«Ніколи не сумнівайтеся, що невелика група вдумливих, відданих громадян може змінити світ.Фактично, це єдиний там».
Місія Cureus полягає в тому, щоб змінити давню модель медичних публікацій, у якій подання досліджень може бути дорогим, складним і трудомістким.
Збагачена тромбоцитами плазма/prp, регенерація тканин, активація тромбоцитів, проліферативна терапія глюкозою, тромбоцити, проліферативна терапія
Цитуйте цю статтю як: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al.(17 травня 2022 р.) Вплив глюкози на кількість і об’єм тромбоцитів: наслідки для регенеративної медицини.Лікування 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
Збагачена тромбоцитами плазма (PRP) і гіпертонічні розчини глюкози зазвичай використовуються для ін’єкцій у регенеративній медицині, іноді разом.Про вплив гіпертонічної глюкози на лізис і активацію тромбоцитів раніше не повідомлялося.Ми перевірили вплив підвищених концентрацій глюкози на кількість тромбоцитів і еритроцитів, а також об’єм клітин у PRP і цільній крові (ЦК).Швидке часткове зниження кількості тромбоцитів відбулося з усіма сумішами глюкози, змішаними з PRP або цільною кров’ю, відповідно до часткового лізису. Після першої хвилини кількість тромбоцитів залишалася стабільною, що свідчить про швидку акомодацію залишкових тромбоцитів до екстремального (>2000 мОсм) гіпертонусу. Після першої хвилини кількість тромбоцитів залишалася стабільною, що свідчить про швидку акомодацію залишкових тромбоцитів до екстремального (>2000 мОсм) гіпертонусу. Після першої хвилини кількість тромбоцитів залишалося стабільним, що вказує на швидку аккомодацію остаточних тромбоцитів до екстремального (>2000 мОсм) гіпертонуса. Після першої хвилини кількість тромбоцитів залишалася стабільною, що вказувало на швидку акомодацію залишкових тромбоцитів до екстремального (>2000 мОсм) гіпертонусу.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 мОсм）高渗状态。2000 мОсм）高渗状态。 Після першої хвилини кількість тромбоцитів залишалася стабільною, що вказує на швидку адаптацію остаточних тромбоцитів до екстремального (>2000 мОсм) гіперосмолярного стану. Після першої хвилини кількість тромбоцитів залишалася стабільною, що вказує на швидку адаптацію залишкових тромбоцитів до екстремального (>2000 мОсм) гіперосмолярного стану.Концентрації глюкози 25% і вище призвели до значного збільшення середнього об’єму тромбоцитів (MPV), що вказує на ранню стадію активації тромбоцитів.Потрібні подальші дослідження, щоб визначити, чи відбувається лізис або активація тромбоцитів і чи може ін’єкція гіпертонічної глюкози окремо чи в поєднанні з PRP забезпечити додаткову клінічну користь.
У 1950-х роках американський хірург Джордж Хакет виявив, що він може назавжди полегшити біль у суглобах і спині у багатьох пацієнтів, вводячи проліферативний розчин у сухожилля та зв’язки.Його експерименти на кроликах показали, що лікування, яке він назвав проліферативною терапією, призвело до збільшення та зміцнення сухожиль.Гістологічні дослідження підтвердили, що під час цього процесу виробляється новий колаген [1].
Протягом перших кількох десятиліть було випробувано багато різних рішень для розповсюдження.До 1990-х років більшість практиків вважали високі концентрації глюкози найбезпечнішим і найефективнішим методом.Однак механізм дії залишається неясним.
Кілька клінічних досліджень було проведено в 20 столітті після роботи Хакетта.Однак у 2000-х роках відновився інтерес і було завершено кілька успішних клінічних випробувань проліферативної терапії для лікування болю в попереку [2], остеоартриту колінного суглоба [3] та латерального епікондиліту [4].
Регенерація тканин вимагає участі стовбурових клітин.Тому високі концентрації глюкози повинні якимось чином індукувати міграцію, реплікацію та диференціацію стовбурових клітин.Ми припускаємо, що тромбоцити можуть діяти як месенджери, і що високі концентрації глюкози можуть змусити тромбоцити вивільняти цитокіни та фактори росту, таким чином сприяючи регенеративним процесам, особливо міграції стовбурових клітин до зон високої концентрації глюкози.
Активація тромбоцитів завжди передує збільшенню внутрішньоклітинного кальцію [5].Лю та ін.у 2008 році показали, що високі рівні глюкози підвищують активність каналів транзиторного рецепторного потенціалу канонічного типу 6 (TRPC6) у плазматичній мембрані, що призводить до притоку іонів кальцію в тромбоцити [6].Інше дослідження показало, що вплив іонів кальцію на крайову зону мікротрубочок спричиняє розслаблення, розширення та деформацію маргінальної зони, що, у свою чергу, спричиняє зміну форми з дискової на сферичну, що призводить до середнього об’єму тромбоцитів (MPV) [7].
Наша гіпотеза в цьому дослідженні полягає в тому, що вплив високих концентрацій глюкози на тромбоцити впливає на крайову зону мікротрубочок і внутрішньоклітинне середовище, що призводить до збільшення MPV.
Усі учасники підписали форму інформованої згоди після пояснення деталей дослідження та до отримання зразків.У цьому дослідженні використовувалися лише зразки PRP з гематокритом понад 2%, щоб кількість еритроцитів (еритроцитів) і середній корпускулярний об’єм еритроцитів (MCV) могли бути включені для порівняння.
Дослідження проводилося в чотири фази, першою фазою була PRP, а інші фази – цільна кров (табл. 1).Як описано раніше [8], усі відносні відцентрові сили (RCF, g-сила) були розраховані від середини (Rmid, у см) стовпчика крові у відцентровому шприці.Ми вирішили використовувати MPV як маркер сенсибілізації тромбоцитів і кількість тромбоцитів як показник потенційного лізису тромбоцитів, обидва з яких можна легко виміряти на стандартних гематологічних аналізаторах.
На першому етапі 47 добровольців здавали зразки крові — одну пробірку з етилендіамінтетраоцтовою кислотою (EDTA) і один зразок цільної крові PRP (антикоагулянт цитрат натрію (NaCl, 3%)) (табл. 1).Негайно помістіть коромисло в трубку.Повний аналіз крові (CBC) проводили на зразках EDTA у трьох примірниках, а зразки NaCl аналізували в трьох примірниках для аналізу CBC, а потім готували PRP різними методами, описаними вище [8].Усі зразки PRP готували центрифугуванням при 900–1000 g.Змішайте кожен зразок PRP на вихровому змішувачі протягом 5–10 секунд, потім розділіть п’ять аліквот по 0,5 мл у пробірки.
Щоб оцінити вплив впливу тромбоцитів на підвищені концентрації глюкози, рівні кількості (0,5 мл) 0%, 5%, 12,5%, 25% і 50% глюкози у воді змішували зі зразками тромбоцитів, щоб отримати 0%, 2,5% 6,25%, 12,5% і 25% концентрації суміші глюкози, і змішували пробірки на шейкері для пробірок протягом 15 хвилин.TAC кожної суміші аналізували в трьох повторах через 15 хв.Кількість тромбоцитів (PLT), кількість еритроцитів, MCV і MPV усереднювали для кожної пробірки, а середню кількість тромбоцитів, кількість еритроцитів, MCV і MPV розраховували для всіх зразків PRP.
Після завершення першого етапу збору даних ми помітили значне збільшення об’єму тромбоцитів у тромбоцитах PRP після додавання D50W.Тромбоцити PRP не обов’язково представляють усі тромбоцити в крові, а середовище PRP відрізняється від середовища WB.Тому ми вирішили провести другу фазу дослідження ефекту додавання D50W до цільної крові.
Для другого раунду ми обрали розмір вибірки 30 на основі результатів першої серії, як описано в розділі «Аналіз».У цій серії 20 добровольців здали зразки крові (табл. 1).Цільну кров (1,8 мл) набирали в шприц на 3 мл і антикоагулювали 0,2 мл 40% NaCl.Шприц із цільною кров’ю перемішували протягом п’яти секунд за допомогою вихрового змішувача, і CBC аналізували в трьох повторах.Після аналізу антикоагулянтну кров додавали до 2 мл 50% глюкози в шприці на 5 мл (кінцева концентрація глюкози становила приблизно 25% (D25) і поміщали в пробірку для струшування на 30 хвилин. Через 30 хвилин D25/CBC у шприцах WB аналізували в трьох повторах. Кількість тромбоцитів, кількість еритроцитів, MCV і MPV на шприц усереднювали та середнє PLT , кількість еритроцитів, MCV і MPV розраховували для кожного зразка до і після додавання глюкози.
Оскільки тромбоцити в цільній крові зазвичай піддаються впливу гіпертонічної глюкози під час проліферативної терапії глюкозою через мінімально інвазивну ін’єкцію, і не прийнято поєднувати PRP з гіпертонічною глюкозою безпосередньо перед ін’єкцією, ми вирішили вивчити гіпертонічну глюкозу в поєднанні з WB у Розділі 1. Етапи третій і четвертий.На кожному етапі 20 добровольців здавали по 7-8 мл АКД-А (кислота, що містить тринатрій цитрат (22,0 г/л), лимонну кислоту (8,0 г/л) і глюкозу (24,5 г/л), розчин декстрози цитрату) для антикоагулянтів крові (табл. 1).Тільки суміші глюкози більше 12,5% використовувалися для визначення порогового відсотка, пов'язаного зі збільшенням MPV.На третьому етапі в пробірку поміщають 1 мл крові.Потім перемішуйте кров на вихровому змішувачі протягом 10 секунд, додаючи в пробірку 1 мл 30% глюкози, 40% глюкози або 50% глюкози до отримання кінцевої концентрації глюкози 15%, 20% і 25% відповідно.Зразки крові на глюкозу аналізували на CBC одразу після змішування та повторювали кожні дві хвилини протягом 30 хвилин.
Під час початкового змішування додавання 1:1 гіпертонічної глюкози та WB або PRP піддає тромбоцити концентраціям понад 25% протягом кількох секунд.На четвертому етапі, щоб оцінити ефект гіпертонічної глюкози з мінімальними початковими піковими концентраціями та перевірити верхню межу ефекту глюкози, ми додали лише невелику кількість крові до D25W або D50W.Помістіть 1 мл D25W або D50W у пробірку та додайте 0,2 мл WB, перемішуючи зразок протягом 10 секунд.У цих випадках кров піддавалася впливу глюкози в концентрації приблизно на 20% вище кінцевої концентрації, а не на 50% вище кінцевої концентрації, як у фазі 3, що призвело до кінцевих концентрацій глюкози 20,8% і 41,6%.Змішані зразки аналізували в той самий проміжок часу, що й на кроці 3.
На першому етапі кожної серії розведення глюкози було взято 30 зразків, оскільки це був відповідний розмір зразка для пілотного дослідження [9].Наприкінці кожної фази (включно з першою) оцініть адекватність розміру вибірки, використовуючи формулу, яка використовується для визначення розміру вибірки, необхідного для оцінки середнього значення безперервної змінної результату в одній сукупності.Формула n = Z2 x SD2 /E2.У цьому рівнянні Z — Z-оцінка, SD — стандартне відхилення, а E — бажана помилка [10].Наша альфа становить 0,05, що відповідає значенню Z 1,96, і ми очікуємо помилку 5 (у відсотках).Отже, ми розв’язуємо n = (1,962 x SD2)/52.Результати показали, що розмір вибірки, необхідний для кожного етапу, був меншим, ніж фактично зібрана кількість.
Протягом періодів 1, 3 і 4 з використанням більш ніж однієї концентрації глюкози вплив різних концентрацій глюкози аналізували шляхом порівняння часткової зміни між часом 0 і кожним наступним часом (фаза 1 через 15 хвилин, період 3 через 15 хвилин).і чотири через 15 секунд, потім кожні дві хвилини.) Швидкості змін для кожного періоду часу порівнювали за допомогою U-критерію Манна-Уїтні, оскільки дані не відповідали нормальному розподілу, визначеному тестом нормальності Шапіро-Вілка.Оскільки на першому, третьому та четвертому етапах (загалом п’ять) було проведено аналіз 1 до 1 кількох груп (п’яти), було виконано поправку Бонферроні, щоб налаштувати бажане значення альфа до ≤0,01, але не ≤0,05.
Зменшення кількості тромбоцитів при всіх концентраціях гіпертонічної декстрози та збільшення MPV у тромбоцитах PRP при концентрації декстрози >12,5 %: кількість тромбоцитів PRP зросла від концентрації в один до п’яти разів порівняно з початковою концентрацією в цільній крові, залежно від методу (не показано). Зменшення кількості тромбоцитів при всіх концентраціях гіпертонічної декстрози та збільшення MPV у тромбоцитах PRP при концентрації декстрози >12,5%: кількість тромбоцитів PRP зросла від концентрації в один до п’яти разів порівняно з базовою концентрацією в цільній крові, залежно від методу (не показано). Зменшення кількості тромбоцитів при всіх концентраціях гіпертонічної декстрози та збільшення MPV в тромбоцитах PRP при концентрації декстрози > 12,5%: кількість тромбоцитів PRP збільшилася в 1-5 разів порівняно з вихідною цільною кров'ю, в залежності від методу (не показано). Зменшення кількості тромбоцитів при всіх гіпертонічних концентраціях декстрози та підвищення MPV у тромбоцитах PRP при концентрації декстрози >12,5%: кількість тромбоцитів PRP зросла в 1-5 разів порівняно з початковим рівнем цільної крові, залежно від методу (не показано). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV 增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。. При >12,5% концентрації глюкози висока концентрація глюкози знижує кількість крові, PRP крові MPV збільшується: порівняно з 与基线全血 кількість PRP крові збільшується від 1 до 5 разів, ніж концентрація (не описано). При концентрації глюкози >12,5% весь вміст гіпертонічної глюкози знижував кількість тромбоцитів, а MPV підвищувався в тромбоцитах PRP: кількість тромбоцитів PRP збільшувалася від 1- до 5-кратних концентрацій у порівнянні з вихідними концентраціями цільної крові, в залежності від методу (не описано). При концентраціях глюкози >12,5 % усі концентрації глюкози при гіпертензії знижували кількість тромбоцитів і збільшували MPV у тромбоцитах PRP: кількість тромбоцитів PRP збільшувалася в 1-5 разів порівняно з базовими концентраціями в цільній крові, залежно від методу (як описано).На малюнку 1 показано, що кількість тромбоцитів зменшилася майже на 75% після розведення у воді та на 20-30% після 15-хвилинного розведення з різними концентраціями глюкози порівняно з базовим PRP і розведенням 1:1 з поправкою на об’єм (1-k1 з корекцією об’єму).k -1 розведення).1 розведення).
Кількість клітин у кожному розведенні виражається як частка вихідної кількості до розведення.
MPV мінімально знизився під час виробництва PRP, без подальшої зміни концентрацій розведення до 12,5% у воді або глюкозі (включаючи 25% суміші глюкози PRP) і збільшився більш ніж на 20% після розведення в 50% розчині глюкози (рис. .2).).Навпаки, еритроцити не показали суттєвих змін в об’ємі при будь-якому розведенні, крім H2O.
Середній об’єм клітин у кожному розведенні виражається у відсотках від вихідного об’єму до розведення.
Подібне, але менш виражене зниження кількості тромбоцитів і підвищення CVR спостерігалося в РМЖ, що піддавалося впливу 50% глюкози (для приготування препарату з 25% глюкози).У таблиці 2 порівнюється кількість і об’єм клітин у цільній крові, розведеній у 50% розчині декстрози, з даними фази 1 PRP, розведених у 50% розчині глюкози.Зміни кількості еритроцитів і MCV еритроцитів не були очевидними і не були в центрі нашої уваги.
SD = стандартне відхилення, MD = середня різниця між групами, SE = стандартне відхилення середньої різниці, RBC = еритроцити, PLT = тромбоцити, PRP = збагачена тромбоцитами плазма, WB = цільна кров
Після додавання D50W до WB відсоткова втрата тромбоцитів з урахуванням розведення становила 7,7% (310±73 проти 286±96) порівняно з 17,8% для розведення PRP у D50W (664±348 проти 544±277).MPV WB збільшився на 16,8 % (з 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6), тоді як MPV PRP збільшився на 26 % (9,2 ± 0,8 проти 11,6 ± 0,7). Хоча середні відмінності як у зниженні кількості тромбоцитів, так і в збільшенні MPV були значно більшими при PRP, зміни в зниженні кількості тромбоцитів у WB були майже значними (310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), а збільшення MPV було значним (10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Хоча середні відмінності як у зниженні кількості тромбоцитів, так і в збільшенні MPV були значно більшими при PRP, зміни в зниженні кількості тромбоцитів у WB були майже значними (310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), а збільшення MPV було значним (10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Хоча середні відмінності як у зниженні кількості тромбоцитів, так і в збільшенні CVR були значно більшими при PRP, зміни в зниженні кількості тромбоцитів у WB були майже значними (від 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).збільшення MPV було значущим (від 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). збільшення MPV було достовірним (з 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB 内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 × 286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < . 001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数 减少的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 × 286 ± 96 (-7,7%) ； p = 0,06）和MPV 的增加是显着的＄ (10,1 ± 0,5 到11,8) ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Зміни зниження кількості тромбоцитів у WB були майже значущими (від 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), хоча PRP мав значно більші середні відмінності у зниженні кількості тромбоцитів і збільшенні MPV.і збільшення MPV було значним.(від 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (від 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Кінцева концентрація 20% глюкози була потрібна, щоб побачити значну зміну MPV, але зміна MPV була більш вираженою при кінцевій концентрації 25%.Втрата тромбоцитів стабілізувалася після початкового зниження.Ми відзначили початкове різке зниження CVR, однак CVR швидко відновлювався при кінцевій концентрації глюкози 25%, що було значно вище, ніж рівні CVR, що спостерігалися при кінцевих концентраціях глюкози 20% і 15% (рис. 3 і ліворуч від таблиці 3; заштриховані рамки).вказують р-значення ≤ альфа з поправкою Бонферроні 0,01).Також було початкове різке падіння кількості PLT, яке спостерігалося в початковій фазі 0-15 с, а потім залишалося стабільним (від 15 с до 30 хв; ліворуч від таблиці 4).
Додавання різних концентрацій глюкози до цільної крові призвело до початкового швидкого зниження MPV з подальшим залежним від концентрації відновленням більш ніж на 20%.Легенда показує концентрацію глюкози після розведення.D15, D20 і D25 проводили в розведенні 1:1.D21 і D41 проводили в розведенні 1:5.
Таблиця 4 показує зміну кількості тромбоцитів при розведенні в гіпертонічній глюкозі.Ми спостерігали залежне від дози співвідношення між негайним падінням чисел PLT при розведенні 1:1 і при розведенні 1:5.Порівнюючи розведення 1:1 як одну групу з розведеннями 1:5, група 1:1 мала негайне зниження кількості тромбоцитів менше, ніж група 1:5, 66±48 000 (23%) проти 99±69 000 (37%)., p = 0,014) у групі 1:5.Після початкового падіння в першій точці вимірювання кількість тромбоцитів у відсотках глюкози стабілізувалася (рис. 4).
Коли цільну кров додають до глюкози у співвідношенні 1:1, кількість тромбоцитів зменшується приблизно на 25%.Однак при додаванні цільної крові у співвідношенні 1:5 зниження було набагато більшим – приблизно на 50%.
41% глюкози збільшив MPV швидше та різкіше, ніж 25% або 21%.Результати MPV показані на малюнку 3. При всіх інших розведеннях після додавання 50% глюкози не спостерігалося негайного початкового зниження MPV.При використанні 25% глюкози (концентрація глюкози 20,8% у кінцевому розведенні) зміна MPV була порівнянна зі зміною 20% глюкози у розведенні 1:1 (рис. 3).Хоча зміни MPV спочатку були більшими при 41% змішаній концентрації, ніж при 25%, різниця в MPV між 41% і 25% через 16 хвилин більше не була значущою (Таблиця 3, праворуч).Також цікаво, що 25% глюкоза підвищувала MPV ефективніше, ніж 20,8%.
Це дослідження in vitro частково підтвердило нашу гіпотезу. Він продемонстрував потенційний частковий лізис тромбоцитів за допомогою домішки декстрози, швидку акомодацію тромбоцитів до надзвичайного гіпертонусу та значне підвищення MPV у відповідь на концентрацію гіпертонічної декстрози > 25%. Він продемонстрував потенційний частковий лізис тромбоцитів за допомогою домішки декстрози, швидку акомодацію тромбоцитів до надзвичайного гіпертонусу та значне підвищення MPV у відповідь на концентрацію гіпертонічної декстрози > 25%. Він показав потенційний частковий лізис тромбоцитів у разі декстрози, швидку аккомодацію тромбоцитів до екстремального гіпертонуса та значне підвищення MPV у відповідь на гіпертонічну концентрацію декстрози > 25%. Він продемонстрував потенційний частковий лізис тромбоцитів декстрозою, швидку акомодацію тромбоцитів до надзвичайного гіпертонусу та значне збільшення MPV у відповідь на гіпертонічний рівень декстрози >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗 ， 以及 响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Він показує потенційний частковий лізис тромбоцитів сумішшю з глюкозою, швидку адаптацію тромбоцитів до екстремального гіпертонусу та значне збільшення MPV у відповідь на концентрацію гіпертонічної глюкози > 25%. Він показує потенційний частковий лізис тромбоцитів сумішами глюкози, швидку адаптацію тромбоцитів до екстремального гіпертонусу та значне збільшення MPV у відповідь на гіпертонічний рівень глюкози >25%.Початкове збільшення було максимальним при 41,6% експозиції глюкози, але збільшення MPV наблизилося до 25% експозиції глюкози приблизно через 20 хвилин після експозиції.
На концентрацію тромбоцитів впливає глюкоза.Ми помітили, що кількість PLT зменшилася при всіх розведеннях глюкози.Різке падіння кількості тромбоцитів у H2O (0%) розведеннях серії PRP може бути пов’язане з осмотичним лізисом.Крім того, це може бути артефакт, спричинений злипанням тромбоцитів, але це на відміну від відсутності зміни MPV при такому розведенні.Це означає, що деякі тромбоцити дуже чутливі до гіпоосмолярності.
У всіх розведеннях глюкози 1:1 кількість PLT зменшувалася на 20-30%, навіть на D5W (гіпотонічна при 252 мОсм), що може свідчити про специфічний неосмотичний ефект глюкози, оскільки і PLT, і MPV залишалися незмінними при триразовому збільшенні концентрації.глюкоза.від D5W до D25W.Фактично, концентрації PLT мали тенденцію до незначного збільшення зі збільшенням осмолярності.
Зниження PLT між розведеннями 1:1 і 1:5 означає, що ефект розчинення залежить від початкової та кінцевої концентрації глюкози.Якби це залежало лише від початкової концентрації, тоді можна було б очікувати побачити різницю в зниженні PLT між концентраціями 1:1.Але ми цього не робимо.Якщо ефект лізису залежить лише від кінцевої концентрації глюкози, тоді ми не очікуємо великої різниці між 20% розведенням 1:1 і 20,8% розведенням 1:5.І все ж ми це зробили.
Якщо втрата тромбоцитів відбувається внаслідок лізису тромбоцитів, утворюється частковий лізат, після чого цитокіни та фактори росту вивільняються у позаклітинне середовище.Кілька досліджень показали, що лізат тромбоцитів майже такий же ефективний, як і PRP, як розчин для проліферації [11].Показано, що сам PRP є ефективним рішенням для лікування проліферації [12-14].
Неактивні тромбоцити циркулюють у формі диска, укріпленого кількома внутрішніми структурами.Під час активації вони набувають більш сферичної форми або форми амеби, що призводить до збільшення об’єму.Збільшення об’єму вимагає збільшення площі поверхні, що є результатом екструзії системи відкритих канальців (OCS) і додавання екзоцитарних гранул до мембрани.Залишається визначити, чи залучає збільшення MPV, викликане гіпертонічною глюкозою, один або обидва ці механізми, але якщо останній, то збільшення MPV вказуватиме на дегрануляцію.
Це дослідження показало, що вплив високих концентрацій глюкози на PRP або тромбоцити цільної крові призводив до збільшення MPV протягом 15 хвилин з концентрацією глюкози 25% і 41,6% відповідно.
Збільшення MPV тромбоцитів може бути наслідком розширення оточуючих клубків мікротрубочок у відповідь на приплив кальцію.Лю та ін.Було показано, що глюкоза опосередковує приплив кальцію через канал TRPC6 тромбоцитів [6].Наша гіпотеза полягає в тому, що глюкоза індукує розслаблення клубків мікротрубочок, що призводить до збільшення MPV і сенсибілізації та/або активації тромбоцитів.Однак, судячи з наших результатів, це лише частина історії.У наших тестах жодна концентрація нижче D25W не призводила до збільшення MPV.З огляду на те, що ми не тестували вплив концентрації глюкози між 12,5% і 25%, наші результати фази 1 свідчать про те, що в цьому діапазоні концентрацій глюкози може існувати поріг, який призводить до збільшення MPV.Подальше тестування на етапах 3 і 4 показало, що 20-25% глюкози є порогом для цього, але залишається незрозумілим, чому.
Ми також спостерігали зниження MPV на ~9% після центрифугування.Незрозуміло, чи пов’язано це зниження MPV з більшими та щільнішими тромбоцитами, захопленими шаром еритроцитів центрифуги.Це спостереження може бути важливим для клініцистів, оскільки воно може означати, що тромбоцити PRP є меншою та менш щільною підгрупою тромбоцитів WB.
У попередньому дослідженні ми показали, що приготування PRP ручними методами є недорогим [8].Якщо глюкоза сенсибілізує тканинні тромбоцити або PRP, роблячи їх більш чутливими до активації, або якщо PRP виробляється з частковими властивостями лізату, це може посилити регенерацію та зменшити потребу в терапії.Таким чином, поєднання PRP і висококонцентрованої глюкози може бути економічно ефективнішим, ніж PRP або глюкоза окремо.
Наше дослідження має кілька недоліків.По-перше, ми використовуємо PRP, отриманий кількома різними методами.Це може призвести до суперечливих результатів.По-друге, ми не змогли виконати біохімічний аналіз жодного з наших зразків, щоб точніше визначити, чи відбулася активація тромбоцитів.Ми хотіли б виміряти Р-селектин, тромбоцитарний фактор 4, моноцитарні тромбоцитарні агрегати або інші маркери активації тромбоцитів, щоб краще зрозуміти ступінь або наявність дегрануляції альфа-гранул, але це виходить за рамки цього дослідження.По-третє, ми не змогли підтвердити за допомогою електронної мікроскопії чи інших методів, що збільшення MPV у тромбоцитах, які зазнали впливу глюкози, було спричинене впливом на клубки мікротрубочок.
Суміші WB або PRP з 25% глюкози підвищували MPV, сигналізуючи про початок активації тромбоцитів, хоча це дослідження не продемонструвало прогресування агрегації або дегрануляції.Гіпертонічна суміш глюкози призвела до втрати тромбоцитів, що, можливо, є літичним ефектом.Часткова активація або лізис тромбоцитів може викликати регенерацію тканини після ін'єкції тромбоцитів.Неясно, до яких клінічних наслідків можуть призвести ці зміни.Подальші дослідження продемонстрували більш точні вимірювання активації або лізису та оцінили різні клінічні ефекти гіпертонічних сумішей глюкози з WB або PRP.
Глюкозопроліферативна терапія є простою та недорогою регенеративною терапією, яка швидко розширюється та підтримує клінічні дослідження.Це дослідження передбачає фізіологічний механізм, який, якщо він буде підтверджений, може допомогти нам зрозуміти частину регенеративного механізму проліферативної терапії.
Біомедична та медична інформатика в Університеті Міссурі, Медична школа Канзас-Сіті, Канзас-Сіті, США
Люди: усі учасники цього дослідження дали або не дали згоду.Міжнародне товариство клітинної медицини видало схвалення ICMS-2017-003.Наступний протокол був схвалений для подальшого використання Інституційною наглядовою радою Міжнародного товариства клітинної медицини: Назва: Розрахунок виходу збагаченої тромбоцитами лікарської речовини в плазмі на основі вихідної кількості тромбоцитів CBC.Тварини. Усі автори підтвердили, що в цьому дослідженні не брали участі тварини чи тканини.Конфлікти інтересів: відповідно до Уніфікованої форми розкриття інформації ICMJE, усі автори заявляють про наступне: Інформація про оплату/послуги: Усі автори заявляють, що вони не отримували фінансової підтримки від будь-якої організації за подану роботу.Фінансові відносини: усі автори заявляють, що вони не мають фінансових відносин на даний момент або протягом останніх трьох років з будь-якою організацією, яка може бути зацікавлена ​​в поданій роботі.Інші відносини: усі автори заявляють, що немає інших відносин або діяльності, які можуть вплинути на подану роботу.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K та ін.(17 травня 2022 р.) Вплив глюкози на кількість і об’єм тромбоцитів: наслідки для регенеративної медицини.Лікування 14(5): e25081.doi:10.7759/cureus.25081
© 2022 Гаррісон та ін.Це стаття відкритого доступу, яка розповсюджується на умовах ліцензії Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0.Дозволяється необмежене використання, розповсюдження та відтворення на будь-якому носії за умови вказівки оригінального автора та джерела.