Nature.com نى زىيارەت قىلغىنىڭىزغا رەھمەت.سىز ئىشلىتىۋاتقان توركۆرگۈچ نۇسخىسىنىڭ CSS قوللىشى چەكلىك.ئەڭ ياخشى تەجرىبە ئۈچۈن يېڭىلانغان تور كۆرگۈچنى ئىشلىتىشىڭىزنى تەۋسىيە قىلىمىز (ياكى Internet Explorer دىكى ماسلىشىشچان ھالەتنى چەكلەڭ).بۇ جەرياندا ، داۋاملىق قوللاشقا كاپالەتلىك قىلىش ئۈچۈن ، تور بېكەتنى ئۇسلۇب ۋە JavaScript ئىشلەتمەيمىز.
سۇيۇق بىئوپسىسىيە (LB) بىر خىل ئۇقۇم بولۇپ ، ئۇ بىئولوگىيەلىك داۋالاش ساھەسىدە تېز ئالقىشقا ئېرىشىۋاتىدۇ.بۇ ئۇقۇم ئاساسلىقى ئايلانما ھۈجەيرە سىرتىدىكى DNA (ccfDNA) نىڭ پارچىلىرىنى بايقاشنى ئاساس قىلغان بولۇپ ، ئۇلار ھەر خىل توقۇلمىلاردا ھۈجەيرە ئۆلگەندىن كېيىن كىچىك پارچىلار سۈپىتىدە قويۇپ بېرىلىدۇ.بۇ پارچىلارنىڭ ئاز بىر قىسمى چەتئەل (چەتئەل) توقۇلمىلىرى ياكى جانلىقلاردىن كەلگەن.ھازىرقى خىزمەتتە ، بىز بۇ ئۇقۇمنى دېڭىز سۈيىنىڭ سۈزۈش ئىقتىدارى بىلەن تونۇلغان يۈرەك مۇسكۇلىغا قوللاندۇق.بىز مۇسكۇللارنىڭ تەبىئىي سۈزگۈچ رولىنى ئويناپ ، مۇھىتتىكى DNA پارچىلىرىنى ھەر خىل مەنبەلەردىن تارتىپ ، دېڭىز بويىدىكى ئېكولوگىيىلىك سىستېمىلارنىڭ جانلىقلارنىڭ كۆپ خىللىقى ھەققىدە ئۇچۇر بىلەن تەمىنلەيمىز.نەتىجىمىز شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، مۇسكۇل قان تومۇردا چوڭ-كىچىكلىكى 1 دىن 5 كىلوگرامغىچە بولغان DNA پارچىلىرى بار.ئوق ئېتىش تەرتىپىدە نۇرغۇنلىغان DNA پارچىلىرىنىڭ چەتئەل مىكروب مەنبەلىك ئىكەنلىكى كۆرسىتىلدى.بۇنىڭ ئىچىدە بىز باكتېرىيە ، ئارخېيە ۋە ۋىرۇسلارنىڭ DNA پارچىلىرىنى بايقىدۇق ، بۇلار ئادەتتە دېڭىز بويىدىكى دېڭىز-ئوكيان ئېكولوگىيە سىستېمىسىدا كۆپ ئۇچرايدىغان ساھىبجاماللارنى يۇقۇملاندۇرىدىغان ۋىرۇسلارنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.خۇلاسىلىگەندە ، تەتقىقاتىمىز مۇسكۇلغا قوللىنىلغان LB ئۇقۇمىنىڭ دېڭىز قىرغىقىدىكى ئېكولوگىيىلىك سىستېمىدىكى مىكروبلارنىڭ كۆپ خىللىقى توغرىسىدىكى مول ، ئەمما تېخى تەتقىق قىلىنمىغان بىلىم مەنبەسىگە ۋەكىللىك قىلىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بەردى.
كېلىمات ئۆزگىرىش (CC) نىڭ دېڭىز-ئوكيان ئېكولوگىيە سىستېمىسىنىڭ جانلىقلارنىڭ كۆپ خىللىقىغا كۆرسىتىدىغان تەسىرى تېز تەرەققىي قىلىۋاتقان تەتقىقات رايونى.يەرشارىنىڭ ئىسسىپ كېتىشى مۇھىم فىزىئولوگىيىلىك بېسىم پەيدا قىلىپلا قالماستىن ، يەنە دېڭىز جانلىقلىرىنىڭ ئىسسىقلىق مۇقىملىقىنىڭ تەدرىجىي تەرەققىيات چەكلىمىسىنى ئىلگىرى سۈرۈپ ، بىر قاتار جانلىقلارنىڭ ياشاش مۇھىتىغا تەسىر كۆرسىتىپ ، ئۇلارنى تېخىمۇ پايدىلىق شارائىت ئىزدەشكە ئۈندەيدۇ [1, 2].CC مېتازونىڭ جانلىقلارنىڭ كۆپ خىللىقىغا تەسىر كۆرسەتكەندىن باشقا ، ساھىبجامال بىلەن مىكروبلارنىڭ ئۆز-ئارا تەسىر قىلىشىنىڭ نازۇك تەڭپۇڭلۇقىنى بۇزىدۇ.بۇ مىكروب كەمتۈكلۈك كېسىلى دېڭىز جانلىقلىرىنى يۇقۇملۇق كېسەللىك قوزغاتقۇچىغا ئاسان گىرىپتار قىلغاچقا ، دېڭىز-ئوكيان ئېكولوگىيە سىستېمىسىغا ئېغىر تەھدىد ئېلىپ كېلىدۇ [3, 4].SS كەڭ كۆلەملىك ئۆلۈشتە مۇھىم رول ئوينايدۇ دەپ قارىلىدۇ ، بۇ يەرشارى دېڭىز-ئوكيان ئېكولوگىيە سىستېمىسىنى باشقۇرۇشتىكى ئېغىر مەسىلە [5, 6].بۇ نۇرغۇن دېڭىز جانلىقلىرىنىڭ ئىقتىسادىي ، ئېكولوگىيىلىك ۋە ئوزۇقلۇق تەسىرىنى كۆزدە تۇتقان مۇھىم مەسىلە.بولۇپمۇ قۇتۇپ رايۇنىدا ياشايدىغان بۈركۈتلەر ئۈچۈن تېخىمۇ شۇنداق ، بۇ يەردە CK نىڭ تەسىرى تېخىمۇ تېز ۋە ئېغىر بولىدۇ [6, 7].ئەمەلىيەتتە ، Mytilus spp قاتارلىق رىقابەتچىلەر.CC نىڭ دېڭىز-ئوكيان ئېكولوگىيە سىستېمىسىغا كۆرسىتىدىغان تەسىرىنى نازارەت قىلىش ئۈچۈن كەڭ قوللىنىلىدۇ.ئۇلارنىڭ سالامەتلىكىنى نازارەت قىلىش ئۈچۈن بىر قەدەر كۆپ ساندىكى بىئولوگىيىلىك ماركا ئىجاد قىلىنغانلىقى ئەجەبلىنەرلىك ئەمەس ، ئۇلار دائىم فېرمېنتلىق پائالىيەت ياكى ھۈجەيرىلەرنىڭ ھاياتىي كۈچى ۋە فاكوسسىك پائالىيىتى قاتارلىق ھۈجەيرە فۇنكسىيەسىنى ئاساس قىلغان ئىقتىدارلىق بىئولوگىيىلىك ماركا ئىشلىتىشتىن ئىبارەت ئىككى قاتلاملىق ئۇسۇلنى قوللىنىدۇ.بۇ ئۇسۇللار يەنە كۆپ مىقداردىكى دېڭىز سۈيى سۈمۈرۈلگەندىن كېيىن يۇمشاق توقۇلمىلاردا يىغىلىدىغان ئالاھىدە بېسىم كۆرسەتكۈچلىرىنىڭ قويۇقلۇقىنى ئۆلچەشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.قانداقلا بولمىسۇن ، سۈزگۈچنىڭ يۇقىرى سۈزۈش ئىقتىدارى ۋە يېرىم ئوچۇق ئايلىنىش سىستېمىسى سۇيۇق بىئوپوسسىيە (LB) ئۇقۇمىدىن پايدىلىنىپ بىمارلارنى باشقۇرۇشقا ئاددىي ۋە ئەڭ تاجاۋۇز قىلىش ئۇسۇلى ئارقىلىق يېڭى قان ئېرىشچان بىئولوگىيىلىك ماركا يارىتىش پۇرسىتى بىلەن تەمىنلەيدۇ.قان ئەۋرىشكىسى [9, 10].گەرچە ئىنسانلارنىڭ LB دا بىر نەچچە خىل ئايلىنىش مولېكۇلاسىنى تاپقىلى بولسىمۇ ، ئەمما بۇ ئۇقۇم ئاساسلىقى پلازما ئىچىدىكى ھۈجەيرە سىرتىدىكى DNA (ccfDNA) پارچىلىرىنىڭ DNA رەت تەرتىپىنى ئانالىز قىلىشنى ئاساس قىلىدۇ.ئەمەلىيەتتە ، ئىنسانلارنىڭ پلازمىسىدا ئايلانما DNA نىڭ بارلىقى 20-ئەسىرنىڭ ئوتتۇرىلىرىدىن باشلاپلا بىلىنگەن [11] ، ئەمما يېقىنقى يىللاردا يۇقىرى ئۈنۈملۈك تەرتىپلەش ئۇسۇلىنىڭ بارلىققا كېلىشى ccfDNA نى ئاساس قىلغان كلىنىكىلىق دىئاگنوزنى كەلتۈرۈپ چىقاردى.بۇ ئايلانما DNA پارچىلىرىنىڭ مەۋجۇت بولۇشى مەلۇم دەرىجىدە ھۈجەيرە ئۆلگەندىن كېيىن گېن گۇرۇپپىسىنىڭ (يادرو ۋە خوندىرىئوسوملۇق) پاسسىپ قويۇپ بېرىلىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك. ساغلام كىشىلەردە ccfDNA نىڭ قويۇقلۇقى ئادەتتە تۆۋەن بولىدۇ (<10 ng / mL) ، ئەمما ھەر خىل كېسەللىكلەرگە گىرىپتار بولغان ياكى بېسىمغا ئۇچرىغان بىمارلاردا 5-10 ھەسسە ئېشىپ ، توقۇلمىلارنىڭ بۇزۇلۇشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ. ساغلام كىشىلەردە ccfDNA نىڭ قويۇقلۇقى ئادەتتە تۆۋەن بولىدۇ (<10 ng / mL) ، ئەمما ھەر خىل كېسەللىكلەرگە گىرىپتار بولغان ياكى بېسىمغا ئۇچرىغان بىمارلاردا 5-10 ھەسسە ئېشىپ ، توقۇلمىلارنىڭ بۇزۇلۇشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ. У здоровых людей марар вккДНК в умеме низкая (<10 нг / گىن) ، نو موجېت پوۋشىاتьسيا в 5-10 раз у больных с различной погологией или подвергающихся лаву, при приящемсу к повреждению ساغلام كىشىلەردە cccDNA نىڭ قويۇقلۇقى ئادەتتە تۆۋەن بولىدۇ (<10 ng / mL) ، ئەمما ئۇ ھەر خىل كېسەللىكلەر ياكى بېسىم ئاستىدا توقۇلمىلارنىڭ بۇزۇلۇشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغان بىمارلاردا 5-10 ھەسسە كۆپىيىدۇ.10 健康 个体 中 c ccfDNA 的 浓度 通常 较低 （<10 ng / mL） ， 但 在 患有 各种 或 -10 -10 5-10 倍 ， 从而 导致 组织 损伤。在 健康 个体 中 c ccfdna 的 浓度 较 低 （（<10 ng / ml） 在 在 各 种 病理 -10 -10 5-10 倍 ， 从而 组织 -10 损伤 损伤 损伤 损伤 损伤Концентрации ccfDNA обикно низкие (<10 нг / كان) у здоровых людей, но могут быть увеличены в 5-10 раз у удов с различными пидологиями или чисом, что при притит к повреждению тканей. ccfDNA نىڭ قويۇقلۇقى ئادەتتە ساغلام كىشىلەردە تۆۋەن (<10 ng / ml) بولىدۇ ، ئەمما ھەر خىل كېسەللىك ياكى بېسىمغا گىرىپتار بولغان بىمارلاردا 5-10 ھەسسە كۆپىيىپ ، توقۇلمىلارنىڭ بۇزۇلۇشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.CcfDNA پارچىلىرىنىڭ چوڭ-كىچىكلىكى ئوخشىمايدۇ ، ئەمما ئادەتتە 150 دىن 200 bp ئارىلىقىدا.[12].ئۆزلۈكىدىن ھاسىل بولغان ccfDNA نى ئانالىز قىلىش ، يەنى نورمال ياكى ئۆزگەرتىلگەن ساھىبجامال ھۈجەيرىسىدىن ccfDNA نى يادرو ۋە ياكى خوندىرىئوسوملۇق گېندا بار بولغان گېن ۋە يەرلىك ئۆزگىرىشلەرنى بايقاشقا ئىشلىتىشكە بولىدۇ ، بۇ ئارقىلىق كلىنىكىلىق دوختۇرلارنىڭ مولېكۇلا نىشانلىق داۋالاش ئۇسۇلىنى تاللىشىغا ياردەم بېرىدۇ.قانداقلا بولمىسۇن ، ccfDNA ھامىلىدارلىق مەزگىلىدە ھامىلىنىڭ ھۈجەيرىسىدىن ياكى كۆچۈرۈلگەن ئەزالاردىن ccfDNA قاتارلىق چەتئەل مەنبەلىرىدىن ئېرىشكىلى بولىدۇ [14,15,16,17].ccfDNA يەنە يۇقۇملانغۇچى (چەتئەل) نىڭ يادرو كىسلاتاسىنىڭ بار-يوقلۇقىنى بايقاشتىكى مۇھىم ئۇچۇر مەنبەسى بولۇپ ، ئۇ قان مەدەنىيىتى تەرىپىدىن ئېنىقلانمىغان كەڭ تارقالغان يۇقۇملىنىشنى تاجاۋۇزسىز بايقىيالايدۇ ، يۇقۇملانغان توقۇلمىلارنىڭ تاجاۋۇزچى بىئوپوسسىيەسىدىن ساقلىنىدۇ.يېقىنقى تەتقىقاتلار شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، ئىنسان قېنىدا مول ئۇچۇر مەنبەسى بار بولۇپ ، ۋىرۇس ۋە باكتېرىيە كېسەللىكلىرىنى پەرقلەندۈرۈشكە ئىشلىتىلىدۇ ، ئىنسانلارنىڭ پلازمىسىدا بايقالغان ccfDNA نىڭ تەخمىنەن% 1 ى چەتئەلدىن كەلگەن [19].بۇ تەتقىقاتلار ccfDNA ئانالىزى ئارقىلىق جانلىقلارنىڭ ئايلىنىدىغان مىكروبومنىڭ جانلىقلارنىڭ كۆپ خىللىقىنى باھالىغىلى بولىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بەردى.قانداقلا بولمىسۇن ، تاكى يېقىنقى ۋاقىتلارغىچە ، بۇ ئۇقۇم پەقەت ئىنسانلاردا ۋە ئازراق بولسىمۇ باشقا ئومۇرتقىلىق ھايۋانلاردا ئىشلىتىلگەن [20, 21].
ھازىرقى ماقالىدە ، بىز LB يوشۇرۇن كۈچىدىن پايدىلىنىپ ، Aulacomya atra نىڭ ccfDNA نى ئانالىز قىلىمىز ، بۇ يەر جەنۇبىي قۇتۇپ كېرگۇئېلېن تاقىم ئارىلىدا كۆپ ئۇچرايدۇ ، بۇ ئاراللار 35 مىليون يىل ئىلگىرى شەكىللەنگەن چوڭ تۈزلەڭلىكنىڭ ئۈستىدە.يانار تاغ پارتلاش.ۋىرۇس تەجرىبىسى سىستېمىسىدىن پايدىلىنىپ ، دېڭىز سۈيىدىكى DNA پارچىلىرىنىڭ مۇسكۇللار تەرىپىدىن تېزلا ئېلىپ ، قان ئېرىش بۆلۈمىگە كىرگەنلىكىنى بايقىدۇق.ئوق ئېتىش تەرتىپىدە كۆرسىتىلىشىچە ، مۇسكۇل گېمولىمفا ccfDNA نىڭ ئۆزلۈكىدىن ۋە ئۆزىدىن كېلىپ چىققان DNA پارچىلىرى بار ، بۇلار سىمبىيوتىك باكتېرىيە ۋە سوغۇق يانار تاغ دېڭىز قىرغىقى ئېكولوگىيىلىك سىستېمىسىغا خاس بىئولوگىيىلىك DNA پارچىلىرىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.Hemolymph ccfDNA يەنە ئوخشىمىغان ساھىبجامال دائىرىسىدىكى ۋىرۇسلاردىن ھاسىل بولغان ۋىرۇس تەرتىپىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.بىز يەنە سۆڭەك بېلىقى ، دېڭىزدىكى ئانېمون ، يۈسۈن ۋە ھاشارات قاتارلىق كۆپ ھۈجەيرىلىك ھايۋانلارنىڭ DNA پارچىلىرىنى بايقىدۇق.خۇلاسىلىگەندە ، تەتقىقاتىمىز LB ئۇقۇمىنىڭ مۇۋەپپەقىيەتلىك ھالدا دېڭىزدىكى ئومۇرتقىسىز ھايۋانلارغا قوللىنىلىپ ، دېڭىز-ئوكيان ئېكولوگىيە سىستېمىسىدا مول گېن گۇرۇپپىسىنى ھاسىل قىلالايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بەردى.
قۇرامىغا يەتكەنلەر (ئۇزۇنلۇقى 55-70 مىللىمېتىر) Mytilus platensis (M. platensis) ۋە Aulacomya atra (A. atra) فرانسىيە-پورت پورتى ئارىلىقىدىكى تاشلىق قىرغاقتىن يىغىلغان (049 ° 21.235 S ، 070 ° 13.490 E.).2018-يىلى 12-ئايدا Kerguelen تاقىم ئاراللىرى.(سۈنئىي دېڭىز تۇزى رېف خرۇستال ، ئامېرىكا ۋىرگىنىيە شىتاتى)ھەر قېتىملىق سىناقتا يەككە قاپنىڭ ئۇزۇنلۇقى ۋە ئېغىرلىقى ئۆلچەم قىلىندى.
بۇ پروگراممىنىڭ ھەقسىز ئوچۇق زىيارەت كېلىشىمنامىسىنى توردا كۆرەلەيسىز (https://doi.org/10.17504/protocols.io.81wgb6z9olpk/v1).قىسقىچە قىلىپ ئېيتقاندا ، LB قان تومۇر ئۆسمىسى تۇتقۇن قىلىنغان مۇسكۇللاردىن يىغىۋېلىندى [22].گېمولىمفا 1200 × گرامدا مەركەزدىن قاچۇرۇش ئارقىلىق 3 مىنۇت ئايدىڭلاشتۇرۇلدى ، خاسىيەتلىك ماددا توڭلاتقۇ (-20 سېلسىيە گرادۇس) ئىشلىتىپ بولغۇچە توڭلىتىلدى.CfDNA نى ئايرىش ۋە ساپلاشتۇرۇش ئۈچۈن ، ئىشلەپچىقارغۇچىلارنىڭ كۆرسەتمىسى بويىچە ئەۋرىشكە (1.5-2.0 مىللىمېتىر) ئېرىتىلگەن ۋە NucleoSnap cfDNA يۈرۈشلۈك زاپچاسلىرى (Macherey-Nagel, Bethlehen, PA) ئارقىلىق ئېرىتىلگەن ۋە بىر تەرەپ قىلىنغان.يەنىمۇ ئىلگىرىلىگەن ھالدا تەھلىل قىلغۇچە ccfDNA -80 ° C قا ساقلانغان.بەزى تەجرىبىلەردە ، ccfDNA QIAamp DNA تەكشۈرۈش ئەسۋابى (QIAGEN ، تورونتو ، كانادا ئونتارىيو ، كانادا) ئارقىلىق ئايرىۋېتىلدى ۋە ساپلاشتۇرۇلدى.ساپلاشتۇرۇلغان DNA ئۆلچەملىك PicoGreen تەكشۈرۈشى ئارقىلىق مىقدارلاشقان.ئايرىۋېتىلگەن ccfDNA نىڭ پارچە تەقسىملىنىشى يۇقىرى سەزگۈرلۈك DNA زاپچاسلىرى ئارقىلىق Agilent 2100 بىيو ئانالىزچى (Agilent Technologies Inc. ، سانتا كلارا ، CA) ئارقىلىق قىل قان تومۇر ئېلېكتروفورىسى ئارقىلىق ئانالىز قىلىنغان.بۇ زاۋۇت ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ كۆرسەتمىسى بويىچە ccfDNA ئەۋرىشكىسىدىن 1 µl ئىشلىتىپ ئېلىپ بېرىلدى.
گېمولىمف ccfDNA پارچىلىرىنى تەرتىپكە سېلىش ئۈچۈن ، گېنومې كۇئېبېك (كانادا مونترېئال ، كۋېبېك ، كانادا) Illumina MiSeq PE75 يۈرۈشلۈك زاپچاسلىرىنىڭ Illumina DNA ئارىلاشما زاپچاسلىرى ئارقىلىق مىلتىق كۈتۈپخانىلىرىنى تەييارلىدى.ئۆلچەملىك ماسلاشتۇرغۇچ (BioO) ئىشلىتىلگەن.خام سانلىق مەلۇمات ھۆججەتلىرىنى NCBI تەرتىپ ئوقۇش ئارخىپى (SRR8924808 ۋە SRR8924809) دىن تاپقىلى بولىدۇ.ئاساسىي ئوقۇش سۈپىتى FastQC ئارقىلىق باھالاندى [23].Trimmomatic [24] ماسلاشتۇرغۇچ ۋە سۈپەتسىز ئوقۇش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ.ئوق چىقىرىش ئوقلىرى بىلەن ئوق چىقىرىش FLASH ئۇزۇنراق يەككە ئوقۇشقا بىرلەشتۈرۈلۈپ ، ئەڭ ئاز بولغاندا 20 bp لىك قاپلاش بولۇپ ، ماسلاشماسلىقنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ. بىرلەشتۈرۈلگەن ئوقۇشلار قوش يۆنىلىشلىك NCBI تاكتىكىسى سانلىق مەلۇمات ئامبىرى (e قىممىتى <1e - 3 ۋە% 90 گومولوگىيە) ئارقىلىق BLASTN بىلەن ئىزاھلانغان ، DUST ئارقىلىق تۆۋەن مۇرەككەپ تەرتىپلەرنى نىقابلاش ئېلىپ بېرىلغان. بىرلەشتۈرۈلگەن ئوقۇشلار قوش يۆنىلىشلىك NCBI تاكتىكىسى سانلىق مەلۇمات ئامبىرى (e قىممىتى <1e - 3 ۋە% 90 گومولوگىيە) ئارقىلىق BLASTN بىلەن ئىزاھلانغان ، DUST ئارقىلىق تۆۋەن مۇرەككەپ تەرتىپلەرنى نىقابلاش ئېلىپ بېرىلغان. Объединенные ч чения были аннотированя с помощу BLASTN с ىسپولزوۋانىم باسسىينىلىق تاكونوميي двустворч чатх моллюсков NCBI (значение e <1e-3 ۋە 90% كومولوۋىچ). зованием DUST [26]. توپلانغان ئوقۇشلار BLASTN بىلەن NCBI قوش يۆنىلىشلىك باج تاپشۇرۇش سانلىق مەلۇمات ئامبىرى (e قىممىتى <1e-3 ۋە% 90 گومولوگىيە) ئارقىلىق ئىزاھلانغان ، DUST ئارقىلىق تۆۋەن مۇرەككەپ تەرتىپ ماسكىسى ماسلاشتۇرۇلغان.使用 双壳类 NCBI 分类 数据库 （e 值 <1e-3 和 90% 同源 性） 用 BLASTN 注释 合并 的 读数 ， 并 UST DUST [26] 进行 低 复杂 度 序列 的 掩蔽。使用 双 壳 类 ncbi 分类 （（（<1e-3 和 90% 同源） 用 用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 掩蔽 掩蔽 掩蔽 掩蔽 掩蔽 掩蔽Объединенные ч чения были аннотирован с помощу BLASTN с ىسپولزوۋانىم تاكونومېچېسكوي بازىسى كاننىخ двустворч чатх моллюсков NCBI (значение e <1e-3 ۋە 90% «پەنلوۋ»). пользованием DUST [26]. تولدۇرۇلغان ئوقۇشلۇقلار BLASTN بىلەن NCBI bivalve تاكتىكىسى سانلىق مەلۇمات ئامبىرى (e قىممىتى <1e-3 ۋە% 90 گومولوگىيە) ئارقىلىق ئىزاھلانغان ، DUST ئارقىلىق تۆۋەن مۇرەككەپ تەرتىپ ماسكىسى ماسكا قىلىنغان.ئوقۇش ئىككى گۇرۇپپىغا بۆلۈندى: قوش يۆنىلىشلىك تەرتىپلەر (بۇ يەردە ئۆزلۈكىدىن ئوقۇش دېيىلىدۇ) ۋە مۇناسىۋەتسىز (ئۆزى ئوقۇمايدىغان).ئىككى گۇرۇپپا ئايرىم-ئايرىم ھالدا MEGAHIT ئارقىلىق يىغىلىپ ھاسىل قىلغان [27].شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا ، تاشقى پىلانېت مىكروبلىرىنىڭ ئوقۇلۇشىنىڭ تاكتىكىلىق تەقسىملىنىشى Kraken2 [28] ئارقىلىق تۈرگە ئايرىلغان ۋە گرافىكلىق ھالدا Galaxy دىكى Krona تورت جەدۋىلى بىلەن ئىپادىلەنگەن [29, 30].ئەڭ ياخشى kmers دەسلەپكى سىناقلىرىمىزدىن kmers-59 دەپ بېكىتىلدى. ئاندىن ئۆز-ئارا ماسلاشتۇرۇلغانلار ئەڭ ئاخىرقى ئىزاھلاش ئۈچۈن BLASTN (bivalve NCBI سانلىق مەلۇمات ئامبىرى ، e قىممىتى <1e - 10 ۋە% 60 گومولوگىيە) بىلەن ماسلىشىش ئارقىلىق ئېنىقلانغان. ئاندىن ئۆز-ئارا ماسلاشتۇرۇلغانلار ئەڭ ئاخىرقى ئىزاھلاش ئۈچۈن BLASTN (bivalve NCBI سانلىق مەلۇمات ئامبىرى ، e قىممىتى <1e - 10 ۋە% 60 گومولوگىيە) بىلەن ماسلىشىش ئارقىلىق ئېنىقلانغان. Затем собственные кстиги были идентифицировana путем сопоставления с BLASTN (بازا چانىنىخ двустворч чатх моллюсков NCBI, значение e <1e-10 ۋە ئىدولوگىيە 60%) для окончательной аннотации. ئاندىن ئۆز-ئارا ماسلاشقانلار ئەڭ ئاخىرقى ئىزاھلاش ئۈچۈن BLASTN (NCBI bivalve سانلىق مەلۇمات ئامبىرى ، e قىممىتى <1e-10 ۋە% 60 گومولوگىيە) گە ماسلىشىش ئارقىلىق ئېنىقلانغان.然后 通过 与 BLASTN （双 壳 贝类 NCBI 数据库 ， e 值 <1e-10 和 60% 同源 性） 对齐 来 识别 自身 重叠 群 以 进行 最终 注释。然后 通过 与 BLASTN （双 壳 贝类 NCBI 数据库 ， e 值 <1e-10 和 60% Затем были идент сифицировя собственные babaтиги для окончательной аннотации путем сопоставления с BLASTN (باسا چاننىخ NCBI длу двустворч чехх моллюсксков, значение e <1e-10 ۋە زوچو 60%). ئاندىن ئۆز-ئارا ماسلاشتۇرۇلغانلار BLASTN (NCBI bivalve سانلىق مەلۇمات ئامبىرى ، e قىممىتى <1e-10 ۋە% 60 گومولوگىيە) بىلەن ماسلىشىپ ئاخىرقى ئىزاھلاش ئۈچۈن بېكىتىلدى. پاراللېل ھالدا ، گۇرۇپپا گۇرۇپپىلىرى BLASTN بىلەن ئىزاھلاندى (nt NCBI سانلىق مەلۇمات ئامبىرى ، e قىممىتى <1e - 10 ۋە% 60 گومولوگىيە). پاراللېل ھالدا ، گۇرۇپپا گۇرۇپپىلىرى BLASTN بىلەن ئىزاھلاندى (nt NCBI سانلىق مەلۇمات ئامبىرى ، e قىممىتى <1e - 10 ۋە% 60 گومولوگىيە). Параллельно чужеродные групповые kтитиги были аннотированя с помощу BLASTN (بازا چانىنىخ nt NCBI, значение e <1e-10 ۋە ئىدولوگىيە 60%). پاراللېل ھالدا ، چەتئەل گۇرۇپپىلىرى BLASTN (NT NCBI سانلىق مەلۇمات ئامبىرى ، e قىممىتى <1e-10 ۋە% 60 گومولوگىيە) بىلەن ئىزاھلاندى.平行 地 ， 用 BLASTN （nt NCBI 数据库 ， e 值 <1e-10 和 60% 同源 性） 注释 非 自身 组 重叠 群。。平行 地 ， 用 BLASTN （nt NCBI 数据库 ， e 值 <1e-10 和 60% 同源 性） 注释 非 自身 组 重叠 群。。 Параллельно утитиги, не относящиеся к собственной группе, были аннотирован с помощу BLASTN (بازا كاننىخ nt NCBI, значение e <1e-10 ۋە ئىدولوگىيە 60%). پاراللېل ھالدا ، ئۆز-ئۆزىگە تەۋە بولمىغان گۇرۇپپىلار BLASTN (nt NCBI سانلىق مەلۇمات ئامبىرى ، e قىممىتى <1e-10 ۋە% 60 گومولوگىيە) بىلەن ئىزاھلاندى. BLASTX يەنە nr ۋە RefSeq ئاقسىلى NCBI سانلىق مەلۇمات ئامبىرى (e قىممىتى <1e - 10 ۋە% 60 گومولوگىيە) ئارقىلىق ئۆز-ئارا باغلىنىشلىق ئېلىپ بېرىلدى. BLASTX يەنە nr ۋە RefSeq ئاقسىلى NCBI سانلىق مەلۇمات ئامبىرى (e قىممىتى <1e - 10 ۋە% 60 گومولوگىيە) ئارقىلىق ئۆز-ئارا باغلىنىشلىق ئېلىپ بېرىلدى. BLASTX takже был проведен на امامостоятельных птитигах с использованием بازانىخ بېلكا nr ۋە RefSeq NCBI (значение e <1e-10 ۋە ئىدولوگىيە 60%). BLASTX يەنە nr ۋە RefSeq NCBI ئاقسىل سانلىق مەلۇمات ئامبىرى (e قىممىتى <1e-10 ۋە% 60 گومولوگىيە) ئارقىلىق ئۆز-ئارا ماسلاشمىغان.还 r nr 和 RefSeq 蛋白 NCBI 数据库 对 非 自身 重叠 群 进行 AST BLASTX （e 值 <1e-10 和 60% 同源 性）。还 r nr 和 RefSeq 蛋白 NCBI 数据库 对 非 自身 重叠 群 进行 AST BLASTX （e 值 <1e-10 和 60% 同源 性）。 BLASTX takjе выполняли на امامостоятельных птитигах с использованием بازانىخ بېلكا nr ۋە RefSeq NCBI (значение e <1e-10 ۋە ئىدولوگىيە 60%). BLASTX يەنە nr ۋە RefSeq NCBI ئاقسىل سانلىق مەلۇمات ئامبىرى (e قىممىتى <1e-10 ۋە% 60 گومولوگىيە) ئارقىلىق ئۆز-ئارا ماسلاشمىغان.ئۆز-ئارا ماسلاشمىغان BLASTN ۋە BLASTX كۆلچەكلىرى ئاخىرقى مەزمۇنلارنى كۆرسىتىدۇ (قوشۇمچە ھۆججەتكە قاراڭ).
PCR ئۈچۈن ئىشلىتىلىدىغان پىرىسلار S1 جەدۋەلدە كۆرسىتىلگەن.تاق DNA پولىمېراسى (Bio Basic Canada, Markham, ON) ccfDNA نىشان گېنىنى كېڭەيتىشكە ئىشلىتىلگەن.تۆۋەندىكى ئىنكاس شارائىتى قوللىنىلدى: 95 سېلسىيە گرادۇستا 3 مىنۇت ، 95 سېلسىيە گرادۇس 1 مىنۇت ، تېمپېراتۇرا 1 مىنۇت ، 72 سېلسىيە گرادۇس 1 مىنۇت ، 35 ئايلانما ، ئاخىرىدا 10 مىنۇت ئىچىدە 72 سېلسىيە گرادۇس..PCR مەھسۇلاتلىرى 95 V. دە SYBRTM بىخەتەر DNA گېلى داغ (Invitrogen, Burlington, ON, كانادا) تەركىبىدىكى ئاگاروزا گېلىدىكى ئېلېكتروفورېز ئارقىلىق ئايرىلدى.
مۇسسېل (Mytilus spp.) 500 مىللىمېتىر ئوكسىگېنلانغان دېڭىز سۈيىدە (32 PSU) 4 سېلسىيە گرادۇستا 24 سائەت كۆندى.پلازمىد DNA ئىنسانلارنىڭ گالېتىن -7 cDNA تەرتىپىنى كودلاشتۇرىدىغان قىستۇرما (NCBI نىڭ كىرىش نومۇرى L07769) قاچىسىغا ئەڭ ئاخىرقى قويۇقلۇقى 190 mg / μl بولغان.ئوخشاش شارائىتتا يوشۇرۇنغان مۇسسېللار كونترول قىلىنغان.ئۈچىنچى كونترول باكىدا مۇسكۇل يوق DNA بار.دېڭىز سۈيىنىڭ DNA سۈپىتىنى نازارەت قىلىش ئۈچۈن ، كۆرسىتىلگەن ۋاقىتتا ھەر بىر باكتىن دېڭىز سۈيىنىڭ ئەۋرىشكىسى (20 مىللىمېتىر ؛ ئۈچ قېتىم تەكرارلاش) ئېلىندى.پىلاستىك DNA ئىز قوغلاش ئۈچۈن ، LB مۇسكۇلى كۆرسىتىلگەن ۋاقىتتا يىغىۋېلىندى ۋە qPCR ۋە ddPCR تەرىپىدىن ئانالىز قىلىندى.دېڭىز سۈيىنىڭ تۇز تەركىبى يۇقىرى بولغانلىقتىن ، PCR تەكشۈرۈشتىن ئىلگىرى ئالكوك PCR سۈپەتلىك سۇدا سۇيۇلدى (1:10).
رەقەملىك تامچە PCR (ddPCR) BioRad QX200 كېلىشىمىدىن پايدىلىنىپ ئېلىپ بېرىلدى (Mississauga, Ontario, Canada).تېمپېراتۇرا ئارخىپىنى ئىشلىتىپ ئەڭ ياخشى تېمپېراتۇرىنى ئېنىقلاڭ (S1 جەدۋەل).تامچە QX200 تامچە گېنېراتور (BioRad) ئارقىلىق ھاسىل قىلىنغان.ddPCR تۆۋەندىكىدەك ئېلىپ بېرىلدى: 95 سېلسىيە گرادۇس 5 مىنۇت ، 50 سېلسىيە گرادۇس 30 سېلسىيە گرادۇس ، 30 سېلسىيە گرادۇسلۇق تېمپېراتۇرا 1 مىنۇت ، 72 سېلسىيە گرادۇس 30 سېلسىيە گرادۇس ، 5 سېلسىيە گرادۇس 5 سېلسىيە گرادۇس.تامچە ۋە ئاكتىپ ئىنكاسلارنىڭ سانى (كۆپەيتىلگەن نۇسخىسى / µl) QX200 تامچە ئوقۇغۇچ (BioRad) ئارقىلىق ئۆلچەم قىلىندى.10،000 تامچىسىدىن تۆۋەن ئەۋرىشكە رەت قىلىندى.ھەر قېتىم ddPCR ئىجرا بولغاندا ئۈلگە كونترول قىلىنمىدى.
qPCR Rotor-Gene® 3000 (Corbett Research ، سىدنېي ، ئاۋىستىرالىيە) ۋە LGALS7 ئالاھىدە پىرىسلىغۇچ ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى.بارلىق مىقداردىكى PCR لار 20 µl دە QuantiFast SYBR يېشىل PCR يۈرۈشلۈك زاپچاسلىرى (QIAGEN) ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى.qPCR 95 سېلسىيە گرادۇسلۇق 15 مىنۇتلۇق ئىنكۇباتسىيەدىن كېيىن ، 40 سېلسىيە گرادۇس 95 سېلسىيە گرادۇستا 10 سېكۇنت ، 60 سېلسىيە گرادۇستا 60 سېكۇنت ئىچىدە بىر سانلىق مەلۇمات توپلاش بىلەن باشلانغان.ئېرىتىش ئەگرى سىزىقى 95 سېلسىيە گرادۇسلۇق 5 سېلسىيە گرادۇس ، 65 سېلسىيە گرادۇس 60 سېلسىيە گرادۇس ، qPCR نىڭ ئاخىرىدا 97 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئۆلچەش ئارقىلىق ھاسىل قىلىنغان.كونترول ئەۋرىشكىسىدىن باشقا ، ھەر بىر qPCR ئۈچ خىل ھالەتتە ئېلىپ بېرىلدى.
مۇسكۇللارنىڭ سۈزۈش نىسبىتى يۇقىرى بولغانلىقى ئۈچۈن ، بىز ئالدى بىلەن ئۇلارنىڭ دېڭىز سۈيىدە بار بولغان DNA پارچىلىرىنى سۈزۈپ ساقلىيالايدىغانلىقىنى تەكشۈردۇق.بىز بۇ پارچىلارنىڭ يېرىم ئوچۇق لىمفا سىستېمىسىدا يىغىلىپ قالغان-كەلمىگەنلىكىگە قىزىقىمىز.بىز كۆك مۇسكۇل باكلىرىغا قوشۇلغان ئېرىيدىغان DNA پارچىلىرىنىڭ تەقدىرىنى ئىز قوغلاپ بۇ مەسىلىنى سىناق ئارقىلىق ھەل قىلدۇق.DNA پارچىلىرىنى ئىز قوغلاشقا قۇلايلىق بولسۇن ئۈچۈن ، بىز ئىنسانلارنىڭ گالېتىن -7 گېنى بولغان چەتئەل (ئۆزى ئەمەس) پىلازما DNA نى ئىشلەتتۇق.ddPCR دېڭىز سۈيى ۋە مۇسكۇللاردىكى پىلازما DNA پارچىلىرىنى ئىزلايدۇ.نەتىجىمىز شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، ئەگەر دېڭىز سۈيىدىكى DNA پارچىلىرى ۋاقىتنىڭ ئۆتۈشىگە ئەگىشىپ (7 كۈنگىچە) بىر قەدەر تۇراقلىق ھالەتتە تۇرسا ، مۇسكۇللار ئالدىدا بۇ سەۋىيە 8 سائەت ئىچىدە پۈتۈنلەي يوقالغان (رەسىم 1a ، b).ئىچكى ئاجراتما سۇيۇقلۇقى ۋە قان تومۇردا 15 مىنۇت ئىچىدە ئاسانلا تاشقى DNA نىڭ پارچىلىرى بايقالدى (1c رەسىم).بۇ پارچىلارنى ئاشكارىلاپ 4 سائەتكىچە يەنىلا بايقىغىلى بولىدۇ.DNA پارچىلىرىغا مۇناسىۋەتلىك بۇ سۈزۈش پائالىيىتىنى باكتېرىيە ۋە يۈسۈنلەرنىڭ سۈزۈش پائالىيىتى بىلەن سېلىشتۇرۇشقا بولىدۇ [31].بۇ نەتىجىلەر مۇسكۇللارنىڭ سۇيۇقلۇق بۆلۈملىرىدە چەتئەل DNA نى سۈزۈپ توپلىيالايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
دېڭىز سۈيىدىكى پلازما DNA نىڭ نىسپىي قويۇقلۇقى ddPCR بىلەن ئۆلچەنگەن مۇسكۇللارنىڭ بارلىقى (A) ياكى يوقلۇقى (B).A دا ، نەتىجە پىرسەنت شەكلىدە ئىپادىلىنىدۇ ، ساندۇقلارنىڭ چېگرىسى 75- ۋە 25-پىرسەنتكە ۋەكىللىك قىلىدۇ.ماسلاشتۇرۇلغان لوگارىزىم ئەگرى سىزىقى قىزىل رەڭدە كۆرسىتىلىدۇ ، كۈلرەڭدە سايە چۈشۈرۈلگەن رايون% 95 ئىشەنچ ئارىلىقىنى كۆرسىتىدۇ.B دا ، قىزىل سىزىق ئوتتۇرىنى ، كۆك سىزىق بولسا قويۇقلۇقىنىڭ% 95 ئىشەنچ ئارىلىقىنى كۆرسىتىدۇ.C پىلازما DNA قوشۇلغاندىن كېيىن ئوخشىمىغان ۋاقىتتا مۇسكۇللارنىڭ قان ئېرىش ۋە قان تومۇر سۇيۇقلۇقىدىكى پىلازما DNA نىڭ يىغىلىشى.نەتىجە مۇتلەق كۆپەيتىلگەن / mL (± SE) سۈپىتىدە كۆرسىتىلدى.
كېيىنكى قەدەمدە ، بىز ئانتروپوگېننىڭ تەسىرى چەكلىك بولغان ئاراللار توپى بولغان كېرگېلېن ئارىلىدىكى مۇسكۇل كارىۋىتىدىن يىغىلغان مۇسكۇللاردىكى ccfDNA نىڭ كېلىش مەنبەسىنى تەكشۈردۇق.بۇ مەقسەت ئۈچۈن ، مۇسكۇل قان تومۇرلىرىدىكى cccDNA ئادەتتە ئىنسانلارنىڭ cccDNA نى تازىلاشتا قوللىنىلىدىغان ئۇسۇللار بىلەن ئايرىۋېتىلدى ۋە ساپلاشتۇرۇلدى [32, 33].بىز مۇسكۇللاردىكى ئوتتۇرىچە قان ئېرىشچان ccfDNA قويۇقلۇقىنىڭ ھەر مىللىلېتىر قان تومۇر دائىرىسىدە تۆۋەن مىكروگرامدا ئىكەنلىكىنى بايقىدۇق (S2 جەدۋەل ، قوشۇمچە ئۇچۇرلار).بۇ قويۇقلۇق دەرىجىسى ساغلام كىشىلەرگە قارىغاندا كۆپ چوڭ (ھەر مىللىلېتىر نانوگرام تۆۋەن) ، ئەمما ئاز ئۇچرايدىغان ئەھۋاللاردا ، راك بىمارلىرىدا ، ccfDNA نىڭ سەۋىيىسى ھەر مىللىلېتىردا بىر نەچچە مىكروگرامغا يېتىدۇ [34, 35].Hemolymph ccfDNA نىڭ چوڭ-كىچىكلىكىنى تەقسىملەش ئانالىزىدا كۆرسىتىلىشىچە ، بۇ پارچىلارنىڭ چوڭ-كىچىكلىكى ئوخشىمايدۇ ، 1000 bp دىن 1000 bp غىچە.5000 bp غىچە (2-رەسىم).مۇشۇنىڭغا ئوخشاش نەتىجىلەر سىلىتسىينى ئاساس قىلغان QIAamp تەكشۈرۈش ئەسۋابىدىن پايدىلىنىپ قولغا كەلتۈرۈلگەن بولۇپ ، بۇ ئۇسۇل ئەدلىيە ئىلمىدە ئادەتتە ccfDNA نى ئۆز ئىچىگە ئالغان تۆۋەن قويۇقلۇقتىكى DNA ئەۋرىشكىسىدىن گېن گۇرۇپپىسىنى تېز ئايرىپ ۋە ساپلاشتۇرىدۇ.
مۇسكۇل قان تومۇرنىڭ ۋەكىللىك ccfDNA ئېلېكترو فورمىسى.NucleoSnap پلازما زاپچىسى (ئۈستى) ۋە QIAamp DNA تەكشۈرۈش ئەسۋابى بىلەن ئېلىنغان.B Violin سۇيۇقلۇقى مۇسكۇللاردا گېمولىمف ccfDNA قويۇقلۇقى (± SE) نىڭ تارقىلىشىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.قارا ۋە قىزىل سىزىقلار ئوتتۇرا ۋە بىرىنچى ۋە ئۈچىنچى پەسىلنى كۆرسىتىدۇ.
ئىنسانلار ۋە پىرىماتلاردا ccfDNA نىڭ تەخمىنەن% 1 چەتئەل مەنبەسى بار [21, 37].يېرىم ئوچۇق قان ئايلىنىش سىستېمىسىنىڭ ، مىكروب مول دېڭىز سۈيىنىڭ ۋە مۇسكۇل ccfDNA نىڭ چوڭ-كىچىكلىكىنىڭ تارقىلىشىنى كۆزدە تۇتۇپ ، مۇسكۇل گېمولىمفا ccfDNA نىڭ مول ۋە كۆپ خىل مىكروب DNA بولۇشى مۇمكىنلىكىنى پەرەز قىلدۇق.بۇ پەرەزنى سىناش ئۈچۈن ، بىز كەرگۇئېلېن تاقىم ئارىلىدىن يىغىلغان Aulacomya atra ئەۋرىشكىسىدىن قان ئېرىشچان ccfDNA نى تەرتىپكە سالدۇق ، 10 مىليوندىن ئارتۇق ئوقۇشقا ئېرىشتۇق ، بۇنىڭ% 97.6 ى سۈپەت كونتروللۇقىدىن ئۆتتى.ئاندىن بۇ ئوقۇشلار BLASTN ۋە NCBI قوش سانلىق مەلۇمات ئامبىرىنى ئىشلىتىپ ئۆزى ۋە ئۆزى بولمىغان مەنبەلەرگە ئاساسەن تۈرگە ئايرىلدى (S1 رەسىم ، قوشۇمچە ئۇچۇرلار).
ئىنسانلاردا يادرو ۋە خوندىرىئوسوملۇق DNA نىڭ قانغا قويۇپ بېرىلىشى مۇمكىن [38].قانداقلا بولمىسۇن ، ھازىرقى تەتقىقاتتا ، A. ئاترا گېن گۇرۇپپىسىنىڭ تەرتىپلىك ياكى تەسۋىرلەنمىگەنلىكىنى كۆزدە تۇتۇپ ، مۇسكۇللارنىڭ يادرو گېن گۇرۇپپىسىنى تەپسىلىي تەسۋىرلەش مۇمكىن ئەمەس.قانداقلا بولمىسۇن ، بىز ئىككى قۇتۇپلۇق كۇتۇپخانىنى ئىشلىتىپ ئۆزىمىزنىڭ كېلىپ چىققان بىر قانچە ccfDNA پارچىلىرىنى پەرقلەندۈرەلەيدىغان بولدۇق (رەسىم S2 ، قوشۇمچە ئۇچۇرلار).بىز يەنە تەرتىپلىك ھالدا ئاشۇ A. ئاترا گېنىنى PCR كېڭەيتىش ئارقىلىق ئۆزىمىزنىڭ كېلىپ چىققان DNA پارچىلىرىنىڭ بارلىقىنى جەزملەشتۈردۇق (3-رەسىم).ئوخشاشلا ، A. ئاترانىڭ خوندىرىئوسوملۇق گېن گۇرۇپپىسىنىڭ ئاممىۋى سانلىق مەلۇمات ئامبىرىدا بارلىقىنى كۆزدە تۇتقاندا ، ئا.خوندىرىئوسوملۇق DNA پارچىلىرىنىڭ بارلىقى PCR نىڭ كۈچەيتىلىشى بىلەن ئىسپاتلاندى (3-رەسىم).
PCR تەرىپىدىن كۈچەيتىلگەن A. ئاترا (قىزىل چېكىت - پاي چېكى نومۇرى: SRX5705969) ۋە M. platensis (كۆك چېكىت - پاي چېكى نومۇرى: SRX5705968) نىڭ قان تومۇردا ھەر خىل خوندىرىئوسوملۇق گېنلار بار.رەسىم برېتون قاتارلىقلاردىن ئۆزگەرتىلگەن ، 2011 B A ئاترادىن گېمولىمفا خاسىيەتلىك كېمىسىنىڭ كۈچەيتىلىشى FTA قەغىزىدە ساقلانغان.3 مىللىمېتىرلىق مۇشت ئىشلىتىپ PCR ئارىلاشمىسى بولغان PCR تۇرۇبىسىغا بىۋاسىتە قوشۇڭ.
دېڭىز سۈيىنىڭ تەركىبىدىكى مول مىكروبلارنى كۆزدە تۇتقاندا ، بىز دەسلەپتە قان ئېرىشتىكى مىكروبلارنىڭ DNA تەرتىپىنىڭ ئالاھىدىلىكىگە ئەھمىيەت بەردۇق.بۇنىڭ ئۈچۈن بىز ئوخشىمىغان ئىككى خىل ئىستراتېگىيىنى قوللىنىمىز.بىرىنچى ئىستراتېگىيىدە ئالگورىزىمنى ئاساس قىلغان تەرتىپ بويىچە تۈرگە ئايرىش پروگراممىسى Kraken2 ئىشلىتىلگەن بولۇپ ، مىكروب تەرتىپلىرىنى BLAST ۋە باشقا قوراللار بىلەن سېلىشتۇرغىلى بولىدىغان توغرىلىق بىلەن پەرقلەندۈرگىلى بولىدۇ [28].6719 دىن ئارتۇق ئوقۇشنىڭ باكتېرىيەدىن ئىكەنلىكى ئېنىقلانغان ، 124 ۋە 64 ئايرىم-ئايرىم ھالدا ئارخېيە ۋە ۋىرۇستىن كەلگەن (4-رەسىم).ئەڭ مول بولغان باكتېرىيە DNA پارچىلىرى Firmicutes (% 46) ، ئاقسىل باكتېرىيەسى (% 27) ۋە باكتېرىيە ۋىرۇسى (% 17) (4a رەسىم).بۇ تەقسىمات دېڭىزدىكى كۆك مۇسكۇل مىكروبلىرىنىڭ ئىلگىرىكى تەتقىقاتى بىلەن بىردەك [39, 40].Gammaproteobacteria Proteobacteria نىڭ ئاساسلىق سىنىپى (% 44) ، بۇنىڭ ئىچىدە نۇرغۇن Vibrionales بار (4b رەسىم).DdPCR ئۇسۇلى A. atra hemolymph نىڭ ccfDNA دا Vibrio DNA پارچىلىرىنىڭ بارلىقىنى ئىسپاتلىدى (4c رەسىم).CcfDNA نىڭ باكتېرىيە مەنبەسىگە مۇناسىۋەتلىك تېخىمۇ كۆپ ئۇچۇرلارغا ئېرىشىش ئۈچۈن ، قوشۇمچە ئۇسۇل قوللىنىلدى (S2 رەسىم ، قوشۇمچە ئۇچۇرلار). بۇ خىل ئەھۋال ئاستىدا ، بىر-بىرىگە قاپلانغان جۈپ جۈپ ئوقۇش شەكلىدە قۇراشتۇرۇلغانلىقى ۋە BLASTN نى ئىشلىتىپ ئۆزلۈكىدىن (ئىككىگە بۆلۈنگەن) ياكى ئۆزلىكىدىن كېلىپ چىققانلىقى ۋە e قىممىتى 1e - 3 ۋە كېسىلگەنلىكى% 90 گومولوگىيەلىك دەپ يېزىلغان. بۇ خىل ئەھۋال ئاستىدا ، بىر-بىرىگە قاپلانغان جۈپ جۈپ ئوقۇش شەكلىدە قۇراشتۇرۇلغانلىقى ۋە BLASTN نى ئىشلىتىپ ئۆزلۈكىدىن (ئىككىگە بۆلۈنگەن) ياكى ئۆزلىكىدىن كېلىپ چىققانلىقى ۋە e قىممىتى 1e - 3 ۋە كېسىلگەنلىكى% 90 گومولوگىيەلىك دەپ يېزىلغان. В этом случае перекрывающиеся ч чения были собраня как чтения с парными концами и были медисифицирована как собственные (двустворч че моллуски) или чужие по происхождению с сппользов һәм зы %. بۇ خىل ئەھۋالدا ، تەكرارلانغان ئوقۇشلۇق جۈپ ئوقۇش شەكلىدە توپلانغان بولۇپ ، BLASTN ۋە e قىممىتى 1e-3 ۋە ئەسلى قىممىتى 90% گومولوگىيە بىلەن يەرلىك (bivalve) ياكى ئەسلى ئەمەس دەپ تۈرگە ئايرىلغان.在 这种 情况 下 ， 重叠 的 使用 使用 使用 使用 AST BLASTN 和 1e-3 的 e 值 和> 90% 同源 性 的 截止 值 分类 为 自身。。。 自身。。在 这 种 情况 下 ， 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用 e e 90 90 90> 90% 同源 性 的 分类 自身 双 。。。。。。。。。 。。。。。。。。。 。。。。。。。。。 В э том слуеачае пеесрр ки пиес чаÑфирым сициция си иция си ия кияне (ئىۋان кене (ئىۋان чене (ئىخ двстворые (д дуста чату уосюски нсобстal - илобстннннниненнений и> и и>% 90. بۇ خىل ئەھۋالدا ، تەكرارلانغان ئوقۇشلۇق جۈپ ئوقۇش شەكلىدە توپلىنىپ ، e BLASTN ۋە 1e-3 قىممىتى ۋە گومولوگىيە بوسۇغىسى> 90% دىن پايدىلىنىپ ئۆزلۈكىدىن (ئىككىگە بۆلۈنگەن) ياكى ئەسلى ئەمەس دەپ ئايرىلىدۇ.A. ئاترا گېن گۇرۇپپىسى تېخى تەرتىپلەنمىگەچكە ، بىز MEGAHIT كېيىنكى ئەۋلاد تەرتىپلەش (NGS) قۇراشتۇرغۇچىنىڭ de novo قۇراشتۇرۇش ئىستراتېگىيىسىنى قوللاندۇق.جەمئىي 147،188 ئەترەتنىڭ كېلىپ چىقىشى (بېقىندى) ئىكەنلىكى ئېنىقلاندى.ئاندىن بۇ قىستۇرمىلار BLASTN ۋە BLASTX ئارقىلىق 1e-10 نىڭ ئېلېكترونلۇق قىممىتى بىلەن پارتىلىغان.بۇ ئىستراتېگىيىمىز بىزگە A. atra ccfDNA دا بار بولغان 482 پارچە تەڭداشسىز پارچىلارنى پەرقلەندۈرۈشكە يول قويدى.بۇ DNA پارچىلىرىنىڭ يېرىمىدىن كۆپرەكى (% 57) باكتېرىيەدىن ئېلىنغان ، ئاساسلىقى گۈڭگۈرت سىمفونىتنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.
تىپ سەۋىيىسىدىكى نىسپىي موللىق.B ئىككى خىل ئاساسلىق فىللانىڭ مىكروب كۆپ خىللىقى (Firmicutes and Proteobacteria).DdPCR C Vibrio spp نىڭ ۋەكىللىك كۈچەيتىلىشى.A. ئۈچ ئاترا قان تومۇردىكى 16S rRNA گېنىنىڭ پارچىلىرى.
جەمئىي 482 توپلانغان ئەترەت ئانالىز قىلىنغان.مېتاگېنومىيىلىك كونتېينېر ئىزاھاتى (prokaryotes ۋە eukaryotes) نىڭ تاكتىكىلىق تەقسىملىنىشىنىڭ ئومۇمىي ئارخىپى.B BLASTN ۋە BLASTX تەرىپىدىن ئېنىقلانغان باكتېرىيە DNA پارچىلىرىنىڭ تەپسىلىي تارقىتىلىشى.
Kraken2 تەھلىلىدە يەنە مۇسكۇل ccfDNA نىڭ ئارخېئولوگىيەلىك DNA پارچىلىرى بارلىقى كۆرسىتىلدى ، بۇنىڭ ئىچىدە Euryarchaeota نىڭ DNA پارچىلىرى (% 65) ، كرېنارخايوتا (% 24) ۋە تۇرمارچوتا (% 11) (6a رەسىم).Euryarchaeota ۋە Crenarchaeota دىن ھاسىل قىلىنغان DNA پارچىلىرىنىڭ بارلىقى ئىلگىرى كالىفورنىيە مۇسكۇلىنىڭ مىكروب توپىدا بايقالغان بولۇپ ، ھەيران قالارلىق ئىش بولماسلىقى كېرەك [42].گەرچە Euryarchaeota ھەمىشە پەۋقۇلئاددە شارائىت بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولسىمۇ ، ئەمما ھازىر Euryarchaeota ۋە Crenarcheota نىڭ دېڭىز-ئوكيان كرىگېن مۇھىتىدا ئەڭ كۆپ ئۇچرايدىغان پروكارىئوتلارنىڭ بىرى ئىكەنلىكى تونۇلدى [43, 44].يېقىنقى مەزگىللەردە كېرگۇئېلېن ئېگىزلىكىدىكى تۆۋەن ئېقىندىن كەڭ كۆلەمدە پاتقاق گازى ئېقىپ كېتىش ۋە كېرگۇئېلېن تاقىم ئارىلىنىڭ دېڭىز قىرغىقىدا كۆزىتىلگەن مىكروب مېتان ئىشلەپچىقىرىش ئېھتىماللىقى توغرىسىدىكى خەۋەرلەرنى ئويلاشقاندا ، مۇسكۇللاردا مېتانوگېنلىق مىكرو ئورگانىزىملارنىڭ بولۇشى ھەيران قالارلىق ئەمەس.
بىزنىڭ دىققىتىمىز ئاندىن DNA ۋىرۇسىدىن ئوقۇشقا يۆتكەلدى.بىزنىڭ بىلىشىمىزچە ، بۇ مۇسكۇللارنىڭ ۋىرۇس تەركىبىنى تۇنجى قېتىم نىشانسىز تەتقىق قىلىش ئىكەن.ئويلىغىنىمىزدەك ، بىز باكتېرىيە (Caudovirales) نىڭ DNA پارچىلىرىنى بايقىدۇق (6b رەسىم).قانداقلا بولمىسۇن ، ئەڭ كۆپ ئۇچرايدىغان ۋىرۇسلۇق DNA بىر خىل يادرو ھۈجەيرىسىدىن كېلىدۇ ، ئۇ يەنە يادرو سىتوپلازمىسى چوڭ DNA ۋىرۇسى (NCLDV) دەپمۇ ئاتىلىدۇ ، بۇ ۋىرۇسنىڭ ئەڭ چوڭ گېنى بار.بۇ خىل فىلوم ئىچىدە ، كۆپىنچە DNA تەرتىپلىرى Mimimidoviridae (% 58) ۋە Poxviridae (% 21) ئائىلىسىگە تەۋە ، ئۇلارنىڭ تەبىئىي ساھىبجاماللىرى ئومۇرتقىلىق ھايۋانلار ۋە بوغۇم ئاغرىقىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ ، ئەمما بۇ DNA تەرتىپلىرىنىڭ ئاز بىر قىسمى مەلۇم ۋىرۇس يۈسۈنلىرىگە تەۋە.دېڭىزدىكى ئېۋكارىئوتىك يۈسۈننى يۇقۇملاندۇرىدۇ.بۇ تەرتىپلەر يەنە پاندورا ۋىرۇسىدىن ئېلىنغان ، بۇ ۋىرۇس ئەڭ چوڭ گېن گۇرۇپپىسىنىڭ ئەڭ چوڭ گېنى.قىزىقارلىق يېرى ، گېمولىمف ccfDNA تەرتىپى ئارقىلىق بېكىتىلگەن ۋىرۇس بىلەن يۇقۇملانغانلىقى مەلۇم بولغان ساھىبجاماللارنىڭ دائىرىسى بىر قەدەر چوڭ (S3 رەسىم ، قوشۇمچە ئۇچۇرلار).ئۇ Baculoviridae ۋە Iridoviridae قاتارلىق ھاشاراتلارنى يۇقۇملاندۇرىدىغان ۋىرۇسلارنى ، شۇنداقلا ئاموبا ، يۈسۈن ۋە ئومۇرتقىلىق ھايۋانلارنى يۇقۇملاندۇرىدىغان ۋىرۇسلارنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.بىز يەنە Pithovirus sibericum گېنىغا ماس كېلىدىغان تەرتىپلەرنى بايقىدۇق.پىترو ۋىرۇسى («زومىگەر ۋىرۇس» دەپمۇ ئاتىلىدۇ) تۇنجى قېتىم سىبىرىيەدىكى 30،000 يىللىق توڭ توڭدىن ئايرىۋېتىلدى [47].شۇڭا ، بىزنىڭ نەتىجىمىز ئىلگىرىكى دوكلاتلار بىلەن بىردەك بولۇپ ، بۇ ۋىرۇسلارنىڭ ھازىرقى زامان تۈرلىرىنىڭ ھەممىسىنىڭ يوقىلىپ كەتمەيدىغانلىقىنى ۋە بۇ ۋىرۇسلارنىڭ يىراق دېڭىز ئاستى دېڭىز ئېكولوگىيە سىستېمىسىدا بولۇشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسىتىپ بەردى.
ئاخىرىدا ، بىز باشقا كۆپ ھۈجەيرىلىك ھايۋانلارنىڭ DNA پارچىلىرىنى تاپالايدىغان ياكى تاپالمايدىغانلىقىمىزنى سىنىدۇق.BLASTN ۋە BLASTX تەرىپىدىن nt ، nr ۋە RefSeq كۈتۈپخانىلىرى (گېن ۋە ئاقسىل) بىلەن جەمئىي 482 چەتئەللىك گۇرۇپپا ئېنىقلانغان.نەتىجىمىز شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، كۆپ ھۈجەيرىلىك ھايۋانلارنىڭ ccfDNA نىڭ چەتئەل پارچىلىرى ئىچىدە سۆڭەك سۆڭىكىنىڭ DNA سى ئۈستۈنلۈكنى ئىگىلىدى (5-رەسىم).ھاشارات ۋە باشقا جانلىقلارنىڭ DNA پارچىلىرىمۇ تېپىلدى.DNA پارچىلىرىنىڭ بىر قەدەر چوڭ قىسمى ئېنىقلانمىدى ، بۇ بەلكىم يەر شارىدىكى جانلىقلارغا سېلىشتۇرغاندا گېن سانلىق مەلۇمات ئامبىرىدا نۇرغۇنلىغان دېڭىز-ئوكيان تۈرلىرىنىڭ كەمچىل بولۇشى سەۋەبىدىن بولۇشى مۇمكىن [49].
ھازىرقى ماقالىدە ، بىز LB ئۇقۇمىنى مۇسكۇللارغا قوللىنىمىز ، گېمولىمف ccfDNA ئېتىش تەرتىپىنىڭ دېڭىز قىرغىقىدىكى ئېكولوگىيىلىك سىستېمىنىڭ تەركىبى ھەققىدە چۈشەنچە بېرەلەيدىغانلىقىنى ئوتتۇرىغا قويدۇق.بولۇپمۇ ، بىز 1) مۇسكۇل قان تومۇرنىڭ قويۇقلۇقى بىر قەدەر چوڭ (~ 1-5 كىلوگرام) ئايلانما DNA پارچىلىرىنىڭ بىر قەدەر يۇقىرى (مىكروگرام سەۋىيىسى) بارلىقىنى بايقىدۇق.2) بۇ DNA پارچىلىرى ھەم مۇستەقىل ھەم مۇستەقىل ئەمەس 3) بۇ DNA پارچىلىرىنىڭ چەتئەل مەنبەلىرى ئىچىدە بىز باكتېرىيە ، ئارخېئولوگىيەلىك ۋە ۋىرۇسلۇق DNA ، شۇنداقلا باشقا كۆپ ھۈجەيرىلىك ھايۋانلارنىڭ DNA سىنى بايقىدۇق.4) بۇ چەتئەل ccfDNA پارچىلىرىنىڭ قان تومۇردا يىغىلىشى تېز يۈز بېرىپ ، مۇسكۇللارنىڭ ئىچكى سۈزۈش پائالىيىتىگە تۆھپە قوشىدۇ.خۇلاسىلىگەندە ، تەتقىقاتىمىز شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، ھازىرغا قەدەر ئاساسلىقى بىئولوگىيەلىك داۋالاش ساھەسىدە قوللىنىلغان LB ئۇقۇمى مول ، ئەمما تەتقىق قىلىنمىغان بىلىم مەنبەسىنى كودلاشتۇرىدۇ ، بۇ خىل جانلىقلار بىلەن ئۇلارنىڭ مۇھىتىنىڭ ئۆز-ئارا تەسىرلىرىنى تېخىمۇ ياخشى چۈشىنىشكە ئىشلىتىلىدۇ.
پىرىماتلاردىن باشقا ، سۈت ئەمگۈچىلەردە چاشقان ، ئىت ، مۈشۈك ۋە ئات قاتارلىق ccfDNA نىڭ ئايرىۋېتىلگەنلىكى خەۋەر قىلىنغان [50, 51, 52].قانداقلا بولمىسۇن ، بىزنىڭ بىلىشىمىزچە ، تەتقىقاتىمىز تۇنجى بولۇپ ئوچۇق ئايلىنىش سىستېمىسى بىلەن دېڭىز جانلىقلىرىدىكى ccfDNA نىڭ بايقىلىشى ۋە رەت تەرتىپىنى دوكلات قىلغان.مۇسكۇللارنىڭ بۇ ئاناتومىيىلىك ئالاھىدىلىكى ۋە سۈزۈش ئىقتىدارى ھېچ بولمىغاندا قىسمەن باشقا جانلىقلارغا سېلىشتۇرغاندا DNA پارچىلىرىنىڭ ئوخشىمىغان چوڭلۇق ئالاھىدىلىكىنى چۈشەندۈرۈپ بېرەلەيدۇ.ئىنسانلاردا ، قاندا ئايلىنىۋاتقان DNA پارچىلىرىنىڭ كۆپىنچىسى 150 دىن 200 bp غىچە بولغان كىچىك پارچىلار.ئەڭ يۇقىرى چوققىسى 167 bp [34, 53].DNA پارچىلىرىنىڭ كىچىك ، ئەمما كۆرۈنەرلىك قىسمى 300 دىن 500 bp ئارىلىقىدا ، تەخمىنەن 5% 900 bp دىن ئۇزۇن.[54].بۇ چوڭلۇقنىڭ تارقىلىشىدىكى سەۋەب ، پلازما تەركىبىدىكى ccfDNA نىڭ ئاساسلىق مەنبەسى ھۈجەيرىلەرنىڭ ئۆلۈشىدىن كېلىپ چىققان ، ياكى ساغلام كىشىلەردىكى قان ئايلىنىش ھۈجەيرىسىنىڭ نېكروزلىنىشى ياكى راك بىمارلىرىدىكى ئۆسمە ھۈجەيرىسىنىڭ ئاپپتوزوز سەۋەبىدىن (ئايلانما ئۆسمە DNA دەپ ئاتىلىدۇ)., ctDNA).بىز مۇسكۇللاردا بايقىغان گېمولىمف ccfDNA نىڭ چوڭ-كىچىكلىكى 1000 دىن 5000 bp ئارىلىقىدا بولۇپ ، مۇسكۇل ccfDNA نىڭ باشقىچە كېلىپ چىققانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.بۇ لوگىكىلىق پەرەز ، چۈنكى مۇسكۇللارنىڭ يېرىم ئوچۇق قان تومۇر سىستېمىسى بار ھەمدە يۇقىرى قويۇقلۇقتىكى مىكروب گېن گۇرۇپپىسىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان دېڭىز-ئوكيان مۇھىتىدا ياشايدۇ.ئەمەلىيەتتە ، بىزنىڭ تاشقى تەجرىبىمىزدىن پايدىلىنىپ ئېلىپ بېرىلغان تەجرىبىمىز شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، مۇسكۇللار دېڭىز سۈيىدە DNA پارچىلىرىنى توپلايدۇ ، ھېچ بولمىغاندا بىر نەچچە سائەتتىن كېيىن ئۇلار ھۈجەيرە قوبۇل قىلىنغاندىن كېيىن ناچارلىشىدۇ ۋە ياكى قويۇپ بېرىلىدۇ ۋە ياكى ھەر خىل تەشكىلاتلاردا ساقلىنىدۇ.ھۈجەيرىلەرنىڭ ئاز ئۇچرايدىغانلىقىنى كۆزدە تۇتقاندا (پروكارىئوتىك ۋە ئېۋكارىئوتىك) ، تومۇرنىڭ ئىچكى قىسمىدىكى بۆلەكلەرنى ئىشلىتىش ئۆزلۈكىدىن شۇنداقلا چەتئەل مەنبەلىرىدىن ccfDNA نىڭ مىقدارىنى ئازايتىدۇ.تۇغما ئىممۇنىتېتنىڭ مۇھىملىقى ۋە كۆپ مىقداردىكى ئايلانما فاكوسېتلارنىڭ مۇھىملىقىنى كۆزدە تۇتۇپ ، بىز يەنە چەتئەل ccfDNA نىڭ مىكرو ئورگانىزملار ۋە ياكى ھۈجەيرە ئەخلەتلىرىنى يۇتۇۋالغاندىن كېيىن چەتئەل DNA توپلايدىغان ئايلانما فاكوسېتلار بىلەن بېيىغانلىقىنى تېخىمۇ پەرەز قىلدۇق.يىغىپ ئېيتقاندا ، بىزنىڭ نەتىجىمىز شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، bivalve hemolymph ccfDNA مولېكۇلا ئۇچۇرلىرىنىڭ ئۆزگىچە ئامبىرى بولۇپ ، ئۇلارنىڭ ئەگەشمە تۈر بولۇش ئورنىنى كۈچەيتىدۇ.
سانلىق مەلۇماتلىرىمىز شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى ، باكتېرىيەدىن ھاسىل بولغان گېمولىمفا ccfDNA پارچىلىرىنى رەتلەش ۋە ئانالىز قىلىش ساھىبجامال باكتېرىيە ئۆسۈملۈكلىرى ۋە ئەتراپتىكى دېڭىز-ئوكيان ئېكولوگىيە سىستېمىسىدا بار بولغان باكتېرىيە ھەققىدە مۇھىم ئۇچۇرلار بىلەن تەمىنلەيدۇ.ئوق چىقىرىش تەرتىپى تېخنىكىسىدا ئادەتتىكى كۇتۇپخانا A. atra gill نىڭ تەرتىپلىرى ئاشكارىلاندى ، ئەگەر ئادەتتىكى 16S rRNA پەرقلەندۈرۈش ئۇسۇلى قوللىنىلغان بولسا ، قولدىن كەتكەن بولاتتى.ئەمەلىيەتتە ، بىزنىڭ Kerguelen دىكى ئوخشاش مۇسكۇل قەۋىتىدىكى M. platensis دىن توپلانغان LB سانلىق مەلۇماتلىرىنى ئىشلىتىشىمىز گىلغا مۇناسىۋەتلىك باكتېرىيە سىمبونىنىڭ تەركىبىنىڭ ھەر ئىككى مۇسكۇل تۈرىگە ئوخشاش ئىكەنلىكىنى كۆرسەتتى (S4 رەسىم ، قوشۇمچە ئۇچۇرلار).گېنى ئوخشىمايدىغان ئىككى مۇسكۇلنىڭ بۇ ئوخشاشلىقى كېرگۇئېلېننىڭ سوغۇق ، گۈڭگۈرت ۋە يانار تاغ چۆكمىلىرىدىكى باكتېرىيە توپىنىڭ تەركىبىنى ئەكىس ئەتتۈرۈشى مۇمكىن [55, 56, 57, 58].يۇقىرى دەرىجىدىكى گۈڭگۈرتنى ئازايتىدىغان مىكرو ئورگانىزملار پورت-ئو-فرانسىيە دېڭىز قىرغىقىغا ئوخشاش بىئولوگىيىلىك بۇزۇلغان دېڭىز بويى رايونلىرىدىن مۇسكۇللارنى يىغىۋالغاندا ياخشى تەسۋىرلەنگەن.يەنە بىر خىل ئېھتىماللىق شۇكى ، كۆپ ئۇچرايدىغان مۇسكۇل ئۆسۈملۈكلىرى گورىزونتال تارقىلىشىنىڭ تەسىرىگە ئۇچرىشى مۇمكىن [60, 61].تېخىمۇ كۆپ تەتقىقاتلار دېڭىز-ئوكيان مۇھىتى ، دېڭىز ئۈستى يۈزى ۋە مۇسكۇلدىكى بىرىكمە باكتېرىيەنىڭ تەركىبى ئوتتۇرىسىدىكى باغلىنىشنى ئېنىقلاشقا موھتاج.بۇ تەتقىقاتلار ھازىر داۋاملىشىۋاتىدۇ.
گېمولىمف ccfDNA نىڭ ئۇزۇنلۇقى ۋە قويۇقلۇقى ، ئۇنىڭ ساپلاشتۇرۇلۇشى ئاسان ۋە مىلتىقنىڭ تېز سۈرئەتتە تەرتىپكە سېلىنىشى ئۈچۈن يۇقىرى سۈپەتلىك مۇسكۇل ccfDNA ئارقىلىق دېڭىز قىرغاقلىرىنىڭ ئېكولوگىيىلىك سىستېمىسىدىكى جانلىقلارنىڭ كۆپ خىللىقىنى باھالاشتىكى نۇرغۇن ئەۋزەللىكلەرنىڭ بىرى.بۇ خىل ئۇسۇل مەلۇم ئېكولوگىيىلىك سىستېمىدا ۋىرۇس توپى (ۋىرۇس) نى خاراكتېرلەندۈرۈشتە ئالاھىدە ئۈنۈملۈك [62, 63].باكتېرىيە ، ئارخېيە ۋە ئېۋكارىئوتلارغا ئوخشىمايدىغىنى ، ۋىرۇس گېنلىرىدا 16S تەرتىپى قاتارلىق فىلوگېنتىك ساقلانغان گېن يوق.نەتىجىمىز شۇنى ئىسپاتلىدىكى ، مۇسكۇل قاتارلىق كۆرسەتكۈچ تۈرلىرىدىكى سۇيۇقلۇق بىئوپوسسىيەلەر ئادەتتە دېڭىز بويىدىكى دېڭىز-ئوكيان ئېكولوگىيە سىستېمىسىدا ياشايدىغان ساھىبجاماللارنى يۇقۇملاندۇرىدىغان مەلۇم ساندىكى ccfDNA ۋىرۇس پارچىلىرىنى پەرقلەندۈرۈشكە ئىشلىتىلىدۇ.بۇ پروتوزو ، بوغۇم ئاغرىقى ، ھاشارات ، ئۆسۈملۈك ۋە باكتېرىيە ۋىرۇسى (مەسىلەن ، باكتېرىيە) نى يۇقۇملاندۇرىدىغان ۋىرۇسلارنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.مۇشۇنىڭغا ئوخشاش تارقىلىشچانلىقى Kerguelen دىكى ئوخشاش مۇسكۇل قەۋىتىدە توپلانغان كۆك مۇسكۇل (M. platensis) نىڭ قان ئېرىشچان ccfDNA ۋىرۇسىنى تەكشۈرگەندە تېپىلدى (S2 جەدۋەل ، قوشۇمچە ئۇچۇرلار).CcfDNA نىڭ ئوق ئېتىش تەرتىپى ھەقىقەتەن ئىنسانلار ياكى باشقا جانلىقلارنىڭ ۋىرۇسىنى تەتقىق قىلىشتا جانلىنىۋاتقان يېڭى ئۇسۇل [21, 37, 64].بۇ خىل ئۇسۇل قوش يۆنىلىشلىك DNA ۋىرۇسىنى تەتقىق قىلىشقا ئالاھىدە پايدىلىق ، چۈنكى بالتىموردىكى ئەڭ كۆپ خىل ۋە كەڭ تۈردىكى ۋىرۇسلارغا ۋەكىللىك قىلىدىغان قوش لىنىيىلىك DNA ۋىرۇسى ئىچىدە ھېچقانداق گېن ساقلانمايدۇ [65].گەرچە بۇ ۋىرۇسلارنىڭ كۆپىنچىسى مەخپىيلەشتۈرۈلمىگەن بولۇپ ، ۋىرۇس دۇنياسىنىڭ پۈتۈنلەي نامەلۇم يېرىدىن كەلگەن ۋىرۇسلارنى ئۆز ئىچىگە ئالغان بولۇشى مۇمكىن [66] ، بىز مۇسكۇللارنىڭ A. atra ۋە M. platensis نىڭ ۋىرۇس ۋە ساھىبجامال دائىرىسىنىڭ بۇ ئىككى خىل جانلىقنىڭ ئارىسىدا ئىكەنلىكىنى بايقىدۇق.ئوخشاشلا (S3 رەسىمگە قاراڭ ، قوشۇمچە ئۇچۇرلار).بۇ ئوخشاشلىق ھەيران قالارلىق ئەمەس ، چۈنكى ئۇ مۇھىتتا بار بولغان DNA نى قوبۇل قىلىشتا تاللاشنىڭ كەملىكىنى ئەكس ئەتتۈرۈشى مۇمكىن.RNA ۋىرۇسىنى خاراكتېرلەندۈرۈش ئۈچۈن ھازىر ساپلاشتۇرۇلغان RNA ئارقىلىق كەلگۈسى تەتقىقاتلار لازىم.
تەتقىقاتىمىزدا ، كوۋارسكى ۋە خىزمەتداشلىرىنىڭ خىزمىتىگە ماسلاشتۇرۇلغان ئىنتايىن قاتتىق تۇرۇبا يولىنى قوللاندۇق [37] ، ئۇلار يەرلىك ccfDNA قۇراشتۇرۇشنىڭ ئالدى-كەينىدە ئىككى باسقۇچلۇق بىرلەشتۈرۈلگەن ئوقۇش ۋە قىستۇرمىلارنى ئۆچۈرۈۋەتتى ، نەتىجىدە سىزىلمىغان ئوقۇش نىسبىتى يۇقىرى بولدى.شۇڭلاشقا ، بىز بۇ سىزىلمىغان ئوقۇشلۇقلارنىڭ بەزىلىرىنىڭ يەنىلا ئۆزىنىڭ كېلىپ چىقىشى مۇمكىنلىكىنى نەزەردىن ساقىت قىلالمايمىز ، بۇنىڭ ئاساسلىق سەۋەبى بىزدە بۇ مۇسكۇل تۈرىگە ئائىت گېن يوق.بىز بۇ تۇرۇبا يولىنىمۇ ئىشلەتتۇق ، چۈنكى بىز ئۆزىمىز ۋە ئۆزى ئوقۇمايدىغان ئوقۇشلۇق ۋە Illumina MiSeq PE75 ھاسىل قىلغان ئوقۇش ئۇزۇنلۇقى ئوتتۇرىسىدىكى ۋاقىت مەسىلىسىگە كۆڭۈل بۆلدۇق.كۆپلەپ ئوقۇلمىغان ئوقۇشنىڭ يەنە بىر سەۋەبى شۇكى ، دېڭىزدىكى مىكروبلارنىڭ كۆپىنچىسى ، بولۇپمۇ كېرگۇئېلېن قاتارلىق يىراق رايونلاردا ئىزاھلانمىغان.بىز ccfDNA پارچىسىنىڭ ئۇزۇنلۇقى ئىنسانلارنىڭ ccfDNA غا ئوخشايدىغانلىقىنى پەرەز قىلىپ Illumina MiSeq PE75 نى ئىشلەتتۇق.كەلگۈسىدىكى تەتقىقاتلارغا نىسبەتەن ، گېمولىمفا ccfDNA نىڭ ئىنسانلار ۋە ياكى سۈت ئەمگۈچىلەردىن ئۇزۇنراق ئوقۇلىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدىغان نەتىجىمىزنى ئويلاشقاندا ، ئۇزۇنراق ccfDNA پارچىلىرىغا تېخىمۇ ماس كېلىدىغان تەرتىپ سۇپىسىنى ئىشلىتىشنى تەۋسىيە قىلىمىز.بۇ ئەمەلىيەت تېخىمۇ چوڭقۇر تەھلىل قىلىش ئۈچۈن تېخىمۇ كۆپ كۆرسەتكۈچلەرنى بايقاشنى تېخىمۇ ئاسانلاشتۇرىدۇ.ھازىر ئېرىشكىلى بولمايدىغان مۇكەممەل بولغان A. ئاترا يادرو گېن گۇرۇپپىسىنىڭ تەرتىپىگە ئېرىشىشمۇ ccfDNA نىڭ ئۆزىنى ۋە ئۆزى بولمىغان مەنبەلەردىن كەمسىتىلىشىنى زور دەرىجىدە ئاسانلاشتۇرىدۇ.تەتقىقاتىمىزنىڭ سۇيۇقلۇق بىئوپسىسىيە ئۇقۇمىنى مۇسكۇللارغا قوللىنىش مۇمكىنچىلىكىگە مەركەزلەشكەنلىكىنى كۆزدە تۇتۇپ ، بۇ ئۇقۇمنىڭ كەلگۈسىدىكى تەتقىقاتتا قوللىنىلىشى بىلەن ، يېڭى قورال ۋە تۇرۇبا يولىنىڭ تەرەققىي قىلىپ ، بۇ خىل ئۇسۇلنىڭ مۇسكۇللارنىڭ مىكروبلارنىڭ كۆپ خىللىقىنى تەتقىق قىلىش يوشۇرۇن كۈچىنى ئاشۇرۇشىنى ئۈمىد قىلىمىز.دېڭىز-ئوكيان ئېكولوگىيە سىستېمىسى.
تاجاۋۇز قىلمايدىغان كلىنىكىلىق بىئولوگىيىلىك ماركا بولۇش سۈپىتى بىلەن ، ccfDNA نىڭ ئىنسانلارنىڭ پلازما سەۋىيىسىنىڭ يۇقىرى كۆتۈرۈلۈشى ھەر خىل كېسەللىكلەر ، توقۇلمىلارنىڭ بۇزۇلۇشى ۋە بېسىم ئەھۋالى بىلەن مۇناسىۋەتلىك [67,68,69].بۇ كۆپىيىش توقۇلمىلار بۇزۇلغاندىن كېيىن ئۆزىنىڭ كېلىپ چىققان DNA پارچىلىرىنىڭ قويۇپ بېرىلىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك.بىز بۇ مەسىلىنى جىددىي ئىسسىقلىق بېسىمى ئارقىلىق ھەل قىلدۇق ، بۇنىڭدا مۇسكۇللار 30 سېلسىيە گرادۇسلۇق تېمپېراتۇرا بىلەن قىسقا ۋاقىت ئۇچراشتى.بىز ئۈچ مۇستەقىل تەجرىبىدە ئوخشىمىغان ئۈچ خىل مۇسكۇل ئۈستىدە بۇ تەھلىلنى ئېلىپ باردۇق.قانداقلا بولمىسۇن ، بىز جىددىي ئىسسىقلىق بېسىمىدىن كېيىن ccfDNA سەۋىيىسىدە ھېچقانداق ئۆزگىرىش بايقىمىدۇق (S5 رەسىمگە قاراڭ ، قوشۇمچە ئۇچۇرلار).بۇ بايقاش مۇسكۇللارنىڭ يېرىم ئوچۇق قان ئايلىنىش سىستېمىسىنىڭ بارلىقىنى ۋە سۈزۈش پائالىيىتىنىڭ يۇقىرى بولۇشى سەۋەبىدىن چەتئەلنىڭ DNA سىنىڭ كۆپ مىقداردا توپلىنىدىغانلىقىنى چۈشەندۈرۈپ بېرەلەيدۇ.يەنە بىر جەھەتتىن ، مۇسكۇللار نۇرغۇنلىغان ئومۇرتقىسىز ھايۋانلارغا ئوخشاش ، بېسىم كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغان توقۇلمىلارنىڭ بۇزۇلۇشىغا تېخىمۇ قارشى تۇرالايدۇ ، بۇ ئارقىلىق ئۇلارنىڭ قان تومۇردا ccfDNA نىڭ قويۇپ بېرىلىشىنى چەكلەپ قويىدۇ [70, 71].
ھازىرغا قەدەر ، سۇ ئېكولوگىيە سىستېمىسىدىكى جانلىقلارنىڭ كۆپ خىللىقىنى ئانالىز قىلىش ئاساسلىقى مۇھىت DNA (eDNA) مېتابولىزىمغا مەركەزلەشتى.قانداقلا بولمىسۇن ، بۇ ئۇسۇل ئادەتتە پىرىمېرلار ئىشلىتىلگەندە جانلىقلارنىڭ كۆپ خىللىقىنى تەھلىل قىلىشتا چەكلىنىدۇ.مىلتىق تەرتىپىنى ئىشلىتىش PCR نىڭ چەكلىمىسى ۋە دەسلەپكى يۈرۈشلۈك تاللاشلارنى بىر تەرەپلىمە تاللاشتىن ھالقىپ كەتتى.شۇڭا ، مەلۇم مەنىدىن ئېيتقاندا ، بىزنىڭ ئۇسۇلىمىز يېقىندا ئىشلىتىلگەن يۇقىرى ئۈنۈملۈك eDNA Shotgun تەرتىپلەش ئۇسۇلىغا تېخىمۇ يېقىن بولۇپ ، ئۇ پارچىلىنىپ كەتكەن DNA نى بىۋاسىتە رەتلىيەلەيدۇ ۋە بارلىق جانلىقلارنى دېگۈدەك تەھلىل قىلالايدۇ [72, 73].قانداقلا بولمىسۇن ، LB نى ئۆلچەملىك eDNA ئۇسۇلى بىلەن پەرقلەندۈرىدىغان بىر قاتار نېگىزلىك مەسىلىلەر بار.ئەلۋەتتە ، eDNA بىلەن LB نىڭ ئاساسلىق پەرقى تەبىئىي سۈزگۈچ ساھىبجاماللىرىنى ئىشلىتىش.EDNA نى تەتقىق قىلىدىغان تەبىئىي سۈزگۈچ سۈپىتىدە سپونس ۋە بۈركۈت (Dresseina spp.) قاتارلىق دېڭىز-ئوكيان تۈرلىرىنىڭ ئىشلىتىلىشى دوكلات قىلىنغان [74, 75].قانداقلا بولمىسۇن ، درېيسېنانىڭ تەتقىقاتىدا DNA ئېلىنغان توقۇلمىلار بىئوپسىيىسى ئىشلىتىلگەن.LB دىن ccfDNA نى ئانالىز قىلغاندا توقۇلما بىئوپوسسىيە ، مەخسۇس ۋە بەزىدە قىممەت باھالىق ئۈسكۈنىلەر ۋە ئەشيا ئوبوروتى eDNA ياكى توقۇلمىلار بىئوپسىيىسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك ئەمەس.ئەمەلىيەتتە ، بىز يېقىندا LB دىن كەلگەن ccfDNA نى سوغۇق زەنجىرنى ساقلىماي تۇرۇپ FTA قوللىشى بىلەن ساقلىغىلى ۋە تەھلىل قىلغىلى بولىدىغانلىقىنى خەۋەر قىلدۇق ، بۇ يىراق رايونلاردىكى تەتقىقاتتىكى بىر چوڭ رىقابەت [76].CcfDNA نى سۇيۇق بىئوپوسسىيەدىن ئېلىشمۇ ئاددىي بولۇپ ، مىلتىق تەرتىپى ۋە PCR ئانالىزى ئۈچۈن يۇقىرى سۈپەتلىك DNA بىلەن تەمىنلەيدۇ.بۇ eDNA تەھلىلى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بەزى تېخنىكىلىق چەكلىمىلەرنى نەزەردە تۇتقاندا ناھايىتى ياخشى ئەۋزەللىك.ئەۋرىشكە ئېلىش ئۇسۇلىنىڭ ئاددىيلىقى ۋە تۆۋەن تەننەرخى ئۇزۇن مۇددەتلىك كۆزىتىش پروگراممىسىغىمۇ ئالاھىدە ماس كېلىدۇ.ئۇلارنىڭ سۈزۈش ئىقتىدارى يۇقىرى بولغاندىن باشقا ، تىرناقنىڭ يەنە بىر داڭلىق ئالاھىدىلىكى ئۇلارنىڭ شىللىق پەردىسىنىڭ خىمىيىلىك مۇكوپولىساخارىد تەركىبى بولۇپ ، ۋىرۇسلارنىڭ سۈمۈرۈلۈشىنى ئىلگىرى سۈرىدۇ [78, 79].بۇ ئىككى خىل جانلىقنىڭ جانلىقلارنىڭ كۆپ خىللىقى ۋە كېلىمات ئۆزگىرىشنىڭ مەلۇم سۇ ئېكولوگىيە سىستېمىسىدىكى تەسىرىنى خاراكتېرلەندۈرۈشتىكى كۆڭۈلدىكىدەك تەبىئىي سۈزگۈچكە ئايلاندۇرىدۇ.گەرچە ساھىبجامالدىن ھاسىل بولغان DNA پارچىلىرىنىڭ مەۋجۇتلۇقىنى eDNA غا سېلىشتۇرغاندا بۇ ئۇسۇلنىڭ چەكلىمىسى دەپ قاراشقا بولسىمۇ ، ئەمما ساغلاملىق تەتقىقاتى ئۈچۈن تەمىنلەنگەن نۇرغۇن ئۇچۇرلار ئۈچۈن eDNA غا سېلىشتۇرغاندا ، بۇنداق يەرلىك ccfDNA نىڭ بولۇشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك چىقىمنى بىرلا ۋاقىتتا چۈشىنىشكە بولىدۇ.offset host.بۇ ساھىبجامالنىڭ گېن گۇرۇپپىسىغا بىرلەشتۈرۈلگەن ۋىرۇس تەرتىپلىرىنىڭ مەۋجۇتلۇقىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.بۇ مۇسكۇللاردا گورىزونتال ئارقىلىق تارقىلىدىغان ئاق قان ۋىرۇسىنىڭ مەۋجۇتلۇقىنى كۆزدە تۇتۇپ ، مۇسكۇللار ئۈچۈن ئىنتايىن مۇھىم [80, 81].LB نىڭ eDNA غا قارىغاندا يەنە بىر ئارتۇقچىلىقى شۇكى ، ئۇ مىكرو ئورگانىزملارنى (ۋە ئۇلارنىڭ گېنلىرىنى) يۇتۇۋالىدىغان قان ھۈجەيرىسىدىكى قان ھۈجەيرىسىنىڭ ئايلىنىش پائالىيىتىدىن پايدىلىنىدۇ.فاكوسېتوز قان تومۇردىكى قان ھۈجەيرىسىنىڭ ئاساسلىق رولى [82].ئاخىرىدا ، بۇ ئۇسۇل مۇسكۇللارنىڭ سۈزۈش ئىقتىدارىدىن يۇقىرى (دېڭىز سۈيىنىڭ ئوتتۇرىچە 1.5 لېتىر / سائەت) ۋە ئىككى كۈنلۈك ئايلىنىشىدىن پايدىلىنىپ ، ئوخشىمىغان قاتلامدىكى دېڭىز سۈيىنىڭ ئارىلاشمىسىنى ئاشۇرۇپ ، گېروولوگىيىلىك eDNA نى قولغا كەلتۈرەلەيدۇ.[83, 84].شۇڭا ، مۇسكۇل ccfDNA ئانالىزى مۇسكۇللارنىڭ ئوزۇقلۇق ، ئىقتىسادىي ۋە مۇھىت تەسىرىنى كۆزدە تۇتۇپ قىزىقارلىق بىر يول.ئىنسانلاردىن توپلانغان LB ئانالىزىغا ئوخشاش ، بۇ ئۇسۇل يەنە تاشقى ماددىلارنىڭ ئىنكاسىغا ئاساسەن ساھىبجامال DNA دىكى گېن ۋە يەرلىك ئۆزگىرىشلەرنى ئۆلچەش مۇمكىنچىلىكىنى ئاچىدۇ.مەسىلەن ، ئۈچىنچى ئەۋلاد تەرتىپلەش تېخنىكىلىرىنى نانوپور تەرتىپى ئارقىلىق يەرلىك ccfDNA دا گېننىڭ كەڭ كۆلەمدە مېتىل ئانالىزى قىلىشنى تەسەۋۋۇر قىلىشقا بولىدۇ.بۇ جەريان مۇسكۇل مۇسكۇلى ccfDNA پارچىلىرىنىڭ ئۇزۇنلۇقىنىڭ ئۇزۇن ئوقۇلغان تەرتىپلىك سۇپىلار بىلەن ئەڭ ماس كېلىدىغانلىقى ، خىمىيىلىك ئۆزگەرتىشنىڭ ھاجىتى يوق گېن گۇرۇپپىسىدىكى DNA مېتىل ئانالىزىنىڭ يەككە تەرتىپ بويىچە يۈرگۈزۈلۈشىگە شارائىت ھازىرلاپ بېرەلەيدىغانلىقى ئۈچۈن.شۇڭلاشقا ، ئۇ كېلىمات ئۆزگىرىشى ياكى بۇلغىمىلارنىڭ تەسىرىگە ئۇچرىغاندىن كېيىن ئىنكاس قايتۇرىدىغان ئاساسىي مېخانىزملار ھەققىدە قىممەتلىك چۈشەنچە بېرەلەيدۇ [87].قانداقلا بولمىسۇن ، LB نى ئىشلىتىش چەكلىمىگە ئۇچرىمايدۇ.دېمىسىمۇ ، بۇ ئېكولوگىيىلىك سىستېمىدا كۆرسەتكۈچ تۈرلىرىنىڭ بولۇشىنى تەلەپ قىلىدۇ.يۇقىرىدا دەپ ئۆتكىنىمىزدەك ، LB ئارقىلىق مەلۇم ئېكولوگىيىلىك سىستېمىنىڭ جانلىقلارنىڭ كۆپ خىللىقىنى باھالاش ئۈچۈن ، مەنبەدىن DNA پارچىلىرىنىڭ بارلىقىنى نەزەردە تۇتۇپ ، قاتتىق بىيو ئۇچۇرلاشتۇرۇش تۇرۇبىسى تەلەپ قىلىنىدۇ.يەنە بىر چوڭ مەسىلە دېڭىز-ئوكيان تۈرلىرىنىڭ پايدىلىنىش گېنلىرىنىڭ بولۇشى.دېڭىز-ئوكيان سۈت ئەمگۈچىلەر گېن گۇرۇپپىسى ۋە يېقىندا قۇرۇلغان Fish10k تۈرى [88] قاتارلىق تەشەببۇسلارنىڭ كەلگۈسىدە بۇ خىل تەھلىلنى ئاسانلاشتۇرۇشىنى ئۈمىد قىلىمىز.LB ئۇقۇمىنىڭ دېڭىز سۈزگۈچنى ئوزۇقلاندۇرىدىغان جانلىقلارغا قوللىنىلىشىمۇ تەرتىپلەش تېخنىكىسىنىڭ ئەڭ يېڭى تەرەققىياتىغا ماس كېلىدۇ ، ئۇ مۇھىت بېسىمىغا تاقابىل تۇرۇش ئۈچۈن دېڭىز-ئوكيان ياشاش مۇھىتىنىڭ ساغلاملىقىغا مۇناسىۋەتلىك مۇھىم ئۇچۇرلار بىلەن تەمىنلەش ئۈچۈن ، كۆپ خىل ئوخ بىئولوگىيىلىك ماركا تەرەققىياتىغا ماس كېلىدۇ.
گېن تەرتىپلەش سانلىق مەلۇماتلىرى NCBI تەرتىپلىك ئوقۇش ئارخىپىغا قويۇلغان https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra/SRR8924808 Bioprojects SRR8924808.
Brierley AS ، Kingsford MJ كىلىمات ئۆزگىرىشىنىڭ دېڭىز جانلىقلىرى ۋە ئېكولوگىيە سىستېمىسىغا كۆرسىتىدىغان تەسىرى.Cole Biology.2009;19: P602 - P614.
Gissi E, Manea E, Mazaris AD, Fraschetti S, Almpanidou V, Bevilacqua S قاتارلىقلار.كىلىمات ئۆزگىرىشى ۋە باشقا يەرلىك بېسىملارنىڭ دېڭىز-ئوكيان مۇھىتىغا كۆرسىتىدىغان تەسىرىنى ئويلىشىپ كۆرۈڭ.ئادەتتىكى ئىلمىي مۇھىت.2021 ؛ 755: 142564.
كارېللا F ، ئانتۇئوفېرمو E ، فارىنا S ، سالاتى F ، مانداس D ، پرادو P قاتارلىقلار.).3-ئاينىڭ بىرىنچى كۈنىدىكى ئىلىم.2020; 7: 48.
Seront L, Nicastro CR, Zardi GI, Goberville E. قايتا-قايتا ئىسسىقلىق بېسىمى شارائىتىدا ئىسسىققا بەرداشلىق بېرىش ئىقتىدارىنى تۆۋەنلىتىش كۆك مۇچنىڭ يازدىكى ئۆلۈش نىسبىتىنى چۈشەندۈرۈپ بېرىدۇ.ئىلمىي دوكلات 2019;9: 17498.
Fey SB, Siepielski AM, Nussle S, Cervantes-Yoshida K, Hwan JL, Huber ER قاتارلىقلار.ھايۋانلارنىڭ ئۆلۈش قېتىم سانى ، سەۋەبى ۋە دائىرىسىدىكى يېقىنقى ئۆزگىرىشلەر.Proc Natl Acad Sci USA.2015; 112: 1083-8.
Scarpa F, Sanna D, Azzena I, Mughetti D, Cerruti F, Hosseini S قاتارلىقلار.كۆپ خىل بولمىغان ئالاھىدە كېسەللىك قوزغاتقۇچى پىننا نوبىلىسنىڭ كەڭ كۆلەمدە ئۆلۈشىنى كەلتۈرۈپ چىقارغان بولۇشى مۇمكىن.ھايات.2020; 10: 238.
Bradley M, Coutts SJ, Jenkins E, O'Hara TM.كىلىمات ئۆزگىرىشىنىڭ شىمالىي قۇتۇپ رايۇنىدىكى كېسەللىكلەرگە كۆرسىتىدىغان تەسىرى.Int J ئايلانما ساغلاملىق.2005;64: 468–77.
Beyer J., Greene NW, Brooks S., Allan IJ, Ruus A., Gomez T. قاتارلىقلار.كۆك مۇچ (Mytilus edulis spp.) دېڭىز قىرغىقىدىكى بۇلغىنىشنى نازارەت قىلىشتىكى سىگنال جانلىقلىرى سۈپىتىدە: تەكشۈرۈش.Mar Environ Res 2017;130: 338-65.
Siravegna G, Marsoni S, Siena S, Bardelli A. راكنى داۋالاشتا سۇيۇق بىئوپوسسىيەنىڭ بىرىكىشى.Nat Rev Clean Oncol.2017;14: 531–48.
Wan JCM, Massie C, Garcia-Corbacho J, Mouliere F, Brenton JD, Caldas C قاتارلىقلار.سۇيۇق بىئوپسىسىيەنىڭ يېتىلىشى: ئۆسمە DNA نىڭ ئايلىنىشىغا يول قويىدۇ.Nat Rev راك.2017; 17: 223–38.
ماندېل P. ، Metais P. ئىنسانلارنىڭ پلازمىسىدىكى يادرو كىسلاتاسى.Soc Biol تارماق شىركەتلىرىنىڭ يىغىن خاتىرىسى.1948-يىل.142: 241-3.
Bronkhorst AJ ، Ungerer W ، Holdenrieder S. راكنى داۋالاشنىڭ مولېكۇلا بەلگىسى سۈپىتىدە ھۈجەيرىسىز DNA نىڭ يېڭى رولى.بىئولوگىيىلىك ئانالىزنىڭ مىقدارى.2019; 17: 100087.
Ignatiadis M., Sledge GW, Jeffrey SS سۇيۇقلۇق بىئوپسىيىسى شىپاخانىغا كىرىدۇ - يولغا قويۇش مەسىلىسى ۋە كەلگۈسى رىقابەت.Nat Rev Clin Oncol.2021;18: 297–312.
Lo YM, Corbetta N., Chamberlain PF, Rai W., Sargent IL, Redman CW قاتارلىقلار.ھامىلىنىڭ DNA سى ئانا پلازمىسى ۋە قان زەردابىدە بولىدۇ.Lancet.1997;350: 485-7.
مۇفارراي MN ، ۋوڭ RJ ، شاۋ ھەممىباب ، ستېۋېنسون DK ، يەر تەۋرەش SR ھامىلىدارلىق جەريانىدىكى ئاياللار قېنىدىكى تاشقى ھۈجەيرە RNA نى ئىشلىتىپ ھامىلىدارلىق جەريانى ۋە ئۇنىڭ ئەگەشمە كېسەللىكلىرىنى تەتقىق قىلدى.دوپپا.2020; 8: 605219.
Ollerich M, Sherwood K, Keown P, Schütz E, Beck J, Stegbauer J قاتارلىقلار.سۇيۇق بىئوپوسسىيە: ئىئانە قىلغۇچى ھۈجەيرىسىز DNA بۆرەك كۆچۈرۈشتىكى ئاللوگېنلىق جاراھەتنى بايقاشقا ئىشلىتىلىدۇ.Nat Rev Nephrol.2021;17: 591–603.
جۈەن FC ، Lo YM تۇغۇتتىن ئىلگىرىكى دىئاگنوز قويۇشتا يېڭىلىق يارىتىش: ئانىلارنىڭ پلازما گېن تەرتىپى.Anna MD.2016; 67: 419-32.
گۇ ۋ ، دېڭ X ، لى م ، سۇكۇ YD ، ئارېۋالو S ، سترىكې D قاتارلىقلار.يۇقۇملانغان بەدەن سۇيۇقلۇقىنىڭ كېيىنكى ئەۋلاد مېتاگېنومىيىلىك تەرتىپى بىلەن تېز كېسەللىك قوزغاتقۇچ بايقاش.Nat Medicine.2021; 27: 115-24.