נאַנאָפּאָראָוס און נאַנאָטהיק פילם-פאָרמינג ביאָאַקטיווע קאַמפּאַזישאַנז פֿאַר ביאָמעדיקאַל אַפּלאַקיישאַנז

דאנק איר פֿאַר באזוכן Nature.com.דער בלעטערער ווערסיע איר נוצן האט לימיטעד CSS שטיצן.פֿאַר דער בעסטער דערפאַרונג, מיר רעקאָמענדירן אַז איר נוצן אַ דערהייַנטיקט בלעטערער (אָדער דיסייבאַל קאַמפּאַטאַבילאַטי מאָדע אין Internet Explorer).אין דער דערווייל, צו ענשור פארבליבן שטיצן, מיר וועלן מאַכן דעם פּלאַץ אָן סטיילז און דזשאַוואַסקריפּט.
אַנקאַנטראָולד בלידינג איז איינער פון די לידינג סיבות פון טויט.דערגרייכן גיך העמאָסטאַסיס ינשורז די ניצל פון די ונטערטעניק ווי אַ ערשטער הילף בעשאַס קאַמבאַט, פאַרקער אַקסאַדאַנץ און טויט רעדוקציע אַפּעריישאַנז.נאַנאָפּאָראָוס פיברע-ריינפאָרסט קאָמפּאָסיטע סקאַפאַלד (NFRCS) דערייווד פון אַ פּשוט העמאָסטאַטיק פילם-פאָרמינג זאַץ (HFFC) ווי אַ קעסיידערדיק פאַסע קענען צינגל און פאַרבעסערן העמאָסטאַסיס.די אַנטוויקלונג פון די NFRCS איז באזירט אויף די פּלאַן פון די פליגל פון די דראַגאָנפלי.די דראַגאָנפלי פליגל סטרוקטור באשטייט פון טראַנזווערס און לאַנדזשאַטודאַנאַל פליגל, און די פליגל מעמבריינז זענען פארבונדן צו יעדער אנדערער צו האַלטן די אָרנטלעכקייַט פון די מיקראָסטרוקטורע.HFFC יוואַנלי קאָוטאַד די ייבערפלאַך פון די פיברע מיט אַ פילם פון נאַנאָמעטער גרעב און קאַנעקץ די ראַנדאַמלי פונאנדערגעטיילט וואַטע גרעב (קט) (דיספּערסט פאַסע) צו פאָרעם אַ נאַנאָפּאָראָוס סטרוקטור.די קאָמבינאַציע פון ​​קעסיידערדיק און דיספּערסט פייזאַז ראַדוסאַז די פּרייַז פון די פּראָדוקט מיט צען מאל קאַמפּערד מיט קאמערשעל בנימצא פּראָדוקטן.מאָדיפיעד NFRCS (טאַמפּאַנז אָדער ווריסטבאַנדס) קענען זיין געוויינט אין אַ פאַרשיידנקייַט פון ביאָמעדיקאַל אַפּלאַקיישאַנז.אין וויוואָו שטודיום האָבן געפונען אַז די דעוועלאָפּעד Cp NFRCS טריגערז און ימפּרוווז די קאָואַגיאַליישאַן פּראָצעס אויף די פּלאַץ פון אַפּלאַקיישאַן.NFRCS קענען מאָדולירן די מיקראָענוויראָנמענט און אַקט אויף די סעליאַלער מדרגה רעכט צו זיין נאַנאָפּאָראַס סטרוקטור ריזאַלטינג אין בעסער ווונד היילונג אין די עקססיסיאָן ווונד מאָדעל.
אַנקאַנטראָולד בלידינג בעשאַס קאַמבאַט, ינטראַאָפּעראַטיווע און נויטפאַל סיטואַטיאָנס קענען זיין אַ ערנסט סאַקאָנע צו די לעבן פון די ווונדאַד1.די באדינגונגען ווייַטער פירן צו אַ קוילעלדיק פאַרגרעסערן אין פּעריפעראַל וואַסקיאַלער קעגנשטעל, לידינג צו העמאָררהאַגיק קלאַפּ.צונעמען מיטלען צו קאָנטראָלירן בלידינג בעשאַס און נאָך כירורגיע זענען קאַנסידערד פּאַטענטשאַלי לעבן-טרעטאַנינג 2,3.שעדיקן צו גרויס כלים פירט צו מאַסיוו בלוט אָנווער, ריזאַלטינג אין אַ מאָרטאַליטי קורס פון ≤ 50% אין קאַמבאַט און 31% בעשאַס כירורגיע1.מאַסיוו בלוט אָנווער פירט צו אַ פאַרקלענערן אין גוף באַנד, וואָס ראַדוסאַז קאַרדיאַק רעזולטאַט.אַ פאַרגרעסערן אין גאַנץ פּעריפעראַל וואַסקיאַלער קעגנשטעל און אַ פּראָגרעסיוו ימפּערמאַנט פון מיקראָסירקולאַטיאָן פירן צו היפּאָקסיאַ אין די לעבן-שטיצן אָרגאַנס.העמאָררהאַגיק קלאַפּ קען פּאַסירן אויב די צושטאַנד האלט אָן עפעקטיוו ינטערווענטיאָן1,4,5.אנדערע קאַמפּלאַקיישאַנז אַרייַננעמען די פּראַגרעשאַן פון כייפּאַטערמיאַ און מעטאַבאַליק אַסידאָסיס, ווי געזונט ווי אַ קאָואַגיאַליישאַן דיסאָרדער וואָס ימפּיד די קאָואַגיאַליישאַן פּראָצעס.שטרענג העמאָררהאַגיק קלאַפּ איז פארבונדן מיט אַ העכער ריזיקירן פון טויט 6,7,8.אין גראַד III (פּראָגרעסיוו) קלאַפּ, בלוט טראַנספוסיאָן איז יקערדיק פֿאַר פּאַציענט ניצל בעשאַס ינטראַאָפּעראַטיווע און פּאָסטאָפּעראַטיווע מאָרבידאַטי און מאָרטאַליטי.צו באַקומען אַלע די אויבן לעבן-טרעטאַנינג סיטואַטיאָנס, מיר האָבן דעוועלאָפּעד אַ נאַנאָפּאָראָוס פיברע-ריינפאָרסט קאָמפּאָסיטע סקאַפאַלד (NFRCS) וואָס ניצט אַ מינימאַל פּאָלימער קאַנסאַנטריישאַן (0.5%) ניצן אַ קאָמבינאַציע פון ​​​​וואַסער-סאַליאַבאַל העמאָסטאַטיק פּאָלימערס.
מיט די נוצן פון פיברע ריינפאָרסמאַנט, קאָס-עפעקטיוו פּראָדוקטן קענען זיין דעוועלאָפּעד.די ראַנדאַמלי עריינדזשד פייבערז ריזעמבאַל די סטרוקטור פון אַ דראַגאָנפלי ס פליגל, באַלאַנסט דורך די האָריזאָנטאַל און ווערטיקאַל מלקות אויף די פליגל.די טראַנזווערס און לאַנדזשאַטודאַנאַל וועינס פון די פליגל יבערגעבן מיט די פליגל מעמבראַנע (Fig. 1).NFRCS באשטייט פון ריינפאָרסט קט ווי אַ סקאַפאַלד סיסטעם מיט בעסער גשמיות און מעטשאַניקאַל שטאַרקייַט (פיגורע 1).רעכט צו דער אַפאָרדאַבילאַטי און קראַפצמאַנשיפּ, סערדזשאַנז בעסער צו נוצן וואַטע פאָדעם גיידזשיז (קט) בעשאַס אַפּעריישאַנז און דרעסינגז. דעריבער, קאַנסידערינג זייַן קייפל בענעפיץ, אַרייַנגערעכנט> 90% קריסטאַליין סעליאַלאָוס (ימפּאַרץ אין די ענכאַנסמאַנט פון העמאָסטאַטיק טעטיקייט), Ct איז געניצט ווי אַ סקעלעטאַל סיסטעם פון NFRCS9,10. דעריבער, קאַנסידערינג זייַן קייפל בענעפיץ, אַרייַנגערעכנט> 90% קריסטאַליין סעליאַלאָוס (ימפּאַרץ אין די ענכאַנסמאַנט פון העמאָסטאַטיק טעטיקייט), Ct איז געניצט ווי אַ סקעלעטאַל סיסטעם פון NFRCS9,10. סלעאַדאָוואַטעל, וואָס איז מער ווי 90% פון די קרייסטאַל סייקאַלאַדזשאַסץ (אין די צייט פון מער ווי 90% סטאַטיסטיש אַקטיוויטעט), Ct использовали в качестве скелетной системы NFRCS9,10. דעריבער, געגעבן זייַן פילע בענעפיץ, אַרייַנגערעכנט> 90% קריסטאַליין סעליאַלאָוס (ינוואַלווד אין געוואקסן העמאָסטאַטיק טעטיקייט), Ct איז געניצט ווי די NFRCS סקעלעטאַל סיסטעם 9,10.因此,考虑到它的多重益处,包括> 90% 的结晶纤维素. ,10 קלאסן.因此,考虑到它的多重益处,包括> 90%דעריבער, ווייַל פון זייַן פילע בענעפיץ, אַרייַנגערעכנט איבער 90% קריסטאַליין סעליאַלאָוס (העלפּס פאַרבעסערן העמאָסטאַטיק טעטיקייט), Ct איז געניצט ווי אַ סקאַפאַלד פֿאַר NFRCS9,10.Ct איז געווען סופּערפישאַלי קאָוטאַד (נאַנאָ-דיק פילם פאָרמירונג איז באמערקט) און ינטערקאַנעקטיד מיט אַ העמאָסטאַטיק פילם-פאָרמינג זאַץ (HFFC).HFFC אקטן ווי אַ מאַטריגעל, האלטן ראַנדאַמלי געשטעלט קט צוזאַמען.די דעוועלאָפּעד פּלאַן טראַנזמיץ דרוק אין די דיספּערסט פאַסע (ריינפאָרסינג פייבערז).עס איז שווער צו באַקומען נאַנאָפּאָראָוס סטראַקטשערז מיט גוט מעטשאַניקאַל שטאַרקייט ניצן מינימאַל פּאָלימער קאַנסאַנטריישאַנז.אין דערצו, עס איז נישט גרינג צו קאַסטאַמייז פאַרשידענע מאָולדז פֿאַר פאַרשידענע ביאָמעדיקאַל אַפּלאַקיישאַנז.
די פיגור ווייזט אַ דיאַגראַמע פון ​​די NFRCS פּלאַן באזירט אויף די דראַגאָנפלי פליגל סטרוקטור (א).דער בילד ווייזט אַ קאָמפּאַראַטיווע אַנאַלאַדזשי פון די פליגל סטרוקטור פון אַ דראַגאָנפלי (די ינטערסעקטינג און לאַנדזשאַטודאַנאַל וועינס פון די פליגל זענען ינטערקאַנעקטיד) און אַ קרייַז-סעקשאַנאַל פאָטאָמיקראָגראַף פון Cp NFRCS (ב).סכעמאַטיש פאַרטרעטונג פון NFRCS.
NFRCs זענען דעוועלאָפּעד מיט HFFC ווי אַ קעסיידערדיק פאַסע צו אַדרעס די לימיטיישאַנז אויבן.HFFC איז פארפאסט פון פאַרשידן פילם-פאָרמינג העמאָסטאַטיק פּאָלימערס אַרייַנגערעכנט טשיטאָסאַן (ווי די הויפּט העמאָסטאַטיק פּאָלימער) מיט מעטהילסעללולאָסע (מק), הידראָקסיפּראָפּיל מעטהילסעללולאָסע (HPMC 50 cp) און פּאָליוויניל אַלקאָהאָל (פּוואַ)) (125 kDa) ווי אַ שטיצן פּאָלימער וואָס פּראַמאָוץ טראַמבאַס פאָרמירונג.פאָרמירונג.די אַדישאַן פון פּאָליווינילפּירראָלידינע ק 30 (פּופּ ק 30) ימפּרוווד די נעץ אַבזאָרפּשאַן קאַפּאַציטעט פון די NFRCS.פּאַליעטאַלין גלייקאָל 400 (PEG 400) איז צוגעגעבן צו פֿאַרבעסערן פּאָלימער קראָססלינקינג אין באַנדאַד פּאָלימער בלענדז.דריי פאַרשידענע HFFC העמאָסטאַטיק חיבורים (Cm HFFC, Ch HFFC און Cp HFFC), ניימלי טשיטאָסאַן מיט מק (קם), טשיטאָסאַן מיט המפּק (טש), און טשיטאָסאַן מיט פּוואַ (קפּ), זענען געווענדט צו קט.פאַרשידן אין וויטראָ און אין וויוואָו כאַראַקטעריזיישאַן שטודיום האָבן באשטעטיקט די העמאָסטאַטיק און ווונד היילונג טעטיקייט פון NFRCS.קאָמפּאָסיטע מאַטעריאַלס געפֿינט דורך NFRCS קענען זיין געוויינט צו קאַסטאַמייז פאַרשידן פארמען פון סקאַפאַלדינג צו טרעפן ספּעציפיש באדערפענישן.
אין אַדישאַן, NFRCS קענען זיין מאַדאַפייד ווי אַ באַנדאַזש אָדער זעמל צו דעקן די גאנצע שאָדן געגנט פון די נידעריקער יקסטרעמאַטיז און אנדערע טיילן פון דעם גוף.ספּאַסיפיקלי פֿאַר קאַמבאַט לימב ינדזשעריז, די דיזיינד NFRCS פּלאַן קענען זיין פארענדערט צו אַ האַלב אָרעם אָדער פול פוס (סופּפּלעמענטאַרי פיגור ס 11).די NFRCS קענען זיין געמאכט אין אַ ווריסטבאַנד מיט געוועב קליי, וואָס קענען זיין געוויינט צו האַלטן בלידינג פון שטרענג סואַסיידאַל ינדזשעריז.אונדזער הויפּט ציל איז צו אַנטוויקלען אַ NFRCS מיט ווי קליין פּאָלימער ווי מעגלעך וואָס קענען זיין איבערגעגעבן צו אַ גרויס באַפעלקערונג (אונטער דער אָרעמקייַט שורה) און וואָס קענען זיין שטעלן אין אַ ערשטער הילף קיט.פּשוט, עפעקטיוו און שפּאָרעוודיק אין פּלאַן, NFRCS בענעפיץ היגע קהילות און קענען האָבן אַ גלאבאלע פּראַל.
טשיטאָסאַן (מאָלעקולאַר וואָג 80 kDa) און אַמאַראַנטה זענען פּערטשאַסט פֿון Merck, ינדיאַ.הידראָקסיפּראָפּיל מעטהילסעללולאָסע 50 קפּ, פּאַליעטאַלין גלייקאָל 400 און מעטהיל סעליאַלאָוס זענען פּערטשאַסט פֿון Loba Chemie Pvt.ללק, מומבאַי.פּאָליוויניל אַלקאָהאָל (מאָלעקולאַר וואָג 125 קדאַ) (87-90% כיידראַלייזד) איז פּערטשאַסט פון נאַשאַנאַל קעמיקאַלז, גודזשאַראַט.פּאָליווינילפּירראָלידינע ק30 איז פּערטשאַסט פֿון Molychem, מומבאַי, סטערילע סוואַבז זענען פּערטשאַסט פֿון Ramaraju Surgery Cotton Mills Ltd., Tamil Nadu, מיט Milli Q וואַסער (דירעקט-Q3 וואַסער רייניקונג סיסטעם, Merck, ינדיאַ) ווי די טרעגער.
NFRCS איז דעוועלאָפּעד מיט אַ ליאָפיליזאַטיאָן מעטאַד11,12.כל HFFC חיבורים (טאַבלע 1) זענען צוגעגרייט מיט אַ מעטשאַניקאַל סטירער.צוגרייטן אַ 0.5% לייזונג פון טשיטאָסאַן ניצן 1% אַסעטיק זויער אין וואַסער דורך קעסיידערדיק סטערינג בייַ 800 רפּם אויף אַ מעטשאַניקאַל סטירער.די פּינטלעך וואָג פון די לאָודיד פּאָלימער אנגעוויזן אין טאַבלע 1 איז מוסיף צו די טשיטאָסאַן לייזונג און סטערד ביז אַ קלאָר פּאָלימער לייזונג איז באקומען.PVP K30 און PEG 400 זענען מוסיף צו די ריזאַלטינג געמיש אין די אַמאַונץ אנגעוויזן אין טיש 1, און סטערינג איז פארבליבן ביז אַ קלאָר וויסקאַס פּאָלימער לייזונג איז באקומען.די ריזאַלטינג וואַנע פון ​​פּאָלימער לייזונג איז סאָניקאַטעד פֿאַר 60 מינוט צו באַזייַטיקן טראַפּט לופט באַבאַלז פון די פּאָלימער געמיש.ווי געוויזן אין סופּפּלעמענטאַרי פיגור ס 1 (ב), קט איז יוואַנלי פונאנדערגעטיילט אין יעדער געזונט פון אַ 6-געזונט טעלער (פורעם) סאַפּלאַמענטאַד מיט 5 מל פון HFFC.
די זעקס-געזונט טעלער איז סאָניקאַטעד פֿאַר 60 מינוט צו דערגרייכן מונדיר וועטינג און פאַרשפּרייטונג פון HFFC אין די קט נעץ.דעמאָלט פרירן די זעקס-געזונט טעלער בייַ -20 ° C פֿאַר 8-12 שעה.פרירן פּלאַטעס זענען ליאָפילייזד פֿאַר 48 שעה צו קריגן פאַרשידן פאָרמיוליישאַנז פון NFRCS.דער זעלביקער פּראָצעדור איז געניצט צו פּראָדוצירן פאַרשידענע שאַפּעס און סטראַקטשערז, אַזאַ ווי טאַמפּאַנז אָדער סילינדריקאַל טאַמפּאַנז, אָדער קיין אנדערע פאָרעם פֿאַר פאַרשידענע אַפּלאַקיישאַנז.
אַקיעראַטלי ווייד טשיטאָסאַן (80 kDa) (3%) איז צעלאָזן אין 1% אַסעטיק זויער מיט אַ מאַגנעטיק סטירער.צו די ריזאַלטינג לייזונג פון טשיטאָסאַן איז צוגעגעבן 1% PEG 400 און סטערד פֿאַר 30 מינוט.גיסן די ריזאַלטינג לייזונג אין אַ קוואַדראַט אָדער רעקטאַנגגיאַלער קאַנטיינער און פרירן בייַ -80 ° C פֿאַר 12 שעה.פאַרפרוירן סאַמפּאַלז זענען ליאָפילייזד פֿאַר 48 שעה צו באַקומען פּאָרעז קס13.
די דעוועלאָפּעד NFRCS איז געווען אונטערטעניק צו יקספּעראַמאַנץ ניצן Fourier Transform Infrared Spectrascopy (FTIR) (Shimadzu 8400 s FTIR, טאָקיאָ, יאַפּאַן) צו באַשטעטיקן די כעמישער קאַמפּאַטאַבילאַטי פון טשיטאָסאַן מיט אנדערע פּאָלימערס14,15.די FTIR ספּעקטראַ (ברייט פון די ספּעקטראַל קייט פון 400 צו 4000 סענטימעטער-1) פון אַלע טעסטעד סאַמפּאַלז זענען באקומען דורך דורכפירן 32 סקאַנז.
די בלוט אַבזאָרפּשאַן קורס (BAR) פֿאַר אַלע פאָרמיוליישאַנז איז עוואַלואַטעד מיט דעם אופֿן דיסקרייבד דורך Chen et al.16 מיט קליין מאָדיפיקאַטיאָנס.די דעוועלאָפּעד NFRKs פון אַלע חיבורים זענען דאַר אין אַ וואַקוום ויוון ביי 105 ° C יבערנאַכטיק צו באַזייַטיקן ריזידזשואַל סאַלוואַנט.30 מג NFRCS (ערשט מוסטער וואָג - W0) און 30 מג Ct (positive קאָנטראָל) זענען געשטעלט אין באַזונדער קיילים מיט אַ פּרעמיקס פון 3.8% סאָדיום סיטראַטע.אין פּרידיטערמינד צייט ינטערוואַלז, דאס הייסט 5, 10, 20, 30, 40 און 60 סעקונדעס, די NFRCS זענען אַוועקגענומען און זייער סערפאַסיז קלינד פון אַנאַבסאָרבעד בלוט דורך שטעלן די סאַמפּאַלז אויף Ct פֿאַר 30 סעקונדעס.די לעצט וואָג פון בלוט אַבזאָרבד דורך NFRCS 16 איז קאַנסידערד (W1) אין יעדער צייט פונט.רעכענען די BAR פּראָצענט מיט די פאלגענדע פאָרמולע:
בלוט קלאַטינג צייט (BCT) איז באשלאסן ווי רעפּאָרטעד דורך וואַנג עט על.17 .די צייט וואָס איז פארלאנגט פֿאַר גאַנץ בלוט (שטשור בלוט פּרעמיקסעד מיט 3.8% סאָדיום סיטראַטע) צו קלאַט אין דעם בייַזייַן פון NFRCS איז קאַלקיאַלייטיד ווי די BCT פון די פּראָבע מוסטער.די פאַרשידן NFRCS קאַמפּאָונאַנץ (30 מג) זענען געשטעלט אין 10 מל שרויף היטל ווייאַלז און ינקובייטיד בייַ 37 ° C.בלוט (0.5 מל) איז מוסיף צו די וויאַל און 0.3 מל פון 0.2 M CaCl2 איז צוגעגעבן צו אַקטאַווייט בלוט קאָואַגיאַליישאַן.צום סוף, יבערקערן די וויאַל יעדער 15 סעקונדעס (אַרויף צו 180 °) ביז אַ פעסט קלאַט פארמען.די BCT פון די מוסטער איז עסטימאַטעד דורך די נומער פון פליפּס 17,18.באַזירט אויף BCT, צוויי אָפּטימאַל חיבורים פון NFRCS Cm, Ch און Cp זענען אויסגעקליבן פֿאַר ווייַטער קעראַקטעריסטיקס שטודיום.
די BCT פון Ch NFRCS און Cp NFRCS חיבורים איז באשלאסן דורך ימפּלאַמענינג דעם אופֿן דיסקרייבד דורך Li et al.19 .שטעלן 15 X 15 mm2 Ch NFRCS, Cp NFRCS און Cs (positive קאָנטראָל) אין באַזונדער פּעטרי קיילים (37 ° C).בלוט מיט 3.8% סאָדיום סיטראַטע איז געמישט מיט 0.2 M CaCl2 אין אַ 10: 1 באַנד פאַרהעלטעניש צו אָנהייבן די בלוט קלאַטינג פּראָצעס.20 μל פון 0.2 M CaCl2 שטשור בלוט געמיש איז געווען געווענדט צו דער מוסטער ייבערפלאַך און געשטעלט אין אַ ליידיק פּעטרי שיסל.די קאָנטראָל איז בלוט אויסגעגאסן אין ליידיק פּעטרי קיילים אָן קט.אין פאַרפעסטיקט ינטערוואַלז פון 0, 3 און 5 מינוט, האַלטן קלאַטינג דורך אַדינג 10 מל פון דייאָניזעד (די) וואַסער צו די מוסטער מיט די שיסל אָן דיסטורבינג די קלאַט.ונקאָאַגולאַטעד עריטהראָסיטעס (עריטהראָסיטעס) אַנדערגאָו העמאָליסיס אין דעם בייַזייַן פון דייאָניזעד וואַסער און מעלדונג העמאָגלאָבין.העמאָגלאָבין אין פאַרשידענע צייט (האַ (ה)) איז געמאסטן ביי 540 נם (λמאַקס העמאָגלאָבין) מיט אַ UV-Vis ספּעקטראָפאָטאָמעטער.די אַבסאָלוט אַבזאָרפּשאַן פון העמאָגלאָבין (אַה (0)) אין 0 מינוט פון 20 μל בלוט אין 10 מל פון דייאָניזעד וואַסער איז גענומען ווי אַ רעפֿערענץ נאָרמאַל.די קאָרעוו העמאָגלאָבין אַפּטייק (רהאַ) פון קאָאַגולאַטעד בלוט איז קאַלקיאַלייטיד פון די פאַרהעלטעניש HA (t) / HA (0) ניצן די זעלבע פּעקל פון בלוט.
מיט אַ געוועב אַנאַליזער (Texture Pro CT V1.3 Build 15, Brookfield, USA), די קלעפּיק פּראָפּערטיעס פון NFRK צו דאַמידזשד געוועב זענען באשלאסן.דרוק אַן אָפֿן-באַטאַמד סילינדריקאַל שיסל קעגן די ין פון די כאַזער הויט (אָן די שיכטע פון ​​פעט).סאַמפּאַלז (Ch NFRCS און Cp NFRCS) זענען געווענדט דורך קאַננולאַ אין סילינדריקאַל מאָולדז צו שאַפֿן אַדכיזשאַן צו די הויט פון די חזיר.נאָך אַ 3 מינוט ינגקיוביישאַן אין צימער טעמפּעראַטור (רט) (25 ° C.), די NFRCS קלעפּיק שטאַרקייַט איז רעקאָרדעד אין אַ קעסיידערדיק קורס פון 0.5 מם / סעק.
די הויפּט שטריך פון כירורגיש סילאַנץ איז צו פאַרגרעסערן בלוט קלאַטינג בשעת רידוסינג בלוט אָנווער.לאָססלעסס קאָואַגיאַליישאַן אין NFRCS איז עוואַלואַטעד ניצן אַ פריער ארויס אופֿן מיט קליין מאָדיפיקאַטיאָנס 19.מאַכן אַ מיקראָסענטריפוגע רער (2 מל) (ינער דיאַמעטער 10 מם) מיט אַ 8 × 5 מם 2 לאָך אויף איין זייַט פון די סענטריפודזש רער (רעפּריזענטינג אַ עפענען ווונד).NFRCS איז געניצט צו פאַרמאַכן די עפן און טייפּ איז געניצט צו פּלאָמבע די ויסווייניקסט עדזשאַז.לייג 20 μל פון 0.2 M CaCl2 צו די מיקראָסענטריפוגע רער מיט די 3.8% סאָדיום סיטראַטע פּרעמיקס.נאָך 10 מינוט, די מיקראָסענטריפוגע טובז זענען אַוועקגענומען פון די קיילים און די פאַרגרעסערן אין די מאַסע פון ​​די קיילים איז באשלאסן רעכט צו דער אַוטפלאָו פון בלוט פון די NFRK (n = 3).בלוט אָנווער Ch NFRCS און Cp NFRCS זענען קאַמפּערד מיט Cs.
נאַס אָרנטלעכקייַט פון NFRCS איז געווען באשלאסן באזירט אויף דעם אופֿן דיסקרייבד דורך Mishra און Chaudhary21 מיט מינערווערטיק מאָדיפיקאַטיאָנס.אָרט די NFRCS אין אַ 100 מל ערלענמיער קאָלבע מיט 50 מל וואַסער און סווערל פֿאַר 60 ס אָן פאָרמינג אַ שפּיץ.וויסואַל דורכקוק און פּרייאָראַטייזיישאַן פון סאַמפּאַלז פֿאַר גשמיות אָרנטלעכקייַט באזירט אויף זאַמלונג.
די ביינדינג שטאַרקייַט פון HFFC צו Ct איז געלערנט מיט פריער ארויס מעטהאָדס מיט מינערווערטיק מאָדיפיקאַטיאָנס.ייבערפלאַך קאָוטינג אָרנטלעכקייַט איז אַססעססעד דורך יקספּאָוזינג NFRK צו אַקוסטיש כוואליעס (פונדרויסנדיק סטימול) אין דעם בייַזייַן פון מיליק וואַסער (קט).די דעוועלאָפּעד NFRCS Ch NFRCS און Cp NFRCS זענען געשטעלט אין אַ ביקער אָנגעפילט מיט וואַסער און סאָניקאַטעד פֿאַר ריספּעקטיוולי 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 און 30 מינוט.נאָך דרייינג, דער פּראָצענט חילוק צווישן די ערשט און לעצט וואָג פון די NFRCS איז געניצט צו רעכענען די פּראָצענט אָנווער פון מאַטעריאַל (HFFC).אין וויטראָ BCT שטיצט די ביינדינג שטאַרקייַט אָדער אָנווער פון ייבערפלאַך מאַטעריאַלס.די עפעקטיווקייַט פון HFFC ביינדינג צו Ct גיט בלוט קאָואַגיאַליישאַן און אַ גומע קאָוטינג אויף די ייבערפלאַך פון Ct22.
די כאָומאַדזשיניאַטי פון די דעוועלאָפּעד NFRCS איז באשלאסן דורך די BCT פון סאַמפּאַלז (30 מג) גענומען פון ראַנדאַמלי אויסגעקליבן אַלגעמיינע לאָוקיישאַנז פון די NFRCS.גיי די פריער דערמאנט BCT פּראָצעדור צו באַשליסן די העסקעם פון NFRCS.פּראַקסימאַטי צווישן אַלע פינף סאַמפּאַלז ינשורז מונדיר ייבערפלאַך קאַווערידזש און HFFC דעפּאַזישאַן אין די קט ייגל.
די נאָמינאַל בלוט קאָנטאַקט געגנט (NBCA) איז געווען באשלאסן ווי פריער געמאלדן מיט עטלעכע מאָדיפיקאַטיאָנס.קאָאַגולירן די בלוט דורך קלאַמפּינג 20 μל בלוט צווישן די צוויי סערפאַסיז פון Ct, Ch NFRCS, Cp NFRCS און Cs.נאָך 1 שעה, די צוויי טיילן פון די סטענט זענען אפגעשיידט און מאַניואַלי געמאסטן די געגנט פון די קלאַט.די דורכשניטלעך ווערט פון דריי רעפּאַטישאַנז איז געהאלטן NBCA NFRCS19.
דינאַמיש פארע סאָרפּטיאָן (DVS) אַנאַליסיס איז געניצט צו אָפּשאַצן די יפעקטיוונאַס פון NFRCS צו אַרייַנציען וואַסער פון די פונדרויסנדיק סוויווע אָדער פֿון די שאָדן פּלאַץ פאַראַנטוואָרטלעך פֿאַר ינישיייטינג קאָואַגיאַליישאַן.די DVS יוואַליוייץ אָדער רעקאָרדירן די פארע אַפּטייק און אָנווער אין אַ מוסטער גראַווימעטריקלי ניצן אַ הינטער-שפּירעוודיק וואָג מיט אַ מאַסע האַכלאָטע פון ​​± 0.1 μג.א פּאַרטיייש פארע דרוק (רעלאַטיוו הומידיטי) איז דזשענערייטאַד דורך אַן עלעקטראָניש מאַסע לויפן קאָנטראָללער אַרום די מוסטער דורך מיקסינג סאַטשערייטאַד און טרוקן טרעגער גאַסאַז. לויט די אייראפעישע פאַרמאַקאָפּעיאַ גיידליינז, באזירט אויף די פּראָצענט פון נעץ אַפּטייק דורך די סאַמפּאַלז, סאַמפּאַלז זענען קאַטאַגערייזד אין 4 קאַטעגאָריעס (0-0.012% וו/וו- ניט-היגראָסקאָפּיק, 0.2-2% וו/וו אַ ביסל היגראָסקאָפּיק, 2-15% מאַדעראַטלי היגראָסקאָפּיק, און> 15% 23 זייער. לויט די אייראפעישע פאַרמאַקאָפּעיאַ גיידליינז, באזירט אויף די פּראָצענט פון נעץ אַפּטייק דורך די סאַמפּאַלז, סאַמפּאַלז זענען קאַטאַגערייזד אין 4 קאַטעגאָריעס (0-0.012% וו/וו- ניט-היגראָסקאָפּיק, 0.2-2% וו/וו אַ ביסל היגראָסקאָפּיק, 2-15% מאַדעראַטלי היגראָסקאָפּיק, און> 15% 23 זייער.לויט די רעקאַמאַנדיישאַנז פון דער אייראפעישער פאַרמאַקאָפּאָעיאַ, דיפּענדינג אויף די פּראָצענט פון נעץ אַבזאָרפּשאַן דורך די סאַמפּאַלז, די סאַמפּאַלז זענען צעטיילט אין 4 קאַטעגאָריעס (0-0.012% וו / וו - ניט-היגראָסקאָפּיק, 0.2-2% וו / וו אַ ביסל היגראָסקאָפּיק, 2- פופצן%).% умеренно гигроскопичен и > 15% очень гигроскопичен)23. % מעסיק היגראָסקאָפּיק און> 15% זייער היגראָסקאָפּיק)23.根据欧洲药典指南,根据样品吸收水分的百分比,样品分为4 类(鿁0-0.012% w/w.012% w/w. /וו 轻微吸湿性、2-15% 适度吸湿,> 15% 非常吸湿)23.根据 欧洲 药典 指南 , 根据 吸收 水分 的 百分比 样品 分为 分为 刱为 刱为 刱为 0%-0%-0.湿 性 、 、 、 0.2-2% וו/וו 轻微 、 2-15% 适度 吸湿 ,> 15% 非常吸湿)23.אין לויט מיט די רעקאַמאַנדיישאַנז פון דער אייראפעישער פאַרמאַקאָפּאָעיאַ, סאַמפּאַלז זענען צעטיילט אין 4 קלאסן דיפּענדינג אויף די פּראָצענט פון נעץ אַבזאָרבד דורך די מוסטער (0-0.012% דורך וואָג - ניט-היגראָסקאָפּיק, 0.2-2% דורך וואָג אַ ביסל היגראָסקאָפּיק, 2-15% דורך וואָג).% умеренно гигроскопичен, > 15 % очень гигроскопичен) 23. % מעסיק היגראָסקאָפּיק,> 15% זייער היגראָסקאָפּיק) 23.די היגראָסקאָפּיק עפעקטיווקייַט פון NFCS X NFCS און TsN NFCS איז באשלאסן אויף אַן אַנאַליזער DVS TA TGA Q5000 SA.בעשאַס דעם פּראָצעס, לויפן צייט, קאָרעוו הומידיטי (רה) און פאַקטיש-צייט מוסטער וואָג ביי 25 ° C24 זענען באקומען.מויסטשער אינהאַלט איז קאַלקיאַלייטיד דורך פּינטלעך NFRCS מאַסע אַנאַליסיס ניצן די פאלגענדע יקווייזשאַן:
MC איז NFRCS הומידיטי.m1 - טרוקן וואָג פון NSAIDs.m2 איז די פאַקטיש-צייט NFRCS מאַסע ביי אַ געגעבן רה.
די גאַנץ ייבערפלאַך געגנט איז עסטימאַטעד ניצן אַ ניטראָגען אַדסאָרפּטיאָן עקספּערימענט מיט פליסיק ניטראָגען נאָך עמפּטיינג די סאַמפּאַלז ביי 25 ° C פֿאַר 10 ה (<7 × 10-3 טאָר). די גאַנץ ייבערפלאַך געגנט איז עסטימאַטעד ניצן אַ ניטראָגען אַדסאָרפּטיאָן עקספּערימענט מיט פליסיק ניטראָגען נאָך עמפּטיינג די סאַמפּאַלז ביי 25 ° C פֿאַר 10 ה (<7 × 10-3 טאָר). Общая площадь поверхности оценивалась с помощью площадь поверхности оценивалась с помощью эксперимента подсорбции азота жидким азотом פֿאַר 25 ℃ צו 10 ℃ (<7 × 10-3 טהאָרר). די גאַנץ ייבערפלאַך געגנט איז עסטימאַטעד ניצן אַ ניטראָגען אַדסאָרפּטיאָן עקספּערימענט מיט פליסיק ניטראָגען נאָך סאַמפּאַלז זענען עמטיד ביי 25 ° C פֿאַר 10 ה (<7 × 10-3 טאָר).在25°C 清空样品10 小时(< 7 × 10-3 טאָר在 25°C Общая площадь поверхности оценивалась с использованием экспериментов по адсорбции азота жидком азото נאָך 10 טעג אין אַ טעמפּעראַטור פון 25 ℃ (< 7 × 10-3 טהאָרר). די גאַנץ ייבערפלאַך געגנט איז עסטימאַטעד ניצן ניטראָגען אַדסאָרפּטיאָן יקספּעראַמאַנץ מיט פליסיק ניטראָגען נאָך סאַמפּאַלז זענען עמטיד פֿאַר 10 שעה ביי 25 ° C (<7 קס 10-3 טאָר).גאַנץ ייבערפלאַך שטח, פּאָרע באַנד און NFRCS פּאָרע גרייס זענען באשלאסן מיט אַ Quantachrome פון NOVA 1000e, עסטרייַך ניצן RS 232 ווייכווארג.
צוגרייטן 5% RBCs (סאַלינע ווי דילוענט) פון גאַנץ בלוט.דערנאָך אַריבערפירן אַן אַליקוואָט פון HFFC (0.25 מל) צו אַ 96-געזונט טעלער און 5% RBC מאַסע (0.1 מל).ינגקיובייט די געמיש בייַ 37 ° C פֿאַר 40 מינוט.א געמיש פון רויט בלוט סעלז און סערום איז געהאלטן ווי אַ positive קאָנטראָל, און אַ געמיש פון סאַלינע און רויט בלוט סעלז ווי אַ נעגאַטיוו קאָנטראָל.העמאַגלוטינאַטיאָן איז באשלאסן לויט די סטאַדזשיצקי וואָג.די פארגעלייגט וואָג זענען ווי גייט: + + + + געדיכט גראַניאַלער אַגגרעגאַץ;+ + + גלאַט דנאָ פּאַדס מיט קערווד עדזשאַז;+ + גלאַט דנאָ פּאַדס מיט טאָרן עדזשאַז;+ שמאָל רויט רינגס אַרום די עדזשאַז פון די גלאַט פּאַדס;- (נעגאַטיוו) דיסקרעטע רויט קנעפּל 12 אין דעם צענטער פון דער נידעריקער געזונט.
די העמאָקאָמפּאַטיביליטי פון NFRCS איז געלערנט לויט דעם אופֿן פון די ינטערנאַטיאָנאַל ארגאניזאציע פֿאַר סטאַנדערדיזיישאַן (ISO) (ISO10993-4, 1999)26,27.די גראַווימעטריק אופֿן דיסקרייבד דורך Singh et al.מינערווערטיק מאָדיפיקאַטיאָנס זענען געמאכט צו אַססעסס טראַמבאַס פאָרמירונג אין דעם בייַזייַן פון אָדער אויף די ייבערפלאַך פון NFRCS.500 מג פון Cs, Ch NFRCS און Cp NFRCS זענען ינקובייטיד אין פאַספייט באַפערד סאַלין (PBS) פֿאַר 24 שעה בייַ 37 ° C.נאָך 24 שעה, פּבס איז אַוועקגענומען און NFRCS איז באהאנדלט מיט 2 מל פון בלוט מיט 3.8% סאָדיום סיטראַטע.אויף די ייבערפלאַך פון די NFRCS, לייגן 0.04 מל פון 0.1 M CaCl2 צו די ינגקיובייטיד סאַמפּאַלז.נאָך 45 מינוט, 5 מל פון דיסטילד וואַסער איז צוגעגעבן צו האַלטן קאָואַגיאַליישאַן.קאָאַגולאַטעד בלוט אויף די ייבערפלאַך פון NFRK איז באהאנדלט מיט 36-38% פאָרמאַלדאַכייד לייזונג.די קלאַץ פאַרפעסטיקט מיט פאָרמאַלדאַכייד זענען דאַר און ווייד.דער פּראָצענט פון טראַמבאָוסאַס איז עסטימאַטעד דורך קאַלקיאַלייטינג די וואָג פון די גלאז אָן בלוט און מוסטער (נעגאַטיוו קאָנטראָל) און די גלאז מיט בלוט (positive קאָנטראָל).
ווי אַן ערשט באַשטעטיקונג, די סאַמפּאַלז זענען וויזשוואַלייזד אונטער אַ אָפּטיש מיקראָסקאָפּ צו פֿאַרשטיין די פיייקייט פון די HFFC ייבערפלאַך קאָוטינג, Ct ינטערקאַנעקטיד און Ct נעץ צו פאָרעם פּאָרעס.דין סעקשאַנז פון טש און קפּ פון NFRCS זענען טריממעד מיט אַ סקאַלפּעל בלייד.די ריזאַלטינג אָפּטיילונג איז געשטעלט אויף אַ גלאז רוק, באדעקט מיט אַ קאָווערסליפּ, און די עדזשאַז זענען פאַרפעסטיקט מיט קליי.די צוגעגרייט סליידז זענען וויוד אונטער אַ אָפּטיש מיקראָסקאָפּ און פאָוטאַגראַפס זענען גענומען אין פאַרשידענע מאַגנאַפאַקיישאַנז.
פּאָלימער דעפּאַזישאַן אין קט נעטוואָרקס איז וויזשוואַלייזד ניצן פלורעסאַנס מיקראָסקאָפּי באזירט אויף דעם אופֿן דיסקרייבד דורך רייס עט על.29. די HFFC זאַץ געניצט פֿאַר די פאָרמיוליישאַן איז געווען געמישט מיט אַ פלורעסאַנט פאַרב (אַמאַראַנטה), און NFRCS (Ch & Cp) זענען צוגעגרייט ווי פּער דער אופֿן דערמאנט פריער. די HFFC זאַץ געניצט פֿאַר די פאָרמיוליישאַן איז געווען געמישט מיט אַ פלורעסאַנט פאַרב (אַמאַראַנטה), און NFRCS (Ch & Cp) זענען צוגעגרייט ווי פּער דער אופֿן דערמאנט פריער.די HFFC זאַץ געניצט פֿאַר פאָרמיוליישאַן איז געווען געמישט מיט אַ פלורעסאַנט פאַרב (אַמאַראַנטה) און NFRCS (טש און קפּ) איז באקומען לויט די פריער דערמאנט אופֿן.将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料将用于配方的HFFC 组合物与荧光染料די HFFC זאַץ געניצט אין די פאָרמיאַליישאַן איז געמישט מיט אַ פלורעסאַנט פאַרב (אַמאַראַנטה) און באקומען NFRCS (טש און קפּ), ווי דערמאנט פריער.פון די באקומען סאַמפּאַלז זענען שנייַדן דין סעקשאַנז פון נפרק, געשטעלט אויף גלאז סליידז און באדעקט מיט דעקן סליפּס.אָבסערווירן די צוגעגרייט סליידז אונטער אַ פלורעסאַנט מיקראָסקאָפּ ניצן אַ גרין פילטער (310-380 נם).בילדער זענען גענומען מיט 4 קס מאַגנאַפאַקיישאַן צו פֿאַרשטיין Ct באציונגען און וידעפדיק פּאָלימער דעפּאַזישאַן אין די Ct נעץ.
די ייבערפלאַך טאַפּאַגראַפי פון NFRCS Ch און Cp איז באשלאסן מיט אַן אַטאָמישע קראַפט מיקראָסקאָפּ (AFM) מיט אַ הינטער-שאַרף TESP קאַנטילעווער אין טאַפּינג מאָדע: 42 N / m, 320 kHz, ROC 2-5 nm, Bruker, טייוואַן.ייבערפלאַך ראַפנאַס איז באשלאסן דורך וואָרצל מיטל קוואַדראַט (RMS) ניצן ווייכווארג (Scanning Probe Image Processor).פאַרשידן NFRCS לאָוקיישאַנז זענען רענדערד אויף 3 ד בילדער צו קאָנטראָלירן פֿאַר ייבערפלאַך יונאַפאָרמאַטי.דער נאָרמאַל דיווייישאַן פון די כעזשבן פֿאַר אַ געגעבן געגנט איז דיפיינד ווי די ייבערפלאַך ראַפנאַס.די RMS יקווייזשאַן איז געניצט צו קוואַנטיפיצירן די ייבערפלאַך ראַפנאַס פון NFRCS31.
FESEM-באזירט שטודיום זענען דורכגעקאָכט מיט FESEM, SU8000, HI-0876-0003, Hitachi, טאָקיאָ, צו פֿאַרשטיין די ייבערפלאַך מאָרפאָלאָגי פון Ch NFRCS און Cp NFRCS, וואָס געוויזן בעסער BCT ווי Cm NFRCS.די FESEM לערנען איז דורכגעקאָכט לויט די מעטאָד דיסקרייבד דורך דזשאַו עט על.32 מיט מינערווערטיק מאָדיפיקאַטיאָנס.NFRCS 20 צו 30 מג Ch NFRCS און Cp NFRCS זענען פּרעמיקסעד מיט 20 μל פון 3.8% סאָדיום סיטראַטע פּרעמיקסעד מיט שטשור בלוט.20 μל פון 0.2 M CaCl2 איז צוגעגעבן צו די בלוט-באהאנדלט סאַמפּאַלז צו אָנהייבן קאָואַגיאַליישאַן און די סאַמפּאַלז זענען ינקובייטיד אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר 10 מינוט.אין דערצו, וידעפדיק עריטהראָסיטעס זענען אַוועקגענומען פון די NFRCS ייבערפלאַך דורך רינסינג מיט סאַלין.
סאַבסאַקוואַנט סאַמפּאַלז זענען באהאנדלט מיט 0.1% גלוטאַראַלדעהידע און דעמאָלט דאַר אין אַ הייס לופט ויוון בייַ 37 ° C צו באַזייַטיקן נעץ.די דאַר סאַמפּאַלז זענען קאָוטאַד און אַנאַלייזד 32 .אנדערע בילדער באקומען בעשאַס די אַנאַליסיס זענען קלאַט פאָרמירונג אויף די ייבערפלאַך פון יחיד וואַטע פייבערז, פּאָלימער דעפּאַזישאַן צווישן Ct, עריטהראָסיטע מאָרפאָלאָגי (פאָרעם), קלאַט אָרנטלעכקייַט און עריטהראָסיטע מאָרפאָלאָגי אין דעם בייַזייַן פון NFRCS.ונרעאַטעד NFRCS געביטן און Ch און Cp באהאנדלט NFRCS געביטן ינגקיובייטיד מיט בלוט זענען סקאַנד פֿאַר עלעמענטאַל ייאַנז (סאָדיום, פּאַטאַסיאַם, ניטראָגען, קאַלסיום, מאַגניזיאַם, צינק, קופּער און סעלעניום) 33.פאַרגלייַכן עלעמענטאַל יאָן פּערסענטידזשיז צווישן באהאנדלט און אַנטריטיד סאַמפּאַלז צו פֿאַרשטיין עלעמענטאַל יאָן אַקיומיאַליישאַן בעשאַס קלאַט פאָרמירונג און קלאַט כאָומאַדזשיניאַטי.
די גרעב פון די קפּ HFFC ייבערפלאַך קאָוטינג אויף די קט ייבערפלאַך איז באשלאסן מיט FESEM.די קרייַז סעקשאַנז פון Cp NFRCS זענען שנייַדן פון די פריימווערק און ספּאַטער קאָוטאַד.די ריזאַלטינג ספּאַטער קאָוטינג סאַמפּאַלז זענען באמערקט דורך FESEM און די גרעב פון די ייבערפלאַך קאָוטינג איז געמאסטן 34, 35, 36.
X-Ray מיקראָ-CT גיט הויך-האַכלאָטע 3 ד ניט-דעסטרוקטיווע ימידזשינג און אַלאַוז איר צו לערנען די ינערלעך סטראַקטשעראַל אָרדענונג פון NFRK.מיקראָ-CT ניצט אַן X-Ray שטראַל וואָס גייט דורך די מוסטער צו רעקאָרדירן די היגע לינעאַר אַטטענואַטיאָן קאָואַפישאַנט פון די X-שטראַלן אין דער מוסטער, וואָס העלפּס צו באַקומען מאָרפאַלאַדזשיקאַל אינפֿאָרמאַציע.די ינערלעך אָרט פון Ct אין Cp NFRCS און בלוט-באהאנדלט Cp NFRCS איז יגזאַמאַנד דורך מיקראָ-CT צו פֿאַרשטיין אַבזאָרפּשאַן עפעקטיווקייַט און בלוט קלאַטינג אין דעם בייַזייַן פון NFRCS37,38,39.די 3 ד סטראַקטשערז פון בלוט-באהאנדלט און אַנטריטיד קפּ NFRCS סאַמפּאַלז זענען ריקאַנסטראַקטיד מיט מיקראָ-CT (V|tome|x S240, פיניקס, דייַטשלאַנד).מיט VG STUDIO-MAX ווייכווארג ווערסיע 2.2, עטלעכע X-Ray בילדער זענען גענומען פֿון פאַרשידענע אַנגלעס (יידילי 360 ° קאַווערידזש) צו אַנטוויקלען 3 ד בילדער פֿאַר NFRCS.די געזאמלט פּרויעקציע דאַטן זענען ריקאַנסטראַקטיד אין 3D וואָלומעטריק בילדער מיט די קאָראַספּאַנדינג פּשוט 3D ScanIP אַקאַדעמיק ווייכווארג.
אין אַדישאַן, צו פֿאַרשטיין די פאַרשפּרייטונג פון די קלאַט, 20 μל פּרימיקסעד סיטראַטעד בלוט און 20 μל 0.2 M CaCl2 זענען צוגעגעבן צו די NFRCS צו אָנהייבן בלוט קלאַטינג.די צוגעגרייט סאַמפּאַלז זענען לינקס צו פאַרגליווערט.די NFRK ייבערפלאַך איז געווען באהאנדלט מיט 0.5% גלוטאַראַלדעהידע און דאַר אין אַ הייס לופט ויוון בייַ 30-40 ° C פֿאַר 30 מינוט.די בלוט קלאַט געשאפן אויף די NFRCS איז סקאַנד, ריקאַנסטראַקטיד און אַ 3 ד בילד פון די בלוט קלאַט איז וויזשוואַלייזד.
אַנטיבאַקטיריאַל אַססעס זענען דורכגעקאָכט אויף Cp NFRCS (בעסטער קאַמפּערד מיט Ch NFRCS) מיט די פריער דיסקרייבד אופֿן מיט מינערווערטיק מאָדיפיקאַטיאָנס.די אַנטיבאַקטיריאַל טעטיקייט פון Cp NFRCS און Cp HFFC איז באשלאסן מיט דריי פאַרשידענע פּראָבע מייקראָואָרגאַניזאַמז [S.aureus (גראַם-positive באַקטיריאַ), E.coli (גראַם-נעגאַטיוו באַקטיריאַ) און ווייַס קאַנדידאַ (C.albicans)] גראָוינג אויף אַגאַר אין פּעטרי קיילים אין אַ ינגקיאַבייטער.ינאָקולירן 50 מל פון די דיילוטאַד באַקטיריאַל קולטור סאַספּענשאַן אין אַ קאַנסאַנטריישאַן פון 105-106 CFU מל-1 אין די אַגאַר מיטל.גיסן די מיטל אין אַ פּעטרי שיסל און לאָזן עס פאַרגליווערט.וועלז זענען געמאכט אויף די ייבערפלאַך פון די אַגאַר טעלער צו פּלאָמבירן מיט HFFC (3 וועלז פֿאַר HFFC און 1 פֿאַר נעגאַטיוו קאָנטראָל).לייג 200 μl HFFC צו 3 וועלז און 200 μל pH 7.4 PBS צו די 4 געזונט.אויף די אנדערע זייַט פון די פּעטרי שיסל, שטעלן אַ 12 מם קפּ NFRCS דיסק אויף די סאַלידאַפייד אַגאַר און ייַננעצן מיט פּבס (pH 7.4).סיפּראָפלאָקסאַסין, אַמפּיסיללין און פלוקאָנאַזאָלע טאַבלעץ זענען גערעכנט ווי רעפֿערענץ סטאַנדאַרדס פֿאַר סטאַפילאָקאָקקוס אַורעוס, Escherichia coli און Candida albicans.מעסטן די ינאַבישאַן זאָנע מאַניואַלי און נעמען אַ דיגיטאַל בילד פון די ינאַבישאַן זאָנע.
נאָך ינסטיטושאַנאַל עטישע האַסקאָמע, די לערנען איז געווען געפירט אין די קאַסטובאַ מעדיקאַל קאָלעדזש פון בילדונג און פאָרשונג אין מאַניפּאַל, קאַרנאַטאַקאַ, אין דרום ינדיאַ.די יקספּערמענאַל פּראָטאָקאָל אין וויטראָ TEG איז ריוויוד און באוויליקט דורך די ינסטיטושאַנאַל עטיקס קאַמיטי פון קאַסטובאַ מעדיקאַל קאָלעדזש, מאַניפּאַל, קאַרנאַטאַקאַ (IEC: 674/2020).סאַבדזשעקץ זענען ריקרוטיד פון פרייַוויליקער בלוט דאָנאָרס (אַלט 18-55) פון די שפּיטאָל בלוט באַנק.אין דערצו, אַ ינפאָרמד צושטימען פאָרעם איז באקומען פון די וואַלאַנטירז פֿאַר די זאַמלונג פון בלוט סאַמפּאַלז.געבוירן TEG (N-TEG) ​​איז געניצט צו לערנען די ווירקונג פון די Cp HFFC פאָרמיוליישאַן אויף גאַנץ בלוט פּרעמיקסעד מיט סאָדיום סיטראַטע.N-TEG איז וויידלי אנערקענט פֿאַר זיין ראָלע אין ריסאַסיטיישאַן פונט-פון-זאָרגן, וואָס קריייץ פּראָבלעמס פֿאַר קליניסיאַנס רעכט צו דער פּאָטענציעל פֿאַר קליניש באַטייטיק פאַרהאַלטן אין רעזולטאַטן (רוטינע קאָואַגיאַליישאַן טעסץ).N-TEG אַנאַליסיס איז דורכגעקאָכט מיט גאַנץ בלוט.ינפאָרמד צושטימען און דיטיילד מעדיציניש געשיכטע זענען באקומען פון אַלע פּאַרטיסאַפּאַנץ.די לערנען האט נישט אַרייַנגערעכנט פּאַרטיסאַפּאַנץ מיט העמאָסטאַטיק אָדער טהראָמבאָטיק קאַמפּלאַקיישאַנז אַזאַ ווי שוואַנגערשאַפט / פּאָסטפּאַרטום אָדער לעבער קרענק.סאַבדזשעקץ גענומען דרוגס וואָס ווירקן די קאָואַגיאַליישאַן קאַסקייד זענען אויך יקסקלודיד פון די לערנען.יקערדיק לאַבאָראַטאָריע טעסץ (העמאָגלאָבין, פּראָטהראָמבין צייט, אַקטיווייטיד טהראָמבאָפּלאַסטין און פּלאַטעלעט ציילן) זענען דורכגעקאָכט אויף אַלע פּאַרטיסאַפּאַנץ לויט צו נאָרמאַל פּראָוסידזשערז.N-TEG דיטערמאַנז וויסקאָעלאַסטיסאַטי פון בלוט קלאַט, ערשט קלאַט סטרוקטור, פּאַרטאַקאַל ינטעראַקשאַן, קלאַט פֿאַרשטאַרקונג און קלאַט ליסיס.די N-TEG אַנאַליסיס גיט גראַפיקאַל און נומעריקאַל דאַטן וועגן די קאָלעקטיוו יפעקץ פון עטלעכע סעליאַלער עלעמענטן און פּלאַזמע.N-TEG אַנאַליסיס איז געווען דורכגעקאָכט אויף צוויי פאַרשידענע וואַליומז פון קפּ HFFC (10 μl און 50 μl).ווי אַ רעזולטאַט, 1 מל פון גאַנץ בלוט מיט סיטריק זויער איז מוסיף צו 10 μl Cp HFFC.לייג 1 מל (קפּ HFFC + סיטרייטיד בלוט), 340 μל געמישט בלוט צו 20 μל 0.2 M CaCl2 מיט TEG שיסל.דערנאָך, TEG קיילים זענען לאָודיד אין TEG® 5000, יו. עס. צו מעסטן R, K, אַלף ווינקל, MA, G, CI, TPI, EPL, LY 30% פון בלוט סאַמפּאַלז אין דעם בייַזייַן פון Cp HFFC41.
דער פּראָטאָקאָל פון לערנען אין וויוואָו איז ריוויוד און באוויליקט דורך די ינסטיטושאַנאַל אַנימאַל עטיקס קאַמיטי (IAEC), Kasturba שולע פון ​​​​מעדיסינע, מאַניפּאַל אינסטיטוט פון העכער בילדונג, מאַניפּאַל (IAEC/KMC/69/2020).אַלע כייַע יקספּעראַמאַנץ זענען דורכגעקאָכט אין לויט מיט די רעקאַמאַנדיישאַנז פון די קאַמיטי פֿאַר קאָנטראָל און השגחה פון כייַע עקספּערימענטאַטיאָן (CPCSEA).אַלע אין וויוואָו NFRCS שטודיום (2 × 2 סענטימעטער 2) זענען דורכגעקאָכט אויף ווייַבלעך וויסטאַר ראַץ (ווייינג 200 צו 250 ג).אַלע אַנימאַלס זענען אַקקלימאַטייזד אין אַ טעמפּעראַטור פון 24-26 ° C, די אַנימאַלס האָבן פריי צוטריט צו נאָרמאַל עסנוואַרג און וואַסער אַד לאַביטוס.אַלע אַנימאַלס זענען ראַנדאַמלי צעטיילט אין פאַרשידענע גרופּעס, יעדער גרופּע קאָנסיסטעד פון דרייַ אַנימאַלס.אַלע שטודיום זענען דורכגעקאָכט אין לויט מיט אַנימאַל סטודיעס: באריכט פון אין וויוואָו יקספּעראַמאַנץ 43.איידער די לערנען, די אַנימאַלס זענען אַנאַסטעטיק דורך ינטראַפּעריטאָנעאַל (יפּ) אַדמיניסטראַציע פון ​​אַ געמיש פון 20-50 מג קעטאַמינע (פּער 1 קג פון גוף וואָג) און 2-10 מג קסילאַזינע (פּער 1 קג פון גוף וואָג).נאָך דעם לערנען, די בלידינג באַנד איז קאַלקיאַלייטיד דורך יוואַליוייטינג די חילוק צווישן די ערשט און לעצט וואָג פון די סאַמפּאַלז, די דורכשניטלעך ווערט באקומען פון די דריי טעסץ איז גענומען ווי די בלידינג באַנד פון די מוסטער.
די שטשור עק אַמפּיאַטיישאַן מאָדעל איז ימפּלאַמענאַד צו פֿאַרשטיין די פּאָטענציעל פון NFRCS צו מאָדולירן בלידינג אין טראַוומע, קאַמבאַט אָדער פאַרקער צופאַל (שאָדן מאָדעל).שנייַדן אַוועק 50% פון די עק מיט אַ סקאַלפּעל בלייד און שטעלן אין לופט פֿאַר 15 ס צו ענשור נאָרמאַל בלידינג.אין אַדישאַן, פּרובירן סאַמפּאַלז זענען געשטעלט אויף די עק פון אַ שטשור דורך אַפּלייינג דרוק (Ct, Cs, Ch NFRCS און Cp NFRCS).בלידינג און פּקט זענען רעפּאָרטעד פֿאַר פּרובירן ספּעסאַמאַנז (n = 3) 17,45.
די יפעקטיוונאַס פון NFRCS דרוק קאָנטראָל אין קאַמבאַט איז ינוועסטאַגייטאַד אויף אַ מאָדעל פון די אויבנאויפיקער פעמאָראַל אַרטעריע.די פעמאָראַל אַרטעריע איז יקספּאָוזד, פּאַנגקטשערד מיט אַ 24 ג טראָקאַר, און בלוטיד אין 15 סעקונדעס.נאָך אַנקאַנטראָולד בלידינג איז באמערקט, די פּראָבע ספּעסאַמאַן איז געשטעלט אויף די פּאַנגקטשער פּלאַץ מיט דרוק געווענדט.גלייך נאָך אַפּלאַקיישאַן פון די פּראָבע מוסטער, די קלאַטינג צייט איז רעקאָרדעד און כעמאָסטאַטיק עפעקטיווקייַט איז באמערקט פֿאַר די ווייַטער 5 מינוט.דער זעלביקער פּראָצעדור איז ריפּיטיד מיט Cs און Ct46.
דאולינג עט על.47 פארגעלייגט אַ לעבער שאָדן מאָדעל צו אַססעסס די העמאָסטאַטיק פּאָטענציעל פון העמאָסטאַטיק מאַטעריאַלס אין דעם קאָנטעקסט פון ינטראַאָפּעראַטיווע בלידינג.BCT איז רעקאָרדעד פֿאַר Ct סאַמפּאַלז (נעגאַטיוו קאָנטראָל), Cs פריימווערק (positive קאָנטראָל), Ch NFRCS סאַמפּאַלז און Cp NFRCS סאַמפּאַלז.די סופּראַהעפּאַטיק ווענאַ קאַוואַ פון די שטשור איז געווען יקספּאָוזד דורך פּערפאָרמינג אַ מידיאַן לאַפּאַראָטאָמי.נאָך דעם, די דיסטאַל טייל פון די לינקס לאָוב איז שנייַדן אויס מיט שער.מאַכן אַ ינסיזשאַן אין די לעבער מיט אַ סקאַלפּעל בלייד און לאָזן עס בלוטיקן פֿאַר אַ ביסל סעקונדעס.אַקיעראַטלי ווייד Ch NFRCS און Cp NFRCS פּרובירן סאַמפּאַלז זענען געשטעלט אויף די דאַמידזשד ייבערפלאַך אָן קיין positive דרוק און BCT איז רעקאָרדעד.די קאָנטראָל גרופּע (קט) דעמאָלט געווענדט דרוק נאכגעגאנגען דורך Cs 30 s47 אָן ברייקינג די שאָדן.
אין וויוואָו ווונד היילונג אַסאַסאַז זענען דורכגעקאָכט מיט אַן עקססיטיאָנאַל ווונד מאָדעל צו אָפּשאַצן די ווונד היילונג פּראָפּערטיעס פון די דעוועלאָפּעד פּאָלימער-באזירט NFRCSs.מאָדעלס פון עקססיטיאָנאַל ווונדז זענען אויסגעקליבן און דורכגעקאָכט לויט פריער ארויס מעטהאָדס מיט מינערווערטיק מאָדיפיקאַטיאָנס 19,32,48.אַלע אַנימאַלס זענען אַנעסטעטיזעד ווי פריער דיסקרייבד.ניצן אַ ביאָפּסי זעץ (12 מם) צו מאַכן אַ קייַלעכיק טיף ינסיזשאַן אין די הויט פון די צוריק.צוגעגרייט ווונד זייטלעך זענען אנגעטאן מיט Cs (positive קאָנטראָל), Ct (רעקאַגנייזינג אַז וואַטע פּאַדס אַרייַנמישנ זיך מיט היילונג), Ch NFRCS און Cp NFRCS (עקספּערימענטאַל גרופּע) און אַ נעגאַטיוו קאָנטראָל אָן קיין באַהאַנדלונג.אויף יעדער טאָג פון די לערנען, די געגנט פון די ווונד איז געמאסטן אין אַלע ראַץ.ניצן אַ דיגיטאַל אַפּאַראַט צו נעמען אַ בילד פון די ווונד געגנט און אָנטאָן אַ נייַ סאָוס.דער פּראָצענט פון ווונד קלאָוזשער איז געמאסטן דורך די פאלגענדע פאָרמולע:
באַזירט אויף דער פּראָצענט פון ווונד קלאָוזשער אויף די 12 טאָג פון די לערנען, די שטשור הויט פון דער בעסטער גרופּע איז עקסיסטיד ((Cp NFRCS) און די קאָנטראָל גרופּע) און געלערנט דורך H&E סטיינינג און Masson ס טריקראָום סטיינינג. באַזירט אויף דער פּראָצענט פון ווונד קלאָוזשער אויף די 12 טאָג פון די לערנען, די שטשור הויט פון דער בעסטער גרופּע איז עקסיסטיד ((Cp NFRCS) און די קאָנטראָל גרופּע) און געלערנט דורך H&E סטיינינג און Masson ס טריקראָום סטיינינג.באַזירט אויף דער פּראָצענט פון ווונד קלאָוזשער אויף די 12 טאָג פון די לערנען, די הויט פון די ראַץ פון דער בעסטער גרופּע ((Cp NFRCS) און די קאָנטראָל גרופּע) איז יקסידיד און יגזאַמאַנד דורך סטיינינג מיט העמאַטאָקסילין-עאָסין און מאַססאָן ס טריקראָום.根据研究第12天的伤口闭合百分比,切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大雒行Massons三色染色研究.根据研究第12天的伤口闭合百分比,切除最佳组((Cp NFRCS)和对照组)的大雤行的大雤皌眳组)ראַץ אין דער בעסטער גרופּע ((Cp NFRCS) און קאָנטראָל גרופּעס) זענען יקסידיד פֿאַר העמאַטאָקסילין-עאָסין סטיינינג און מאַססאָן ס טריקראָום סטיינינג באזירט אויף פּראָצענט ווונד קלאָוזשער אויף טאָג 12 פון די לערנען.די ימפּלאַמענאַד סטיינינג פּראָצעדור איז דורכגעקאָכט לויט פריער דיסקרייבד מעטהאָדס49,50.בעקיצער, נאָך פיקסיישאַן אין 10% פאָרמאַלין, די סאַמפּאַלז זענען דיכיידרייטאַד מיט אַ סעריע פון ​​​​גריינד אַלקאָהאָלס.ניצן אַ מיקראָטאָמע צו באַקומען דין סעקשאַנז (5 μm דיק) פון די עקסיסטיד געוועב.דין סיריאַל סעקשאַנז פון קאָנטראָלס און Cp NFRCS זענען באהאנדלט מיט העמאַטאָקסילין און עאָסין צו לערנען כיסטאָופּאַטאַלאַדזשיקאַל ענדערונגען.מאַססאָן ס טריקראָום פלעק איז געניצט צו דעטעקט די פאָרמירונג פון קאַלאַגאַן פיברילז.די רעזולטאַטן באקומען זענען בליינדלי געלערנט דורך פּאַטאַלאַדזשיס.
די פעסטקייַט פון Cp NFRCS סאַמפּאַלז איז געלערנט אין צימער טעמפּעראַטור (25 ° C ± 2 ° C / 60% RH ± 5%) פֿאַר 12 months51.Cp NFRCS (ייבערפלאַך דיסקאַלעריישאַן און מייקראָוביאַל וווּקס) איז וויזשוואַלי ינספּעקטיד און טעסטעד פֿאַר פאַרלייגן טראָגן קעגנשטעל און BCT לויט די אויבן מעטהאָדס אַוטליינד אין די מאַטעריאַלס און מעטהאָדס אָפּטיילונג.
די סקאַלאַביליטי און רעפּראָדוסיביליטי פון Cp NFRCS איז יגזאַמאַנד דורך פּריפּערינג Cp NFRCS מיט אַ גרייס פון 15 × 15 cm2.אין אַדישאַן, 30 מג סאַמפּאַלז (n = 5) זענען יקסידיד פון פאַרשידן קפּ NFRCS פראַקשאַנז און די BCT פון די געלערנט סאַמפּאַלז איז געווען עוואַלואַטעד ווי דיסקרייבד פריער אין די מעטהאָדס אָפּטיילונג.
מיר האָבן געפרוווט צו אַנטוויקלען פאַרשידן שאַפּעס און סטראַקטשערז ניצן Cp NFRCS חיבורים פֿאַר פאַרשידן בייאָמעדיקאַל אַפּלאַקיישאַנז.אַזאַ שאַפּעס אָדער קאַנפיגיעריישאַנז אַרייַננעמען קאַניקאַל סוואַבז פֿאַר נאָסעבלעעדס, דענטאַל פּראָוסידזשערז, און סילינדריקאַל סוואַבז פֿאַר וואַדזשיינאַל בלידינג.
אַלע דאַטן שטעלט זענען אויסגעדריקט ווי דורכשניטלעך ± נאָרמאַל דיווייישאַן און זענען אַנאַלייזד דורך ANOVA ניצן פּריסם 5.03 (גראַפפּאַד, סאַן דיעגאָ, CA, USA) נאכגעגאנגען דורך Bonferroni ס קייפל קאַמפּעראַסאַנז פּרובירן (* פּ <0.05).
אַלע פּראָוסידזשערז דורכגעקאָכט אין מענטש שטודיום זענען אין לויט מיט די סטאַנדאַרדס פון דעם אינסטיטוט און די נאַשאַנאַל פאָרשונג קאָונסיל, ווי געזונט ווי די דעקלאַראַציע פון ​​העלסינקי 1964 און די סאַבסאַקוואַנט אַמענדמאַנץ, אָדער ענלעך עטישע סטאַנדאַרדס.אַלע פּאַרטיסאַפּאַנץ זענען ינפאָרמד וועגן די פֿעיִקייטן פון די לערנען און זייַן וואַלאַנטערי נאַטור.באַטייליקטער דאַטן בלייבן קאַנפאַדענטשאַל אַמאָל געזאמלט.די יקספּערמענאַל פּראָטאָקאָל אין וויטראָ TEG איז ריוויוד און באוויליקט דורך די ינסטיטושאַנאַל עטיקס קאַמיטי פון קאַסטובאַ מעדיקאַל קאָלעדזש, מאַניפּאַל, קאַרנאַטאַקאַ (IEC: 674/2020).וואַלאַנטירז געחתמעט ינפאָרמד צושטימען צו זאַמלען בלוט סאַמפּאַלז.
אַלע פּראָוסידזשערז דורכגעקאָכט אין כייַע שטודיום זענען דורכגעקאָכט אין לויט מיט די קאַסטובאַ פאַקולטי פון מעדיסינע, מאַניפּאַל אינסטיטוט פון העכער בילדונג, מאַניפּאַל (IAEC/KMC/69/2020).אַלע כייַע יקספּעראַמאַנץ דיזיינד זענען געפירט אין לויט מיט די גיידליינז פון די קאַמיטי פֿאַר קאָנטראָל און השגחה פון כייַע עקספּערימענטאַטיאָן (CPCSEA).אַלע מחברים נאָכגיין די ArrIVE גיידליינז.
די FTIR ספּעקטראַ פון אַלע NFRCS זענען אַנאַלייזד און קאַמפּערד מיט די טשיטאָסאַן ספּעקטרום געוויזן אין פיגורע 2A.כאַראַקטעריסטיש ספּעקטראַל פּיקס פון טשיטאָסאַן (רעקאָרדעד) ביי 3437 סענטימעטער-1 (אָה און נה סטרעטשינג, אָוווערלאַפּ), 2945 און 2897 סענטימעטער-1 (טש סטרעטשינג), 1660 סענטימעטער-1 (נה2 שפּאַנונג), 1589 סענטימעטער-1 (נה און נה בענדינג), 1157 סענטימעטער-1 קנעכט (בריק אויסשטרעקן 6, 1 קמ-1) הידראָקסיל), 993 סענטימעטער-1 (אויסשטרעקן גלויבנס, באָ-טאַקע) 52.53.54.סופּפּלעמענטאַרי טאַבלע S1 ווייזט די FTIR NFRCS אַבזאָרפּשאַן ספּעקטרום וואַלועס פֿאַר טשיטאָסאַן (רעפּאָרטער), ריין טשיטאָסאַן, Cm, Ch און Cp.די FTIR ספּעקטראַ פון אַלע NFRCS (Cm, Ch און Cp) געוויזן די זעלבע כאַראַקטעריסטיש אַבזאָרפּשאַן באַנדס ווי ריין טשיטאָסאַן אָן קיין באַטייַטיק ענדערונגען (Fig. 2A).די FTIR רעזולטאַטן באשטעטיקט די פעלן פון כעמיש אָדער גשמיות ינטעראַקשאַנז צווישן די פּאָלימערס געניצט צו אַנטוויקלען די NFRCS, וואָס ינדיקייץ אַז די פּאָלימערס געניצט זענען ינערט.
אין וויטראָ כאַראַקטעריזיישאַן פון Cm NFRCS, Ch NFRCS, Cp NFRCS און Cs.(א) רעפּראַזענץ די קאַמביינד FTIR ספּעקטראַ פון די חיבורים פון טשיטאָסאַן און Cm NFRCS, Ch NFRCS און Cp NFRCS אונטער קאַמפּרעשאַן.(ב) אַ) גאַנץ בלוט אַפּטייק קורס פון NFRCS Cm, Ch, Cp, און Cg (n = 3);די Ct סאַמפּאַלז געוויזן אַ העכער BAR ווייַל די וואַטע ווישער האט אַ העכער אַבזאָרפּשאַן עפעקטיווקייַט;ב) בלוט נאָך בלוט אַבזאָרפּשאַן אילוסטראציע פון ​​די אַבזאָרבד מוסטער.גראַפיקאַל פאַרטרעטונג פון די BCT פון פּרובירן מוסטער C (Cp NFRCS האט דער בעסטער BCT (15 s, n = 3)). דאַטן אין C, D, E און G זענען געוויזן ווי דורכשניטלעך ± SD, און די טעות באַרס רעפּראַזענץ SD, ***p <0.0001. דאַטן אין C, D, E און G זענען געוויזן ווי דורכשניטלעך ± SD, און די טעות באַרס רעפּראַזענץ SD, ***p <0.0001. פּלאַננעד אין C, D, E און G פּלאַננעד פֿאַר ± סטאַנדאַרט אַפּערטונאַטיז, אַ פּלאַננעד פּלאַננעד פּאָרטפעל *** 0,0001. דאַטן אין C, D, E און G זענען דערלאנגט ווי דורכשניטלעך ± נאָרמאַל דיווייישאַן, און טעות באַרס רעפּראַזענץ נאָרמאַל דיווייישאַן, *** פּ <0.0001. C, D, E 和G 中的数据显示为平均值± SD,误差线代表SD,***p <0.0001. C, D, E 和G 中的数据显示为平均值± SD,误差线代表SD,***p <0.0001. אַנטלייַען אין C, D, E און G показаны как среднее значение ± стандартное отклонение, планки погрешностей представля*** פּ <0,0001. דאַטן אין C, D, E און G זענען געוויזן ווי דורכשניטלעך ± נאָרמאַל דיווייישאַן, טעות באַרס רעפּראַזענץ נאָרמאַל דיווייישאַן, *** פּ <0.0001.


פּאָסטן צייט: אויגוסט 13-2022