Nature.com نى زىيارەت قىلغىنىڭىزغا رەھمەت. سىز ئىشلىتىۋاتقان توركۆرگۈچ نۇسخىسىنىڭ CSS نى چەكلىك قوللىشى بار. ئەڭ ياخشى تەجرىبە ئۈچۈن ، يېڭىلانغان توركۆرگۈچنى ئىشلىتىشىڭىزنى تەۋسىيە قىلىمىز (ياكى Internet Explorer دىكى ماسلىشىش ھالىتىنى ئېتىۋېتىڭ). بۇ جەرياندا ، داۋاملىق قوللاشقا كاپالەتلىك قىلىش ئۈچۈن ، ئۇسلۇب ۋە JavaScript بولمىغان تور بېكەتنى كۆرسىتىمىز.
ئىنسانلارنىڭ ئۈچەي مورفوگېنىزىمى 3D ئېپىتېلىيە مىكرو قۇرۇلمىسى ۋە بوشلۇق تەشكىللەشنىڭ شىفىرلىق داچا ئالاھىدىلىكىنى بەرپا قىلىدۇ. بۇ ئۆزگىچە قۇرۇلما ئاساسىي شىفىردىكى غول ھۈجەيرە ئۇۋىسىنى تاشقى مىكروب ئانتىگېنلىرى ۋە ئۇلارنىڭ مېتابولىزلىرىدىن قوغداش ئارقىلىق ئۈچەيدىكى ھورمۇنىنى ساقلاپ قېلىشنى تەلەپ قىلىدۇ. دىققەت قىلىشقا ئەرزىيدىغىنى ، ئۆزەكتىكى ئورگانىك تەقلىد قىلىنغان ئۈچەي ئۈچەيدىكى ئېفتېلىيەنىڭ ئۆزلۈكىدىن 3D مورفوگېنېزنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن ، فىزىئولوگىيىلىك ئىقتىدار ۋە بىئولوگىيىلىك مېخانىزم كۈچەيتىلگەن. بۇ يەردە بىز كۆپىيىش كېلىشىمنامىسى بىلەن تەمىنلەيمىز. ئېفتېلىيە ھۈجەيرىسى ئادەتتىكى ئورۇنلاردا شۇنداقلا مىكرو سۇيۇقلۇق سۇپىسىدا ، 3D مورفوگېنېزنىڭ پەيدا بولۇشى ۋە كۆپ خىل تەسۋىر ھاسىل قىلىش ئۇسۇلى ئارقىلىق بەرپا قىلىنغان 3D ئېپىتېلىيەنىڭ ئالاھىدىلىكى. بىئولوگىيىلىك داۋالاش جەمئىيىتىگە تەسىر كۆرسىتىدۇ ، بىئولوگىيەلىك داۋالاش ، كلىنىكىلىق ۋە دورىگەرلىك قوللىنىشلىرى ئۈچۈن ۋىرۇستا 3D ئۈچەي ئېپىتېلىيە قەۋىتىنى قايتا ھاسىل قىلىش ئۇسۇلى بىلەن تەمىنلەيدۇ.
تەجرىبە شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، ئۈچەيدىكى ئېپىتېلىيە خاراكتېرلىك Caco-2 ھۈجەيرىسى ئۆزەكتە يېتىلدۈرۈلگەن 1،2،3،4،5 ياكى قوش قەۋەتلىك مىكرو سۇيۇقلۇق ئۈسكۈنىلەردە 6،7 ئاساسىي مېخانىزىمنى ئېنىق چۈشەنمەي تۇرۇپ ، ۋىرۇستا ئۆزلۈكىدىن 3D مورفوگېنېزنى باشتىن كەچۈرەلەيدۇ. 2 ۋە بىماردىن ھاسىل بولغان ئۈچەي ئورگانىكلىرى.ئېپىتېلىيە ھۈجەيرىسى دەلىللەندى. بۇ تەتقىقاتتا ، بىز ئۆزەكنىڭ ئىچكى قىسمىدىكى ئۆزەك ۋە ئۆزگەرتىلگەن مىكرو سۇيۇقلۇق ئۈسكۈنىلەردە «ئارىلاشما ئۆزەك» دەپ ئاتىلىدىغان كۈچلۈك Wnt قارشى تۇرغۇچىسى Dickkopf-1 (DKK-1) نىڭ ھۈجەيرە ئىشلەپچىقىرىشى ۋە قويۇقلۇقى تەقسىملىنىشىگە ئالاھىدە ئەھمىيەت بەردۇق. -1) ئۆزەكتىكى ئۈچەيگە مورفوگېنېزنى تورمۇزلايدۇ ياكى ئالدىن ياسالغان 3D ئېپىتېلىيە قەۋىتىنى قالايمىقانلاشتۇرىدۇ ، بۇ مەدەنىيەتتىكى ئانتىگونغا قارشى بېسىمنىڭ ۋىرۇسنىڭ ئۈچەيدىكى مورفوگېنېزغا مەسئۇل بولىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. شۇڭلاشقا ، ئېپىتېلىيە كۆرۈنمە يۈزىدىكى كۈچلۈك ئۆزەك پىلاستىنكىسىدىكى Wnt ئانتروگېننىڭ سەۋىيىسىنى يوقىتىش ياكى ئەڭ تۆۋەن چەكتە ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. تارقاقلاشتۇرۇش. ئىككى تەرەپلىك تاراتقۇلار (مەسىلەن ، Transwell قۇدۇقتىكى چوڭ ئاساسىي سۇ ئامبىرىغا قىستۇرۇلىدۇ).
بۇ كېلىشىمنامىدە ، بىز ئۆزەكنىڭ ئۈچەيدىكى مىكرو ئېلېمېنتلار ۋە Transwell قىستۇرغىلى بولىدىغان ئارىلاش ماتورلۇق ئۆزەكلەرنى (1-5 قەدەم) پولىدىمېتىلسىلوكان (PDMS) تاياقچە پەردىسىنىڭ مەدەنىيەت ئۈچەي ئېپىتېلىيە ھۈجەيرىسىگە (6A ، 7A ، 8 ، 9) ۋە ترانسۋېل قىستۇرمىسىدىكى 8B ، 9B ۋە 8-باسقۇچلۇق پولىئېستېر پەردىسىنى ياساشنىڭ تەپسىلىي ئۇسۇلى بىلەن تەمىنلەيمىز. ھۈجەيرە ۋە مولېكۇلا ئالاھىدىلىكلىرى كۆپ خىل تەسۋىر ھاسىل قىلىش ئۇسۇلىنى قوللىنىش ئارقىلىق توقۇلمىلارغا خاس گىستوگېنېز ۋە نەسەبكە تايىنىدىغان ھۈجەيرىلەرنى پەرقلەندۈرۈشنى كۆرسىتىدۇ. (بىز 11-24 قەدەم) 2D ئېفتېلىيە خاراكتېرلىك يەككە ئايلىنىشتىن 3D مورفوگېنىزىم ، بىز مەدەنىيەتنىڭ ئاساسىي بۆلۈمچىسىگە ۋاسىتە ئارقىلىق ئىككى خىل مەدەنىيەت شەكلىدىكى مورفوگېنغا قارشى تۇرغۇچىنى چىقىرىپ تاشلىدۇق. ئاخىرىدا ، بىز قايتا ھاسىل بولىدىغان 3D ئېپىتېلىيە قەۋىتىنىڭ پايدىسىنى ئىپادىلەپ بېرەلەيمىز ، بۇلار مورفوگېنغا تايىنىش خاراكتېرلىك ئېپىتېلىيە خاراكتېرلىك يۇقۇملىنىش ، يۇقۇملىنىش خاراكتېرلىك توسۇلۇش خاراكتېرلىك يۇقۇملىنىش ، كېسەللىك پەيدا قىلغۇچى كېسەللىكلەر ، مىكروبلار بىلەن يۇقۇملىنىش. luences.
بىزنىڭ كېلىشىمنامە ئاساسىي (مەسىلەن ، ئۈچەي شىللىق پەردىسىنىڭ بىئولوگىيىسى ، غول ھۈجەيرە بىئولوگىيىسى ۋە تەرەققىيات بىئولوگىيىسى) ۋە قوللىنىشچان تەتقىقات (مەسىلەن ، دەسلەپكى باسقۇچلۇق دورا تەكشۈرۈش ، كېسەللىك مودېلى ، توقۇلما ئىنژېنېرلىقى ۋە ئاشقازان-ئۈچەي كېسەللىكلىرى) قاتارلىق كەڭ پەن-تېخنىكا خادىملىرىغا پايدىلىق بولۇشى مۇمكىن. بىزنىڭ كېلىشىمنامىمىزنىڭ كۆپىيىشچانلىقى ۋە كۈچلۈكلىكى سەۋەبىدىن ، بىزنىڭ ئۈچەيدىكى ئېنىرگىيەنى تەتقىق قىلىدىغان ئۈچەيدىكى ھۈجەيرىلەرنى تەرەققىي قىلدۇرىمىز. .كېسەللىك پاتولوگىيەسى ۋە كېسەللىك قوزغاتقۇچىنىڭ تاماشىبىنلىرىمۇ پايدىلىق. ئۆزەكتىكى ئۈچەيدىكى مىكرو فىزىئولوگىيە سىستېمىسىنى ئىشلىتىش ئۇزۇن ئۆپكە ئورتاق مەدەنىيەت 10 ۋە ئۇنىڭدىن كېيىن ساھىبجاماللارنىڭ مۇداپىئەسى ، ئىممۇنىتېت ئىنكاسى ۋە كېسەللىك قوزغاتقۇچىغا مۇناسىۋەتلىك زەخىملىنىشنى ئاشقازان-ئۈچەي يولى (GI) يولى 11 گە باھالاپ بېرەلەيدۇ. بىمارنىڭ 3D ئۈچەيدىكى ئېپىتېلىيە قەۋىتى ، بۇ كېسەللىكلەر قەبىھ قان ئازلىق ، شىفىرنى قىسقارتىش ، شىللىق پەردىنىڭ بۇزۇلۇشى ياكى ئېپىتېلىيە توسىقىنىڭ توسالغۇغا ئۇچرىشى قاتارلىقلارنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.توقۇلمىلارغا خاس ئىممۇنىتېت ھۈجەيرىسى ، 5.
3D ئېپىتېلىيە مىكرو قۇرۇلمىسىنى بۆلۈش جەريانىسىز مۇقىملاشتۇرغىلى ۋە تەسۋىرلىگىلى بولىدىغان بولغاچقا ، بوشلۇقتىكى ترانسكرىپومىكا ۋە يۇقىرى ئېنىقلىقتىكى ياكى دەرىجىدىن تاشقىرى ئېنىقلىقتىكى تەسۋىر ھاسىل قىلىدىغان كۆرۈرمەنلەر بىزنىڭ ئېپىتېلىيە ئورۇنلىرىدىكى گېن ۋە ئاقسىلنىڭ بوشلۇقتىكى ھەرىكەتچان خەرىتىسىنى سىزىشىمىزغا قىزىقىشى مۇمكىن.تېخنىكىغا قىزىقىدۇ. مىكروب ياكى ئىممۇنىتېتنىڭ غىدىقلىشىغا جاۋاب قايتۇرۇش. ئۇنىڭدىن باشقا ، ئۇزۇنغا سوزۇلغان ساھىبجامال مىكروبوموز كېسىشمە يولى 10 ، 14 ، ئۈچەيدىكى ئۈچەي شىللىق پەردىسى قەۋىتىدە ھەر خىل مىكروب تۈرلىرى ، مىكروبلار توپى ياكى چوڭ تەرەت مىكروبلىرىنى ئۆز-ئارا يېتىشتۈرۈش ئارقىلىق 3D ئۈچەي شىللىق پەردىسى قەۋىتىدە قۇرۇلغىلى بولىدۇ.بۇ خىل ئۇسۇل شىللىق پەردە ئىممۇنىتولوگىيەسى ، ئاشقازان-ئۈچەي كېسەللىكلىرى ، ئىنسانلارنىڭ مىكروبلىرى ، مەدەنىيەت ۋە كلىنىكىلىق مىكروبولوگىيە تەتقىقاتى بىلەن شۇغۇللىنىدىغان تاماشىبىنلارنى ئالاھىدە جەلپ قىلىدۇ. تەجرىبىخانىدا ئىلگىرى يېتىلمىگەن ئۈچەي مىكروبوتا يېتىشتۈرۈشنى مەقسەت قىلغان. ئەگەر بىزنىڭ ۋىرۇس مورفوگېنېز كېلىشىمنامىمىزنى كېڭەيتكىلى بولىدىغان مەدەنىيەت فورماتىغا ماسلاشتۇرغىلى بولىدىغان بولسا ، ئۇ ئىككى خىل بىرىكمە ماددىلارنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. يىمەكلىك ياكى يۇقىرى مەھسۇلاتنى تەكشۈرۈش ياكى يېمەكلىك سانائىتى ئۈچۈن دەلىللەش سۇپىسى. پرىنسىپنىڭ ئىسپاتى بولۇش سۈپىتىمىز بىلەن ، بىز يېقىندا 24 قۇدۇق تاختىسىنىڭ فورماتىغا كېڭەيتكىلى بولىدىغان كۆپ ئىقتىدارلىق يۇقىرى ئۈنۈملۈك مورفوگېنېز سىستېمىسىنىڭ مۇمكىنلىكىنى نامايان قىلدۇق. بۇنىڭدىن باشقا ، ئۆزەكتە كۆپ خىل ئۆزەك مەھسۇلاتلىرى تاۋارلاشتۇرۇلدى ، ھۆكۈمەت ئورگانلىرىنىڭ تەتقىقاتى بىلەن شۇغۇللانغىلى بولىدۇ. زەھەرلىك چېكىملىك ​​ياكى بىئولوگىيىلىك داۋالاشنى سىناشتا ۋىرۇسلۇق ئۈچەيدىكى مورفوگېنېزنىڭ ئىچىدە ، زەھەرلىك چېكىملىك ​​كاندىداتلىرىنىڭ سۈمۈرۈلۈشى ۋە توشۇلۇشى 3D ئۈچەينىڭ ۋاكالىتەن ئىشلەيدىغان ۋاستىسى ئارقىلىق ياكى ئۆزەك ياكى سودا ئورگانلىرىنىڭ ئۆزەك مودېلى ئارقىلىق ئۈچەينىڭ مورفوگېنېزلىنىش جەريانىنىڭ كۆپىيىشىنى باھالايدۇ.
ئۈچەيدىكى ئېفتېلىيە خاراكتېرلىك مورفوگېنېزنى تەتقىق قىلىش ئۈچۈن چەكلىك مىقداردىكى ئىنسانلارغا مۇناسىۋەتلىك تەجرىبە مودېللىرى ئىشلىتىلگەن ، بۇنىڭ ئاساسلىق سەۋەبى ۋىرۇستا 3D مورفوگېنېز پەيدا قىلىدىغان ئەمەلىي كېلىشىمنامىنىڭ كەملىكىدىندۇر. ئەمەلىيەتتە ، ھازىرقى ئۈچەي مورفوگېنېزىغا مۇناسىۋەتلىك نۇرغۇن بىلىملەر ھايۋانات تەتقىقاتىنى ئاساس قىلىدۇ (مەسىلەن ، zebrafish20 ، چاشقان 21 ياكى توخۇ 22). قانداقلا بولمىسۇن ، ئۇلار ئەمگەك كۈچى ۋە تەننەرخنى تۆۋەنلىتىدۇ. مودېللارنىڭ كۆپ تەرەپلىمىلىك كېڭەيتىش ئۇسۇلىدا سىناق قىلىنىش ئىقتىدارىمۇ ئىنتايىن چەكلىك. شۇڭلاشقا ، بىزنىڭ vivo ھايۋانات مودېللىرىدىكى ۋىرۇسنىڭ سىرتقى شەكلىدىكى 3D توقۇلما قۇرۇلمىسىنى ئەسلىگە كەلتۈرۈش توغرىسىدىكى كېلىشىمنامە شۇنداقلا باشقا ئەنئەنىۋى تۇراقلىق 2D ھۈجەيرە مەدەنىيەت مودېللىرى. ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك ، 3D ئېپىتېلىيە قۇرۇلمىسىنى ئىشلىتىپ ، ئوخشىمىغان ھۈجەيرىلەرنىڭ بوشلۇقتىكى يەرلىكلەشتۈرۈلۈشىنى تەكشۈرەلەيمىز. ساھىبجامال ئامىللارغا قارىتا ئوولوگىيىلىك تەدرىجىي تەرەققىيات (مەسىلەن ، ئىچكى شىلىمشىق پەردىنىڭ قەۋىتى ، IgA نىڭ ئاجرىلىپ چىقىشى ۋە مىكروبقا قارشى پېپتىدلارنىڭ ئاجرىلىپ چىقىشى). ئۇنىڭدىن باشقا ، 3D ئېپىتېلىيە مورفولوگىيىسى بىزگە ئۈچەيدىكى مىكروبوتانىڭ ئۆز مەھەللىسىنى قانداق تەشكىل قىلىدىغانلىقىنى ۋە ماس قەدەملىك ھالدا مىكروب مېتابولىزىمىنى ھاسىل قىلىدىغانلىقىنى چۈشىنىپ بېرەلەيدۇ.
بىزنىڭ 3D ئۈچەي ئېپىتېلىيە قۇرۇلمىسىنى بارلىققا كەلتۈرۈش ئۇسۇلىمىزدىن باشقا ، يەنە بىر قانچە خىل ۋىرۇس ئۇسۇلى بار. ئۈچەي ئورگانىك مەدەنىيىتى ئالاھىدە مورفوگېن شارائىتىدا ئۈچەي غول ھۈجەيرىسىنى يېتىشتۈرۈشنى ئاساس قىلغان زامانىۋى توقۇلما ئىنژېنېرلىق تېخنىكىسىدۇر. ial ھۈجەيرىلىرى ياكى تاشقى ئانتىگېنلار چەكلىك.مىكرو ئوكۇل ئارقىلىق ئورگانىك نۇرغا ئېرىشىشنى ياخشىلىغىلى بولىدۇ ، 26،27 ، ئەمما بۇ ئۇسۇل تاجاۋۇزچىلىق ۋە ئەمگەكنى كۆپ تەلەپ قىلىدۇ ھەمدە مەخسۇس بىلىم تەلەپ قىلىدۇ.
باشقا بىر قانچە تەتقىقات گۇرۇپپىلىرى قوللانغان باشقا ئۇسۇللار ئالدىن ياسالغان 3D ھىدروگېل تاياقچىسىدىن پايدىلىنىپ ، گېلى يۈزىدىكى يەككە ئۈچەي ھۈجەيرىسىنى يېتىشتۈرۈش ئارقىلىق ئۈچەينىڭ ئېپىتېلىيە قۇرۇلمىسىنى تەقلىد قىلىدۇ. 3D بېسىلغان ، مىكرو ئورالغان ياكى تاش مەتبەئەدىن ياسالغان قېلىپنى ئىشلىتىپ ھىدروگېل تاياقچە ھاسىل قىلىدۇ. غول ھۈجەيرىگە غول ھۈجەيرىلەرنى كىرگۈزۈش ئارقىلىق غولى. قانداقلا بولۇشىدىن قەتئىينەزەر ، ئالدىن ياسالغان قاپارتمىلارنىڭ خاراكتېرى ئۆزلۈكىدىن مورفوگېنتىك جەرياننىڭ ئۆزىنى كۆرسىتىشىنىڭ ئالدىنى ئالالايدۇ. بۇ مودېللار يەنە ھەرىكەتچان نۇر ياكى ئارىلىق ئېقىمى بىلەن تەمىنلىمەيدۇ ، سۇيۇقلۇق قىرقىش بېسىمى كەمچىل ، ئۈچەي ھۈجەيرىلىرى مورفوگېنېزدىن پايدىلىنىپ فىزىئولوگىيىلىك فۇنكسىيەگە ئېرىشىدۇ. چاشقىنەك تېخنىكىسى. چاشقاننىڭ ئۈچەيدىكى ئورگانىزملىرى ئورالغان شەكىلگە ئەگىشىپ ئۈچەي نەيچىسى قۇرۇلمىسىنى ھاسىل قىلىدۇ ، ئۈچەيدىكى سۇيۇقلۇق ئېقىمىنى مىكرو سۇيۇقلۇق مودۇلى ئارقىلىق قايتا-قايتا تەكرارلىغىلى بولىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن ، بۇ مودېل ئۆزلۈكىدىن مورفوگېنتىك جەرياننى كۆرسەتمەيدۇ ياكى ئۈچەينىڭ مېخانىك ھەرىكىتىنىمۇ ئۆز ئىچىگە ئالمايدۇ. سۇيۇقلۇق ئېقىمى ۋە مېخانىكىلىق ئۆزگىرىش. بۇنىڭدىن باشقا ، مودېلنىڭ مەشغۇلاتچانلىقى چەكلىك بولۇشى مۇمكىن ، بولۇپمۇ بىيولوگىيەلىك بېسىش جەريانى تاماملانغاندىن كېيىن ، تەجرىبە شارائىتى ياكى ھۈجەيرە بىلەن ھۈجەيرىلەرنىڭ ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىشىنى توسىدۇ. ئەكسىچە ، بىزنىڭ ئوتتۇرىغا قويغان كېلىشىمنامىمىز ئۆزلۈكىدىن ئۈچەي مورفوگېنىزىمى ، فىزىئولوگىيىلىك مۇناسىۋەتلىك قىرقىش بېسىمى ، بىئولوگىيىلىك مېخانىزم بىلەن تەمىنلەيدۇ. گېن كېلىشىمنامىسى ھازىرقى ئۇسۇللارنىڭ خىرىسىنى يېڭىش ئۈچۈن قوشۇمچە ئۇسۇل بىلەن تەمىنلىشى مۇمكىن.
بىزنىڭ كېلىشىمنامىمىز پۈتۈنلەي 3D ئېپىتېلىيە خاراكتېرلىك مورفوگېنېزغا مەركەزلەشكەن بولۇپ ، پەقەت مەدەنىيەتتىكى ئېپىتېلىيە ھۈجەيرىسىلا بار ، مېزېنزىم ھۈجەيرىسى ، بالىياتقۇ ئىچكى ھۈجەيرىسى ۋە ئىممۇنىتېت ھۈجەيرىسى قاتارلىق ئەتراپتىكى باشقا ھۈجەيرىلەرمۇ يوق. ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك ، كېلىشىمنامىمىزنىڭ يادروسى ئېفتېلىيە خاراكتېرلىك مورفوگېنېزنى كىرگۈزۈش بولۇپ ، بىز ئۆز-ئارا ئارىلاشما ئۆزەكنىڭ ئاساسى تەرىپىدىكى يوشۇرۇن ئۆزەكنى ئاجرىتىپ چىقىرىمىز. دولقۇنسىمان 3D ئېپىتېلىيە قەۋىتىنى يېدى ، ئېپىتېلىيە-مېزېنزىمنىڭ ئۆز-ئارا تەسىر قىلىشى قاتارلىق قوشۇمچە بىئولوگىيىلىك مۇرەككەپ ماددىلار 33،34 ، تاشقى ھۈجەيرە ماترىسسا (ECM) چۆكمىسى 35 ۋە بىزنىڭ مودېلىمىزدا ، ئاساسىي شىفىردىكى غول ھۈجەيرە ئۇۋىسىنى يەتكۈزىدىغان شىفىرلىق داچا ئالاھىدىلىكى داۋاملىق ئويلىنىشقا توغرا كېلىدۇ. بىزنىڭ مودېلىمىزدىكى ئېنزىم ھۈجەيرىلىرى مورفوگېنتىك جەريان ۋە ھۈجەيرىلەرنىڭ باغلىنىش ئۈنۈمىنى يۇقىرى كۆتۈردى. ئىچكى ئاجراتما قەۋىتى (يەنى قىل قان تومۇر ياكى لىمفا ھۈجەيرىسى) ئۈچەيدىكى مىكرو مۇھىتتا مولېكۇلا تىرانسپورتى 39 ۋە ئىممۇنىتېت ھۈجەيرىسىنى قوبۇل قىلىش 40 نى تەڭشەشتە موھىم رول ئوينايدۇ. ئېنىقلىق. بىماردىن ھاسىل بولغان ئىممۇنىتېت ھۈجەيرىسىمۇ تۇغما ئىممۇنىتېت ئىنكاسى ، ئانتىگېننىڭ كۆرسىتىلىشى ، تۇغما ماسلىشىشچان ئىممۇنىتېت ئېغىزى ۋە ئۈچەي كېسەللىكلىرىگە تەقلىد قىلىنغان توقۇلمىلارغا خاس ئىممۇنىتېتنى كۆرسىتىشتە ئىنتايىن مۇھىم.
ئارىلاش ماتورلۇق ئۆزەكنى ئىشلىتىش ئۆزەكنىڭ ئۈچىيىگە قارىغاندا تېخىمۇ ئاددىي ، چۈنكى ئۈسكۈنىنىڭ ئورۇنلاشتۇرۇلۇشى تېخىمۇ ئاددىي ۋە Transwell قىستۇرمىسىنى ئىشلىتىش ئۈچەي ئېپىتېلىيىسىنىڭ كېڭىيىشچان مەدەنىيىتىگە شارائىت ھازىرلاپ بېرىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن ، پولىئېستېر پەردىسى بار سودا خاراكتېرلىك Transwell قىستۇرمىسى ئېلاستىك ئەمەس ھەمدە ئۇ ئۆز ئارا ماس كېلىدىغان تۇراقلىق ھالەتتىكى تۇراقلىق ھالەتتىكى تۇراقلىق ھالەتتىكى تۇراقلىق ھالەتتىكى تۇراقلىق ھالەتتىكى تۇراقلىق ھالەتتىكى تۇراقلىق ھالەتتىكى تۇراقلىق ھالەتتىكى تۇراقلىق ھالەتكە چۈشۈپ قالدى. ical بۆلەك ئارىلاشما ئۆزەكتە ئۇزۇن مۇددەتلىك باكتېرىيە ئورتاق مەدەنىيەتنى ناھايىتى ئاز قوزغىتىدۇ. گەرچە بىز ئارىلاش ماتورلۇق ئۆزەكنى ئىشلەتكەندە Transwell قىستۇرمىسىدا 3D مورفوگېنېزنى كۈچلۈك قوزغىتالايمىز ، ئەمما فىزىئولوگىيىلىك مۇناسىۋەتلىك بىئولوگىيىلىك مېخانىزم ۋە ئاپپاق سۇيۇقلۇق ئېقىمى كەمچىل بولۇشى مۇمكىن.
ئىنسانلارنىڭ ئۆزەك ۋە ئۆزەكنىڭ ئۆزەك مەدەنىيىتىدىكى شىفىرلىق داچا ئوقىنىڭ تولۇق قۇرۇلۇشى تولۇق قۇرۇلمىدى. مورفوگېنېز ئېفتېلىيە خاراكتېرلىك يەككە ئايلىنىشتىن باشلانغان بولغاچقا ، 3D مىكرو قۇرۇلما vivo دىكى شىفىرلار بىلەن مورفولوگىيەلىك ئوخشاشلىقنى تەمىنلىمەيدۇ. گەرچە بىز مىكرو شىفىرلىق رايونلارنىڭ كۆپىيىشىنى كەلتۈرۈپ چىقارغان بولساقمۇ. ئۆزەك ئۈستىدىكى ئۈستۈنكى قاناللار مىكرو ئېنىرگىيىلىك ئېپىتېلىيەنىڭ ئېگىزلىكىنى ئاشۇرۇۋېتىدۇ ، ئەڭ چوڭ ئېگىزلىكى يەنىلا ~ 300 ~ 400 مىللىمېتىرغىچە.
تەسۋىر ھاسىل قىلىش نۇقتىسىدىن ئېيتقاندا ، 3D مىكرو قۇرۇلمىلارنىڭ دەرىجىدىن تاشقىرى ئېنىقلىقتىكى تەسۋىر ھاسىل قىلىنىشى ئۆزەكتىكى ئۈچەي بىلەنلا چەكلىنىشى مۇمكىن ، چۈنكى ئوبيېكتىپ لىنزادىن ئېپىتېلىيە قەۋىتىگىچە بولغان خىزمەت ئارىلىقى بىر نەچچە مىللىمېتىر تەرتىپ بويىچە بولىدۇ. بۇ مەسىلىنى يېڭىش ئۈچۈن ، يىراقتىكى نىشان تەلەپ قىلىنىشى مۇمكىن. بۇنىڭدىن باشقا ، ھەر بىر قەۋەتنىڭ ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىشى بىلەن PDMS.For نىڭ يېپىشقاقلىقى سەۋەبىدىن ، ھەر بىر قەۋەتنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. قەۋەت ، ئۈستۈنكى قەۋەتنى ئېچىش ياكى ئېلىۋېتىش ئېپىتېلىيە قەۋىتىنىڭ يەر يۈزى قۇرۇلمىسىنى تەكشۈرۈش ئىنتايىن قىيىن. مەسىلەن ، سىكانېرلاش ئېلېكترونلۇق مىكروسكوپ (SEM) ئارقىلىق.
PDMS نىڭ گىدروفوبىكلىقى گىدروفوبىكلىق كىچىك مولېكۇلانى بىر تەرەپ قىلىدىغان مىكرو فلوئىدنى ئاساس قىلغان تەتقىقاتتا چەكلەش ئامىلى بولۇپ كەلدى ، چۈنكى PDMS بۇ خىل گىدروپوبىك مولېكۇلانى ئالاھىدە سۈمۈرۈۋالالايدۇ. PDMS غا مۇناسىۋەتلىك ماددىلار باشقا پولىمېرلىق ماتېرىياللار بىلەن ئويلىنىشى مۇمكىن.
ئاخىرىدا ، بىزنىڭ ئۇسۇلىمىز يۇقىرى ئۈنۈملۈك تەكشۈرۈش ياكى «بىر ئۆلچەمگە ماس كېلىدىغان» ئابونتلارغا قۇلايلىق تەجرىبە سۇپىسى بىلەن تەمىنلەش جەھەتتە ياخشى سۈپەتلەنمىدى. ھازىرقى كېلىشىمدە ھەر بىر مىكرو ئېلېكتر ئۈسكۈنىسىدە ئوكۇل پومپىسى تەلەپ قىلىنىدۇ ، ئۇ CO2 ئىنكۇباتوردا بوشلۇق ئىگىلەيدۇ ۋە چوڭ كۆلەملىك سىناقلارنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ. media).
ئىنسانلارنىڭ ئۈچەيدىكى ئېپىتېلىيەنىڭ 3D مورفوگېنىزىمنى قوزغاش ئۈچۈن ، بىز ئىككى خىل پاراللېل مىكرو قانال ۋە ئېلاستىك تۆشۈك پەردىسىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان مىكرو سۇيۇقلۇق ئۆزەك ئۈچەي ئۈسكۈنىسىنى ئىشلىتىپ ، تومۇر قان تومۇر كۆرۈنمە يۈزى ھاسىل قىلدۇق. ئېقىننى يۆنىلىشلىك كونترول قىلىش ئارقىلىق ئاساسىي بۆلەكتىن مورفوگېنغا قارشى تۇرغۇچىنى يوقىتىش ئارقىلىق كۆرسىتىلىدۇ. پۈتكۈل تەجرىبە تەرتىپى (1-رەسىم) بەش قىسىمدىن تەركىب تاپىدۇ:3-5 ساندۇقلار ، كونترول قىلىدۇ.
بىز ئوخشىمىغان ئىككى خىل مەدەنىيەت سۇپىسىنى قوللاندۇق: بىۋاسىتە قانال ياكى ئۆزەكسىز ئۇلانغان قاناللار بىلەن ئۈچەيدە ئۆزەك ياكى مىكرو ئېلېمېنتلىق ئۈسكۈنىگە Transwell (TW) قىستۇرۇلغان ئارىلاشما ئۆزەك ، 1-ساندۇقتا تەسۋىرلەنگەندەك ياسالغان ۋە 1-5-قەدەم. كېلىشىمنامىدە. ساھىبجامال مىكرو جانلىقلار ئېكولوگىيە سىستېمىسى ۋە كېسەللىك مودېللىرى. agglutinin. «ساھىبجامال-مىكروب ئورتاق مەدەنىيىتى» دىكى بىر-بىرىگە قاپلانغان ئىككى پارچە رەسىمدە ئۆزەكتىكى ئۈچەيدىكى ۋەكىل ساھىبجامال مىكروبلار ئورتاق مەدەنىيىتى كۆرسىتىلدى. سول تەرەپتە E. coli نىڭ يېشىل فلۇئورېسسېنسىيە ئاقسىلى (GFP) بىلەن مىكرو ئورگانىزملىق 3D Caco-2 ئېپىتېلىيە ھۈجەيرىسىنىڭ يەرلىكلەشتۈرۈلگەنلىكى كۆرسىتىلدى. ئوڭ تەرەپتە GFP E. ئاتىن (قىزىل) ۋە يادرو (كۆك). كېسەللىك مودېلى باكتېرىيە ئانتىگېنلىرى (مەسىلەن ، لىپوپولىساخارىد ، LPS) ۋە ئىممۇنىتېت ھۈجەيرىسى (مەسىلەن ، PBMC) بىلەن فىزىئولوگىيىلىك خىرىس ئاستىدا ئۈچەي ياللۇغلىنىش ئۆزەكلىرىدىكى ساغلام ۋە ئېقىپ كەتكەن ئۈچەينى تەسۋىرلەيدۇ.يېشىل رەڭ.ئوكسفورد ئۇنىۋېرسىتېتى نەشرىياتىRef.5 نىڭ رۇخسىتى بىلەن كۆپەيتىلدى.NAS;Ref.3 نىڭ رۇخسىتى بىلەن ماسلاشتۇرۇلغان «ساھىبجامال مىكروب ئورتاق مەدەنىيىتى».NAS;پايدىلىنىشنىڭ رۇخسىتى بىلەن ماسلاشتۇرۇلغان «كېسەللىك مودېلى» .5.NAS.
ئۈچەيدىكى ئۆزەك ۋە ئارىلاش ماتورلۇق ئۆزەك PDMS كۆپەيتىلگەن نۇسخىسى ئارقىلىق ياسالغان بولۇپ ، كرېمنىي قېلىپتىن يۇمشاق تاش مەتبەئە ئارقىلىق 444 دىن ياسالغان ۋە SU-8 بىلەن نەقىشلەنگەن. ھەر بىر ئۆزەكتىكى مىكرو قاناللارنىڭ لايىھىسى قىرقىش بېسىمى ۋە گىدرودىنامىكىلىق بېسىم قاتارلىق ھىدرو دىنامىكنى ئويلىشىش ئارقىلىق بەلگىلىنىدۇ ، بۇ ئۆزەكنىڭ ئۆز-ئارا ماسلاشتۇرۇلغان ئىككى خىل ئۆز-ئارا ماسلاشتۇرۇلغان. ئۈچەيدىكى ئۆزەك (كېڭەيتىلگەن سانلىق مەلۇمات رەسىم 1b) بىر جۈپ ئەگمە مىكرو قانالنى ئۆز ئىچىگە ئالغان بولۇپ ، سۇيۇقلۇقنىڭ تۇرۇش ۋاقتىنىڭ ئېشىشىنى ، سىزىقسىز ئېقىش ئەندىزىسىنى ۋە مەدەنىيەت ھۈجەيرىلىرىنىڭ كۆپ مەنبەلىك شەكلى ئۆزگىرىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ (رەسىم 2a - f) 12. تېخىمۇ مۇرەككەپ ئۈچەي بىئولوگىيىلىك مېخانىزىمىنى قايتا ھاسىل قىلىشقا توغرا كەلگەندە ، مۇرەككەپ ئۈچەيدىكى ئۆزەكنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. مەدەنىيەتنىڭ ھۈجەيرە تىپىنىڭ قانداق بولۇشىدىن قەتئىينەزەر ، ئەسلىدىكى Gut-Chip غا سېلىشتۇرغاندا ئېپىتېلىيە خاراكتېرلىك ئۆسۈش. شۇڭلاشقا ، 3D مورفوگېنېز پەيدا قىلىش ئۈچۈن ، ئۆزەك ۋە مۇرەككەپ ئۆزەك ئۈچەي لايىھىسى ئۆز-ئارا ئالمىشىدۇ.2) PDMS كۆپەيتىلگەن ئەينەك ۋە ئەينەكنىڭ يۈزىنى ئوكسىگېن پلازمىسى ياكى تاجىسىمان داۋالاش ئارقىلىق داۋالاش ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلىدۇ. كرېمنىي نەيچىسىگە ئۇلانغان مىكرو تىپتىكى ئۈسكۈنىنى مىكروبسىزلاندۇرغاندىن كېيىن ، ئۈسكۈنىنى تەڭشەش ئۈچەي ئېپىتېلىيىسىنىڭ 3D مورفوگېنېزسىنى ئىشلەشكە تەييارلاندى (2g رەسىم).
a, SU-8 نەقىشلىك كرېمنىي قېپىدىن PDMS زاپچاسلىرىنىڭ تەييارلىنىشىنىڭ سىخېمالىق تەسۋىرى. ئېنىقلانمىغان PDMS ئېرىتمىسى كرېمنىي قېلىپقا (سولغا) قۇيۇلدى ، 60 سېلسىيە گرادۇس (ئوتتۇرىدا) ساقىيىپ ، تۆۋەنگە چۈشۈرۈلدى. ئوڭدىن ياسالغان. يۇقىرى ۋە تۆۋەن PDMS زاپچاسلىرى ۋە قۇراشتۇرۇلغان ئۆزەك ئۈچەي ئۈسكۈنىسى. بىر تۇرۇبا ۋە شىپىرىس ياپقۇچ ئۈستىگە قويۇلدى. ئۆزەك ئۈسكۈنىسى 150 مىللىمېتىرلىق پېترى تامىقىنىڭ قاپىقىغا قويۇلۇپ پىششىقلاپ ئىشلەندى. بۇ باغلانما كرېمنىي نەيچىسىنى تاقاشقا ئىشلىتىلىدۇ. Transwell قىستۇرمىسىغا ئورنىتىلغان كاتەكچە قەۋىتىنىڭ ئاستىدا. كىچىك بالداق ، 1 cm.h پايدىلىنىش رۇخسىتى بىلەن قايتا بېسىلدى .4.Elsevier.
بۇ كېلىشىمدە ، Caco-2 ھۈجەيرە لىنىيىسى ۋە ئۈچەيدىكى ئورگانىزملار ئېپىتېلىيە مەنبەسى سۈپىتىدە ئىشلىتىلگەن (3a رەسىم). ھەر ئىككى خىل ھۈجەيرە مۇستەقىل يېتىلدۈرۈلگەن (2-ساندۇق ۋە 5-ساندۇق) ۋە ئۆزەك ئۈچەي ياكى Transwell قىستۇرمىسىنىڭ ECM بىلەن قاپلانغان مىكرو قاناللىرىنى تېرىشقا ئىشلىتىلىدۇ. ترىپسىنلاشتۇرۇش سۇيۇقلۇقى ئارقىلىق ئاتېد ھۈجەيرىسىنىڭ ئاسما جازىسى (2-قۇتا). ئۈچەيدىكى بىئوپوسسىيە ياكى ئوپېراتسىيىلىك ئوپېراتسىيەلەردىن كەلگەن ئىنسانلارنىڭ ئۈچەيدىكى ئورگانىك ماددىلىرى 24 قۇدۇق تەخسىسىدىكى ماترىگېل تاياقچە گۈمبەزدە يېتىلدۈرۈلۈپ ، قۇرۇلما مىكرو مۇھىتنى قوللايدۇ. يىغىۋېلىنىپ يەككە ھۈجەيرىگە بۆلۈنۈپ ئۆزەك ياكى ئۇرۇققا تىرانسۋېل قىستۇرۇلىدۇ. .
a ، ئۈچەي ئۆزىكىدە ئۈچەي مورفوگېنېزىنىڭ پەيدا بولۇشى ئۈچۈن خىزمەت ئېقىمى. كاكو -2 ئىنسانلارنىڭ ئۈچەيدىكى ئېپىتېلىيە ۋە ئۈچەيدىكى ئورگانىك ماددىلار بۇ كېلىشىمنامىدە 3D مورفوگېنېزنى كۆرسىتىش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ. يەككە ئېپىتېلىيە ھۈجەيرىسى تەييارلانغان ئۈچەيدىكى ئۆزەك ئۈسكۈنىسىگە ئۇرۇق سېلىنىدۇ (ئۆزەك تەييارلىنىدۇ). دەسلەپكى 2 كۈن (ئېقىن ، AP ، D0-D2). ئاساسىي تەرەپ (BL) ئېقىمى دەۋرىيلىك سوزۇلۇش ھەرىكىتى (سوزۇلۇش ، ئېقىش ، AP ۋە BL) بىلەن بىللە باشلىنىدۇ ، تولۇق 2D يەككە ئايلىنىش شەكىللەنگەندە. ئۈچەيدىكى 3D مورفوگېنېز 5 كۈنلۈك مىكرو فلوئىد مەدەنىيىتى (مورفوگېنېز ، D5). ئۈچەيدىكى مورفوگېنېزنىڭ ماس كاسسىسىنى تەسۋىرلەيدىغان سىخېما دىئاگراممىمىز. سىخېماتىكى سىزىلغان ئوقيا سۇيۇقلۇق ئېقىمىنىڭ يۆنىلىشىگە ۋەكىللىك قىلىدۇ. B ، SEM رەسىمى ئورنىتىلغان 3D Caco-2 ئېپىتېلىيىسىنىڭ يەر يۈزى توپولوگىيەسىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (سولدا. (ZO-1 ، قىزىل) ۋە ئۈزلۈكسىز چوتكىلاش چېگرا پەردىسىدە F-actin (يېشىل) ۋە يادرو (كۆك) ئىممۇنىتېت كۈچىنىڭ ئىممۇنىتېت كۈچى ھۈجەيرىسىنىڭ ئۈچەي ئۆزىكىدىكى ئېپىتېلىيە ھۈجەيرىسىنىڭ ئۆز ئارا تەسۋىرلىنىشىدە كۆرسىتىلىدۇ. ئوتتۇرا سىخېمىنى كۆرسىتىپ بېرىدىغان ئوقلار فوكۇسلانغان ئايروپىلاننىڭ ھەر بىر كۆز قارىچۇقىنىڭ ئورنىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. تەمىنلەنگەن رەسىمنىڭ كۆرسىتىلىشى.ماگېنتتا) ، كۆزەينەك ھۈجەيرىسى (MUC2 ؛ يېشىل) ، F- ئاتىن (كۈلرەڭ) ۋە يادرو (سىئەن) ئۈچ كۈن ئۆزەك ئۆزەكلىرىدە ئۆسكەن ئايرىم-ئايرىم ھالدا (سولدا) ۋە 13 كۈنلۈك (ئوتتۇرا) ئورگانىك ئېپىتېلىيە قەۋىتىدە. مەدەنىيەتنىڭ 13-كۈنى بوياشنى (ئوڭدىن) سوراڭ. باشقىلىرى دېيىلمىگەن بولسا كىچىك بالداق 50 مىللىمېتىر. b پايدىلىنىش رۇخسىتى بىلەن قايتا بېسىلدى .2.ئوكسفورد ئۇنىۋېرسىتېتى نەشرىياتىc پايدىلىنىش ماتېرىيالىنىڭ رۇخسىتى بىلەن ماسلاشتۇرۇلغان .2.ئوكسفورد ئۇنىۋېرسىتېتى نەشرىياتىe ۋە f پايدىلىنىش ئىجازەتنامىسى بىلەن ماسلاشتۇرۇلغان .12 ئىجادىي ئورتاق ئىجازەتنامە CC BY 4.0.
ئۆزەكتىكى ئۈچەيدە ، مۇۋەپپەقىيەتلىك ECM سىرلاش ئۈچۈن PDMS تۆشۈك پەردىسىنىڭ گىدروفوبىك يۈزىنى ئۆزگەرتىش كېرەك. بۇ كېلىشىمنامىدە ، بىز PDMS پەردىسىنىڭ گىدروپوبىكلىقىنى ئۆزگەرتىش ئۈچۈن ئوخشىمىغان ئىككى خىل ئۇسۇلنى قوللىنىمىز. ئورگانىك ئېپىتېلىيە مەدەنىيىتى خىمىيىلىك ئاساس قىلىنغان يەر يۈزى فۇنكسىيەسىنى تەلەپ قىلىپ ، PDMS مىكرو قانالغا پولىئېتىلېنېمىن (PEI) ۋە گلۇتارالدېھىدنى تەرتىپلىك ئىشلىتىش ئارقىلىق ECM ئاقسىلىنىڭ ئۈنۈملۈك چۆكۈپ كېتىشىنى قولغا كەلتۈرۈشنى تەلەپ قىلىدۇ. يەر يۈزى ئۆزگەرتىلگەندىن كېيىن ، ECM ئاقسىلى فۇنكسىيەلىك PDMS يۈزىنى يېپىپ قويۇلدى ، ئاندىن مىكرو ھۈجەيرىلەر تولۇقلانغاندىن كېيىن ، مىكرو ھۈجەيرىلەر تولۇقلانغان. تۆۋەنكى مىكرو قانال بولسا تۇراقلىق ھالەتنى ساقلايدۇ. بۇ يەر يۈزىنى قوزغىتىش ۋە ECM سىرلاشنىڭ ئەلالاشتۇرۇلغان ئۇسۇلى ئورگانىك ئېپىتېلىيەنىڭ باغلىنىشى ئارقىلىق PDMS يۈزىدە 3D مورفوگېنېز پەيدا قىلىدۇ.
Transwell مەدەنىيىتى يەنە ھۈجەيرە تېرىشتىن ئىلگىرى ECM سىرلاشنى تەلەپ قىلىدۇ.قانداقلا بولمىسۇن ، ترانسۋېل مەدەنىيىتى مۇرەككەپ قىستۇرما دېتاللارنىڭ يۈزىنى قوزغىتىش ئۈچۈن مۇرەككەپ ئالدىنئالا قەدەم بېسىشنى تەلەپ قىلمايدۇ. ترانسۋېل قىستۇرمىسىدىكى Caco-2 ھۈجەيرىسىنىڭ ئۆسۈشىگە ئەگىشىپ ، ECM قاپارتما قىستۇرمىلارنىڭ سىرلىنىشى ئايرىۋېتىلگەن Caco-2 ھۈجەيرىسىنىڭ (<1 سائەت) ۋە چىڭ ئۇلىنىش توسىقىنىڭ شەكىللىنىشىنى تېزلىتىدۇ. oids توساق پۈتۈنلۈكى بىلەن مۇكەممەل يەككە شەكىل ھاسىل قىلىدۇ. ترانسۋېل مەدەنىيىتى ئارىلاشما ئۆزەك ئىشلەتمەي 24 قۇدۇق تاختىسىدا ئېلىپ بېرىلىدۇ.
ۋىرۇسلۇق 3D مورفوگېنېزنى مۇقىم ئېپىتېلىيە قەۋىتىنىڭ ئاساسىي تەرىپىگە سۇيۇقلۇق ئېقىش ئارقىلىق قوزغىتىشقا بولىدۇ. ئۆزەكنىڭ ئۈچىيىدە ، ئېپىتېلىيە خاراكتېرلىك مورفوگېنېز ئوتتۇرا ۋە تۆۋەنكى مىكرو قاناللارغا ئارىلاشتۇرۇلغاندىن كېيىن باشلىنىدۇ (3a رەسىم). ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك ، تۆۋەن قان تومۇردىكى ئاقسىلنىڭ ئوزۇقلۇق ماددىلىرىنى تۆۋەنلىتىشى كېرەك. رېلىس ۋە نۇرنىڭ قىرقىشىنى پەيدا قىلىدۇ ، بىز ئادەتتە ئۆزەكتە ئۈچەيدە قوش ئېقىننى ئىشلىتىمىز. ئارىلاشما ئۆزەكتە ، ئارىلاشما ئۆزەك ئىچىگە ئېفتېلىيە مونولا ئېلېمېنتى بار Transwell قىستۇرمىسى ئارىلاش ماتورلۇق ئۆزەك ئىچىگە قىستۇرۇلدى.
مىكرو ئېنىرگىيىلىك 3D ئېپىتېلىيە قەۋىتىنىڭ مورفولوگىيەلىك ئالاھىدىلىكىنى ھەرخىل تەسۋىر ھاسىل قىلىش ئۇسۇللىرىنى قوللىنىش ئارقىلىق تەھلىل قىلىشقا بولىدۇ ، مەسىلەن فازا سېلىشتۇرما مىكروسكوپ ، پەرقلىق ئارىلىشىش سېلىشتۇرمىسى (DIC) مىكروسكوپ ، SEM ياكى ئىممۇنىتېت كۈچىگە قارشى تۇرغۇچى مىكروسكوپ (3-ۋە 4-رەسىم). ئۆزەك سۇپىلىرى ئۈسكۈنىنى بۆلۈش ياكى چۇۋۇشنىڭ ھاجىتى يوق ئەھۋال ئاستىدا نەق مەيدان تەسۋىر ھاسىل قىلالايدۇ. ئىممۇنىتېت كۈچىگە قارشى تەسۋىر ھاسىل قىلغاندا (رەسىملەر 1 ، 3c ، f ۋە 4b ، c) ، ھۈجەيرىلەر ئادەتتە% 4 (wt / vol) پارافورمالدېگىد (PFA) بىلەن مۇقىملىنىدۇ ، ئۇنىڭدىن كېيىن Triton X-100 ۋە% 2 (wt / vol). ئېرس ۋە توسۇش دورىسى ئىشلىتىشكە بولىدۇ. نەسەبكە تايىنىدىغان ھۈجەيرە ياكى رايون بەلگىسىنى نىشان قىلغان دەسلەپكى ئانتىتېلا ئۆزەكنىڭ ئورنىدا ھەرىكەتسىزلەنگەن ھۈجەيرىلەرنى گەۋدىلەندۈرۈش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ ، ئۇنىڭدىن كېيىن ئىككىلەمچى ئانتىتېلا قارشى تۇرغۇچى بوياق بىلەن بىللە يادرونى نىشانلايدۇ (مەسىلەن ، 4 ′ ، 6 دىئامدىنو -2 فېنلىن) ئىندۇل ، فلۇئېن فېرمېنسىمان فلۇئېن فېرمېنسىيىسى بار. (رەسىم.1 ، «ھۈجەيرىلەرنى پەرقلەندۈرۈش» ۋە «ئۈچەي فىزىئولوگىيىسى») ، مىكروب ھۈجەيرىلىرىنى ئىختىيارىي مۇستەملىكە قىلىش (1-رەسىم ، «ساھىبجامال مىكروب ئورتاق مەدەنىيىتى») ، ئىممۇنىتېت ھۈجەيرىسىنى قوبۇل قىلىش (1-رەسىم ، «كېسەللىك مودېلى») ياكى 3D ئېپىتېلىيە مورفولوگىيىسىنىڭ قىياپىتى (3-رەسىم ، f ۋە 4b ، c). ئېپىتېلىيە خاراكتېرلىك مورفولوگىيە شۇنداقلا ئاپتوماتىك چوتكا چېگرىسىدىكى مىكرو ۋىرۇسنى SEM ئارقىلىق تەسۋىرلىگىلى بولىدۇ (3b رەسىم). پەرقلەندۈرۈش بەلگىسىنىڭ ئىپادىسىنى مىقدارلاشقان PCR5 ياكى يەككە ھۈجەيرە RNA تەرتىپىنى ئىجرا قىلىش ئارقىلىق باھالىغىلى بولىدۇ.
a ، ئارىلاشما ئۆزەكتە ئۈچەينىڭ مورفوگېنېزنى كىرگۈزۈش ئۈچۈن خىزمەت ئېقىمى. بۇ كېلىشىمدە كاكو -2 ۋە ئۈچەيدىكى ئورگانىك ماددىلار ئارىلاشما ئۆزەك سۇپىسىدا 3D مورفوگېنېزنى كۆرسىتىش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ. بۆلۈنگەن ئېپىتېلىيە ھۈجەيرىسى تەييارلانغان ترانسۋېل قىستۇرمىسىغا ئۇرۇقلاندۇرۇلدى (TW تەييارلىق ؛ تۆۋەندىكى رەسىمگە قاراڭ). بىر نەچچە كۈندە ، ئېپىتېلىيە ھۈجەيرىسىنىڭ 2D يەككە ئايلىنىشچان ئۆز ئىچىگە ئالغان يەككە ترانسۋېل قىستۇرمىسى بىرىكمە ئۆزەككە بىرىكتۈرۈلۈپ ئاساسىي ئېقىن (Flow, BL) نى تونۇشتۇردى ، نەتىجىدە ئەڭ ئاخىرىدا 3D ئېپىتېلىيە قەۋىتى (مورفوگېنېز) بارلىققا كەلدى. ئۆزەك (سول سىخېما) ئوخشىمىغان Z ئورۇنلىرىدا (ئۈستۈنكى ، ئوتتۇرا ۋە تۆۋەن) تارتىلغان يۇقىرى-تۆۋەن ئارىلاشما مىكروسكوپ كۆرۈنۈشلىرى بىلەن ئورگانىك ئېپىتېلىيە ھۈجەيرىسىنىڭ 3D مورفوگېنېزلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.توغرا سىخېما ۋە ماس چېكىتلىك قۇرلارنى كۆرۈڭ).ئېنىق مورفولوگىيىلىك ئالاھىدىلىكنى كۆرسەتتى. c پايدىلىنىش رۇخسىتى بىلەن قايتا بېسىلدى .4.Elsevier.
ئوخشاش ھۈجەيرىلەرنى (Caco-2 ياكى ئۈچەيدىكى ئورگانىك ئېپىتېلىيە ھۈجەيرىسى) نى يېتىشتۈرۈش ئارقىلىق ئەنئەنىۋى تۇراقلىق مەدەنىيەت شارائىتىدا ئىككى ئۆلچەملىك مونوپولغا ئايلاندۇرغىلى بولىدۇ. دىققەت قىلىشقا ئەرزىيدىغىنى ، مىكرو قاناللارنىڭ ھەجىمى چەكلىك بولغانلىقتىن ئوزۇقلۇقنىڭ خورىشى كېلىپ چىقىشى مۇمكىن (يەنى ئەسلى ئۈچەي ئۆزەك لايىھىسىدىكى ئۈستۈنكى قانالدىكى ~ 4 µL).
يۇمشاق تاش مەتبەئە جەريانىنى پاكىز ئۆيدە ئېلىپ بېرىش كېرەك. ئۆزەك (ئۈستۈنكى ۋە تۆۋەن قەۋەت ۋە پەردىلەر) ۋە ئارىلاشما ئۆزەكتىكى ھەر بىر قەۋەت ئۈچۈن ، ئوخشىمىغان كرېمنىي ۋافېردا ئوخشىمىغان فوتوماسكا ئىشلىتىلگەن ۋە ياسالغان ، چۈنكى مىكرو قانالنىڭ ئېگىزلىكى ئوخشىمايتتى.
3 دىيۇملۇق كرېمنىيلىق ۋافېرنى ئاتسېتون بىلەن قاچىغا قويۇڭ. تەخسىنى ئاستا-ئاستا 30 سېكۇنت ئايلاندۇرۇڭ ، ئاندىن ھاۋانى قۇرۇتۇڭ. ۋافېرنى IPA بىلەن تەخسىگە يۆتكەڭ ، ئاندىن تەخسىنى 30 سېكۇنت ئايلاندۇرۇپ پاكىزلاڭ.
پىرانخا ئېرىتمىسى (ھىدروگېن ئوكسىد ۋە قويۇق گۈڭگۈرت كىسلاتاسىنىڭ ئارىلاشمىسى ، 1: 3 (ۋولت) نى ئىختىيارىي ئىشلىتىپ ، كرېمنىيلىق ۋافېر يۈزىدىكى ئورگانىك قالدۇقلارنى چىقىرىپ تاشلاشنى ئەڭ زور چەكتە ئىشلىتىشكە بولىدۇ.
پىرانخا ئېرىتمىسى ئىنتايىن چىرىتىشچان بولۇپ ، ئىسسىقلىق ھاسىل قىلىدۇ. قوشۇمچە بىخەتەرلىك تەدبىرلىرى زۆرۈر. تاشلاندۇقلارنى بىر تەرەپ قىلىش ئۈچۈن ، ھەل قىلىش چارىسىنى پاكىز ، قۇرۇق تاشلاندۇق قاچىسىغا يۆتكەشكە يول قويۇڭ. ئىككىلەمچى قاچىلارنى ئىشلىتىڭ ھەمدە تاشلاندۇق قاچىلارغا مۇۋاپىق بەلگە قويۇڭ. تېخىمۇ تەپسىلىي تەرتىپلەر ئۈچۈن ئەسلىھەنىڭ بىخەتەرلىك كۆرسەتمىلىرىگە ئەمەل قىلىڭ.
ۋافېرنى 200 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئىسسىق تەخسىگە 10 مىنۇت تۇرغۇزۇپ سۇسىزلاندۇرۇڭ. سۇسىزلانغاندىن كېيىن ، ۋافېر ھاۋادا بەش قېتىم سىلكىپ سوۋۇتۇلدى.
پاكىزلانغان كرېمنىيلىق ۋافېرنىڭ مەركىزىگە ~ 10 گرام فوتوگراف ئۇستىسى قۇيۇڭ. تىۋىتتىن پايدىلىنىپ فوتوگرافنى ۋافېرغا تەكشى يېيىڭ. ئاندا-ساندا ۋافېرنى 65 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئىسسىق تەخسىگە قويۇپ ، فوتوگرافنىڭ يېپىشقاقلىقىنى تېخىمۇ ئاسان يېپىشتۇرۇڭ.
SU-8 ئايلانما قاپلاش ئارقىلىق ۋافېرغا تەكشى تارقىتىلدى. پروگرامما SU-8 نىڭ 5-10 s غىچە كېلىدىغان ئايلىنىش پروگراممىسىنى 100 rpm / s لىك تېزلىكتە 500 rpm دە كېڭەيتىش ئۈچۈن پروگرامما تۈزۈڭ. pm.
ئاساسلىق ئايلىنىش سۈرئىتىنى كرېمنىيلىق ۋافېردىكى SU-8 ئەندىزىسىنىڭ نىشان قېلىنلىقىغا ئاساسەن تەڭشىگىلى بولىدۇ.
ئۆزەك ئۈستىدىكى ئۈچەينىڭ ئۈستۈنكى قەۋىتى ئۈچۈن 500 µm ئېگىزلىكتىكى SU-8 ئەندىزىسىنى توقۇش ئۈچۈن ، بۇ قۇتىنىڭ ئايلانما سىر ۋە يۇمشاق پىشۇرۇش باسقۇچلىرى (7-ۋە 8-قەدەملەر) ئارقا-ئارقىدىن تەكرارلاندى (9-قەدەمگە قاراڭ) ، 250 µm قېلىنلىقتىكى ئىككى قەۋەت SU-8 نى ھاسىل قىلدى ، بۇ قەۋەتنى 12-قەدەمدە ئۇلترا بىنەپشە نۇر بىلەن بىرلەشتۈرگىلى بولىدۇ.
يۇمشاق دېتالنى SU-8 سىرلانغان ۋافېرنى ئەستايىدىللىق بىلەن 65 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئىسسىق تەخسىگە قويۇپ 5 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ ، ئاندىن تەڭشەكنى 95 سېلسىيە گرادۇسقا ئالماشتۇرۇڭ ھەمدە 40 مىنۇت سىڭدۈرۈڭ.
ئۈستۈنكى مىكرو قانالدا SU-8 ئەندىزىسىنىڭ 500 مىللىمېتىر ئېگىزلىكىنى ئەمەلگە ئاشۇرۇش ئۈچۈن ، 7 ۋە 8 باسقۇچلارنى تەكرارلاپ ، 250 مىللىمېتىر قېلىنلىقتىكى ئىككى SU-8 قەۋىتى ھاسىل قىلىڭ.
UV ماسكا ماسلاشتۇرغۇچنى ئىشلىتىپ ، ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كۆرسەتمىسى بويىچە چىراغ سىنىقى ئېلىپ بېرىپ ، ۋافېرنىڭ ئاشكارلىنىش ۋاقتىنى ھېسابلاڭ. (ئاشكارلىنىش ۋاقتى ، ms) = (ئاشكارلىنىش مىقدارى ، mJ / cm2) / (چىراغ كۈچى ، mW / cm2).
ئاشكارلىنىش ۋاقتىنى بېكىتكەندىن كېيىن ، فوتو ئاپپاراتنى UV ماسكا ماسلاشتۇرغۇچنىڭ ماسكا ساقلىغۇچىغا قويۇپ ، فوتو ئاپپاراتنى SU-8 قاپلانغان ۋافېرغا قويۇڭ.
فوتوماسكىنىڭ بېسىلغان يۈزىنى كرېمنىي ۋافېرنىڭ SU-8 سىرلانغان تەرىپىگە بىۋاسىتە قويۇپ ، ئۇلترا بىنەپشە نۇرنىڭ تارقىلىشىنى ئازايتىڭ.
ئالدىن بېكىتىلگەن ئاشكارلىنىش ۋاقتى ئۈچۈن SU-8 سىرلانغان ۋافېر ۋە فوتوسماكنى UV نۇرىنىڭ 260 mJ / cm2 غىچە تىك ھالەتتە كۆرسىتىڭ (بۇ قۇتىنىڭ 10-قەدەمگە قاراڭ).
ئۇلترا بىنەپشە نۇردىن كېيىن ، SU-8 سىرلانغان كرېمنىيلىق ۋافېر 65 سېلسىيە گرادۇستا 5 مىنۇت ، 95 سېلسىيە گرادۇستا 15 مىنۇتتا 15 مىنۇتتا پىشۇرۇلدى ، ئېگىزلىكى 200 مىللىمېتىر.
ئاچقۇچى ئەينەك قاچىغا قۇيۇلۇپ ، پىشۇرۇلغان ۋافېر قاچىغا سېلىنىدۇ. SU-8 ئاچقۇچىنىڭ ھەجىمى ئەينەك تاختاينىڭ چوڭ-كىچىكلىكىگە ئاساسەن ئوخشىماسلىقى مۇمكىن. يېتەرلىك SU-8 ئاچقۇچىنى ئىشلىتىپ ئېنىقلانمىغان SU-8 نى تولۇق چىقىرىۋېتىشكە كاپالەتلىك قىلىڭ.
تەرەققىي قىلغان قېلىپنى ~ 10 mL لىك يېڭى ئاچقۇچى بىلەن IPA ئەگىشىپ تۇرۇبا ئارقىلىق ئېرىتمىنى پۈركۈپ چايقىڭ.
ۋافېرنى پلازما تازىلاش ماشىنىسىغا قويۇپ ، ئوكسىگېن پلازمىسى (ئاتموسفېرا گازى ، نىشان بېسىمى 1 × 10−5 Torr ، قۇۋۋىتى 125 W) 1.5 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ.
ۋافېرنى ۋاكۇئۇملۇق تازىلاش ماشىنىسىغا قويۇڭ ، ئىچىگە ئەينەك سىيرىلما ئورنىتىڭ. ۋافېر ۋە سىيرىلغۇچنى يانمۇ-يان قويغىلى بولىدۇ. ئەگەر ۋاكۇئۇم يوقىتىش دورىسى تەخسە ئارقىلىق بىر نەچچە قەۋەتكە ئايرىلسا ، تام تەسۋىرنى تۆۋەنكى كامېرغا ۋە ۋافېرنى ئۈستۈنكى كامېرغا قويۇڭ.
37 سېلسىيە گرادۇسلۇق سۇ مۇنچىسىدا توڭلىتىلغان Caco-2 ھۈجەيرىسىنى ئېرىتىپ ، ئاندىن ئېرىتىلگەن ھۈجەيرىلەرنى T75 پلاستىنكىغا يۆتكەپ ، 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق 15 مىللىمېتىرلىق Caco-2 ۋاستىسى بار.
Caco-2 ھۈجەيرىسىنى% 90 لىك تۇتاشتۇرۇشتا ئۆتۈش ئۈچۈن ، 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق سۇ مۇنچىسىدا ئالدى بىلەن ئىللىق Caco-2 ئوتتۇراھال ، PBS ۋە% 0.25 لىك تىرىپسىن / 1 mM EDTA.
ۋاكۇئۇم ئىنتىلىش ئارقىلىق ۋاسىتە قىلىڭ. ۋاكۇئۇم ئارزۇسىنى تەكرارلاش ۋە يېڭى PBS قوشۇش ئارقىلىق ھۈجەيرىلەرنى 5 مىللىمېتىر ئىسسىق PBS بىلەن ئىككى قېتىم يۇيۇڭ.