12 sagat guradyldy. Guradylan ýumşak bloklar birkemsiz ýerleşdirilip, 550 ° C-de 12 sagatlap peçde hasaplandy. Üç partiýa bölejikleriň ululygynyň, gözenegiň ululygynyň we ýerüsti köpelişini barlamak üçin taýýarlandy we häsiýetlendirildi.
Polistirol zynjyrlary üçin polýar topar we stasionar faza. Taýýarlyk tertibi aşakda beýan edilýär.
N-fenilmaleimid (200 mg) we metil winil izosýanat (100 mg) suwsuz toluende eritildi, soň bolsa fenilmaleimidiň we metil winil izokýananyň kopolimerini almak üçin reaksiýa flakasyna 0,1 ml 2,2′-azoisobutyronitril (AIBN) goşuldy. ) Garyndy 60 ° C-de 3 sagat gyzdyryldy, süzüldi we 40 ° C-de ojakda 3 sagat guradyldy.
Guradylan kremniniň bölejikleri (2 g) gury toluene (100 ml) dargadyldy, 500 ml tegelek çüýşede 10 minut garyndy we sonikasiýa edildi. PMCP (10 mg) toluende eräp, goşmaça huni arkaly reaksiýa çüýşesine aşaklygyna goşuldy. Garyndy 100 ° C-de 8 sagatlap şöhlelendi, süzüldi, aseton bilen ýuwuldy we 60 ° C-de 3 sagat guradyldy. Soňra, PMCP (100 g) bilen baglanyşykly kremniniň bölejikleri toluanda (200 ml) eritildi we katalizator hökmünde 100 μl dibutiltin dilauratynyň gatnaşmagynda 4-gidroksi-TEMPO (2 ml) goşuldy. Garyndy 50 ° C-de 8 sagat garyndy, süzüldi we 50 ° C-de 3 sagat guradyldy.
Tiren (1 ml), benzoýl peroksid BPO (0,5 ml) we TEMPO-PMCP (1,5 g) birikdirilen kremniniň bölejikleri toluende dargadyldy we azot bilen arassalandy. Stiranyň polimerizasiýasy 100 ° C-de 12 sagatlap geçirildi. Alnan önüm metanol bilen ýuwuldy we bir gije 60 ° C-da guradyldy. Reaksiýanyň umumy shemasy injirde görkezilýär. biri.
Nusgalar 10–3 Torr-dan az galyndy basyşy alynýança 1 sagatda 393 K derejesinde peseldi. Deňeşdirilen basyşda P / P0 = 0.99 basylan N2 mukdary gözenegiň umumy göwrümini kesgitlemek üçin ulanyldy. Arassa we baglanan kremniniň bölejikleriniň morfologiýasy, elektron mikroskop arkaly gözden geçirildi (Hitachi High Technologies, Tokio, Japanaponiýa). Alýumin çybyklaryna uglerod lentasy bilen gury nusgalar (arassa kremnis we baglanan kremniniň bölejikleri) ýerleşdirildi. Altyn, Q150T tüýdük enjamyny ulanyp, nusgada 5 nm galyňlykdaky Au gatlagy goýuldy. Bu pes woltly prosesiň netijeliligini ýokarlandyrýar we sowuk püskürmegi üpjün edýär. Elemental derňew Termo Elektron (Waltham, MA, ABŞ) Flash EA1112 elementar kompozisiýa analizatorynyň kömegi bilen geçirildi. Bölejikleriň ululygynyň paýlanyşyny almak üçin Malwer bölejikleriniň ululygy analizatory (Worcestershire, Angliýa) Mastersizer 2000 ulanyldy. Örtülmedik kremniniň bölejikleri we baglanan kremniniň bölejikleri (hersi 5 mg) 5 ml izopropanolda dargadyldy, 10 minut sonikasiýa edildi, 5 minut agitasiýa edildi we Mastersizer optiki skameýkasyna ýerleşdirildi. Termogravimetriki derňew minutda 30 ° 800 ° C aralygynda minutda 5 ° C derejesinde geçirilýär.
Ölçegleri (ID 100 × 1.8 mm) aýna süýümli çyzykly poslamaýan polat sütünleri, 31-nji salgydaky ýaly prosedura laýyklykda süýümli doldurma usuly bilen gaplandy. Poslamaýan polat sütün (aýna bilen örtülen, ID 100 × 1 .8 mm) we 1 µm frit bar bolan rozetka gaplaýyş enjamyna birikdirildi (Alltech Deerfield, IL, ABŞ). 1,2 ml metanolda 150 mg stasionar fazany saklap, suw howdany sütünine iýmitlendirip, stasionar fazanyň togtadylmagyny taýýarlaň. Metanol süýümli ergin we gözegçilik çözüji hökmünde ulanyldy. 100 MP basyş yzygiderliligini 10 minut, 80 MP 15 minut, 30 MP üçin 60 MP ulanyp, sütüni gaplaň. Gaplamak prosesi birmeňzeş sütün gaplanyşyny üpjün etmek üçin mehaniki yrgyldy üçin iki gaz hromatografiýa sütün titremesini (Alltech, Deerfield, IL, ABŞ) ulandy. Süýümli gaplaýjyny ýapyň we simiň zaýalanmagynyň öňüni almak üçin basyşy ýuwaş-ýuwaşdan goýberiň. Sütün süýümli burun bilen kesildi we girelgesine başga bir gurnama dakyldy we işleýşini barlamak üçin LC ulgamyna birikdirildi.
LCörite MLC LC nasosy (10AD Şimadzu, Japanaponiýa), 50 nL sanjym aýlawy (Valco (ABŞ) C14 W.05), membrananyň degasseri (Shimadzu DGU-14A) we UV-VIS kapilýar penjiresi arkaly guruldy. Detektor enjamy (UV-2075) we emal mikrokolun. Goşmaça sütüniň giňelmeginiň täsirini azaltmak üçin gaty dar we gysga birleşdiriji turbalary ulanyň. Sütüni dolduranyňyzdan soň, 1/16 ″ azalýan çatrykyň rozetkasyna kapilýar (50 µm id 365) guruň we azalýan çatrykdan kapilýar (50 µm) guruň. Maglumat ýygnamak we hromatogramma gaýtadan işlemek “Multichro 2000” programma üpjünçiligi arkaly amala aşyrylýar. 254 nm tizlikde, analitikleriň UV siňdirişi 0-da gözegçilik edildi. Hromatografiki maglumatlar OriginPro8 (Northampton, MA) ulanylyp seljerildi.
Adamyň serum albumin, lýofilizlenen poroşok, ≥ 96% (agarose gel elektroforezi) 3 mg tripsin (1,5 mg), 4.0 M karbamid (1 ml) we 0,2 M ammiak bikarbonat (1 ml) bilen garylan. Ergin 10 minut garyndy we 37 ° C-de 6 sagat suw wannasynda saklandy, soňra 1 ml 0,1% TFA bilen söndürildi. Ergini süzüň we 4 ° C-den aşakda saklaň.
PMP sütüninde peptidler we triptiki siňdiriş HSA garyndysynyň bölünişine aýratyn baha berildi. PMP sütüni bilen bölünen peptidler we HSA garyndysynyň triptiki gidrolizini barlaň we netijeleri Ascentis Express RP-Amide sütüni bilen deňeşdiriň. Nazary plitalaryň sany aşakdaky deňlemäni ulanyp hasaplanýar:
Arassa kremniniň bölejikleriniň we baglanan kremniniň bölejikleriniň SEM şekilleri 2-nji suratda görkezilýär. Arassa kremniniň bölejikleriniň (A, B) SEM şekilleri, öňki gözleglerimiz bilen deňeşdirilende bölejikleriň uzalýan ýa-da tertipsiz simmetriýasyna eýe bolan sferiki görnüşi görkezýär. Bag (C, D) bilen baglanyşykly kremniniň bölejikleriniň üstü, kremniniň bölejikleriniň üstüni örtýän polistirol zynjyrlary sebäpli bolup bilýän arassa kremniniň bölejiklerinden has ýumşakdyr.
Arassa kremniniň bölejikleriniň (A, B) we baglanan kremniniň bölejikleriniň (C, D) elektron mikrograflaryny gözden geçirmek.
Arassa kremniniň bölejikleriniň we baglanan kremniniň bölejikleriniň bölejikleriniň paýlanyşy 2-nji suratda görkezilýär. (A). Volumetrik bölejikleriň ululygynyň paýlanyş egrileri, kremniniň bölejikleriniň himiki üýtgemelerden soň köpelendigini görkezdi (3A-njy surat). Häzirki gözlegden we öňki barlagdan kremniniň bölejikleriniň ululygynyň paýlanyş maglumatlary 1-nji tablisada (A) deňeşdirilýär. PMP-iň göwrümli bölejikleriniň ululygy d (0,5) 3,36 mkm, öňki gözlegimizde (polistirol bilen baglanan kremniniň bölejikleri) 34 (3,0 mk) bahasy bilen deňeşdirilende 3,36 mkm boldy. Reaksiýa garyndysynda PEG, karbamid, TMOS we sirke kislotasynyň gatnaşygynyň üýtgemegi sebäpli bu partiýanyň bölejikleriň ululygy öňki gözlegimiz bilen deňeşdirilende has dar boldy. PMP fazasynyň bölejikleriniň ululygy, ozal öwrenen polistirol bilen baglanyşykly kremniniň bölejik fazasyndan birneme uludyr. Bu, kremniniň bölejikleriniň stirol bilen işleýşiniň kremniniň üstünde diňe polistirol gatlagyny (0,97 mk) goýandygyny, PMP tapgyrynda gatlagyň galyňlygynyň 1,38 mkm bolandygyny aňladýar.
Bölejikleriň ululygynyň paýlanyşy (A) we arassa kremniniň bölejikleriniň gözenek ululygynyň paýlanyşy (B).
Bu gözlegde ulanylýan kremniniň bölejikleriniň gözenegiň ululygy, gözenegiň göwrümi we üstki meýdany 1-nji tablisada görkezilýär (B). Arassa kremniniň bölejikleriniň we baglanan kremniniň bölejikleriniň PSD profilleri Şekillerde görkezilýär. 3 (B). Netijeler öňki okuwymyz bilen deňeşdirildi34. Arassa we baglanan kremniniň bölejikleriniň gözenek ululyklary degişlilikde 310 Å we 241 Å bolup, himiki üýtgemelerden soň gözenegiň ululygynyň 1 (B) tablisada görkezilişi ýaly 69 Å azalandygyny we smena egrisiniň şekiliniň şekilde görkezilýändigini görkezýär. 1-nji tablisada (B) görkezilişi ýaly, himiki üýtgemeden soň kremniniň bölejikleriniň üstki meýdany (m2 / g) 116 m2 / g-den 105 m2 / g-a çenli azaldy.
Stasionar fazanyň elementar derňewiniň netijeleri tablisada getirilýär. 2. Häzirki stasionar fazanyň uglerod düzümi 6,35% bolup, bu öňki gözlegimizden has pesdir (polistirol bilen baglanyşykly kremniniň bölejikleri, degişlilikde 7,93% 35 we 10.21%) 42. Aşakdaky häzirki stasionar fazanyň uglerod düzümi, sebäbi fenilmaleimid metil winil izosýanat (PCMP) we 4-gidroksi-TEM-de 4-gidroksi ulanylýar. Häzirki stasionar tapgyrda azotyň agram göterimi 0,1735 bilen deňeşdirilende 2,21% we öňki barlaglarda 0.85%. Bu, häzirki stasionar fazanyň fenilmaleimid sebäpli azotyň ýokary agramynyň bardygyny aňladýar. Şonuň ýaly-da, önümler (4) we (5) uglerodyň mukdary degişlilikde 2,7% we 2,9%, soňky önümde (6) 2-nji tablisada görkezilişi ýaly 6,35% uglerod bar. Termogravimetriki derňew (TGA) PMP-iň stasionar tapgyrynda agramy barlamak üçin ulanyldy, we TGA egrisi 4-nji suratda görkezilýär. baglarda diňe C däl, N, O we H. hem bar.
Ligand fenilmaleimid-metilwinil izosýanat, polýar fenilmaleimid we winilisosýanat toparlary sebäpli kremniniň bölejikleriniň ýüzüni üýtgetmek üçin saýlandy. Winil izosýanat toparlary, radikal polimerizasiýa bilen ýaşap, stirol bilen hasam täsir edip biler. Ikinji sebäp, analitik bilen aram täsirleşýän we analitik bilen stasionar fazanyň arasynda güýçli elektrostatik täsirleşmeýän topara girmek, sebäbi fenilmaleimidiň adaty pH-de wirtual zarýady ýok. Stasionar fazanyň polýarlygy, iň oňat mukdarda stirol we erkin radikal polimerizasiýa reaksiýa wagty bilen dolandyrylyp bilner. Reaksiýanyň soňky ädimi (erkin radikal polimerizasiýa) stasionar fazanyň polýarlygyny üýtgedýänligi üçin möhümdir. Bu seljeriş tapgyrlarynda uglerodyň düzümini barlamak üçin elementar derňew geçirildi. Stironyň mukdaryny we reaksiýa wagtyny köpeltmek stasionar fazanyň uglerod mukdaryny we tersine ýokarlandyrýandygy syn edildi. Dürli konsentrasiýa bilen taýýarlanan SP-lerde dürli uglerod ýükleri bar. Şonuň ýaly-da, bu stasionar fazalar poslamaýan polat sütünlerine ýerleşdirildi we olaryň hromatografiki aýratynlyklary (saýlama, çözgüt, N bahasy we ş.m.) barlandy. Bu synaglaryň esasynda, gözegçilik edilýän polýarlygy we analitigiň gowy saklanmagyny üpjün etmek üçin PMP stasionar fazasyny taýýarlamak üçin optimal kompozisiýa saýlandy.
Şeýle hem, PMP sütünine bäş fazaly peptidiň (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leýsin-enkephalin) seljermesi üçin baha berildi. 60/40 (v / v) ACN / suw (0,1% TFA) 80 µl / min. Iň amatly elitasiýa şertlerinde (200,000 plastinka / m), sütüniň başyna (100 × 1.8 mm) teoretiki plitalaryň sany (100 × 1.8 mm) 20,000 ± 100 bolýar. Üç PMP sütüniniň N bahalary 3-nji tablisada we hromatogrammalar 5A suratda görkezilýär. PMP sütüninde ýokary akym tizliginde (700 µl / min) çalt derňew, bir minutyň içinde bäş sany peptid, sütüniň başyna 13,500 ± 330 (diametri 100 x 1.8 mm), 135,000 plastinka / m deňdir (5B-nji surat). Birmeňzeş ululykdaky üç sütün (içki diametri 100 x 1.8 mm) köpelişini barlamak üçin üç dürli PMP stasionar fazasy bilen dolduryldy. Analitikler, iň amatly elitasiýa şertlerini, N teoretiki plitalaryň sanyny we saklanyş wagtyny ulanyp, her sütündäki birmeňzeş synag garyndysyny bölüp, her sütün üçin ýazga alyndy. PMP sütünleri üçin köpeliş maglumatlary 4-nji tablisada görkezilýär. PMP sütüniniň köpelmegi 3-nji tablisada görkezilişi ýaly gaty pes% RSD bahalary bilen gowy baglanyşdyrylýar.
PMP sütüninde (B) we Ascentis Express RP-Amide sütüninde (A) peptid garyndylarynyň bölünişi, ykjam faza 60/40 ACN / H2O (TFA 0.1%), PMP sütüniniň ölçegleri (100 x 1.8 mm id), derňew Birleşmeleriň tertibi tertibi: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gyr) (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) we 5 (leýs kislotasy enkefalin).
HPLC tarapyndan adam serumu albumininiň triptiki gidrolizatynyň bölünmegi üçin PMP sütüni (içki diametri 100 x 1.8 mm) baha berildi. 6-njy suratdaky hromatogramma, nusgalaryň gaty gowy çözgüt bilen gowy bölünendigini görkezýär. HSA çözgütleri 100 μl / min akym tizligini, 70/30 asetonitril / suwy we 0,1% TFA ulanyp, seljerildi. HSA-nyň bölünişi, 17 peptide gabat gelýän hromatogrammada görkezilişi ýaly (6-njy surat) 17 pikire bölündi. Aýry-aýry pikleriň HSA gidrolizatyndan bölüniş netijeliligi hasaplandy we bahalar 5-nji tablisada görkezilýär.
HSA triptiki gidrolizatlar PMP sütüninde (içki diametri 100 x 1.8 mm), akym tizligi (100 μl / min), ykjam faza 60/40 asetonitril / suw we 0,1% TFA bilen bölünipdi.
bu ýerde L sütüniň uzynlygy, η ykjam fazanyň ýapyşygy, ΔP sütüniň arka basyşy, u bolsa ykjam fazanyň çyzykly tizligi. PMP sütüniniň geçirijiligi 2,5 × 10–14 m2, akym tizligi 25 µl / min, 60/40 v / v ulanyldy. ACN / suw. PMP sütüniniň geçirijiligi (ID 100 × 1.8 mm) öňki Ref.34 gözlegimize meňzeýärdi. Superüzleý gözenekli bölejikler bilen doldurylan sütüniň geçirijiligi 1,7 × 10 .6 µm, 5 µm bölejikler üçin 2,5 × 10-14 m2. Şonuň üçin PMP fazasynyň geçirijiligi 5 μm ululykdaky ýadro gabyk bölejikleriniň geçirijiligine meňzeýär.
bu ýerde Wx hloroform bilen doldurylan sütüniň massasy, Wy metanol bilen doldurylan sütüniň massasy, ρ bolsa çözüjiniň dykyzlygy. Metanolyň dykyzlygy (ρ = 0.7866) we hloroform (ρ = 1.484). Silisiýa-C18 bölejik sütüniniň umumy gözenekliligi (100 × 1.8 mm ID) 34 we öň öwrenilen C18-karbamid 31 sütünimiz degişlilikde 0,63 we 0,55 boldy. Bu karbamid baglarynyň bolmagy stasionar fazanyň geçirijiligini peseldýändigini aňladýar. Beýleki tarapdan, PMP sütüniniň umumy gözenegi (içki diametri 100 × 1.8 mm) 0,60. PMP sütünleri C18 bagly kremniniň bölejikleri bilen gaplanan sütünlerden has az geçirijidir, sebäbi C18 görnüşli stasionar fazalarda C18 ligandalar çyzykly zynjyrlarda kremniniň bölejiklerine birikdirilýär, polistirol görnüşli stasionar fazalarda bölejikleriň töwereginde has galyň polimer emele gelýär. gatlak A. Adaty synagda sütüniň gözenekliligi aşakdaky ýaly hasaplanýar:
Injirde. 7A, B PMP sütüni (id 100 x 1.8 mm) we “Ascentis Express RP-Amide” sütüni (id 100 x 1.8 mm), 60/40 ACN / H2O we 0 .1% TFA 20 µl / min-dan 800 µl / min. Iň amatly akym tizliginde (80 µl / min) iň pes HETP bahalary degişlilikde PMP sütüni we Ascentis Express RP-Amide sütüni üçin 2,6 mkm we 3,9 µm boldy. HETP bahalary, PMP sütüniniň (100 x 1.8 mm id) bölüniş netijeliliginiň, täjirçilik taýdan elýeterli Ascentis Express RP-Amide sütüninden (100 x 1.8 mm id) has ýokarydygyny görkezýär. 7-nji (A) suratdaky van Deemter grafigi, öňki gözlegimiz bilen deňeşdirilende akymyň köpelmegi bilen N bahasynyň peselmeginiň ep-esli ýokary däldigini görkezýär. “Ascentis Express RP-Amide” sütüni bilen deňeşdirilende PMP sütüniniň (id 100 × 1.8 mm) has ýokary bölüniş netijeliligi bölejikleriň görnüşine we ululygyna we häzirki işde ulanylýan çylşyrymly sütün gaplama prosedurasyna esaslanýar.
(A) Van Deemter sýu ploteti (HETP vs. ykjam faza çyzykly tizlik) PMP sütüninde (id 100 x 1.8 mm) 60/40 ACN / H2O-da 0,1% TFA bilen alnan. .
Aralyk polistirolyň polýar stasionar fazasy, ýokary öndürijilikli suwuk hromatografiýada sintetiki peptidleriň we adam serumu albumininiň (HSA) triptiki gidrolizatynyň garyndysynyň bölünmegi üçin taýýarlandy we baha berildi. Peptid garyndylary üçin PMP sütünleriniň hromatografiki öndürijiligi, aýralyk netijeliligi we çözgüdi taýdan ajaýyp. PMP sütünleriniň aýralyk netijeliliginiň ýokarlanmagy kremniniň bölejikleriniň ululygy we gözenegiň ululygy, stasionar fazalaryň dolandyrylýan sintezi we çylşyrymly sütün gaplaýyş materiallary ýaly birnäçe sebäplere baglydyr. Sepokary aýralyk netijeliligine goşmaça, bu stasionar fazanyň başga bir artykmaçlygy, ýokary akym tizliginde pes sütün arka basyşydyr. PMP sütünleri ýokary öndürijilikli we peptidleriň garyndylaryny we dürli beloklaryň triptiki siňdirişini seljermek üçin ulanylyp bilner. Bu sütüni bioaktiw birleşmeleri tebigy önümlerden, dermanlyk ösümlikleriň we kömelekleriň ekstraktlaryny suwuk hromatografiýada bölmek üçin ulanmagy maksat edinýäris. Geljekde beloklaryň we monoklonal antikorlaryň bölünmegi üçin PMP sütünlerine hem baha berler.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Pitersson, P. Tersine fazaly hromatografiýa peptid bölüniş ulgamlarynyň derňewi I bölüm: Sütünleri häsiýetlendirmek üçin protokol düzmek. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Pitersson, P. Tersine fazaly hromatografiýa peptid bölüniş ulgamlarynyň derňewi I bölüm: Sütünleri häsiýetlendirmek üçin protokol düzmek.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H. we Petersson, P. Ters fazaly hromatografiýa arkaly peptid bölüniş ulgamlarynyň derňewi, I bölüm: Sütünleri häsiýetlendirmek üçin teswirnama düzmek. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Tersine fazaly hromatografiýa peptid bölüniş ulgamlarynyň derňewi I bölüm: Sütün aýratynlyklary üçin protokol düzmek. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Tersine fazaly hromatografiýa peptid bölüniş ulgamlarynyň derňewi I bölüm: Sütün aýratynlyklary üçin protokol düzmek.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H. we Petersson, P. Ters fazaly hromatografiýa arkaly peptid bölüniş ulgamlarynyň derňewi, I bölüm: Sütünleri häsiýetlendirmek üçin teswirnama düzmek.J. 色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019)。
Gomez, B. we ş.m. Ectokanç keselleri bejermek üçin gowulaşan işjeň peptidleri döretmegiň usullary. Biotehnologiýa. Üstünlikler 36 (2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Wlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Hrestchatisky, M. Sintetiki bejeriş peptidleri: Ylym we bazar. Wlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Hrestchatisky, M. Sintetiki bejeriş peptidleri: Ylym we bazar.Vliege P, Lisowski V, Martinez J we Chreschatyski M. Sintetiki bejeriş peptidleri: ylym we bazar.Vliege P, Lisowski V, Martinez J we Hreschatsky M. Sintetiki bejeriş peptidleri: ylym we bazar. neşe serişdeleriniň tapylmagy. Häzirki wagtda 15 (1-2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Sie, F., Smith, RD & Shen, Y. Ösen proteomiki suwuk hromatografiýa. Sie, F., Smith, RD & Shen, Y. Ösen proteomiki suwuk hromatografiýa.F., Smith RD we Şen Yuu serediň. Ösen proteomiki suwuk hromatografiýa. Sie, F., Smith, RD & Şen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Sie, F., Smith, RD & Shen, Y. Ösen belok düzümi 液相色谱。F., Smith RD we Şen Yuu serediň. Ösen proteomiki suwuk hromatografiýa.J. Hromatografiýa 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. we ş.m. Ösen suwuk hromatografiýa-köpçülik spektrometri giň esasly metabolomika we proteomikany birleşdirmäge ukyply. anus. Çim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Çesnut, SM & Salisbury, JJ UHPLC-iň derman önümçiliginde tutýan orny. Çesnut, SM & Salisbury, JJ UHPLC-iň derman önümçiliginde tutýan orny.Çesnut, SM we Salisberi, JJ UHPLC-iň derman ösüşinde tutýan orny.Çesnut, SM we Salisberi, JJ UHPLC-iň neşe serişdeleriniň ösüşindäki roly. J. Sept Ylym. 30 (8), 1183–1190 (2007).
Wu, N. & Klauzen, AM Çalt bölünmek üçin ultra ýokary basyşly suwuk hromatografiýanyň esasy we amaly taraplary. Wu, N. & Klauzen, AM Çalt bölünmek üçin ultra ýokary basyşly suwuk hromatografiýanyň esasy we amaly taraplary.Wu, N. we Klauzen, AM Çalt bölünmek üçin ýokary basyşly suwuk hromatografiýanyň esasy we amaly taraplary. Wu, N. & Klauzen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Klauzen, AM Çalt bölünmek üçin ultra ýokary basyşly suwuk hromatografiýanyň esasy we amaly taraplary.Wu, N. we Klauzen, AM Çalt bölünmek üçin ýokary basyşly suwuk hromatografiýanyň esasy we amaly taraplary.J. Sentýabr Ylym. 30 (8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Derman ösüşinde ultra öndürijilikli suwuk hromatografiýany ulanmak. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Derman ösüşinde ultra öndürijilikli suwuk hromatografiýany ulanmak.Ren, SA we Chelischeff, P. Derman ösüşinde ultra ýokary öndürijilikli suwuk hromatografiýanyň ulanylmagy. Wren, SA & Thelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA & Çelitçeff, P.Ren, SA we Chelischeff, P. Ultra öndürijilikli suwuk hromatografiýany neşe serişdeleriniň ösüşinde ulanmak.J. Hromatografiýa 1119 (1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. we ş.m. Enterowirusy netijeli arassalamak üçin ýokary içerki fazasy bolan nebitdäki suw emulsiýasyndan alnan monolit makroporoz gidrogel 71. Himiki. taslama. 1urnal 401, 126051 (2020).
Şi, Y .., Sýan, R., Horwat, C. & Wilkins, JA Suwuk hromatografiýanyň proteomikadaky orny. Şi, Y .., Sýan, R., Horwat, C. & Wilkins, JA Suwuk hromatografiýanyň proteomikadaky orny.Şi, Y .., Sýan, R., Horwat, C. we Wilkins, JA Proteomikada suwuk hromatografiýanyň roly. Şi, Y .., Sýan, R., Horwat, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Şi, Y .., Sýan, R., Horwat, C. & Wilkins, JAŞi, Y .., Sýan, R., Horwat, C. we Wilkins, JA Proteomikada suwuk hromatografiýanyň roly.J. Hromatografiýa 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Wutey, J.-L. & Guillarme, D. Terapewtiki peptidleriň we beloklaryň ters fazaly suwuk hromatografiki bölünişiginiň täze ugurlary: Nazaryýet we amalyýetler. & Guillarme, D. Terapewtiki peptidleriň we beloklaryň ters fazaly suwuk hromatografiki bölünişiginiň täze ugurlary: Nazaryýet we amalyýetler. & Гилларме, Д. & Guillarme, D. Terapewtiki peptidleri we beloklary ters fazaly suwuk hromatografiýa bilen bölmegiň täze ugurlary: teoriýa we amalyýetler. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Guillarme, D.we Guillarme, D. Terapewtiki peptidleri we beloklary ters fazaly suwuk hromatografiýa bilen bölmegiň täze ugurlary: teoriýa we amalyýetler.J. Pharm. Biomedikal ylym. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Oliwowa, P., Dali, AE & Gebler, JC Birinji we ikinji aýralyk ölçeglerinde dürli pH bolan RP-RP-HPLC ulgamyny ulanyp, peptidleriň iki ölçegli bölünişi. Gilar, M., Oliwowa, P., Dali, AE & Gebler, JC Birinji we ikinji aýralyk ölçeglerinde dürli pH bolan RP-RP-HPLC ulgamyny ulanyp, peptidleriň iki ölçegli bölünişi.Gilar M., Oliwowa P., Dali AE we Gebler JK Birinji we ikinji aýralyk ölçeglerinde dürli pH bolan RP-RP-HPLC ulgamyny ulanyp, peptidleriň iki ölçegli bölünişi.Gilar M., Oliwowa P., Dali AE we Gebler JK RP-RP-HPLC ulgamyny ulanyp, birinji we ikinji aýralyk ölçeglerinde dürli pH bahalaryny ulanyp, peptidleriň iki ölçegli bölünişi. J. Sept Ylym. 28 (14), 1694–1703 (2005).
Fellitti, S. we ş.m. 2 µm-den kiçi doly gözenekli we ýüzleý gözenekli C18 bölejikleri bilen gaplanan ýokary öndürijilikli hromatografiýa sütünleriniň köpçülikleýin geçirişini we kinetiki aýratynlyklaryny derňemek. J. Sept Ylym. 43 (9-10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. we ş.m. Ösümlik bioaktiw peptidleri izolýasiýa etmekde, kesgitlemekde we tassyklamakda soňky tendensiýalar we analitiki kynçylyklar. anus. Anal jandar. Himiki. 410 (15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Müller, JB we ş.m. Durmuş şalygynyň protomiki peýza .y. Tebigat 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luka, K. we ş.m. Terapewtiki peptidleri taýýarlaýjy suwuk hromatografiýa bilen bejermek. Molekulalar (Bazel, Şweýsariýa) 26 (15), 4688 (2021).
Yangaň, Y .. & Geng, X. Garyşyk tertipli hromatografiýa we biopolimerlere ulanylyşy. Yangaň, Y .. & Geng, X. Garyşyk tertipli hromatografiýa we biopolimerlere ulanylyşy.Yangaň, Yu. we Geng, X. Garyşyk re modeim hromatografiýasy we biopolimerlere ulanylyşy. Yangaň, Y .. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yangaň, Y .. & Geng, X. Garyşyk re modeim hromatografiýasy we biopolimerlerde ulanylyşy.Yangaň, Yu. we Gen, X. Garyşyk re modeim hromatografiýasy we biopolimerlere ulanylyşy.J. Hromatografiýa 1218 (49), 8813–8825 (2011).