Javascript наразі вимкнено у вашому браузері. Деякі функції цього веб-сайту не працюватимуть, якщо JavaScript вимкнено.
Зареєструйтесь із вашими конкретними даними та конкретним препаратом, який вас цікавить, і ми зіставимо надану вами інформацію зі статтями в нашій великій базі даних і негайно надішлемо вам копію у форматі PDF.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Стефанія Стелла, 1,2 Сільвія Ріта Вітале, 1,2 Федеріка Марторана, 1,2 Мікеле Массіміно, 1,2 Джуліана Павоне, 3 Катя Ланцафаме, 3 Себастьяно Б'янка, 4 К'яра Бароне, 5 Крістіна Горгоне, 6 Марко Фічера, 6, 7 Лівія Манзелла1,21 Відділ клінічної та експериментальної медицини cine, Університет Катанії, Катанія, 95123, Італія;2 Центр експериментальної онкології та гематології, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Катанія, 95123, Італія;3 Медична онкологія АОУ Поліклініка «Г.Rodolico – San Marco”, Катанія, 95123, Італія;4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Катанія, 95123, Італія;5 Medicine Genetics, ASP, Сіракузи, 96100, Італія;6 Департамент біомедичних і біотехнологічних наук, Університет Катанії, медична генетика, Катанія, Італія, 95123;7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Італія Комунікації: Стефанія Стелла, тел. +39 095 378 1946, електронна адреса [електронна пошта захищена];[електронна пошта захищена] Мета: мутації зародкової лінії в BRCA1 і BRCA2 і встановлений рак молочної залози (РМЗ), яєчників (РЯ) та інші, пов’язані з довічним ризиком розвитку раку. Тестування на ген BRCA є ключовим для оцінки індивідуального ризику, а також для пошуку методів профілактики у здорових носіїв і підбору лікування для хворих на рак. Поширеність змін BRCA1 і BRCA2 сильно відрізняється в різних географічних регіонах, і хоча існують дані про BRCA1. Патогенні варіанти КА в сицилійських сім’ях, дослідження, спрямовані спеціально на популяції у східній Сицилії, відсутні. Метою нашого дослідження було дослідити частоту та поширення патогенних змін зародкової лінії BRCA у когорті пацієнтів з РМЖ зі східної Сицилії та оцінити їх зв’язок із специфічними ознаками РМЗ за допомогою секвенування наступного покоління. Наявність змін корелювала зі ступенем пухлини та індексом проліферації. РЕЗУЛЬТАТИ. Загалом 35 пацієнтів (9%) мали патогенний варіант BRCA, 17 (49%) — BRCA1 і 18 (51%) — BRCA2. Зміни BRCA1 переважають у пацієнтів із потрійним негативним РМЗ, тоді як мутації BRCA2 частіше зустрічаються у пацієнтів із просвітним РМЗ. Порівняно з неносіями суб’єкти з варіантами BRCA1 мали значно вищий ступінь ступеня пухлини та проліфер. Висновки: наші результати надають огляд мутаційного статусу BRCA у пацієнтів з РМЗ зі східної Сицилії та підтверджують роль аналізу NGS у виявленні пацієнтів зі спадковим РМЗ. Загалом ці дані узгоджуються з попередніми доказами, що підтверджують скринінг BRCA для належної профілактики та лікування раку у носіїв мутації.
Рак молочної залози (РМЗ) є найпоширенішим злоякісним новоутворенням у всьому світі та найбільш смертоносним раком у жінок.1 Біологічні особливості, які визначають прогноз РМЗ і клінічну поведінку, були ретельно вивчені та частково з’ясовані з часом. Насправді, наразі використовується кілька сурогатних маркерів для класифікації РМЗ на різні молекулярні підтипи. Це рецептор естрогену (ER) та/або прогестерону (PgR), ампліфікація рецептора людського епідермального фактора росту 2 (HER2). , індекс проліферації Ki-67 і ступінь пухлини (G).2 Комбінація цих змінних визначила наступні категорії РМЗ: 1) Люмінальні пухлини, що демонструють експресію ER та/або PgR, спричиняли 75% РМЖ. Ці пухлини були далі розділені на Люмінальні А, коли Ki-67 був нижче 20% і HER2 негативний, і Люмінальні B, коли Ki-67 дорівнював або перевищував 20% і в присутності ампліфікація HER2, незалежно від індексу проліферації;2) HER2+ пухлини, які є ER та PgR негативними, але мають ампліфікацію HER2. На цю групу припадає 10% усіх пухлин молочної залози;3) Потрійний негативний рак молочної залози (TNBC), який не показує експресії ER та PgR та ампліфікації HER2, становить близько 15% випадків раку молочної залози.2-4
Серед цих підтипів РМЗ ступінь пухлини та індекс проліферації представляють перехресні біомаркери, які прямо та незалежно пов’язані з агресивністю та прогнозом пухлини.5,6
На додаток до вищезазначених біологічних особливостей, роль успадкованих генетичних змін, що призводять до розвитку РМЗ, стає все більш важливою протягом останніх кількох років. Приблизно 1 з 10 пухлин молочної залози успадковується через зміни зародкової лінії в конкретних генах. 8 Два великих епідеміологічних дослідження за участю понад 180 000 жінок нещодавно ідентифікували групу з восьми генів (тобто ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C і RAD51D), головним чином відповідальними за спадковий РМЗ. Серед цих генів BRCA1 і BRCA2 (надалі BRCA1/2) показали найсильнішу кореляцію з розвитком пухлин молочної залози.9-12 Фактично, мутації зародкової лінії BRCA1/2 значно підвищують ризик РМЗ протягом життя, а також інших злоякісних новоутворень, включаючи яєчники, передміхурової залози, підшлункової залози, колоректальної та меланоми. У віці від 13 до 80 років кумулятивна частота РМЗ становить 72% у жінок з патогенним варіантом BRCA1 (PV) і 69% у жінок з BRCA2 PV.14
Примітно, що нещодавня публікація свідчить про те, що ризик РМЗ залежить від типу ПВ. Насправді, порівняно з патогенними усіченими варіантами, яскраві місенс-варіанти, особливо в гені BRCA1, пов’язані зі зниженим ризиком РМЗ, особливо у літніх жінок.15
Наявність PV BRCA1 або BRCA2 була пов’язана з різними біологічними та клініко-патологічними особливостями.16,17 РМЗ, пов’язані з BRCA1, мають тенденцію бути клінічно агресивними, погано диференційованими та високопроліферативними. Ці пухлини зазвичай потрійно негативні та мають ранній вік. Пухлини, які виникають у пацієнтів з мутацією BRCA2, зазвичай мають помірний або добре диференційований ступінь і змінні проліферативні індекси. Ці пухлини частіше зустрічаються в просвіті B і зазвичай виникають у літніх людей.16-18 Слід зазначити, що мутації в BRCA1 і BRCA2 підвищують чутливість до специфічних методів лікування, включаючи солі платини та цільові препарати, такі як інгібітори полі(АДФ-рибози) полімерази (PARPi).19,20
Протягом останніх кількох років впровадження секвенування наступного покоління (NGS) у клінічній практиці дозволило все більшій кількості пацієнтів з РМЗ пройти молекулярне тестування на синдроми сприйнятливості до раку, включаючи BRCA1/2.21 Одночасно визначення на основі точних критеріїв щодо сімейної історії, демографічних та клініко-патологічних характеристик для кращого визначення осіб, які заслуговують на тестування BRCA1/2.22,23 У цьому контексті докази e накопичується під час скринінгу BRCA1/2 у певних популяціях, підкреслюючи відмінності між географічними регіонами.24–27 Хоча є повідомлення про когорту РМЖ у західній Сицилії, доступно менше даних щодо скринінгу BRCA1/2 у популяції східної Сицилії.28,29
Тут ми описуємо результати скринінгу зародкової лінії BRCA1/2 у пацієнтів з РМЖ зі східної Сицилії, додатково корелюючи наявність мутацій BRCA1 або BRCA2 з основними клініко-патологічними особливостями цих пухлин.
Ретроспективне дослідження було проведено в «Центрі експериментальної онкології та гематології» в Policlinico Hospital.Rodolico – San Marco в Катанії. З січня 2017 року по березень 2021 року загалом 455 пацієнтів із раком молочної залози та яєчників, меланомою, підшлунковою або передміхуровою залозою були направлені в нашу молекулярно-діагностичну лабораторію для генетичного тестування BRCA/2. Це дослідження проводилося відповідно до Декларації раціону Гельсінкі, і всі учасники надали письмову інформовану згоду перед молекулярним аналізом.
Гістологічні та біологічні характеристики (ER, PgR, статус HER2, Ki-67 та ступінь) РМЗ оцінювали на основі біопсії або хірургічних зразків, враховуючи лише агресивні компоненти пухлини. На основі цих характеристик РМЗ класифікували наступним чином: просвіт A (ER+ та/або PgR+, HER2-, Ki-67<20%), просвіт B (ER+ та/або PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), люмінальний B-HER2+ (ER та/або PgR+, HER2+), HER2+ (ER та PgR-, HER2+) або тричі негативний (ER та PgR-, HER2-).
Перед оцінкою статусу мутації BRCA1 і BRCA2 мультидисциплінарна команда, яка включала онколога, генетика та психолога, провела консультацію щодо генетики пухлини для кожного пацієнта, щоб визначити наявність BRCA1 та/або BRCA1.або особи з високим ризиком ПВ у гені BRCA2. Відбір пацієнтів проводився відповідно до рекомендацій Італійського товариства медичної онкології (AIOM) та місцевих сицилійських рекомендацій.30,31 Ці критерії включають: (i) сімейний анамнез відомих патогенних варіантів генів сприйнятливості (наприклад, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) самці з БК;(iii) з BC і OC;(iv) жінки з РМЗ <36 років, ТНМЦ <60 років або двосторонній РМЗ <50 років;(v) особиста медична історія РМЖ <50 років і принаймні один родич першого ступеня: (а) БМР <50 років;(b) немуцинозний та непограничний РЯ будь-якого віку;(в) двосторонній БК;г) чоловічий БК;(e) рак підшлункової залози;(f) рак простати;(vi) два або більше випадків РМЗ понад 50 років в особистому анамнезі та сімейна історія РМЗ, РЯ або раку підшлункової залози для родичів, які є родичами першого ступеня (включаючи родичів, з якими вона є родичами першого ступеня);(vii) Особистий анамнез РЯ та принаймні один родич першого ступеня: (a) до н.е. <50 років;(b) НОК;(в) двосторонній БК;г) чоловічий БК;(vii) жінка з серозним РЯ високого ступеня.
У кожного пацієнта було взято 20 мл зразка периферичної крові та зібрано в пробірки з EDTA (BD Biosciences). Геномну ДНК виділяли із 0,7 мл зразків цільної крові за допомогою QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Італія) відповідно до інструкцій виробника та пропускали через флуорометр Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Wal там, Массачусетс, США) Виконайте кількісне визначення.Збагачення мішені та підготовка бібліотеки виконується Chef-аналізатором Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, готовим до завантаження в набір реагентів Ion AmpliSeq™ Chef DL8 для автоматизованої підготовки бібліотеки відповідно до інструкцій виробника. Набір складається з двох мультиплексних пулів праймерів для ПЛР, які можна використовувати для дослідження всіх генів BRCA1 (NM_007300.3) і BRCA2 (NM_000059.3).B Коротше кажучи, 15 мкл кожного розведеного зразка ДНК (10 нг) додавали до планшетів зі штрих-кодом для підготовки бібліотеки, а всі реагенти та витратні матеріали завантажували на прилад Ion Chef™. Потім автоматизовану підготовку бібліотеки та об’єднання бібліотек штрих-кодів проводили на приладі Ion Chef™. Потім кількість підготовлених бібліотек оцінювали за допомогою флуорометра Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Walt). ham, Массачусетс, США) згідно з інструкціями виробника. Нарешті, бібліотеки об’єднують в еквімолярних співвідношеннях у пробірках для зразків бібліотеки Ion Chef™ (пробірках зі штрих-кодом) і завантажують на прилад Ion Chef™. Секвенування проводили за допомогою приладу Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) з використанням мікросхеми Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Аналіз проводився за допомогою Amplicon Suite (SmartSeq srl) і програмного забезпечення Ion Reporter.
Уся номенклатура варіантів відповідала поточним рекомендаціям Консорціуму варіацій генома людини, доступним в Інтернеті (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Клінічне значення варіантів BRCA1/2 було визначено за допомогою класифікації Міжнародного консорціуму ENIGMA (Мережа на основі доказів для інтерпретації мутантних алелів зародкової лінії, https://enigmaconsortium.org/) та консультації. різні бази даних, такі як ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD і UMD. Класифікація включає п’ять різних категорій ризику: доброякісна (категорія I), ймовірно доброякісна (категорія II), варіант невизначеної значущості (VUS, категорія III), ймовірно патогенна (категорія IV) і патогенна (категорія V). VarSome також проаналізував вплив мутацій на структуру білка і функція, інформаційний інструмент з доступом до 30 баз даних.32
Щоб призначити потенційну клінічну значущість кожному VUS, були використані такі обчислювальні алгоритми прогнозування білка: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) і Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd). _input.php). Варіанти, класифіковані як клас 1 і 2, вважалися диким типом.
Секвенування Сенгера підтвердило наявність кожного патогенного варіанту. Коротко кажучи, для кожного виявленого варіанту була розроблена пара специфічних праймерів за допомогою еталонних послідовностей генів BRCA1 і BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 і NG_012772.3, NM_000059.3, відповідно). Тому була проведена цільова ПЛР, а потім секвенування Сенгера. ncing.
Пацієнти з негативним результатом тесту на ген BRCA1/2 були протестовані методом мультиплексної лігування-залежної ампліфікації зонда (MLPA) відповідно до інструкцій виробника для оцінки наявності великих геномних перебудов (LGR). Коротко, зразки ДНК денатурують і використовують до 60 геноспецифічних зондів BRCA1 і BRCA2, кожен з яких виявляє конкретну послідовність ДНК довжиною приблизно 60 нуклеотидів.Pro. Продукти ампліфікації, що складаються з унікального набору ПЛР-ампліконів, потім аналізували за допомогою капілярного електрофорезу та за допомогою програмного забезпечення Cofalyser.Net у поєднанні з відповідними таблицями Cofalyser для окремих партій (www.mrcholland.com).
Вибрані клініко-патологічні змінні (гістологічний ступінь та індекс проліферації Ki-67%) були пов’язані з наявністю BRCA1/2 PV, розраховані за допомогою програмного забезпечення Prism v. 8.4 з використанням точного критерію Фішера, припускаючи, що p-значення <0,05 є значущим.
З січня 2017 року по березень 2021 року 455 пацієнтів пройшли скринінг на мутації BRCA1/2 зародкової лінії. Тест на мутації проводився в Центрі експериментальної онкології та гематології Policlinico Hospital. Відповідно до сицилійських рекомендацій (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10). Gennaio 2020), Родоліко з Катанії – Сан-Марко», загалом 389 пацієнтів. Був рак молочної залози, 37 — рак яєчників, 16 — рак підшлункової залози, 8 — рак простати та 5 — меланома.Розподіл пацієнтів за типом раку та результатами аналізу показано на рисунку 1.
На малюнку 1 показано блок-схему, яка демонструє огляд дослідження. Пацієнтів із пухлинами молочної залози, меланоми, підшлункової залози, простати або яєчників перевіряли на мутації в генах BRCA1 і BRCA2.
Скорочення: ПВ, патогенний варіант;ВУС, варіант невизначеного значення;WT, послідовність BRCA1/2 дикого типу.
Ми вибірково зосередили наші дослідження на когортах раку молочної залози. Середній вік пацієнтів становив 49 років (діапазон 23-89) і були переважно жінки (n=376, або 97%).
З цих суб’єктів 64 (17%) мали мутації BRCA1/2 і всі були жінками. Тридцять п’ять (9%) мали PV і 29 (7,5%) мали VUS. Сімнадцять (48,6%) із 35 патогенних варіантів мали місце у BRCA1 і 18 (51,4%) у BRCA2, тоді як 5 VUS мали місце у BRCA1 (17,2%) і 24 (82). 0,8%) у BRCA2 (рис. 1 і 2). LGR не був присутній в аналізі MLPA.
Рисунок 2. Аналіз мутацій BRCA1 і BRCA2 у 389 пацієнтів з раком молочної залози. (A) Розподіл патогенних варіантів (PV) (червоний), варіантів невизначеної значущості (VUS) (помаранчевий) і WT (синій) у 389 пацієнтів з раком молочної залози;(B) 389 пацієнтів з раком молочної залози Тридцять п’ять (9%) мали патогенні варіанти (PV) BRCA1/2. Серед них 17 (48,6%) були носіями PV BRCA1 (темно-червоний) і 18 (51,4%) були носіями BRCA2 (світло-червоний);(C) 29 (7,5%) із 389 суб’єктів були носіями VUS, 5 (17,2%) генів BRCA1 (темно-оранжевий) і 24 (82,8%) генів BRCA2 (світло-оранжевий).
Скорочення: ПВ, патогенний варіант;ВУС, варіант невизначеного значення;WT, послідовність BRCA1/2 дикого типу.
Далі ми досліджували поширеність молекулярних підтипів РМЗ у пацієнтів з BRCA1/2 PV. Розподіл включав 2 (5,7%) люмінальний A, 15 (42,9%) люмінальний B, 3 (8,6%) люмінальний B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ та 13 (37,1%) пацієнтів з TNBC. Серед BRCA1-позитивних пацієнтів 5 (29,4) %) мали люмінальний В РМЖ, 2 (11,8%) мали хворобу HER2+ і 10 (58,8%) мали TNBC. Пухлини без мутацій BRCA1 були або люмінальними A, або люмінальними B-HER2+ (рис. 3). У BRCA2-позитивній підгрупі 10 (55,6%) пухлини були люмінальними B, 3 (16,7%) були люмінальними B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC і 2 (11,1%) були просвітом A (рис. 3). У цій групі не було пухлин HER2+. Таким чином, мутації BRCA1 переважають у пацієнтів з TNBC, тоді як зміни BRCA2 переважають у просвіті B осіб.
Рисунок 3. Поширеність підтипів раку молочної залози у пацієнтів із патогенними варіантами BRCA1 і BRCA2. Гістограми, що показують розподіл BRCA1- (темно-червоний) і BRCA2- (світло-червоний) PV серед молекулярних підтипів пацієнтів з раком молочної залози. Числа, зазначені в кожному полі, представляють відсоток пацієнтів з BRCA1 і BRCA2 PV для кожного підтипу раку молочної залози.
Скорочення: ПВ, патогенний варіант;HER2+, позитивний рецептор 2 епідермального фактора росту людини;TNBC, потрійний негативний рак молочної залози.
Згодом ми оцінили тип і локалізацію гена BRCA1 і BRCA2 PV. У BRCA1 PV ми спостерігали 7 однонуклеотидних варіантів (SNV), 6 делецій, 3 дуплікації та 1 вставку. Лише одна мутація (c.5522delG) є новим відкриттям. Найбільш поширеним BRCA1 PV, виявленим в обох суб’єктів, був c.5035_5039 delCTAAT. Ця зміна передбачає делецію п’яти нуклеотидів (CTAAT) в екзоні 15 BRCA1, що призводить до заміни амінокислоти лейцину на тирозин у кодоні 1679, і через зсув рамки трансляції з передбачуваним альтернативним стоп-кодоном призводить до передчасного скорочення білка. Усі інші зміни виявляються лише в одному випадку. Примітно, що одна з зареєстрованих PV була розташована в ділянка консенсусу місця зрощування (c.4357+1G>T) (табл. 1).
Що стосується BRCA2 PV, ми спостерігали 6 делецій, 6 SNV і 2 дуплікації. Жодна зі знайдених змін не є новою. Три мутації повторилися в нашій популяції, c.428dup і c.8487+1G>A спостерігалися у 3 суб’єктів, а потім c.5851_5854delAGTT, отриманий у двох випадках. Зміна c.428dup включає повторення C. в екзоні 5 BRCA2, передбачається, що він кодує усічений нефункціональний білок. Мутація c.8487+1G>A виникає в інтронній області інтрона 19 BRCA2 (± 1,2) і впливає на консенсусну послідовність сплайсингу, що призводить до зміненого сплайсингу, що призводить до аномального або відсутності білка. Патогенний варіант c.5851_5854delAGTT є наслідком до 4-нуклеотидної делеції з нуклеотидних позицій 5851 до 5854 у кодуючому екзоні 10 гена BRCA2 і призводить до трансляційного зсуву рамки з прогнозованим альтернативним стоп-кодоном (p.S1951WfsTer). Примітно, що, як повідомлялося раніше, обидві зміни c.631G>A і c.7008-2A>T були виявлені в одного пацієнта.34 Перша мутація включає заміну аденозину (A) в екзоні 7 BRCA2 на нуклеотид, що містить гуанін (G), що призводить до зміни валіну на ізолейцин у кодоні 211, амінокислота ізолейцину є амінокислотою з дуже схожими властивостями. Ця зміна впливає на нормальний сплайсинг мРНК. Другий варіант розташований у інтронній області та призводить до подвійного А на субтимін (T) перед екзоном 13 гена, що кодує BRCA2. Зміна c.7008-2A>T може генерувати кілька транскриптів різної довжини. Крім того, у групі BRCA2 PV 4 із 18 змін (22,2%) були інтронними.
Потім ми нанесли на карту шкідливі мутації BRCA1/2 у функціональних доменах і білок-зв’язуючих областях (рис. 4). У гені BRCA1 50% PV були розташовані в кластерній області раку молочної залози (BCCR), тоді як 22% мутацій були розташовані в кластерній області раку яєчників (OCCR) (рис. 4A). У BRCA2 PV 35,7% варіантів були розташовані в BCCR. Область CR і 42,8% мутацій були локалізовані в OCCR (рис. 4B). Далі ми оцінили розташування PV в доменах білків BRCA1 і BRCA2. Для білка BRCA1 ми знайшли три PV в доменах петлі та спіралі та дві мутації в домені BRCT (рис. 4A). Для білка BRCA2 4 PV зіставлені з повтором BRC домену, тоді як 3 інтронні та 3 екзонічні зміни були виявлені в оліго/олігосахарид-зв’язувальному (OB) та баштовому (T) доменах (рис. 4B).
Рисунок 4 Схематичне зображення білків BRCA1 і BRCA2 і локалізація патогенних варіантів. На цьому малюнку показано розподіл патогенних варіантів BRCA1 (A) і BRCA2 (B) у пацієнтів з раком молочної залози. Екзонні мутації показані синім кольором, тоді як інтронні варіанти показані помаранчевим кольором. Висота стовпчика відображає кількість випадків. Повідомляється про білки BRCA1 і BRCA2 та їх функціональні домени. (A) BR Білок CA1 містить петлевий домен (RING) і послідовність ядерної локалізації (NLS), спіральний домен, кластерний домен SQ/TQ (SCD) і С-кінцевий домен BRCA1 (BRCT).(B) Білок BRCA2 містить вісім повторів BRC, ДНК-зв’язуючий домен із спіральним доменом (Shelical), три складки, що зв’язують олігонуклеотид/олігосахарид (OB), вежу домен (T) і NLS на стороні C. Ділянки, які називаються кластерною областю раку молочної залози (BCCR) і кластерною областю раку яєчників (OCCR), показані внизу.*Представляє мутації, які визначають стоп-кодони.
Потім ми досліджували клініко-патологічні ознаки РМЗ, які могли б корелювати з наявністю BRCA1/2 PV. Повні клінічні записи були доступні для 181 BRCA1/2-негативного пацієнта (не носіїв) та всіх носіїв (n = 35). Існувала кореляція між швидкістю проліферації пухлини та ступенем.
Ми розрахували розподіл Ki-67 на основі медіани нашої когорти (25%, діапазон <10-90%). Суб’єкти з Ki-67 < 25% були визначені як «низькі Ki-67», а особи зі значеннями ≥ 25% вважалися «високими Ki-67». Значні відмінності Ki-67 (p<0,01) були виявлені між неносіями та носіями BRCA1 PV. s (рис. 5A).
Рисунок 5 Кореляція Ki-67 із розподілом ступенів у жінок з раком молочної залози з і без BRCA1 і BRCA2 PV. (A) Бокс-схема, що показує середні значення Ki-67 у 181 пацієнта без носія РМЗ порівняно з пацієнтами з BRCA1 (18) або BRCA2 (17) PV. Значення P нижче 0,5 вважалися статистично значущими. (B) Гістограма, що представляє розподіл пацієнтів з раком РМЗ на групи гістологічного ступеня (G2 і G3) відповідно до статусу мутації BRCA1 і BRCA2 (суб’єкти WT, носії PV BRCA1 і BRCA2).
Так само ми перевірили, чи ступінь пухлини корелює з наявністю BRCA1/2 PV. Оскільки G1 РМЗ був відсутній у нашій популяції, ми розділили пацієнтів на дві групи (G2 або G3). Відповідно до результатів Ki-67, аналіз виявив статистично значущу кореляцію між ступенем пухлини та мутацією BRCA1, з вищою часткою пухлин G3 у носіїв BRCA1 порівняно з неносіями (p<0,0). 05) (Малюнок 5B).
Удосконалення технології секвенування ДНК забезпечило безпрецедентний прогрес у генетичному тестуванні BRCA1/2, що має вирішальне значення для пацієнтів із сімейною історією раку. На сьогодні приблизно 20 000 варіантів BRCA1/2 ідентифіковано та класифіковано відповідно до Американського товариства медичної генетики 35 та системи ENIGMA.35,36 Добре відомо, що спектр мутацій BRCA1/2 дуже різноманітний. ly через географічні регіони.37 В Італії рівень BRCA1/2 PV коливався від 8% до 37%, демонструючи широку варіабельність усередині країни.38,39 З населенням майже 5 мільйонів, Сицилія є п’ятим за величиною регіоном Італії з точки зору кількості жителів. Хоча існують дані про розподіл BRCA1/2 у західній Сицилії, немає значних доказів у східній частині. острова.
Наше дослідження є одним із перших звітів про частоту BRCA1/2 PV у пацієнтів з РМЗ у східній Сицилії.28 Ми зосередили наш аналіз на РМЗ, оскільки це, безумовно, найпоширеніше захворювання в нашій когорті.
Під час тестування 389 пацієнтів з РМЗ 9% мали PV BRCA1/2, рівномірно розподілені між BRCA1 і BRCA2. Ці результати узгоджуються з результатами, отриманими раніше в італійській популяції.28 Цікаво, що 3% (13/389) нашої когорти були чоловіками. Цей показник вищий, ніж очікувався для раку молочної залози у чоловіків (1% усіх РМЗ),40 відображає наш вибір популяцій на основі ризику мутації BRCA1/2. Однак у жодного з цих чоловіків не розвинувся PV BRCA1/2, тому вони були кандидатами на подальший молекулярний аналіз, щоб виключити наявність менш поширених мутацій, таких як PALB2, RAD51C і D, серед інших. Варіанти невизначеної значущості були отримані у 7% суб’єктів, у яких був очевидний BRCA2 VUS. Навіть цей результат узгоджується з наявними доказами.28,41,42
Коли ми проаналізували розподіл молекулярних підтипів РМЖ у жінок-мутантів BRCA1/2, ми підтвердили відомий зв’язок між TNBC і BRCA1 PV (58,8%) і між люмінальним B BC і BRCA2 PV (55,6%).16,43 Пухлини просвіту A і HER2+ у носіїв BRCA1 і BRCA2 PV узгоджуються з наявними літературними даними.16,43
Потім ми зосереджуємось на типі та розташуванні фотоелектричної системи BRCA1/2. У нашій когорті найпоширенішою фотоелектричною системою BRCA1 була c.5035_5039delCTAAT. Хоча Incorvaia et al.не описували цей варіант у своїй сицилійській когорті, інші автори повідомили про це як про зародкову лінію BRCA1 PV.34 Кілька BRCA1 PV були знайдені в нашій когорті – наприклад, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA та c.5266dupC – які спостерігалися на Сицилії.28 З них дві мутації засновника BRCA1 (c.18 1T>G і c.5266dupC) зазвичай зустрічаються у євреїв-ашкеназі Східної та Центральної Європи (Польщі, Чехії, Словенії, Австрії, Угорщини, Білорусі та Німеччини), 44,45 і в Сполучених Штатах і Аргентині нещодавно був визначений як «рецидивуючий варіант зародкової лінії» в італійських пацієнтів з РМЖ і РЯ. Варіант 34c.514del був раніше ідентифікований у 8 пацієнтів з раком молочної залози з північних країн. Сицилія в Палермо та Мессіні. Цікаво, що навіть Incorvaia et al.виявили варіант c.3253dupA в деяких сім’ях у Катанії.28 Найбільш репрезентативними PV BRCA2 є c.428dup, c.5851_5854delAGTT та інтронний варіант c.8487+1G>A, про який повідомлялося більш детально 28 у пацієнта в Палермо з c.428dup, c.5851_5854delAGTT спостерігався PV у домогосподарствах на північному заході Сицилії, головним чином у регіонах Трапані та Палермо, тоді як c.5851_5854delAGTT PV спостерігався в домогосподарствах на північному заході Сицилії. Варіант 8487+1G>A був більш поширеним у суб’єктів із Мессіни, Палермо та Кальтаніссетти.28 Rebbeck et al.раніше описав зміну c.5851_5854delAGTT у Колумбії.37 Інший BRCA2 PV, c.631+1G>A, був виявлений у пацієнтів з РМ та РЯ з Сицилії (Агрідженто, Сіракузи та Рагуза).28 Примітно, що ми спостерігали співіснування двох варіантів BRCA2 (BRCA2 c.631G>A та c.7008-2A>T). ) у того самого пацієнта, якого ми припустили як розділеного в цис-режимі, як повідомлялося раніше.34,46 Ці мутації BRCA2 uble справді часто спостерігаються в італійському регіоні, і було виявлено, що вони вводять передчасні стоп-кодони, впливаючи на сплайсинг месенджерної РНК і викликаючи збій білка BRCA2.47,48
Ми також відобразили PV BRCA1 і BRCA2 в передбачуваних областях OCCR і BCCR білкових доменів і генів. Ці області були описані Rebbeck et al.як зони ризику розвитку раку яєчників і молочної залози, відповідно.49 Проте докази щодо зв’язку між розташуванням варіантів зародкової лінії та ризиком раку молочної залози або яєчників залишаються суперечливими.28,50-52 У нашій популяції PV BRCA1 були переважно розташовані в регіоні BCCR, тоді як PV BRCA2 були переважно розташовані в регіоні OCCR. Однак ми не змогли знайти жодного зв’язку між передбачуваним OCCR і РМЖ. Області CR і ознаки РМЖ. Це може бути пов’язано з обмеженою кількістю пацієнтів з мутаціями BRCA1/2. З точки зору білкового домену, PV BRCA1 розподіляються вздовж усього білка, а зміни BRCA2 переважно виявляються в домені повторів BRC.
Нарешті, ми співвіднесли клініко-патологічні ознаки РМЗ з BRCA1/2 PV. Через обмежену кількість пацієнтів, які були включені, ми виявили лише значну кореляцію між Ki-67 і ступенем пухлини. Хоча оцінка та інтерпретація Ki-67 залишається дещо суперечливою, безсумнівно, що високі показники проліферації пов’язані з підвищеним ризиком рецидиву захворювання та зниженням виживаності. На сьогодні межа для розрізнення «високої », а «низький» Ki-67 становить 20%. Однак цей поріг не застосовується до нашої популяції пацієнтів із мутацією BRCA1/2, для якої середнє значення Ki-67 становить 25%. Цю тенденцію щодо високих показників Ki-67 можна пояснити поширеністю в наших когортах просвіту B і TNBC, у яких було мало пухлин просвіту A. Проте деякі дані свідчать про те, що вищий порог Ki-67 (25–25– 30%) можуть краще класифікувати пацієнтів відповідно до їх прогнозу.53,54 За результатами нашого аналізу значна кореляція не є дивною. Виникає між високим Ki-67 і ступенями та наявністю BRCA1 PV. Фактично, пухлини, пов’язані з BRCA1, типові для TNBC і демонструють більш агресивні ознаки.16,17
На завершення це дослідження містить звіт про мутаційний статус BRCA1/2 у когорті РМЗ зі східної Сицилії. Загалом наші висновки узгоджуються з наявними доказами як щодо поширеності мутацій, так і щодо клініко-патологічних особливостей РМЗ. Додаткові дослідження у більших популяціях пацієнтів з РМЗ з мутантами BRCA1/2, такі як використання мультигеномного розширеного мутаційного аналізу, виправдані для оцінки наявності PVs, які є чіткими та менш частими, ніж BRCA1/2. Це дозволить ідентифікувати та належним чином вести все більшу кількість суб’єктів із підвищеним ризиком раку через генетичні мутації.
Ми підтвердили, що пацієнти підписали інформовану згоду на анонімне надання своїх зразків пухлин для дослідницьких цілей. Усі пацієнти підписали письмову інформовану згоду відповідно до Гельсінської декларації. Згідно з політикою AOU Policlinico «G.Rodolico – S.Marco», це дослідження було звільнено від етичної перевірки, оскільки аналіз BRCA1/2 проводився відповідно до клінічної практики, і всі пацієнти дали письмову інформовану згоду. Пацієнти також дали згоду на використання їхніх даних для дослідницьких цілей.
Ми дякуємо професору Паоло Віньєрі за його допомогу в догляді за хворими на рак молочної залози згідно з проханням Комітету з етики.
Федеріка Марторана повідомляє про гонорари від Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Інші автори заявляють про відсутність конфлікту інтересів у цій роботі.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL та ін. Глобальна статистика раку 2020: GLOBOCAN оцінює захворюваність і смертність від 36 видів раку в 185 країнах світу. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660