Nature.com-a gireniňiz üçin sag boluň.Ulanylýan brauzer wersiýaňyzyň çäkli CSS goldawy bar.Iň oňat tejribe üçin täzelenen brauzeri ulanmagy maslahat berýäris (ýa-da Internet Explorer-de Gabat geliş tertibini öçüriň).Şol aralykda, dowamly goldawy üpjün etmek üçin sahypany stil we JavaScript bolmazdan hödürläris.
Angustifolius lupine (NLL, Lupinus angustifolius L.) azyk önümçiligi we topragy gowulaşdyrmak üçin ulanylýan gök ösümlikdir.NLL-iň ekin hökmünde dünýä derejesinde giňelmegi köp sanly patogen kömelekleri, şol sanda weýran ediji antraknoz keselini döredýän lýupin antraknozy özüne çekdi.NLL tohumçylygynda artýan garşylygy görkezýän iki allel, Lanr1 we AnMan ulanyldy, ýöne esasy molekulýar mehanizmler näbelli bolup galýar.Bu gözlegde, Lanr1 we AnMan markerleri Europeanewropanyň NLL nusgalaryny barlamak üçin ulanyldy.Waksinany gözegçilik astynda saklamak, iki çydamly donoryň netijeliligini tassyklady.Differensial gen aňlatma profili wekilçilikli çydamly we duýgur çyzyklarda ýerine ýetirildi.Antraknoza garşylyk “GO: 0006952 Goranmak jogaby”, “GO: 0055114 Redoks prosesi” we “GO: 0015979 Fotosintez” gen ontologiýa adalgalarynyň aşa aşa gysylmagy bilen baglanyşyklydy.Mundan başga-da, Lanr1 (83A: 476) setiri sanjymdan soň çalt transkriptomany gaýtadan programmirlemegi görkezdi, beýleki setirler bolsa bu jogabyň takmynan 42 sagat yza süýşürilendigini görkezdi.Goranyş jogaplary TIR-NBS, CC-NBS-LRR we NBS-LRR genleri, patogenez bilen baglanyşykly 10 belok, lipid geçiriji beloklar, endoglukan-1,3-gl glukozidaza, glisine baý öýjük diwar beloklary we kislorodyň reaktiw ýolundaky genler bilen baglanyşykly.83A: 476-a irki jogaplar, şol sanda fotosintez bilen baglanyşykly genleri seresaplylyk bilen basyp ýatyrmak, kömelek biologiýasynyň wegetatiw ösüş döwründe üstünlikli goraga gabat geldi, bu effektoryň immuniteti güýçlendirýändigini görkezýär.Mandeloop reaksiýasy, umumy gorizontal süýrüşi ýaly haýallaýar.
Dar ýaprakly lýupin (NLL, Lupinus angustifolius L.) Ortaýer deňziniň günbatarynda dörän ýokary belokly däne1,2.Häzirki wagtda haýwanlar we adamlar üçin iýmit hasyly hökmünde ösdürilip ýetişdirilýär.Şeýle hem, simbiotik azotyň bakteriýalary bilen azotyň kesgitlenmegi we topragyň gurluşynyň umumy gowulaşmagy sebäpli ekin dolanyşygy ulgamlarynda ýaşyl dökün hasaplanýar.NLL geçen asyrda çalt eldekileşdirmek prosesini başdan geçirdi we henizem ýokary tohum basyşy3,4,5,6,7,8,9,10,11,12.NLL-iň giňden ösdürilmegi bilen, patogen kömelekleriň yzygiderliligi täze oba hojalygyny ösdürdi we täze ekinleri ýok ediji kesellere sebäp boldy. Düwürtikli daýhanlar we seleksionerler üçin iň täsirli, patogen kömelek, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 sebäpli ýüze çykan antraknozyň peýda bolmagydy. Düwürtikli daýhanlar we seleksionerler üçin iň täsirli, patogen kömelek, Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 sebäpli ýüze çykan antraknozyň peýda bolmagydy. Наиболее примечательным для конмермеров һәм селекционеров люпина было появление антракноза, в чиванного патоныным грибком Коллетотричум лупини (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Daýhanlar we seleksionerler üçin iň bellisi, “Colletotrichum lupini” (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 patogen kömelek sebäpli dörän antraknozyň döremegi boldy.Colletotrichum lupini (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 引起 的。。 let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let真菌 羽扇 let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let let Наиболее поразительным для камермеров һәм селекционеров люпина является появление антракноза, вяываемого патанным грибком Коллетотричум лупини (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13. Düwürtikli daýhanlar we seleksionerler üçin iň täsir galdyryjy, “Colletotrichum lupini” (Bondar) Nirenberg, Feiler & Hagedorn13 patogen kömelek sebäpli dörän antraknozyň ýüze çykmagydyr.Keseliň ilkinji habarlary degişlilikde 1912 we 1929-njy ýyllarda ýüze çykýan adaty alamatlar Braziliýadan we ABŞ-dan geldi.Şeýle-de bolsa, takmynan 30 ýyldan soň patogen Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz diýlip atlandyryldy. & Sak., Teleomorf Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sak., Teleomorf Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sak., Омоморф Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & Sak., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauldyň teleomorfi. & Sak. Omere 有 目的 的 omere Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld。 & Sak. Omere 有 目的 的 omere Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld。 & Sak., Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld в Целенаправленной морфологии. & Sak., Maksatly morfologiýada Glomerella cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk ,. & H. Şrenk ,.we H. Şrenk. & H. 施伦克 ，。 & H. 施伦克 ，。we H. Schlenk ,.20-nji asyryň ortalarynda geçirilen deslapky kesel fenotip görnüşi NLL we sary lupin (L. luteus L.) goşundylarynda käbir garşylygy görkezdi, ýöne synagdan geçen ähli ak lýupin (L. albus L.) goşundylary ýokary derejede duýgur boldy15,16.Geçirilen gözlegler, antraknozyň ösüşiniň ygalyň (howanyň çyglylygy) we temperaturanyň (12-28 ° C aralygynda) ýokarlanmagy bilen baglanyşyklydygyny görkezdi, bu has ýokary temperaturada garşylygyň bozulmagyna sebäp bolýar17, 18. Aslynda, conidia-nyň gögermegi we keseliň başlamagy üçin zerur bolan çyglylyk 12 ° C (16 sagat) -dan dört esse gysgady.Şeýlelik bilen, dowam edýän global ýylylyk antraknozyň ýaýramagyna sebäp boldy.Şeýle-de bolsa, bu kesel Fransiýada (1982) we Ukrainada (1983) howp abanýan howp hökmünde habar berildi, ýöne 20,21-nji ýyllarda lýupin senagaty tarapyndan äsgerilmedi.Birnäçe ýyldan soň bu weýran ediji kesel bütin dünýä ýaýrady we Awstraliýa, Polşa we Germaniýa ýaly lýupin öndürýän ýurtlara-da täsir etdi22,23,24.1990-njy ýyllaryň ortalarynda antraknoz epidemiýasyndan soň, giňişleýin barlag NLL19 nusgalarynda birnäçe çydamly donorlaryň kesgitlenmegine sebäp boldy.Antraknoza garşy NLL garşylygy, dürli germplazma çeşmelerinde tapylan iki sany aýratyn agdyklyk edýän allel tarapyndan dolandyrylýar: ekerançylykda Lanr1, Tanjil we Wonga we AnMan.Mandalay 25, 26. Bu alleller köpeltmek programmalarynda çydamly germplazmyň saýlanmagyny goldaýan molekulýar bellikleri doldurýar25,26,27,28,29,30.Lanr1 allelini göterýän 83A: 476 çydamly tohumçylyk çyzygy, antraknoza garşylygy üçin bölünýän RIL ilatyny almak üçin, P27255 duýgur ýabany çyzyk bilen kesildi, bu bolsa Lanr1 ýerini NLL-1131, 32, 33. Hromosoma bilen baglanyşdyrdy NLL-11), ýöne dürli pozisiýalarda29,34,35.Şeýle-de bolsa, RIL-leriň azlygy we markerler bilen degişli allelleriň arasyndaky genetiki uzaklyk sebäpli, olaryň esasy genleri barada hiç hili ygtybarly netije çykaryp bolmaýar.Beýleki bir tarapdan, genetiki manipulýasiýany kynlaşdyrýan gaty pes dikeldiş potensialy sebäpli lupinlerde ters genetikany ulanmak kyn.
83A: 476 (Lanr1) we Mandelup (AnMan) ýaly gomozigoz ýagdaýynda islenýän allelleri göterýän öý germplazmasynyň ösüşi, ýabany populýasiýalarda alelleriň garşydaş kombinasiýalarynyň barlygy sebäpli antraknoza garşylygy öwrenmek üçin gapy açdy.Molekulýar mehanizmleriň mümkinçilikleri.Belli bir genotiplerden döredilen gorag jogaplaryny deňeşdiriň.Bu gözleg, NLL-iň C. lupini sanjymyna irki transkriptor jogaplaryna baha berdi.Ilki bilen, 215 setirden ybarat Europeanewropa NLL germplazm paneli, Lanr1 we AnMan allellerini bellän molekulýar markerler arkaly barlandy.Antraknoz fenotip görnüşi soňra gözegçilik şertlerinde molekulýar markerler üçin saýlanan 50 NLL setirde geçirildi.Bu synaglaryň esasynda, antraknoza garşylygy we Lanr1 / AnMan allelik düzümi bilen tapawutlanýan dört setir iki sany goşmaça çemeleşmäni ulanyp, diferensial gorag geni aňlatmasy üçin saýlandy: ýokary geçişli RNK yzygiderliligi we real wagt PCR mukdary.
NLLLD gerplmplasm (N = 215 toparynyň toplumy, LANC1 we Anduk (Asiq 1) diňe bir setir (Ansantq) we Anan, ähli markalar üçin "ähli bellikleriň" paýyny "(73,5%) linalaryň paýyny tapdy. .13 setir Lanr1 markeriniň iki “çydamly” allelini, 8 setir bolsa Lanr1-iň “çydamly” allelini öndürdi.marker.AnMan markeriniň “garşylyk” allele (Goşmaça tablisa S1).Anseq3 markeri üçin iki setir, AnManM1 markeri üçin bir heterozigotlydy.42 setir (19.5%) Anseq3 we Anseq4 allelleriniň ters fazalaryny alyp bardy, bu iki sebitiň arasynda rekombinasiýanyň ýokary ýygylygyny görkezýär.Dolandyryş şertlerinde antraknoz fenotipleri (Goşmaça tablisa S2), antraknozanyň agyrlygynda görkezilen synag edilen genotipleriň garşylygynyň üýtgeýşini ýüze çykardy.Orta ballaryň arasyndaky tapawutlar 1.8-den (ortaça çydamly) 6,9-a (duýgur) we ösümlik agramynyň tapawudy 0,62-den (duýgur) 4,45 g (çydamly) aralygynda üýtgeýär. Synagyň iki gaýtalanyşynda (keseliň agyrlyk ballary üçin 0,51, ösümlik agramy üçin P = 0.00017 we 0.61, P <0.0001), şeýle hem bu iki parametriň arasynda (- 0.59 we - 0.77, P <0.0001) arasynda möhüm baglanyşyk bar. Synagyň iki gaýtalanyşynda (keseliň agyrlyk ballary üçin 0,51, ösümlik agramy üçin P = 0.00017 we 0.61, P <0.0001), şeýle hem bu iki parametriň arasynda (- 0.59 we - 0.77, P <0.0001) arasynda möhüm baglanyşyk bar. Вявлена ​​достоверная коррел мат между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях чимимента (0,51 для адов т тестести болезни, P = 0,00017 и 0,61 для мася ра ретия, П <0,0001) 0,0001) 0,0001). Synagyň iki gezek gaýtalanmagynda (keseliň agyrlyk ballary üçin 0,51, ösümlik agramy üçin P = 0.00017 we 0.61, P <0.0001), şeýle hem bu iki parametriň arasynda (- 0.59 we -0.77, P <0.0001) 0.0001 arasynda möhüm baglanyşyk tapyldy.1 0.51 ， P = 0.00017 ， 6 .6 0.61 ， P <0.0001） 这 0.5 0.5 0.5 0.5 - 0.59 和 - 0.77 ， P <0.000在 两两 重复 值相关性 值相关性 相关性相关性 相关性相关性 相关性 <两 <两 0.59 和 - 0.57 和 - 0.57, P <0.0001) 以及 为和 相关性 - 0.59 和 Наблюдалась значительная коррел не между значениями, наблюдаемыми в двух повторностях (оженка т тегести заболевания 0,51, P = 0,00017 и масса рацения 0,61, P <0,0001), и межу э этачи дв. Dublikatda (keseliň agyrlyk derejesi 0,51, P = 0.00017 we ösümlik agramy 0.61, P <0.0001) we bu iki parametriň arasynda (-0.59 we -0 .0001) 0.77, P <0.0001 arasynda möhüm baglanyşyk bar. ).Kesgitli ösümliklerde ýüze çykýan adaty alamatlar, “çopanyň ýaýy” gurluşyna meňzeýän baldagyň gysylmagyny we burulmagyny, soň bolsa mämişi / gülgüne sporozoitler bilen ýumurtga zeperlenmelerini öz içine alýar (Goşmaça 1-nji surat).Lanr1 (83A: 476 we Tanjil) we AnMan (Mandelup) genlerini göterýän Awstraliýa goşundylary ortaça çydamly, 0.0331 we 0,0036).“Çydamly” Lanr1 we / ýa-da AnMan allellerini göterýän käbir setirler keseliň alamatlaryny görkezýär.
Gyzykly tarapy, haýsydyr bir “çydamly” marker allele ýetmezçiligi bolan birnäçe NLL setirinde Boregine (iki bahasy üçin P bahasy <0.0001), Bojar (P bahasy <0.0001 we ösümlik agramy üçin 0.001) we ilat B-549 / 79b (P bahasy <0.0001) we ilat B-549 / 79b Gyzykly tarapy, haýsydyr bir “çydamly” marker allele ýetmezçiligi bolan birnäçe NLL setirinde Boregine (iki bahasy üçin P bahasy <0.0001), Bojar (P bahasy <0.0001 we ösümlik agramy üçin 0.001) we ilat B-549 / 79b (P bahasy <0.0001) we ilat B-549 / 79b Интересно, что несколько kийий NLL, лишенных какого-либо «резистентного» маркерного аллеля, показали вискокий оровень устойчивости к антракнозу (сопоставимый или болье в ок ок ген ыс ыс ыс так так так так так чение P <0,0001 для обоих параметров), Bojar (значение П <0,0001 для оценки и 0,001 для масса ра рения) һәм популяции B-549 / 79b (значение П <0,0001 для оценки һәм незначимо для массы). Gyzykly tarapy, haýsydyr bir 'çydamly' marker alleliniň ýoklugy bilen baglanyşykly birnäçe NLL çyzgysy, Boregine (iki bahasy üçin P bahasy <0.0001), Bojar (P bahasy <0.0001 we ösümlik agramy üçin 0.001) we ilatyň B-549 / 79b (P bahasy <0.0001) we ilatyň B-549 / 79b (P bahasy).Lanr1 或 AnMan 基因型 M ore ore ore ore ore ore ore ore ore 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. B-549 / 79b （得分 P 值 <0.0001 ， 重量 不 显）。 Haýsydyr bir “antigen” markeri bolmadyk käbir NLL ulgamlarynyň Boregine (iki parametr P <0.0001), Bojar (P bahasy <0.0001, ösümlik agramy 0.001) we B-549 / 79b (P bahasy <0.0001, agramy möhüm däl) ýaly ýokary gorizontal garşylygy (Lanr1 ýa-da AnMan genlerine ýa-da has ýokary) görkezýändigi gyzykly. Интересно, что некот заии NLL, лишенные каких-либо маркерных аллеле «резистентности», показали високие оровни устойчивости к антракнозу (сравнимые или више, чем у кнео кровы) пар параметров <0,0001), Bojar (значение P <0,0001, масса расения 0,001) һәм поп Б-549 / 79b (оценка P-значение <0,0001, масса незначительна). Gyzykly tarapy, haýsydyr bir 'garşylyk' marker allelleri bolmadyk käbir NLL setirlerinde Boregine (iki parametr üçin P bahasy <0.0001), Bojar (P-bahasy <0.0001, ösümlik agramy 0.001) we ilat B-549 / 79b (P-baha <0.000) ýaly antraknoza garşylygy (Lanr1 ýa-da AnMan genotipleri bilen deňeşdirip ýa-da has ýokary) görkezdi.Bu hadysa, marker genotipleri bilen kesel fenotipleriniň (P bahalary ~ 0.42-den .9 0.98) arasyndaky baglanyşygyň ýoklugyny düşündirip, täze genetiki garşylyk çeşmesiniň mümkinçiligini görkezýär.Şeýlelik bilen, Kolmogorow-Smirnow synagy, antraknoza garşylyk baradaky maglumatlaryň adatça ballar (P-bahalar 0.25 we 0.11) we ösümlik massasy (P-bahalar 0.47 we 0.55) üçin paýlanýandygyny görkezdi, bu bolsa Lanr1 we AnMan-dan has köp alleliň bardygyny çaklaýaryn.
Antraknoza garşylyk barlagynyň netijelerine esaslanyp, transkriptom derňewi üçin 4 setir saýlandy: 83A: 476, Boregine, Mandelup we Ilat 22660Bal bahalary aşakdakylardy: Boregin (1.71 ± 1.39), 83A: 476 (2.09 ± 1.38), Mandelup (3.82 ± 1.42) we ilaty 22660 (6.11 ± 1.29).
“Illumina NovaSeq 6000” protokoly her nusga üçin ortaça 40.5 çörek jübütine (29,7-den 54,4 ok) (S3 goşmaça tablisa) ýetdi.Salgy yzygiderliliginde deňleşdirme ballary 75.5% -den 88,6% aralygynda.Biologiki köpeltmeleriň arasyndaky eksperimental wariantlaryň arasyndaky okalýan san maglumatlarynyň ortaça arabaglanyşygy 0.812-den 0.997-e çenli (ortaça 0.959). Derňelýän 35,170 geniň 2917-sinde hiç hili aňlatma ýok, galan 4785 gen ähmiýetsiz derejede aňladyldy (esas <5). Derňelýän 35,170 geniň 2917-sinde hiç hili aňlatma ýok, galan 4785 gen ähmiýetsiz derejede aňladyldy (esas <5). 35 35 Derňelýän 35,170 geniň 2917-si hiç hili aňlatma görkezmedi, galan 4785 gen ähmiýetsiz derejede aňladyldy (esas <5).在 分析 的 35,170 个 17 ， 2917 个 85 85 85 4785 个 基因 的 5 5 5 5 5 5 5。35,170 35 35 Derňelýän 35,170 geniň 2917-si beýan edilmedi we galan 4785 geniň ähmiýetsiz aňlatmasy bardy (esas <5).Şeýlelik bilen, synag wagtynda beýan edilen genleriň sany (esasy ortaça ≥ 5) 27,468 (78.1%) boldy (S4 goşmaça tablisa).
Ilkinji gezekden başlap, ähli NLL setirleri transkriptomy (1-nji tablisa) gaýtadan programmirlemek arkaly C. lupini (Col-08 ştammy) sanjymyna jogap berdi, ýöne setirleriň arasynda düýpli tapawutlar ýüze çykdy.Şeýlelik bilen, 83A: 476 garşylyk çyzygy (Lanr1 genini göterýär) ilkinji nokatda (6 at güýji) ep-esli transkriptom programmirlemesini görkezdi, bu wagt beýleki wagt nokatlary bilen deňeşdirilende izolirlenen ýokary we aşaky genleriň sany 31-69 esse köpeldi.Mundan başga-da, bu pik gysga möhletli boldy, sebäbi ikinji gezek (12 at güýji) diňe birnäçe geniň aňlatmasy ep-esli üýtgedi.Gyzykly tarapy, synag synagynda ýokary garşylyk görkezen Boregine, synag wagtynda beýle uly transkripsiýa programmirlemesini başdan geçirmedi.Şeýle-de bolsa, diferensial beýan edilen genleriň (DEG) sany Boregine we 12 HPI-de 83A: 476 deň boldy.Mandelup we ilat 22660, iň soňky nokatda (48 l / s) DEG iň ýokary derejesini görkezdi, bu goranyş çäreleriniň birneme gijikendigini görkezýär.
83A: 476 beýleki liniýalar bilen deňeşdirilende 6 HPI-de C. lupini jogap hökmünde köpçülikleýin transkriptomiki gaýtadan programmirlemegi başdan geçirendigi sebäpli, bu nokatda syn edilen DEG-leriň% 91% nesil aýratynlygydy (1-nji surat).Şeýle-de bolsa, Boregine, Mandelupda 68.5%, 50.9% we 52,6% DEG we 22660 ilat arasynda irki jogaplarda belli bir wagtyň içinde 83A: 476 tapylanlar bilen birmeňzeş gabat geldi.Şeýle-de bolsa, bu DEG-ler häzirki wagtda 83A: 476 ulanyp ýüze çykarylan ähli DEG-leriň diňe az bölegini (0.97–1,70%) düzdi.Mundan başga-da, ösümlik goragynyň jogaplarynyň umumy komponentlerini öz içine alýan ähli setirlerden 11 DEG (S4-S6 goşmaça tablisalar) utgaşdy: lipid geçiriji belok (TanjilG_32225), endoglukan-1,3-gl glukozid fermenti (TanjilG_23384), SAM22 (TanjilGanj3_328) ) we glisine baý gurluşly öýjük diwar beloklary (TanjilG_19701 we TanjilG_19702).Şeýle hem 83A: 476 bilen Boregine 24 HPI (jemi 16-38% DEG) we Mandelup bilen Ilat 22660 arasynda 48 HPI (jemi 14-20% DEG) arasynda has ýokary gabat geliş boldy.
Kolletotrih lupini bilen sanjym edilen dar ýaprakly lýupin (NLL) çyzyklarda diferensial beýan edilen genleriň (DEG) sanyny görkezýän Wenn diagrammasy (Polşanyň Wierzhenice, 1999).Derňelýän NLL setirleri: 83A: 476 (çydamly, Lanr1 allelini göterýän), Boregine (çydamly, genetiki fon belli däl), Mandelup (ortaça çydamly, AnMan allelini göterýän) we 22660 ilat (gaty duýgur).Hpi gysgaltmasy sanjymdan soň birnäçe sagatlap dur.Grafigi ýönekeýleşdirmek üçin nol bahalar aýryldy.
6 at güýji bolan aşa aşa gysylan genler toplumy kanoniki R gen domenleriniň bolmagy üçin derňeldi (Goşmaça tablisa S7).Bu gözleg, diňe 83A: 476 derejesinde NBS-LRR domenleri bilen klassiki kesele garşylyk genleriniň transkriptor induksiýasyny ýüze çykardy.Bu toplum bir TIR-NBS-LRR geninden (tanjilg_05042), bäş sany CC-NBS-LRR geninden (tanjilg_06165, tanjilg_06162, tanjilg_22773, tanjilg_22640, we tanjilg_16162) we Dört NBS-LR16 Tanjilg_162 ) şeýle hem Dört NBS-Lrr (tanjilg_16162) we Dört NBS-LRR (TANJILG_16162).Bu genleriň hemmesiniň konserwirlenen yzygiderlilikde ýerleşdirilen kanoniki domenleri bar.NBS-LRR domen genlerinden başga-da, 6 at güýjünde birnäçe RLL kinase işjeňleşdirildi, biri Boreginde (TanjilG_19877), ikisi Mandelupda (TanjilG_07141 we TanjilG_19877) we ilat sany 22660 (TanjilG_09014 we TanjilG_10361).
C. lupini (Kol-08 ştammy) sanjymyna jogap hökmünde ep-esli üýtgedilen genler gen Ontologiýasy (GO) baýlaşdyryş derňewine sezewar edildi (Goşmaça tablisa S8). Iň ýygy-ýygydan görkezilen biologiki proses termini “GO: 0006952 goranyş jogaby” bolup, ýokary ähmiýetli (P bahasy <0,001) 16 (wagt çyzgysy) kombinasiýasynyň 6-synda peýda boldy (2-nji surat). Iň ýygy-ýygydan görkezilen biologiki proses termini “GO: 0006952 goranyş jogaby” bolup, ýokary ähmiýetli (P bahasy <0,001) 16 (wagt çyzgysy) kombinasiýasynyň 6-synda peýda boldy (2-nji surat). Наиболее часто чрезмерно предветленным ажом биологического ксаса был «GO: 0006952 защитный ответ», который появлялся в 6 из 16 (время × чия) комбинаций с вискокой значимостю (значение П <0,00). Iň ýygy-ýygydan görkezilen biologiki proses termini, ýokary ähmiýetli (P bahasy <0,001) 16 (wagt × nesil) kombinasiýasynyň 6-synda ýüze çykan 'GO: 0006952 goranyş jogaby' boldy (2-nji surat).GO GO 000 GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO GO Iň köp biologiki amal termini, ýokary ähmiýetli (P bahasy <0,001) (图 2) 16 (时间 × 线) kombinasiýanyň 6-synda ýüze çykýan “GO: 0006952 goranyş jogaby”. Наиболее часто чрезмерно предветленным ажом биологического ксаса был «GO: 0006952 Goranyş jogaby», который появлялся в 6 из 16 комбинаций (время × чия) с визокой значимостю (значение П <0,001) (рс. Iň ýygy-ýygydan biologiki proses termini 'GO: 0006952 Goranmak jogaby' bolup, ýokary ähmiýetli (P bahasy <0,001) 16 kombinasiýanyň 6-synda (wagt çyzgysy) peýda boldy (2-nji surat).Bu adalga 83A: 476 we Boregine (6 we 24 at güýji) iki gezek we Mandelup we Ilat 22660 (degişlilikde 12 we 6 at güýji) nokatlarynda has köp görkezilipdir.Bu garaşylýan netije, çydamly çyzyklaryň antifungal jogabyny görkezýär.Mundan başga-da, 83A: 476 C. lupini belli bir gorag jogabyny görkezýän “GO: 0055114 redoks prosesi” adalgasy bilen aňladylýan oksidleýji partlama bilen baglanyşykly genleri çalt induksiýa edip jogap berdi, Boregine bolsa “GO” adalgasy bilen baglanyşykly gorag jogaplaryny ýüze çykardy.: 0006950 Stresse jogap ”.Ilat 22660, ikinji derejeli metabolitleri öz içine alýan gorizontal garşylyk seslenmesini işjeňleşdirdi, “GO: 0016104 Triterpen biosinteziniň prosesi” we “GO: 0006722 triterpen çalşygynyň prosesi” (iki adalga hem genler toplumyna degişlidir) adalgalarynyň sanyny görkezip, GO termini baýlaşdyrmagyň derňewi we Mandelup reaksiýasy durnuklylygy 226. Mandelup we Ilat 22660 GO: 0015979 'fotosintez' we beýleki biologiki amallar adalgasyny öz içine alýar.
Antraks lupine (1999-njy ýylda Polşanyň Wierzhenice şäherindäki lupin meýdanlaryndan alnan Col-08 ştammy) sanjym edilen dar ýaprakly lýupiniň (NLL) transkriptor jogaplary wagtynda diferensial beýan edilen genleriň düşündirişinde saýlanan bioprosess gen ontologiýa terminleri gaty ulaldylýar.Derňelýän NLL setirleri: 83A: 476 (çydamly, birmeňzeş Lanr1 allelini göterýän), Boregine (çydamly, näbelli genetiki fon), Mandelup (ortaça çydamly, birmeňzeş AnMan allelini göterýän) we ilat 22660 (duýgur).
Bu gözleg, antraknoza garşylygy üpjün edýän genleri kesgitlemegi maksat edinýändigi sebäpli, GO “GO: 0006952 Goranyş jogaplary” we “GO: 0055114 Redoks amallary” adalgalaryna berlen genler kesilenler bilen seljerildi, sebäbi iň azyndan bir setir bilen ≥ 30 diýmekdir.Log log2-iň statistiki ähmiýetli bahalaryny birleşdirýän wagt nokady.Bu kriteriýalara laýyk gelýän genleriň sany GO: 656952 we GO: 0055114 üçin 524 boldy.
83A: 476 GO: 0006952 termini bilen düşündirilen iki sany DEG pikini ýüze çykardy, birinjisi 6 dýuýmda 6 gen (64 gen, ýokary we aşak düzgün), ikinjisi dýuýmda 24 gen (15 gen, diňe kadalaşdyrmak).Boregine, GO: 0006952-iň bir wagtyň özünde iň ýokary derejä ýetendigini, ýöne az DEG (11 we 8) we artykmaç işjeňleşdirme bilen görkezdi.Mandeloop 12 we 48 HPI-de GO: 0006952-iň iki sany ýokary derejesini görkezdi, ikisinde-de 12 gen göterilýär (birinjisi işjeňleşdiriji genler bilen, ikinjisi diňe basyş ediji genler bilen), 6 HPI-de (13 gen) 22660 ilat köpelmegiň iň ýokary derejesine eýe boldy.düzgünleşdirmek.Bu piklerdäki GO: 0006952 DEG-iň 96,4% -iniň birmeňzeş jogap (ýokary ýa-da aşak) bolandygyny bellemek gerek, bu genleriň sanynyň tapawudyna garamazdan goranyş jogaplarynda ep-esli gabat gelýändigini görkezýär.GO: 0006952 adalgasy bilen baglanyşykly yzygiderliligiň iň uly topary, 10-njy patogenez bilen baglanyşykly belok (PR-10) belok klassyna we esasy belok lateksine degişli bolan Açlyk Stress-Associated Message Protein 22 (SAM22 meňzeş) kodlaýar.meňzeş (MLP meňzeş) belok) belok (3-nji surat).Iki topar aňlatma häsiýeti we jogap ugry boýunça tapawutlandy.SAM22 meňzeş beloklary kodlaýan genler irki döwürlerde (6 ýa-da 12 at güýji) yzygiderli we ähmiýetli induksiýany görkezdi we synagyň ahyrynda (48 at güýji) jogap bermedi, MLP meňzeş beloklar bolsa 6 at güýjünde koordinasiýa görkezdi.hpi.83A: 476 we 48 sagatda Mandelup, beýleki maglumatlar nokatlarynyň hemmesi diýen ýaly jogap bermedi.Mundan başga-da, SAM22 meňzeş belok genleriniň aňlatma profilindäki tapawutlar, antraknoza garşylygyndaky üýtgeýşi yzarlady, sebäbi has çydamly çyzyklar bu genleri has duýgur genlere garanyňda ep-esli wagt alýardy.Beýleki LlR18A / B meňzeş PR-10 geni, SAM22 meňzeş belok genine gaty meňzeş aňlatma görnüşini görkezdi.
“GO: 0006952 Goranmak jogaby” biologiki prosesiniň esasy bölekleri we Lanr1 we AnMan allelleriniň kandidat genleriniň aňlatma nagyşlary kesgitlenildi.Log2 şkalasy, sanjym edilen (Colletotrichum lupini, lupin meýdanlaryndan, Wizhenika, Polşa, 1999) we şol bir wagtyň özünde gözegçilik (ýasama) ösümlikleriň arasynda log2 bahalaryny (ep-esli üýtgemegi) aňladýar.Aşakdaky dar lýupin çyzyklary derňeldi: 83A: 476 (çydamly, birmeňzeş Lanr1 allelini göterýän), Boregine (çydamly, genetiki fon näbelli), Mandelup (ortaça çydamly, birmeňzeş AnMan allelini göterýän) we Ilat 22660 (duýgur).
Mundan başga-da, RNA-seq kandidat genleri Lanr1 (TanjilG_05042) we AnMan (TanjilG_12861) genleriniň aňlatma profiline baha berildi (3-nji surat).TanjilG_05042 geni, ilkinji gezek (6 at güýji) 83A: 476-da möhüm seslenme (işjeňleşdirme) görkezdi, TanjilG_12861 bolsa Mandeloopda diňe iki wagt nokadynda möhümdi: 6 at güýji (aşak düzgün) we 24 at güýji (6 at güýji).Bilen.).sazlap bolýar)).
GO: 0055114 “redoks prosesi” adalgasynda iň aşa gysylan genler sitokrom P450 beloklaryny we peroksidaza kodlaýan genlerdi (4-nji surat).6 HPI-de 83A: 476-dan izolirlenen nusgalar üçin, sanjym we gözegçilik ösümlikleriniň arasynda iň ýokary ýa-da iň az log2 (ep-esli üýtgeşme) bahalary hasaba alyndy, bu genotipiň jyns sanjymyna ýokary täsirini görkezýär.83A: 476 iň möhüm GO: 0055114 DEG 6 at güýjünde (503 gen) görkezdi, galan setirler 48 at güýjünde (Boregine, 31 gen; Mandelup, 85 gen; we ilat 22660, 78 gen).GO: 0055114 maşgalasynyň genleriniň köpüsinde sanjymlara (işjeňleşdirme we inhibisiýa) iki görnüşli jogap berildi.Gyzykly ýeri, Mandelupe şäherinde 48 at güýji bilen GO: 0055114 termini üçin kesgitlenen DEG-leriň 97,6% -ine çenli bu gözegçilikler ep-esli kiçi göwrüme garamazdan (ýagny, üýtgedilen redoks genleriniň sany, 503-e garşy 85), mandeloupyň antraknoza garşy gijikdirilen transkriptor jogaplarynyň nusgasynyň 83A: 476-yň irki jogabyna meňzeýändigini görkezýär.Boregine we Ilat 22660-da bu ýakynlyk degişlilikde 51,6% we 75,6% pesdir.
“GO: 0055114 Redox prosesi” biologiki prosesiniň adalgasynyň esasy komponentlerini aňlatmagyň görnüşleri ýüze çykaryldy.Log2 şkalasy, sanjym edilen (Colletotrichum lupini, lupin meýdanlaryndan, Wizhenika, Polşa, 1999) we şol bir wagtyň özünde gözegçilik (ýasama) ösümlikleriň arasynda log2 bahalaryny (ep-esli üýtgemegi) aňladýar.Aşakdaky dar lýupin çyzyklary derňeldi: 83A: 476 (çydamly, birmeňzeş Lanr1 allelini göterýän), Boregine (çydamly, genetiki fon näbelli), Mandelup (ortaça çydamly, birmeňzeş AnMan allelini göterýän) we Ilat 22660 (duýgur).
83A: 476 C. lupini (Kol-08 ştammy) bilen sanjymlara transkriptomiki jogaplar, GO: 0015979 “fotosintez” we beýleki baglanyşykly biologiki amallar (FIG. 5) termini bilen baglanyşykly genleriň utgaşdyrylan dymmagyny hem öz içine alýar.Bu GO: 0015979 DEG toplumynda, 83A: 476-da 6 at güýjünde ep-esli derejede repressiýa edilen 105 gen bar.Bu bölümde Mandelupda 48 HPI-de 37 gen we şol bir wagtyň özünde 22660 ilatyň arasynda 35 gen kadalaşdyryldy, şol sanda iki genotip üçin umumy 19 DEG.GO: 0015979 termini bilen baglanyşykly hiç bir DEG haýsydyr bir kombinasiýada ep-esli işjeňleşdirilmedi (setiriň wagty).
“GO: 0015979 Fotosintez” biologiki prosesi adalgasynyň esasy komponentlerini aňlatmagyň görnüşleri ýüze çykaryldy.Log2 şkalasy, sanjym edilen (Colletotrichum lupini, lupin meýdanlaryndan, Wizhenika, Polşa, 1999) we şol bir wagtyň özünde gözegçilik (ýasama) ösümlikleriň arasynda log2 bahalaryny (ep-esli üýtgemegi) aňladýar.Aşakdaky dar lýupin çyzyklary derňeldi: 83A: 476 (çydamly, birmeňzeş Lanr1 allelini göterýän), Boregine (çydamly, genetiki fon näbelli), Mandelup (ortaça çydamly, birmeňzeş AnMan allelini göterýän) we Ilat 22660 (duýgur).
Differensial aňlatma derňewiniň netijelerine esaslanyp we patogen kömeleklere garşy gorag çärelerine gatnaşan bu ýedi gen toplumy real wagt PCR (goşmaça tablisa S9) tarapyndan aňlatma profilini kesgitlemek üçin saýlandy.
TanjilG_10657 belok geni, gözegçilik (meňzeş) ösümlikler (S10, S11 goşmaça tablisalar) bilen deňeşdirilende ähli öwrenilen setirlerde we wagt nokatlarynda ep-esli derejede täsir edildi.Mundan başga-da, TanjilG_10657 aňlatma tertibi, ähli setirler üçin synagyň dowamynda barha artýan tendensiýany görkezdi.Ilat 22660, TanjilG_10657-iň 114 esse işjeňleşdirme bilen sanjymlara iň ýokary duýgurlygyny we 24 HPI-de iň ýokary degişlilikde aňlatma derejesini (4,4 ± 0.4) görkezdi (6a surat).PR10 LlR18A belok geni TanjilG_27015, maglumatlar nokatlarynyň köpüsinde statistik ähmiýete eýe bolan ähli setirlerde we wagt nokatlarynda işjeňleşmegi görkezdi (6b surat).TanjilG_10657 bilen deňeşdirilende, TanjilG_27015-iň iň ýokary aňlatma derejesi 24 HPI (19.5 ± 2.4) sanjym edilen 22660 ilat arasynda hasaba alyndy.Kislotaly endokitinaza geni TanjilG_04706, Boregine 6 at güýjünden başga ähli setirlerde we hemme wagt nokatlarynda ep-esli tertipleşdirildi (6-njy surat).Ilkinji gezek (6 HPI) 83A: 476 (10,5 esse) güýçli täsir edildi we beýleki setirlerde ortaça ýokarlandy (6,6-7,5 esse).Synag wagtynda TanjilG_04706-yň aňlatmasy 83A: 476 we Boregine meňzeş derejelerde galdy, Mandelup we Ilat 22660-da ep-esli ýokarlandy we degişlilikde ýokary bahalara ýetdi (degişlilikde 5,9 ± 1.5 we 6.2 ± 1.5).Endoglukan-1,3-β-glýukozidaza meňzeş gen TanjilG_23384, ilkinji iki wagt nokadynda (6 we 12 at güýji) 22660 ilatdan başga ähli setirlerde ýokary işjeňleşme görkezdi (6d surat).TanjilG_23384-iň iň ýokary derejeli aňlatma derejesi Mandelupda (2.7 ± 0.3) we 83A: 476 (1.5 ± 0.1) ikinji gezek (12 at güýji) syn edildi.24 HPI-de, TanjilG_23384 aňlatmasy ähli öwrenilen setirlerde birneme pesdi (0.04 ± 0,009-dan 0.44 ± 0.12).
Sanly PCR tarapyndan ýüze çykarylan saýlanan genleriň (ag) aňlatma profilleri.6, 12 we 24 sanlar sanjymdan birnäçe sagat soň görkezilýär.LanDExH7 we LanTUB6 genleri kadalaşdyrmak üçin, LanTUB6 bolsa seriýalar arasyndaky kalibrleme üçin ulanyldy.Roralňyşlyklar çyzgylary üç sany biologiki köpeltmä esaslanýan standart gyşarmany aňladýar, olaryň her biri ortaça üç sany tehniki göçürme. Sanjym edilen (Colletotrichum lupini, 1999-njy ýylda Polşanyň Wierzenika şäherindäki lupin meýdanyndan alnan Col-08 ştammy) we gözegçilik (masgaralanan) ösümlikleriň arasyndaky aňlatma derejelerindäki tapawutlaryň statistik ähmiýeti maglumat nokatlaryndan ýokarda bellendi (* P bahasy <0.05, ** P bahasy ≤ 0.01, *** P bahasy ≤ 0,001). Sanjym edilen (Colletotrichum lupini, 1999-njy ýylda Polşanyň Wierzenika şäherindäki lupin meýdanyndan alnan Col-08 ştammy) we gözegçilik (masgaralanan) ösümlikleriň arasyndaky aňlatma derejelerindäki tapawutlaryň statistik ähmiýeti maglumat nokatlaryndan ýokarda bellendi (* P bahasy <0.05, ** P bahasy ≤ 0.01, *** P bahasy ≤ 0,001). Статистическая значимость различий в оровнях кресрессии между интокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Кол-08, получен в 1999 г. с поля люпина в Верженице, Польша) чение P <0,05, ** значение P ≤ 0,01, *** значение P ≤ 0,001). Sanjylan (Colletotrichum lupini, 1999-njy ýylda Polşanyň Wierzhenice şäherindäki lupin meýdanyndan alnan Colletotrichum lupini, Col-08 ştammy) we gözegçilik (ýasama) ösümlikleriň arasyndaky aňlatma derejeleriniň statistik taýdan möhüm tapawutlary maglumat nokatlarynyň üstünde bellendi (* P bahasy <0.05, ** P-baha ≤ 0.01, *** P-baha ≤ 0,001).接种 （Colletotrichum lupini ， Col-08 株 ， 1999 年 ier ier Wierzenica 的 羽扇 豆 获得） 水平 P P P P P P 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05接种 （colletotrichum lupini ， color-08 株 ， 1999 年 ier wierzenica 的 羽扇 获得 p p p Статистически значимые различия в оровнях кресрессии между интокулированными (Colletotrichum lupini, штамм Кол-08, полученный с пойл люпина в Верженице, Польша, в 1999 г.) начение P <0,05, ** P-значение ≤ 0,01, *** P-значение ≤ 0,001). Sanjym edilen (Colletotrichum lupini, 1999-njy ýylda Polşanyň Werjenise şäherindäki lupin meýdanlaryndan alnan Colletotrichum lupini, Col-08 ştammy) we gözegçilik (ýasama) ösümlikleriň arasynda statistiki taýdan möhüm tapawutlar maglumat nokatlarynyň üstünde bellendi (* P bahasy <0.05, ** P-baha ≤ 0.01, *** P-baha ≤ 0,001).Derňelýän NLL setirleri: 83A: 476 (çydamly, birmeňzeş Lanr1 allelini göterýän), Mandelup (ortaça çydamly, birmeňzeş AnMan allelini göterýän), Boregine (çydamly, näbelli genetiki fon) we ilat 22660 (duýgur).
Dalaşgär geni TanjilG_05042, Lanr1 ýerleşýän ýerinde, RNA-seq gözleglerinden alnan profillerden düýpgöter tapawutly aňlatma görnüşini görkezdi (6e surat).Bu geniň ep-esli işjeňleşmegi Mandelupda we 22660 ilatda (degişlilikde 39,7 we 11,7 esse) ýüze çykdy, netijede aňlatma derejesi ýokary boldy (degişlilikde 1,4 ± 0.14 we 7.2 ± 1,3).83A: 476, şeýle hem, TanjilG_05042 geniniň (3,8 esse çenli) käbir düzgünleşdirilendigini ýüze çykardy, ýöne gazanylan degişlilikde aňlatma derejesi (0.044 ± 0,002) Mandelupda we 22660 ilatda 30 esse pesdi.qPCR tarapyndan seljerilen, sanjym edilen (gözegçilik) görnüşlerindäki genotipleriň arasynda aňlatma derejelerinde düýpli tapawutlar görkezilip, 22660 we 83A: 476 ilatyň arasynda, şeýle hem 22660 we 22660 ilat arasynda 58 esse tapawut bar. Boregine bilen Mandalup arasynda iki esse tapawut gazanyldy.
AnMan sebitindäki kandidat geni, TanjilG_12861, 83A: 476 sanjymyna jogap hökmünde işjeňleşdirildi we Mandelup, 22660 ilat arasynda bitarapdy we Boreginde kadalaşdyryldy (6f surat).TanjilG_12861 geniniň otnositel aňlatmasy sanjym edilen 83A: 476 (0,14 ± 0.01) iň ýokary boldy.17,4 kDa I synp ýylylyk şok belok geni TanjilG_05080 HSP17.4, öwrenilen ştamlaryň we wagt nokatlarynyň has pes degişlilik derejesini görkezdi (6g surat).Iň ýokary baha 22660 ilatyň 24 HPI-de (0,14 ± 0.02, sanjymlara jogap hökmünde sekiz esse ýokarlandy) hasaba alyndy.
Gen aňlatma profillerini deňeşdirmek (7-nji surat) TanjilG_10657 we beýleki dört geniň arasynda ýokary baglanyşygy ýüze çykardy: TanjilG_27015 (r = 0.89), TanjilG_05080 (r = 0.85), TanjilG_05042 (r = 0.80) we TanjilG_04706 (r = 0.79).Şeýle netijeler goranyş jogaplary wagtynda bu genleriň sazlaşygyny görkezip biler.TanjilG_12861 we TanjilG_23384 genleri, beýleki genler bilen deňeşdirilende Pearson korrelýasiýa koeffisiýentiniň pes bahalary (degişlilikde 0.08-den 0.43 we -0.19-dan 0.28-e çenli) dürli aňlatma profilini görkezdi.
Gen aňlatma profilleriniň arasyndaky baglanyşyk mukdar PCR ulanyp ýüze çykaryldy.Aşakdaky dar lýupin çyzyklary derňeldi: 83A: 476 (çydamly, birmeňzeş Lanr1 allelini göterýän), Mandelup (ortaça çydamly, birmeňzeş AnMan allelini göterýän), Boregine (çydamly, genetiki fon näbelli) we Ilat 22660 (duýgur).Üç wagt nokady hasaplandy (sanjymdan 6, 12 we 24 sagat soň), şol sanda sanjym edilen (Colletotrichum lupini, Col-08 ştammy, 1999-njy ýylda Polşanyň Wierzhenice şäherindäki lupin meýdanlaryndan alnan) we gözegçilik (ýasama) sanjymlar.Masştab Pearson korrelýasiýa koeffisiýentiniň bahasyny görkezýär.
Her dýuýmda 6 at güýji bilen alnan maglumatlara esaslanyp, irki gorag jogaplaryna ünsi jemlemek üçin sanjym we gözegçilik zawodlaryny deňeşdirmek arkaly kesgitlenen 9981 DEG-de WGCNA ýerine ýetirildi (Goşmaça tablisa S12).Genotipler bilen eksperimental wariantlaryň arasynda korrelirlenen (polo positiveitel ýa-da otrisatel) aňlatma profilleri bilen 22 gen moduly (toparlary) tapyldy. Ortaça, gen aňlatma derejesi 83A: 476> Mandelup> Boregine> Ilat 22660 tertipde peselýärdi (iki görnüşde-de bolsa, gözegçilik zawodlarynda bu tendensiýa has güýçlüdi). Ortaça, gen aňlatma derejesi 83A: 476> Mandelup> Boregine> Ilat 22660 tertipde peselýärdi (iki görnüşde-de bolsa, gözegçilik zawodlarynda bu tendensiýa has güýçlüdi). В среднем оровни консрессии занов снижались в порядке 83A: 476> Mandelup> Boregine> Ilaty 22660 Ortaça, gen aňlatmagyň derejesi 83A: 476> Mandelup> Boregine> Ilat 22660 tertipde peseldi (iki görnüşde-de bolsa, gözegçilik zawodlarynda bu tendensiýa has güýçlüdi).A 而言 ， A A A 83A: 476> Mandelup> Boregine> Ilaty 22660 的 顺序 下降 （然而 ， 变。。。。。。A 83a: 476> mandelup> boregine> ilat 22660 population 而 言 言 population 。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 В среднем оровни курсрессии башов снижались в ряду 83A: 476> Mandelup> Boregine> Ilaty 22660 Ortaça, 83A: 476> Mandelup> Boregine> Ilat 22660 seriýasynda gen aňlatmagyň derejesi peseldi (ýöne iki görnüşde-de gözegçilik zawodlarynda bu tendensiýa has güýçlüdi).Sanjym, esasanam 18, 19, 14, 6 we 1-nji modullarda (peselýän tertipde), negatiw düzgünleşdirme (mysal üçin 9 we 20-nji modullar) ýa-da bitarap täsirler (mysal üçin 11, 22, 8 we 13-nji modullar) gen aňlatmasynyň sazlanmagyna getirdi.GO termini baýlaşdyryş derňewi (Goşmaça tablisa S13) sanjym edilen modul (18) üçin iň ýokary işjeňleşdirme bilen, qPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 we TanjilG_27015), şeýle hem köp sanly inokulýasiýa modullary üçin "GO: 0006952 Gorag jogaplary" ýüze çykaryldy.18-nji modul konsentratory (8-nji surat) PR-10 meňzeş LlR18B belogyny kodlaýan TanjilG_26536 geni we 9-njy modul konsentratory fotosurat II PsbQ belogyny kodlaýan TanjilG_28955 geni hökmünde kesgitlenildi.Dalaşgär antraknoza garşylyk geni Lanr1, TanjilG_05042, 22-nji modulda (9-njy surat) tapyldy we “GO: 0044260 Öýjükli makromolekulýar metabolik prosesler” we “GO: 0006355 Transkripsiýa düzgünleşdirmesi, DNK şablony” TanjilG_01212 merkezini göterýär.gen ýylylyk stresiniň transkripsiýa faktoryny A-4a (HSFA4a) kodlaýar.
“GO: 0006952 Goranmak jogaplary” biologiki proses adalgalary bilen modullaryň gen bilelikde görkezilmeginiň agramly tor derňewi.QPCR (TanjilG_04706, TanjilG_23384, TanjilG_10657 we TanjilG_27015) tarapyndan seljerilen dört geni görkezmek üçin kazyýet işi ýönekeýleşdirildi.
“GO: 0006355: Transkripsiýa düzgünleşdirmesi, DNK şablony” we kandidatyň antraknoza garşylyk geni Lanr1 TanjilG_05042 bolan modulyň gen bilelikde aňladylyşynyň torlaýyn derňewi.Kazyýet işi, TanjilG_05042 genini we merkezi TanjilG_01212 genini izolirlemek üçin ýönekeýleşdirildi.
Awstraliýada ýygnanan antraknoza garşylyk barlagy irki goýberilen ekinleriň köpüsine duçar bolandygyny görkezdi;Kalya, Coromup we Mandelup ortaça çydamly, Wonga, Tanjil we 83A: 476 ýokary çydamly 26,27,31 hökmünde häsiýetlendirildi.birmeňzeş garşylyk allele eýe boldy, Lanr1 bellendi, Coromup we Mandelup başga bir allele eýe boldy, AnMan10, 26, 39 bellendi, Kalya başga bir allele geçdi., Lanr2.Germaniýada antraknoza garşylygy barlamak, LanrBo36 bellenen Lanr1-den başga kandidat allele bilen Bo7212 çydamly çyzygyň kesgitlenmegine sebäp boldy.
Biziň gözlegimiz, synag edilen germplazmada Lanr1 alleliniň gaty pes ýygylygyny (takmynan 6%) ýüze çykardy.Bu gözegçilik, Lanr1 alleliniň diňe iki Belarus setirinde bardygyny görkezýän Anseq3 we Anseq4 markerlerini ulanyp, Gündogar Europeanewropanyň germplazmasyny barlamagyň netijelerine laýyk gelýär.Bu, Lanr1 alleliniň marker kömegi bilen köpeltmek üçin esasy allelleriň biri bolan Awstraliýadan tapawutlylykda ýerli tohumçylyk programmalary tarapyndan entek giňden ulanylmaýandygyny görkezýär.Bu, Lanr1 allele-iň Europeanewropa meýdan şertlerinde Awstraliýanyň hasabaty bilen deňeşdirilende has pes garşylyk sebäpli bolup biler.Mundan başga-da, Awstraliýada ýokary ýagyşly ýerlerde antraknozyň gözlegleri, Lanr1 alleliniň töwellaçylygyndaky garşylyk täsirleriniň patogeniň ösmegini we çalt ösmegini goldaýan howa şertlerinde täsirli bolup bilmejekdigini görkezdi.Aslynda, häzirki gözlegde, Lanr1 allelini göterýän genotiplerde antraknozyň käbir alamatlary hem ýüze çykypdyr we C. lupininiň ösmegi üçin amatly şertlerde garşylygyň ýok bolup biljekdigini görkezýär.Mundan başga-da, Lanr1 ýerinden takmynan 1 sm uzaklykda ýerleşýän Anseq3 we Anseq4 markerleriniň bardygyny ýalňyş polo positiveitel düşündirmek mümkin, 28,30,43.
Biziň gözlegimiz, Lanr1 allelini göterýän 83A: 476, C. lupini sanjymyna ilkinji seljerilen wagt nokadynda (6 at güýji) uly göwrümli transkriptom programmirleme bilen jogap berendigini, AnMan allelini göterýän Mandelupda bolsa transkriptomiki jogaplaryň has soň görülendigini görkezdi.(24-den 48 at güýji).Goranyş jogaplaryndaky bu wagtlaýyn üýtgemeler, keseliň alamatlarynyň tapawudy bilen baglanyşykly bolup, garşylyga üstünlikli jogap bermek üçin irki patogen tanamagyň ähmiýetini görkezýär.Ösümlik dokumalaryna ýokaşmak üçin, garynja sporalary öýjügiň üstünde ösmek, öýjükleriň bölünmegi we appressoriumyň emele gelmegi ýaly birnäçe ösüş etabyndan geçmeli.Goşundy, öý eýesiniň ýüzüne birikýän we kabul ediji dokumalara aralaşmagyny ýeňilleşdirýän ýokanç gurluşdyr.Şeýlelik bilen, nohut ekstraktyndaky C. gloeosporioidleriň sporalary 75-90 minut inkubasiýa edilenden soň ýadronyň birinji bölünişigini, 90-120 minutdan soň mikrob turbasynyň emele gelmegini we 4 sagatdan 45 sagat soň basylmagyny görkezdi.Mango C. gloeosporioides, 3 sagat inkubasiýa edilenden soň 40% -den gowrak gögerijiligini we 4 sagatdan soň takmynan 20% emele gelişini görkezdi.C. gloeosporioidleriň wirus bilen baglanyşykly CAP20 geni, 4 sagat 46 minutdan soň ýokary derejeli konsentrasiýaly awokado üstündäki mumda 3,5 sagat inkubasiýa edilenden soň epifit emele getirýän konidiýada transkripsiýa işjeňligini görkezdi.Şonuň ýaly-da, C. trifolii-de melanin biosintez genleriniň işjeňligi 2 sagatlyk inkubasiýa wagtynda, 1 sagatdan soň bolsa appressorium emele geldi.Leafaprak dokumalarynyň üstünde geçirilen gözlegler, C. acutatum bilen sanjym edilen qulupnagyň ilkinji gezek 8 at güýji bilen basylýandygyny, C. kokkodlary bilen sanjylýan pomidorlaryň ilkinji gezek 4 at güýji 48,49-a ýetendigini görkezdi.esasan “Colletotrichum spp” -iň wagt masştabyna laýyk gelýär.ýokanç prosesi.83A: 476-a çalt gorag jogaplary bu setire ösümliklere garşylyk we effektli immunitet (ETI) genleriniň gatnaşmagyny teklip edýär, Mandelupyň gijikdirilen jogaplary bolsa mikro bilen baglanyşykly molekulýar nagyşly immunitet (MTI) gipotezasyny goldaýar 50. 83A: 476 we Mandelup-a irki jogaplar.Gijä goýlan jogapda ýokary ýa-da pes düzgünleşdirilen genleriň arasyndaky bölekleýin gapma-garşylyk bu düşünjäni hem goldaýar, sebäbi ETI köplenç tizlenýän we güýçlendirilen MTI jogaby hasaplanýar, infeksiýa bolan ýerde programmirlenen öýjükleriň ölmegine sebäp bolýar, anafilaktiki zarba 51,52.
Gen Ontologiýasy GO: 0006952 “Goranyş çäresi” adalgasy bilen baglanyşykly genleriň köpüsi, 22 sany belok (SAM22-e meňzeş) we ýedi esasy lateks belogyny (MLP) stres bilen baglanyşykly agyz beklemegiň 11 gomologydyr.31, 34, 43 we 423 meňzeş beloklar yzygiderliligiň meňzeşligini görkezdi.SAM22 meňzeş genler, antraknoza garşylyk derejesiniň ýokarlanandygyny görkezip, has uzak dowam eden möhüm işjeňleşmäni görkezdi (83A: 476 we Boregine).Şeýle-de bolsa, MLP meňzeş genler diňe kandidatyň garşylyk allelini göterýän setirlerde kadalaşdyryldy (83 at: 476 / Lanr1 6 at güýji we Mandelup / AnMan 24 at güýji).Identifiedhli kesgitlenen SAM22 meňzeş gomologlaryň takmynan 105 kb aralygyndaky gen toparyndan gelip çykýandygyny, MLP meňzeş genleriň geniň aýry sebitlerinden gelip çykýandygyny bellemelidiris.Şeýle SAM22 meňzeş genleriň utgaşdyrylan işjeňleşdirilmegi, NLL-iň Diaportetoksika sanjymyna garşylygy baradaky öňki gözlegimizde hem goranyş gorizontal böleklerine degişlidigini görkezýär.Bu netije, SAM22 meňzeş genleriň salisil turşusy, kömelek induktorlary ýa-da wodorod peroksid bilen şikeslenmegine ýa-da bejergisine oňyn jogap berendigi baradaky habarlar bilen hem goldanýar.
MLP meňzeş genler dürli abiotik we biotiki streslere, şol sanda köp ösümlik görnüşlerinde bakteriýa, wirus we patogen kömelek ýokançlyklaryna jogap berýändigi görkezildi55.Ösümlikler we patogenleriň arasyndaky käbir täsirlere jogap beriş ugurlary güýçli ýokarlanmakdan (ýagny, Verticillium dahliae bilen pagta siňdirilende) ep-esli peselmekden (ýagny, alma agajy Alternaria spp bilen ýokaşandan soň) 56,57 üýtgäpdir.Awokado goragynda F. niger infeksiýasyna we alma agajynyň ýokaşmagy wagtynda Botryosphaeria berengeriana f. MLP meňzeş 423 geniň ep-esli peselmegi hasaba alyndy.cn.pirikola we Alternaria alternata alma patotipleri58,59.Mundan başga-da, alma kalliniň MLP meňzeş 423 genini aşa aşa gysmagy garşylyk bilen baglanyşykly genleriň pes görkezijisine eýe bolup, kömelek ýokançlygyna has ýykgyn edýärdi59.Fusarium oxysporum f-den soň, MLP meňzeş 423 gen çydamly umumy noýba germplazmasynda hem basyldy.cn.Fasulye ýokançlygy 60.
RNA-seq gözlegimizde kesgitlenen PR-10 maşgalasynyň beýleki agzalary, düzgüne jogap hökmünde LlR18A we LlR18B genleri, şeýle hem DIR1 lipid geçiriji belok üçin tertipleşdirilen (1 gen) ýa-da kadalaşdyrylan (3 gen) gen..Mundan başga-da, WGCNA sanjymlara ýokary duýgur we birnäçe gorag jogap genini göterýän bu modulda merkez hökmünde LlR18B genini görkezýär.LLRR18A we LLR18B miller sary lupendiýada D.BOTAC-den soň, NLS-den başlap, NLSSSPIC-de nlSsp10-de çaltlyk bilen baglanyşykly "Lindi" ulag belligine "Ulgam" -niň gazanylan garşylyklaryň (SAR) sebäpli zerur bolan ypopir ulag belligine "-diýdi.Gorag reaksiýalarynyň ösmegi bilen, DIR1 belogy ýokanç organlardan SAR-a itergi bermek üçin floemanyň üsti bilen ýokaşýar.Gyzykly tarapy, TanjilG_02313 DIR1 geni ilkinji gezek 84A: 476 we Ilat 22660 setirlerinde ep-esli derejede täsir edildi, ýöne antraknoza garşylyk diňe 84A: 476 setirde üstünlikli ösdi.Bu, NLL-de DIR1 geniniň käbir işlemeýänligini görkezip biler, sebäbi galan üç gomolog sanjymlara diňe 83 at: 476 setirde 6 at güýji bilen jogap beripdir we bu jogap aşaklygyna gönükdirilipdir.
Biziň gözlegimizde “GO: 0055114 Redoks prosesi” diýilýän biologiki prosese gabat gelýän iň köp ýaýran komponentler sitokrom P450 belogy, peroksidaza, linoleý kislotasy 9S- / 13S-lipoksigenaza we 1-aminosiklopropan-1-karboksil kislotasy oksidaza boldy.Mundan başga-da, WGCNA HSFA4a gomologyny Lanr1 garşylyk gen kandidaty TanjilG_05042 ýaly modullary göterýän merkez hökmünde kesgitleýär.HSFA4a ösümliklerde ýadro transkripsiýasynyň redoks garaşly düzgünleşdirilmeginiň bir bölegidir.
Sitokrom P450 beloklary, ksenobiotikleriň alyş-çalşygyny, şeýle hem gormonlary, ýag kislotalaryny, sterollary, öýjük diwar böleklerini, biopolimerleri we gorag birleşmeleriniň biosintezini öz içine alýan NADPH we / ýa-da O2 bagly gidroksilasiýa reaksiýalaryny katalizleýän oksidor geçiriji maddalardyr. üýtgedilen gomologlar (37) we belli bir genleriň arasyndaky jogap görnüşleriniň tapawudy, ýokarky wersiýany görkezýär..Şeýle uly belokly maşgalada NLL genleriniň goýulýan biologiki funksiýasyny düşündirmek üçin diňe RNA-seq maglumatlary ulanmak gaty spekulýatiw bolardy.Şeýle-de bolsa, käbir sitokrom P450 genleriniň patogen kömeleklere ýa-da bakteriýalara garşylygy ýokarlandyrmagy, şol sanda allergiki täsirlere goşant goşmak bilen baglanyşyklydygyny bellemelidiris 69,70,71.
III synp peroksidazlar ösümlikleriň ösmegi we ösmegi, şeýle hem duzlulyk, guraklyk, ýokary ýagtylyk intensiwligi we patogen hüjümi ýaly daşky gurşaw streslerine jogap hökmünde köp metabolik proseslere gatnaşýan köpugurly ösümlik fermentleridir.Peroksidazlar birnäçe ösümlik görnüşleriniň Antrasis bilen özara täsirine gatnaşýar, şol sanda Stylosanthes humilis we C. gloeosporioides, Lens culinaris we C. truncatum, Phaseolus vulgaris we C. lindemuthianum, Cucumis sativus we C. lagenarium73,74,75,76.Kömelek ösümlik dokumalaryna girmezden ozal gaty çalt, käte hatda 4 HPI-de bolýar.Peroksidaza geni D. toksika NLL sanjymyna-da jogap berdi.Oksidleýji partlamany kadalaşdyrmak ýa-da oksidleýji stresleri ýok etmek üçin adaty wezipelerinden başga-da, peroksidazlar belli birleşmeleriň lignifikasiýasy, subunit ýa-da biri-biri bilen baglanyşygy wagtynda öýjük diwaryny berkitmek esasynda fiziki päsgelçilikleri döredip, patogeniň ösmegine päsgel berip biler.Bu funksiýany silikoda TanjilG_03329 gen kodlamak bilen baglanyşdyryp bolar, 6 HPI-de 83A: 476 çydamly çyzykda gözlegimizde ep-esli tertipleşdirilen, lignin emele getirýän anion peroksidaza kodlanýar, ýöne beýleki ştamlarda we wagt nokatlarynda däl.
Linoleý kislotasynyň 9S- / 13S-lipoksigenaza lipid biosinteziniň oksidleýji ýolundaky ilkinji ädimdir.Bu ýoluň önümleri ösümlik goragynda, kalloza we pektin ýataklarynyň emele gelmegi arkaly öýjük diwaryny berkitmek we reaktiw kislorod görnüşlerini öndürmek arkaly oksidleýji stresiň sazlanmagy ýaly birnäçe wezipä eýedir79,80,81,82,83.Häzirki gözlegde, linoleý kislotasynyň 9S- / 13S-lipoksigenazyň aňlatmasy ähli ştamlarda üýtgedildi, ýöne ähtimal 22660 ilat arasynda dürli wagt nokatlarynda kadalaşma agdyklyk edýärdi, çydamly Lanr1 we AnMan allelini göterýän ştamlarda, bu genotipleriň arasynda oksilipin gatlagynyň diwersifikasiýa edilmegini nygtaýar.
1-aminosiklopropan-1-karboksilat oksidaza (ACO) gomolog lýupin bilen sanjym edilende ep-esli tertipleşdirildi (9 gen) ýa-da düzgünleşdirilmedik (2 gen).Iki kadadan çykma bilen, bu jogaplaryň hemmesi 6 at güýjünde boldy.83A: 476-da.ACO beloklary bilen araçylyk edilýän ferment reaksiýasy, etilen önümçiliginiň tizligini çäklendiriji ädimdir we şonuň üçin ýokary derejede kadalaşdyrylýar84.Etilen ösümlikleriň gormony bolup, ösümlikleriň ösüşini kadalaşdyrmakda we abiotik we biotiki stres şertlerine jogap bermekde dürli rol oýnaýar.ACO transkripsiýasynyň induksiýasy we etilen signalizasiýa ýolunyň işjeňleşdirilmegi, reaktiw kislorod görnüşleriniň we fitoaleksinleriň önümçiligini kadalaşdyrmak arkaly tüwiniň gemibiotrofiki kömelek oryzae oryza garşy garşylygyny ýokarlandyrmaga gatnaşýar.Bu işde habar berlen 83A: 476 setirde ACO gomologlarynyň ep-esli tertipleşdirilmeginiň fonunda M. oryzae bilen C. lupini88,89 arasynda tapylan gaty meňzeş ýaprak ýokanç prosesi, molekulýar ýollarda signal berýän merkezi ädim NLL antraknoz Etilenine garşylyk görkezmek mümkinçiligini üýtgedýär.
Häzirki gözlegde, fotosintez bilen baglanyşykly köp geniň uly göwrümli basyşy 83A: 476-da 6 at güýji, Mandelopda 48 at güýji we 22660 ilat bilen syn edildi.Bu üýtgeşmeleriň derejesi we ösüşi derejä proporsionaldyr.Bu synagda antraknoza garşylyk görkezildi.Recentlyakynda ösümlik-patogen täsirleriniň birnäçe modelinde, şol sanda patogen bakteriýalar we kömelekler bilen fotosintez bilen baglanyşykly ýazgylaryň güýçli we irki repressiýalary habar berildi.Gyssagly (käbir täsirlerde 2 HPI-den) we infeksiýa garşy fotosintez bilen baglanyşykly genleriň global basyşy, reaktiw kislorod görnüşleriniň ýerleşdirilmegine we allergiki täsirleri ara alyp maslahatlaşmak üçin salisil turşusy ýoly bilen täsirine esaslanyp ösümlik immunitetini döredip biler.
Sözümiň ahyrynda, iň çydamly nesil (83A: 476) üçin teklip edilýän goranyş mehanizmleri R geniniň (ähtimal TIR-NBS-LRR TanjilG_05042) patogen tanamagyny we allergiki täsir bilen baglanyşykly salisil turşusyny we etilen duýduryşyny öz içine alýar, soň bolsa uzak aralyga SAR döredilýär.hereket DIR-1 belogy bilen goldanýar.C. lupini ýokaşmagy üçin biotrofiki döwrüň gaty gysga (takmynan 2 gün), soň bolsa nekrotik ösüş 95 bolandygyny bellemelidiris.Bu etaplaryň arasyndaky geçiş, nekroz we kabul ediji ösümliklerde aşa duýgurlyk reaksiýalaryny herekete getirýän etilen-ýokaşýan beloklaryň aňlatmagy bilen baglanyşykly bolup biler.Şonuň üçin C. lupini biotrofiki tapgyrda üstünlikli ele almak üçin wagt penjiresi gaty dar.83 at: 476-da 6 at güýjünde görlen redoks we fotosintez bilen baglanyşykly genleriň gaýtadan programmirlemegi, kömelek gipafynyň ösüşine laýyk gelýär we biotrofiki tapgyrda üstünlikli gorag jogabynyň ösmegini habar berýär.Mandelupyň we 22660 ilatyň transkriptomiki jogaplary, nekrotik ösüşe geçmezden ozal kömelegi almak üçin gijikdirilip bilner, ýöne Mandelup 22660 ilatdan has täsirli bolup biler, sebäbi PR-10 belogynyň has çalt düzgünleşdirilmegi keseligine garşylygy ýokarlandyrýar.
Kanoniki R geni bilen dolandyrylýan ETI, antraknoza garşy noýba garşylygy üçin umumy mehanizm ýaly bolup görünýär.Şeýlelik bilen, “Medicago truncatula” gök önüminde, TIR-NBS-LRR97 ösümlik R gen synpynyň agzasy RCT1 geni bilen antraknoza garşylyk berilýär.Bu gen, duýgur ösümliklere geçirilende ýorunja giň spektrli antraknoza garşylygy hem berýär.Adaty noýbada (P. vulgaris) şu güne çenli 20-den gowrak antraknoza garşylyk geni kesgitlenildi.Bu genleriň käbiri kanoniki R genleri bolmadyk sebitlerde duş gelýär, ýöne beýlekileriň köpüsi TIR-NBS-LRRs99 ýaly NBS-LRR gen toparyny göterýän hromosomlaryň gyralarynda ýerleşýär.Genom boýunça SSR barlagy, NBS-LRR geniniň umumy noýbada antraknoza garşylygy bilen birleşendigini tassyklady.Kanoniki R geni, ak lýupin 101-de esasy antraknoza garşylyk ýerini göterýän genom sebitinde hem tapyldy.
Biziň işimiz, ösümlik ýokançlygynyň irki döwründe işjeňleşdirilen (has gowusy 12 at güýjünden gijä galman) işjeň garşylykly reaksiýanyň, ýaprakly lýupini patogen kömelek Collelotrichum lupini sebäpli ýüze çykýan antraknozdan netijeli goraýandygyny görkezýär.Throughokary geçiş yzygiderliligini ulanyp, Lanr1 we AnMan garşylyk genleri bilen araçylyk edilen NLL ösümliklerinde antraknoza garşylyk genleriniň diferensial aňlatma profilini görkezdik.Üstünlikli gorag, ösümligiň bir patogen bilen ilkinji gatnaşygyndan birnäçe sagadyň dowamynda redoks, fotosintez we patogenez bilen baglanyşykly beloklar üçin genleri seresaplylyk bilen düzmegi öz içine alýar.Şuňa meňzeş gorag reaksiýalary, ýöne wagtyň geçmegi bilen ösümlikleri kesellerden goramakda has az täsir edýär.Lanr1 geni bilen araçylyk edilen garynja garşylygy, R geniniň adaty çalt reaksiýasyna meňzeýär (effektli hereketlendiriji immunitet), AnMan geni bolsa gorizontal jogap berýär (mikrob bilen baglanyşykly molekulýar nagyş bilen döredilen immunitet), ortaça durnuklylygy üpjün edýär.
Antraknoz markerlerini barlamak üçin ulanylýan 215 NLL çyzgy 74 görnüşden, kesişmek ýa-da köpeltmek arkaly alnan 60 setir, 5 mutant we 76 ýabany ýa-da özboluşly germplazmadan ybarat.Bu setirler esasan Polşadan (58), Ispaniýadan (47), Germaniýadan (27), Awstraliýadan (26), Russiýadan (19), Belarusdan (7), Italiýadan (5) we beýleki ýurtlardan geldi.10 ýurtdan.Toplumda salgylanma çydamly çyzyklar hem bar: 83A: 476, Tanjil, Lanr1 allelini göterýän Wonga we AnMan allelini göterýän Mandelup.Bu setirler, Poznań ösümlik tohumçylyk kärhanasy, Wiatrowo, Polşa (S1 goşmaça tablisa) tarapyndan saklanýan Europeanewropanyň Lupin genetiki çeşmeler bazasyndan alyndy.
Ösümlikler gözegçilik astynda ösdürilip ýetişdirildi (fotoperiod 16 sagat, gündizine 25 ° C we gije 18 ° C).Iki sany biologiki köpeltme seljerildi.Protokola laýyklykda DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germaniýa) ulanyp, DNK üç hepdelik ýapraklardan izolirlendi.Izolirlenen DNK-nyň hili we konsentrasiýasy spektrofotometrik usullar bilen bahalandyryldy (NanoDrop 2000; Termo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABŞ).Antraknoza garşylyk genini bellän AnManM1 markeri (Mandelup ç.Çydamly allel üçin gomozigotlar “1 ″, duýgur -“ 0 ″ ”, heterozigotlar bolsa 0,5 hökmünde bal aldy.
AnManM1, AnSeq3 we AnSeq4 markerleri barlamagyň netijelerine we soňky synag synaglary üçin tohumlaryň barlygyna esaslanyp, antraknoza garşylyk fenotipi üçin 50 NLL setir saýlandy.Derňew, gündizine 22 ° C, gijesi 19 ° C bolan 14 sagatlyk fotoperiod bilen kompýuter tarapyndan dolandyrylýan teplisada iki gezek geçirildi.Tohum paltosynyň gaty bolmagy sebäpli tohumyň guramagynyň öňüni almak we birmeňzeş gögermegini üpjün etmek üçin ekişden ozal tohumlar çyzylýar (düwünçejigiň garşy tarapyndaky tohum palto bilen ýiti pyçak bilen kesilýär).Ösümlikler steril toprakly küýzelerde (11 × 11 × 21 sm) ösdürilip ýetişdirildi (TS-1 REC 085 Orta Basic, Klasmann-Deilmann Polska, Warşawa, Polşa).Sanjym 1999-njy ýylda Uly Polşanyň Werjenitsa (52 ° 27 ′ 42 ″ N 17 ° 04 ′ 05 ″ E) ekin meýdanynda ösdürilip ýetişdirilen dar ýaprakly lýupin ösümlikleriniň baldaklaryndan ösdürilip ýetişdirilen Colletotrichum lupini Col-08 ştammy bilen geçirildi.Sebit alyň.Izolýasiýa, sporulýasiýa sebäp bolmak üçin 21 günüň dowamynda gara ýagtylygyň aşagynda 20 ° C derejesinde ösdürilip ýetişdirildi.Ekişden dört hepde soň, ösümlikler 4-6 ýaprak basgançagyna ýetensoň, sanjym her ml üçin 0,5 x 106 conidia konsentrasiýasynda conidia asma bilen sepmek arkaly amala aşyryldy.Sanjymdan soň ösümlikler takmynan 98% çyglylykda we 25 ° C temperaturada 24 sagat garaňkylykda saklandy, konidiýanyň gögermegini we ýokaşma prosesini ýeňilleşdirdi.Soňra ösümlikler 22 sagatlyk gije / 19 ° C gijede we 70% çyglylykda 14 sagatlyk fotoperiodda ösdürilip ýetişdirildi.Keseliň görkezijisi sanjymdan 22 gün soň edildi we baldaklarda we ýapraklarda nekrotik lezýonlaryň barlygyna ýa-da ýoklugyna baglylykda 0 (immun) -dan 9 (gaty duýgur) aralygynda üýtgeýärdi.Mundan başga-da, gol salandan soň ösümlikleriň agramy ölçeldi.Marker genotipleri bilen kesel fenotipleriniň arasyndaky baglanyşyk iki yzygiderli korrelýasiýa hökmünde hasaplandy (antraknoza garşylyk fenotipini seljermek üçin setirler toplumynda heterozigoz markerleriň ýoklugy).