דאנק איר פֿאַר באזוכן Nature.com. דער בלעטערער ווערסיע איר נוצן האט לימיטעד שטיצן פֿאַר CSS. פֿאַר דער בעסטער דערפאַרונג, מיר רעקאָמענדירן אַז איר נוצן אַ דערהייַנטיקט בלעטערער (אָדער קער אַוועק קאַמפּאַטאַבילאַטי מאָדע אין Internet Explorer). אין דער דערווייל, צו ענשור פארבליבן שטיצן, מיר וועלן אַרויסווייַזן די פּלאַץ אָן סטיילז און דזשאַוואַסקריפּט.
פּאָרעז סילאַקאַ פּאַרטיקאַלז זענען צוגעגרייט דורך אַ סאָל-געל מעטאָד מיט עטלעכע מאָדיפיקאַטיאָנס צו קריגן מאַקראָפּאָראָוס פּאַרטיקאַלז. 1.8 מם שייַן) זענען פּאַקט דורך סלערי פּאַקינג. די טעאָרעטיש טעלער ציילן פון די פּעפּטייד געמיש איז ווי הויך ווי 280,000 פּלאַטעס / מ². קאַמפּערינג די צעשיידונג פאָרשטעלונג פון די דעוועלאָפּעד זייַל מיט די געשעפט Ascentis Express RP-Amide זייַל, עס איז באמערקט אַז די צעשיידונג פאָרשטעלונג פון די PMP זייַל איז העכער ווי די געשעפט זייַל אין טערמינען פון צעשיידונג עפעקטיווקייַט און האַכלאָטע.
אין די לעצטע יאָרן, די ביאָ-פאַרמאַסוטיקאַל אינדוסטריע איז געווארן אַ יקספּאַנדינג גלאבאלע מאַרק מיט אַ היפּש פאַרגרעסערן אין מאַרק טיילן. s און סעלז איז אַ גאָר טשאַלאַנדזשינג אַרבעט רעכט צו דער גרויס נומער פון פּאַטענטשאַלי דיטעקטאַבאַל מינים אין אַ איין מוסטער. כאָטש מאַסע ספּעקטראָמעטרי איז אַן עפעקטיוו געצייַג פֿאַר פּעפּטייד און פּראָטעין סיקוואַנסינג, אויב אַזאַ סאַמפּאַלז זענען ינדזשעקטיד אין די מאַסע ספּעקטראָמעטער אין איין פאָרן, די צעשיידונג וועט נישט זיין ידעאַל. אין אַ געגעבן צייט4,5,6.אין דערצו, בעשאַס פליסיק פאַסע צעשיידונג, אַנאַליטעס קענען זיין פאָוקיסט אין שמאָל מקומות, דערמיט קאַנסאַנטרייטינג די אַנאַליטעס און ימפּרוווינג MS דיטעקשאַן סענסיטיוויטי.
ריווערסט-פאַסע פליסיק קראָומאַטאַגראַפי (רפּ-לק) איז וויידלי געניצט פֿאַר רייניקונג און צעשיידונג פון פּעפּטייד מיקסטשערז ניצן אָקטאַדייל-מאַדאַפייד סיליקאַ (אָדס) ווי די סטיישאַנערי פאַסע11,12,13. צו פונאַנדערקלייַבן פּעפּטיידז און פּראָטעינס מיט פּאָליאַר און ניט-פּאָליאַר טיילן צו ינטעראַקט מיט און ריטיין די אַנאַליסיס. 9,20,21. געמישט מאָדע סטיישאַנערי פייזאַז (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, Polar Intercalation/RPLC) זענען פּאַסיק פֿאַר פּעפּטייד און פּראָטעין סעפּעריישאַנז רעכט צו דעם בייַזייַן פון ביידע פּאָליאַר און ניט-פּאָליאַר גרופּעס 22,23,24,25,26,27,28. פּאָליאַר און ניט-פּאָליאַר אַנאַליטעס, ווי צעשיידונג דעפּענדס אויף די ינטעראַקשאַן צווישן אַנאַליט און סטיישאַנערי פאַסע.מולטימאָדאַל ינטעראַקשאַנז 29, 30, 31, 32. לעצטנס, זשאַנג עט על.די פּאָליאַר ינטערקאַלאַטאָר האט ביידע פּאָליאַר און ניט-פּאָליאַר גרופּעס, אַזוי עס קענען זיין געוויינט צו צעטיילן פּעפּטיידז און פּראָטעינס וואָס האָבן ביידע כיידראָופאָביק און כיידראָופיליק קאָלומבעעדעס (למשל, כיידראָופאָביק און כיידראָופיליק קאָלומבעעדיעס). ) זענען קאמערשעל בנימצא אונטער די האַנדל נאָמען Ascentis Express RP-Amide שפאלטן, אָבער די שפאלטן זענען געניצט בלויז פֿאַר אַנאַליסיס פון אַמינע 33.
אין דעם קראַנט לערנען, אַ פּאָליאַר-עמבעדיד סטיישאַנערי פאַסע (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) איז געווען צוגעגרייט און עוואַלואַטעד פֿאַר די צעשיידונג פון פּעפּטיידז און טריפּסין דיידזשעסטץ פון HSA. די סטיישאַנערי פאַסע איז געווען צוגעגרייט מיט די פאלגענדע סטראַטעגיע. , וואַסער אַסעטיק זויער איז אַדזשאַסטיד צו צוגרייטן סיליקאַ פּאַרטיקאַלז מיט גרויס פּאָרע גרייס. צווייטנס, אַ נייַ ליגאַנד, פענילמאַלעימידע-מעטהיל וויניל יסאָסיאַנאַטע, איז געווען סינטיסייזד און געניצט צו דעריוואַטיזירן סיליקאַ פּאַרטיקאַלז צו צוגרייטן אַ פּאָליאַר עמבעדיד סטיישאַנערי פאַסע. מעטשאַניקאַל ווייבריישאַן צו ענשור אַ כאָומאַדזשיניאַס בעט איז געשאפן ין דער קאָלאָנע.עוואַלואַטע פּאַקט זייַל צעשיידונג פון פּעפּטייד מיקסטשערז קאַנסיסטינג פון פינף פּעפּטיידז;(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) און Trypsin digest of human serum albumin (HAS). און פּראָטעינס זענען באמערקט צו זיין געזונט ריזאַלווד און עפעקטיוו אויף די PMP זייַל, וואָס איז געווען מער עפעקטיוו ווי די Ascentis Express RP-Amide זייַל.
PEG (פּאַליעטאַלין גלייקאָל), ורעאַ, אַסעטיק זויער, טרימעטהאָקסי אָרטהאָסיליקאַטע (טמאָס), טרימעטהיל טשלאָראָסילאַנע (TMCS), טריפּסין, מענטש סערום אַלבומין (הסאַ), אַמאָוניאַם קלאָרייד, ורעאַ, העקסאַן מעטהילדיסילאַסאַנע (המדס), מעטהאַקרילאָיל קלאָרייד (מקק, הידראָקסילע, אַקסאַדאָו, סטירענע, 4-4, אַקסיד, סטירעלע, אַקסאַדאָוז, סטירעלע, אַקסיד, 4-4). טרילע (אַקן), מעטאַנאָל, 2-פּראָפּאַנאָל, און אַסאַטאָון פּערטשאַסט פֿון Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
א געמיש פון ורעאַ (8 ג), פּאַליעטאַלין גלייקאָל (8 ג), און 8 מל פון 0.01 ן אַסעטיק זויער איז סטערד פֿאַר 10 מינוט, און דעמאָלט 24 מל פון טמאָס איז צוגעגעבן צו דערין אונטער אייז-קאַלט טנאָים. ד בייַ 70 ° C פֿאַר 12 שעה. די דאַר ווייך מאַסע איז גלאַט ערד אין אַ ויוון און קאַלסיינד בייַ 550 ° C פֿאַר 12 שעה. דריי באַטשאַז זענען צוגעגרייט און קעראַקטערייזד צו ונטערזוכן רעפּראָדוסיביליטי אין פּאַרטאַקאַל גרייס, פּאָרע גרייס און ייבערפלאַך געגנט.
דורך ייבערפלאַך מאָדיפיקאַטיאָן פון סיליקאַ פּאַרטיקאַלז מיט פאַר-סינטאַסייזד ליגאַנד פענילמאַלעימידע-מעטהילוויניליסאָסיאַנאַטע (פּקמפּ) נאכגעגאנגען דורך ריידיאַל פּאַלימעראַזיישאַן מיט סטירענע, אַ פּאָליאַר גרופּע-מיט קאַמפּאַונד איז געווען צוגעגרייט.סטיישאַנערי פאַסע פֿאַר אַגראַגייץ און פּאַליסטיירין קייטן.דער צוגרייטונג פּראָצעס איז דיסקרייבד אונטן.
נ-פענילמאַלעימידע (200 מג) און מעטהיל וויינאַל יסאָסיאַנאַטע (100 מג) זענען צעלאָזן אין טרוקן טאָלוענע, און 0.1 מל פון 2,2'-אַזאָיסאָבוטיראָניטרילע (אַיבן) איז מוסיף צו די רעאַקציע קאָלבע צו צוגרייטן פענילמאַלעימידע-מעטהיל וויינאַל יסאָסיאַנאַטע קאָאָלימער פֿאַר 3 שעה, די פּאָלימער וויינאַל ייסאָסיאַנאַטע געמישט פֿאַר דריי און 3 שעה (ק פּאָלימער 30 שעה). ד אין אַ ויוון בייַ 40 ° C פֿאַר 3 שעה.
דאַר סילאַקאַ פּאַרטיקאַלז (2 ג) זענען דיספּערסט אין טרוקן טאָלוענע (100 מל), סטערד און סאָניקאַטעד אין אַ 500 מל קייַלעכיק דנאָ קאָלבע פֿאַר 10 מינוט. פּמקפּ (10 מג) איז צעלאָזן אין טאָלוענע און צוגעגעבן דראָפּווייז צו דער אָפּרוף קאָלבע דורך אַ דראַפּינג לייקע. °C פֿאַר 3 שעה. דערנאָך, פּמקפּ-באַנדיד סיליקאַ פּאַרטיקאַלז (100 ג) זענען צעלאָזן אין טאָלוענע (200 מל) און 4-כיידראָקסי-טעמפּאָ (2 מל) איז מוסיף אין דעם בייַזייַן פון 100 μל דיבוטילטין דילאַוראַטע ווי אַ קאַטאַליסט.
סטירענע (1 מל), בענזויל פּעראַקסייד בפּאָ (0.5 מל), און TEMPO-PMCP-אַטאַטשט סיליקאַ פּאַרטיקאַלז (1.5 ג) זענען דיספּערסט אין טאָלוענע און פּערדזשד מיט ניטראָגען. די פּאַלימעראַזיישאַן פון סטירענע איז געפירט אויס ביי 100 ° C פֿאַר 12 שעה.
די סאַמפּאַלז זענען דעגאַסעד בייַ 393 ק פֿאַר 1 שעה צו באַקומען אַ ריזידזשואַל דרוק פון ווייניקער ווי 10-3 טאָר. די סומע פון ​​נ 2 אַדסאָרבעד אין אַ קאָרעוו דרוק פון פּ / פּ 0 = 0.99 איז געניצט צו באַשטימען די גאַנץ פּאָרע באַנד. עד סיליקאַ פּאַרטיקאַלז) זענען געשטעלט אויף אַ אַלומינום זייַל ניצן קלעפּיק טשאַד טייפּ. גאָלד איז פּלייטאַד אויף די סאַמפּאַלז ניצן אַ Q150T ספּאַטער קאָוטער, און אַ 5 nm Au שיכטע איז געווען דאַפּאַזיטיד אויף די סאַמפּאַלז. אָרסעסטערשירע, וק) מאַסטערסייזער 2000 פּאַרטאַקאַל גרייס אַנאַליזער איז געניצט צו קריגן די פּאַרטאַקאַל גרייס פאַרשפּרייטונג. נאַקעט סיליקאַ פּאַרטיקאַלז און ליגאַנד-באַנדיד סיליקאַ פּאַרטיקאַלז (5 מג יעדער) זענען דיספּערסט אין 5 מל פון יסאָפּראָפּאַנאָל, סאָניקאַטעד פֿאַר 10 מינוט, וואָרטעקסעד פֿאַר 5 מינוט, און געשטעלט אויף די אָפּטיש פּערגראַוויזער באַנק פון אַ 5 מינוט פון די אָפּטיש פּערגראַוויזער באַנק. אַ טעמפּעראַטור קייט פון 30 צו 800 °C.
גלאז-ליינד ומבאַפלעקט שטאָל שמאָל-נודנע שפאלטן פון דימענשאַנז (100 × 1.8 מם שייַן) זענען פּאַקט מיט די סלערי פּאַקינג אופֿן, אַפּלייינג די זעלבע פּראָצעדור געניצט אין רעפערענסעס.31.א ומבאַפלעקט שטאָל זייַל (גלאז ליינד, 100 × 1.8 מם שייַן) מיט אַ ווענטיל פּאַסן מיט אַ 1 μm פריט איז פארבונדן צו אַ סלערי פּאַקער (Alltech Deerfield, IL, USA). פּלאָמבירן די זייַל סאַקווענטשאַלי דורך אַפּלייינג פּרעשערז פון 100 MP פֿאַר 10 מינוט, 80 MP פֿאַר 15 מינוט, און 60 MP פֿאַר 30 מינוט. די סלערי פּאַקינג אַפּאַראַט און פאַרבינדן אן אנדער פּאַסן צו די ינלעט און די LC סיסטעם צו קאָנטראָלירן די פאָרשטעלונג.
אַ LC פּאָמפּע (10AD Shimadzu, יאַפּאַן), ינדזשעקטער (Valco (USA) C14 W.05) מיט 50nL ינדזשעקשאַן שלייף, מעמבראַנע דעגאַססער (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS קאַפּאַלערי פֿענצטער איז קאַנסטראַקטאַד ספּעציעלע μLC מיטל דעטעקטאָר (UV-2075) און מינאַמייז די גלאז-ליינד ווירקונג פון די מיקראָנומען צו די עקסטרע-קאָלירן ווירקונג פון די גלאז. נאָך פּאַקקאַגינג, קאַפּאַלעריז (50 μם יד 365 און רידוסינג יוניאַן קאַפּאַלעריז (50 μם) זענען אינסטאַלירן אין די 1/16 ″ ווענטיל פון די רידוסינג פאַרבאַנד. דאַטן זאַמלונג און קראָומאַטאַגראַפיק פּראַסעסינג זענען דורכגעקאָכט מיט Multichro 2000 ווייכווארג. (נאָרטהאַמפּטאָן, מאַ).
אַלבומין פון מענטש סערום, ליאָפיליזעד פּודער, ≥ 96% (אַגאַראָסע געל עלעקטראָפאָרעסיס) 3 מג געמישט מיט טריפּסין (1.5 מג), 4.0 ם ורעאַ (1 מל), און 0.2 ם אַמאָוניאַם בייקאַרבאָנאַטע (1 מל). טפאַ.פילטער די לייזונג און קראָם אונטער 4 °C.
די צעשיידונג פון פּעפּטייד מיקסטשערז און HSA טריפּסין דיידזשעסטז זענען עוואַלואַטעד סעפּעראַטלי אויף פּמפּ שפאלטן.
SEM בילדער פון נאַקעט סיליקאַ פּאַרטיקאַלז און ליגאַנד-באַנדיד סיליקאַ פּאַרטיקאַלז זענען געוויזן אין FIG.סעם בילדער פון נאַקעט סיליקאַ פּאַרטיקאַלז (א, ב) ווייַזן אַז אין קאַנטראַסט צו אונדזער פריערדיקן שטודיום, די פּאַרטיקאַלז זענען ספעריש אין וואָס די פּאַרטיקאַלז זענען ילאָנגגייטאַד אָדער האָבן ירעגיאַלער סימעטריע.
סקאַנינג עלעקטראָן מיקראָסקאָפּ בילדער פון נאַקעט סיליקאַ פּאַרטיקאַלז (א, ב) און ליגאַנד-באַנדיד סיליקאַ פּאַרטיקאַלז (C, ד).
די פּאַרטאַקאַל גרייס דיסטריביושאַנז פון נאַקעט סיליקאַ פּאַרטיקאַלז און ליגאַנד-באַנדיד סיליקאַ פּאַרטיקאַלז זענען געוויזן אין פיגור 3(א). באַנד-באזירט פּאַרטאַקאַל גרייס פאַרשפּרייטונג קורוועס געוויזן אַז די גרייס פון די סיליקאַ פּאַרטיקאַלז געוואקסן נאָך כעמישער מאָדיפיקאַטיאָן (Fig. 3A). 3.36 μm, קאַמפּערד צו אונדזער פריערדיקן לערנען מיט אַד (0.5) ווערט פון 3.05 μm (פּאַלעסטירענע-געבונדן סיליקאַ פּאַרטיקאַלז) 34. דעם פּעקל האט אַ שמאָלער פּאַרטאַקאַל גרייס פאַרשפּרייטונג קאַמפּערד צו אונדזער פריערדיקן לערנען רעכט צו די וועריינג ריישיאָוז פון PEG, ורעאַ, TMOS, און פּ עסטעטיק זויער אין די רעאַקציע פון ​​די פּאַרטאַקאַל-געבונדן פאַסע פון ​​די פּאַרטאַקאַל געמיש. פאַסע מיר פריער געלערנט. דעם מיטל אַז ייבערפלאַך פאַנגקשאַנאַליזיישאַן פון סיליקאַ פּאַרטיקאַלז מיט סטירענע בלויז דאַפּאַזיטיד אַ פּאַליסטיירין שיכטע (0.97 μם) אויף די סיליקאַ ייבערפלאַך, כוועראַז אין די PMP פאַסע די שיכטע גרעב איז געווען 1.38 μם.
פּאַרטאַקאַל גרייס פאַרשפּרייטונג (א) און פּאָרע גרייס פאַרשפּרייטונג (ב) פון נאַקעט סיליקאַ פּאַרטיקאַלז און ליגאַנד-געבונדן סיליקאַ פּאַרטיקאַלז.
די פּאָרע גרייס, פּאָרע באַנד און ייבערפלאַך שטח פון די סיליקאַ פּאַרטיקאַלז פון די קראַנט לערנען זענען געגעבן אין טיש 1(ב). די פּסד פּראָופיילז פון נאַקעט סיליקאַ פּאַרטיקאַלז און ליגאַנד-בונדעד סיליקאַ פּאַרטיקאַלז זענען געוויזן אין פיגורע 3(ב). די רעזולטאַטן זענען פאַרגלייַכלעך צו אונדזער פריערדיקן לערנען. 69 נאָך כעמישער מאָדיפיקאַטיאָן, ווי געוויזן אין טאַבלע 1 (ב), און די ענדערונג פון די ויסבייג איז געוויזן אין Fig. 3 (ב). קענען 1 (ב), די ייבערפלאַך שטח (מ2 / ג) פון די סיליקאַ פּאַרטיקאַלז אויך דיקריסט פון 116 מ 2 / ג צו 105 מ 2 / ג נאָך כעמישער מאָדיפיקאַטיאָן.
די רעזולטאטן פון עלעמענטאַל אַנאַליסיס פון די סטיישאַנערי פאַסע זענען געוויזן אין טאַבלע 2. די טשאַד לאָודינג פון די קראַנט סטיישאַנערי פאַסע איז 6.35%, וואָס איז נידעריקער ווי די טשאַד לאָודינג פון אונדזער פריערדיקן לערנען (פּאַליסטירענע געבונדן סיליקאַ פּאַרטיקאַלז, ריספּעקטיוולי 7.93% 35 און 10.21%, ריספּעקטיוולי) 42. די ניטראָגען וואָג פּראָצענט פון די קראַנט סטיישאַנערי פאַסע איז 2.21%, קאַמפּערד צו 0.1735 און 0.85% דורך וואָג פון ניטראָגען אין פריערדיקע שטודיום, ריספּעקטיוולי. ס פון פּראָדוקטן (4) און (5) זענען ריספּעקטיוולי 2.7% און 2.9%, בשעת די טשאַד לאָודינג פון די לעצט פּראָדוקט (6) איז געווען 6.35%, ווי געוויזן אין טיש 2. די וואָג אָנווער איז אָפּגעשטעלט מיט PMP סטיישאַנערי פאַסע, און די TGA ויסבייג איז געוויזן אין פיגור 4. אָבער אויך N, O, און H.
די פענילמאלעימידע-מעטהילוויניליסיאנאטע ליגאנד איז אויסגעקליבן געווארן פאר אויבערפלאך מאדיפיקאציע פון ​​סיליקא פארטיילן ווייל עס האט פאלארע פענילמאלעימידע גרופעס און וויניליסיאנאטע גרופעס.וויניל יסאָסיאנאט גרופעס קענען ווייטער רעאגירן מיט סטירענע דורך לעבעדיקע ראדיקאלע פאלימעריזאציע. די פּאָליאַריטעט פון די סטיישאַנערי פאַסע קענען זיין קאַנטראָולד דורך די אָפּטימאַל סומע פון ​​​​סטירען און די אָפּרוף צייט פון פריי ראַדיקאַל פּאַלימעראַזיישאַן. ווערסאַ.ספּס צוגעגרייט מיט פאַרשידענע קאַנסאַנטריישאַנז פון סטירענע האָבן פאַרשידענע טשאַד לאָודינג. ווידער, לאָדן די סטיישאַנערי פייזאַז אין ומבאַפלעקט שטאָל שפאלטן און קאָנטראָלירן זייער טשראָמאַטאָגראַפיק פאָרשטעלונג (סעלעקטיוויטי, האַכלאָטע, ען ווערט, אאז"ו ו). באַזירט אויף די יקספּעראַמאַנץ, אַן אָפּטימיזעד פאָרמיוליישאַן איז אויסגעקליבן צו צוגרייטן די PMP סטיישאַנערי פאַסע צו ענשור קאַנטראָולד פּאָולעראַטי און גוט אַנאַליט ריטענשאַן.
פינף פּעפּטייד מיקסטשערז (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) זענען אויך עוואַלואַטעד ניצן אַ PMP זייַל ניצן אַ רירעוודיק פאַסע;60/40 (וו / וו) אַסעטאָניטרילע / וואַסער (0.1% טפאַ) אין אַ לויפן קורס פון 80 μ ל / מין. אונטער אָפּטימאַל ילושאַן טנאָים, די טעאָרעטיש טעלער נומער (ען) פּער זייַל (100 × 1.8 מם שייַן) איז 20,000 ± 100 (200,000 מ 2 ט ווערט פון די זייַל און 3 מ 2 ט מפּ ווערט). טשראָמאַטאָגראַמס זענען געוויזן אין פיגורע 5 אַ. שנעל אַנאַליסיס אויף אַ פּמפּ זייַל מיט הויך לויפן קורס (700 μ ל / מין), פינף פּעפּטיידז זענען ילוייטיד ין איין מינוט, ען וואַלועס זענען זייער גוט, 13,500 ± 330 פּער זייַל (100 × 1.8 מם שייַן), קאָראַספּאַנדז צו 0 פּלאַטעס, 05 מם, 0,5 סענטימעטער. (100 × 1.8 מם שייַן) זענען פּאַקט מיט דריי פאַרשידענע גורל פון PMP סטיישאַנערי פאַסע צו קאָנטראָלירן רעפּראָדוסיביליטי. די אַנאַליט קאַנסאַנטריישאַן פֿאַר יעדער זייַל איז רעקאָרדעד ניצן די אָפּטימאַל ילושאַן טנאָים און די נומער פון טעאָרעטיש פּלאַטעס N און ריטענשאַן צייט צו באַזונדער די זעלבע פּרובירן געמיש אויף יעדער זייַל. .
צעשיידונג פון פּעפּטייד געמיש אויף פּמפּ זייַל (ב) און אַסענטיס עקספּרעסס רפּ-אַמידע זייַל (א);רירעוודיק פאַסע 60/40 אַקן / ה 2 אָ (טפאַ 0.1%), פּמפּ זייַל דימענשאַנז (100 × 1.8 מם שייַן);אַנאַליטיקאַל די ילושאַן סדר פון די קאַמפּאַונדז: 1 (גלי-טיר), 2 (גלי-לעו-טיר), 3 (גלי-גלי-טיר-אַרג), 4 (טיר-ילע-גלי-סער-אַרג) און 5 (לעוסינע) זויער ענקעפאַלין)).
א PMP זייַל (100 × 1.8 מם שייַן) איז געווען עוואַלואַטעד פֿאַר צעשיידונג פון טריפּטיק דיידזשעסטץ פון מענטש סערום אַלבומין אין הויך פאָרשטעלונג פליסיק קראָומאַטאַגראַפי. די קראָומאַטאַגראַם אין פיגורע 6 ווייזט אַז דער מוסטער איז געזונט אפגעשיידט און די האַכלאָטע איז זייער גוט. ווי געוויזן אין די קראָומאַטאַגראַם (פיגורע 6), די HSA דיידזשעסטשאַן איז שפּאַלטן אין 17 פּיקס קאָראַספּאַנדינג צו 17 פּעפּטיידז. די צעשיידונג עפעקטיווקייַט פון יעדער שפּיץ אין די HSA דיידזשעסט איז קאַלקיאַלייטיד און די וואַלועס זענען געגעבן אין טאַבלע 5.
א טריפּטיק דיידזשעסטיד פון HSA (100 × 1.8 מם שייַן) איז געווען אפגעשיידט אויף אַ PMP זייַל;לויפן קורס (100 μל / מין), רירעוודיק פאַסע 60/40 אַסאַטאָוניטרילע / וואַסער מיט 0.1% טפאַ.
ווו L איז די זייַל לענג, η איז די וויסקאָסיטי פון די רירעוודיק פאַסע, ΔP איז די זייַל צוריק דרוק, און ו איז די לינעאַר גיכקייַט פון די רירעוודיק פאַסע. די לעדוירעס פון די PMP זייַל איז געווען 2.5 × 10-14 מ 2, די לויפן קורס איז געווען 25 μ ל / מין, און 60/40 וו / וו פּער 1 וואַסער זייַל איז געניצט 60/40 וו / וו פּער 1 וואַסער. איז געווען ענלעך צו אונדזער פריערדיקן לערנען רעפ.34.די לעדוירעס פון די זייַל פּאַקט מיט אויבנאויפיקער פּאָרעז פּאַרטיקאַלז איז: 1.7 × 10-15 פֿאַר 1.3 μם פּאַרטיקאַלז, 3.1 × 10-15 פֿאַר 1.7 μם פּאַרטיקאַלז, 5.2 × 10-15 און 102 ם פֿאַר 102 ם פֿאַר 102 ם. μm פּאַרטיקאַלז 43.דעריבער, די לעדוירעס פון די פּמפּ פאַסע איז ענלעך צו אַז פון 5 μם האַרץ-שאָל פּאַרטיקאַלז.
ווו Wx איז די וואָג פון די זייַל פּאַקט מיט טשלאָראָפאָרם, Wy איז די וואָג פון די זייַל פּאַקט מיט מעטאַנאָל, און ρ איז די געדיכטקייַט פון די סאַלוואַנט. דענסיטיעס פון מעטאַנאָל (ρ = 0.7866) און טשלאָראָפאָרם (ρ = 1.484). s 31 וואָס מיר פריער געלערנט זענען 0.63 און 0.55, ריספּעקטיוולי.דאס מיטל אַז די בייַזייַן פון ורעאַ ליגאַנדז ראַדוסאַז די לעדוירעס פון די סטיישאַנערי פאַסע. אויף די אנדערע האַנט, די גאַנץ פּאָראָסיטי פון די פּמפּ זייַל (100 × 1.8 מם שייַן) איז 0.60. די C18 ליגאַנדז זענען אַטאַטשט צו די סיליקאַ פּאַרטיקאַלז ווי לינעאַר קייטן, און אין די סטיישאַנערי פאַסעס פון פּאַליסטיירין, די א לעפיערעך דיק פּאָלימער שיכטע איז געשאפן אַרום אים.
פיגור 7A,B ווייַזן די PMP זייַל (100 × 1.8 מם שייַן) און Ascentis Express RP-Amide זייַל (100 × 1.8 מם שייַן) ניצן די זעלבע ילושאַן טנאָים (ד"ה 60/40 ACN / H2O און 0.1% TFA).) פון די וואן דעעמטער פלאץ.אויסגעקליבן פּעפּטייד מיקסטשערז (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) זענען צוגעגרייט אין 20 μL / די מינימום לויפן קורס פֿאַר ביידע שפאלטן איז 800 μL / min. איז עקספּרעסס רפּ-אַמידע זייַל זענען ריספּעקטיוולי 2.6 µm און 3.9 µm. צו אונדזער פריערדיקן לערנען. די העכער צעשיידונג עפעקטיווקייַט פון די פּמפּ זייַל (100 × 1.8 מם שייַן) קאַמפּערד צו די אַסענטיס עקספּרעסס רפּ-אַמידע זייַל איז באזירט אויף ימפּרווומאַנץ אין פּאַרטאַקאַל פאָרעם, גרייס און קאָמפּלעקס זייַל פּאַקינג פּראָוסידזשערז געניצט אין דעם קראַנט אַרבעט 34.
(א) וואַן דעעמטער פּלאַנעווען (העטפּ קעגן רירעוודיק פאַסע לינעאַר גיכקייַט) באקומען מיט אַ פּמפּ זייַל (100 × 1.8 מם שייַן) אין 60/40 אַקן / ה 2 אָ מיט 0.1% טפאַ. מיט 0.1% טפאַ.
א פּאָליאַר-עמבעדיד פּאַליסטיירין סטיישאַנערי פאַסע איז געווען צוגעגרייט און עוואַלואַטעד פֿאַר צעשיידונג פון סינטעטיש פּעפּטייד מיקסטשערז און טריפּסין דיידזשעסטץ פון מענטש סערום אַלבומין (HAS) אין הויך פאָרשטעלונג פליסיק קראָומאַטאַגראַפי. פּאַרטיקאַלז, קאַנטראָולד סינטעז פון די סטיישאַנערי פאַסע, און קאָמפּלעקס זייַל פּאַקינג. אין אַדישאַן צו הויך צעשיידונג עפעקטיווקייַט, נידעריק זייַל צוריק דרוק ביי הויך לויפן ראַטעס איז אן אנדער מייַלע פון ​​דעם סטיישאַנערי פאַסע. PMP שפאלטן ויסשטעלונג גוט רעפּראָדוסיביליטי און קענען ווערן געניצט פֿאַר די אַנאַליסיס פון פּעפּטייד מיקסטשערז און טריפּסין דיידזשעסטשאַן פון פאַרשידן פּראָטעינס. , PMP שפאלטן וועט אויך זיין עוואַלואַטעד פֿאַר די צעשיידונג פון פּראָטעינס און מאָנאָקלאָנאַל אַנטיבאָדיעס.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. פאָרשונג אויף פּעפּטייד סעפּאַראַטיאָן סיסטעמען דורך ריווערסט פאַסע טשראָמאַטאָגראַפי טייל איך: אַנטוויקלונג פון אַ זייַל טשאַראַקטעריזאַטיאָן פּראָטאָקאָל.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. עט על. ימפּראָוועד אַקטיוו פּעפּטיידז דיזיינד פֿאַר די באַהאַנדלונג פון ינפעקטיאָוס חולאתן. ביאָטעטשנאָלאָגי.אַוואַנסעד.36 (2), 415-429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. סינטעטיש טעראַפּיוטיק פּעפּטיידז: וויסנשאַפֿט און די מאַרקעט.דרוג אַנטדעקן.15 (1-2) הייַנט, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.09 (120.09).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261, 78-90 (2012).
Liu, W. עט על.אַוואַנסירטע פליסיק קראָומאַטאַגראַפי-מאַסע ספּעקטראָמעטרי ינייבאַלז די ינקאָרפּעריישאַן פון ברייט טאַרגעטעד מאַטאַבאַליזאַם און פּראָטעאָמיקס.
Chesnut, SM & Salisbury, JJ די ראָלע פון ​​UHPLC אין מעדיצין אַנטוויקלונג.Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM פונדאַמענטאַל און פּראַקטיש אַספּעקץ פון ולטראַהיגה דרוק פליסיק קראָומאַטאַגראַפי פֿאַר גיך סעפּעריישאַנז.סעפטעמבער Sci.30 (8), 1167-1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. אַפּפּליקאַטיאָן פון הינטער-הויך פאָרשטעלונג פליסיק קראָומאַטאַגראַפי אין מעדיצין אַנטוויקלונג.Chromatography.1119 (1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
גו, ה, עט על.מאָנאָליטהיק מאַקראָפּאָראָוס הידראָגעלס צוגעגרייט פון ייל-אין-וואַסער הויך ינערלעך פאַסע עמולסיאָנס פֿאַר עפעקטיוו רייניקונג פון ענטעראָווירוס.טשעמיקאַל.בריטאַן.דזש.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA די ראָלע פון ​​פליסיק קראָומאַטאַגראַפי אין פּראָטעאָמיקס.דזש.Chromatography.A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. ימערדזשינג טרענדס אין ריווערסט-פאַסע פליסיק קראָומאַטאַגראַפי סעפּעריישאַנז פון טעראַפּיוטיק פּעפּטיידז און פּראָטעינס: טעאָריע און אַפּלאַקיישאַנז.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC.סעפטעמבער ססי.28 (14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. די מאַסע אַריבערפירן קעראַקטעריסטיקס און קינעטיק פאָרשטעלונג פון הויך-עפעקטיווקייַט טשראָמאַטאָגראַפיק שפאלטן פּאַקט מיט C18 סאַב-2 μם גאָר און סופּערפישאַלי פּאָרעז פּאַרטיקאַלז זענען ינוועסטאַגייטאַד.סעפטעמבער ססי.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. לעצטע טרענדס און אַנאַליטיקאַל טשאַלאַנדזשיז אין די אפגעזונדערטקייט, לעגיטימאַציע און וואַלאַדיישאַן פון פאַבריק ביאָאַקטיווע פּעפּטיידז.anus.biological anus.Chemical.410 (15), 3425-3444.
Mueller, JB עט על.די פּראָטעאָמיק לאַנדשאַפט פון די מלכות פון לעבן. נאַטור 582 (7813), 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
דעלוקאַ, סי עט על. דאַונסטרים פּראַסעסינג פון טעראַפּיוטיק פּעפּטיידז דורך פּריפּעראַטיוו פליסיק קראָומאַטאַגראַפי. מאָלעקולע (באַסעל, שווייץ) 26 (15), 4688 (2021).
יאַנג, י & גענג, X. געמישט-מאָדע קראָומאַטאַגראַפי און זייַן אַפּלאַקיישאַן צו ביאָפּאָלימערס.דזש.Chromatography.A 1218 (49), 8813-8825 (2011).
דזשאַו, דזשי, דאָנג, X.-Y. & Sun, Y. ליגאַנדז פֿאַר געמישט-מאָדע פּראָטעין קראָומאַטאַגראַפי: פּרינציפּ, כאַראַקטעריזיישאַן, און פּלאַן.דזש.Biotechnology.144 (1), 3-11 (2009).