Javascript hiện đang bị tắt trong trình duyệt của bạn. Một số tính năng của trang web này sẽ không hoạt động khi javascript bị tắt.
Đăng ký với các chi tiết cụ thể của bạn và loại thuốc cụ thể mà bạn quan tâm và chúng tôi sẽ khớp thông tin bạn cung cấp với các bài báo trong cơ sở dữ liệu rộng lớn của chúng tôi và nhanh chóng gửi email cho bạn một bản sao PDF.
Nhân vật Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella1,21 Khoa Y học Thực nghiệm và Lâm sàng, Đại học Catania, Catania, 95123, Ý ;2 Trung tâm Ung thư và Huyết học Thực nghiệm, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Ý;3 Khoa Ung thư Y khoa, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Ý;4 Di truyền y học, ARNS Garibaldi, Catania, 95123, Ý;5 Di truyền y học, ASP, Syracuse, 96100, Ý;6 Khoa Khoa học Y sinh và Công nghệ Sinh học, Đại học Catania, Di truyền Y học, Catania, Ý, 95123;7Viện nghiên cứu Oasi-IRCCS, Troina, 94018, Ý Thông tin liên lạc: Stefania Stella, điện thoại +39 095 378 1946, email [email protected];[email protected] Mục đích: Đột biến dòng mầm ở BRCA1 và BRCA2 và gây ung thư vú (BC), buồng trứng (OC) và các bệnh khác có liên quan đến nguy cơ ung thư suốt đời. Xét nghiệm gen BRCA là chìa khóa để đánh giá rủi ro cá nhân, cũng như để tìm ra các phương pháp phòng ngừa ở người lành mang mầm bệnh và điều trị phù hợp ở bệnh nhân ung thư. Tỷ lệ biến đổi BRCA1 và BRCA2 rất khác nhau giữa các khu vực địa lý và mặc dù có dữ liệu về các biến thể gây bệnh BRCA trong các gia đình Sicilia, nhưng các nghiên cứu nhắm mục tiêu cụ thể vào quần thể ở miền đông Sicily còn thiếu. để điều tra tỷ lệ và sự phân bố của sự thay đổi dòng mầm gây bệnh BRCA trong một nhóm bệnh nhân BC từ miền đông Sicily và để đánh giá mối liên hệ của họ với các đặc điểm BC cụ thể bằng cách sử dụng trình tự thế hệ tiếp theo. Sự hiện diện của các thay đổi tương quan với cấp độ khối u và chỉ số tăng sinh. KẾT QUẢ: Nhìn chung, 35 bệnh nhân (9%) có biến thể gây bệnh BRCA, 17 (49%) ở BRCA1 và 18 (51%) ở BRCA2. Các đột biến BRCA1 phổ biến ở bệnh nhân BC âm tính ba, trong khi đột biến BRCA2 phổ biến hơn ở bệnh nhân BC vùng thắt lưng. So với những người không mang mầm bệnh, các đối tượng có biến thể BRCA1 có cấp độ khối u và chỉ số tăng sinh cao hơn đáng kể. Kết luận: Phát hiện của chúng tôi cung cấp tổng quan về tình trạng đột biến BRCA ở bệnh nhân BC từ miền đông Sicily và xác nhận vai trò của phân tích NGS trong việc xác định bệnh nhân mắc BC di truyền. Nhìn chung, những dữ liệu này phù hợp với bằng chứng trước đây hỗ trợ sàng lọc BRCA để ngăn ngừa và điều trị ung thư đúng cách ở những người mang gen đột biến.
Ung thư vú (BC) là bệnh ác tính phổ biến nhất trên toàn thế giới và là bệnh ung thư nguy hiểm nhất ở phụ nữ.1 Các đặc điểm sinh học xác định tiên lượng BC và hành vi lâm sàng đã được nghiên cứu rộng rãi và làm sáng tỏ một phần theo thời gian. Trên thực tế, một số dấu hiệu thay thế hiện đang được sử dụng để phân loại BC thành các phân nhóm phụ khác nhau. Chúng là thụ thể estrogen (ER) và/hoặc progesterone (PGR), khuếch đại thụ thể nhân tố tăng trưởng biểu bì 2 (HER2), chỉ số tăng sinh Ki-67 và cấp độ khối u (G).2 Sự kết hợp của các biến số này đã xác định các loại BC sau: 1) Khối u vùng thắt lưng, có biểu hiện ER và/hoặc PGR, chiếm 75% BC. Các khối u này được chia thành Luminal A, khi Ki-67 dưới 20% và HER2 âm tính, và Luminal B, khi Ki-67 bằng hoặc trên 20% và có sự khuếch đại HER2, bất kể chỉ số tăng sinh;2) Khối u HER2+ âm tính với ER và PGR nhưng có biểu hiện khuếch đại HER2. Nhóm này chiếm 10% tổng số khối u vú;3) Ung thư vú bộ ba âm tính (TNBC), không biểu hiện ER và PGR và khuếch đại HER2, chiếm khoảng 15% các ca ung thư vú.2-4
Trong số các phân nhóm BC này, cấp độ khối u và chỉ số tăng sinh đại diện cho các dấu ấn sinh học cắt ngang có liên quan trực tiếp và độc lập với sự xâm lấn và tiên lượng của khối u.5,6
Ngoài các đặc điểm sinh học đã nói ở trên, vai trò của những thay đổi di truyền dẫn đến sự phát triển của BC ngày càng trở nên quan trọng trong vài năm qua.7 Khoảng 1 trong 10 khối u vú được di truyền do sự thay đổi dòng mầm trong các gen cụ thể.8 Hai nghiên cứu dịch tễ học lớn với sự tham gia của hơn 180.000 phụ nữ gần đây đã xác định được một nhóm gồm tám gen (tức là ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C và RAD51D) chịu trách nhiệm chính cho BC di truyền. Trong số các gen này, BRCA1 và BRCA2 (sau đây gọi là BRCA1/2) cho thấy mối tương quan mạnh nhất với sự phát triển của khối u vú.9-12 Trên thực tế, đột biến gen BRCA1/2 ở dòng mầm làm tăng đáng kể nguy cơ mắc BC cũng như các khối u ác tính khác, bao gồm buồng trứng, tuyến tiền liệt, tuyến tụy, đại trực tràng và khối u ác tính. Từ 13 đến 80 tuổi, tỷ lệ mắc BC tích lũy là 72% ở phụ nữ có biến thể gây bệnh BRCA1 (PV) và 69 % ở phụ nữ có BRCA2 PV.14
Đáng chú ý, một ấn phẩm gần đây cho thấy nguy cơ mắc bệnh BC phụ thuộc vào loại PV. Trên thực tế, so với các biến thể cắt ngắn gây bệnh, các biến thể tên lửa rõ ràng, đặc biệt là ở gen BRCA1, có liên quan đến việc giảm nguy cơ mắc bệnh BC, đặc biệt là ở phụ nữ lớn tuổi.15
Sự hiện diện của BRCA1 hoặc BRCA2 PV có liên quan đến các đặc điểm sinh học và lâm sàng khác nhau.16,17 Các BC liên quan đến BRCA1 có xu hướng hung hăng về mặt lâm sàng, kém biệt hóa và tăng sinh cao. Các khối u này thường có bộ ba âm tính và khởi phát ở độ tuổi sớm. Các khối u xảy ra ở bệnh nhân đột biến BRCA2 thường biểu hiện mức độ từ trung bình đến biệt hóa tốt và các chỉ số tăng sinh thay đổi. Những khối u này phổ biến hơn ở lòng B và thường xảy ra ở người lớn tuổi.16-18 Đáng chú ý, các đột biến ở BRCA1 và BRCA2 làm tăng độ nhạy cảm với các phương pháp điều trị cụ thể, bao gồm muối bạch kim và các loại thuốc nhắm mục tiêu như chất ức chế polymerase poly(ADP-ribose) (PARPi).19,20
Trong vài năm qua, việc triển khai giải trình tự gen thế hệ tiếp theo (NGS) trong thực hành lâm sàng đã cho phép ngày càng nhiều bệnh nhân BC được xét nghiệm phân tử để phát hiện các hội chứng nhạy cảm với ung thư, bao gồm BRCA1/2.21. Đồng thời, các định nghĩa dựa trên các tiêu chí chính xác về tiền sử gia đình, nhân khẩu học và các đặc điểm lâm sàng để xác định rõ hơn những người xứng đáng với xét nghiệm BRCA1/2. 7 Mặc dù có báo cáo về nhóm thuần tập BC ở phía tây Sicily, nhưng có ít dữ liệu hơn về sàng lọc BRCA1/2 ở dân số phía đông Sicily.28,29
Chúng tôi mô tả ở đây kết quả sàng lọc BRCA1/2 dòng mầm ở bệnh nhân BC từ phía đông Sicily, tương quan hơn nữa sự hiện diện của đột biến BRCA1 hoặc BRCA2 với các đặc điểm lâm sàng bệnh học chính của các khối u này.
Một nghiên cứu hồi cứu đã được thực hiện tại “Trung tâm Ung thư và Huyết học Thực nghiệm” tại Bệnh viện Policlinico.Rodolico – San Marco ở Catania. Từ tháng 1 năm 2017 đến tháng 3 năm 2021, tổng cộng 455 bệnh nhân mắc ung thư vú và buồng trứng, u ác tính, tuyến tụy hoặc ung thư tuyến tiền liệt đã được chuyển đến phòng thí nghiệm chẩn đoán phân tử của chúng tôi để xét nghiệm di truyền BRCA/2. Nghiên cứu này được thực hiện theo Tuyên bố Helsinki và tất cả những người tham gia đều cung cấp sự đồng ý bằng văn bản trước khi phân tích phân tử.
Các đặc điểm mô học và sinh học (ER, PGR, trạng thái HER2, Ki-67 và cấp độ) của BC được đánh giá trên sinh thiết lõi hoặc các mẫu phẫu thuật, chỉ xem xét các thành phần khối u xâm lấn. Dựa trên những đặc điểm này, BC được phân loại như sau: vùng thắt lưng A (ER+ và/hoặc PgR+, HER2-, Ki-67<20%), vùng thắt lưng B (ER+ và/hoặc PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), vùng thắt lưng B-HER2+ (ER và/hoặc PgR+, HER2+), HER2+ (ER và PgR-, HER2+) hoặc bộ ba âm tính (ER và PgR-, HER2-).
Trước khi đánh giá tình trạng đột biến BRCA1 và BRCA2, một nhóm đa ngành bao gồm bác sĩ chuyên khoa ung thư, nhà di truyền học và nhà tâm lý học đã tiến hành tư vấn di truyền khối u cho từng bệnh nhân để xác định sự hiện diện của BRCA1 và/hoặc BRCA1.hoặc những cá nhân có nguy cơ cao mắc PV ở gen BRCA2. Việc lựa chọn bệnh nhân được thực hiện theo hướng dẫn của Hiệp hội Ung thư Y khoa Ý (AIOM) và các khuyến nghị của người Sicily tại địa phương.30,31 Các tiêu chí này bao gồm: (i) tiền sử gia đình có các biến thể gây bệnh đã biết trong các gen nhạy cảm (ví dụ: BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN);(ii) nam giới có BC;(iii) những người có BC và OC;(iv) phụ nữ có BC <36 tuổi, TNBC <60 tuổi hoặc BC hai bên <50 tuổi;(v) lịch sử y tế cá nhân của BC <50 năm và ít nhất một người thân cấp một: (a) BC <50 năm;(b) OC không nhầy và không có ranh giới ở mọi lứa tuổi;(c) BC song phương;(d) nam BC;(e) ung thư tuyến tụy;(f) ung thư tuyến tiền liệt;(vi) hai hoặc nhiều hơn Tiền sử cá nhân mắc bệnh BC > 50 năm và tiền sử gia đình mắc bệnh BC, OC hoặc ung thư tuyến tụy đối với những người thân là họ hàng cấp một của nhau (bao gồm cả những người thân mà cô ấy là họ hàng cấp một);(vii) Lịch sử cá nhân của OC và ít nhất một người thân cấp một: (a) BC <50 năm;(b) NOC;(c) BC song phương;(d) nam BC;(vii) nữ bị OC huyết thanh cao.
Một mẫu máu ngoại vi 20 mL được lấy từ mỗi bệnh nhân và được thu thập vào các ống EDTA (BD Bioscatics). DNA bộ gen được phân lập từ 0,7 mL mẫu máu toàn phần bằng cách sử dụng Bộ cách ly QIAsymphony DSP DNA Midi kit (QIAGEN, Hilden, Ý) theo hướng dẫn của nhà sản xuất và được đưa qua Máy đo huỳnh quang Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Khoa học, Waltham, MA, Hoa Kỳ) Thực hiện định lượng.Chuẩn bị làm giàu mục tiêu và chuẩn bị thư viện được thực hiện bởi Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, sẵn sàng để nạp vào Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit để chuẩn bị thư viện tự động theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Bộ này bao gồm hai nhóm mồi PCR multiplex có thể được sử dụng để nghiên cứu tất cả các gen BRCA1 (NM_007300.3) và BRCA2 (NM_000059.3).Tóm lại, 15 µL của mỗi DNA mẫu đã pha loãng (10 ng) được thêm vào các đĩa có mã vạch để chuẩn bị thư viện và tất cả thuốc thử cũng như vật tư tiêu hao được nạp vào thiết bị Ion Chef™. Quá trình chuẩn bị thư viện tự động và tổng hợp thư viện mẫu có mã vạch sau đó được thực hiện trên thiết bị Ion Chef™. Sau đó, số lượng thư viện đã chuẩn bị được đánh giá bằng Máy đo huỳnh quang Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Khoa học, Waltham, MA, Hoa Kỳ) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Cuối cùng, các thư viện được kết hợp theo tỷ lệ mol bằng nhau trong các ống mẫu thư viện Ion Chef™ (có mã vạch) ống) và nạp vào thiết bị Ion Chef™. Quá trình giải trình tự được thực hiện bằng thiết bị Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Khoa học) (Thermo Fisher Khoa học) sử dụng Chip Ion 510 (Thermo Fisher Khoa học). Phân tích dữ liệu được thực hiện bởi Amplicon Suite (SmartSeq srl) và Phần mềm báo cáo Ion.
Tất cả các danh pháp biến thể đều tuân theo các hướng dẫn hiện tại của Hiệp hội biến đổi bộ gen người, có sẵn trực tuyến (HGVS, //www.hgvs.org/mutnomen). Ý nghĩa lâm sàng của các biến thể BRCA1/2 được xác định bằng cách sử dụng phân loại của Hiệp hội quốc tế ENIGMA (Mạng dựa trên bằng chứng để giải thích các alen đột biến dòng mầm, https://enigmaconsortium.org/) và tham khảo các cơ sở dữ liệu khác nhau như ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar , IARC_LOVD và UMD. Việc phân loại bao gồm năm loại rủi ro riêng biệt: lành tính (loại I), có khả năng lành tính (loại II), biến thể có ý nghĩa không chắc chắn (VUS, loại III), có khả năng gây bệnh (loại IV) và gây bệnh (loại V).VarSome cũng đã phân tích tác động của các đột biến đối với cấu trúc và chức năng protein, một công cụ thông tin có quyền truy cập vào 30 cơ sở dữ liệu.32
Để gán ý nghĩa lâm sàng tiềm năng cho từng VUS, các thuật toán dự đoán protein tính toán sau đây đã được sử dụng: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (//provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (//genetic.bwh.harvard.edu/pph2/) và Align-GVGD (//agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Các biến thể được phân loại là loại 1 và 2 được coi là loại hoang dã.
Giải trình tự Sanger đã xác nhận sự hiện diện của từng biến thể gây bệnh. Nói tóm lại, một cặp mồi cụ thể được thiết kế cho từng biến thể được phát hiện bằng cách sử dụng các trình tự tham chiếu gen BRCA1 và BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 và NG_012772.3, NM_000059.3, tương ứng). Do đó, PCR mục tiêu được thực hiện theo trình tự Sanger.
Những bệnh nhân có kết quả xét nghiệm âm tính với gen BRCA1/2 đã được xét nghiệm bằng phương pháp khuếch đại đầu dò phụ thuộc vào hệ thống ghép kênh (MLPA) theo hướng dẫn của nhà sản xuất để đánh giá sự hiện diện của sự sắp xếp lại bộ gen lớn (LGR). Tóm lại, các mẫu DNA được biến tính và có tới 60 mẫu dò đặc hiệu cho gen BRCA1 và BRCA2 được sử dụng, mỗi mẫu dò phát hiện một trình tự DNA cụ thể có chiều dài khoảng 60 nucleotide. Các sản phẩm khuếch đại mẫu dò, bao gồm một bộ khuếch đại PCR duy nhất, sau đó được phân tích bằng mao quản điện di và bằng phần mềm Cofalyser.Net kết hợp với các bảng Cofalyser cụ thể theo lô thích hợp (www.mrcholland.com).
Các biến số lâm sàng bệnh học được chọn (cấp độ mô học và chỉ số tăng sinh Ki-67%) có liên quan đến sự hiện diện của BRCA1/2 PV, được tính toán bằng phần mềm Prism phiên bản 8.4 bằng cách sử dụng thử nghiệm chính xác của Fisher với giả định giá trị p <0,05 là có ý nghĩa.
Từ tháng 1 năm 2017 đến tháng 3 năm 2021, 455 bệnh nhân đã được sàng lọc các đột biến gen BRCA1/2. Thử nghiệm đột biến được thực hiện tại Trung tâm Huyết học và Ung thư Thực nghiệm của Bệnh viện Policlinico. Theo hướng dẫn của Sicily (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), Rodolico of Catania – San Marco ” tổng thể, 389 bệnh nhân bị ung thư vú, 37 ung thư buồng trứng, 16 ung thư tuyến tụy, 8 ung thư tuyến tiền liệt và 5 khối u ác tính.Sự phân bố bệnh nhân theo loại ung thư và kết quả phân tích được thể hiện trong Hình 1.
Hình 1 cho thấy một lưu đồ trình bày tổng quan về nghiên cứu. Bệnh nhân có khối u vú, khối u ác tính, tuyến tụy, tuyến tiền liệt hoặc buồng trứng đã được xét nghiệm để tìm đột biến gen BRCA1 và BRCA2.
Chữ viết tắt: PV, biến thể gây bệnh;VUS, biến thể có ý nghĩa không chắc chắn;WT, trình tự BRCA1/2 kiểu hoang dã.
Chúng tôi tập trung nghiên cứu có chọn lọc vào các nhóm thuần tập ung thư vú. Các bệnh nhân có độ tuổi trung bình là 49 (khoảng 23-89) và chủ yếu là nữ (n=376, hay 97%).
Trong số những đối tượng này, 64 (17%) có đột biến BRCA1/2 và tất cả đều là nữ. Ba mươi lăm (9%) có PV và 29 (7,5%) có VUS. Mười bảy (48,6%) trong số 35 biến thể gây bệnh xảy ra ở BRCA1 và 18 (51,4%) ở BRCA2, trong khi 5 VUS xảy ra ở BRCA1 (17,2%) và 24 (82,8%) ở BRCA2 (Hình 1 và 2).L GR không có mặt trong phân tích MLPA.
Hình 2. Phân tích đột biến BRCA1 và BRCA2 ở 389 bệnh nhân ung thư vú. (A) Phân bố các biến thể gây bệnh (PV) (màu đỏ), các biến thể có ý nghĩa không chắc chắn (VUS) (màu cam) và WT (màu xanh) ở 389 bệnh nhân ung thư vú;(B) 389 bệnh nhân ung thư vú Ba mươi lăm (9%) có các biến thể gây bệnh BRCA1/2 (PV). Trong số đó, 17 (48,6%) là người mang BRCA1 PV (đỏ sẫm) và 18 (51,4%) là người mang BRCA2 (đỏ nhạt);(C) 29 (7,5%) trong số 389 đối tượng mang VUS, 5 (17,2%) gen BRCA1 (màu cam đậm) và 24 (82,8%) gen BRCA2 (màu cam nhạt).
Chữ viết tắt: PV, biến thể gây bệnh;VUS, biến thể có ý nghĩa không chắc chắn;WT, trình tự BRCA1/2 kiểu hoang dã.
Tiếp theo, chúng tôi đã điều tra mức độ phổ biến của các phân nhóm phân tử BC ở những bệnh nhân mắc BRCA1/2 PV. Sự phân bố bao gồm 2 (5,7%) bệnh nhân ở vùng thắt lưng A, 15 (42,9%) ở vùng thắt lưng B, 3 (8,6%) ở vùng thắt lưng B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ và 13 (37,1%) bệnh nhân TNBC. 2+ và 10 (58,8%) mắc TNBC. Các khối u không có đột biến BRCA1 nằm ở vùng thắt lưng A hoặc B-HER2+ ở vùng thắt lưng (Hình 3). Trong phân nhóm dương tính với BRCA2, 10 (55,6%) khối u là ở vùng thắt lưng B, 3 (16,7%) là vùng thắt lưng B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC và 2 (11,1%) là ở vùng thắt lưng A (Hình 3). Không có khối u HER2+ ở vùng thắt lưng. trong nhóm này. Do đó, các đột biến BRCA1 phổ biến ở bệnh nhân TNBC, trong khi các thay đổi BRCA2 chiếm ưu thế ở các cá thể lumen B.
Hình 3 Mức độ phổ biến của các phân nhóm ung thư vú ở những bệnh nhân có các biến thể gây bệnh ở BRCA1 và BRCA2. Biểu đồ cho thấy sự phân bố của BRCA1- (đỏ đậm) và BRCA2- (đỏ nhạt) giữa các phân nhóm phân tử của bệnh nhân ung thư vú. Các số được báo cáo trong mỗi hộp biểu thị tỷ lệ phần trăm bệnh nhân mắc BRCA1 và BRCA2 PV cho từng phân nhóm ung thư vú.
Chữ viết tắt: PV, biến thể gây bệnh;HER2+, thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì 2 dương tính ở người;TNBC, ung thư vú bộ ba âm tính.
Sau đó, chúng tôi đã đánh giá loại và quá trình định vị gen của BRCA1 và BRCA2 PV. Trong PV BRCA1, chúng tôi đã quan sát thấy 7 biến thể nucleotide đơn (SNV), 6 lần xóa, 3 lần sao chép và 1 lần chèn. Chỉ có một đột biến (c.5522delG) đại diện cho một khám phá mới. PV BRCA1 phổ biến nhất được phát hiện ở cả hai đối tượng là c.5035_5039delCTAAT. Sự thay đổi này liên quan đến việc xóa 5 nucleotide (CTAAT) trong BRCA1 exon 15, dẫn đến sự thay thế axit amin leucine bằng tyrosine ở codon 1679, và do quá trình dịch khung hình với một codon dừng thay thế được dự đoán dẫn đến việc cắt ngắn protein sớm. Tất cả các thay đổi khác chỉ được phát hiện trong một trường hợp. Đáng chú ý là một trong những PV được báo cáo nằm trong khu vực đồng thuận của vị trí mối nối (c.4357+1G>T) (Bảng 1).
Về BRCA2 PV, chúng tôi đã quan sát thấy 6 lần xóa, 6 SNV và 2 lần trùng lặp. Không có thay đổi nào được tìm thấy là mới. Ba đột biến tái diễn trong dân số của chúng tôi, c.428dup và c.8487+1G>A được quan sát thấy ở 3 đối tượng, tiếp theo là c.5851_5854delAGTT được truy xuất trong hai trường hợp. Sự thay đổi c.428dup liên quan đến việc lặp lại C trong exon 5 của BRCA2, được dự đoán sẽ mã hóa một đoạn cắt ngắn, không phải -protein chức năng.C.8487+1G>Một đột biến xảy ra ở vùng phức tạp của BRCA2 intron 19 (± 1,2) và ảnh hưởng đến trình tự đồng thuận nối, dẫn đến thay đổi nối, dẫn đến protein bất thường hoặc không có protein. Biến thể gây bệnh c.5851_5854delAGTT là do xóa 4 nucleotide từ vị trí nucleotide 5851 đến 5854 trong mã hóa exon 10 của gen BRCA2 và dẫn đến dịch mã al frameshift với một codon dừng thay thế được dự đoán (p.S1951WfsTer). Đáng chú ý, như đã báo cáo trước đây, cả hai thay đổi c.631G>A và c.7008-2A>T đều được phát hiện ở cùng một bệnh nhân.34 Đột biến đầu tiên liên quan đến việc thay thế adenosine (A) trong BRCA2 exon 7 bằng nucleotide chứa guanine (G) dẫn đến thay đổi valin thành isoleucine ở codon 211, axit amin isoleucine là một axit amin có các đặc tính rất giống nhau. Sự thay đổi này ảnh hưởng đến quá trình ghép nối mRNA bình thường. Biến thể thứ hai nằm trong vùng phức tạp và dẫn đến sự thay thế kép A thành thymine (T) trước exon 13 của gen mã hóa BRCA2. Sự thay đổi c.7008-2A>T có thể tạo ra nhiều bản phiên mã có độ dài khác nhau. Ngoài ra, trong nhóm PV BRCA2, 4 trong số 18 thay đổi (22,2%) là nghiêm trọng.
Sau đó, chúng tôi đã lập bản đồ các đột biến có hại BRCA1/2 trong các miền chức năng và vùng liên kết với protein (Hình 4). Ở gen BRCA1, 50% PV nằm ở vùng cụm ung thư vú (BCCR), trong khi 22% đột biến nằm ở vùng cụm ung thư buồng trứng (OCCR) (Hình 4A). Ở BRCA2 PV, 35,7% biến thể nằm ở vùng BCCR và 42,8% đột biến nằm ở OCCR (Hình 4). .4B).Tiếp theo, chúng tôi đã đánh giá vị trí của PV trong miền protein BRCA1 và BRCA2.Đối với protein BRCA1, chúng tôi đã tìm thấy ba PV trong miền vòng lặp và cuộn cuộn và hai đột biến trong miền BRCT (Hình 4A). Đối với protein BRCA2, 4 PV được ánh xạ tới miền lặp lại BRC, trong khi 3 thay đổi nghiêm trọng và 3 thay đổi ngoại vi được phát hiện trong miền liên kết oligo/oligosaccharide (OB) và miền tháp (T) ( Hình 4B) ).
Hình 4 Sơ đồ biểu diễn các protein BRCA1 và BRCA2 và quá trình định vị của các biến thể gây bệnh. Hình này cho thấy sự phân bố của các biến thể gây bệnh BRCA1 (A) và BRCA2 (B) ở bệnh nhân ung thư vú. Các đột biến exonic được thể hiện bằng màu xanh lam, trong khi các biến thể nghiêm trọng được thể hiện bằng màu cam. miền, miền cụm SQ/TQ (SCD) và miền đầu cuối BRCA1 C (BRCT). (B) Protein BRCA2 chứa tám lần lặp lại BRC, miền liên kết DNA với miền xoắn ốc (Xoắn ốc), ba nếp gấp oligonucleotide/liên kết oligosacarit (OB), miền tháp (T) và An NLS ở phía C. Các khu vực được gọi là Vùng cụm ung thư vú (BCCR) và Vùng cụm ung thư buồng trứng (OCCR) được hiển thị ở dưới cùng.* Thể hiện các đột biến xác định codon dừng.
Sau đó, chúng tôi đã điều tra các đặc điểm bệnh học lâm sàng BC có thể tương quan với sự hiện diện của BRCA1/2 PV. Hồ sơ lâm sàng đầy đủ có sẵn cho 181 bệnh nhân âm tính với BRCA1/2 (không mang mầm bệnh) và tất cả những người mang mầm bệnh (n = 35). Có mối tương quan giữa tỷ lệ và cấp độ tăng sinh khối u.
Chúng tôi đã tính toán mức độ phân phối của Ki-67 dựa trên giá trị trung bình của nhóm thuần tập của chúng tôi (25%, phạm vi <10-90%). Các đối tượng có Ki-67 < 25% được định nghĩa là "Ki-67 thấp", trong khi các cá thể có giá trị ≥ 25% được coi là "Ki-67 cao". Sự khác biệt đáng kể về Ki-67 (p<0,01) được tìm thấy giữa người không mang và người mang BRCA1 PV (Hình 5A).
Hình 5. Mối tương quan của Ki-67 với phân bố cấp độ ở phụ nữ ung thư vú có và không có PV BRCA1 và BRCA2. (A) Boxplot hiển thị giá trị Ki-67 trung bình ở 181 bệnh nhân BC không mang mầm bệnh so với bệnh nhân PV BRCA1 (18) hoặc BRCA2 (17). Giá trị P dưới 0,5 được coi là có ý nghĩa thống kê. (B) Biểu đồ thể hiện việc phân chia bệnh nhân ung thư BC thành các nhóm cấp độ mô học (G2 và G3) theo BRCA1 và G3) Trạng thái đột biến BRCA2 (đối tượng WT, người mang BRCA1 và BRCA2 PV).
Tương tự như vậy, chúng tôi đã kiểm tra xem cấp độ khối u có tương quan với sự hiện diện của BRCA1/2 PV hay không. Vì G1 BC không có trong quần thể của chúng tôi, nên chúng tôi chia bệnh nhân thành hai nhóm (G2 hoặc G3). Phù hợp với kết quả Ki-67, phân tích cho thấy mối tương quan có ý nghĩa thống kê giữa cấp độ khối u và đột biến BRCA1, với tỷ lệ khối u G3 ở người mang gen BRCA1 cao hơn so với người không mang gen bệnh (p<0,005) (Hình 5B).
Những tiến bộ trong công nghệ giải trình tự DNA đã cho phép đạt được những tiến bộ chưa từng có trong xét nghiệm di truyền BRCA1/2, với ý nghĩa quan trọng đối với những bệnh nhân có tiền sử gia đình mắc bệnh ung thư. Cho đến nay, khoảng 20.000 biến thể BRCA1/2 đã được xác định và phân loại theo Hiệp hội Di truyền Y khoa Hoa Kỳ 35 và hệ thống ENIGMA.35,36 Người ta biết rằng phổ đột biến BRCA1/2 rất khác nhau giữa các vùng địa lý.37 Tại Ý, tỷ lệ BRCA1/2 PV dao động từ 8% đến 8%. 37%, cho thấy sự khác biệt lớn giữa các quốc gia.38,39 Với dân số gần 5 triệu người, Sicily là khu vực lớn thứ năm ở Ý về số lượng cư dân. Mặc dù có dữ liệu về sự phân bố BRCA1/2 ở phía tây Sicily, nhưng không có bằng chứng rộng rãi ở phần phía đông của hòn đảo.
Nghiên cứu của chúng tôi là một trong những báo cáo đầu tiên về tỷ lệ mắc BRCA1/2 PV ở bệnh nhân BC ở miền đông Sicily.28 Chúng tôi tập trung phân tích vào BC, vì đây là căn bệnh phổ biến nhất trong nhóm của chúng tôi cho đến nay.
Khi xét nghiệm 389 bệnh nhân trước Công nguyên, 9% mang BRCA1/2 PV, phân bố đều giữa BRCA1 và BRCA2. Những kết quả này phù hợp với những kết quả được báo cáo trước đây trong dân số Ý.28 Điều thú vị là 3% (13/389) trong nhóm của chúng tôi là nam giới. Tỷ lệ này cao hơn dự kiến ​​đối với ung thư vú nam (1% trong số tất cả các BC),40 phản ánh sự lựa chọn quần thể của chúng tôi dựa trên nguy cơ đột biến BRCA1/2. Tuy nhiên, không ai trong số những người đàn ông này phát triển BRCA1/2 PV, vì vậy họ là ứng cử viên để phân tích phân tử sâu hơn nhằm loại trừ sự hiện diện của các đột biến ít phổ biến hơn như PALB2, RAD51C và D, trong số những đột biến khác. Các biến thể có ý nghĩa không chắc chắn được tìm thấy ở 7% đối tượng có BRCA2 VUS rõ ràng. Thậm chí, kết quả này phù hợp với bằng chứng đã có từ trước.28,41,42
Khi chúng tôi phân tích sự phân bố của các phân nhóm phân tử BC ở phụ nữ đột biến BRCA1/2, chúng tôi đã xác nhận mối liên quan đã biết giữa TNBC và BRCA1 PV (58,8%) và giữa B BC và BRCA2 PV (55,6%).
Sau đó, chúng tôi tập trung vào loại và vị trí của PV BRCA1/2. Trong nhóm thuần tập của chúng tôi, PV BRCA1 phổ biến nhất là c.5035_5039delCTAAT. Mặc dù Incorvaia et al.đã không mô tả biến thể này trong đoàn hệ Sicilia của họ, các tác giả khác đã báo cáo nó là dòng mầm BRCA1 PV.34 Một số PV BRCA1 đã được tìm thấy trong đoàn hệ của chúng tôi – ví dụ: c.181T>G, c.514del, c.3253dupA và c.5266dupC – đã được quan sát thấy ở Sicily.28 Trong số này, hai đột biến sáng lập BRCA1 (c.181T>G và c.5266dupC) thường phổ biến được tìm thấy ở người Do Thái Ashkenazi ở Đông và Trung Âu (Ba Lan, Séc), Slovenia, Áo, Hungary, Bêlarut và Đức), 44,45 và, ở Hoa Kỳ và Argentina, gần đây được định nghĩa là "biến thể dòng mầm tái phát" ở bệnh nhân Ý mắc BC và OC. Biến thể 34c.514del trước đây đã được xác định ở 8 bệnh nhân ung thư vú từ phía bắc Sicily ở Palermo và Messina. Thật thú vị, ngay cả Incorvaia et al.tìm thấy biến thể c.3253dupA trong một số họ ở Catania.28 Các PV BRCA2 tiêu biểu nhất là c.428dup, c.5851_5854delAGTT và biến thể phức tạp c.8487+1G>A, đã được báo cáo chi tiết hơn 28 ở một bệnh nhân ở Palermo với c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV được quan sát thấy ở các hộ gia đình ở tây bắc Sicily, chủ yếu ở vùng Trapani và Palermo, trong khi c.5851_5854delAGTT PV được quan sát thấy trong các hộ gia đình ở tây bắc Sicily. Biến thể 8487+1G>A phổ biến hơn ở các đối tượng từ Messina, Palermo và Caltanissetta.28 Rebbeck et al.trước đây đã mô tả sự thay đổi c.5851_5854delAGTT ở Colombia.37 Một PV BRCA2 khác, c.631+1G>A, đã được tìm thấy ở các bệnh nhân BC và OC từ Sicily (Agrigento, Siracusa và Ragusa). cis, như đã báo cáo trước đây như vậy.34,46 Những đột biến uble BRCA2 này thực sự thường được quan sát thấy ở khu vực Ý và đã được phát hiện là tạo ra các codon dừng sớm, ảnh hưởng đến quá trình ghép nối RNA thông tin và khiến protein BRCA2 bị lỗi.47,48
Chúng tôi cũng đã ánh xạ các PV BRCA1 và BRCA2 trong các vùng OCCR và BCCR giả định của các miền protein và gen. Các vùng này được mô tả bởi Rebbeck et al.tương ứng là các khu vực có nguy cơ phát triển ung thư buồng trứng và ung thư vú.49 Tuy nhiên, bằng chứng về mối liên quan giữa vị trí của các biến thể dòng mầm và nguy cơ ung thư vú hoặc ung thư buồng trứng vẫn còn gây tranh cãi.28,50-52 Trong dân số của chúng tôi, các PV BRCA1 chủ yếu nằm ở vùng BCCR, trong khi các PV BRCA2 chủ yếu nằm ở vùng OCCR. Tuy nhiên, chúng tôi không thể tìm thấy bất kỳ mối liên hệ nào giữa các vùng OCCR và BCCR giả định và các đặc điểm BC. miền protein, các PV BRCA1 được phân phối dọc theo toàn bộ protein và các thay đổi BRCA2 được ưu tiên tìm thấy trong miền lặp lại BRC.
Cuối cùng, chúng tôi đã so sánh các đặc điểm lâm sàng bệnh lý BC với BRCA1/2 PV. Do số lượng bệnh nhân hạn chế, chúng tôi chỉ tìm thấy mối tương quan đáng kể giữa Ki-67 và cấp độ khối u. Mặc dù việc đánh giá và giải thích Ki-67 vẫn còn gây tranh cãi, nhưng chắc chắn rằng tỷ lệ tăng sinh cao có liên quan đến tăng nguy cơ tái phát bệnh và giảm tỷ lệ sống sót. Cho đến nay, ngưỡng phân biệt giữa Ki-67 “cao” và “thấp” là 20%. Tuy nhiên, ngưỡng này không áp dụng cho nhóm bệnh nhân đột biến BRCA1/2 của chúng tôi. , có giá trị Ki-67 trung bình là 25%. Xu hướng tỷ lệ Ki-67 cao này có thể được giải thích bằng tỷ lệ phổ biến trong các nhóm thuần tập B và TNBC vùng thắt lưng của chúng tôi, trong đó có một số khối u A ở vùng thắt lưng. Tuy nhiên, một số bằng chứng dường như cho thấy rằng ngưỡng Ki-67 cao hơn (25–30%) có thể phân tầng bệnh nhân tốt hơn theo tiên lượng của họ.53,54 Từ kết quả phân tích của chúng tôi, một mối tương quan đáng kể không có gì đáng ngạc nhiên. Xảy ra giữa Ki-67 cao và điểm và sự hiện diện của BRCA 1 PV. Trên thực tế, các khối u liên quan đến BRCA1 là điển hình của TNBC và thể hiện nhiều đặc điểm tích cực hơn.16,17
Để kết luận, nghiên cứu này cung cấp một báo cáo về tình trạng đột biến của BRCA1/2 trong một nhóm thuần tập BC từ phía đông Sicily. Nhìn chung, những phát hiện của chúng tôi phù hợp với bằng chứng đã có từ trước, cả về tỷ lệ đột biến và các đặc điểm lâm sàng ở BC. Các nghiên cứu khác trên quần thể bệnh nhân BC đột biến BRCA1/2 lớn hơn, chẳng hạn như sử dụng phân tích đột biến mở rộng đa gen, được đảm bảo để đánh giá sự hiện diện của các PV khác biệt và ít gặp hơn BRCA1/2. Điều này sẽ cho phép xác định và quản lý hợp lý số lượng đối tượng ngày càng tăng tại tăng nguy cơ ung thư do đột biến gen.
Chúng tôi xác nhận rằng bệnh nhân đã ký giấy đồng ý tiết lộ mẫu khối u của họ một cách ẩn danh cho mục đích nghiên cứu. Tất cả bệnh nhân đã ký giấy đồng ý có hiểu biết theo Tuyên bố Helsinki. Theo chính sách của AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”, nghiên cứu này được miễn đánh giá đạo đức vì phân tích BRCA1/2 được thực hiện theo thực hành lâm sàng và tất cả bệnh nhân đều có văn bản đồng ý. Bệnh nhân cũng đồng ý sử dụng dữ liệu của họ cho mục đích nghiên cứu.
Chúng tôi cảm ơn Giáo sư Paolo Vigneri đã hỗ trợ trong việc chăm sóc bệnh nhân ung thư vú theo yêu cầu của Ủy ban Đạo đức.
Federica Martorana báo cáo Honoraria từ Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Các tác giả khác tuyên bố không có xung đột lợi ích trong công việc này.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Thống kê Ung thư Toàn cầu 2020: GLOBOCAN ước tính tỷ lệ mắc và tử vong của 36 bệnh ung thư ở 185 quốc gia trên thế giới.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660