א דאנק פארן באזוכן Nature.com. איר ניצט א בראַוזער ווערסיע מיט באגרענעצטע CSS שטיצע. פאר דער בעסטער דערפאַרונג, רעקאָמענדירן מיר אז איר זאָלט ניצן אן אפדעיטירטן בראַוזער (אָדער אויסלעשן קאָמפּאַטיביליטי מאָדע אין אינטערנעט עקספּלאָרער). דערצו, צו זיכער מאַכן אָנגייענדיקע שטיצע, ווייַזן מיר דעם וועבזייטל אָן סטילן און דזשאַוואַסקריפּט.
ווײַזט אַ קאַרוסעל פֿון דרײַ סליידס אויף איין מאָל. ניצט די "פֿריִערדיקע" און "ווײַטער" קנעפּלעך צו גיין דורך דרײַ סליידס אויף איין מאָל, אָדער ניצט די "סליידער" קנעפּלעך אין סוף צו גיין דורך דרײַ סליידס אויף איין מאָל.
פּאָרעזע סיליקאַ פּאַרטיקלען זענען צוגעגרייט געוואָרן דורך דער סאָל-געל מעטאָדע מיט עטלעכע מאָדיפיקאַציעס צו באַקומען ברייט-פּאָרע פּאַרטיקלען. די פּאַרטיקלען זענען דעריוואַטיזירט געוואָרן מיט N-פֿענילמאַלעאימיד-מעטהילוויניל איזאָסיאַנאַט (PMI) און סטירען דורך ריווערס קייט טראַנספֿער-פֿראַגמענטאַציע (RAFT) פּאָלימעריזאַציע צו פּראָדוצירן N-פֿענילמאַלעאימיד אינטערקאַלייטיד פּאָליאַמידעס. סטירען (PMP) סטאַציאָנערע פֿאַזע. שמאָלע באָר ומבאַפלעקט שטאָל קאָלומס (100 × 1.8 מם ינער דיאַמעטער) זענען פּאַקט מיט אַ סלאַרי פּאַקינג. די כראָמאַטאָגראַפֿיש פאָרשטעלונג פון דער PMP קאָלום איז עוואַלואַטעד צו צעשיידן אַ געמיש פון סינטעטישע פּעפּטיידן באַשטייענדיק פון פינף פּעפּטיידן (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu אַמינאָ זויער ענקעפאַלין) און טריפּטיק הידראָליזאַט פון מענטשלעך סערום אַלבומין (HAS). אונטער אָפּטימאַלע עלוטיאָן באדינגונגען, די טעאָרעטישע נומער פון פּלאַטעס מיט אַ געמיש פון פּעפּטיידן ריטשט 280,000 פּלאַטעס/סק.מ. פארגלייכנדיק די צעשיידונג-פארשטעלונג פון דער אנטוויקלטער קאלום מיט דער קאמערציעלער אסענטיס עקספּרעסס RP-אמיד קאלום, איז באמערקט געווארן אז די צעשיידונג-עפעקטיווקייט פון דער PMP קאלום איז געווען העכער ווי דער קאמערציעלער קאלום אין טערמינען פון צעשיידונג-עפעקטיווקייט און רעזאלוציע.
די ביאָפאַרמאַסוטיקאַל אינדוסטריע איז געוואָרן אַן עקספּאַנדירנדיקער גלאָבאַלער מאַרק מיט אַ באַדייטנדיקער פאַרגרעסערונג אין מאַרק טייל אין די לעצטע יאָרן. מיטן עקספּלאָזיוון וואוקס פון דער ביאָפאַרמאַסוטיקאַל אינדוסטריע1,2,3 איז דאָ אַ גרויסער נויט פֿאַר פּעפּטיד און פּראָטעין אַנאַליז. אין דערצו צו דעם ציל פּעפּטיד, ווערן פאַרשידענע אומריינקייטן געשאפן בעת ​​פּעפּטיד סינטעז, אַזוי כראָמאַטאָגראַפֿישע רייניקונג איז נויטיק צו באַקומען די געוואונטשענע ריינקייט פון דעם פּעפּטיד. די אַנאַליז און כאַראַקטעריזאַציע פון ​​פּראָטעאינען אין גוף פלוידס, געוועבן און צעלן איז אַן עקסטרעם טשאַלאַנדזשינג אַרבעט רעכט צו דער גרויסער צאָל פון פּאָטענציעל דעטעקטאַבאַל מינים פאָרשטעלן אין אַן איינציק מוסטער. כאָטש מאַסע ספּעקטראָמעטרי איז אַן עפעקטיוו געצייַג פֿאַר סיקוואַנסינג פּעפּטיידז און פּראָטעאינען, אויב אַזאַ מוסטערן ווערן גלייך ינטראָודוסט אין דעם מאַסע ספּעקטראָמעטער, וועט די צעשיידונג זיין נישט צופֿרידנשטעלנד. דעם פּראָבלעם קען זיין סאַלווד דורך דורכפירן פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע (LC) איידער MS אַנאַליז, וואָס וועט רעדוצירן די סומע פון ​​​​אַנאַלייץ וואָס אַרייַן די מאַסע ספּעקטראָמעטער אין אַ געגעבענער צייט4,5,6. אין דערצו, קענען אַנאַלייץ קאָנצענטרירן אין אַ שמאָל געגנט בעת ​​פליסיק פאַסע צעשיידונג, דערמיט קאָנצענטרירן די אַנאַלייץ און פאַרגרעסערן די סענסיטיוויטי פון MS דעטעקציע. פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע (LC) האָט זיך באַדייטנד פֿאָרויסגעגאַנגען אין די לעצטע יאָרצענדלינג און איז געוואָרן אַ ברייט גענוצטע מעטאָדע פֿאַר פּראָטעאָמישע אַנאַליז 7,8,9,10.
ריווערס-פאזע פליסיג כראמאטאגראפיע (RP-LC) ווערט ברייט גענוצט צו רייניקן און אפשיידן געמישן פון פעפטיידן ניצנדיק אקטאדעציל-מאדיפיצירטע סיליקא (ODS) אלס די סטאציאנערע פאזע11,12,13. אבער, צוליב זייער קאמפליצירטער סטרוקטור און אמפאטערישע נאטור,14,15 קענען RP סטאציאנערע פאזעס נישט צושטעלן א צופרידנשטעלנדיקע אפשיידונג פון פעפטיידן און פראטעאינען. דעריבער, די אנאליז פון פעפטיידן און פראטעאינען מיט פאלארע און נישט-פאלארע פראגמענטן פארלאנגט ספעציעל דיזיינטע סטאציאנערע פאזעס צו אינטעראקטירן און האלטן די אנאליטן16. געמישטע כראמאטאגראפיע, וואס אפערט מולטימאדאלע אינטעראקציעס, קען זיין אן אלטערנאטיוו צו RP-LC פארן אפשיידן פעפטיידן, פראטעאינען, און אנדערע קאמפליצירטע געמישן. עטליכע געמישט-טיפ סטאציאנערע פאזעס זענען צוגעגרייט געווארן און קאלום'ס אנגעפילט מיט די סטאציאנערע פאזעס זענען גענוצט געווארן צו אפשיידן פעפטיידן און פראטעאינען17,18,19,20,21. צוליב דעם אנוועזנהייט פון פּאָליאַרע און נישט-פּאָלאַרע גרופּעס, זענען געמישטע מאָד סטאַציאָנערע פאַזעס (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, פּאָליאַרע אינטערקאַלאַציע/RPLC) פּאַסיק פֿאַר דער צעשיידונג פון פּעפּטיידן און פּראָטעאינען 22,23,24,25,26,27,28. , פּאָליאַרע אינטערקאַלירטע סטאַציאָנערע פאַזעס מיט קאָוואַלענטלי געבונדענע פּאָליאַרע גרופּעס ווייַזן גוטע צעשיידונג קייפּאַבילאַטיז און יינציק סעלעקטיוויטי פֿאַר פּאָליאַרע און נישט-פּאָלאַרע אַנאַליטן ווייַל צעשיידונג דעפּענדס אויף דער ינטעראַקציע צווישן דעם אַנאַליט און דער סטאַציאָנערע פאַזע מולטימאָדאַל ינטעראַקשאַנז 29,30,31,32. לעצטנס, זשאַנג עט על. 30 באַקומען בעהעניל-טערמינירטע סטאַציאָנערע פאַזעס פון פּאָליאַמינען און הצלחה צעשיידט כיידראָקאַרבאַנז, אַנטידעפּרעסאַנץ, פלאַוואָנאָידן, נוקלעאָסידעס, עסטראָגענס, און עטלעכע אנדערע אַנאַליטן. די פּאָליאַר עמבעדיד סטאַציאָנערע מאַטעריאַל האט ביידע פּאָליאַרע און נישט-פּאָלאַרע גרופּעס, אַזוי עס קען זיין געניצט צו צעשיידן פּעפּטיידן און פּראָטעאינען אין הידראָפאָבישע און הידראָפילישע טיילן. פּאָליאַרע אינליין קאָלומס (למשל, C18 קאָלומס מיט אַמיד אינליין) זענען בנימצא אונטערן האַנדל נאָמען Ascentis Express RP-Amide קאָלומס, אָבער די קאָלומס זענען בלויז געניצט געוואָרן פֿאַר דער אַנאַליז פון אַמין 33.
אין דער איצטיקער שטודיע, איז א פּאָלאַרע איינגעבעטענע סטאַציאָנערע פאַזע (N-פֿענילמאַלעאימיד, איינגעבעטענע פּאָליסטירען) צוגעגרייט און עוואַלויִרט געוואָרן פֿאַר פּעפּטיד צעשיידונג און טריפּטיש HSA שפּאַלטונג. די פֿאָלגנדיקע סטראַטעגיע איז גענוצט געוואָרן צו צוגרייטן די סטאַציאָנערע פאַזע. פּאָרעזע סיליקאַ פּאַרטיקלען זענען צוגעגרייט געוואָרן לויט די פּראָצעדורן באַשריבן אין אונדזערע פֿריִערדיקע פּובליקאַציעס, מיט עטלעכע ענדערונגען אין צוגרייטונג סכעמעס 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. די פּראָפּאָרציעס פֿון אורעאַ, פּאָליעטילען גליקאָל (PEG), TMOS און וואַסעריק-עסיק זויער זענען אַדזשאַסטיד געוואָרן צו באַקומען סיליקאַ פּאַרטיקלען מיט גרויסע פּאָרע גרייסן. צווייטנס, איז אַ נייַ פֿענילמאַלעאימיד-מעטהילוויניל איזאָסיאַנאַט ליגאַנד סינטעזירט געוואָרן און זיינע דעריוואַטיזירטע סיליקאַ פּאַרטיקלען זענען גענוצט געוואָרן צו צוגרייטן פּאָלאַרע איינגעבעטענע סטאַציאָנערע פֿאַזעס. די באַקומענע סטאַציאָנערע פאַזע איז פּאַקט געוואָרן אין אַ ומבאַפלעקט שטאָל קאָלום (אינעווייניקסטער דיאַמעטער 100 × 1.8 מם) לויט אַן אָפּטימיזירטער פּאַקינג סכעמע. די פּאַקינג פֿון דער קאָלום ווערט געהאָלפֿן דורך מעכאַנישע ווייבריישאַן צו ענשור אַ מונדיר שיכט אין דער קאָלום. די פּאַקטע קאָלום איז געוואָרן עוואַלויִרט פֿאַר צעשיידונג פֿון אַ געמיש פֿון פּעפּטיידן באַשטייענדיק פֿון פֿינף פּעפּטיידן (גלי-טיר, גלי-לעו-טיר, גלי-גלי-טיר-אַרג, טיר-אילע-גלי-סער-אַרג, לעוסין-ענקעפֿאַלין פּעפּטייד). און טריפּטיש הידראָליזאַטן פֿון מענטשלעכן סערום אַלבומין (HSA). מען האָט באַאָבאַכטעט אַז די פּעפּטייד געמיש און די HSA טריפּטיש דיידזשעסט האָבן זיך געשיידט מיט גוטער רעזאָלוציע און עפֿעקטיווקייט. די צעשיידונג עפֿעקטיווקייט פֿון דער PMP קאָלום איז געוואָרן פֿאַרגליכן מיט יענע פֿון דער אַסענטיס עקספּרעס RP-אַמיד קאָלום. מען האָט באַאָבאַכטעט אַז פּעפּטיידן און פּראָטעאינען האָבן גוטע רעזאָלוציע און הויכע צעשיידונג עפֿעקטיווקייט אויף דער PMP קאָלום, און די צעשיידונג עפֿעקטיווקייט פֿון דער PMP קאָלום איז העכער ווי יענע פֿון דער אַסענטיס עקספּרעס RP-אַמיד קאָלום.
PEG (פּאָליעטילען גליקאָל), אורעאַ, עסיק זויער, טרימעטהאָקסיאָרטאָסיליקאַט (TMOS), טרימעטהילכלאָראָסילאַן (TMCS), טריפּסין, מענטשלעכע סערום אַלבומין (HSA), אַמאָוניום קלאָריד, אורעאַ, העקסאַמעטהילמעטהאַקרילאָילדיסילאַזאַן (HMDS), מעטהאַקרילאָיל קלאָריד (MC), סטירענע, 4-הידראָקסי-TEMPO, בענזאָיל פּעראָקסייד (BPO), אַצעטאָניטריל (ACN) פֿאַר HPLC, מעטאַנאָל, 2-פּראָפּאַנאָל און אַצעטאָן. סיגמאַ-אַלדריטש קאָמפּאַני (סעינט לואיס, מיזורי, USA).
א געמיש פון אורעאַ (8 ג), פּאָליעטילען גליקאָל (8 ג) און 8 מל פון 0.01 N עסיק זויער איז געוואָרן גערודערט פֿאַר 10 מינוט, און 24 מל פון TMOS איז צוגעגעבן געוואָרן אונטער אייז-קילונג. די רעאַקציע געמיש איז געוואָרן געהייצט ביי 40°C פֿאַר 6 שעה און דערנאָך ביי 120°C פֿאַר 8 שעה אין אַ ומבאַפלעקט שטאָל אויטאָקלאַוו. דאָס וואַסער איז געוואָרן דעקאַנטירט און די רעשט איז געוואָרן געטריקנט ביי 70°C פֿאַר 12 שעה. די געטריקנטע ווייכע בלאָקן זענען גלאַט צעמאָלן און קאַלסינירט אין אַן אויוון ביי 550°C פֿאַר 12 שעה. דריי באַטשעס זענען צוגעגרייט און כאַראַקטעריזירט געוואָרן צו פּרובירן די רעפּראָדוצירבאַרקייט פון פּאַרטיקל גרייסן, פּאָר גרייס און ייבערפלאַך שטח.
פּאָלאַרע גרופּע און סטאַציאָנערע פאַזע פֿאַר פּאָליסטירין קייטן. די צוגרייטונג פּראָצעדור איז באַשריבן אונטן.
N-פֿענילמאַלעימיד (200 מג) און מעטיל וויניל איזאָסיאַנייט (100 מג) זענען אויפֿגעלייזט געוואָרן אין וואַסערפֿרײַעם טאָלוען, און דערנאָך איז 0.1 מל פֿון 2,2′-אַזאָיסאָבוטיראָניטריל (AIBN) צוגעגעבן געוואָרן צום רעאַקציע־פֿלעש צו באַקומען אַ קאָפּאָלימער פֿון פֿענילמאַלעימיד און מעטיל וויניל איזאָסיאַנייט (PMCP). ) די געמיש איז געהייצט געוואָרן בײַ 60°C פֿאַר 3 שעה, פֿילטרירט און געטריקנט אין אַן אויוון בײַ 40°C פֿאַר 3 שעה.
געטריקנטע סיליקאַ פּאַרטיקלען (2 ג) זענען צעשפּרייט געוואָרן אין טרוקענעם טאָלוען (100 מל), גערודערט און סאָניקירט פֿאַר 10 מינוט אין אַ 500 מל קייַלעכדיקן באָדן פלאַש. PMCP (10 מג) איז אויפגעלייזט געוואָרן אין טאָלוען און צוגעגעבן טראָפּנסווייז צו דער רעאַקציע פלאַש דורך אַן אַדישאַן טריכטער. די געמיש איז געקאָכט געוואָרן אין רעפלוקס ביי 100°C פֿאַר 8 שעה, פֿילטרירט, געוואַשן מיט אַצעטאָן און געטריקנט ביי 60°C פֿאַר 3 שעה. דערנאָך, די סיליקאַ פּאַרטיקלען פֿאַרבונדן מיט PMCP (100 ג) זענען אויפגעלייזט געוואָרן אין טאָלוען (200 מל), און 4-הידראָקסי-טעמפּאָ (2 מל) איז צוגעגעבן געוואָרן אין דער אנוועזנהייט פון 100 μl פון דיבוטילטין דילאַוראַט ווי אַ קאַטאַליסט. די געמיש איז גערודערט געוואָרן ביי 50°C פֿאַר 8 שעה, פֿילטרירט און געטריקנט ביי 50°C פֿאַר 3 שעה.
סטירען (1 מל), בענזאָיל פּעראָקסייד BPO (0.5 מל) און סיליקאַ פּאַרטיקלען אַטאַטשט צו TEMPO-PMCP (1.5 ג) זענען דיספּערסט געוואָרן אין טאָלוען און אויסגערייניקט מיט שטיקשטאָף. די פּאָלימעריזאַציע פון ​​סטירען איז דורכגעפירט געוואָרן ביי 100°C פֿאַר 12 שעה. דער רעזולטאַט פּראָדוקט איז געוואַשן געוואָרן מיט מעטאַנאָל און געטריקנט איבער נאַכט ביי 60°C. די אַלגעמיינע סכעמע פון ​​דער רעאַקציע ווערט געוויזן אין פיגור איינס.
די מוסטערן זענען דעגאזירט געווארן ביי 393 ק פאר 1 שעה ביז א רעזידועל דרוק פון ווייניגער ווי 10–3 טאר איז באקומען געווארן. די צאל N2 אדסארבירט ביי רעלאטיוון דרוק P/P0 = 0.99 איז גענוצט געווארן צו באשטימען דעם גאנצן פארע וואליום. די מארפאלאגיע פון ​​ריינע און ליגאנד-געבונדענע סיליקא פארטיקלען איז געפארשט געווארן מיט א סקענירן עלעקטראן מיקראסקאפ (היטאטשי הויך טעכנאלאגיעס, טאקיא, יאפאן). טרוקענע מוסטערן (ריינע סיליקא און ליגאנד-געבונדענע סיליקא פארטיקלען) זענען געשטעלט געווארן אויף אלומיניום שטאנגען מיט קארבאן טייפ. גאלד איז אפגעלייגט געווארן אויף דעם מוסטער מיט א Q150T שפריצעריי אפאראט, און א 5 נ"מ דיקע Au שיכט איז אפגעלייגט געווארן אויף דעם מוסטער. דאס פארבעסערט די עפעקטיווקייט פון דעם נידריג וואלטאזש פראצעס און גיט פיינע קאלטע שפריצן. עלעמענטארע אנאליז איז דורכגעפירט געווארן מיט א טערמא עלעקטראן (וואלטהאם, מאסאטשוסעטס, יו.עס.עי.) פלעש EA1112 עלעמענטארע קאמפאזיציע אנאליזירער. א מאלווערן פארטיקל גרייס אנאליזירער (ווארקעסטערשיר, פאראייניגטע קעניגרייך) מאסטערסייזער 2000 איז גענוצט געווארן צו באקומען די פארטיקל גרייס פארטיילונג. נישט-באדעקטע סיליקאַ פּאַרטיקלען און ליגאַנד-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען (5 מג יעדער) זענען דיספּערסט געוואָרן אין 5 מל פון יסאָפּראָפּאַנאָל, סאָניקירט פֿאַר 10 מינוט, אַדזשיטירט פֿאַר 5 מינוט, און געשטעלט אויף אַ מאַסטערסייזער אָפּטישער באַנק. טערמאָגראַווימעטרישע אַנאַליז איז דורכגעפירט מיט אַ קורס פון 5 °C פּער מינוט אין די טעמפּעראַטור קייט פון 30 צו 800 °C.
גלאז פיברע באדעקטע שמאָלע באָר ומבאַפלעקט שטאָל זיילן מיט דימענסיעס (אינדוסטריע 100 × 1.8 מם) זענען פּאַקט געוואָרן דורך דעם סלערי פילונג מעטאָד נאָכפאָלגנדיק די זעלבע פּראָצעדור ווי אין רעפֿערענץ 31. ומבאַפלעקט שטאָל זייל (גלאז באדעקט, אינדוסטריע 100 × 1.8 מם) און אַן אַרויסגאַנג מיט אַ 1 מיקראָמעטער פריט איז געווען פארבונדן צו אַ סלערי פּאַקקאַגינג מאַשין (אַלטעק דירפֿילד, אילינאָי, USA). צוגרייטן אַ סאַספּענשאַן פון דער סטאַציאָנעריער פאַזע דורך סאַספּענדינג 150 מג פון דער סטאַציאָנעריער פאַזע אין 1.2 מל פון מעטאַנאָל און פיטער עס אין אַ רעזערוואַר זייל. מעטאַנאָל איז געניצט ווי דער סלערי סאָלוואַנט און קאָנטראָל סאָלוואַנט. פּאַק די זייל דורך אַפּלייינג אַ דרוק סיקוואַנס פון 100 MP פֿאַר 10 מינוט, 80 MP פֿאַר 15 מינוט, און 60 MP פֿאַר 30 מינוט. דער פּאַקינג פּראָצעס געניצט צוויי גאַז כראָמאַטאָגראַפֿיע זייל ווייברייטערז (אַלטעק, דירפֿילד, אילינאָי, USA) פֿאַר מעכאַנישע ווייבריישאַן צו ענשור מונדיר זייל פּאַקינג. פאַרמאַכן די סלערי פּאַקער און מעלדונג דרוק פּאַמעלעך צו פאַרמייַדן שעדיקן צו די שטריקל. די זייל איז געוואָרן אָפּגעטיילט פֿון דער שלאַמיגער נאָזל און אַן אַנדער פֿיטינג איז געוואָרן אַטאַטשט צום אַרײַנגאַנג און פֿאַרבונדן צום LC סיסטעם צו פּרובירן איר אָפּעראַציע.
א ספעציעל געבויטע MLC איז געווארן קאנסטרואירט מיט א LC פאמפע (10AD Shimadzu, יאפאן), א סעמפּלער מיט א 50 nL אינדזשעקציע שלייף (Valco (USA) C14 W.05), א מעמבראן דעגאסער (Shimadzu DGU-14A), און א UV-VIS קאפילאר פענצטער. דעטעקטאר אפאראט (UV-2075) און עמעלירטע מיקראקאלאם. ניצט זייער שמאלע און קורצע פארבינדונג רערן צו מינימיזירן דעם עפעקט פון צוגעלייגטע קאלום אויסברייטונג. נאכן אנפילן די קאלום, אינסטאלירט א קאפילאר (50 µm id 365) ביים ארויסגאנג פון די 1/16″ רעדוצירנדיקע דזשאנקשאן און אינסטאלירט א קאפילאר (50 µm) פון די רעדוצירנדיקע דזשאנקשאן. דאטן זאמלונג און כראמאטאגראם באארבעטונג ווערן דורכגעפירט מיט די Multichro 2000 ווייכווארג. ביי 254 נם, איז די UV אבזארבאנץ פון די סוביעקטן אנאליטן מאניטארירט געווארן ביי 0. כראמאטאגראפישע דאטן זענען אנאליזירט געווארן מיט OriginPro8 (נארטהאמפטאן, מאסאטשוסעטס).
מענטשלעכע סערום אַלבומין, ליאָפיליזירטע פּודער, ≥ 96% (אַגאַראָזע געל עלעקטראָפאָרעזיס) 3 מג געמישט מיט טריפּסין (1.5 מג), 4.0 M אורעאַ (1 מל) און 0.2 M אַמאָוניום ביקאַרבאָנאַט (1 מל). די לייזונג איז געווען גערודערט פֿאַר 10 מינוט און געהאלטן אין אַ וואַסער וואַנע ביי 37°C פֿאַר 6 שעה, דערנאָך געקאָכט מיט 1 מל פון 0.1% TFA. פילטער די לייזונג און לאַגערן אונטער 4°C.
די צעשיידונג פון א געמיש פון פּעפּטיידן און טריפּטישן דיידזשעסט HSA אויף א PMP קאָלום איז באַזונדער עוואַלויִרט געוואָרן. קאָנטראָלירט די טריפּטישע הידראָליז פון א געמיש פון פּעפּטיידן און HSA אפגעשיידט דורך א PMP קאָלום און פאַרגלייכט די רעזולטאַטן מיט אן Ascentis Express RP-Amide קאָלום. די צאָל טעאָרעטישע פּלאַטעס ווערט קאַלקולירט מיט דער פאלגענדער גלייכונג:
SEM בילדער פון ריינע סיליקאַ פּאַרטיקלען און ליגאַנד געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען ווערן געוויזן אין פיגור 2. SEM בילדער פון ריינע סיליקאַ פּאַרטיקלען (A, B) ווייַזן אַ ספערישע פאָרעם אין וועלכער די פּאַרטיקלען זענען פֿאַרלענגערט אָדער האָבן ירעגולערע סימעטריע קאַמפּערד צו אונדזער פריערדיקע שטודיעס. די ייבערפלאַך פון די סיליקאַ פּאַרטיקלען געבונדן דורך די ליגאַנד (C, D) איז גלאַטער ווי די פון ריינע סיליקאַ פּאַרטיקלען, וואָס קען זיין רעכט צו די פּאָליסטירענע קייטן וואָס דעקן די ייבערפלאַך פון די סיליקאַ פּאַרטיקלען.
סקענירנדיקע עלעקטראָן מיקראָגראַפֿן פֿון ריינע סיליקאַ פּאַרטיקלען (A, B) און ליגאַנד געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען (C, D).
די פּאַרטיקל גרייס פאַרשפּרייטונג פון ריין סיליקאַ פּאַרטיקאַלז און ליגאַנד-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקאַלז איז געוויזן אין פיג. 2.3(A). וואָלומעטרישע פּאַרטיקל גרייס פאַרשפּרייטונג קורוועס האָבן געוויזן אַז די סיליקאַ פּאַרטיקל גרייס איז געוואַקסן נאָך כעמישער מאָדיפיקאַציע (פיג. 3A). די סיליקאַ פּאַרטיקל גרייס פאַרשפּרייטונג דאַטן פון דער איצטיקער שטודיע און דער פריערדיקער שטודיע זענען קאַמפּערד אין טאַבעלע 1(A). די וואָלומעטרישע פּאַרטיקל גרייס d(0.5) פון PMP איז געווען 3.36 µm, קאַמפּערד צו ad(0.5) ווערט פון 3.05 µm אין אונדזער פריערדיקער שטודיע (פּאָליסטירין געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקאַלז)34. רעכט צו דער ענדערונג אין די פאַרהעלטעניש פון PEG, ורעאַ, TMOS און עסיק זויער אין דער רעאַקציע געמיש, די פּאַרטיקל גרייס פאַרשפּרייטונג פון דעם באַטש איז געווען שמאָלער קאַמפּערד צו אונדזער פריערדיקער שטודיע. די פּאַרטיקל גרייס פון דער PMP פאַסע איז אַ ביסל גרעסער ווי די פון דער פּאָליסטירין געבונדענער סיליקאַ פּאַרטיקל פאַסע וואָס מיר האָבן פריער געלערנט. דאָס מיינט אַז די ייבערפלאַך פאַנגקשאַנאַליזאַציע פון ​​סיליקאַ פּאַרטיקאַלז מיט סטירענע האט אַוועקגעלייגט בלויז אַ פּאָליסטירען שיכט (0.97 מיקראָמעטער) אויף דער סיליקאַ ייבערפלאַך, בשעת אין דער PMP פאַזע איז די שיכט גרעב געווען 1.38 מיקראָמעטער.
פּאַרטיקל גרייס פאַרשפּרייטונג (A) און פּאָרע גרייס פאַרשפּרייטונג (B) פון ריין סיליקאַ פּאַרטיקאַלז און ליגאַנד געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקאַלז.
די פּאָרע גרייס, פּאָרע באַנד, און ייבערפלאַך שטח פון די סיליקאַ פּאַרטיקאַלז געניצט אין דעם לערנען זענען געוויזן אין טיש 1 (B). די PSD פּראָופיילז פון ריין סיליקאַ פּאַרטיקאַלז און ליגאַנד-געבונדן סיליקאַ פּאַרטיקאַלז זענען געוויזן אין פיג. 3 (B). די רעזולטאַטן זענען געווען פאַרגלייַכלעך צו אונדזער פריערדיקער לערנען 34. די פּאָרע גרייסן פון ריין און ליגאַנד-געבונדן סיליקאַ פּאַרטיקאַלז זענען געווען 310 Å און 241 Å, ריספּעקטיוולי, וואָס ינדיקייץ אַז נאָך כעמישער מאָדיפיקאַטיאָן, די פּאָרע גרייס איז דיקריסט מיט 69 Å, ווי געוויזן אין טיש 1 (B), און די שיפט קורווע איז געוויזן אין פיג. די ספּעציפיש ייבערפלאַך שטח פון סיליקאַ פּאַרטיקאַלז אין דער קראַנט לערנען איז 116 m2/g, וואָס איז פאַרגלייַכלעך צו אונדזער פריערדיקער לערנען (124 m2/g). ווי געוויזן אין טיש 1 (B), די ייבערפלאַך שטח (m2/g) פון סיליקאַ פּאַרטיקאַלז נאָך כעמישער מאָדיפיקאַטיאָן אויך דיקריסט פון 116 m2/g צו 105 m2/g.
די רעזולטאַטן פון עלעמענטאַר אַנאַליז פון דער סטאַטיאָנעריער פאַזע ווערן פּרעזענטירט אין טאַבעלע 2. דער טשאַד אינהאַלט פון דער איצטיקער סטאַטיאָנעריער פאַזע איז 6.35%, וואָס איז נידעריקער ווי אין אונדזער פריערדיקער שטודיע (סיליקאַ פּאַרטיקלען פֿאַרבונדן מיט פּאָליסטירען, 7.93%35 און 10.21%, ריספּעקטיוולי) 42. דער טשאַד אינהאַלט פון דער איצטיקער סטאַטיאָנעריער פאַזע אונטן, ווייל עטלעכע פּאָליאַרע ליגאַנדן ווי פענילמאַלעימיד מעטיל וויניל איזאָסיאַנאַטע (PCMP) און 4-הידראָקסי-TEMPO זענען געניצט געוואָרן אין דערצו צו סטירען אין דער צוגרייטונג פון SP. דער וואָג פּראָצענט פון שטיקשטאָף אין דער איצטיקער סטאַטיאָנעריער פאַזע איז 2.21% קאַמפּערד צו 0.1735 און 0.85% אין פריערדיקע שטודיעס42. דאָס מיינט אַז די איצטיקע סטאַטיאָנעריער פאַזע האט אַ הויך וואָג פּראָצענט פון שטיקשטאָף רעכט צו דעם פענילמאַלעימיד. אזוי אויך, האבן פראדוקטן (4) און (5) א קוילן-שטאף אינהאלט פון 2.7% און 2.9%, בהתאמה, בשעת דער ענדגילטיגער פראדוקט (6) האט א קוילן-שטאף אינהאלט פון 6.35%, ווי געוויזן אין טאבעלע 2. טערמאגראווימעטרישע אנאליז (TGA) איז גענוצט געווארן אויף דער סטאציאנערער פאזע פון ​​PMP צו טעסטן פאר וואג-פארלוסט, און די TGA קורווע ווערט געוויזן אין פיגור 4. די TGA קורווע ווייזט א וואג-פארלוסט פון 8.6%, וואס איז אין גוטער הסכמה מיטן קוילן-שטאף אינהאלט (6.35%), ווייל די ליגאנדס אנטהאלטן נישט נאר C1, נאר אויך N2, O2 און H2.
דער ליגאַנד פענילמאַלעימיד-מעטהילוויניל איזאָסיאַנייט איז אויסגעקליבן געוואָרן צו מאָדיפֿיצירן די ייבערפֿלאַך פֿון די סיליקאַ פּאַרטיקלען צוליב זייַנע פּאָליאַרע פענילמאַלעימיד און ווינילאיזאָסיאַנייט גרופּעס. וויניל איזאָסיאַנייט גרופּעס קענען ווייטער רעאַגירן מיט סטירען דורך לעבעדיקע ראַדיקאַל פּאָלימעריזאַציע. די צווייטע סיבה איז צו אַריינשטעלן אַ גרופּע וואָס האט מיטלמעסיקע אינטעראַקציעס מיטן אַנאַליט און קיין שטאַרקע עלעקטראָסטאַטישע אינטעראַקציעס צווישן דעם אַנאַליט און דער סטאַציאָנאַרער פֿאַזע, ווײַל די פענילמאַלעימיד מאָיעטי האט נישט קיין ווירטואַלע לאָדונג בײַ נאָרמאַלן pH. די פּאָלאַריטעט פֿון דער סטאַציאָנאַרער פֿאַזע קען קאָנטראָלירט ווערן דורך דער אָפּטימאַלער מאָס סטירען און די רעאַקציע צײַט פֿון דער פֿרײַער ראַדיקאַל פּאָלימעריזאַציע. דער לעצטער שריט פֿון דער רעאַקציע (פֿרײַער ראַדיקאַל פּאָלימעריזאַציע) איז קריטיש ווײַל עס ענדערט די פּאָלאַריטעט פֿון דער סטאַציאָנאַרער פֿאַזע. עלעמענטאַרע אַנאַליז איז דורכגעפֿירט געוואָרן צו קאָנטראָלירן דעם קאַרבאָן אינהאַלט אין די סטאַציאָנאַרע פֿאַזעס. מען האָט באַמערקט אַז פֿאַרגרעסערן די מאָס סטירען און די רעאַקציע צײַט פֿאַרגרעסערט דעם קאַרבאָן אינהאַלט פֿון דער סטאַציאָנאַרער פֿאַזע און פֿאַרקערט. SPs צוגעגרייט מיט פֿאַרשידענע קאָנצענטראַציעס פֿון סטירען האָבן פֿאַרשידענע קאַרבאָן לאָודז. אזוי אויך, די סטאַציאָנערע פאַזעס זענען געשטעלט געוואָרן אויף ומבאַפלעקט שטאָל זיילן און זייערע כראָמאַטאָגראַפֿישע כאַראַקטעריסטיקס (סעלעקטיוויטי, רעזאָלוציע, N ווערט, אאז"וו) זענען געקאָנטראָלירט געוואָרן. באַזירט אויף די עקספּערימענטן, איז אַן אָפּטימיזירטע קאָמפּאָזיציע פֿאַר דער צוגרייטונג פון דער PMP סטאַציאָנערע פאַזע אויסגעקליבן געוואָרן צו צושטעלן קאָנטראָלירטע פּאָלאַריטעט און גוטע ריטענשאַן פון די אַנאַליט.
די PMP קאָלום איז אויך עוואַלויִרט געוואָרן פֿאַר דער אַנאַליז פֿון פֿינף געמישן פֿון פּעפּטיידן (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leusine-enkephalin) ניצנדיק די קאַפּאַציטעט פֿון דער מאָבילער פֿאַזע. 60/40 (v/v) ACN/וואַסער (0.1% TFA) מיט אַ פֿלוס ראַטע פֿון 80 µl/min. אונטער אָפּטימאַלע עלוציע באַדינגונגען (200,000 פּלאַטעס/m²), די צאָל טעאָרעטישע פּלאַטעס (N) פּער קאָלום (100 × 1.8 mm) איז 20,000 ± 100. די N ווערטן פֿאַר די דריי PMP קאָלומס ווערן געוויזן אין טאַבעלע 3 און די כראָמאַטאָגראַמען ווערן געוויזן אין פֿיגור 5A. שנעלע אנאליז ביי א הויכן שטראָם ראטע (700 µl/min) אויף א PMP קאלום, פינף פּעפּטיידן ארויסגעלאָזט אין איין מינוט, אויסגעצייכנטער N ווערט פון 13,500 ± 330 פּער קאלום (100 x 1.8 מם דיאַמעטער), עקוויוואַלענט צו 135,000 פּלאַטעס/מ² (פיגור 5B). דריי קאלום'ס פון דער זעלבער גרייס (אינעווייניקסטער דיאַמעטער 100 x 1.8 מם) זענען אָנגעפילט געוואָרן מיט דריי פֿאַרשידענע באַטשעס פון PMP סטאַציאָנערע פֿאַזע צו פּרובירן רעפּראָדוצירבאַרקייט. אַנאַליטן זענען רעקאָרדירט ​​געוואָרן פֿאַר יעדער קאלום דורך צעשיידן די זעלבע טעסט געמיש אויף יעדער קאלום מיט אָפּטימאַלע ארויסלאָז באַדינגונגען, נומער פון טעאָרעטישע פּלאַטעס N, און ריטענשאַן צייט. די רעפּראָדוצירבאַרקייט דאַטן פֿאַר די PMP קאלום'ס ווערן געוויזן אין טאַבעלע 4. די רעפּראָדוצירבאַרקייט פון דער PMP קאלום האָט גוט קאָרעלירט מיט זייער נידעריקע %RSD ווערטן ווי געוויזן אין טאַבעלע 3.
צעשיידונג פון פּעפּטיד מישונגען אויף אַ PMP קאָלום (B) און אַן Ascentis Express RP-Amide קאָלום (A), מאָביל פאַזע 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP קאָלום דימענסיעס (100 x 1.8 מם אינדעקס), אַנאַליז עלוציע סדר פון קאַמפּאַונדז: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) און 5 (לויסיק זויער ענקעפאַלין).
א PMP זייַל (אינעווייניקסטער דיאַמעטער 100 x 1.8 מ״מ) איז געוואָרן עוואַלויִרט פֿאַר דער צעשיידונג פֿון דעם טריפּטישן הידראָליזאַט פֿון מענטשלעכן סערום אַלבומין דורך HPLC. דער כראָמאַטאָגראַם אין פֿיגור 6 ווײַזט אַז די מוסטערן זענען גוט צעשיידט מיט זייער גוטער רעזאָלוציע. HSA לייזונגען זענען אַנאַליזירט געוואָרן מיט אַ פֿלוס ראַטע פֿון 100 μl/min, אַ מאָבילער פֿאַזע פֿון 70/30 אַצעטאָניטריל/וואַסער און 0.1% TFA. די שפּאַלטונג פֿון HSA איז געוואָרן צעטיילט אין 17 שפּיצן, ווי געוויזן אין כראָמאַטאָגראַם (פֿיגור 6), וואָס קאָרעספּאָנדירן צו 17 פּעפּטיידן. די צעשיידונג עפֿעקטיוויטעט פֿון יחיד שפּיצן פֿון HSA הידראָליזאַט זענען אויסגערעכנט געוואָרן און די ווערטן ווערן געוויזן אין טאַבעלע 5.
HSA טריפּטישע הידראָליזאַטן זענען געטיילט געוואָרן אויף אַ PMP קאָלום (אינעווייניקסטער דיאַמעטער 100 x 1.8 מם), שטראָם ראַטע (100 μl/min), מאָבילער פאַזע 60/40 אַצעטאָניטריל/וואַסער, און 0.1% TFA.
וואו L איז די זייל לענג, η איז די וויסקאָסיטי פון דער מאָבילער פאַזע, ΔP איז דער צוריק דרוק פון דער זייל, און u איז די לינעאַרע גיכקייט פון דער מאָבילער פאַזע. די פּערמעאַביליטי פון דער PMP זייל איז געווען 2.5 × 10–14 מ², די לויפן קורס איז געווען 25 µl/min, 60/40 v/v איז געניצט געוואָרן. ACN/וואַסער. די פּערמעאַביליטי פון דער PMP זייל (ID 100 × 1.8 מם) איז געווען ענלעך צו יענע פון ​​אונדזער פריערדיקער רעף.34 שטודיע. די פּערמעאַביליטי פון אַ זייל אָנגעפילט מיט סופּערפישאַלי פּאָרעז פּאַרטיקאַלז איז 1.7×10 .6 µm, 2.5×10-14 מ² פֿאַר 5 µm פּאַרטיקאַלז43. דעריבער, די פּערמעאַביליטי פון דער PMP פאַזע איז ענלעך צו דער פּערמעאַביליטי פון קערן-שאָל פּאַרטיקאַלז מיט אַ גרייס פון 5 μm.
וואו Wx איז די מאַסע פון ​​דער זייל אָנגעפילט מיט כלאָראָפאָרם, Wy איז די מאַסע פון ​​דער זייל אָנגעפילט מיט מעטאַנאָל, און ρ איז די געדיכטקייט פון דעם סאָלוואַנט. געדיכטקייט פון מעטאַנאָל (ρ = 0.7866) און כלאָראָפאָרם (ρ = 1.484). די גאַנצע פּאָראָסיטי פון דער סיליקאַ-C18 פּאַרטיקל זייל (100 × 1.8 מם ID)34 און אונדזער פריער שטודירטער C18-ורעאַ31 זייל איז געווען 0.63 און 0.55, ריספּעקטיוולי. דאָס מיינט אַז די בייַזייַן פון ורעאַ ליגאַנדס ראַדוסירט די פּערמעאַביליטי פון דער סטאַציאָנאַרער פאַזע. אויף דער אַנדערער האַנט, די גאַנצע פּאָראָסיטי פון דער PMP זייל (אינערלעכער דיאַמעטער 100 × 1.8 מם) איז 0.60. PMP זיילן זענען ווייניקער פּערמעאַבאַל ווי זיילן פּאַקט מיט C18 געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען ווייַל אין C18 טיפּ סטאַציאָנאַרע פאַזעס זענען די C18 ליגאַנדס אַטאַטשט צו די סיליקאַ פּאַרטיקלען אין לינעאַר קייטן, בשעת אין פּאָליסטירענע טיפּ סטאַציאָנאַרע פאַזעס אַ רעלאַטיוו דיק פּאָלימער איז געשאפן אַרום די פּאַרטיקלען. שיכט א. אין א טיפישן עקספערימענט, ווערט קאלום פאראזיטעט אויסגערעכנט ווי פאלגנד:
אויף פיג. 7א, ב ווײַזן וואַן דימטער פּלאָץ פֿאַר אַ PMP קאָלום (אינטערנאַטירלעכער גרייס 100 x 1.8 מם) און אַן Ascentis Express RP-Amide קאָלום (אינטערנאַטירלעכער גרייס 100 x 1.8 מם) אונטער די זעלבע עלוציע באַדינגונגען, 60/40 ACN/H2O און 0 .1% TFA 20 µl/min ביז 800 µl/min אויף ביידע קאָלומס. די מינימום HETP ווערטן בײַם אָפּטימאַלן פֿלוס ראַטע (80 µl/min) זענען געווען 2.6 µm און 3.9 µm פֿאַר דער PMP קאָלום און דער Ascentis Express RP-Amide קאָלום, בהתאמה. די HETP ווערטן ווײַזן אַז די צעשיידונג עפֿעקטיווקייט פֿון דער PMP קאָלום (100 x 1.8 מם אינטערנאַטירלעכער גרייס) איז פֿיל העכער ווי די פֿון דער קאמערציעל פֿאַרפֿיגבארער Ascentis Express RP-Amide קאָלום (100 x 1.8 מם אינטערנאַטירלעכער גרייס). דער וואן דימטער גראף אין פיג. 7(א) ווייזט אז די פארקלענערונג אין N ווערט איז נישט באדייטנד העכער מיטן פארגרעסערן שטראם קאמפערד צו אונזער פריערדיגער שטודיע. די העכערע צעשיידונג עפעקטיווקייט פון דער PMP קאלום (אידענטיטי 100 × 1.8 מ"מ) קאמפערד צו דער Ascentis Express RP-Amide קאלום איז באזירט אויף דער פארבעסערטער פארטיקל פאָרעם און גרייס און די סאפיסטיקירטע קאלום פּאַקינג פּראָצעדור גענוצט אין איצטיקער ארבעט34.
(א) וואן דימטער פלאט (HETP קעגן מאבילע פאזע לינעארע גיכקייט) באקומען אויף א PMP קאלום (אינדי. איי. 100 x 1.8 מ"מ) אין 60/40 ACN/H2O מיט 0.1% TFA. (ב) וואן דימטער פלאט (HETP קעגן מאבילע פאזע לינעארע גיכקייט) באקומען אויף אן אסענטיס עקספרעס RP-אמיד קאלום (אינדי. איי. 100 x 1.8 מ"מ) אין 60/40 ACN/H2O מיט 0.1% TFA.
א פּאָלאַרע סטאַציאָנערע פאַזע פון ​​אינטערקאַלירט פּאָליסטירען איז צוגעגרייט און עוואַלויִרט געוואָרן פֿאַר דער צעשיידונג פון אַ געמיש פון סינטעטישע פּעפּטיידן און טריפּטיש הידראָליזאַט פון מענטשלעכן סערום אַלבומין (HSA) אין הויך-פאָרשטעלונג פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע. די כראָמאַטאָגראַפֿישע פאָרשטעלונג פון PMP קאָלומען פֿאַר פּעפּטייד געמישן איז אויסגעצייכנט אין טערמינען פון צעשיידונג עפעקטיווקייט און רעזאָלוציע. די פֿאַרבעסערטע צעשיידונג עפעקטיווקייט פון PMP קאָלומען איז רעכט צו עטלעכע סיבות ווי סיליקאַ פּאַרטיקל גרייס און פּאָרע גרייס, קאָנטראָלירטע סינטעז פון סטאַציאָנערע פאַזעס, און קאָמפּלעקסע קאָלום פּאַקינג מאַטעריאַלס. אין דערצו צו דער הויך צעשיידונג עפעקטיווקייט, נאָך אַ מייַלע פון ​​דעם סטאַציאָנערן פאַזע איז דער נידעריק קאָלום צוריק דרוק ביי הויך לויפן ראַטעס. PMP קאָלומען זענען העכסט רעפּראָדוסיבל און קענען ווערן גענוצט צו אַנאַליזירן געמישן פון פּעפּטיידן און טריפּטיש דיידזשעסטשאַן פון פאַרשידענע פּראָטעינס. מיר פּלאַנירן צו נוצן דעם קאָלום פֿאַר דער צעשיידונג פון ביאָאַקטיוו קאַמפּאַונדז פון נאַטירלעך פּראָדוקטן, עקסטראַקטן פון מעדיציניש געוויקסן און שוואָם אין פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע. אין דער צוקונפֿט, PMP קאָלומען וועלן אויך ווערן עוואַלויִרט פֿאַר דער צעשיידונג פון פּראָטעינס און מאָנאָקלאָנאַל אַנטיבאָדיעס.
פעלד, דזש.ק., עוערבי, עם.ר., לאו, דזש., טהעגערסען, ה. & פּעטערסאָן, פּ. אויספאָרשונג אין ריווערסט פאַזע כראָמאַטאָגראַפֿיע פּעפּטיד צעשיידונג סיסטעמען טייל 1: אַנטוויקלונג פון אַ פּראָטאָקאָל פֿאַר קאָלום כאַראַקטעריזאַציע. פעלד, דזש.ק., עוערבי, עם.ר., לאו, דזש., טהעגערסען, ה. & פּעטערסאָן, פּ. אויספאָרשונג אין ריווערסט פאַזע כראָמאַטאָגראַפֿיע פּעפּטיד צעשיידונג סיסטעמען טייל 1: אַנטוויקלונג פון אַ פּראָטאָקאָל פֿאַר קאָלום כאַראַקטעריזאַציע.פעלד, דזש.ק., אווערביי, עם.ר., לאו, דזש., טאגערסען, ה., און פעטערסאן, פ. אויספארשונג פון פּעפּטייד צעשיידונג סיסטעמען דורך ריווערס-פאַסע כראָמאַטאָגראַפֿיע, טייל 1: אנטוויקלען א פּראָטאָקאָל פֿאַר קאָלום כאַראַקטעריזאַציע. פעלד, דזש.ק., עוערבי, עם.ר., לאו, דזש., טהעגערסען, ה. & פּעטערסאָן, פּ. אויספאָרשונג אין ריווערסט פאַזע כראָמאַטאָגראַפֿיע פּעפּטיד צעשיידונג סיסטעמען טייל 1: אַנטוויקלונג פון אַ פּראָטאָקאָל פֿאַר קאָלום קעראַקטעריסטיקס. פעלד, דזש.ק., עוערבי, עם.ר., לאו, דזש., טהעגערסען, ה. & פּעטערסאָן, פּ. אויספאָרשונג אין ריווערסט פאַזע כראָמאַטאָגראַפֿיע פּעפּטיד צעשיידונג סיסטעמען טייל 1: אַנטוויקלונג פון אַ פּראָטאָקאָל פֿאַר קאָלום קעראַקטעריסטיקס.פעלד, דזש.ק., אווערביי, עם.ר., לאו, דזש., טאגערסען, ה., און פעטערסאן, פ. אויספארשונג פון פּעפּטייד צעשיידונג סיסטעמען דורך ריווערס-פאַסע כראָמאַטאָגראַפֿיע, טייל 1: אנטוויקלען א פּראָטאָקאָל פֿאַר קאָלום כאַראַקטעריזאַציע.J.色谱法。 1603，113-129。 https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
גאָמעז, ב. און אַנדערע. מעטאָדן פֿאַר שאַפֿן פֿאַרבעסערטע אַקטיווע פּעפּטיידן פֿאַר דער באַהאַנדלונג פֿון אינפֿעקציעזע קראַנקייטן. ביאָטעכנאָלאָגיע. דערגרייכונגען 36(2), 415–429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
פליגע, פ., ליסאווסקי, וו., מארטינעז, דזש. און כרעסטטשאַטיסקי, מ. סינטעטישע טעראַפּעווטישע פּעפּטיידן: וויסנשאַפֿט און מאַרק. פליגע, פ., ליסאווסקי, וו., מארטינעז, דזש. און כרעסטטשאַטיסקי, מ. סינטעטישע טעראַפּעווטישע פּעפּטיידן: וויסנשאַפֿט און מאַרק.פליגע פּ, ליסאָווסקי וו, מאַרטינעז דזש און כרעסטשאַטישקי מ. סינטעטישע טעראַפּעווטישע פּעפּטיידן: וויסנשאַפֿט און מאַרק.פליגע פ, ליסאווסקי וו, מארטינעז דזש און כרעסטשאצקי מ. סינטעטישע טעראַפּעווטישע פּעפּטיידן: וויסנשאַפֿט און מאַרק. מעדיצין אויפדעקונג. טודיי 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
קסיע, פ., סמיט, ר.ד. און שען, י. פארגעשריטענע פּראָטעאָמישע פליסיקע כראָמאַטאָגראַפֿיע. קסיע, פ., סמיט, ר.ד. און שען, י. פארגעשריטענע פּראָטעאָמישע פליסיקע כראָמאַטאָגראַפֿיע.זעה פ., סמיט ר.ד. און שען יו. פארגעשריטענע פּראָטעאָמישע פליסיקע כראָמאַטאָגראַפֿיע. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced פּראָטעין זאַץ 液相色谱.זעה פ., סמיט ר.ד. און שען יו. פארגעשריטענע פּראָטעאָמישע פליסיקע כראָמאַטאָגראַפֿיע.דזש. כראָמאַטאָגראַפֿיע. א 1261, 78–90 (2012).
ליו, וו. און אנדערע. פארגעשריטענע פליסיקע כראמאטאגראפיע-מאסע ספעקטראמעטריע איז פעהיג צו קאמבינירן ברייט-באזירטע מעטאבאלאמיקס און פראטעאמיקס. אנוס. כימ. אקטא 1069, 89–97 (2019).
טשעסנאט, ס.מ. און סאליסבורי, דזש.דזש. די ראלע פון ​​UHPLC אין פארמאצעווטישע אנטוויקלונג. טשעסנאט, ס.מ. און סאליסבורי, דזש.דזש. די ראלע פון ​​UHPLC אין פארמאצעווטישע אנטוויקלונג.טשעסנוט, ס.מ. און סאליסבורי, דזש.דזש. די ראלע פון ​​UHPLC אין פארמאצעווטישע אנטוויקלונג.טשעסנאט, ס.מ. און סאליסבורי, דזש.דזש. די ראלע פון ​​UHPLC אין מעדיצין אנטוויקלונג. דזש. סעפטעמבער סייענס. 30(8), 1183–1190 (2007).
וו, נ. & קלאַוזען, אַם יסודותדיקע און פּראַקטישע אַספּעקטן פון אולטראַהויך דרוק פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע פֿאַר שנעלע צעשיידונגען. וו, נ. & קלאַוזען, אַם יסודותדיקע און פּראַקטישע אַספּעקטן פון אולטראַהויך דרוק פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע פֿאַר שנעלע צעשיידונגען.וו, נ. און קלאַוזען, אַם יסודותדיקע און פּראַקטישע אַספּעקטן פון הויך דרוק פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע פֿאַר שנעלער צעשיידונג. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 וו, נ. & קלאַוזען, אַם גרונטלעכע און פּראַקטישע אַספּעקטן פון אולטראַ-הויך דרוק פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע פֿאַר שנעלער צעשיידונג.וו, נ. און קלאַוזען, אַם יסודותדיקע און פּראַקטישע אַספּעקטן פון הויך דרוק פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע פֿאַר שנעלער צעשיידונג.דזש. סעפטעמבער. סייענס. 30(8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
רען, ס.א. און טשעקיטשעף, פ. באַניץ פון אולטראַ-פּערפאָרמאַנס פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע אין פֿאַרמאַסוטיקאַל אַנטוויקלונג. רען, ס.א. און טשעקיטשעף, פ. באַניץ פון אולטראַ-פּערפאָרמאַנס פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע אין פֿאַרמאַסוטיקאַל אַנטוויקלונג.רען, סאַ און טשעלישעפף, פּ. די נוצן פון אולטרא הויך פאָרשטעלונג פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע אין פֿאַרמאַסוטיקאַל אַנטוויקלונג. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用. רען, ס.א. און טשעליטשעף, פ.רען, סאַ און טשעלישעפף, פּ. אַפּליקאַציע פון ​​​​ולטראַ-פּערפאָרמאַנס פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע אין מעדיצין אַנטוויקלונג.דזש. כראָמאַטאָגראַפֿיע. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
גו, ה. און אנדערע. א מאנאליטישער מאקראפארעזער הידראגעל געשאפן פון אן אויל-אין-וואסער עמולסיע מיט א הויכער אינערליכער פאזע פאר עפעקטיווער רייניקונג פון ענטעראווירוס 71. כעמישער. פראיעקט. זשורנאל 401, 126051 (2020).
שי, י., קסיאַנג, ר., האָרוואַט, ק. און ווילקינס, דזש.אַ. די ראָלע פון ​​פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע אין פּראָטעאָמיקס. שי, י., קסיאַנג, ר., האָרוואַט, ק. און ווילקינס, דזש.אַ. די ראָלע פון ​​פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע אין פּראָטעאָמיקס.שי, י., קסיאַנג, ר., האָרוואַט, ק. און ווילקינס, דזש.אַ. די ראָלע פון ​​פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע אין פּראָטעאָמיקס. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用. שי, י, קסיאַנג, ר, האָרוואַטה, סי & ווילקינס, יאַשי, י., קסיאַנג, ר., האָרוואַט, ק. און ווילקינס, דזש.אַ. די ראָלע פון ​​פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע אין פּראָטעאָמיקס.דזש. כראָמאַטאָגראַפֿיע. א 1053 (1-2), 27-36 (2004).
פעקעטע, ס., ווטיי, דזש.-ל. & גילאַרמע, ד. נייע טרענדס אין ריווערסט-פאַסע פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיש סעפּאַראַציעס פון טעראַפּעווטישע פּעפּטיידן און פּראָטעאינען: טעאָריע און אַפּליקאַציעס. & גילאַרמע, ד. נייע טרענדס אין ריווערסט-פאַסע פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיש סעפּאַראַציעס פון טעראַפּעווטישע פּעפּטיידן און פּראָטעאינען: טעאָריע און אַפּליקאַציעס. & Guillarme, די. фазой: теория и приложения. & גילאַרמע, ד. נייע טרענדס אין דער צעשיידונג פון טעראַפּעווטישע פּעפּטיידן און פּראָטעאינען דורך פאַרקערט פאַסע פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע: טעאָריע און אַפּליקאַציעס. & Guillarme, D. און גילאַרמע, ד.און גילאַרמע, ד. נייע טרענדס אין דער צעשיידונג פון טעראַפּעווטישע פּעפּטיידן און פּראָטעאינען דורך פאַרקערט פאַסע פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע: טעאָריע און אַפּליקאַציעס.דזש. פארם. ביאָמעדיקאַל סייענס. אַנוס. 69, 9–27 (2012).
גילאַר, מ., אָליוואָוואַ, פּ., דאַלי, AE און געבלער, דזש.סי. צוויי-דימענסיאָנאַלע צעשיידונג פון פּעפּטיידן ניצנדיק RP-RP-HPLC סיסטעם מיט פאַרשידענע pH אין ערשטער און צווייטער צעשיידונג דימענסיעס. גילאַר, מ., אָליוואָוואַ, פּ., דאַלי, AE און געבלער, דזש.סי. צוויי-דימענסיאָנאַלע צעשיידונג פון פּעפּטיידן ניצנדיק RP-RP-HPLC סיסטעם מיט פאַרשידענע pH אין ערשטער און צווייטער צעשיידונג דימענסיעס.גילאַר מ., אָליוואָוואַ פּ., דאַלי אַע און געבלער דזש.ק. צוויי-דימענסיאָנאַלע צעשיידונג פון פּעפּטיידן ניצנדיק די RP-RP-HPLC סיסטעם מיט פאַרשידענע pH אין דער ערשטער און צווייטער צעשיידונג דימענסיעס.גילאַר מ., אָליוואָוואַ פּ., דאַלי אַע און געבלער דזש.ק. צוויי-דימענסיאָנעלע צעשיידונג פון פּעפּטיידן ניצנדיק פֿאַרשידענע pH ווערטן אין דער ערשטער און צווייטער צעשיידונג דימענסיעס ניצנדיק די RP-RP-HPLC סיסטעם. דזש. סעפּט סייענס. 28 (14), 1694–1703 (2005).
פעליטי, ס. און אנדערע. אויספארשונג פון די מאסע טראנספער און קינעטישע אייגנשאפטן פון הויך-פארשטעלונג כראמאטאגראפיע קאלום'ס געפאקט מיט פולשטענדיג פאראזע און אויבערפלעכלעך פאראזע C18 פארטיקלען קלענער ווי 2 µm. דזש. סעפטעמבער סייענס. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
פּיאָוועסאַנאַ, ס. און אַנדערע. לעצטע טרענדס און אַנאַליטישע טשאַלאַנדזשיז אין דער איזאָלאַציע, אידענטיפֿיקאַציע און וואַלידאַציע פון ​​פלאַנצן ביאָאַקטיווע פּעפּטיידן. אַנוס. באַשעפעניש אַנאַל. כעמישע. 410(15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
מולער, דזש.בי. און אנדערע. פּראָטעאָמישע לאַנדשאַפט פון דעם מלכות פון לעבן. נאַטור 582 (7813), 592–596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
דע לוקאַ, ק. און אַנדערע. נאָך-באַהאַנדלונג פון טעראַפּעווטישע פּעפּטיידן דורך פּרעפּעראַטיוו פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע. מאָלעקולעס (באַזעל, שווייץ) 26(15), 4688 (2021).
יאַנג, י. און גענג, קס. געמישט-מאָד כראָמאַטאָגראַפֿיע און אירע אַפּליקאַציעס צו ביאָפּאָלימערן. יאַנג, י. און גענג, קס. געמישט-מאָד כראָמאַטאָגראַפֿיע און אירע אַפּליקאַציעס צו ביאָפּאָלימערן.יאַנג, יו. און גענג, קס. געמישט מאָדע כראָמאַטאָגראַפֿיע און זיין אַפּליקאַציע צו ביאָפּאָלימערס. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 יאַנג, י. און גענג, קס. געמישט מאָדע כראָמאַטאָגראַפֿיע און איר אַפּליקאַציע אין ביאָפּאָלימערן.יאַנג, יו. און דזשין, קס. געמישט מאָדע כראָמאַטאָגראַפֿיע און זיין אַפּליקאַציע צו ביאָפּאָלימערס.דזש. כראָמאַטאָגראַפֿיע. א 1218(49), 8813–8825 (2011).