Nature.com saytiga tashrif buyurganingiz uchun tashakkur. Siz foydalanayotgan brauzer versiyasi CSS-ni cheklangan darajada qo‘llab-quvvatlaydi. Eng yaxshi tajriba uchun yangilangan brauzerdan foydalanishni tavsiya qilamiz (yoki Internet Explorer-da moslik rejimini o‘chirib qo‘ying). Ayni paytda qo‘llab-quvvatlashning davom etishini ta’minlash uchun biz saytni uslublar va JavaScript-larsiz ko‘rsatamiz.
G'ovakli kremniy zarralari makrog'ovak zarrachalarni olish uchun ba'zi o'zgartirishlar bilan sol-gel usuli bilan tayyorlangan. Bu zarralar N-fenilmaleimid-metilvinilizosiyanat (PMI) va stirol bilan qaytariladigan qo'shilish bo'linish zanjiri o'tkazuvchanligi (RAFT) polimerizatsiyasi orqali N-fenilmaleimid-metil-fazali polipropilen-naro-fazali polipropilen-fazalarni tayyorlash uchun olingan. po'lat ustunlar (100 × 1,8 mm id) atala qadoqlash bilan qadoqlangan edi. Besh peptidlar (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Chromaty-Arg, digalum-albom) va digalumning ko'rsatkichi) dan iborat peptid aralashmasining PMP ustunini ajratish baholandi. (HAS) da. Optimal elutsiya sharoitida peptid aralashmasining nazariy plastinka soni 280 000 plastinka/m² ni tashkil qiladi. Ishlab chiqilgan ustunning ajratish ko'rsatkichlarini tijorat Ascentis Express RP-Amide ustuni bilan solishtirganda, PMP ustunining ajratish ko'rsatkichi ajratish samaradorligi va rezolyutsiya jihatidan tijorat ustunidan ustun ekanligi kuzatildi.
So'nggi yillarda biofarmatsevtika sanoati bozor ulushi sezilarli darajada o'sib borayotgan global bozorga aylandi. Biofarmatsevtika sanoatining portlovchi o'sishi bilan 1,2,3 peptidlar va oqsillarni tahlil qilish juda istaydi. Maqsadli peptidga qo'shimcha ravishda, peptid sintezi jarayonida bir nechta aralashmalar hosil bo'ladi, shuning uchun peptidlarning xromatografik tahlilini va xromatologik tahlilni olishni talab qiladi. Tana suyuqliklari, to'qimalari va hujayralaridagi oqsillarni aniqlash juda qiyin vazifadir, chunki bitta namunada potentsial aniqlanishi mumkin bo'lgan ko'plab turlar mavjud. Mass-spektrometriya peptid va oqsillarni ketma-ketligini aniqlash uchun samarali vosita bo'lsa-da, agar bunday namunalar massa spektrometriga bir marta yuborilsa, ajratish ideal bo'lmaydi. ma'lum bir vaqtda massa spektrometriga kiruvchi litlar4,5,6.Bundan tashqari, suyuqlik fazalarini ajratish vaqtida tahlil qiluvchi moddalar tor hududlarga qaratilishi mumkin, shu bilan bu tahlilchilarni konsentratsiyalash va MSni aniqlash sezgirligini oshirish mumkin.Suyuqlik xromatografiyasi (LC) so'nggi o'n yil ichida sezilarli darajada rivojlangan va proteomik tahlilda mashhur texnikaga aylangan,8,9170.
Teskari fazali suyuqlik xromatografiyasi (RP-LC) statsionar faza sifatida oktadesil-modifikatsiyalangan silika (ODS) yordamida peptid aralashmalarini tozalash va ajratish uchun keng qo'llaniladi. s bu analitlar bilan o'zaro ta'sir qilish va ularni saqlab qolish uchun qutbli va qutb bo'lmagan qismlarga ega peptidlar va oqsillarni tahlil qilish uchun talab qilinadi16. Multimodal o'zaro ta'sirlarni ta'minlaydigan aralash rejimli xromatografiya peptidlar, oqsillar va boshqa murakkab aralashmalarni ajratish uchun RP-LC ga muqobil bo'lishi mumkin. 17,18,19,20,21.Aralash rejimli statsionar fazalar (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, qutbli interkalatsiya/RPLC) ham qutbli, ham qutbsiz guruhlar mavjudligi sababli peptid va oqsillarni ajratish uchun mos keladi22,23,24,25,26,27,28 .Polar oraliq boʻlinishlar bilan yaxshi fazali boʻlinishlarni koʻrsatadi. qutbli va qutbsiz analitlar uchun quvvat va noyob selektivlik, chunki ajratish analit va statsionar faza o'rtasidagi o'zaro ta'sirga bog'liq.Multimodal shovqinlar 29, 30, 31, 32.Yaqinda Zhang va boshqalar.30 dodesil bilan tugallangan poliamin statsionar fazasini tayyorladi va uglevodorodlar, antidepressantlar, flavonoidlar, nukleozidlar, estrogenlar va boshqa bir qancha tahliliy moddalarni muvaffaqiyatli ajratdi. Polar interkalator ham qutbli, ham qutbsiz guruhlarga ega, shuning uchun ham gidrofobik, ham gidro-poliaminli kolonnali, gidro-poliaminli, statsionar fazaga ega bo'lgan peptidlar va oqsillarni ajratish uchun foydalanish mumkin. C18 ustunlari) Ascentis Express RP-Amide ustunlari savdo nomi ostida mavjud, ammo bu ustunlar faqat amin 33 tahlili uchun ishlatiladi.
Joriy tadqiqotda HSA ning peptidlari va tripsin hazm qilishlarini ajratish uchun qutbga o'rnatilgan statsionar faza (N-fenilmaleimid o'rnatilgan polistirol) tayyorlandi va baholandi. Statsionar faza quyidagi strategiyadan foydalangan holda tayyorlangan. Gözenekli silika zarralari oldingi nashrimizda keltirilgan protsedura bo'yicha tayyorlangan. ), TMOS, suv sirka kislotasi katta gözenekli kremniy zarralarini tayyorlash uchun o'rnatildi. Ikkinchidan, yangi ligand, fenilmaleimid-metil vinil izosiyanat sintez qilindi va qutbga o'rnatilgan statsionar fazani tayyorlash uchun silika zarralarini hosil qilish uchun foydalanildi. Olingan statsionar faza 0 1 po'latdan foydalangan holda optimallashtirildi. ing sxemasi. Ustun ichida bir hil to'shak hosil bo'lishini ta'minlash uchun kolonna o'rash mexanik tebranish bilan yordam beradi. Besh peptiddan iborat peptid aralashmalarning qadoqlangan ustun ajratish baholang;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) va tripsin hazm qilish inson zardobidagi albumin (HAS). Peptid aralashmasi va HSA ning tripsin hazm qilish yaxshi rezolyutsiya bilan ajralib turishi kuzatildi. Ascentis Express RP-Amide ustunidan ko'ra samaraliroq bo'lgan PMP ustunida ham peptidlar, ham oqsillar yaxshi echilgan va samarali ekanligi kuzatildi.
PEG (polietilen glikol), karbamid, sirka kislotasi, trimetoksi ortosilikat (TMOS), trimetilxlorosilan (TMCS), tripsin, inson zardobidagi albumin (HSA), ammoniy xlorid, karbamid, geksan metildisilazan (HMDS), metakridi (Metakridi) Benzoil peroksid (BPO), HPLC darajasidagi asetonitril (ACN), metanol, 2-propanol va aseton Sigma-Aldrichdan (Sent-Luis, MO, AQSh) sotib olingan.
Karbamid (8 g), polietilen glikol (8 g) va 8 ml 0,01 n sirka kislotasi aralashmasi 10 daqiqa davomida aralashtiriladi, so'ngra muzdek sovuq sharoitda unga 24 ml TMOS qo'shiladi. Reaksiya aralashmasi 40 ° C da 6 soat davomida isitiladi va keyin 120 ° C haroratda suvsiz po'latda 8 soat davomida isitiladi. qoldiq material 70 ° C da 12 soat davomida quritilgan. Quritilgan yumshoq massa pechda silliq maydalangan va 12 soat davomida 550 ° C da kalsinlangan. Zarrachalar hajmi, gözenek hajmi va sirt maydoni bo'yicha takror ishlab chiqarishni tekshirish uchun uchta partiya tayyorlangan va tavsiflangan.
Oldindan sintez qilingan ligand fenilmaleimid-metilvinilizosiyanat (PCMP) bilan kremniy zarralarini sirt modifikatsiyasi, so'ngra stirol bilan radial polimerizatsiya orqali qutbli guruhni o'z ichiga olgan birikma tayyorlandi.Agregatlar va polistirolli zanjirlar uchun statsionar bosqich.Tayyorlash jarayoni quyida tavsiflanadi.
N-fenilmaleimid (200 mg) va metil vinil izosiyanat (100 mg) quruq toluolda eritildi va 0,1 ml 2,2'-azoizobutironitril (AIBN) fenilmaleimid-metil vinilpolimerini tayyorlash uchun reaksiya kolbasiga qo'shildi (CP3 ° C haroratda qizdirildi). soat, filtrlanadi va pechda 3 soat davomida 40 ° C da quritiladi.
Quritilgan silika zarralari (2 g) quruq toluolda (100 ml) tarqatildi, aralashtirildi va 500 ml dumaloq tubi kolbada 10 daqiqa davomida sonikatsiya qilindi. PMCP (10 mg) toluolda eritildi va tomchilatib yuboriladigan voronka orqali reaksiya kolbasiga qo'shildi. Aralashma 100 ° C da yuviladi va 100 ° C haroratda filtrlanadi. 3 soat davomida 60 ° C da. So'ngra, PMCP bilan bog'langan kremniy zarralari (100 g) toluolda (200 ml) eritildi va 4-gidroksi-TEMPO (2 ml) katalizator sifatida 100 µL dibutiltin dilaurat ishtirokida qo'shildi. Aralashma 50 ° C da 8 soat davomida filtrlanadi, filtrlanadi, 5 ° C da filtrlanadi. 3 soat.
Stirol (1 ml), benzoil peroksid BPO (0,5 ml) va TEMPO-PMCP bilan biriktirilgan silika zarralari (1,5 g) toluolda tarqatildi va azot bilan tozalandi. Stirolning polimerizatsiyasi 100 ° C da 12 soat davomida amalga oshirildi. Olingan mahsulot kechasi bilan yuvildi. men 1-rasmda ko'rsatilgan.
Namunalar 10-3 Torr dan kam qoldiq bosim olish uchun 1 soat davomida 393 K haroratda gazsizlandi. P/P0 = 0,99 nisbiy bosimda adsorbsiyalangan N2 miqdori umumiy gözenek hajmini aniqlash uchun foydalanildi. Yalang'och va ligand bilan bog'langan kremniy zarralarining morfologiyasi (Yuqori texnologiyali skanerdan o'tkazildi, elektrokimyoviy skanerdan o'tkazildi). quritilgan namunalar (yalang'och kremniy va ligand bilan bog'langan kremniy zarralari) yopishqoq uglerodli lenta yordamida alyuminiy ustunga joylashtirildi. Q150T purkagich yordamida oltin qo'yildi va namunalar ustiga 5 nm Au qatlami yotqizildi. Bu past kuchlanishlardan foydalangan holda jarayon samaradorligini oshiradi va MAW grain grainhamron, nozik grain bilan ta'minlaydi. Elementlarni tahlil qilish uchun 1112 element analizatori ishlatilgan. Zarrachalar hajmi taqsimotini olish uchun Malvern (Worcestershire, Buyuk Britaniya) Mastersizer 2000 zarracha o'lchami analizatori ishlatilgan. Yalang'och silika zarralari va ligand bilan bog'langan kremniy zarralari (har biri 5 mg) 5 ml izopropanolga tarqalib, maydalangan va optopropanol uchun maydalangan, maydalangan, maydalangan. Mastersizerning.Termogravimetrik tahlili 30 dan 800 °C gacha bo'lgan harorat oralig'ida daqiqada 5 °C tezlikda amalga oshirildi.
Shisha bilan qoplangan zanglamaydigan po'latdan yasalgan o'lchamdagi tor teshikli ustunlar (100 × 1,8 mm id) atala qadoqlash usulidan foydalangan holda, Ref.31. Zanglamaydigan po'latdan yasalgan ustun (shisha bilan qoplangan, 100 × 1,8 mm id) o'z ichiga 1 mkm fritni o'z ichiga olgan chiqish moslamasiga ulangan (Alltech Deerfield, IL, AQSH). 150 mg statsionar fazani to'xtatib, statsionar fazali atala tayyorlang. 10 daqiqa davomida 100 MP, 15 daqiqa davomida 80 MP va 30 daqiqa davomida 60 MP bosim qo'llash orqali ustunni ketma-ket to'ldiring. Qadoqlash paytida ikkita GC kolonnali silkitgich (Alltech, Deerfield, IL) bilan mexanik tebranish qo'llanildi. ustun ichidagi har qanday shikastlanmaslik uchun asta-sekin bosim o'tkazing. Ustunni atala qadoqlash moslamasidan ajratib oling va uning ishlashini tekshirish uchun kirish va LC tizimiga boshqa fittingni ulang.
LC nasosi (10AD Shimadzu, Yaponiya), injektor (Valco (AQSh) C14 W.05), 50 nL in'ektsiya halqasi, membrana degasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS kapillyar oynasi maxsus mLC qurilmasi detektori (UV-2075) va shisha qatlamlarni qo'shimcha ravishda qisqa tutashtirish ta'sirida qurilgan. Qadoqlashdan so'ng kapillyarlar (50 mkm id 365 va qisqartiruvchi birlashma kapillyarlari (50 mkm) qisqartiruvchi birlashmaning 1/16" chiqishiga o'rnatildi. Ma'lumotlarni yig'ish va xromatografik ishlov berish Multichro 2000 dasturiy ta'minoti yordamida amalga oshirildi. 254 mkm ma'lumotlarning so'rilishi uchun 254 mikron emilim testi orqali tahlil qilindi. (Northampton, MA).
Inson zardobidan albumin, liyofillangan kukun, ≥ 96% (agaroz jeli elektroforezi) 3 mg tripsin (1,5 mg), 4,0 M karbamid (1 ml) va 0,2 M ammoniy bikarbonat (1 ml) bilan aralashtiriladi. Eritma 10 daqiqa davomida aralashtiriladi va keyin 10 daqiqa davomida aralashtiriladi va 7 soat davomida quen 1 ° C li suv hammomida saqlanadi. 0,1% TFA. Eritmani filtrlang va 4 °C dan past haroratda saqlang.
Peptid aralashmalari va HSA tripsin hazm qilishlari PMP ustunlarida alohida baholandi.PMP ustuni orqali HSA ning peptid aralashmasi va tripsin hazm bo‘lishini tekshiring va natijalarni Ascentis Express RP-Amide ustuni bilan solishtiring.Nazariy plastinka raqami quyidagicha hisoblanadi:
Yalang'och kremniy zarralari va ligand bilan bog'langan silika zarralarining SEM tasvirlari shaklda ko'rsatilgan.2 .Yalang'och kremniy zarralarining (A, B) SEM tasvirlari shuni ko'rsatadiki, avvalgi tadqiqotlarimizdan farqli o'laroq, bu zarralar sharsimon bo'lib, ularda zarrachalar cho'zilgan yoki tartibsiz simmetriyaga ega. ca zarralari.
Yalang'och kremniy zarralari (A, B) va ligand bilan bog'langan silika zarralari (C, D) ning skanerlash elektron mikroskop tasvirlari.
Yalang'och kremniy zarralari va ligand bilan bog'langan kremniy zarralarining zarracha hajmi taqsimoti shakl 3 (A) da ko'rsatilgan. Hajmi bo'yicha zarracha hajmi taqsimoti egri chizig'i kimyoviy modifikatsiyadan so'ng silika zarrachalarining o'lchami ortganligini ko'rsatdi (3A-rasm). Hozirgi o'rganishdan olingan kremniy zarralarining zarracha o'lchami taqsimoti ma'lumotlari va oldingi zarrachaning T ga asoslangan hajmi (A), taqqoslanadigan hajmi , d. Ad(0,5) qiymati 3,05 mkm (polistirol bilan bog'langan kremniy zarralari) 34. Bu partiya PEG, karbamid, TMOS va sirka kislotasining nisbati o'zgarib turishi tufayli zarracha o'lchamlari taqsimoti torroq edi. Biz ilgari o'rgangan kremniy zarralari fazasi. Bu shuni anglatadiki, kremniy zarralarining stirol bilan sirt funktsionalizatsiyasi faqat silika yuzasida polistirol qatlamini (0,97 mkm) yotqizgan, PMP bosqichida qatlam qalinligi 1,38 mkm edi.
Yalang'och kremniy zarralari va ligand bilan bog'langan silika zarralarining zarracha o'lchami taqsimoti (A) va gözenek hajmi taqsimoti (B).
Joriy tadqiqotdagi kremniy zarralarining g'ovak o'lchami, g'ovak hajmi va sirt maydoni 1(B)-jadvalda keltirilgan. Yalang'och silika zarralari va ligand bilan bog'langan kremniy zarralarining PSD profillari 3(B)-rasmda ko'rsatilgan. Natijalar bizning oldingi tadqiqotimiz bilan solishtirish mumkin. Yalang'och va ligand zarralarining g'ovak o'lchamlari mos ravishda silika zarralari va silika zarralarini ko'rsatadi: 312, 1(B)-jadvalda ko'rsatilganidek, kimyoviy modifikatsiyadan keyin g'ovak hajmi 69 ga kamayadi va egri chiziqning o'zgarishi 3(B)-rasmda ko'rsatilgan. Xuddi shunday, kimyoviy modifikatsiyadan keyin kremniy zarralarining g'ovak hajmi 0,67 dan 0,58 sm3/g gacha kamaydi. Hozirda o'rganilgan silika zarralarining o'ziga xos sirt maydoni 16 m 2 ga kamaygan. (124 m2/g). 1(B)-jadvalda ko'rsatilganidek, kimyoviy modifikatsiyadan so'ng silika zarralarining sirt maydoni (m2/g) ham 116 m2/g dan 105 m2/g gacha kamaydi.
Statsionar fazaning elementar tahlili natijalari 2-jadvalda keltirilgan. Joriy statsionar fazaning uglerod yuklanishi 6,35% ni tashkil etadi, bu bizning oldingi tadqiqotimizdagi uglerod yuklanishidan past (polistirol bilan bog'langan kremniy zarralari, mos ravishda 7,93%35 va 10,21%) 42. Chunki SP ga joriy fazaning qo'shilishi past. stirol, fenilmaleimid-metilvinilizosiyanat (PCMP) va 4-gidroksi-TEMPO kabi ba'zi qutbli ligandlar ishlatilgan. Joriy statsionar fazadagi azotning og'irligi 2,21% ni tashkil qiladi, avvalgi tadqiqotlardagi 0,1735 va 0,85% azotga nisbatan 2,21% ni tashkil qiladi. fenilmaleimid. Xuddi shunday, (4) va (5) mahsulotlarning uglerod yuklari mos ravishda 2,7% va 2,9% ni tashkil etdi, 2-jadvalda ko'rsatilganidek, yakuniy mahsulotning uglerod yuki (6) 6,35% ni tashkil etdi. Vazn yo'qolishi PMP statsionar fazasi bilan tekshirildi va TGA egri chizig'i TGA 6 ga mos ravishda og'irlikni kamaytirishni ko'rsatadi. uglerod yuki (6,35%), chunki ligandlar nafaqat C, balki N, O va H ni ham o'z ichiga oladi.
Fenilmaleimid-metilvinilizosiyanat ligand kremniy zarralarining sirt modifikatsiyasi uchun tanlangan, chunki u qutbli fenilmaleimid guruhlari va vinilizosiyanat guruhlariga ega. faza, chunki fenilmaleimid qismi normal pHda virtual zaryadga ega emas. Statsionar fazaning qutbliligi stirolning optimal miqdori va erkin radikal polimerlanishning reaksiya vaqti bilan boshqarilishi mumkin. Reaksiyaning oxirgi bosqichi (erkin radikal polimerizatsiya) juda muhim va statsionar fazaning qutblanishini o'zgartirishi mumkin. reaktsiya vaqti statsionar fazaning uglerod yuklanishini oshirdi va aksincha. Har xil konsentratsiyali stirol bilan tayyorlangan SPlar turli xil uglerod yuklariga ega. Shunga qaramay, bu statsionar fazalarni zanglamaydigan po'latdan ustunlarga yuklang va ularning xromatografik ko'rsatkichlarini tekshiring (selektivlik, ruxsat, N qiymati va boshqalar). Ushbu tajribalar asosida, optimallashtirilgan fazali formulani tayyorlash uchun PMPning yaxshi nazorat qilinishini ta'minlash uchun statsionar anatomiya tanlandi.
Beshta peptid aralashmasi (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leysin enkefalin) ham mobil faza yordamida PMP ustuni yordamida baholandi;60/40 (v/v) asetonitril/suv (0,1% TFA) 80 mkL/min oqim tezligida. Optimal elutsiya sharoitida har bir ustun uchun nazariy plastinka raqami (N) (100 × 1,8 mm id) 20 000 ± 100 ni tashkil qiladi (200,000 ± 100 ni tashkil qiladi). romatogrammalar 5A-rasmda ko'rsatilgan. PMP ustunida yuqori oqim tezligida (700 mkL/min) tezkor tahlil, bir daqiqada besh peptid elutsiya qilindi, N qiymatlari juda yaxshi, har bir ustun uchun 13500 ± 330 (100 × 1,8 mm id), 135,000 mm dan 135,000 mm lik ustunga to'g'ri keladi. 00 × 1,8 mm identifikator) takrorlanuvchanligini tekshirish uchun PMP statsionar fazasining uch xil partiyasi bilan o‘ralgan. Har bir ustun uchun tahlil qiluvchi moddaning konsentratsiyasi optimal elutsiya sharoitlari va nazariy plitalar soni N va har bir ustunda bir xil sinov aralashmasini ajratish uchun ushlab turish vaqti yordamida qayd etilgan. PMP ustunlari uchun takrorlanuvchanlik ma’lumotlari PMP 4-jadvalida qayta ishlab chiqarishning juda past korrespondentlik qiymatlari bilan ko‘rsatilgan. 3-jadval.
PMP ustunida (B) va Ascentis Express RP-Amid ustunida (A) peptid aralashmasini ajratish;mobil faza 60/40 ACN / H2O (TFA 0,1%), PMP ustun o'lchamlari (100 × 1,8 mm id);Analitik birikmalarning elutsiya tartibi: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) va 5 (leytsin) kislota enkefalin)).
PMP ustuni (100 × 1,8 mm identifikator) yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida inson sarum albuminining triptik hazm bo'lishini ajratish uchun baholandi. 6-rasmdagi xromatogramma namuna yaxshi ajratilganligini va rezolyutsiya juda yaxshi ekanligini ko'rsatadi. HSA hazm qilishlari 100 mkL/suv va mobil fazali atse3%70ni, mobil fazada 100 mkL/daq. .Xromatogrammada (6-rasm) ko'rsatilganidek, HSA hazm qilish 17 peptidga mos keladigan 17 tepalikka bo'lingan. HSA dayjestidagi har bir cho'qqining ajratish samaradorligi hisoblangan va qiymatlar 5-jadvalda keltirilgan.
HSA (100 × 1,8 mm id) ning triptik hazmi PMP ustunida ajratilgan;oqim tezligi (100 µL/min), mobil faza 60/40 asetonitril/suv 0,1% TFA.
Bu erda L - ustun uzunligi, ē - mobil fazaning yopishqoqligi, DP - ustunning orqa bosimi va u - harakatlanuvchi fazaning chiziqli tezligi. PMP ustunining o'tkazuvchanligi 2,5 × 10-14 m2, oqim tezligi 25 mkL/min, suvning 60/40 v/v/v AC quvvati P18 mm dan foydalanilgan. id) bizning oldingi tadqiqotimizga o'xshash edi Ref.34. Yuzaki g'ovakli zarrachalar bilan o'ralgan ustunning o'tkazuvchanligi: 1,3 mkm zarralar uchun 1,7 × 10-15, 1,7 mkm zarralar uchun 3,1 × 10-15, 5,2 × 10-15 m2 zarralar uchun va 5,2 × 10-15 m2 zarralar uchun. 5 mkm zarrachalar 43.Shuning uchun PMP fazasining o'tkazuvchanligi 5 mkm yadro qobig'i zarrachalariga o'xshaydi.
Bu erda Wx xloroform bilan o'ralgan ustunning og'irligi, Wy - metanol bilan o'ralgan ustunning og'irligi va r - erituvchining zichligi. Metanol (r = 0,7866) va xloroform (r = 1,484) zichligi. SILICA-18 ning umumiy g'ovakligi (SILICA-1801 mm) Biz ilgari o'rgangan 4 va C18-karbamid ustunlari 31 mos ravishda 0,63 va 0,55 edi. Bu karbamid ligandlarining mavjudligi statsionar fazaning o'tkazuvchanligini pasaytiradi, degan ma'noni anglatadi. Boshqa tomondan, PMP ustunining umumiy g'ovakligi (100 × 1,8 mm dan) PMP ustunining umumiy g'ovakligi P1 dan past bo'lgan ustunli P6 0 ga teng. -bog'langan kremniy zarralari, chunki C18 tipidagi statsionar fazalarda C18 ligandlari silika zarrachalariga chiziqli zanjir sifatida biriktiriladi, polistirol tipidagi statsionar fazalarda esa uning atrofida nisbatan qalin A polimer qatlami hosil bo'ladi.Odatiy tajribada ustun g'ovakligi quyidagicha hisoblanadi:
7A, B-rasmda PMP ustuni (100 × 1,8 mm identifikator) va Ascentis Express RP-Amid ustuni (100 × 1,8 mm id) bir xil elutsiya shartlaridan (ya'ni, 60/40 ACN/H2O va 0,1% TFA) foydalangan holda ko'rsatilgan.) Van Deemter uchastkasi.Tanlangan peptid aralashmalari (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL da tayyorlangan/ Ikkala ustun uchun minimal oqim tezligi 800 µL/min. Express RP-Amide ustuni mos ravishda 2,6 mkm va 3,9 mkm edi. HETP qiymatlari PMP ustunining (100 × 1,8 mm id) ajratish samaradorligi sotuvda mavjud bo'lgan Ascentis Express RP-Amide ustunidan (100 × 1,8 mm id) ko'ra yaxshiroq ekanligini ko'rsatadi. oldingi tadqiqotimiz bilan solishtirganda ahamiyatli emas. Ascentis Express RP-Amide ustuniga nisbatan PMP ustunining (100 × 1,8 mm id) yuqori ajratish samaradorligi joriy ishda qo‘llaniladigan zarrachalar shakli, o‘lchami va murakkab ustunlarni qadoqlash tartib-qoidalarini yaxshilashga asoslangan34.
(A) 0,1% TFA bilan 60/40 ACN/H2O da PMP ustuni (100 × 1,8 mm id) yordamida olingan van Deemter grafigi (HETP va mobil fazaning chiziqli tezligi). 0,1% TFA bilan 0/40 ACN/H2O.
Yuqori samarali suyuq xromatografiyada inson sarum albuminining (HAS) sintetik peptid aralashmalari va tripsin hazm bo'lishi uchun qutbga o'rnatilgan polistirol statsionar fazasi tayyorlandi va baholandi. Peptid aralashmalari uchun PMP ustunlarining xromatografik ishlashi ajratish samaradorligi va rezolyutsiyasida juda yaxshi. ca zarralari, statsionar fazaning boshqariladigan sintezi va murakkab ustunli qadoqlash. Yuqori ajratish samaradorligiga qo'shimcha ravishda, yuqori oqim tezligida ustunning past orqa bosimi bu statsionar fazaning yana bir afzalligi hisoblanadi. PMP ustunlari yaxshi takrorlanish qobiliyatiga ega va peptid aralashmalarini tahlil qilish va turli oqsillarni tripsin hazm qilish uchun ishlatilishi mumkin. hromatography.Kelajakda PMP ustunlari oqsillar va monoklonal antikorlarni ajratish uchun ham baholanadi.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Peptidlarni ajratish tizimlarini teskari fazali xromatografiya bo'yicha tadqiqotlar I qism: Ustunni xarakterlash protokolini ishlab chiqish.J.Xromatografiya.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. va boshqalar. Yuqumli kasalliklarni davolash uchun mo'ljallangan takomillashtirilgan faol peptidlar.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Sintetik terapevtik peptidlar: fan va bozor. dori kashfiyoti.15 (1-2) bugun, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2019 (10.2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Xromatografiya.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. va boshqalar. Kengaytirilgan suyuqlik xromatografiyasi-mass spektrometriyasi keng maqsadli metabolomikani va proteomikani kiritish imkonini beradi.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Dori vositalarini ishlab chiqishda UHPLC ning roli.J.Sent. Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Tez ajratish uchun ultra yuqori bosimli suyuqlik xromatografiyasining asosiy va amaliy jihatlari.J.Sent. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelicheff, P. Preparatni ishlab chiqishda ultra yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasini qo'llash.J.Xromatografiya.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. va boshqalar. Enteroviruslarni samarali tozalash uchun suvda yog'li yuqori ichki fazali emulsiyalardan tayyorlangan monolit makroporozli gidrogellar.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020 yil).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Proteomikada suyuq xromatografiyaning roli.J.Xromatografiya.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Terapevtik peptidlar va oqsillarni teskari fazali suyuqlik xromatografiyasi ajratishning paydo bo'lgan tendentsiyalari: nazariya va ilovalar.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC. Birinchi va ikkinchi ajratish o'lchovlarida turli pH qiymatlaridan foydalangan holda RP-RP-HPLC tizimi yordamida peptidlarni ikki o'lchovli ajratish.J.Sentabr Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. va boshqalar. C18 sub-2 mkm to'liq va yuzaki gözenekli zarrachalar bilan o'ralgan yuqori samarali xromatografik ustunlarning massa uzatish xususiyatlari va kinetik ko'rsatkichlari o'rganildi.J.Sentabr Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. va boshqalar. O'simliklarning bioaktiv peptidlarini ajratish, identifikatsiya qilish va tekshirishdagi so'nggi tendentsiyalar va analitik muammolar.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s002168-02 (s002168-0).
Mueller, JB va boshqalar. Hayot shohligining proteomik landshafti. Tabiat 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. va boshqalar. Preparativ suyuqlik xromatografiyasi orqali terapevtik peptidlarni quyi oqimda qayta ishlash. Molekula (Bazel, Shveytsariya) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Aralash rejimli xromatografiya va uning biopolimerlarga qo'llanilishi.J.Xromatografiya.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Chjao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Aralash rejimli oqsil xromatografiyasi uchun ligandlar: printsipi, tavsifi va dizayni.J.Biotexnologiya.144(1), 3-11 (2009).