غذائی اجزاء کا حصول اور تقسیم حشرات کے چارے اور زندگی کی تاریخ کے خصائص کو یکجا کرتی ہے۔ زندگی کے مختلف مراحل میں مخصوص غذائی اجزاء کی کمی کو پورا کرنے کے لیے، کیڑے اضافی خوراک کے ذریعے یہ غذائی اجزاء حاصل کر سکتے ہیں، مثال کے طور پر، اس عمل میں فقاری رطوبتوں کو کھانا کھلانے سے جسے puddles کہا جاتا ہے۔ اور، اس لیے، میٹابولزم اور تولید دونوں کے لیے غذائی اجزاء کی ضرورت ہوتی ہے۔ اس مطالعے کا مقصد اس بات کا جائزہ لینا تھا کہ آیا An. غذائیت کے حصول کے لیے گائے کے پیشاب پر arabiensis ایجی ٹیشن زندگی کی تاریخ کی خصوصیات کو بہتر بناتا ہے۔
اس بات کو یقینی بنائیں کہ یہ محفوظ ہے۔ arabiensis تازہ، 24 گھنٹے، 72 گھنٹے، اور 168 گھنٹے پرانے گائے کے پیشاب کی بدبو کی طرف راغب ہوئی تھی، اور میزبان کی تلاش کرنے والی اور خون پلانے والی (48 گھنٹے بعد خون کھانے والی) خواتین کو Y-tube olfactometer میں ماپا گیا تھا، اور حاملہ خواتین کے لیے ایک کیمیکل ٹیسٹ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد الیکٹرو فزیوولوجیکل تجزیہ کا استعمال گائے کے پیشاب میں بائیو ایکٹیو مرکبات کی شناخت کے لیے چاروں عمر کی کلاسوں میں کیا گیا۔ Y-tube اور فیلڈ ٹرائلز میں بائیو ایکٹیو مرکبات کے مصنوعی مرکبات کا جائزہ لیا گیا۔ گائے کے پیشاب اور اس کے مرکزی نائٹروجن پر مشتمل کمپاؤنڈ یوریا کی تحقیقات کے لیے ممکنہ ضمنی ضمیمہ کے طور پر خوراک کی پیمائش اور پیرامیٹرز کی خوراک کی پیمائش کی گئی تھی۔ مادہ مچھروں کے تناسب اور گائے کے پیشاب اور جذب شدہ یوریا کی مقدار کا اندازہ لگایا گیا۔ کھانا کھلانے کے بعد، خواتین کی بقا، ٹیچرڈ فلائٹ، اور تولید کا اندازہ لگایا گیا۔
میزبان کے خون اور غذائیت کی تلاش کریں۔ لیبارٹری اور فیلڈ اسٹڈیز میں، عربوں کو تازہ اور بوڑھے گائے کے پیشاب کی قدرتی اور مصنوعی خوشبو کی طرف راغب کیا گیا تھا۔ حاملہ خواتین انڈوں کی جگہوں پر گائے کے پیشاب سے لاتعلق تھیں۔ پرواز، بقا، یا پنروتپادن کے لئے جسمانی حالت کے ایک فنکشن کے طور پر تجارت.
زندگی کی تاریخ کی بہتر خصوصیات کے لیے گائے کے پیشاب کا حصول اور تقسیم۔ گائے کے پیشاب کی اضافی خوراک روزانہ کی بقا اور ویکٹر کی کثافت میں اضافہ کرکے اور بالواسطہ طور پر پرواز کی سرگرمی کو تبدیل کرکے ویکٹر کی صلاحیت کو متاثر کرتی ہے اور اس لیے مستقبل کے ماڈلز میں اس پر غور کیا جانا چاہیے۔
غذائی اجزاء کا حصول اور تقسیم کیڑوں کے چارے اور زندگی کی تاریخ کی خصوصیات کو مربوط کرتی ہے [1,2,3]۔ کیڑے خوراک کی دستیابی اور غذائیت کی ضروریات کی بنیاد پر خوراک کا انتخاب اور حصول اور معاوضہ خوراک انجام دینے کے قابل ہوتے ہیں۔ کیڑے مکوڑے [1، 2]۔مخصوص غذائی اجزاء کی کمی کو پورا کرنے کے لیے، کیڑے ان غذائی اجزاء کو اضافی خوراک کے ذریعے حاصل کر سکتے ہیں، جیسے کیچڑ، مختلف اخراج اور ریڑھ کی ہڈیوں کے رطوبتوں، اور مردار، ایک عمل جسے puddles کہتے ہیں [2]۔ دیگر حشرات کے احکامات میں، اور اس قسم کے وسائل کی طرف راغب ہونے اور کھانا کھلانے سے صحت اور دیگر زندگی کی تاریخ کی خصوصیات پر اہم اثرات مرتب ہو سکتے ہیں [2, 4, 5, 6],7]۔ ملیریا مچھر Anopheles gambiae sensu lato (sl) ایک 'غذائیت کا شکار' بالغ کے طور پر ابھرتا ہے نظر انداز .اس اہم گاڑی میں غذائی اجزاء کی مقدار بڑھانے کے ذریعہ ایجی ٹیشن کا استعمال توجہ کی ضمانت دیتا ہے کیونکہ اس کے وبائی امراض کے اہم نتائج ہو سکتے ہیں۔
بالغ مادہ انوفیلس مچھروں میں نائٹروجن کی مقدار لاروا مرحلے سے کم کیلوریز کے ذخائر اور خون کے کھانے کے غیر موثر استعمال کی وجہ سے محدود ہوتی ہے [9]۔ Female Ann.gambiae sl عام طور پر اضافی خون کے کھانے سے اس کی تلافی کرتی ہے [10، 11 لوگوں کو بیماری کا خطرہ لاحق ہوتا ہے]۔ مچھروں کو شکار کا زیادہ خطرہ ہوتا ہے۔ متبادل کے طور پر، مچھر نائٹروجن مرکبات حاصل کرنے کے لیے فقرے کے اخراج کے اضافی خوراک کا استعمال کر سکتے ہیں جو موافقت اور پرواز کی تدبیر کو بڑھاتے ہیں، جیسا کہ دوسرے کیڑوں سے ظاہر ہوتا ہے [2]۔ پیچیدہ، اینوفیلس عربینس، تازہ اور بوڑھا گائے کا پیشاب [12,13,14]، دلچسپ ہے۔ انوفیلس عربینس اپنی میزبان ترجیحات میں موقع پرست ہے اور اسے مویشیوں کے ساتھ جوڑنے اور کھانا کھلانے کے لیے جانا جاتا ہے۔ گائے کا پیشاب نائٹروجن مرکبات سے بھرپور ایک ایسا وسیلہ ہے، جس میں تازہ یوریا کی کل مقدار 59-59 فیصد ہے۔ گائے کے پیشاب کی عمر کے ساتھ، مائکروجنزم ان وسائل کو 24 گھنٹوں کے اندر نائٹروجن مرکبات کی پیچیدگی کو کم کرنے کے لیے استعمال کرتے ہیں [15]۔ امونیا میں تیزی سے اضافے کے ساتھ، نامیاتی نائٹروجن میں کمی کے ساتھ، الکالوفیلک مائکروجنزم (جن میں سے بہت سے مرکبات پیدا کرنے کے لیے) جو کہ عورت ہو سکتی ہے Ann.arabiensis ترجیحی طور پر 24 گھنٹے یا اس سے کم عمر کے پیشاب کی طرف راغب ہوتی ہے [13, 14]۔
اس تحقیق میں میزبان اور خون سے پلائے جانے والے Ans کی تلاش کی گئی۔ اس کے پہلے گوناڈوٹروپین سائیکل کے دوران، arabiensis کا اندازہ نائٹروجن مرکبات کے حصول کے لیے کیا گیا، بشمول یوریا، پیشاب کی آمیزش کے ذریعے۔ اس کے بعد، تجربات کا ایک سلسلہ یہ جانچنے کے لیے کیا گیا کہ کس طرح مادہ مچھروں کے لیے اس کی صلاحیت کو بہتر بناتا ہے مزید چارہ۔ آخر میں، تازہ اور بوڑھے گائے کے پیشاب کی بدبو کا اندازہ اس بات کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا کہ آیا یہ میزبان اور خون سے پلائے جانے والے An کے لیے قابل اعتماد اشارے فراہم کرتے ہیں۔ اس ممکنہ غذائی وسائل کی تلاش میں، arabiensis نے مشاہدہ شدہ تفریق کشش کے پیچھے کیمیائی ارتباط دریافت کیا۔ عمر رسیدہ پیشاب کا میدانی حالات کے تحت مزید جائزہ لیا گیا، لیبارٹری کے حالات میں حاصل کردہ نتائج کو بڑھاتے ہوئے اور مختلف جسمانی حالتوں پر بوائین پیشاب کی بدبو کے اثر کو ظاہر کیا۔ مچھروں کی کشش۔ حاصل کردہ نتائج اس بات کی تصدیق کرتے ہیں کہ این۔ arabiensis زندگی کی تاریخ کی خصوصیات کو متاثر کرنے کے لیے کشیرکا پیشاب میں پائے جانے والے نائٹروجنی مرکبات کو حاصل اور تقسیم کرتا ہے۔ ان نتائج کو ممکنہ وبائی امراض کے نتائج کے تناظر میں زیر بحث لایا جاتا ہے اور انہیں ویکٹر کی نگرانی اور کنٹرول کے لیے کیسے استعمال کیا جا سکتا ہے۔
انوفیلس عربی (ڈونگولا تناؤ) کو 25 ± 2 °C، 65 ± 5% RH اور 12:12 h روشنی پر برقرار رکھا گیا: تاریک سائیکل۔ لاروا کو پلاسٹک کی ٹرے (20 سینٹی میٹر × 18 سینٹی میٹر × 7 سینٹی میٹر) میں پالا گیا تھا جس میں ڈسٹلڈ واٹر، ڈسٹل فوڈ، ڈبلیو ٹی ® مچھلی سے بھرا ہوا تھا۔ DE)۔Pupae کو 30 ملی لیٹر کپ (Nolato Hertila, Åstorp, SE) میں جمع کیا گیا اور پھر بگڈورم کیجز (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) میں منتقل کیا گیا تاکہ بالغوں کے ظہور کی اجازت دی جا سکے۔ بالغوں کو 10% licro-bite کے بعد تک حل فراہم کیا گیا۔ جس مقام پر میزبان کی تلاش کرنے والی خواتین کو تجربے سے فوراً پہلے خوراک کی پیشکش کی گئی تھی، یا تجربے سے پہلے ڈسٹل واٹر کے ساتھ راتوں رات بھوک لگی تھی، جیسا کہ ذیل میں بیان کیا گیا ہے۔ فلائٹ ٹیوب کے تجربات کے لیے استعمال ہونے والی خواتین کو صرف 4-6 گھنٹے پانی کے ساتھ بھوک لگی تھی۔ (Håtunalab, Bro, SE) ایک میمبرین فیڈنگ سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے (Hemotek Discovery Workshops, Acrington, UK)۔ پھر مکمل طور پر بھیڑ والی خواتین کو انفرادی پنجروں میں منتقل کیا گیا اور براہ راست خوراک فراہم کی گئی، جیسا کہ ذیل میں بیان کیا گیا ہے، یا ذیل میں بیان کیے گئے تجربات سے 3 دن پہلے 10% سوکروز ایڈ لیبٹم۔ بعد میں لیبارٹری کے لیے خواتین کو بائیو ٹیوب کا استعمال کیا گیا اور بعد میں لیبارٹری میں منتقل کیا گیا۔ تجربے سے پہلے 4-6 گھنٹے کے لیے ڈسٹل واٹر ایڈ لیبٹم۔
بالغ عرب خواتین میں پیشاب اور یوریا کے استعمال کی مقدار درست کرنے کے لیے فیڈنگ اسسز کا استعمال کیا گیا تھا۔ میزبان اور خون پلائی جانے والی خواتین کو 1% پتلا تازہ اور عمر رسیدہ گائے کا پیشاب، یوریا کی مختلف مقدار، اور دو کنٹرولز (10% سوکروز اور پانی) کے لیے خوراک فراہم کی گئی تھی، 48 m-1ml-h-1ml کے لیے خوراک۔ FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) کو 250 µl مائکرو سینٹری فیوج ٹیوبوں میں 4 × 4 میٹرکس میں فراہم کیا گیا تھا (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Figure 1A) µl ~3 کے درمیان مقابلہ کریں مچھروں اور ڈائی کلر کے ممکنہ اثرات، 10 مچھروں کو ایک بڑی پیٹری ڈش میں رکھیں (12 سینٹی میٹر قطر اور 6 سینٹی میٹر اونچائی؛ Semadeni، Ostermundigen, CH؛ Figure 1A) مکمل اندھیرے میں 25 ± 2 سینٹی میٹر ° C اور 65ity ± 5% 5.0 سے زیادہ درجہ حرارت کے درمیان تجربہ کیا گیا۔ خوراک کی نمائش، مزید تجزیہ تک مچھروں کو -20 ° C پر رکھا گیا تھا۔
بوائین پیشاب اور یوریا جو میزبان اور خون چوسنے والی مادہ Anopheles arabianus کے ذریعے جذب کیا گیا ہے تلاش کریں۔ فیڈنگ ٹرائل (A) میں، مادہ مچھروں کو تازہ اور بوڑھے گائے کا پیشاب، یوریا کی مختلف مقدار، سوکروز (10%)، اور کشید شدہ پانی (H2Os-C) اور مادہ خون (H2ees-H2) کی خوراک فراہم کی گئی۔ جانچ کی گئی کسی بھی دوسری خوراک کے مقابلے میں زیادہ سوکروز جذب ہوتا ہے۔ نوٹ کریں کہ میزبان کی تلاش کرنے والی خواتین نے 168 گھنٹے کے گائے کے پیشاب (B) سے کم 72 گھنٹے گائے کا پیشاب جذب کیا ہے۔ پیشاب کی اوسط کل نائٹروجن مواد (± معیاری انحراف) انسیٹ میں ظاہر کی جاتی ہے۔ خوراک پر منحصر انداز۔مختلف حروف کے ناموں کے ساتھ اوسط سانس لینے والے حجم (D, E) ایک دوسرے سے نمایاں طور پر مختلف تھے (ٹوکی کے پوسٹ ہاک تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے یک طرفہ ANOVA؛ p <0.05)۔ ایرر بارز اوسط (BE) کی معیاری غلطی کی نمائندگی کرتے ہیں۔ سیدھی ڈیشڈ لائن لاگ لائنر ریگریشن لائن (F, G) کی نمائندگی کرتی ہے۔
جذب شدہ خوراک کو چھوڑنے کے لیے، مچھروں کو انفرادی طور پر 1.5 ملی لیٹر مائیکرو سینٹرفیوج ٹیوبوں میں رکھا گیا جس میں 230 µl ڈسٹل واٹر تھا اور ٹشو کو ڈسپوز ایبل پیسٹل اور کورڈ لیس موٹر (VWR انٹرنیشنل، لنڈ، SE) کا استعمال کرتے ہوئے خلل ڈالا گیا، اس کے بعد 10pm پر سینٹری فیوگیشن (1000pm پر 230 μl)۔ µl) کو 96 کنویں کی مائکروپلیٹ (Sigma-Aldrich) میں منتقل کیا گیا تھا اور جذب (λ620) کا تعین اسپیکٹرو فوٹومیٹر پر مبنی مائکروپلیٹ ریڈر (SPECTROStar® Nano، BMG Labtech، Ortenberg، DE) nm کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ متبادل کے طور پر، مچھروں کے 9µl0ml، 1µl0ml پانی میں ڈسنے والے مچھر تھے۔ جسے سپیکٹرو فوٹومیٹرک تجزیہ کے لیے کیویٹ میں منتقل کیا گیا تھا (λ 620 nm؛ UV 1800، Shimadzu، Kista, SE)۔ خوراک کی مقدار کو درست کرنے کے لیے، سیریل ڈائلیشن کے ذریعے ایک معیاری منحنی خطوط تیار کیا گیا تھا تاکہ 0.2 µl سے 2.1 µ µl µ 1 µ l µ yne µ l µ 1 µ µ l µ µl µ l µ µ l µ µ l µ µl µ µ l µ µ µ l؛ معلوم ڈائی ارتکاز کی نظری کثافت کا استعمال ہر مچھر کے کھانے کی مقدار کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔
حجم کے اعداد و شمار کا یک طرفہ تجزیہ (ANOVA) کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا جس کے بعد Tukey کی پوسٹ ہاک جوڑی کے لحاظ سے موازنہ (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007)۔ لکیری رجعت کا تجزیہ بیان کیا گیا ہے اور ارتکاز کے درمیان بیان کردہ ردعمل اور انحصار کے درمیان بیان کردہ ردعمل۔ خون چوسنے والے مچھر (GraphPad Prism v8.0.0 for Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, US)۔
ہر عمر کے گروپ سے تقریباً 20 µl پیشاب کے نمونے Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh، Sigma Aldrich) پر بندھے ہوئے تھے اور ٹن کیپسول (8 mm × 5 mm) میں لپیٹے گئے تھے۔ 2000، تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، ایم اے، یو ایس) کارخانہ دار کے پروٹوکول کے مطابق تازہ اور پرانے پیشاب میں نائٹروجن کی مقدار کا تعین کرنے کے لیے۔ کل نائٹروجن (g N l-1) کو معیار کے طور پر استعمال ہونے والے معلوم یوریا کی تعداد کی بنیاد پر مقدار میں طے کیا گیا۔
میزبان کی تلاش کرنے والی اور خون چوسنے والی خواتین کی بقا پر خوراک کے اثر کا اندازہ لگانے کے لیے، مچھروں کو انفرادی طور پر بڑے پیٹری ڈشز (قطر میں 12 سینٹی میٹر اور اونچائی 6 سینٹی میٹر؛ سیماڈینی) میں رکھا گیا تھا جس کے ڈھکن میں جالی سے ڈھکا ہوا سوراخ تھا (3 سینٹی میٹر قطر) جس کے ساتھ وینٹی لیٹس اور خوراک کی فراہمی کے بعد براہ راست 4 فیصد فراہم کیا گیا تھا۔ پتلا تازہ اور بوڑھا گائے کا پیشاب، یوریا کی چار مقداریں، اور دو کنٹرولز، 10% سوکروز اور پانی۔ ہر خوراک کو ڈینٹل ٹیمپون (DAB Dental AB، Upplands Väsby, SE) میں 5 ملی لیٹر کی سرنج میں ڈالا گیا (تھرمو فشر، سائنسی، گوتھائی، سٹور، سٹور، سٹائل، 2000 سے زائد)۔ پیٹری ڈش (اعداد و شمار 1)۔1 اے۔ ہر روز اپنی خوراک کو تبدیل کریں۔ جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے لیبارٹری کو برقرار رکھیں۔ زندہ بچ جانے والے مچھروں کو دن میں دو بار شمار کیا جاتا تھا، جبکہ آخری مچھر کے مرنے تک مردہ مچھروں کو ضائع کر دیا جاتا تھا (n = 40 فی علاج)۔ مچھروں کی بقا کو مختلف غذاؤں پر کھلایا جاتا تھا۔ خوراک کے درمیان بقا کی تقسیم کا موازنہ کرنے کے لیے لاگ رینک ٹیسٹ (IBM SPSS شماریات 24.0.0.0)۔
Attisano et al. سینٹی میٹر L) 9 سینٹی میٹر کے فاصلے پر نیوڈیمیم میگنےٹ کے ایک جوڑے کے درمیان معلق کیڑے کی سوئی سے چپکنے والے سروں کے ساتھ۔ ایک ہی مواد (6.5 سینٹی میٹر L) سے بنی ایک افقی ٹیوب نے عمودی ٹیوب کو ایک ٹیچرڈ بازو اور ایک بازو بنانے کے لئے دو حصوں میں تقسیم کیا جس میں ایلومینیم لیٹرپٹ کا ایک چھوٹا سا ٹکڑا ہوتا ہے۔
24 گھنٹے کی بھوکی خواتین کو 30 منٹ تک پابندی سے پہلے مندرجہ بالا خوراک دی گئی تھی۔ مکمل طور پر کھلائے جانے والی مادہ مچھروں کو انفرادی طور پر 2-3 منٹ کے لیے برف پر اینستھیٹائز کیا گیا اور موم کے ساتھ کیڑے کے پنوں سے جوڑ دیا گیا tubes.Flying Mill. Revolutions فی فلائٹ کو ایک حسب ضرورت ڈیٹا لاگر کے ذریعے ریکارڈ کیا گیا، پھر PC-Lab 2000™ سافٹ ویئر (v4.01؛ Velleman, Gavere, BE) کا استعمال کرتے ہوئے ذخیرہ کیا گیا اور ڈسپلے کیا گیا۔ فلائٹ مل کو موسمیاتی ریگولیٹڈ کمرے میں رکھا گیا تھا (12 h: 12 h، روشنی: %6 ± 5 ± 5 ° C, روشنی: %622)۔
پرواز کی سرگرمی کے پیٹرن کو دیکھنے کے لیے، 24 گھنٹے کی مدت کے دوران پرواز کی کل مسافت (m) اور مسلسل پرواز کی سرگرمیوں کی کل تعداد کا حساب فی گھنٹہ کیا گیا۔ اس کے علاوہ، انفرادی خواتین کی طرف سے پرواز کی جانے والی اوسط دوری کا علاج کے دوران موازنہ کیا گیا اور ایک طرفہ ANOVA اور Tukey کے پوسٹ ہاک تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔ منحصر متغیر، جبکہ علاج ایک آزاد عنصر ہے۔ اس کے علاوہ، راؤنڈ کی اوسط تعداد 10 منٹ کے اضافے میں شمار کی جاتی ہے۔
An.arabiensis کی تولیدی کارکردگی پر خوراک کے اثر کا اندازہ لگانے کے لیے، چھ خواتین (4 dpe) کو خون جمع کرنے کے بعد براہ راست بگڈورم کیجز (30 cm × 30 cm × 30 cm) میں منتقل کیا گیا اور پھر 48 گھنٹے کے لیے تجرباتی خوراک فراہم کی گئی جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے۔ اس کے بعد خوراک کو ہٹا دیا گیا اور اس کے بعد کپ (30 ملی لیٹر ہرٹیلا) بھرا گیا تیسرے دن 48 گھنٹے کے لیے فراہم کیے گئے تھے، ہر 24 گھنٹے میں بدلتے ہوئے ہر غذائی طرز عمل کو 20-50 بار دہرائیں۔ ہر تجرباتی پنجرے کے لیے انڈوں کو شمار اور ریکارڈ کیا گیا تھا۔ انڈوں کے ذیلی نمونے انفرادی انڈوں کے اوسط سائز اور لمبائی کے فرق کا اندازہ لگانے کے لیے استعمال کیے گئے تھے (n ≥ 200 فی خوراک) Wetzlar, DE) Leica کیمرہ (DFC) 320 R2 سے لیس؛ Leica Microsystems Ltd., DE)۔ بقیہ انڈوں کو 24 گھنٹے کے لیے معیاری پرورش کے حالات کے تحت آب و ہوا کے کنٹرول والے کمرے میں رکھا گیا تھا، اور حال ہی میں سامنے آنے والے پہلے انسٹار لاروا (n ≥ 200 فی خوراک) کے ذیلی نمونے کی پیمائش کی گئی تھی، جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے۔ hoc تجزیہ (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.)
تازہ (1 گھنٹہ بعد کے نمونے لینے کے بعد)، 24 گھنٹے، 72 گھنٹے اور 168 گھنٹے کی عمر کے پیشاب سے ہیڈ اسپیس کے اتار چڑھاؤ زیبو مویشیوں، ارسی نسلوں سے جمع کیے گئے نمونوں سے جمع کیے گئے تھے۔ سہولت کے لیے، صبح سویرے پیشاب کے نمونے جمع کیے گئے تھے جب کہ گائیں ابھی بھی گودام میں تھیں۔ ہر ایک نمونے کو انفرادی پولیامائیڈ بیکنگ بیگز (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) میں 3 l پولیامائیڈ میں ڑککن کے ساتھ vinyl کلورائیڈ پلاسٹک کے ڈرم میں منتقل کیا گیا تھا۔ ہر بوائین پیشاب کے نمونے سے ہیڈ اسپیس اتار چڑھاؤ جمع کیے گئے تھے، یا تو h2 اور کمرے کے درجہ حرارت پر براہ راست h2 اور درجہ حرارت h2 کے بعد جمع کیے گئے تھے۔ 168 h، یعنی ہر پیشاب کا نمونہ ہر عمر کے گروپ کا نمائندہ تھا۔
ہیڈ اسپیس کے اتار چڑھاؤ کے جمع کرنے کے لیے، ایک بند لوپ سسٹم کا استعمال ایک فعال کاربن فلٹرڈ گیس اسٹریم (100 ملی لیٹر منٹ-1) کو پولیامائیڈ بیگ کے ذریعے جذب کرنے والے کالم میں 2.5 گھنٹے کے لیے ڈایافرام ویکیوم پمپ کے ذریعے گردش کرنے کے لیے کیا گیا تھا (KNF Neuberger، Freiburg، DE سے ایک headspace کنٹرول کیا گیا تھا)۔ بیگ۔ جذب کرنے والا کالم Teflon نلیاں (5.5 cm x 3 mm id) سے بنا تھا جس میں 35 mg Porapak Q (50/80 mesh؛ Waters Associates, Milford, MA, US) شیشے کے اون کے پلگوں کے درمیان تھا۔ استعمال سے پہلے، کالم کو 1 illistane (1 ملی میٹر) کے ساتھ فلش کیا گیا تھا۔ Darmstadt, DE) اور 1 ملی لیٹر پینٹین (99.0% خالص سالوینٹ GC گریڈ، سگما ایلڈرچ)۔ جذب شدہ اتار چڑھاؤ کو 400 μl پینٹین کے ساتھ خارج کیا گیا تھا۔ ہیڈ اسپیس کے مجموعوں کو جمع کیا گیا اور پھر مزید تجزیہ کے لیے استعمال ہونے تک -20 ° C پر ذخیرہ کیا گیا۔
میزبان کی تلاش اور خون کھانے والے An.Headspace کے اتار چڑھاؤ والے عرقوں کے رویے کے جوابات جو تازہ، 24-h، 72-h، اور 168-h-عمر والے پیشاب سے جمع کیے گئے تھے، عربیڈوپسس مچھروں سے اتارے جانے والے اتار چڑھاؤ کے لیے تجزیہ کیا گیا تھا۔ 13-15، این کی گھر تلاش کرنے کی سرگرمی کا عروج کا دور۔ عربی 30 سینٹی میٹر s-1 پر bioassay۔ ہوا کو سٹینلیس سٹیل کی میش سکرینوں کی ایک سیریز سے گزارا جاتا ہے، جس سے ایک لیمینر بہاؤ اور ایک یکساں پلوم ڈھانچہ بنتا ہے۔ ڈینٹل ٹیمپون ڈسپنسر (4 سینٹی میٹر × 1 سینٹی میٹر؛ L:D؛ DAB ڈینٹل AB)، 5 سینٹی میٹر کوائل سے معطل کیا جاتا ہے، اس کے ساتھ ونڈ ورڈ 5 سینٹی میٹر کی تبدیلیاں ہوتی ہیں۔ منٹ۔تجزیہ کے لیے، ہر ہیڈ اسپیس کے نچوڑ کا 10 μl، 1:10 کو گھٹا دیا گیا، محرک کے طور پر استعمال کیا گیا۔ پینٹین کی مساوی مقدار کو کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا۔ انفرادی میزبان یا خون چوسنے والے مچھروں کو انفرادی رہائی کے پنجروں میں 2-3 گھنٹے پہلے رکھا گیا۔ اور مچھروں کو 1 منٹ کے لیے موافق ہونے کی اجازت دی گئی، اور پھر پنجرے کے تتلی والو کو رہائی کے لیے کھول دیا گیا۔ علاج یا کنٹرول کی طرف کشش کا تجزیہ مچھروں کے تناسب کے طور پر کیا گیا جو کہ رہائی کے 5 منٹ کے اندر اندر ذرائع کے ساتھ رابطے میں آئے۔ ہر ہیڈ اسپیس کے غیر مستحکم نچوڑ اور کنٹرول کو کم از کم ایک دن میں ایک ہی تعداد میں نقل کیا گیا، اور کسی بھی دن کے اثرات سے بچنے کے لیے کم از کم 3 بار ایک ہی تعداد میں۔ ہر تجرباتی دن علاج اور کنٹرول کا تجربہ کیا گیا۔ میزبان اور خون سے پلائے جانے والے Ans. عربی بمقابلہ ہیڈ اسپیس سیٹ کا تجزیہ برائے نام لاجسٹک ریگریشن کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا جس کے بعد طاق تناسب (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.) کے لیے جوڑے کے لحاظ سے موازنہ کیا گیا۔
این کے اسپوننگ ردعمل۔ تازہ اور بوڑھے گائے کے پیشاب سے ہیڈ اسپیس کے عرق کا بگڈورم کیجز میں تجزیہ کیا گیا (30 سینٹی میٹر × 30 سینٹی میٹر × 30 سینٹی میٹر؛ میگا ویو سائنس)۔ پلاسٹک کے کپ (30 ملی لیٹر؛ نولاٹو ہرٹیلا) 20 ملی لیٹر آست پانی سے بھرے ہوئے تھے، فراہم کردہ کونے کے اوپری حصے اور کونے کی جگہ موجود تھی۔ 24 سینٹی میٹر کے فاصلے پر۔ ٹریٹمنٹ کپ کو ہر ہیڈ اسپیس کے 10 μl ایکسٹریکٹ کے ساتھ 1:10 ڈائلیشن پر ایڈجسٹ کیا گیا۔ کنٹرول کپ کو ایڈجسٹ کرنے کے لیے مساوی مقدار میں پینٹین کا استعمال کیا گیا۔ پوزیشن کے اثرات کو کنٹرول کرنے کے لیے ہر تجربے کے درمیان ٹریٹمنٹ اور کنٹرول کپ کا تبادلہ کیا گیا۔ دس خون سے پلائی جانے والی خواتین کو تجرباتی پنجروں میں چھوڑا گیا اور بعد میں ZT-9 میں 1 کپ کی شکل میں انڈے کی گنتی 4 گھنٹے کی گئی۔ اسپوننگ انڈیکس کا حساب لگانے کے لیے یہ ہے: (علاج کے کپ میں رکھے گئے انڈوں کی تعداد – کنٹرول کپ میں رکھے گئے انڈوں کی تعداد)/(دیے گئے انڈوں کی کل تعداد)۔ہر علاج کو 8 بار دہرایا گیا۔
خواتین An.arabiensis کا گیس کرومیٹوگرافک اور الیکٹران اینٹینا پیٹرن ڈٹیکشن (GC-EAD) تجزیہ کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا [20]۔ مختصراً، تازہ ہیڈ اسپیس کے اتار چڑھاؤ کو ایک Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA) کے ساتھ الگ کیا گیا تھا۔ 0.25 ملی میٹر id، 0.25 μm فلم کی موٹائی، Agilent ٹیکنالوجیز)۔ اور بڑھاپے کا پیشاب۔ ہائیڈروجن کو موبائل فیز کے طور پر استعمال کیا گیا جس کی اوسط لکیری بہاؤ کی شرح 45 سینٹی میٹر s-1 ہے۔ ہر نمونہ (2 μl) کو 30 سیکنڈ کے لیے اسپلٹ لیس موڈ میں 225 °C کے داخلی درجہ حرارت کے ساتھ انجکشن کیا گیا تھا۔ GC اوون کا درجہ حرارت 35 °C (3 منٹ ہولڈ 010 °C) سے پروگرام کیا گیا تھا۔ °C min-1.GC کے اخراج کے اسپلٹر میں، 4 psi نائٹروجن کو شامل کیا گیا تھا اور 1:1 کو Gerstel 3D/2 کم ڈیڈ والیوم کراس (Gerstel, Mülheim, DE) میں شعلہ آئنائزیشن ڈیٹیکٹر اور EAD کے درمیان تقسیم کیا گیا تھا۔ EAD کے لئے GC ایفلوئنٹ کیپلیری جو GD O-2 کے درجہ حرارت سے گزری تھی، O-2 کے درجہ حرارت کو GC کے ذریعے منتقل کیا گیا تھا۔ پلس 5 °C، شیشے کی ٹیوب (10 سینٹی میٹر × 8 ملی میٹر) میں، جہاں اسے کاربن فلٹر شدہ، مرطوب ہوا (1.5 l min−1) کے ساتھ ملایا گیا تھا۔ اینٹینا کو ٹیوب کے آؤٹ لیٹ سے 0.5 سینٹی میٹر کے فاصلے پر رکھا گیا تھا۔ ہر انفرادی مچھر کی ایک نقل تیار کی گئی تھی، اور کم از کم تین مچھروں پر میزبانی کرنے والے مچھروں کو پرفارم کیا گیا تھا۔ ہر عمر کے پیشاب کے نمونے
مشترکہ GC اور ماس اسپیکٹرومیٹر (GC-MS؛ 6890 GC اور 5975 MS؛ Agilent Technologies) کا استعمال کرتے ہوئے تازہ اور بوڑھے بوائین پیشاب کے ہیڈ اسپیس کے مجموعوں میں بائیو ایکٹیو مرکبات کی شناخت GC-EAD تجزیہ میں اینٹینل ردعمل کو ظاہر کرنے کے لیے، GC-EAD کے تجزیہ میں EVC کے اثرات کو EV7 میں کام کیا گیا تھا۔ HP-5MS UI-coated فیوزڈ سلیکا کیپلیری کالم (60 m × 0.25 mm اندرونی قطر، 0.25 μm فلم کی موٹائی) کے ساتھ ہیلیم کو موبائل فیز کے طور پر استعمال کرتے ہوئے 35 سینٹی میٹر s-1.A 2 μl نمونہ انجیکشن لگایا گیا تھا جس کا اوسط لکیری بہاؤ کی شرح 35 سینٹی میٹر s-1.A 2 μl نمونہ کا استعمال کرتے ہوئے انجیکشن لگایا گیا تھا اور اسی طرح Oven-C درجہ حرارت کی ترتیب کے لیے analysis.compounds کی شناخت ان کے برقرار رکھنے کے وقت (Kovát index) اور کسٹم لائبریری اور NIST14 لائبریری (Agilent) کے مقابلے ماس سپیکٹرا کی بنیاد پر کی گئی تھی۔ شناخت شدہ مرکبات کی تصدیق مستند معیارات (اضافی فائل 1: ٹیبل S2) کے ذریعے کی گئی تھی۔ ایلڈرچ) کو بیرونی معیار کے طور پر انجیکشن لگایا گیا تھا۔
ایک مصنوعی بدبو کے مرکب کی افادیت کا اندازہ لگانا جو تازہ اور بوڑھے پیشاب میں بایو ایکٹیو مرکبات پر مشتمل ہوتا ہے جو میزبان کی تلاش اور خون چوسنے والے Ans.arabiensis کو اپنی طرف متوجہ کرتا ہے، اوپر کے جیسا ہی اولفیکٹو میٹر اور پروٹوکول کا استعمال کرتا ہے۔ تازہ، 24 گھنٹے، 48 گھنٹے، 72 گھنٹے، اور 168 گھنٹے پرانا پیشاب (شکل 5D-G؛ اضافی فائل 1: ٹیبل S2)۔تجزیہ کے لیے، مکمل طور پر مصنوعی مرکب کے 1:100 کے 10 μl کا استعمال کریں، جس کی مجموعی طور پر ریلیز کی شرح 400-402 سے زیادہ ہوتی ہے۔ h-1، میزبان اور خون چوسنے والے مچھروں کے لیے کشش کا اندازہ لگانے کے لیے۔ اس کے بعد، ٹیسٹ مکمل مرکب پر کیا جاتا ہے، جس میں مکمل مرکب کے واحد مرکبات کے تخفیف آمیزے کو ہٹا دیا جاتا ہے۔ میزبان اور خون سے پلائے جانے والے جوابات کی تلاش کریں، عرب بمقابلہ مصنوعی اور تخفیف آمیز مرکبات کا استعمال کرتے ہوئے کسی بھی قسم کے مرکب کو دوبارہ استعمال نہیں کیا گیا۔ طاق تناسب کے لیے موازنہ (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.)۔
اس بات کا اندازہ لگانے کے لیے کہ آیا گائے کا پیشاب ملیریا مچھروں کے لیے میزبان رہائش گاہ کے اشارے کے طور پر کام کر سکتا ہے، تازہ اور بوڑھے گائے کا پیشاب، جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے جمع کیا گیا، اور پانی کو میشڈ 3 لیٹر بالٹی (100 ملی لیٹر) میں رکھا گیا اور میزبان بیت کے جالوں میں رکھا گیا۔ (BG-HDT ورژن؛ BioGents, Regensburg, DE) چراگاہ میں 50 میٹر کے فاصلے پر دس پھندے، دیہاتی برادری سے 400 میٹر کے فاصلے پر (سائلے، ایتھوپیا، 5°53´24´N، 37°29´24´E) اور کوئی مویشی نہیں، مستقل افزائش کے میدانوں پر اور دیہاتوں کی گرمائش کے لیے ٹریپ کی موجودگی تھی۔ جبکہ پانچ ٹریپس کو بغیر گرم چھوڑ دیا گیا تھا۔ علاج کے ہر مقام کو کل پانچ راتوں کے لیے رات کو گھمایا جاتا ہے۔ مختلف عمروں کے پیشاب کے ساتھ پھندے میں پکڑے گئے مچھروں کی تعداد کا موازنہ لاجسٹک ریگریشن کا استعمال کرتے ہوئے بیٹا بائنومیل ڈسٹری بیوشن (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.) کے ساتھ کیا گیا۔
ایتھوپیا کے علاقے اورومیا کے قصبے ماکی کے قریب ملیریا سے متاثرہ گاؤں میں (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E؛ Figure 6A)۔ یہ مطالعہ اگست کے وسط اور وسط ستمبر کے درمیان سالانہ انڈور بارش کے موسم کے ساتھ ساتھ بارش کے طویل موسم سے پہلے کیا گیا تھا۔ گاؤں کے مضافات میں واقع (20-50 میٹر کے فاصلے پر) کو مطالعہ کے لیے منتخب کیا گیا تھا (تصویر 6A)۔ مکانات کو منتخب کرنے کے لیے استعمال ہونے والے معیار یہ تھے: گھر میں جانوروں کی اجازت نہیں تھی، گھر کے اندر کھانا پکانے کی اجازت نہیں تھی (کم از کم آزمائشی مدت کے دوران)، اور زیادہ سے زیادہ دو باشندوں والے مکانات میں بغیر سوئے ہوئے تھے۔ علاج شدہ مچھروں کے جال کے تحت۔ اخلاقی منظوری فکلٹی آف نیچرل سائنسز (CNS-IRB) کے ادارہ جاتی تحقیقی اخلاقیات کے جائزہ بورڈ (IRB/022/2016) نے عطا کی ہے، عدیس ابابا یونیورسٹی، ورلڈ میڈیکل ایسوسی ایشن کی طرف سے قائم کردہ رہنما خطوط کے مطابق ہیلسنکی کے ہیڈ ہیلتھ کے ساتھ ہیلسنکی کے اعلامیے میں مدد کی گئی تھی۔ توسیعی عملہ۔ پورے عمل کی توثیق ضلعی اور وارڈ ('کیبیلے') کی سطح پر مقامی انتظامیہ کرتی ہے۔ تجرباتی ڈیزائن نے 2 × 2 لاطینی مربع ڈیزائن کے بعد کیا، جس میں مصنوعی مرکب اور کنٹرول پہلی رات جوڑے گھروں کو تفویض کیے گئے تھے اور اگلی تجرباتی رات گھروں کے درمیان تبدیل کیے گئے تھے۔ ٹریپس کو دن کے ایک ہی وقت میں فیلڈ ٹرائل کے آغاز، درمیانی اور اختتام پر لگاتار پانچ راتیں چلانے کے لیے مقرر کیا گیا تھا۔
چھ بائیو ایکٹیو مرکبات پر مشتمل ایک مصنوعی مرکب ہیپٹین (97.0% سالوینٹ جی سی گریڈ، سگما ایلڈرچ) میں تحلیل کیا گیا اور ایک کاٹن وِک ڈسپنسر [20] کا استعمال کرتے ہوئے 140 ng h-1 پر جاری کیا گیا۔ وِک ڈسپنسر نے تمام مرکبات کو مستقل تناسب میں جاری کرنے کی اجازت دی جس کا استعمال 12 گھنٹے میں مکمل کنٹرول کے طور پر کیا گیا۔ سینٹرز فار ڈیزیز کنٹرول اینڈ پریوینشن (CDC) لائٹ ٹریپ (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Figure 6A) کے داخلی مقام کے ساتھ۔ پھندوں کو زمین سے 0.8 - 1 میٹر اوپر، بستر کے پاؤں کے قریب لٹکایا گیا تھا، اور ایک رضاکار بغیر کسی علاج کے اور 18 کے درمیان سویا ہوا تھا۔ 06:30۔جنسی اور جسمانی حیثیت سے پکڑے گئے مچھروں (غیر کھلایا، کھلایا، نیم حاملہ، اور حاملہ [21] بعد میں پولیمریز چین ری ایکشن (PCR) تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے اس کی جانچ کی گئی تاکہ مورفولوجیکل طور پر A. gambiae sl. کے طور پر شناخت کی گئی انواع کی شناخت کی جاسکے۔ برائے نام لاجسٹک فٹ ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا، جہاں کشش انحصار متغیر تھی اور علاج (مصنوعی مرکب بمقابلہ کنٹرول) مقررہ اثر تھا (JMP® 14.0. 0. SAS Institute Inc. یہاں، ہم امکان کے تناسب کے ٹیسٹ سے χ2 اور p-values کی اطلاع دیتے ہیں۔
اندازہ کریں کہ آیا یہ محفوظ ہے۔ arabiensis پیشاب حاصل کرنے کے قابل تھا، اس کا بنیادی نائٹروجن ذریعہ، یوریا، براہ راست کھانا کھلانے کے ذریعے، انتظامیہ کے 48 گھنٹے کے اندر، 4 دن کے بعد (dpe) میزبان کی تلاش اور خون سے کھلانے والی خواتین کو کھانا کھلانے والے ٹرائلز (تصویر 1A)۔ دونوں میزبان اور خون چوسنے والی خواتین کے مقابلے میں کسی بھی دوسری خوراک یا خوراک سے زیادہ پانی پیتی ہیں۔ (F(5,426) = 20.15, p <0.0001 اور F(5,299) = 56.00, p <0.0001، بالترتیب؛ تصویر 1B,C) مزید برآں، میزبان کی تلاش کرنے والی خواتین 72 گھنٹے میں پیشاب میں کم کھاتی ہیں، اس کے مقابلے میں پیشاب میں 81W پر مشتمل خوراک (81W پر مشتمل ہے)۔ یوریا، میزبان کی تلاش کرنے والی خواتین نے دیگر تمام ارتکاز اور پانی کے مقابلے میں 2.69 ایم ایم پر نمایاں طور پر زیادہ مقدار میں یوریا جذب کیا، جب کہ 10% سوکروز (F(10,813) = 15.72، p <0.0001؛ شکل 1D میں خواتین کے ردعمل میں یہ کون سی تھی)۔ پانی کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ یوریا پر مشتمل غذا کو جذب کیا، اگرچہ 10% سوکروز (F(10,557) = 78.35، p <0.0001؛ شکل 1.1E) سے کم ہونے کے باوجود، دو جسمانی حالتوں کے درمیان موازنہ کرتے وقت، خواتین کی میزبانی کے مقابلے میں فلیبوٹومائزڈ خواتین کے مقابلے میں زیادہ جذب ہوتا ہے۔ سب سے کم ارتکاز، اور ان خواتین نے زیادہ ارتکاز (F(1,953)= 78.82، p <0.0001؛ تصویر 1F، G) میں اتنی ہی مقدار میں یوریا جذب کیا۔جبکہ یوریا پر مشتمل خوراک سے زیادہ سے زیادہ قدر دکھائی دیتی ہے، (تصویر 1D میں خواتین کی مقدار 1D کے لحاظ سے قابل قدر تھی)۔ لاگ لکیری انداز (تصویر 1F،G) میں یوریا کی مقدار کی پوری رینج میں جذب شدہ یوریا۔ اسی طرح، مچھر پیشاب کے جذب ہونے کی مقدار کو ریگولیٹ کرکے اپنے نائٹروجن کے اخراج کو کنٹرول کرتے دکھائی دیتے ہیں، کیونکہ پیشاب میں نائٹروجن کی مقدار جذب ہونے والی مقدار میں ظاہر ہوتی ہے (شکل 1B، C اور B انسیٹس)۔
میزبان کے متلاشی اور خون چوسنے والے مچھروں کی بقا پر پیشاب اور یوریا کے اثرات کا اندازہ لگانے کے لیے، خواتین کو چاروں عمروں (تازہ، 24 گھنٹے، 72 گھنٹے، اور 168 گھنٹے بعد جمع ہونے کے بعد) پیشاب پلایا گیا اور یوریا کی تعداد کی ایک حد، نیز ڈسٹل واٹر اور یہ sucrose10% کنٹرول (sucrose10)۔ بقا کے تجزیے سے پتہ چلتا ہے کہ خوراک کا میزبان خواتین کی مجموعی بقا پر ایک اہم اثر پڑتا ہے (پیشاب: χ2 = 108.5، df = 5، p <0.0001؛ یوریا: χ2 = 122.8، df = 5، p <0.0001، F-B-edine اور F-edine) χ2 = 93.0, df = 5, p <0.0001; یوریا: χ2 = 137.9, df = 5, p <0.0001; Figure 2D,E) تمام تجربات میں، خواتین نے پیشاب، یوریا، اور پانی کی خوراک کی شرح کے مقابلے خواتین کی خوراک کی شرح کافی کم تھی۔ 2B-E)۔میزبان کی تلاش کرنے والی خواتین کو تازہ اور باسی پیشاب کھلایا جانے کی مختلف شرحیں دکھائی دیتی ہیں، جن کو 72-h کا باسی پیشاب کھلایا جاتا ہے (p = 0.016) ان کے زندہ رہنے کا امکان سب سے کم ہوتا ہے (تصویر 2B)۔ مزید برآں، میزبان کی تلاش کرنے والی خواتین کو 135 mm سے زیادہ پانی کھلایا جاتا ہے۔ (تصویر 2C)۔پانی کے مقابلے میں، تازہ پیشاب اور 24 گھنٹے پیشاب پینے والی خواتین زیادہ دیر تک زندہ رہیں (بالترتیب p = 0.001 اور p = 0.012؛ شکل 2D)، جبکہ 72 گھنٹے کا پیشاب کھلانے والی خواتین ان خواتین سے زیادہ زندہ رہیں جو تازہ پیشاب پیتی ہیں 0.0001 اور p = 0.013، بالترتیب؛ شکل 2D)۔ جب 135 ملی میٹر یوریا کھلایا جاتا ہے، تو خون پینے والی خواتین یوریا اور پانی کی دیگر تمام مقداروں سے زیادہ دیر تک زندہ رہتی ہیں (p <0.013؛ شکل 2E)۔
گائے کے پیشاب اور یوریا پر کھانا کھلانے والی میزبان اور خون چوسنے والی مادہ اینوفیلس عربینس کی بقا۔ بایواسے (A) میں مادہ مچھروں کو تازہ اور بوڑھے گائے کے پیشاب پر مشتمل خوراک فراہم کی گئی، مختلف مقدار میں یوریا، سوکروز (10%) اور ڈسٹل واٹر (H2O)۔ (D, E) مچھروں کو ہر 12 گھنٹے میں ریکارڈ کیا جاتا ہے جب تک کہ تمام خواتین کو پیشاب (B, D) اور یوریا (C, E) پر کھلایا جاتا ہے، اور کنٹرول، سوکروز اور پانی، مر چکے ہوتے ہیں۔
24 گھنٹے کی مدت میں فلائٹ مل ٹیسٹ میں طے شدہ کل فاصلہ اور راؤنڈز کی تعداد میزبان تلاش کرنے والے اور خون چوسنے والے مچھروں کے درمیان مختلف تھی، جس نے مجموعی طور پر کم پرواز کی سرگرمی دکھائی (تصویر 3)۔ میزبان کے متلاشی مچھر جو تازہ اور بوڑھے پیشاب یا سوکروز اور پانی فراہم کرتے تھے۔ فجر کے وقت، جب کہ 24- اور 168 گھنٹے کی عمر کے مچھروں کو جو پیشاب پر کھانا کھلاتے تھے مختلف پرواز کے نمونوں کی نمائش کرتے تھے اور بنیادی طور پر روزانہ کے تھے۔ رات گئے اور صبح سویرے سرگرمی کی اعلی ترین سطح کی نمائش کی، جبکہ 72 گھنٹے پیشاب کھانے والوں نے 24 گھنٹوں کے دوران سرگرمی میں مسلسل کمی کا تجربہ کیا (شکل 3)۔
شکاری خون چوسنے والی خاتون اینوفیلس عربینس کی پرواز کی کارکردگی جو گائے کا پیشاب اور یوریا کھا رہی تھی۔ فلائٹ مل ٹیسٹ میں، مادہ مچھروں کو تازہ اور بوڑھے گائے کا پیشاب کھلایا گیا، یوریا، سوکروز (10%) اور ڈسٹل واٹر (H2O) کی مختلف ارتکازوں کو آزادانہ طور پر گھومنے کے لیے گھومنے کے لیے آزادانہ طور پر بند کیا گیا۔ (اوپر)۔میزبان کی تلاش کرنے والی (بائیں) اور خون چوسنے والی (دائیں) خواتین کے لیے، 24 گھنٹے کی مدت میں ہر خوراک کے لیے فی گھنٹہ پروازوں کی کل فاصلہ اور تعداد ریکارڈ کی گئی تھی (سیاہ: سرمئی؛ ہلکا: سفید)۔ اوسط فاصلہ اور باؤٹس کی اوسط تعداد سرکیڈین سرگرمی کے گراف کے دائیں طرف دکھائی گئی ہے۔ خرابی کا مطلب معیاری متن کی نشاندہی کرتا ہے۔
عام طور پر، میزبان کی تلاش کرنے والی خواتین کی مجموعی پرواز کی سرگرمی 24 گھنٹے کی مدت کے دوران پرواز کے فاصلے کی طرح ایک پیٹرن کی پیروی کرتی ہے۔ اوسط پرواز کا فاصلہ کھانے کی خوراک سے نمایاں طور پر متاثر ہوا (F(5, 138) = 28.27, p <0.0001)، اور میزبان کی تلاش کرنے والی خواتین نے 72 گھنٹے کی طویل فاصلہ کی خوراک کے مقابلے 0.0001)، اور سوکروز سے کھلائے جانے والے مچھر تازہ (p = 0.022) اور 24 گھنٹے کی عمر کے پیشاب (p = 0.022) سے زیادہ دیر تک اڑتے تھے۔ پیشاب کی خوراک کی طرف سے بیان کردہ پرواز کی سرگرمی کے پیٹرن کے برعکس، یوریا سے کھلایا ہوا میزبان-خواتین کے دوران پرواز کرنے والی 4 خواتین کی عمر کے دوران پرواز کی سرگرمی۔ تاریک مرحلے کے دوسرے نصف حصے میں چوٹی (تصویر 3)۔اگرچہ سرگرمی کے نمونے یکساں تھے، میزبان کی تلاش کرنے والی خواتین نے جذب شدہ ارتکاز (F(5, 138) = 1310.91، p <0.0001) کے لحاظ سے یوریا کھلایا۔ یا سوکروز (p <0.03)۔
خون چوسنے والے مچھروں کی مجموعی پرواز کی سرگرمی تمام غذاوں میں 24 گھنٹے سے زیادہ مستحکم اور برقرار رہی، اندھیرے دور کے دوسرے نصف حصے میں پانی پینے والی خواتین کے ساتھ ساتھ تازہ کھلائی جانے والی اور 24 گھنٹے کی عمر کی خواتین میں پیشاب کی سرگرمی میں اضافہ ہوا (تصویر 3)۔ 0.0004)، یوریا کی خوراک نے نہیں کیا (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24) .دوسری پیشاب اور کنٹرول والی خوراک کے ساتھ (تازہ، p = 0.0091؛ 72 گھنٹے، p = 0.0022؛ 168 گھنٹے، p = 0.001؛ p = 0.001؛ p0d = 7؛ sucrose؛ p = 0.001؛ p = 0.24) 0.036)۔
تولیدی پیرامیٹرز پر پیشاب اور یوریا پلانے کے اثرات کا اندازہ انڈے دینے والے بائیوسیز (شکل 4A) میں کیا گیا تھا اور ہر ایک مادہ کے انڈوں کی تعداد، انڈے کے سائز، اور نئے بچے ہوئے پہلے انسٹار لاروا کے مطابق جانچ کی گئی تھی۔ 0.0008؛ تصویر 4B۔ خواتین نے 24 گھنٹے پیشاب کھلایا، خون کے کھانے نے خواتین کو پیشاب کی دوسری خوراکوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ انڈے دیے اور وہ ان سوکروز سے ملتے جلتے تھے (تصویر 4B)۔ 0.0001)، 24 گھنٹے پیشاب کے ساتھ اور سوکروز سے کھلائی جانے والی خواتین پانی سے کھلانے والی خواتین کے مقابلے میں نمایاں طور پر بڑے انڈے دیتی ہیں، جبکہ 168 گھنٹے پیشاب کے ساتھ کھلائی جانے والی خواتین کے انڈے نمایاں طور پر چھوٹے تھے (تصویر 4C)۔ اس کے علاوہ، پیشاب کی خوراک نے لاروا کے سائز (F(5. 7. 8، 7، 8) کو نمایاں طور پر متاثر کیا۔ 24- اور 72-گھنٹے پرانی پیشاب کرنے والی خواتین کے انڈوں سے نکلنے والے انڈوں سے نمایاں طور پر بڑے لاروا نکلتے ہیں۔
گائے کے پیشاب اور یوریا پر کھانا کھلانے والی مادہ اینوفیلس عربینس کی تولیدی کارکردگی۔ خون سے چلنے والی مادہ مچھروں کو تازہ اور بوڑھے گائے کا پیشاب، یوریا کی مختلف مقدار، سوکروز (10٪)، اور ڈسٹل واٹر (H2O) پر مشتمل غذا کھلائی گئی اور انڈوں کو انڈوں میں رکھنے سے 48 گھنٹے پہلے اور 4 گھنٹے تک انڈوں کو جمع کرنے سے پہلے۔ (A)۔ انڈے کا نمبر (B, E)، انڈے کا سائز (C, F) اور لاروا کا سائز (D, G) فراہم کردہ خوراک سے نمایاں طور پر متاثر ہوئے (گائے کا پیشاب: BD؛ یوریا: EG)۔ مختلف حروف کے ناموں کا استعمال کرتے ہوئے ماپا جانے والے ہر پیرامیٹر کا مطلب ایک دوسرے سے نمایاں طور پر مختلف تھا (ٹوکی کے پوسٹ ہاک تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے ایک طرفہ ANOVA؛ p
میزبان کی تلاش میں بوائین پیشاب کے ہیڈ اسپیس کے اتار چڑھاؤ کے لیے مجموعی طور پر کشش۔ گلاس ٹیوب اولفیکٹومیٹر (تصویر 5A) میں اندازہ کیا گیا arabiensis پیشاب کی عمر سے نمایاں طور پر متاثر ہوا (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; flyigana ظاہر ہوا)۔ 24 گھنٹوں میں پیشاب کی بدبو دیگر تمام علاجوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ کشش کا باعث بنتی ہے (72 گھنٹے: p = 0.0060، 168 گھنٹے: p = 0.012، pentane: p = 0.00070)، سوائے تازہ پیشاب کی بو کے (p = 0.13؛ خون کی مجموعی طور پر زیادہ کشش۔ پیشاب کی بدبو سے مچھر نمایاں طور پر مختلف نہیں تھے (χ2 = 8.78, df = 4, p = 0.067; Fig. 5C)، یہ خواتین 72 گھنٹے کی عمر کے پیشاب کے مقابلے میں ہیڈ اسپیس کے اتار چڑھاؤ کے لیے نمایاں طور پر زیادہ پرکشش پائی گئیں۔
میزبان کی تلاش میں قدرتی اور مصنوعی گائے کے پیشاب کی بدبو کے بارے میں طرز عمل کے ردعمل اور خون سے پلائے جانے والے اینوفیلس عربینس۔ شیشے کی ٹیوب اولفیکٹو میٹر (A) کی اسکیمیٹک۔ تازہ اور بوڑھے گائے کے پیشاب سے میزبان (B) کی طرف ہیڈ اسپیس کے اتار چڑھاؤ اور خون چوسنے والے (C) کے رب کی طرف سے 10 کے رد عمل کی طرف راغب۔ تازہ (D)، 24-hour (E)، 72-hour (F)، اور 168-hour (G) پرانے گائے کے پیشاب سے الگ تھلگ ہیڈ اسپیس کے نچوڑ دکھائے گئے ہیں۔ الیکٹران اینٹینا کا پتہ لگانے (EAD) کے نشانات ہیڈ اسپیس میں بائیو ایکٹیو مرکبات کے جواب میں وولٹیج کی تبدیلیوں کو ظاہر کرتے ہیں اور گراف کے ذریعے کھوجنے والی گیس کا پتہ لگاتے ہیں۔ (FID)۔ اسکیل بار ریسپانس ایمپلیٹیوڈ (mV) بمقابلہ برقرار رکھنے کے وقت (s) کی نمائندگی کرتا ہے۔ حیاتیاتی طور پر فعال مرکبات کی خصوصیات اور رہائی کی شرح (µg h-1) دکھائی گئی ہے۔ ایک ستارہ (*) مستقل کم طول و عرض کے ردعمل کی نشاندہی کرتا ہے۔ ڈبل ستارے (**) غیر تولیدی ردعمل کی نشاندہی کرتے ہیں (*) خون کی غیر تولیدی شکل ()۔ An.arabiensis کی تازہ اور عمر رسیدہ گائے کے پیشاب کی بدبو کے مصنوعی مرکب کے لیے مختلف اپیلیں ہیں۔ مختلف حروف کے ناموں کی طرف متوجہ مچھروں کے اوسط تناسب ایک دوسرے سے نمایاں طور پر مختلف تھے (ٹوکی کے پوسٹ ہاک تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے یک طرفہ ANOVA؛ p <0.05)۔ ایرر بارز پیمانے کی معیاری غلطی کی نمائندگی کرتے ہیں۔
خواتین Ann.arabiensis، خون کے کھانے کے 72 گھنٹے اور 120 گھنٹے بعد، سپوننگ کے دوران، پینٹین کنٹرولز (χ2 = 3.07، p > 0.05؛ اضافی فائل 1: تصویر S1) کے مقابلے میں تازہ اور بوڑھے گائے کے پیشاب سے ہیڈ اسپیس کے اتار چڑھاؤ کے لیے کوئی ترجیح نہیں دکھائی گئی۔
خواتین Ann.arabiensis کے لیے، GC-EAD اور GC-MS کے تجزیوں نے آٹھ، چھ، تین اور تین بائیو ایکٹیو مرکبات کی نشاندہی کی (شکل 5D-G)۔ اگرچہ الیکٹرو فزیولوجیکل ردعمل پیدا کرنے والے مرکبات کی تعداد میں فرق دیکھا گیا، لیکن ان میں سے زیادہ تر مرکبات ہر ہیڈ اسپیس میں موجود تھے، جو کہ ہر ایک کے لیے اتارے گئے اتار چڑھاؤ کے لیے اکٹھا کیے گئے تھے۔ وہ مرکبات جنہوں نے دہلیز کے اوپر زنانہ اینٹینا سے جسمانی ردعمل پیدا کیا انہیں مزید تجزیوں میں شامل کیا گیا۔
ہیڈ اسپیس کلیکشن میں بائیو ایکٹیو مرکبات کی کل اتار چڑھاؤ کی شرح تازہ پیشاب میں 29 µg h-1 سے بڑھ کر 168 گھنٹے پرانے پیشاب میں 242 µg h-1 ہوگئی، جس کی بنیادی وجہ p-cresol اور m-formaldehyde فینول کے ساتھ ساتھ فینول کی رہائی کی شرح میں اضافہ ہوتا ہے۔ اس کے برعکس، دیگر مرکبات 2-cyclohexen-1-one اور decanal، پیشاب کی بڑھتی ہوئی عمر کے ساتھ کم ہوا، جو کرومیٹوگرام (تصویر 5D) -G بائیں پینل) میں سگنل کی شدت (کثرت) میں مشاہدہ شدہ کمی اور ان مرکبات کے جسمانی ردعمل (تصویر 5D-G دائیں پینل) سے منسلک ہے۔
مجموعی طور پر، مصنوعی مرکب میں حیاتیاتی مرکبات کا ایک جیسا قدرتی تناسب تھا جس کی شناخت تازہ اور عمر رسیدہ پیشاب کی جگہوں (تصویر 5D–G) کے اتار چڑھاؤ سے ہوتی ہے اور میزبان کی تلاش میں کوئی خاص اپیل نہیں کرتا تھا (χ2 = 4.91, df = 4, p = 0.30؛ تصویر 5I)۔ تاہم، علاج کے درمیان جوڑے کے بعد کے موازنہ سے پتہ چلتا ہے کہ میزبان کی تلاش کرنے والے مچھر پینٹین کنٹرولز کے مقابلے میں 24-h عمر کے پیشاب کے مصنوعی مرکب کے لیے نمایاں طور پر پرکشش تھے۔
24-گھنٹے پرانے پیشاب کے مصنوعی مرکب میں انفرادی اجزاء کے کردار کا اندازہ لگانے کے لیے، Y-tube پرکھ میں مکمل مرکب کے مقابلے میں چھ تخفیف آمیزوں کا جائزہ لیا گیا، جس میں انفرادی مرکبات کو ہٹا دیا گیا تھا۔ میزبان کے متلاشی مچھروں کے لیے، مکمل مرکب سے انفرادی مرکبات کو گھٹا کر، χ63 کے رویے پر اہم اثر پڑتا ہے df = 6، p = 0.0032؛ اضافی فائل 1: Figure S2A)، تمام تخفیف آمیز مرکبات مکمل طور پر مکس کیے جانے سے چھوٹے سے زیادہ پرکشش تھے۔ 0.077)، ڈیکنال کے استثناء کے ساتھ، جس کے نتیجے میں مکمل مرکب کشش (p = 0.022؛ اضافی فائل 1: Figure S2B) کے مقابلے میں کم سطحیں آئیں۔
ایتھوپیا کے ایک ملیریا سے متاثرہ گاؤں میں، کھیت کے حالات میں مچھروں کو اپنی طرف متوجہ کرنے کے لیے 24 گھنٹے گائے کے پیشاب کے مصنوعی مرکب کی افادیت کا دس راتوں تک جائزہ لیا گیا (تصویر 6A)۔ کل 4,861 مچھر پکڑے گئے اور ان کی شناخت کی گئی، جن میں سے 45.8% 19.7% مچھر تھے۔ Anopheles pharoensis تھے اور 35.4% Culex spp. بغیر مکسچر کے ٹریپس (χ2(0, 3196) = 170.0, p <0.0001) .مقدمہ کے آغاز، درمیانی اور اختتام پر پانچ کنٹرول راتوں میں سے ہر ایک پر بغیر لالچ والے جال لگائے گئے تھے۔ اسی طرح کی تعداد میں مچھروں کو ہر ایک جوڑے میں پکڑا گیا تھا۔ 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) اور مطالعہ کی مدت کے دوران آبادی میں کوئی کمی نہیں ہوئی۔ کنٹرول ٹریپس کے مقابلے میں، مصنوعی مرکب پر مشتمل ٹریپس میں پکڑے جانے والے مچھروں کی تعداد میں نمایاں اضافہ ہوا: میزبان کی تلاش (χ2(0, 2107)، حالیہ خون، <1018. (χ2(0, 650) = 32.2, p <0.0001) اور حمل (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.0123؛ اضافی فائل 1: ٹیبل S1)۔ یہ پکڑے گئے مچھروں کی کل تعداد سے بھی ظاہر ہوتا ہے: میزبان > پریگننٹ > خون کی تلاش۔
24 گھنٹے کے مصنوعی گائے کے پیشاب کی بدبو کے مرکب کی افادیت کا فیلڈ کا جائزہ۔ فیلڈ ٹرائلز جنوبی وسطی ایتھوپیا (نقشہ) میں، ماکی کے قصبے کے قریب (انسرٹ) کیے گئے، جوڑے والے گھروں میں بیماریوں کے کنٹرول کے مرکز (سی ڈی سی) لائٹ ٹریپ (دائیں) کا استعمال کرتے ہوئے، جوڑا بنائے گئے اسکوائر ڈیزائن کے ساتھ۔ بدبو سے بھرے سی ڈی سی فوٹو ٹراپس مادہ اینوفیلس عربیسک (B) کو اپنی طرف متوجہ کرتے ہیں اور پکڑتے ہیں، لیکن انوفلیس فاررو (C) کو نہیں، ایک مختلف انداز میں، ایک جسمانی حالت پر منحصر اثر۔ اس کے علاوہ، ان ٹریپس نے میزبان کیولیکس مچھروں کی نمایاں طور پر بڑھتی ہوئی تعداد کو پکڑا ہے۔ (D) کے مقابلے میں۔ بدبودار بیت (سبز) اور کنٹرول (اوپن) ٹریپس (N = 10)، جبکہ دائیں طرف کی سلاخیں کنٹرول ٹریپس کے جوڑوں میں اوسط سلیکشن انڈیکس کی نمائندگی کرتی ہیں (کھلے؛ N = 5)۔ ستارے شماریاتی اہمیت کی سطحوں کی نشاندہی کرتے ہیں (*p = 0.01 اور ***p <0.0001)
تینوں پرجاتیوں کو مصنوعی مرکب پر مشتمل پھندوں میں مختلف طریقے سے پکڑا گیا تھا۔ میزبان (χ2(1, 1345) = 71.7, p <0.0001)، خون کی خوراک (χ2(1, 517) = 16.7, p <0.0001) اور حمل (p.1 = 1, 1) اور حمل (χ2(1, 0.0001) 0.0134) a .arabiensis مصنوعی مرکب (تصویر 6B) کو جاری کرنے والے جال میں پھنس گیا تھا، جبکہ An کی مقدار میں کوئی فرق نہیں تھا۔ مختلف جسمانی حالتوں میں Pharoensis پایا گیا تھا (تصویر 6C)۔ Culex کے لیے، مچھروں کی تعداد میں صرف ایک قابل ذکر اضافہ ہوا تھا جو سنتھیٹک مرکب کی تلاش میں تھے (χ2(1,1319) = 12.6، p = 0.0004؛ تصویر 6D)، کنٹرول ٹریپس کے مقابلے۔
ایتھوپیا میں افزائش کے مقامات اور دیہی برادریوں کے درمیان ممکنہ میزبانوں کے باہر واقع ہوسٹ بیت ٹریپس کا استعمال اس بات کا جائزہ لینے کے لیے کیا گیا تھا کہ آیا ملیریا کے مچھر گائے کے پیشاب کی بدبو کو میزبان رہائش کے اشارے کے طور پر استعمال کرتے ہیں۔ Figure S3) تاہم، اعلی درجہ حرارت اور گائے کے پیشاب کی بدبو کی موجودگی میں، مادہ ملیریا مچھروں کو اپنی طرف متوجہ کیا گیا اور پکڑ لیا گیا، اگرچہ کم تعداد میں، پیشاب کی عمر سے آزاد (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13؛ اضافی فائل 1: Figure S3 نے زیادہ مقدار میں پانی کو کنٹرول نہیں کیا)۔ درجہ حرارت (اضافی فائل 1: شکل S3)۔
ملیریا کے مچھر گائے کے پیشاب (یعنی پڈلز) پر معاوضہ خوراک کے ذریعے نائٹروجن پر مشتمل مرکبات حاصل کرتے ہیں اور تقسیم کرتے ہیں تاکہ زندگی کی تاریخ کی خصوصیات کو بہتر بنایا جا سکے، جیسا کہ دوسرے حشرات [2, 4, 24, 25, 26]۔ گائے کا پیشاب ایک ایسا ذریعہ ہے جو آسانی سے دستیاب جگہوں کے ساتھ آرام دہ اور پرسکون جگہوں پر دستیاب ہے۔ دیہی گھروں اور انڈوں کی جگہوں کے قریب گائے کی جگہوں اور لمبے پودوں کے طور پر۔ مادہ مچھر اس وسیلے کو سونگھ کر تلاش کرتے ہیں اور پیشاب میں نائٹروجن مرکبات کے اخراج کو منظم کرنے کے قابل ہوتے ہیں، بشمول یوریا، پیشاب میں موجود اہم نائٹروجنی جزء پیشاب میں موجود غذائی اجزاء میزبان کی تلاش کرنے والی مادہ مچھروں کی پرواز کی سرگرمی اور بقا کو بڑھانے کے لیے مختص کیے جاتے ہیں، نیز پہلے گوناڈوٹروپک سائیکل کے دوران خون سے کھلائے جانے والے افراد کی بقا اور تولیدی خصوصیات۔ اس لیے پیشاب کی آمیزش ایک اہم غذائیت کا کردار ادا کرتی ہے جو کہ ملیریا کے شکار بالغوں کے لیے بند ہوتی ہے۔ مادہ مچھریں کم خطرے والی خوراک میں شامل ہو کر اہم نائٹروجن مرکبات حاصل کرنے کی صلاحیت رکھتی ہیں۔ اس دریافت کے وبائی امراض کے اہم نتائج ہوتے ہیں، کیونکہ خواتین اپنی متوقع عمر، سرگرمی اور تولیدی پیداوار میں اضافہ کرتی ہیں، یہ سب ویکٹر کی صلاحیت کو متاثر کرتے ہیں۔ مزید برآں، یہ رویہ مستقبل کے ویکٹر مینجمنٹ پروگراموں کا ہدف ہو سکتا ہے۔
پوسٹ ٹائم: جولائی 07-2022
