Javascript şu anda tarayıcınızda devre dışı. Bu web sitesinin bazı özellikleri, javascript devre dışı bırakıldığında çalışmayacaktır.
Özel bilgileriniz ve ilgilendiğiniz özel ilaçla kaydolun ve sağladığınız bilgileri kapsamlı veri tabanımızdaki makalelerle eşleştirelim ve size hemen bir PDF kopyası e-postayla gönderelim.
Ek olarak Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella1,21 Klinik ve Deneysel Tıp Bölümü, Katanya Üniversitesi, Katanya, 95123, İtalya;2 Deneysel Onkoloji ve Hematoloji Merkezi, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, İtalya;3 Medikal Onkoloji, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Katanya, 95123, İtalya;4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, İtalya;5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, İtalya;6 Biyomedikal ve Biyoteknoloji Bilimleri Bölümü, Katanya Üniversitesi, Tıbbi Genetik, Katanya, İtalya, 95123;7Oasi Araştırma Enstitüsü-IRCCS, Troina, 94018, İtalya İletişim: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, e-posta [e-posta korumalı];[email korumalı] Amaç: BRCA1 ve BRCA2'deki germ hattı mutasyonları ve yerleşmiş meme kanseri (BC), yumurtalık (OC) ve diğer yaşam boyu kanser riskiyle ilişkilidir. BRCA geni için test yapmak, bireysel riski değerlendirmenin yanı sıra sağlıklı taşıyıcılarda önleme yöntemleri bulmanın ve kanser hastalarında tedavileri uyarlamanın anahtarıdır. BRCA1 ve BRCA2 değişikliklerinin yaygınlığı coğrafi bölgeler arasında büyük farklılıklar gösterir ve Sicilyalı ailelerde BRCA patojenik varyantları hakkında veriler mevcut olmasına rağmen, çalışmalar özellikle doğudaki popülasyonları hedef alır Sicilya eksiktir. Çalışmamızın amacı, doğu Sicilya'daki BC hastalarından oluşan bir kohortta BRCA patojenik germ hattı değişikliklerinin insidansını ve dağılımını araştırmak ve bunların yeni nesil dizilemeyi kullanarak belirli BC özellikleriyle ilişkisini değerlendirmektir. Değişikliklerin varlığı, tümör derecesi ve proliferasyon indeksi ile ilişkilidir. SONUÇLAR: Genel olarak, 35 hastada (%9) bir BRCA patojenik varyantı vardı, 17 hastada (%49) BRCA1'de ve 18 hastada (%51) BRCA2.BRCA1 değişiklikleri üçlü negatif BC hastalarında yaygınken, BRCA2 mutasyonları lüminal BC hastalarında daha yaygındır. Taşıyıcı olmayanlarla karşılaştırıldığında, BRCA1 varyantları olan deneklerde tümör derecesi ve proliferatif indeks önemli ölçüde daha yüksekti. Sonuçlar: Bulgularımız doğu Sicilya'daki BC hastalarında BRCA mutasyon durumuna genel bir bakış sağlar ve kalıtsal BC'li hastaların belirlenmesinde NGS analizinin rolünü doğrular. Genel olarak, bu veriler mutasyon taşıyıcılarında kanserin uygun şekilde önlenmesi ve kanserin tedavisi için BRCA taramasını destekleyen önceki kanıtlarla tutarlıdır.
Meme kanseri (MK) dünya çapında en yaygın malignite ve kadınlarda en ölümcül kanserdir.1 BC prognozunu ve klinik davranışı belirleyen biyolojik özellikler kapsamlı bir şekilde incelenmiş ve zaman içinde kısmen aydınlatılmıştır. Aslında, şu anda BC'yi farklı moleküler alt tiplere sınıflandırmak için birkaç vekil belirteç kullanılmaktadır. Bunlar östrojen (ER) ve/veya progesteron reseptörü (PgR), insan epidermal büyüme faktörü reseptörü 2 (HER2) amplifikasyonu, proliferasyon indeksi Ki-67 ve tümör derecesidir (G).2 bu değişkenlerin kombinasyonu aşağıdaki BC kategorilerini tanımlamıştır: 1) ER ve/veya PgR ekspresyonu gösteren luminal tümörler, BC'lerin %75'ini oluşturmaktadır. Bu tümörler ayrıca Ki-67 %20'nin altında ve HER2 negatif olduğunda Luminal A ve proliferasyon indeksinden bağımsız olarak Ki-67 %20'ye eşit veya üzerinde olduğunda ve HER2 amplifikasyonunun varlığında Luminal B olarak ayrılmıştır;2) ER ve PgR negatif olan ancak HER2 amplifikasyonu gösteren HER2+ tümörler. Bu grup tüm meme tümörlerinin %10'unu oluşturur;3) ER ve PgR ekspresyonu ve HER2 amplifikasyonu göstermeyen üçlü negatif meme kanseri (TNBC), meme kanserlerinin yaklaşık %15'ini oluşturur.2-4
Bu BC alt türleri arasında, tümör derecesi ve proliferasyon indeksi, tümör agresifliği ve prognozu ile doğrudan ve bağımsız olarak ilişkili olan enine kesitsel biyobelirteçleri temsil eder.5,6
Yukarıda belirtilen biyolojik özelliklere ek olarak, kalıtsal genetik değişikliklerin MK gelişimine yol açma rolü son birkaç yılda giderek daha önemli hale geldi.7 Yaklaşık 10 göğüs tümöründen 1'i, belirli genlerdeki germ hattı değişiklikleri nedeniyle kalıtsaldır.8 Son zamanlarda 180.000'den fazla kadını içeren iki büyük epidemiyolojik çalışma, sekiz genlik bir grup tanımlamıştır (yani, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C ve RAD5) 1D) birincil olarak kalıtsal BC'den sorumludur. Bu genler arasında, BRCA1 ve BRCA2 (bundan sonra BRCA1/2 olarak anılacaktır), meme tümörlerinin gelişimi ile en güçlü korelasyonu göstermiştir.9-12 Aslında, germline BRCA1/2 mutasyonları, yaşam boyu BC riskinin yanı sıra yumurtalık, prostat, pankreas, kolorektal ve melanom dahil olmak üzere diğer maligniteler riskini önemli ölçüde artırır. BRCA1 patojenik varyantı (PV) olan kadınlar ve BRCA2 PV'si olan kadınlarda %69.14
Özellikle yakın tarihli bir yayın, MK riskinin PV tipine bağlı olduğunu ileri sürmektedir. Aslında, patojenik kesik varyantlarla karşılaştırıldığında, özellikle BRCA1 genindeki göze batan missense varyantları, özellikle yaşlı kadınlarda daha düşük MK riski ile ilişkilidir.15
BRCA1 veya BRCA2 PV'nin varlığı, farklı biyolojik ve klinikopatolojik özelliklerle ilişkilendirilmiştir.16,17 BRCA1 ile ilişkili BC'ler, klinik olarak agresif, az farklılaşmış ve yüksek oranda proliferatif olma eğilimindedir. Bu tümörler genellikle üçlü negatiftir ve erken başlangıç ​​yaşlarına sahiptir. BRCA2 mutasyonlu hastalarda ortaya çıkan tümörler tipik olarak orta ila iyi farklılaşmış dereceler ve değişken proliferatif indeksler sergiler. Bu tümörler daha çok lümen B'de görülür ve genellikle yaşlı erişkinlerde ortaya çıkar. .16-18 Bilhassa, BRCA1 ve BRCA2'deki mutasyonlar, platin tuzları ve poli(ADP-riboz) polimeraz inhibitörleri (PARPi) gibi hedeflenmiş ilaçlar dahil olmak üzere spesifik tedavilere duyarlılığı artırır.19,20
Son birkaç yılda, klinik uygulamada yeni nesil dizilemenin (NGS) uygulanması, artan sayıda BC hastasının, BRCA1/2 dahil olmak üzere, kanser duyarlılık sendromları için moleküler testlere tabi tutulmasını sağlamıştır. .24–27 Batı Sicilya'daki BC kohortu hakkında raporlar olmasına rağmen, doğu Sicilya popülasyonundaki BRCA1/2 taramasına ilişkin daha az veri mevcuttur.28,29
Burada doğu Sicilya'daki BC hastalarında germ hattı BRCA1/2 taramasının sonuçlarını açıklıyoruz, ayrıca BRCA1 veya BRCA2 mutasyonlarının varlığını bu tümörlerin ana klinikopatolojik özellikleriyle ilişkilendiriyoruz.
Policlinico Hastanesi'ndeki "Center for Experimental Oncology and Hematology"de retrospektif bir çalışma yapılmıştır. Katanya'daki Rodolico – San Marco'da Ocak 2017'den Mart 2021'e kadar meme ve yumurtalık, melanom, pankreas veya prostat kanseri olan toplam 455 hasta BRCA/2 genetik testi için moleküler tanı laboratuvarımıza yönlendirilmiştir. Bu çalışma Helsinki Bildirgesi'ne uygun olarak yürütülmüştür ve tüm katılımcılar moleküler analizden önce yazılı bilgilendirilmiş onam vermiştir. .
MK'nin histolojik ve biyolojik özellikleri (ER, PgR, HER2 durumu, Ki-67 ve derece), yalnızca agresif tümör bileşenleri dikkate alınarak kor biyopsi veya cerrahi örnekler üzerinde değerlendirildi. ve/veya PgR+, HER2+), HER2+ (ER ve PgR-, HER2+) veya üçlü negatif (ER ve PgR-, HER2-).
BRCA1 ve BRCA2 mutasyon durumunu değerlendirmeden önce, bir onkolog, bir genetikçi ve bir psikologdan oluşan multidisipliner bir ekip, BRCA1 ve/veya BRCA1'in varlığını belirlemek için her hasta için bir tümör genetiği konsültasyonu gerçekleştirdi.veya BRCA2 geninde yüksek PV riski olan bireyler. Hasta seçimi, İtalyan Tıbbi Onkoloji Derneği (AIOM) yönergelerine ve yerel Sicilya tavsiyelerine göre yapıldı.30,31 Bu kriterler şunları içerir: (i) duyarlılık genlerinde (örn., BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN) bilinen patojenik varyantların aile öyküsü;(ii) BC'li erkekler;(iii) BC ve OC olanlar;(iv) BC <36 yaşında, TNBC <60 yaşında veya bilateral BC <50 yaşında olan kadınlar;(v) BC <50 yıllık kişisel tıbbi geçmiş ve en az bir birinci derece akraba: (a) BC <50 yıl;(b) herhangi bir yaşta müsinöz olmayan ve sınırda olmayan OC;(c) ikili BC;(d) erkek BC;(e) pankreas kanseri;(f) prostat kanseri;(vi) birinci derece akraba olan akrabalar için iki veya daha fazla kişisel BC > 50 öyküsü ve ailede BC, OC veya pankreas kanseri öyküsü (birinci derece akraba olduğu akrabalar dahil);(vii) Kişisel OK öyküsü ve en az bir birinci derece akraba: (a) BC <50 yıl;(b) NOK;(c) ikili BC;(d) erkek BC;(vii) yüksek dereceli seröz OC'li kadın.
Her hastadan 20 mL periferik kan örneği alındı ​​ve EDTA tüplerine (BD Biosciences) toplandı. Üreticinin talimatlarına göre QIAsymphony DSP DNA Midi kiti İzolasyon Kiti (QIAGEN, Hilden, İtalya) kullanılarak 0,7 mL tam kan örneklerinden genomik DNA izole edildi ve bir Qubit® 3.0 Florometreden (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD) geçirildi.Hedef zenginleştirme ve kitaplık hazırlama, üreticinin talimatlarına göre otomatik kitaplık hazırlama için Ion AmpliSeq™ Şef Reaktifleri DL8 Kitine yüklenmeye hazır olan Oncomine™ BRCA Araştırma Testi Şefi tarafından gerçekleştirilir. Kit, tüm BRCA1 (NM_007300.3) ve BRCA2 (NM_000059.3) genlerini incelemek için kullanılabilecek iki multipleks PCR primer havuzundan oluşur. Kısaca, her dilden 15 µL Kütüphane hazırlığı için barkodlu plakalara kullanılan numune DNA'sı (10 ng) ilave edildi ve tüm reaktifler ve sarf malzemeleri Ion Chef™ cihazına yüklendi. Daha sonra Ion Chef™ cihazında otomatik kütüphane hazırlama ve barkodlu numune kütüphane havuzu oluşturma işlemi gerçekleştirildi. Daha sonra hazırlanan kütüphanelerin sayısı, üreticinin talimatlarına göre bir Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD) ile değerlendirildi. Son olarak, kütüphaneler I'de eş molar oranlarda birleştirildi. Chef™ kitaplığı örnek tüplerinde (barkodlu tüpler) ve Ion Chef™ cihazına yüklendi. Dizileme, bir Ion 510 Chip (Thermo Fisher Scientific) kullanılarak bir Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) cihazı (Thermo Fisher Scientific) kullanılarak yapıldı. Veri analizi, Amplicon Suite (SmartSeq srl) ve Ion Reporter Software tarafından yapıldı.
Tüm değişken terminolojisi, İnsan Genom Varyasyonu Konsorsiyumu'nun çevrimiçi (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen) mevcut yönergelerini takip etti. BRCA1/2 varyantlarının klinik önemi, Uluslararası Konsorsiyum ENIGMA'nın (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) sınıflandırması ve ARUP, BRCAEXCHANGE gibi farklı veritabanlarına başvurularak tanımlandı. ClinVar, IARC_LOVD ve UMD.Sınıflandırma beş farklı risk kategorisini içerir: iyi huylu (kategori I), muhtemel iyi huylu (kategori II), belirsiz değişken (VUS, kategori III), olası patojenik (kategori IV) ve patojenik (kategori V).VarSome ayrıca mutasyonların protein yapısı ve işlevi üzerindeki etkisini de analiz etti; 30 veri tabanına erişim sağlayan bilgilendirici bir araç.32
Her bir VUS'a potansiyel klinik önem atamak için aşağıdaki hesaplamalı protein tahmin algoritmaları kullanıldı: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (//provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) ve Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php).Vari 1. ve 2. sınıf olarak sınıflandırılan karıncalar vahşi tip olarak kabul edildi.
Sanger dizilimi, her patojenik varyantın varlığını doğruladı. Kısaca, BRCA1 ve BRCA2 gen referans dizileri (sırasıyla NG_005905.2, NM_007294.3 ve NG_012772.3, NM_000059.3) kullanılarak tespit edilen her varyant için bir çift spesifik primer tasarlandı. Bu nedenle, hedefli PCR gerçekleştirildi ve ardından Sanger dizilimi yapıldı.
BRCA1/2 geni için negatif test yapan hastalar, büyük genomik yeniden düzenlemelerin (LGR) varlığını değerlendirmek için üreticinin talimatlarına göre multipleks ligasyona bağlı prob amplifikasyonu (MLPA) ile test edilmiştir. kılcal elektroforez ve uygun partiye özel Cofalyser tabloları (www.mrcholland.com) ile birlikte Cofalyser.Net yazılımı tarafından analiz edilmiştir.
Seçilen klinikopatolojik değişkenler (histolojik derece ve Ki-%67 proliferasyon indeksi), p-değerinin <0.05 anlamlı olduğunu varsayarak Fisher'in kesin testi kullanılarak Prism yazılımı v. 8.4 kullanılarak hesaplanan BRCA1/2 PV'nin varlığı ile ilişkilendirildi.
Ocak 2017 ile Mart 2021 arasında 455 hasta germ hattı BRCA1/2 mutasyonları için tarandı. Policlinico Hastanesi Deneysel Onkoloji ve Hematoloji Merkezi'nde mutasyon testi yapıldı. ico of Catania – San Marco” toplamda 389 hasta Meme kanseri, 37 yumurtalık kanseri, 16 pankreas kanseri, 8 prostat kanseri ve 5 melanom vardı.Hastaların kanser tipi ve analiz sonuçlarına göre dağılımı Şekil 1'de gösterilmiştir.
Şekil 1, çalışmaya genel bir bakışı gösteren bir akış şemasını göstermektedir. Göğüs, melanom, pankreas, prostat veya yumurtalık tümörleri olan hastalar, BRCA1 ve BRCA2 genlerindeki mutasyonlar için test edilmiştir.
Kısaltmalar: PV'ler, patojenik varyant;VUS, önemi belirsiz değişken;WT, vahşi tip BRCA1/2 dizisi.
Çalışmalarımızı seçici olarak meme kanseri kohortlarına odakladık. Hastaların ortanca yaşı 49'du (23-89 arası) ve ağırlıklı olarak kadındı (n=376 veya %97).
Bu deneklerin 64'ünde (%17) BRCA1/2 mutasyonu vardı ve hepsi kadındı. Otuz beşinde (%9) PV ve 29'unda (%7,5) VUS vardı. 35 patojenik varyantın 17'si (%48,6) BRCA1'de ve 18'i (%51,4) BRCA2'de meydana gelirken, 5 VUS BRCA1'de (%17,2) ve 24'ü (%82,8) BRCA2'de meydana geldi (Şekil 1 ve 2).LGR, MLPA analizinde mevcut değildi.
Şekil 2. 389 meme kanseri hastasında BRCA1 ve BRCA2 mutasyonlarının analizi. (A) 389 meme kanseri hastasında patojenik varyantların (PV) (kırmızı), önemi belirsiz varyantların (VUS) (turuncu) ve WT'nin (mavi) dağılımı;(B) 389 meme kanseri hastası Otuz beşinde (%9) BRCA1/2 patojenik varyantları (PV'ler) vardı. Bunların arasında 17'si (%48,6) BRCA1 PV taşıyıcısıydı (koyu kırmızı) ve 18'i (%51,4) BRCA2 taşıyıcısıydı (açık kırmızı);(C) 389 kişiden 29'u (%7,5) VUS, 5'i (%17,2) BRCA1 geni (koyu turuncu) ve 24'ü (%82,8) BRCA2 geni (açık turuncu) taşıyordu.
Kısaltmalar: PV'ler, patojenik varyant;VUS, önemi belirsiz değişken;WT, vahşi tip BRCA1/2 dizisi.
Daha sonra BRCA1/2 PV'li hastalarda BC moleküler alt tiplerinin prevalansını araştırdık. Dağılım 2 (%5,7) lümen A, 15 (%42,9) lümen B, 3 (%8,6) lümen B-HER2+, 2 (%5,7) HER2+ ve 13 (%37,1) TNBC hastasını içeriyordu. BRCA1-pozitif hastalardan 5'inde (%29,4) lüminal B BC, 2'sinde (%11,8) HER2+ hastalığı ve 10'unda (%58,8) TNBC vardı. BRCA1 mutasyonu olmayan tümörler ya luminal A ya da luminal B-HER2+ idi (Şekil 3). BRCA2-pozitif alt grupta 10 (%55,6) tümör luminal B, 3 (%16,7) tümör luminal B-HER2+, 3 (%16,7) TNBC ve 2 (%11,1) luminal A idi (Şekil 3 ). Bu grupta HER2+ tümörü yoktu. Bu nedenle, TNBC hastalarında BRCA1 mutasyonları yaygınken, lümen B bireylerinde BRCA2 değişiklikleri baskındır.
Şekil 3 BRCA1 ve BRCA2'de patojenik varyantları olan hastalarda meme kanseri alt tiplerinin prevalansı. Göğüs kanseri hastalarının moleküler alt tipleri arasında BRCA1- (koyu kırmızı) ve BRCA2- (açık kırmızı) PV'lerin dağılımını gösteren histogramlar. Her kutuda bildirilen sayılar, her meme kanseri alt tipi için BRCA1 ve BRCA2 PV'li hastaların yüzdesini temsil eder.
Kısaltmalar: PV'ler, patojenik varyant;HER2+, insan epidermal büyüme faktörü reseptörü 2 pozitif;TNBC, üçlü negatif meme kanseri.
Daha sonra, BRCA1 ve BRCA2 PV'lerin tipini ve gen lokalizasyonunu değerlendirdik. BRCA1 PV'de 7 tek nükleotid varyantı (SNV), 6 delesyon, 3 duplikasyon ve 1 insersiyon gözlemledik. Yalnızca bir mutasyon (c.5522delG) yeni bir keşfi temsil eder. otidler (CTAAT) BRCA1 ekson 15'te, amino asit lösinin 1679 kodonunda tirozinle yer değiştirmesine neden olur ve tahmini bir alternatif durdurma kodonuyla bir çeviri çerçeve kayması nedeniyle prematüre protein kesilmesine yol açar. Diğer tüm değişiklikler yalnızca bir vakada tespit edilir. Bilhassa, rapor edilen PV'lerden biri ek yeri konsensüs bölgesinde yer aldı (c.4357+1G>T) (Tablo 1).
BRCA2 PV ile ilgili olarak 6 delesyon, 6 SNV ve 2 duplikasyon gözlemledik. Bulunan değişikliklerin hiçbiri yeni değil. Popülasyonumuzda üç mutasyon tekrarlandı, 3 denekte c.428dup ve c.8487+1G>A gözlendi, ardından iki vakada c.5851_5854delAGTT alındı. kesik, işlevsel olmayan bir protein.c.8487+1G>A mutasyonu, BRCA2 intron 19'un (± 1,2) intronik bölgesinde meydana gelir ve ekleme konsensüs dizisini etkileyerek anormal veya proteinin bulunmamasına neden olan değiştirilmiş ekleme ile sonuçlanır. c.5851_5854delAGTT patojenik varyantı, kodlama ekzonunda 5851 ila 5854 nükleotit konumlarından 4-nükleotit silinmesine bağlıdır BRCA2 geninin 10'u ve tahmin edilen alternatif bir durdurma kodonu (p.S1951WfsTer) ile translasyonel bir çerçeve kayması ile sonuçlanır. Belirgin şekilde, daha önce bildirildiği gibi, c.631G>A ve c.7008-2A>T değişikliklerinin her ikisi de aynı hastada tespit edildi.34 İlk mutasyon, BRCA2 ekson 7'deki adenosinin (A) nükleotid içeren bir guanin (G) ile yer değiştirmesini içerir ve bu da valinin izole dönüşmesine neden olur kodon 211'deki usin, izolösin Amino asit, oldukça benzer özelliklere sahip bir amino asittir. Bu değişiklik, normal mRNA eklenmesini etkiler. İkinci varyant, bir intronik bölgede bulunur ve BRCA2'yi kodlayan genin 13. eksonundan önce çift A'nın timine (T) ikamesiyle sonuçlanır. c.7008-2A>T değişikliği, farklı uzunluklarda birden fazla transkript oluşturabilir. Ayrıca, BRCA2 PV'ler grubunda 18 değişiklikten 4'ü (%22.2) intronikti.
Daha sonra fonksiyonel alanlarda ve protein bağlama bölgelerinde BRCA1/2 zararlı mutasyonlarını haritaladık (Şekil 4). BRCA1 geninde, PV'lerin %50'si meme kanseri küme bölgesinde (BCCR) bulunurken, mutasyonların %22'si yumurtalık kanseri küme bölgesinde (OCCR) (Şekil 4A) yer aldı. BRCA2 PV'de, varyantların %35,7'si BCCR bölgesinde ve mutasyonların %42,8'i OCCR (Şekil 4B).Sonra, PV'nin BRCA1 ve BRCA2 protein alanları içindeki konumunu değerlendirdik. BRCA1 proteini için, döngü ve sarmal bobin alanlarında üç PV ve BRCT alanında iki mutasyon bulduk (Şekil 4A). kule (T) alanları ( Şekil 4B).
Şekil 4 BRCA1 ve BRCA2 proteinlerinin şematik temsili ve patojenik varyantların lokalizasyonu. Bu şekil, meme kanseri hastalarında BRCA1 (A) ve BRCA2 (B) patojenik varyantlarının dağılımını göstermektedir. Ekzonik mutasyonlar mavi, intronik varyantlar turuncu ile gösterilmiştir. Çubuk yüksekliği, vaka sayısını temsil eder. BRCA1 ve BRCA2 proteinleri ve bunların işlevsel alanları rapor edilir. (A) BRCA1 proteini, bir döngü alanı (RING) ve bir nükleer lokalizasyon dizisi (NLS) içerir ), bir sarmal-kıvrım alanı, bir SQ/TQ küme alanı (SCD) ve bir BRCA1 C-terminal alanı (BRCT).(B) BRCA2 proteini, sekiz BRC tekrarı, sarmal bir alana sahip bir DNA bağlama alanı (Helikal), üç oligonükleotit/oligosakkarit bağlama (OB) kıvrımı, bir kule alanı (T) ve C tarafında bir NLS içerir. Göğüs Kanseri Küme Bölgesi (BCCR) ve Ovari olarak adlandırılan alanlar altta bir Kanser Küme Bölgesi (OCCR) gösterilmektedir. *Dur kodonlarını belirleyen mutasyonları temsil eder.
Daha sonra BRCA1/2 PV'nin varlığıyla bağıntılı olabilecek BC klinikopatolojik özelliklerini araştırdık. 181 BRCA1/2-negatif hasta (taşıyıcı olmayan) ve tüm taşıyıcılar (n = 35) için eksiksiz klinik kayıtlar mevcuttu. Tümör proliferasyonu oranı ile derecesi arasında bir korelasyon vardı.
Grubumuzun medyanına göre Ki-67 dağılımını hesapladık (%25, aralık <%10-90). Ki-67 < %25 olan denekler "düşük Ki-67" olarak tanımlanırken, ≥ %25 değerlerine sahip kişiler "yüksek Ki-67" olarak kabul edildi. Taşıyıcı olmayanlar ile BRCA1 PV taşıyıcıları arasında önemli Ki-67 farklılıkları (p<0.01) bulundu (Şekil 5A) ).
Şekil 5 BRCA1 ve BRCA2 PV'leri olan ve olmayan meme kanserli kadınlarda derece dağılımı ile Ki-67 korelasyonu.(A) Taşıyıcı olmayan 181 BC hastasında BRCA1 (18) veya BRCA2 (17) PV hastalarında medyan Ki-67 değerlerini gösteren kutu grafiği. ve BRCA2 mutasyon durumu (WT denekleri, BRCA1 ve BRCA2 PV taşıyıcıları).
Benzer şekilde, tümör derecesinin BRCA1/2 PV'nin varlığı ile korele olup olmadığını inceledik. Popülasyonumuzda G1 BC bulunmadığından, hastaları iki gruba ayırdık (G2 veya G3). Ki-67 sonuçlarıyla tutarlı olarak, analiz, tümör derecesi ile BRCA1 mutasyonu arasında istatistiksel olarak anlamlı bir korelasyon ortaya çıkardı ve taşıyıcı olmayanlara kıyasla BRCA1 taşıyıcılarında daha yüksek G3 tümör oranı vardı (p<0.005) (Şekil 5B).
DNA dizileme teknolojisindeki ilerlemeler, BRCA1/2 genetik testinde benzeri görülmemiş ilerlemeler sağladı ve ailesinde kanser öyküsü olan hastalar için çok önemli sonuçlar doğurdu. Bugüne kadar, yaklaşık 20.000 BRCA1/2 varyantı tanımlanmış ve American Society of Medical Genetics35 ve ENIGMA sistemine göre sınıflandırılmıştır.35,36 BRCA1/2 mutasyonel spektrumunun coğrafi bölgeler arasında büyük farklılıklar gösterdiği iyi bilinmektedir.37 İtalya'da BRCA1/2 PV oranları, %8 ila %37, geniş ülke içi değişkenlik göstermektedir.38,39 Yaklaşık 5 milyon nüfusa sahip Sicilya, nüfus bakımından İtalya'nın en büyük beşinci bölgesidir. Batı Sicilya'da BRCA1/2 dağılımına ilişkin veriler mevcut olmasına rağmen, adanın doğu kesiminde kapsamlı bir kanıt yoktur.
Çalışmamız, doğu Sicilya'daki BC hastalarında BRCA1/2 PV insidansına ilişkin ilk raporlardan biridir.28 Bu, kohortumuzda açık ara en yaygın hastalık olduğundan, analizimizi BC'ye odakladık.
389 BC hastasını test ederken, %9'u BRCA1 ve BRCA2 arasında eşit olarak dağılmış BRCA1/2 PV'ler taşıyordu. Bu sonuçlar daha önce İtalyan popülasyonunda bildirilenlerle tutarlıydı.28 İlginç bir şekilde, kohortumuzun %3'ü (13/389) erkekti. Bu oran, erkek meme kanseri için beklenenden daha yüksektir (tüm BC'lerin %1'i),40 bu, BRCA1/2 mutasyon riskine dayalı popülasyon seçimimizi yansıtmaktadır. Ancak, bu erkeklerin hiçbirinde BRCA1/2 PV geliştirmedi , bu nedenle diğerleri arasında PALB2, RAD51C ve D gibi daha az yaygın mutasyonların varlığını ekarte etmek için ileri moleküler analiz için adaylardı. BRCA2 VUS'un belirgin olduğu deneklerin %7'sinde belirsiz öneme sahip varyantlar elde edildi. Bu sonuç bile önceden var olan kanıtlarla tutarlıdır.28,41,42
BRCA1/2 mutant kadınlarda BC moleküler alt tiplerinin dağılımını analiz ettiğimizde, TNBC ile BRCA1 PV (%58,8) ve lüminal B BC ile BRCA2 PV (%55,6) arasındaki bilinen ilişkileri doğruladık.16,43 BRCA1 ve BRCA2 PV taşıyıcılarındaki lüminal A ve HER2+ tümörler, mevcut literatür verileriyle uyumludur.16,43
Daha sonra BRCA1/2 PV'nin tipine ve konumuna odaklanıyoruz. Grubumuzda en yaygın BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT idi. Incorvaia ve ark.Sicilya kohortlarında bu varyantı tanımlamadı, diğer yazarlar bunu bir germline BRCA1 PV olarak bildirdiler.34 Bizim kohortumuzda birkaç BRCA1 PV bulundu – örn. Doğu ve Orta Avrupa'daki (Polonya, Çek), Slovenya, Avusturya, Macaristan, Beyaz Rusya ve Almanya'daki Aşkenaz Yahudilerinde yaygın olarak bulunan 44,45 ve Amerika Birleşik Devletleri ve Arjantin'de son zamanlarda BC ve OC'li İtalyan hastalarda "tekrarlayan bir germ hattı varyantı" olarak tanımlandı. 34c.514del varyantı daha önce Kuzey Sicilya'dan Palermo ve Messina'daki 8 meme kanseri hastasında tanımlandı.Katanya'daki bazı ailelerde c.3253dupA varyantını buldu.28 En temsili BRCA2 PV'leri c.428dup, c.5851_5854delAGTT ve intronik varyant c.8487+1G>A'dır; bunlar Palermo'da c.428dup, c.5851_5854delAGTT ile daha ayrıntılı olarak rapor edilmiştir28 Trapani ve Palermo bölgelerinde, c.5851_5854delAGTT PV ise kuzeybatı Sicilya'daki hanelerde gözlendi. 8487+1G>A varyantı Messina, Palermo ve Caltanissetta'daki deneklerde daha yaygındı.28 Rebbeck ve ark.daha önce Kolombiya'daki c.5851_5854delAGTT değişikliğini tanımlamıştı.37 Başka bir BRCA2 PV, c.631+1G>A, Sicilya'daki (Agrigento, Siracusa ve Ragusa) BC ve OC hastalarında bulunmuştur.28 Aynı hastada ayrı olduğunu varsaydığımız iki BRCA2 varyantının (BRCA2 c.631G>A ve c.7008-2A>T) bir arada var olduğunu gözlemledik. daha önce bu şekilde bildirildiği gibi cis modundadır.34,46 Bu BRCA2 üble mutasyonları gerçekten de İtalya bölgesinde sıklıkla gözlenir ve haberci RNA eklenmesini etkileyerek ve BRCA2 proteininin bozulmasına neden olarak erken durdurma kodonlarını ortaya çıkardığı bulunmuştur.47,48
Ayrıca protein alanlarının ve genlerinin varsayılan OCCR ve BCCR bölgelerindeki BRCA1 ve BRCA2 PV'lerini de haritaladık. Bu bölgeler Rebbeck ve diğerleri tarafından tarif edildi.sırasıyla yumurtalık ve meme kanseri gelişimi için risk alanlarıdır.49 Bununla birlikte, germ hattı varyantlarının konumu ile meme veya yumurtalık kanseri riski arasındaki ilişkiye ilişkin kanıtlar tartışmalı olmaya devam etmektedir.28,50-52 Bizim popülasyonumuzda, BRCA1 PV'leri ağırlıklı olarak BCCR bölgesinde yer alırken, BRCA2 PV'leri ağırlıklı olarak OCCR bölgesinde bulunuyordu. Ancak, varsayılan OCCR ve BCCR bölgeleri ve BC özellikleri arasında herhangi bir ilişki bulamadık. Bunun nedeni, BRCA1/2'li hastaların sınırlı sayıda olması olabilir. mutasyonlar. Bir protein alanı perspektifinden bakıldığında, BRCA1 PV'leri tüm protein boyunca dağılır ve BRCA2 değişiklikleri tercihen BRC tekrar alanında bulunur.
Son olarak, BC klinikopatolojik özelliklerini BRCA1/2 PV ile ilişkilendirdik. Sınırlı sayıda hasta dahil edildiğinden, yalnızca Ki-67 ile tümör derecesi arasında anlamlı bir ilişki bulduk. Ki-67'nin değerlendirilmesi ve yorumlanması biraz tartışmalı olsa da, yüksek proliferatif oranların artan hastalık nüksü riski ve azalan sağkalım ile ilişkili olduğu kesindir. Bugüne kadar, "yüksek" ve "düşük" Ki-67'yi ayırt etmek için kesme sınırı %20'dir. Ancak bu eşik, BR'miz için geçerli değildir Medyan Ki-67 değeri %25 olan CA1/2 mutasyonlu hasta popülasyonu. Yüksek Ki-67 oranlarındaki bu eğilim, az sayıda lüminal A tümörü bulunan lümen B ve TNBC kohortlarımızdaki yaygınlıkla açıklanabilir. Bununla birlikte, bazı kanıtlar, daha yüksek bir Ki-67 kesme noktasının (%25-30) hastaları prognozlarına göre daha iyi sınıflandırabileceğini öne sürüyor gibi görünmektedir.53,54 Analizimizin sonuçlarına göre anlamlı bir korelasyon ortaya çıkıyor. yüksek Ki-67 ve dereceler ile BRCA1 PV'nin varlığı arasında. Aslında, BRCA1 ile ilişkili tümörler TNBC için tipiktir ve daha agresif özellikler sergiler.16,17
Sonuç olarak, bu çalışma doğu Sicilya'daki bir BC kohortunda BRCA1/2'nin mutasyon durumu hakkında bir rapor sunar. Genel olarak bulgularımız, hem mutasyon prevalansı hem de BC'deki klinikopatolojik özellikler açısından önceden var olan kanıtlarla tutarlıdır. Genetik mutasyonlar nedeniyle artan kanser riski taşıyan deneklerin sayısındaki artış.
Hastaların tümör örneklerini araştırma amacıyla anonim olarak vermek için bilgilendirilmiş onam imzaladıklarını doğruladık. Tüm hastalar Helsinki Bildirgesi'ne göre yazılı bilgilendirilmiş onam imzaladılar. AOU Policlinico "G.Rodolico – S.Marco" politikasına göre, BRCA1/2 analizi klinik uygulamaya göre yapıldığından ve tüm hastalar yazılı bilgilendirilmiş onam verdiğinden bu çalışma etik incelemeden muaf tutuldu. Hastalar ayrıca verilerinin araştırma amaçları için kullanılmasına izin verir.
Etik Kurul tarafından talep edilen meme kanseri hastalarının bakımındaki yardımları için Prof. Paolo Vigneri'ye teşekkür ederiz.
Federica Martorana, Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer'den ücret bildiriyor. Diğer yazarlar bu çalışmayla ilgili herhangi bir çıkar çatışması beyan etmiyor.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN dünya çapında 185 ülkede 36 kanserin insidansını ve mortalitesini tahmin ediyor.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660