Kasalukuyang hindi pinagana ang Javascript sa iyong browser. Hindi gagana ang ilang feature ng website na ito kapag hindi pinagana ang javascript.
Magrehistro gamit ang iyong mga partikular na detalye at partikular na gamot ng interes at tutugmain namin ang impormasyong ibibigay mo sa mga artikulo sa aming malawak na database at agad kaming mag-email sa iyo ng isang PDF na kopya.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 ng Manzella1 Livia, Catego ng Medisina, at Cat2 Livia ania, 95123, Italy;2 Center for Experimental Oncology and Hematology, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Italy;3 Medical Oncology, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italy;4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italy;5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italy;6 Department of Biomedical and Biotechnology Sciences, Unibersidad ng Catania, Medical Genetics, Catania, Italy, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italy Mga Komunikasyon: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected];[email protected] Layunin: Ang mga mutasyon ng germline sa BRCA1 at BRCA2 at naitatag na breast cancer (BC), ovary (OC) at iba pang nauugnay sa panghabambuhay na panganib ng cancer. Ang pagsubok para sa BRCA gene ay susi sa pagtatasa ng indibidwal na panganib, gayundin para sa paghahanap ng mga paraan ng pag-iwas sa malusog na mga carrier at pag-aayos ng mga paggamot sa mga pasyente ng cancer. Ang prevalence ng BRCA1 at BRCA2 ay nag-iiba-iba ng mga variant ng data sa iba't ibang rehiyon ng BRCA at malawak na umiiral ang mga pathogen ng BRCA1 at BRCA2 at malawak na pagkakaiba-iba ng mga pathogen ng BRCA1 at BRCA2 a. lian na mga pamilya, kulang ang mga pag-aaral na partikular na nagta-target sa mga populasyon sa silangang Sicily. Ang layunin ng aming pag-aaral ay imbestigahan ang insidente at distribusyon ng BRCA pathogenic germline alterations sa isang pangkat ng mga pasyente ng BC mula sa silangang Sicily at upang masuri ang kanilang kaugnayan sa mga partikular na katangian ng BC gamit ang susunod na henerasyong pagkakasunud-sunod. Ang pagkakaroon ng mga pagbabago na may kaugnayan sa index ng mga pasyente ng BRCA at ULTS3% na may index ng tumor. ic variant, 17 (49%) sa BRCA1 at 18 (51%) sa BRCA2. Ang mga pagbabago sa BRCA1 ay laganap sa triple-negative na mga pasyente ng BC, samantalang ang BRCA2 mutations ay mas karaniwan sa luminal na mga pasyente ng BC. Kung ikukumpara sa mga hindi carrier, ang mga subject na may BRCA1 variant ay may makabuluhang mas mataas na grade na BRCA1 at proliferative na index ng mga pasyente sa paghahanap ng BRCA at proliferative na index ng mutasyon ng mga pasyenteng BRCA. cily at kumpirmahin ang papel ng pagsusuri ng NGS sa pagtukoy ng mga pasyenteng may namamana na BC. Sa pangkalahatan, ang mga datos na ito ay pare-pareho sa mga naunang ebidensya na sumusuporta sa BRCA screening para sa wastong pag-iwas at paggamot ng cancer sa mga mutation carrier.
Ang kanser sa suso (BC) ay ang pinakakaraniwang malignancy sa buong mundo at ang pinakanakamamatay na kanser sa mga kababaihan.1 Ang mga biological na tampok na tumutukoy sa prognosis ng BC at klinikal na pag-uugali ay malawakang pinag-aralan at bahagyang napaliwanagan sa paglipas ng panahon. Sa katunayan, ilang mga surrogate marker ang kasalukuyang ginagamit upang pag-uri-uriin ang BC sa iba't ibang mga molekular na subtype. Ang mga ito ay estrogen (ER) at/o progesterone na receptor ng (PglR) ng tao, at/o progesterone amplifier ng progesterone. ration index Ki-67 at tumor grade (G).2 Tinukoy ng kumbinasyon ng mga variable na ito ang mga sumusunod na kategorya ng BC: 1) Ang mga luminal na tumor, na nagpapakita ng ER at/o PgR expression, ay umabot sa 75% ng mga BC. Ang mga tumor na ito ay hinati pa sa Luminal A, kapag ang Ki-67 ay mas mababa sa 20% at ang HER2 na presensya ay nasa itaas ng equalification ng Ki-60, at ang HER602 B ay nasa itaas ng Ki-67, at ang Luminal na HER2 ay nasa itaas. anuman ang index ng paglaganap;2) HER2+ tumor na ER at PgR negatibo ngunit nagpapakita ng HER2 amplification. Ang pangkat na ito ay bumubuo ng 10% ng lahat ng mga tumor sa suso;3) Ang triple-negative na breast cancer (TNBC), na hindi nagpapakita ng ER at PgR expression at HER2 amplification, ay bumubuo ng humigit-kumulang 15% ng mga kanser sa suso.2-4
Sa mga subtype na ito ng BC, ang grade ng tumor at proliferation index ay kumakatawan sa mga cross-sectional biomarker na direkta at independiyenteng nauugnay sa pagiging agresibo at pagbabala ng tumor.5,6
Bilang karagdagan sa mga nabanggit na biological features, ang papel ng minanang genetic alterations na humahantong sa pag-unlad ng BC ay naging lalong mahalaga sa nakalipas na ilang taon.7 Humigit-kumulang 1 sa 10 na bukol sa suso ang minana dahil sa mga pagbabago sa germline sa mga partikular na gene.8 Dalawang malalaking epidemiological na pag-aaral na kinasasangkutan ng higit sa 180,000 kababaihan, BRCA2 genes kamakailan, BRCA2 gene, BRCA2 na gene, kamakailan-lamang ay natukoy ang isang pangkat ng, e, e, BRCA ATM Ang LB2, RAD51C, at RAD51D) na pangunahing responsable para sa namamana na BC. Kabilang sa mga gene na ito, ang BRCA1 at BRCA2 (mula rito ay tinutukoy bilang BRCA1/2) ay nagpakita ng pinakamatibay na ugnayan sa pag-unlad ng mga tumor sa suso.9-12 Sa katunayan, ang germline BRCA1/2 mutations ay makabuluhang pinatataas ang panghabambuhay na panganib ng BC, pati na rin ang iba pang panganib ng BC, pati na rin ang iba pang mga malignant na kanser, pati na rin ang iba pang mga kanser sa prostate. Mula sa edad na 13 hanggang 80 taon, ang pinagsama-samang insidente ng BC ay 72% sa mga babaeng may BRCA1 pathogenic variant (PV) at 69% sa mga babaeng may BRCA2 PV.14
Kapansin-pansin, ang isang kamakailang publikasyon ay nagmumungkahi na ang panganib ng BC ay nakasalalay sa uri ng PV. Sa katunayan, kumpara sa mga variant ng pathogenic truncating, ang maliwanag na mga variant ng missense, lalo na sa gene ng BRCA1, ay nauugnay sa isang pinababang panganib ng BC, lalo na sa mga matatandang babae.15
Ang pagkakaroon ng BRCA1 o BRCA2 PV ay nauugnay sa iba't ibang biological at clinicopathological features.16,17 BRCA1-associated BCs ay may posibilidad na maging clinically aggressive, poorly differentiated, at mataas na proliferative. Ang mga tumor na ito ay kadalasang triple negative at may maagang edad ng onset. Tumor na nangyayari sa mga pasyenteng BRCA2-nag-iiba-iba at hindi tipikal na may pagbabago sa buhay. Ang mga tumor ay mas karaniwan sa lumen B at kadalasang nangyayari sa mga matatanda.16-18 Kapansin-pansin, ang mga mutasyon sa BRCA1 at BRCA2 ay nagpapataas ng sensitivity sa mga partikular na paggamot, kabilang ang mga platinum salt at mga naka-target na gamot tulad ng poly(ADP-ribose) polymerase inhibitors (PARPi).19,20
Sa nakalipas na ilang taon, ang pagpapatupad ng next-generation sequencing (NGS) sa klinikal na kasanayan ay nagbigay-daan sa dumaraming bilang ng mga pasyente ng BC na sumailalim sa molecular testing para sa cancer susceptibility syndromes, kabilang ang BRCA1/2.21 Kasabay nito, ang mga kahulugang batay sa tumpak na pamantayan tungkol sa family history , demograpiko, at clinicopathological na katangian upang mas makilala ang mga indibidwal na karapat-dapat para sa BRCA1/2 na pagsubok sa BRCA1/2 na ito, BRCA2, BR33 na pagsubok. sa mga partikular na populasyon, na nagpapakita ng mga pagkakaiba sa mga heyograpikong rehiyon.24–27 Bagama't may mga ulat sa BC cohort sa kanlurang Sicily, mas kaunting data ang makukuha sa BRCA1/2 screening sa silangang populasyon ng Sicily.28,29
Inilalarawan namin dito ang mga resulta ng screening ng germline BRCA1/2 sa mga pasyente ng BC mula sa silangang Sicily, na higit pang nakakaugnay sa pagkakaroon ng BRCA1 o BRCA2 mutations na may pangunahing mga tampok na clinicopathological ng mga tumor na ito.
Isang retrospective na pag-aaral ang isinagawa sa "Center for Experimental Oncology and Hematology" sa Policlinico Hospital.Rodolico – San Marco sa Catania.Mula Enero 2017 hanggang Marso 2021, may kabuuang 455 na pasyente na may suso at ovarian, melanoma, pancreatic o prostate cancer ay isinagawa para sa aming BRCAsink na diagnostic na laboratoryo na ito ay na-refer sa aming pag-aaral na ayon sa BRCA/sinki2 na diagnostic na laboratoryo para sa He molecular na pag-aaral ng Decla. , at lahat ng kalahok ay nagbigay ng nakasulat na pahintulot na may kaalaman bago ang pagsusuri sa molekular.
Ang mga histological at biological na katangian (ER, PgR, HER2 status, Ki-67, at grade) ng BC ay nasuri sa core biopsy o surgical sample, na isinasaalang-alang lamang ang mga agresibong bahagi ng tumor. ≥20%), luminal B-HER2+ (ER at/o PgR+, HER2+), HER2+ (ER at PgR-, HER2+) o triple negatibo (ER at PgR-, HER2-).
Bago tasahin ang status ng mutation ng BRCA1 at BRCA2, isang multidisciplinary team kabilang ang isang oncologist, isang geneticist, at isang psychologist ay nagsagawa ng isang tumor genetics consultation para sa bawat pasyente upang matukoy ang pagkakaroon ng BRCA1 at/o BRCA1.o mga indibidwal na may mataas na panganib ng PV sa BRCA2 gene. Ang pagpili ng pasyente ay isinagawa ayon sa mga alituntunin ng Italian Society of Medical Oncology (AIOM) at mga lokal na rekomendasyong Sicilian.30,31 Kabilang sa mga pamantayang ito ang: (i) family history ng mga kilalang pathogenic variant sa susceptibility genes (hal, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) mga lalaking may BC;(iii) ang mga may BC at OC;(iv) mga babaeng may BC <36 taon, TNBC <60 taon, o bilateral BC <50 taon;(v) personal na medikal na kasaysayan ng BC <50 taon at hindi bababa sa isang first-degree na kamag-anak: (a) BC < 50 taon;(b) non-mucinous at non-borderline OC ng anumang edad;(c) bilateral BC;(d) lalaki BC;(e) pancreatic cancer;(f) kanser sa prostate;(vi) dalawa o higit pang Personal na kasaysayan ng BC > 50 taon at family history ng BC, OC, o pancreatic cancer para sa mga kamag-anak na first-degree na kamag-anak sa isa't isa (kabilang ang mga kamag-anak kung saan siya ay first-degree na kamag-anak);(vii) Personal na kasaysayan ng OC at hindi bababa sa isang first-degree na kamag-anak: (a) BC <50 taon;(b) NOC;(c) bilateral BC;(d) lalaki BC;(vii) babaeng may mataas na antas ng serous OC.
Ang isang 20 mL peripheral blood sample ay nakuha mula sa bawat pasyente at nakolekta sa EDTA tubes (BD Biosciences). Ang genomic DNA ay nahiwalay sa 0.7 mL na buong sample ng dugo gamit ang QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italy) ayon sa mga tagubilin ng manufacturer at dumaan sa isang Qubitor® 3.0 Fish Performer, USA. quantification.Ang target na pagpapayaman at paghahanda sa library ay ginagawa ng Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, na handang i-load sa Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit para sa automated na paghahanda ng library ayon sa mga tagubilin ng manufacturer. Ang kit ay binubuo ng dalawang multiplex PCR primer pool na magagamit para pag-aralan ang lahat ng BRCA1 (NM_00730000.3) at BRCA1 (NM_00730000.3) gene. , 15 µL ng bawat diluted sample DNA (10 ng) ay idinagdag sa barcoded plates para sa paghahanda ng library at lahat ng reagents at consumables ay na-load sa Ion Chef™ instrument. Ang awtomatikong paghahanda ng library at barcoded sample library pooling ay isinagawa sa instrumento ng Ion Chef™. Ang bilang ng mga inihandang aklatan ay sinuri ng isang 0 Qubitor®, USA ayon sa . mga tagubilin ng tagagawa. Sa wakas, pinagsama-sama ang mga aklatan sa mga equimolar ratio sa mga sample tube ng library ng Ion Chef™ (mga barcoded tubes) at ni-load sa instrumento ng Ion Chef™. Ginawa ang sequencing gamit ang isang Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) na instrumento (Thermo Fisher Scientific) gamit ang isang Ion 510 na pagsusuri ng Fisher Scientific (Thermo Fisher Scientific) gamit ang isang Ion 510 Scientific Suite. Seq srl) at Ion Reporter Software.
Sinundan ng lahat ng variant nomenclature ang kasalukuyang mga alituntunin ng Human Genome Variation Consortium, available online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Ang klinikal na kahalagahan ng mga variant ng BRCA1/2 ay tinukoy gamit ang pag-uuri ng International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles) at ARCA na pagkonsulta sa iba't ibang mga ARGMA, https://org. HANGE , ClinVar, IARC_LOVD, at UMD. Kasama sa klasipikasyon ang limang magkakaibang kategorya ng peligro: benign (kategorya I), malamang na benign (kategorya II), variant ng hindi tiyak na kahalagahan (VUS, kategorya III), malamang na pathogenic (kategorya IV), at pathogenic (kategorya V). Sinuri din ng VarSome ang isang istruktura at pag-andar ng protina na may 3 pag-andar0, sa isang protina na may epekto sa database3 na may mga mutation.
Upang magtalaga ng potensyal na klinikal na kahalagahan sa bawat VUS, ang mga sumusunod na computational protein prediction algorithm ay ginamit: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (//provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) at Align-cvgvgd.//h/vgvgd.//h/vgvgd Ang mga ariant na inuri bilang klase 1 at 2 ay itinuturing na ligaw na uri.
Kinumpirma ng Sanger sequencing ang pagkakaroon ng bawat pathogenic na variant. Sa madaling sabi, ang isang pares ng mga tukoy na primer ay idinisenyo para sa bawat nakitang variant sa pamamagitan ng paggamit ng BRCA1 at BRCA2 gene reference sequence (NG_005905.2, NM_007294.3 at NG_012772.3, NM_000059.3 na sinundan ng PCrefore, ayon sa pagkakasunod-sunod).
Ang mga pasyenteng nag-negatibo sa BRCA1/2 gene ay sinuri ng multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) ayon sa mga tagubilin ng manufacturer para masuri ang pagkakaroon ng malalaking genomic rearrangements (LGR). Ang mga produkto, na binubuo ng isang natatanging hanay ng mga PCR amplicon, ay sinuri ng capillary electrophoresis at ng Cofalyser.Net software kasabay ng naaangkop na batch-specific na mga Cofalyser table (www.mrcholland.com).
Ang mga napiling clinicopathological variable (histological grade at Ki-67% proliferation index) ay nauugnay sa pagkakaroon ng BRCA1/2 PV, na kinakalkula gamit ang Prism software v. 8.4 gamit ang eksaktong pagsubok ni Fisher na ipinapalagay na ang p-value <0.05 ay makabuluhan.
Sa pagitan ng Enero 2017 at Marso 2021, 455 mga pasyente ang na-screen para sa germline BRCA1/2 mutations. Ang pagsusuri sa mutation ay isinagawa sa Policlinico Hospital's Center for Experimental Oncology and Hematology. ), ang Rodolico ng Catania – San Marco” sa kabuuan, 389 na pasyente Nagkaroon ng breast cancer, 37 ovarian cancer, 16 pancreatic cancer, 8 prostate cancer at 5 melanoma.Ang pamamahagi ng mga pasyente ayon sa uri ng kanser at mga resulta ng pagsusuri ay ipinapakita sa Figure 1.
Ang Figure 1 ay nagpapakita ng flow chart na nagpapakita ng pangkalahatang-ideya ng pag-aaral. Ang mga pasyenteng may mga tumor sa suso, melanoma, pancreatic, prostate, o ovarian ay sinubukan para sa mga mutasyon sa BRCA1 at BRCA2 genes.
Mga pagdadaglat: PV, pathogenic na variant;VUS, variant ng hindi tiyak na kahalagahan;WT, wild-type na BRCA1/2 sequence.
Pinili naming itinuon ang aming mga pag-aaral sa mga pangkat ng kanser sa suso. Ang mga pasyente ay may median na edad na 49 taon (saklaw ng 23-89) at higit sa lahat ay babae (n=376, o 97%).
Sa mga paksang ito, 64 (17%) ang may mutasyon ng BRCA1/2 at lahat ay babae. Tatlumpu't limang (9%) ang may PV at 29 (7.5%) ang may VUS. Labimpito (48.6%) ng 35 pathogenic na variant ang naganap sa BRCA1 at 18 (51.4%) sa BRCA2, habang 8 BRCA17 (12%) ang naganap sa BRCA2 (8.2%) (Fire 8.2%). gures 1 at 2). Wala ang LGR sa pagsusuri ng MLPA.
Figure 2. Pagsusuri ng BRCA1 at BRCA2 mutations sa 389 na mga pasyente ng kanser sa suso.(A) Distribusyon ng mga pathogenic na variant (PV) (pula), mga variant ng hindi tiyak na kahalagahan (VUS) (orange), at WT (asul) sa 389 na mga pasyente ng kanser sa suso;(B) 389 na mga pasyente ng kanser sa suso Tatlumpu't limang (9%) ang may BRCA1/2 pathogenic variants (PVs). Kabilang sa mga ito, 17 (48.6%) ang BRCA1 PV carriers (dark red) at 18 (51.4%) ang BRCA2 carriers (light red);(C) 29 (7.5%) ng 389 na paksa ang nagdala ng VUS, 5 (17.2%) BRCA1 genes (dark orange) at 24 (82.8%) BRCA2 genes (light orange).
Mga pagdadaglat: PV, pathogenic na variant;VUS, variant ng hindi tiyak na kahalagahan;WT, wild-type na BRCA1/2 sequence.
Susunod naming inimbestigahan ang paglaganap ng BC molecular subtypes sa mga pasyenteng may BRCA1/2 PV. Kasama sa distribusyon ang 2 (5.7%) luminal A, 15 (42.9%) luminal B, 3 (8.6%) luminal B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ at 13 (37.1%) na mga pasyenteng BRTNBC 1.9%) (37.1%) ang luminal B-HER2+ (5.7%) (37.1%) ng mga pasyenteng BRTNBC 1. , 2 (11.8%) ang may sakit na HER2+, at 10 (58.8%) ang may TNBC. Ang mga tumor na walang mutation ng BRCA1 ay alinman sa luminal A o luminal B-HER2+ (Larawan 3). %) ay luminal A (Larawan 3). Walang mga tumor ng HER2+ ang naroroon sa pangkat na ito. Kaya, ang mga mutasyon ng BRCA1 ay laganap sa mga pasyente ng TNBC, samantalang ang mga pagbabago sa BRCA2 ay nangingibabaw sa mga indibidwal na lumen B.
Figure 3 Prevalence ng mga subtype ng breast cancer sa mga pasyenteng may mga pathogenic na variant sa BRCA1 at BRCA2. Ang mga histogram na nagpapakita ng distribusyon ng BRCA1- (dark red) at BRCA2- (light red) na mga PV sa mga molecular subtype ng mga pasyente ng breast cancer. Ang mga numerong iniulat sa loob ng bawat kahon ay kumakatawan sa porsyento ng mga pasyenteng may BRCA1 at BRCA2 subtype ng breast cancer para sa bawat breast cancer subtype.
Mga pagdadaglat: PV, pathogenic na variant;HER2+, human epidermal growth factor receptor 2 positibo;TNBC, triple-negative na kanser sa suso.
Kasunod nito, sinuri namin ang uri at lokalisasyon ng gene ng BRCA1 at BRCA2 PVs. Sa BRCA1 PV, naobserbahan namin ang 7 solong nucleotide variants (SNVs), 6 na pagtanggal, 3 pagdoble at 1 insertion. Isang mutation lang (c.5522delG) ang kumakatawan sa isang bagong pagtuklas. Ang pinakakaraniwang na-detect na BRATCA_del.503 na paksang PV35 ay ang pinakakaraniwang BRATCA_50359 na BRCA. .Ang pagbabagong ito ay nagsasangkot ng pagtanggal ng limang nucleotides (CTAAT) sa BRCA1 exon 15, na nagreresulta sa pagpapalit ng amino acid na leucine ng tyrosine sa codon 1679, at dahil sa isang frameshift ng pagsasalin na may hinulaang alternatibong stop codon na humahantong sa napaaga na pagputol ng protina. Lahat ng iba pang mga pagbabago ay matatagpuan sa isang lugar lamang. .4357+1G>T) (Talahanayan 1).
Tungkol sa BRCA2 PV, naobserbahan namin ang 6 na pagtanggal, 6 na SNV at 2 pagdoble. Wala sa mga nakitang pagbabago ay nobela. Tatlong mutasyon ang naulit sa aming populasyon, c.428dup at c.8487+1G>A na naobserbahan sa 3 paksa, na sinusundan ng c.5851_5854delAGTT ng dalawang kaso ret. sa 5 ng BRCA2, hinulaang mag-e-encode ng pinutol, hindi gumaganang protina. Ang c.8487+1G>A mutation ay nangyayari sa intronic na rehiyon ng BRCA2 intron 19 (± 1,2) at nakakaapekto sa pagkakasunud-sunod ng splicing consensus, na nagreresulta sa binagong splicing na nagreresulta sa abnormal o absent na protina41_AG5858 na pathogen. deletion mula sa nucleotide positions 5851 hanggang 5854 sa coding exon 10 ng BRCA2 gene at nagreresulta sa isang translational frameshift na may hinulaang alternatibong stop codon (p.S1951WfsTer). (A) sa BRCA2 exon 7 na may guanine (G) na naglalaman ng nucleotide na nagreresulta sa pagbabago ng valine sa isoleucine sa codon 211, isoleucine Amino acid ay isang amino acid na may lubos na katulad na mga katangian. Ang pagbabagong ito ay nakakaapekto sa normal na mRNA splicing. Ang pangalawang variant ay matatagpuan sa isang intronic na rehiyon at nagreresulta sa isang dobleng A sa BR30 na substitution bago ang thymine (T20) ng thymine (T20). Ang pagbabago sa 8-2A>T ay maaaring makabuo ng maraming transcript na may iba't ibang haba. Higit pa rito, sa pangkat ng mga BRCA2 PV, 4 sa 18 na pagbabago (22.2%) ay intronic.
Pagkatapos ay na-map namin ang BRCA1/2 deleterious mutations sa functional domains at protein-binding regions (Fig. 4). Sa BRCA1 gene, 50% ng mga PV ay matatagpuan sa breast cancer cluster region (BCCR), habang ang 22% ng mga mutations ay matatagpuan sa ovarian cancer cluster region (OCCR) (Fig. 4A). Ang % ng mga mutasyon ay matatagpuan sa OCCR (Larawan 4B). Susunod, sinuri namin ang lokasyon ng PV sa loob ng mga domain ng protina ng BRCA1 at BRCA2. Para sa protina ng BRCA1, nakakita kami ng tatlong PV sa loop at naka-coiled na mga domain ng coil, at dalawang mutasyon sa domain ng BRCT (Larawan 4A). Para sa mga BRCA2 na protinang domain na na-detect ang 4A, na-detect ang PV3 na exonic na domain, ang 4A. sa mga domain ng oligo/oligosaccharide-binding (OB) at tower (T) (Larawan 4B).
Figure 4 Schematic representation ng BRCA1 at BRCA2 proteins at localization ng pathogenic variant. Ipinapakita ng figure na ito ang distribution ng BRCA1 (A) at BRCA2 (B) pathogenic variant sa mga pasyente ng breast cancer. Ang mga exonic mutations ay ipinapakita sa kulay asul, habang ang intronic variant ay ipinapakita sa orange. Ang taas ng bar ay kumakatawan sa bilang ng mga kaso. Ang BRCA1 at BRCAA2 na domain ng mga ito ay naglalaman ng mga functional na domain na protina at BRCAA2. isang nuclear localization sequence (NLS), isang coiled-coil domain, isang SQ/TQ cluster domain (SCD), at isang BRCA1 C-terminal domain (BRCT).(B) Ang BRCA2 protein ay naglalaman ng walong BRC repeats, isang DNA-binding domain na may helical domain (Helical), tatlong oligonucleotide/oligosaccharide-binding na domain (ALS.Oligosaccharide-binding) na tinatawag na N.T. ang Breast Cancer Cluster Region (BCCR) at Ovarian Cancer Cluster Region (OCCR) ay ipinapakita sa ibaba.*Kumakatawan sa mga mutasyon na tumutukoy sa mga stop codon.
Pagkatapos ay inimbestigahan namin ang mga tampok na clinicopathological ng BC na maaaring nauugnay sa pagkakaroon ng BRCA1/2 PV. Ang mga kumpletong klinikal na tala ay magagamit para sa 181 BRCA1/2-negatibong mga pasyente (hindi carrier) at lahat ng mga carrier (n = 35). Nagkaroon ng ugnayan sa pagitan ng rate ng paglaganap at grado ng tumor.
Kinakalkula namin ang distribusyon ng Ki-67 batay sa median ng aming cohort (25%, range <10-90%). Ang mga subject na may Ki-67 < 25% ay tinukoy bilang “mababang Ki-67″, habang ang mga indibidwal na may value na ≥ 25% ay itinuring na “high Ki-67″. Ang mga makabuluhang Ki-67 na carrier ay natagpuan (1pPV) na walang pagkakaiba (1pPV) sa pagitan ng mga hindi carrier ng BR (1pv) <001. g. 5A).
Figure 5 Correlation ng Ki-67 na may grade distribution sa breast cancer women na may at walang BRCA1 at BRCA2 PVs.(A) Boxplot na nagpapakita ng median na Ki-67 values ​​​​sa 181 non-carrier BC na pasyente kumpara sa BRCA1 (18) o BRCA2 (17) PV na pasyente.P values ​​​​sa ibaba ng 0.5B na mga pasyente ay itinuturing na istatistikal na pagtatalaga sa kanyang mga pasyenteng may cancer (sa gramo ng BC) na makabuluhan (itinuturing na istatistikal na pagtatalaga sa kanyang mga pangkat ng cancer na BC) G2 at G3) ayon sa BRCA1 at BRCA2 mutation status (WT subjects, BRCA1 at BRCA2 PVs carriers).
Gayundin, sinuri namin kung may kaugnayan ang grade ng tumor sa pagkakaroon ng BRCA1/2 PV. Dahil wala ang G1 BC sa aming populasyon, hinati namin ang mga pasyente sa dalawang grupo (G2 o G3). Alinsunod sa mga resulta ng Ki-67, ang pagsusuri ay nagsiwalat ng makabuluhang ugnayan sa istatistika sa pagitan ng grade ng tumor at mutation ng BRCA1, na may mas mataas na proporsyon ng mga tumor na hindi G3-Figure sa BRCA10. B ).
Ang mga pag-unlad sa teknolohiya ng DNA sequencing ay nagbigay-daan sa mga hindi pa naganap na pag-unlad sa BRCA1/2 genetic testing, na may mahalagang implikasyon para sa mga pasyenteng may family history ng cancer.Sa ngayon, humigit-kumulang 20.000 BRCA1/2 variant ang natukoy at inuri ayon sa American Society of Medical Genetics 35 at sa ENIGMA system.35,36 BRCA na malawak na kilala sa buong rehiyon na may malawak na spectrum ng BRCA1/2 BRCA. Italy, ang rate ng BRCA1/2 PVs ay mula 8% hanggang 37%, na nagpapakita ng malawak na intra-country variability.38,39 Sa populasyon na halos 5 milyon, ang Sicily ay ang ikalimang pinakamalaking rehiyon sa Italy sa mga tuntunin ng bilang ng mga naninirahan.
Ang aming pag-aaral ay isa sa mga unang ulat sa insidente ng BRCA1/2 PV sa mga pasyente ng BC sa silangang Sicily.28 Itinuon namin ang aming pagsusuri sa BC, dahil ito ang pinakakaraniwang sakit sa aming pangkat.
Kapag sinusuri ang 389 BC na mga pasyente, 9% ang may dalang BRCA1/2 PV, pantay na ipinamahagi sa pagitan ng BRCA1 at BRCA2. Ang mga resultang ito ay pare-pareho sa mga naunang iniulat sa populasyon ng Italyano.28 Kapansin-pansin, 3% (13/389) ng aming cohort ay lalaki. Ang rate na ito ay mas mataas kaysa sa inaasahan para sa mga lalaki na kanser sa suso (1% ng lahat ng BC na nakabatay sa 40 na populasyon sa amin). Ang isa sa mga lalaking ito ay nakabuo ng BRCA1/2 PV, kaya sila ay mga kandidato para sa karagdagang molecular analysis upang ibukod ang pagkakaroon ng hindi gaanong karaniwang mga mutasyon gaya ng PALB2, RAD51C at D, bukod sa iba pa. Ang mga variant ng hindi tiyak na kahalagahan ay nakuha sa 7% ng mga paksa kung saan ang BRCA2 VUS ay nakikita. Kahit na ang resultang ito ay pare-pareho sa dati nang umiiral na ebidensya.
Noong sinuri namin ang distribusyon ng mga BC molecular subtypes sa BRCA1/2 mutant women, kinumpirma namin ang mga kilalang asosasyon sa pagitan ng TNBC at BRCA1 PV (58.8%) at sa pagitan ng luminal B BC at BRCA2 PV (55.6%).16,43 Ang luminal A at HER2+ na mga tumor sa BRCA1 at BRCA2 PV3 na mga carrier ay pare-pareho sa mga kasalukuyang carrier ng data ng literatura ng BRCA1 at BRCA2.
Pagkatapos ay tumutok kami sa uri at lokasyon ng BRCA1/2 PV. Sa aming cohort, ang pinakakaraniwang BRCA1 PV ay c.5035_5039delCTAAT. Bagama't ang Incorvaia et al.Hindi inilarawan ang variant na ito sa kanilang Sicilian cohort, iniulat ito ng ibang mga may-akda bilang germline BRCA1 PV.34 Ilang BRCA1 PV ang natagpuan sa aming cohort – hal c.181T>G, c.514del, c.3253dupA at c.5266dupC – na nakita sa BRCA1 at dalawang mutasyon na ito. .5266dupC) ay karaniwang matatagpuan sa Ashkenazi Jews ng Eastern at Central Europe (Poland, Czech), Slovenian, Austrian, Hungarian, Belarusian at German ), 44,45 at, sa United States at Argentina, kamakailan ay tinukoy bilang isang "paulit-ulit na variant ng germline" sa mga pasyenteng Italyano na may BC at OC. Ang 34c.8 na natukoy na variant ng kanser sa Messiern ay dati nang natukoy sa mga pasyenteng may kanser sa Simocidel. kapansin-pansin, maging ang Incorvaia et al.natagpuan ang c.3253dupA na variant sa ilang pamilya sa Catania.28 Ang pinakakinakatawan na BRCA2 PVs ay c.428dup, c.5851_5854delAGTT at ang intronic variant na c.8487+1G>A, na naiulat nang mas detalyado 28 sa isang pasyente sa Palermo na may c.5858dup na may c.428dup na sambahayan na naobserbahang c.4258dup. sa hilagang-kanluran ng Sicily, pangunahin sa mga rehiyon ng Trapani at Palermo, samantalang ang c.5851_5854delAGTT PV ay naobserbahan sa mga sambahayan sa hilagang-kanlurang Sicily. Ang variant na 8487+1G>A ay mas karaniwan sa mga paksa mula sa Messina, Palermo, at Caltanissetta.28 Rebbeck et al.naunang inilarawan ang c.5851_5854delAGTT na pagbabago sa Colombia.37 Ang isa pang BRCA2 PV, c.631+1G>A, ay natagpuan sa mga pasyente ng BC at OC mula sa Sicily (Agrigento, Siracusa at Ragusa).28 Kapansin-pansin, napagmasdan namin ang magkakasamang pag-iral ng dalawang variant ng BRCA2 at c.631700. na ipinapalagay namin na ibinukod sa cis mode, gaya ng naiulat na dati nang ganyan.34,46 Ang mga BRCA2 uble mutations na ito ay talagang madalas na sinusunod sa rehiyon ng Italy at napag-alaman na nagpapakilala ng mga premature stop codon, na nakakaapekto sa messenger RNA splicing at nagiging sanhi ng pagbagsak ng BRCA2 protein.47,48
Na-map din namin ang mga BRCA1 at BRCA2 PV sa putative OCCR at BCCR na mga rehiyon ng mga domain ng protina at mga gene. Ang mga rehiyong ito ay inilarawan ni Rebbeck et al.bilang mga lugar na may panganib para sa pagbuo ng ovarian at breast cancer, ayon sa pagkakabanggit.49 Gayunpaman, ang katibayan tungkol sa kaugnayan sa pagitan ng lokasyon ng mga variant ng germline at ang panganib ng kanser sa suso o ovarian ay nananatiling kontrobersyal.28,50-52 Sa aming populasyon, ang mga BRCA1 PV ay nakararami na matatagpuan sa rehiyon ng BCCR, samantalang ang mga BRCA2 PV ay nakararami na matatagpuan sa pagitan ng OCCR na rehiyon at anumang rehiyon na matatagpuan sa OCCR, kahit anong rehiyon. s at BC features. Ito ay maaaring dahil sa limitadong bilang ng mga pasyenteng may BRCA1/2 mutations. Mula sa isang protein domain perspective, ang mga BRCA1 PV ay ipinamamahagi sa buong protina, at ang mga BRCA2 na pagbabago ay mas gustong makita sa BRC repeat domain.
Sa wakas, iniugnay namin ang BC clinicopathological features sa BRCA1/2 PV. Dahil sa limitadong bilang ng mga pasyenteng kasama, nakakita lang kami ng makabuluhang ugnayan sa pagitan ng Ki-67 at tumor grade. Bagama't ang pagtatasa at interpretasyon ng Ki-67 ay nananatiling medyo kontrobersyal, tiyak na ang mataas na proliferative rate ay nauugnay sa mas mataas na panganib ng pag-ulit ng sakit at ang pagbabawas ng petsa ng "Tohigh" para sa Ki-67 ay "nababawasan ang kaligtasan." 20%.Gayunpaman, ang threshold na ito ay hindi nalalapat sa aming BRCA1/2 mutation na populasyon ng pasyente, na may median na Ki-67 na halaga na 25%. Ang kalakaran na ito sa mataas na Ki-67 rate ay maaaring ipaliwanag sa pamamagitan ng paglaganap sa aming luminal B at TNBC cohorts, kung saan kakaunti ang luminal A na tumor ang naroroon. Gayunpaman, ang ilang mga pasyente ay tila nagmumungkahi na ang kanilang mas mataas na progresibong Ki2-67 ay maaaring ipahiwatig na mas mataas ang progreso ng mga ito ayon sa Ki2-67%). 53,54 Mula sa mga resulta ng aming pagsusuri, ang isang makabuluhang ugnayan ay hindi nakakagulat. Nangyayari sa pagitan ng mataas na Ki-67 at mga marka at ang pagkakaroon ng BRCA1 PV. Sa katunayan, ang mga tumor na nauugnay sa BRCA1 ay tipikal ng TNBC at nagpapakita ng mas agresibong mga tampok.16,17
Sa konklusyon, ang pag-aaral na ito ay nagbibigay ng ulat sa mutational status ng BRCA1/2 sa isang BC cohort mula sa eastern Sicily. nt kaysa sa BRCA1/2. Ito ay magbibigay-daan sa pagtukoy at wastong pamamahala sa dumaraming mga paksa sa mas mataas na panganib ng kanser dahil sa genetic mutations.
Kinumpirma namin na nilagdaan ng mga pasyente ang may-kaalamang pahintulot na ilabas ang kanilang mga sample ng tumor nang hindi nagpapakilala para sa mga layunin ng pananaliksik. Ang lahat ng mga pasyente ay pumirma ng nakasulat na may-kaalamang pahintulot ayon sa Deklarasyon ng Helsinki. kanilang data para sa layunin ng pananaliksik.
Nagpapasalamat kami kay Prof. Paolo Vigneri sa kanyang tulong sa pangangalaga ng mga pasyente ng kanser sa suso gaya ng hiniling ng Ethics Committee.
Si Federica Martorana ay nag-uulat ng honoraria mula sa Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Ang ibang mga may-akda ay nagpahayag na walang mga salungatan ng interes sa gawaing ito.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al.Global Cancer Statistics 2020: Tinatantya ng GLOBOCAN ang saklaw at dami ng namamatay ng 36 na cancer sa 185 na bansa sa buong mundo.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3222/6caac.3