דאנק איר פֿאַר באזוכן Nature.com.דער בלעטערער ווערסיע איר נוצן האט לימיטעד CSS שטיצן.פֿאַר דער בעסטער דערפאַרונג, מיר רעקאָמענדירן אַז איר נוצן אַ דערהייַנטיקט בלעטערער (אָדער דיסייבאַל קאַמפּאַטאַבילאַטי מאָדע אין Internet Explorer).אין דער דערווייל, צו ענשור פארבליבן שטיצן, מיר וועלן מאַכן דעם פּלאַץ אָן סטיילז און דזשאַוואַסקריפּט.
די לימיטעד אַוויילאַביליטי פון מענטשלעך האָלץ געוועב קולטור סיסטעמען האט געפֿירט צו ומפּינקטלעך ינטערפּריטיישאַנז פון קאַרדאַק מעדיצין יפעקץ.מיר האָבן דעוועלאָפּעד אַ קאַרדיאַק געוועב קולטור מאָדעל (קטקם) אַז ילעקטראָומאַשאַניקאַללי סטימיאַלייץ האַרץ סלייסיז און אַנדערגאָוז פיזיאַלאַדזשיקאַל אויסשטרעקן בעשאַס די סיסטאָליק און דיאַסטאָליק פייזאַז פון די קאַרדיאַק ציקל.נאָך 12 טעג פון קולטור, דעם צוגאַנג טייל ימפּרוווד די ווייאַבילאַטי פון האַרץ סעקשאַנז, אָבער האט נישט גאָר ופהיטן זייער סטראַקטשעראַל אָרנטלעכקייַט.דעריבער, נאָך קליין מאָלעקול זיפּינג, מיר געפֿונען אַז די דערצו פון 100 נם טריאָוטיקאָאָטהאָנין (ט 3) און 1 μ ם דעקסאַמעטהאַסאָנע (דעקס) צו אונדזער מיטל מיינטיינד די מיקראָסטרוקטורע פון ​​די סעקשאַנז פֿאַר 12 טעג.אין קאָמבינאַציע מיט ט 3 / דעקס באַהאַנדלונג, די קטקם סיסטעם מיינטיינד טראַנסקריפּשאַן פּראָופיילז, ווייאַבילאַטי, מעטאַבאַליק טעטיקייט, און סטראַקטשעראַל אָרנטלעכקייַט פֿאַר 12 טעג.אין דערצו, יבעריק סטרעטשינג פון קאַרדיאַק געוועב אין קולטור ינדוסיז היפּערטראָפיק סיגנאַל סיגנאַלינג, פּראַוויידינג אַפיסיישאַן פון קטנם צו נאָכקרימען היפּערטראָפיק טנאָים ינדוסט דורך קאַרדיאַק אויסשטרעקן.אין מסקנא, קטקם קענען מאָדעל די פיזיאַלאַדזשי און פּאַטהאָפיזשיאָלאָגי פון די האַרץ אין קולטור איבער לאַנג פּיריאַדז צייט, און ענייבאַלז פאַרלאָזלעך מעדיצין זיפּונג.
כייַע מאָדעלס זענען קאַמאַנלי געניצט ווי אַ פאָלקס פּלאַטפאָרמע פֿאַר קאַרדיאַק פיזיאַלאַדזשי מיט לימיטעד רילייאַבילאַטי צו פאַרטראַכטן די יפעקס פון דרוגס אין די מענטשלעך האַרץ 1,2.לעסאָף, די ידעאַל קאַרדיאַק געוועב קולטור יקספּערמענאַל מאָדעל (קטקם) איז אַ מאָדעל וואָס איז העכסט שפּירעוודיק און ספּעציפיש פֿאַר פאַרשידן אָווועראַקאַלאַדזשיאָו און פּאַטהיאָלאָגי און פּאַטהאָדיאָלאָגי.דער אַוועק פון אַזאַ אַ סיסטעם לימאַץ די ופדעקונג פון נייַ טריטמאַנץ פֿאַר האַרץ דורכפאַל 45 און האט געפֿירט צו מעדיצין קאַרדיאָטאָקסיסיטי ווי אַ הויפּט סיבה פֿאַר אַרויסגאַנג די מאַרק 6.
איבער די פאַרגאַנגענהייט יאָרצענדלינג, אַכט ניט-קאַרדיאָווואַסקיאַלער דרוגס האָבן שוין וויטדראָן פון קליניש נוצן ווייַל זיי גרונט QT ינטערוואַל קאָלאָוראָנגיישאַן לידינג צו ווענטריקולאַר ערידמיאַז און פּלוצעמדיק טויט 7.אזוי, עס איז אַ ינקריסינג נויט פֿאַר פאַרלאָזלעך שיסער ריפּעקטינג סטראַטעגיעס צו אַססעסס קאַרדיאָווואַסקיאַלער עפעקטיווקייַט און טאַקסיסאַטי.די לעצטע נוצן פון מענטש-ינדוסט פּלוריפּאָטענט סטעם צעל-דערייווד קאַרדיאָמיאָסיטעס (היפּס-סענטימעטער) אין מעדיצין זיפּונג און טאַקסיסאַטי טעסטינג גיט אַ פּאַרטיייש לייזונג צו דעם פּראָבלעם.די ומצייַטיק נאַטור פון היפּס-סענטימעטער און די פעלן פון מולטיסעללולאַר קאַמפּלעקסיטי פון קאַרדיאַק געוועב זענען הויפּט לימיטיישאַנז פון דעם אופֿן.לעצטע שטודיום האָבן געוויזן אַז די באַגרענעצונג קענען זיין צומ טייל ציען דורך ניצן פרי היפּס-סענטימעטער צו פאָרעם קאַרדאַק געוועב הידראָגעלס באַלד נאָך ספּאַנטייניאַס קאַנטראַקשאַנז און ביסלעכווייַז ינקריסינג עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן איבער צייַט.אָבער, די סיפּס-סענם מיקראָטסיסוז מאַנגל די דערוואַקסן עלעקטראָפיסיאָלאָגי און קאָנטראַקטאַל פּראָפּערטיעס פון די דערוואַקסן מיאַקאַרדיום.אין אַדישאַן, מענטשלעך קאַרדיאַק געוועב האט אַ מער קאָמפּליצירט סטרוקטור, וואָס באשטייט פון אַ כעטעראַדזשיניאַס געמיש פון פאַרשידענע צעל טייפּס, אַרייַנגערעכנט ענדאָטעעלאַל סעלז, נייטראַלמייסץ, ינטערקאַנעקטיד דורך ספּעציפיש שטעלט פון עקסטראַסעללולאַר מאַטריץ פּראָטעינס.דעם העטעראָגענעיטי פון ניט-קאַרדיאָמיאָסיטע פּאַפּיאַליישאַנז 11,12,13 אין די דערוואַקסן מאַמאַביאַן האַרץ איז אַ הויפּט מאַמאַליאַן האַרץ איז אַ הויפּט מאַמאַליאַן האַרץ איז אַ הויפּט מאַמאַליאַן האַרץ איז אַ הויפּט מאַמאַליאַן האַרץ איז אַ הויפּט בעריער צו מאָדעלינג קאַרדיאַק געוועב מיט יחיד צעל טייפּס.די הויפּט לימיטיישאַנז ונטערשטרייַכן די וויכטיקייט פון דעוועלאָפּינג מעטהאָדס פֿאַר קאַלטשערינג בעשאָלעם מיאָקאַרדיאַל געוועב מיט פיזיאַלאַדזשיקאַל און פּאַטאַלאַדזשיקאַל טנאָים.
קאַלטאַוועד דין (300 μ ם) סעקשאַנז פון די מענטשלעך האַרץ האָבן פּראָווען צו זיין אַ פּראַמאַסינג מאָדעל פון בעשאָלעם מענטש מיאַקאַרדיום.דער אופֿן גיט אַקסעס צו אַ גאַנץ 3 ד מולטיקאַללולאַר סיסטעם ענלעך צו מענטש האַרץ געוועב.אָבער, 2019, די נוצן פון קאַלטשערד האַרץ סעקשאַנז איז געווען לימיטעד דורך די קורץ (24 ה) קולטור ניצל.דאָס איז רעכט צו אַ נומער פון סיבות אַרייַנגערעכנט די פעלן פון גשמיות מעקאַנאַקאַל אויסשטרעקן, די לופט-פליסיק צובינד און די נוצן פון פּשוט מידיאַ וואָס טאָן ניט שטיצן די באדערפענישן פון קאַרדאַק געוועב.אין 2019, עטלעכע פאָרשונג גרופּעס דעמאַנסטרייטיד אַז ינקאָרפּערייטינג מאַקאַניקאַל סיבות אין קאַרדיאַק געוועב קולטור סיסטעמען קענען פאַרברייטערן קולטור לעבן, פֿאַרבעסערן קאַרדיאַק אויסדרוק, און מימיקער קאַרדיאַק פּאַטאַלאַדזשי.צוויי עלעגאַנט שטודיום 17 און 18 ווייַזן אַז וניאַקסיאַל מעטשאַניקאַל לאָודינג האט אַ positive ווירקונג אויף קאַרדיאַק פענאָטיפּע בעשאַס קולטור.אָבער, די שטודיום האט נישט נוצן די דינאַמיש דריי-דימענשאַנאַל פיזיקאָ-מעטשאַניקאַל לאָודינג פון די קאַרדיאַק ציקל, ווייַל האַרץ סעקשאַנז זענען לאָודיד מיט אַ יסאָמעטריק טענסאַל פאָרסעס 17 אָדער לינעאַר אוקסאָטאָניק לאָודינג 18.די מעטהאָדס פון געוועב סטרעטשינג ריזאַלטיד אין די סאַפּרעשאַן פון פילע קאַרדיאַק גענעס אָדער די יבערקערן פון גענעס פארבונדן מיט אַבנאָרמאַל אויסשטרעקן ענטפֿערס.נאָוטאַבלי, גיגאָוליס עט על.19 דעוועלאָפּעד אַ דינאַמיש האַרץ רעפטל קולטור וואַנע פֿאַר קאַרדיאַק ציקל ריקאַנסטראַקשאַן ניצן קראַפט טראַנסדוסער באַמערקונגען און שפּאַנונג דרייווז.כאָטש די סיסטעם אַלאַוז מער פּינטלעך אין וויטראָ קאַרדיאַק זיקטיש מאָדעלינג, די קאַמפּלעקסיטי און נידעריק טרופּוט לימאַץ די אַפּלאַקיישאַן פון דעם סיסטעם.אונדזער לאַבאָראַטאָריע האט לעצטנס דעוועלאָפּעד אַ סימפּלאַפייד קולטור סיסטעם ניצן עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן און אַן אָפּטימיזעד מיטל צו טייַנען די ווייאַבילאַטי פון סעקשאַנז פון פּאָרצינע און מענטשלעך האַרץ געוועב פֿאַר אַרויף צו 6 טעג 201.
אין דעם קראַנט מאַנוסקריפּט, מיר שילדערן אַ קאַרדאַק געוועב קולטור מאָדעל (קטקם) ניצן סעקשאַנז פון די קאַריק האַרץ וואָס ינקאָרפּערייץ הומאָראַל קיוז צו רעקאַפּייבאַלד פֿאַר דריי-דימענשאַל קאַרדיאַק פיזיאַלאַדזשיקאַל דיסטענשאַן.דעם קטקם קענען פאַרגרעסערן די אַקיעראַסי פון פאַר - קליניש מעדיצין פּראָגנאָז צו אַ שטאַפּל קיינמאָל איידער אַטשיווד דורך אַדיקטיד דורך אַדיקטיד דורך אַדיקטיד דורך אַדיקטיד דורך אַדיקטער דורך אַ קאָסטן-עפעקטיוו, אָנקוקן די טעסטינג פון די פיזיאַלאַדזשי.
העמאָדינאַמיק מעטשאַניקאַל סיגנאַלז שפּיל אַ קריטיש ראָלע אין מיינטיינינג קאַרדיאָמיאָסיטע פונקציע אין וויטראָ 22,23,24.אין דעם קראַנט מאַנוסקריפּט, מיר האָבן דעוועלאָפּעד אַ קטקם (פיגם 1 אַ) וואָס קענען נאָכקרימען די דערוואַקסן קאַרדיאַק סוויווע דורך ינדוסינג ביידע עלעקטריקאַל און מעטשאַל און מעטשאַל און מעטשאַלאַדזשיקאַל נומער).צו ויסמיידן יבעריק געוועב געשטאלטן בעשאַס דיאַסטאָלע, אַ 3 ד דרוקן מיטל איז געניצט צו פאַרגרעסערן די געוועב גרייס דורך 25% (Fig. 1 ב).עלעקטריקאַל פּאַסינינג ינדוסט דורך די C-PARE סיסטעם איז געווען טיימד צו אָנהייבן 100 מיז איידער סיסטעמען מיט אַ דאַטן אַקוואַזישאַן סיסטעם צו גאָר רעפּראָדוצירן די קאַרדיאַק ציקל.די פּראָגראַמאַטיק פון די געוועב קולטור סיסטעם איז אַ פּראָגראַממאַבלע פּנעוומאַטיש אַקטיואַטאָר (לב ינזשעניעריע, דייַטשלאַנד) צו סייקלי יקספּאַנד אַ פלעקסאַבאַל סיליקאָנע מעמבראַנע צו גרונט יקספּאַנשאַן פון די האַרץ סלייסיז אין דער אויבערשטער קאַמער.די סיסטעם איז געווען פארבונדן צו אַ פונדרויסנדיק לופט ליניע דורך אַ דרוק טראַנסדוסער, וואָס עס איז מעגלעך צו אַקיעראַטלי סטרויערן די דרוק (± 1 ממווג) און צייט (± 1 מס) (פיג. 1
א צוטשעפּען די געוועב אָפּטיילונג צו די 7 מם שטיצן רינג, געוויזן אין בלוי, אין די קולטור קאַמער פון די מיטל.די קולטור טשאַמבער איז אפגעשיידט פון די לופט קאַמער דורך אַ דין פלעקסאַבאַל סיליקאָנע מעמבראַנע.שטעלן אַ גאַסקאַט צווישן יעדער קאַמער צו פאַרמייַדן ליקס.די דעקל פון די מיטל כּולל גראַפייט ילעקטראָודז וואָס צושטעלן עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן.ב סכעמאַטיש פאַרטרעטונג פון גרויס געוועב מיטל, פירן רינג און שטיצן רינג.די געוועב סעקשאַנז (ברוין) זענען געשטעלט אויף די אָוווערסייזד מיטל מיט די פירן רינג געשטעלט אין דער נאָרע אויף די ויסווייניקסט ברעג פון דער מיטל.ניצן די פירער, קערפאַלי שטעלן די שטיצן רינג קאָוטאַד מיט געוועב אַקריליק קלעפּיק איבער די אָפּטיילונג פון קאַרדאַק געוועב.C טירונג ווייַזונג די צייט פון עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן ווי אַ פונקציע פון ​​לופט קאַמער דרוק קאַנטראָולד דורך אַ פּראָגראַממאַבלע פּנעוומאַטיש אַקטיואַטאָר (פּפּד).א דאַטן אַקוואַזישאַן מיטל איז געווען געניצט צו סינגקראַנייז עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן ניצן דרוק סענסאָרס.ווען די דרוק אין דער קולטור קאַמער ריטשאַז די באַשטעטיק שוועל, אַ דויפעק סיגנאַל איז געשיקט צו די C-PACE-עם צו צינגל ילעקטריקאַל סטימיאַליישאַן.ד בילד פון פיר קטקמס געשטעלט אויף אַ ינגקיובייטער פּאָליצע.פיר דעוויסעס זענען פארבונדן צו איין פּפּד דורך אַ פּנעוומאַטיש קרייַז, און דרוק סענסאָרס זענען ינסערטאַד אין די העמאָסטאַטיק וואַלוו צו מאָניטאָר די דרוק אין די פּנעוומאַטיש קרייַז.יעדער מיטל כּולל זעקס געוועב סעקשאַנז.
מיט אַ איין פּנעוומאַטיש אַקטוייטער, מיר זענען ביכולת צו קאָנטראָלירן 4 קטקם דעוויסעס, יעדער פון וואָס קען האַלטן 6 געוועב סעקשאַנז (Fig. 1 ד).אין קטקם, די לופט דרוק אין די לופט קאַמער איז קאָנווערטעד צו סינטשראָנאָוס דרוק אין די פליסיק קאַמער און ינדוסיז פיזיאַלאַדזשיקאַל יקספּאַנשאַן פון די האַרץ רעפטל (פיגורע 2 אַ און סאַפּלאַמענטערי פֿילם 1).אפשאצונג פון געוועב אויסגעלאשן ביי 80 מם הג.קונסט.געוויזן סטרעטשינג פון געוועב סעקשאַנז דורך 25% (Fig. 2b).דער פּראָצענט אויסשטרעקן איז געוויזן צו שטימען צו אַ פיזיאַלאַדזשיקאַל סאַרקאָמערער לענג פון 2.2-2.3 μ ם פֿאַר נאָרמאַל קאַרדיאַק אָפּטיילונג.געוועב באַוועגונג איז אַססעססעד מיט מנהג אַפּאַראַט סעטטינגס (סאַפּלאַמענטערי פיגור 1).די אַמפּליטוד און גיכקייַט פון געוועב באַוועגונג (Fig. 2C, ד) קאָראַספּאַנדיד צו אויסשטרעקן בעשאַס די קאַרדיאַק ציקל און צייט בעשאַס סיסטאָלע (פיגול (פיג. 2 ב).אויסשטרעקן און גיכקייַט פון קאַרדיאַק געוועב בעשאַס קאַנטראַקשאַן און אָפּרו פארבליבן קעסיידערדיק פֿאַר 12 טעג אין קולטור (Fig. 2F).צו אָפּשאַצן די ווירקונג פון עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן אויף קאָנטראַקטיביליטי בעשאַס קולטור, מיר דעוועלאָפּעד אַ מעטאָד פֿאַר באַשטימענדיק פֿאַר באַשטימענדיק דיפערראַטיאָנס מיט אַ שיידינג אַלגערידאַם (סאַפּלאַמאַנץ און זענען ביכולת צו ויסטיילן דיפאָרמאַטיז.דער זעלביקער אָפּטיילונג פון די האַרץ (Fig. 2F).אין די באַוועגלעך געגנט פון די שנייַדן (ר 6-9), די וואָולטידזש בעשאַס ילעקטריקאַל סטימיאַליישאַן איז געווען 20% העכער ווי אין דער אַוועק פון ילעקטריקאַל סטימיאַליישאַן, וואָס ינדיקייץ די צושטייַער פון עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן צו קאָנטראַקאַטע פונקציע.
רעפּרעסענטאַטיווע שפּור פון לופט קאַמער דרוק, פליסיק קאַמער דרוק, און געוועב באַוועגונג מעזשערמאַנץ באַשטעטיקן אַז קאַמער דרוק ענדערונגען פליסיק קאַמער דרוק, קאָזינג אַ קאָראַספּאַנדינג באַוועגונג פון די געוועב רעפטל.ב פארשטייער טראַסעס פון פּראָצענט אויסשטרעקן (בלוי) פון געוועב סעקשאַנז קאָראַספּאַנדינג צו פּראָצענט סטרעטש (אָראַנדזש).C די געמאסטן באַוועגונג פון די קאַרדיאַק רעפטל איז קאָנסיסטענט מיט די געמאסטן גיכקייַט פון באַוועגונג.(ד) רעפּריזענאַטיוו טרייַעקטאָריעס פון סייקליקאַל באַוועגונג (בלוי שורה) און גיכקייַט (מאַראַנץ דאַטיד שורה) אין אַ רעפטל פון די האַרץ.e קוואַנטאַפאַקיישאַן פון ציקל צייט (n = 19 סלייסיז פּער גרופּע, פון פאַרשידענע פּיגס), צונויפצי פּלאַן (N = 19 סלייסיז פּער גרופּע), אָפּרו צייט (n = 19 סלייסיז פּער גרופּע, פון פאַרשידענע פּיגס).סלייסיז) / גרופּע פון ​​פאַרשידענע פּיגס), שפּיץ סיסטאָליק גיכקייַט (N = 24 (D0), 25 (ד 12 (ד 12 (ד 12 (ד 12 (ד 12 (ד 12 (ד 12 (ד 12 (ד 12) סלייסיז / גרופע פון ​​פאַרשידענע פּיגס), 25 (ד 0), 25 (ד 12) סלייסיז / גרופע פון ​​פאַרשידענע פּיגס).די ה-פּרובירן פון צוויי-טיילד תּלמיד געוויזן קיין באַטייטיק חילוק אין קיין פּאַראַמעטער.F רעפּריזענאַטיוו שפּאַנונג אַנאַליסיס טראַסעס פון געוועב סעקשאַנז מיט (רויט) און אָן (בלוי) עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן, צען רעגיאָנאַל געביטן פון געוועב די סעקשאַנז פון דער זעלביקער אָפּטיילונג.די דנאָ פּאַנאַלז ווייַזן די קוואַנטאַפאַקיישאַן פון די פּראָצענט דיפעראַנסיז אין שפּאַנונג אין געוועב סעקשאַנז מיט און אָן עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן אין צען געביטן פון פאַרשידענע סעקשאַנז. (N = 8 Стрезов / грезов от разных свиней, נייַעס אין אנדערע שפּראַכן m-критеtry Ст*** p <0,0001, ** פּ <0,05). טעות באַרס רעפּראַזענץ די דורכשניטלעך ± נאָרמאַל דיווייישאַן.
אין אונדזער פרייַערדיק סטאַטיק האַרץ רעפטל קולטור סיסטעם [20, 21, מיר מיינטיינד די ווייאַבילאַטי, פונקציאָנירן, פונקציאָנירן, פונקציאָנירן, פונקציאָנירן, פונקציאָנירן, פונקציאָנירן, פונקציאָנירן פון האַרץ סלייסיז פֿאַר 6 טעג דורך אַפּלייינג די מיטל זאַץ.אָבער, נאָך 10 טעג, די פיגיערז זענען דראַפּט שארף.מיר וועלן אָפּשיקן צו סעקשאַנז אין קאַלטשערז אין אונדזער פריערדיקן סטאַטיק ביאָמימעטיק קולטור סיסטעם 20, 21 קאָנטראָל טנאָים (Ctrl) און מיר וועלן נוצן אונדזער ביז אַהער אָפּטימיזעד מיטל ווי MC באדינגונגען און קולטור אונטער סיימאַלטייניאַס מעטשאַניקאַל און עלעקטריק סטימיאַליישאַן (קולטור סטימיאַליישאַן.גערופן.ערשטער, מיר באשלאסן אַז מעטשאַניקאַל סטימיאַליישאַן אָן עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן איז ניט גענוגיק צו טייַנען געוועב ווייאַבילנאַס פֿאַר 6 טעג (סאַפּלאַמענערי פיג. 3 אַ, ב).ינטערעסטינגלי, מיט די הקדמה פון פיסיאָו-מעטשאַניקאַל און עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן מיט סטקם, די ווייסאַביליטי פון 12-טאָג האַרץ סעקשאַנז אונטער מס-קאָנדיטיאָנס, אָבער נישט אונטער קטרל טנאָים, אָבער ניט אונטער די MTT אַנאַליסיס (פיג. 1).3 אַ).דאָס סאַגדזשעסץ אַז מעטשאַניקאַל סטימיאַליישאַן און סימיאַליישאַן פון די קאַרדיאַק ציקל קענען האַלטן געוועב סעקשאַנז ווייאַבאַל פֿאַר צוויי מאָל ווי לאַנג ווי געמאלדן אין אונדזער פריערדיקן סטאַטיק קולטור סיסטעם.אָבער, אַסעסמאַנט פון די סטראַקטשעראַל ינטעגראַטיטי פון געוועבן סעקשאַנז דורך יממונאָלאַבלינג פון קאַרדיאַק טראָפּאָנין ה און קאָננעקסין 43 אַנטדעקן די קאַנעקשאַן 43 אויסדרוק איז באטייטיק העכער אין MC געוועבן אויף טאָג 12 ווי אין קאָנטראָלס אויף דער זעלביקער טאָג.יונאַפאָרמלי קאָננעקסין 43 אויסדרוק און די ד דיסק פאָרמירונג איז נישט גאָר מיינטיינד (פיג. 3 ב).מיר נוצן אַ קינסטלעך סייכל (אַי) פריימווערק צו קוואַנטאַפיי געוועב סטראַקטשעראַל ינטאַקשאַן 26, אַ בילד-באזירט טיף לערנען רערנ - ליניע באזירט אויף טראָפּאָנין סטאַינינג 43 צו אויטאָמאַטיש קוואַנטירט.26. MC געוועב געוויזן ימפּרוווד סטראַקטשעראַל ענלעכקייט צו טאָג 0 קאַמפּערד צו סטאַטיק קאָנטראָל סעקשאַנז.בשעת CTCM געוואקסן די ווייאַבילאַטי פון האַרץ געוועב, די סעקשאַנז אין טאָג 12 צו אַ הייך ענלעך צו אַז פון פריש האַרץ געוועב, עס האט נישט באטייטיק פֿאַרבעסערן די סטראַקטשעראַל אָרנטלעכקייַט פון די האַרץ סעקשאַנז.
אַ באַר גראַפיק ווייזט קוואַנטאַפאַקיישאַן פון די מטט ווייאַבילאַטי פון פריש האַרץ סלייסיז (ד 0 (ד 12 (ד 12 סענטימעטער קולטור (ד 12 סענטיק קולטור (ד 12 קטקם (ד 12 סענטימעטער עד צו ד 12 קטרל). אַ באַר גראַפיק ווייזט קוואַנטאַפאַקיישאַן פון די מטט ווייאַבילאַטי פון פריש האַרץ סלייסיז (ד 0 (ד 12 (ד 12 סענטימעטער קולטור (ד 12 סענטיק קולטור (ד 12 קטקם (ד 12 סענטימעטער עד צו ד 12 קטרל).די היסטאָגראַם ווייזט די קוואַנטאַפאַקיישאַן פון די ווייאַבילאַטי פון MTT פריש האַרץ סעקשאַנז (D0) אָדער קולטור פון האַרץ סעקשאַנז פֿאַר 12 טעג אין יעדער סטאַטיק קולטור (ד 12 (ד 12 (ד 01), 15 (ד 12 מעגאבייטן) סעקשאַנז / גרופּע פון ​​פאַרשידענע פּיגס, אַ איין-וועג אַנאָוואַ פּרובירן איז געטאן;#### P <0,0001 צושטאַנד - ד 0 И0 И Mar <0,01 פירמע С ד 12 קטרל). א 猪 显示 显示 在 静态 (ד 12 קטרל) 切片 קטקם (ד 12 מעגאבייטן) (ד 0 进行 单向 单向 心脏 心脏 心脏 心脏 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 的 的 的 的## P <0.0001, 与 d12 Ctrl 相比, ** פּ <0.01). היסטאָגראַם ווייַזונג די קוואַנטאַפאַקיישאַן פון מטט ווייאַבילאַטי אין פריש האַרץ סעקשאַנז (ד 0) אָדער האַרץ סעקשאַנז פּאָלאַקשאַנז קאַלטאַוואַק (ד 12 (ד 01), 15 (ד 01), 15 (ד 01).#### P <0,0001 צושטאַנד - ד 0, ** פּ <0,01 פירמע С ד 12 קטרל). #### p <0.0001 קאַמפּערד צו D0, ** פּ <0.01 קאַמפּערד צו D12 Ctrl).ב טראָפּאָנין-ה (גרין), Connexin 43 (רויט) און דאַפּי (בלוי) אין פרעשלי אפגעזונדערט האַרץ סעקשאַנז (MC) אָדער CTCM) קינסטלעך סייכל קוואַנטיפיקאַטיאָן פון די האַרץ געוועב סטראַקטשעראַל ינטעגריטי (N = 7 (D0), 7 (ד 12 קטרל), 5 (ד 12 קטרל), 5 (ד 12 קטרל) סלייסיז / גרופּע-גר legred ף <0.0001 איז דורכגעקאָכט; קינסטלעך סייכל קוואַנטיפיקאַטיאָן פון די האַרץ געוועב סטראַקטשעראַל ינטעגריטי (N = 7 (D0), 7 (ד 12 קטרל), 5 (ד 12 קטרל) סלייסיז / גרופּע יעדער פון פאַרשידענע פּיגס / גרופּע יעדער פון די An12 קטרל). שרייבן אַוסטראַלי פאַרייניקטע שטאַטן אין די פאַרייניקטע שטאַטן פֿאַר אַוסטראַלז (ד 0 (ד 0 (ד 0 (ד 01), 7 (D12 קטר ★ С ся Одоктторный тест anova; #### p <0,0001 צום טאָג קוואַנטאַפאַקיישאַן פון סטראַקטשעראַל אָרנטלעכקייַט פון קאַרדיאַק געוועב דורך קינסטלעך סייכל (n = 7 (D0), 5 (ד 12 קטרל) סעקשאַנז / גרופּעס פון די 0.0001 ווס.人工 智能量化 心脏 组织 结构 结构 (N = 7 (D0), 7 (ד 12 קטרל), 5 (ד 12 קטרל) סלייסיז / גרופּע יעדער פון פאַרשידענע חזיר, OFF## P <0.0001.人工 智能量化 心脏 组织 结构 结构 (N = 7 (D0), 7 (ד 12 קטרל), 5 (ד 12 קטרל) סלייסיז / גרופּע יעדער פון פאַרשידענע פּיגס, איין-וועג## P <0.19,0001. סטיראָוס איז אַ ענקאָנק אין אַ פּלאַץ פון אַ רודערן סטריט סיסטעם (ד 0 (ד 0 (ד 01), 7 (ד 12 קטרל), 7 (ד 12 קטראַ), 7 (ד 12 קטראַ), 7 (ד 12 קטר , אַקסעסעריז די Arova; #### פּ <0,0001 ווס. V0 פֿאַר מער אינפֿאָרמאַציע **** פּ <0,0001 צושטאַנד - ד 12 קטרל). קינסטלעך סייכל צו קוואַנטאַפיי די סטראַקטשעראַל אָרנטלעכקייַט פון קאַרדיאַק געוועב (N = 7 (D0), 7 (ד 12 קטרל) סעקשאַנז / גרופּע יעדער פון פאַרשידענע פּיגס, אָדער פאַרגלייַך **** p <0.0001 קאַמפּערד צו D12 CTRL). C רעפּרעסענטאַטיווע בילדער (לינקס) און קוואַנטאַפאַקיישאַן (רעכט) פֿאַר האַרץ סלייסאַז סטיינד מיט טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריטשראָמע סטאַין (μ m קאַמפּערד מיט D12 Ctrl). C רעפּרעסענטאַטיווע בילדער (לינקס) און קוואַנטאַפאַקיישאַן (רעכט) פֿאַר האַרץ סלייסיז סטיינד מיט טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריסאָן ס טריטשראָמע סטאַין (וואָג נאַקעט = 500 סלייסיז / גרופּע יעדער פון פאַרשידענע פּיגס / גרופּע. C רעקאָרדישע (Слева). N = 10 Стрезов / C רעפּרעסענטאַטיווע בילדער (לינקס) און קוואַנטאַפאַקיישאַן (רעכט) פון האַרץ סעקשאַנז סטיינד מיט טרוסאָן ס טריטשראָמע פלעק (ונקאָטיד וואָג = 500 μ ם) (μ μ m טעסט איז דורכגעקאָכט; #### p <0.0001 קאַמפּערד צו D0 און *** P <0.001 קאַמפּערד מיט D12 CTRL). C רעפּרעסענטאַטיווע בילדער (לינקס) און קוואַנטאַטיישאַן (רעכט) פון האַרץ סעקשאַנז סטאַינערז סטאַינעד מיט טריסאָן ס טריסאָן ס טריטשראָמע פלעק (פּוסט = 500 μ ם) (μ m קאַמפּערד מיט ד 12 קטרל).טעות באַרס רעפּראַזענץ די דורכשניטלעך ± נאָרמאַל דיווייישאַן.
מיר כייפּאַטאַסייזד אַז דורך אַדינג קליין מאָלעקולעס צו די קולטור מיטל, קאַרדיאָמיאָסיטע אָרנטלעכקייַט קען זיין ימפּרוווד און פיבראָסיס אַנטוויקלונג רידוסט בעשאַס קטקם קולטור.מיר דעריבער סקרעעד פֿאַר קליין מאָלעקולעס ניצן אונדזער סטאַטיק קאָנטראָל קאַלטשערז 20,21 רעכט צו דער קליין נומער פון קאַנפאַונדינג סיבות.דעקסאַמעטהאַסאָנע (דעקס), טריאָדאָטהאָנין (ט 3), און SB431542 (SB) זענען אויסדערוויילט פֿאַר דעם פאַרשטעלן.די קליין מאַלאַקיולז האָבן ביז אַהער געניצט אין היפּסק-סענטימעטער קאַלטשערז צו פאַרשאַפן די פּראָדוקציע פון ​​קאַרדיאָמיאָסיטעס דורך ינקריסינג סאַראָמאָמעאָסיטעס דורך ינקריסינג סאַרקאָמאָמער לענג, ט-טובולעס, און קאַנדאַקשאַן גיכקייַט.אין דערצו, ביידע דעקס (אַ גלוקאָסאָסאָיד) און סב איז באַוווסט צו פאַרשטיקן אָנצינדונג29,30.דעריבער, מיר טעסטעד צי די ינקלוזשאַן פון איינער אָדער אַ קאָמבינאַציע פון ​​די קליין מאָלעקולעס וואָלט פֿאַרבעסערן די סטראַקטשעראַל אָרנטלעכקייַט פון האַרץ סעקשאַנז.פֿאַר ערשט זיפּונג, די דאָזע פון ​​יעדער קאַמפּאַונד איז געווען סעלעקטעד באזירט אויף די קאַנסאַנטריישאַנז קאַמאַנלי געניצט אין צעל קולטור מאָדעלס (1 μ ם דעקס 27, 100 נם ט 327, און 2.5 μ ם סב 31).נאָך 12 טעג פון קולטור, די קאָמבינאַציע פון ​​ט 3 און דעקס ריזאַלטיד אין אָפּטימאַל קאַרדיאָמיאָסיטע סטראַקטשעראַל ינטעגריטי און מינימאַל פייבראַס רימאַדאַלינג (סאַפּלאַמענטערי פיגיערז 4 און 5).אין אַדישאַן, נוצן פון טאָפּל אָדער טאָפּל די קאַנסאַנטריישאַנז פון ט 3 און דעקס געשאפן דיליפעראַס יפעקץ קאַמפּערד צו נאָרמאַל קאַנסאַנטריישאַנז (סאַפּלאַמענטערי פיג. 6 אַ, ב).
נאָך ערשט זיפּונג, מיר פּערפאָרמד אַ קאָפּ-צו-קאָפּ פאַרגלייַך פון 4 קולטור טנאָים (פיגורע 4A): Ctrl:20.21 טד: ט 3 און Ctrl S צוגעגעבן דעקס אויף מיטוואך;MC: האַרץ סעקשאַנז געבילדעט אין CTCM מיט אונדזער ביז אַהער אָפּטימיזעד מיטל;און מט: קקטקם מיט ט 3 און דעקס צוגעגעבן צו די מיטל.נאָך 12 טעג פון קאַלטיוויישאַן, די ווייאַבילאַטי פון מיז און מט געווירץ פארבליבן די זעלבע ווי אין פריש געוועבן אַססעססעד דורך MTT אַססעסס (פיג. 4 ב).ינטערעסטינגלי, די דערצו פון ט 3 און דעקס צו טראַנסוועל קאַלטשערז (טד) האט נישט רעזולטאַט אין אַ באַטייַטיק פֿאַרבעסערונג אין ווייאַבילאַטי קאַמפּערד מיט קטרל טנאָים, וואָס ינדאַקייטינג אַ וויכטיק ראָלע פון ​​מאַקאַניקאַל סטימיאַליישאַן אין מיינטיינינג די ווייאַבילאַטי פון האַרץ סעקשאַנז.
א יקספּערמענאַל פּלאַן דיאַגראַמע וואָס שילדערן די פיר קולטור טנאָים געניצט צו אָפּשאַצן די יפעקס פון מעטשאַניקאַל סטימיאַליישאַן און ט 3 / דעקס סופּפּלעמענטאַטיאָן אויף מיטל פֿאַר 12 טעג. bar nar gario wult quantification of viestiater 12 טעג פּאָסטן קולטור אין אַלע 4 קולטור טנאָים (קטרל, טד, מט, מט) קאַמפּערד מיט פריש האַרץ סלייסיז (D0) (D0) (D0) (D0) (D0) (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (ד 12 ט 1) (ד 12 קט). ד 0 און ** פּ <0.01 קאַמפּערד צו ד 12 קטרל). bar nar gario wult quantification of viestiater 12 טעג פּאָסטן קולטור אין אַלע 4 קולטור טנאָים (קטרל, טד, מט, מט) קאַמפּערד מיט פריש האַרץ סלייסיז (D0) (D0) (D0) (D0) (D0) (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (D0 (ד 12 ט 1) (ד 12 קט). ד 0 און ** פּ <0.01 קאַמפּערד צו ד 12 קטרל). ב די באַר גראַפיק ווייזט די קוואַנטאַפאַקיישאַן פון ווייאַבילאַטי ביי 12 טעג פּאָסטן קולטור אין אַלע 4 קולטור טנאָים (קאָנטראָל, טד, מט, מט) קאַמפּערד מיט פריש האַרץ סעקשאַנז (ד 01), 15 (ד 12 קט 1,0001, ### p <0.001 ווס. ד 0 און ** פּ <0.01 ביי קאַמפּערד מיט ד 12 קטרל). ב 条形图 显示 显示 4 种 培养 培养 (Ctrl, TD, MC 和 MT) 与 新鲜 心脏 (D0) (D0), 15 (D1 (D0 组 单向 单向 单向 单向 单向 单向 单向 单向 单向 单向 进行 单向 进行 培养 培养 培养 培养 培养 培养 培养 培养 培养 (קטרל, MC 和 מט) 与 新鲜 心脏 (D0), 15 (D1 (D0 猪), 17 (D12 MC), 来自 单向 条形图 单向 条形图 单向 单向 单向 单向 单向 单向 培养 培养 培养 培养 培养 培养 培养 培养 培养 (קטרל, MC 和 MT) 与 新鲜 心脏 (D0), 15 (D1 (D0 猪 单向 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪;相比, ** פּ <0.01 ℃ ד 12 ℃).ב 4 12 (ד 12 מק) B ge истограма ,Ащащщщщ в в в в в Усе 4 נייַ נייַעס אין אנדערע שפּראַכן, און מט) (ד 0), 15 (ד 0) 15 (ד 0) 15 (ד 01) ), האָט איבערבליקן 12 (D12 MC) ב. CA באַר גראַפיק ווייזט די קוואַנטאַפאַקיישאַן פון גלוקאָוס פלאַקס 12 טעג פּאָסטן קולטור אין אַלע 4 קולטור טנאָים (קטרל, טד, מט, מט) קאַמפּערד מיט D1) (N = 6 סלייסיז / גרופּע איז דורכגעקאָכט; CA באַר גראַפיק ווייזט די קוואַנטאַפאַקיישאַן פון גלוקאָוס פלאַקס 12 טעג פּאָסטן קולטור אין אַלע 4 קולטור טנאָים (קטרל, טד, מט, מט) קאַמפּערד מיט D1) (N = 6 סלייסיז / גרופּע איז דורכגעקאָכט; C Гистограмает кокозывает кокаественуюутенуюукеную Потока isourюкез 12 טעג נייַעס אין אנדערע שפּראַכן. Сравнею с со свежими сердца (D0) (N = 6 Дрезопу от разных с и0 и0 и0 и0 и0 in * in1 И0 и 0,001 С ד 12 קטרל). C היסטאָגאַגראַם ווייַזן קוואַנטאַפאַקיישאַן פון גלוקאָוס פלאַקס 12 טעג פּאָסטן-קולטור אונטער אַלע 4 קולטור טנאָים (קאָנטראָל, טד, מק און מט) קאַמפּערד מיט פריש האַרץ סעקשאַנז (ד 0) (ען = 6 סעקשאַנז (D0 Evalys Pe <0.001 קאַמפּערד מיט D12 CTRL). C 条形图 条形图 4 种 培养 培养 (Ctrl, TD, MC 相比 MT) 与与** 心脏 (D0) 相比, 12 天 的 葡萄糖 葡萄糖 葡萄糖 葡萄糖 葡萄糖 葡萄糖 葡萄糖 葡萄糖, 来自 不同 不同, 来自 不同 来自, 来自 不同 不同 执行 来自 来自 来自 来自 来自 来自 来自 来自 来自 来自 来自 来自 来自 条形图 来自 条形图 条形图 条形图 条形图 显示 4 种 培养 培养 C 条形图 向 4 种 执行 条件 ((קטרל, טד, MC 和 מט) 新鲜新鲜 切片 D0 切片 后 后 的 的 的 的 (n = 的 的 的 通量 的 通量 通量 通量 通量 通量 通量 的 的 的 的 的 的 条形图 条形图 向 向 向 向 向 向 向 向 向 执行 执行 ((Ctrovent; ### p <0.001, 切片 d0 后 的 的)相比). C Гистограма, Показываюая коливесенуюутенунунунунунуко Потока zubertions в иней послез ислех для исех иловий ульовививистовивия бультисивистовистовия бультий ульовивания (באַשיצן די 4 יאָר. ) איר קענען האָבן אַ פּלאַץ פון די לעצטע (D0) (D0) (N = 6 Дрезов / грезов / От разнних Бтоведи сооведи сооведороный с тововнеюнистеноный со сростов д <0,001 П <, *** פּ <0,001 Равнею С D12 (קאָנטאָרענץ). C היסטאָגראַם ווייַזונג קוואַנטאַפאַקיישאַן פון גלוקאָוס פלאַקס אין 12 טעג פּאָסטן-קולטור פֿאַר אַלע 4 קולטור טנאָים (קאָנטראָל, טד, מט, מט) קאַמפּערד מיט פריש האַרץ סעקשאַנז (ד 0, 6 סעקשאַנז זענען דורכגעקאָכט, יונאַלאַטעראַל איז דורכגעקאָכט <0.001 קאַמפּערד צו ד 12די שפּאַנונג אַנאַליסיס פּלאַץ פון פריש (בלוי), טאָג 12 מק (גרין), און טאָג 12 מט (רויט) געוועבן בייַ צען רעגיאָנאַל געוועב פון די רייעך (N = 4 סלייסיז / גרופּע, איין-וועג אַנאָוואַ טעסט; עס איז געווען קיין באַטייַטיק חילוק צווישן גרופּעס).E וואָלקאַנאָ פּלאַנעווען ווייַזונג דיפערענטשאַלי אויסגעדריקט גענעס אין פריש האַרץ סעקשאַנז (ד 0) קאַמפּערד צו האַרץ סעקשאַנז קולטורעד אונטער סטאַטיק טנאָים (קטרל) אָדער אונטער מט) פֿאַר 10-12 טעג.F העאַטמאַפּ פון Sarcomere Genes פֿאַר האַרץ סעקשאַנז קולטורעד אונטער יעדער פון די קולטור טנאָים.טעות באַרס רעפּראַזענץ די דורכשניטלעך ± נאָרמאַל דיווייישאַן.
מעטאַבאַליק אָפענגיקייַט אויף די באַשטימען פון פאַטי זויער אַקסאַדיישאַן צו גלייקאָליסיסיס איז אַ כאַלמאַרק פון קאַרדיאָמיאָסיאָסיטעד דיסיפערענטיאַטיאָן.ומצייַטיק קאַרדיאָמייאָסיטעס בפֿרט נוצן גלוקאָוס פֿאַר אַפּ פּראָדוקציע און האָבן היפּאָפּלאַסטיק מיטאָטשאָנדריאַ מיט ווייניק CRistAE5,32.גלוקאָוס יוטאַלאַזיישאַן אַנאַליזעס געוויזן אַז אונטער מק און מט באדינגונגען, גלוקאָוס יוטאַלאַזיישאַן איז ענלעך צו דעם אין טאָג 0 געוועבן (פיגורע 4 ק).די קטרל סאַמפּאַלז געוויזן אַ באַטייטיק פאַרגרעסערן אין גלוקאָוס יוטאַלאַזיישאַן קאַמפּערד מיט פריש געוועב.דאָס ינדיקייץ אַז די קאָמבינאַציע פון ​​קטקם און ט 3 / דעקס ימפּרוווז געוועב ווייאַבילאַטיז און ייַנגעמאַכץ די מעטאַבאַליק פענאָטיפּע פון ​​12-טאָג קאַלטשערד האַרץ סעקשאַנז.אין דערצו, שפּאַנונג אַנאַליסיס געוויזן אַז שפּאַנונג לעוועלס פארבליבן די זעלבע ווי אין פריש האַרץ געוועב פֿאַר 12 טעג אונטער מט און מס טנאָים (פיג. 4 ד).
צו אַנאַלייז די קוילעלדיק פּראַל פון קטקם און ט 3 / דעקס אויף די גלאבאלע טראַנסקריפּטיאָנאַל לאַנדשאַפט פון קאַרדיאַק רעפטל, מיר דורכגעקאָכט RNASEQ אויף קאַרדיאַק סלייסיז פון אַלע פיר דיסערסאַנסעס (העסאָפע.ינטערעסטינגלי, מט סעקשאַנז געוויזן הויך טראַנסקריפּשאַן ענלעכקייט צו פריש האַרץ געוועב, מיט בלויז 16 דיפערענטשאַלי אויסגעדריקט פון 13,642 גענעס.די דאַטן זענען באשטעטיקט דורך QRT-PCR פון האַרץ און פיבראָבלאַסט גענעס (העסאָפע פיג. 7 אַ-C).ינטערעסטינגלי, די קטרל סעקשאַנז געוויזן דאַונטרעגיאַליישאַן פון קאַרדיאַק און צעל ציקל גענעס און אַקטאַוויישאַן פון ינפלאַמאַטאָרי דזשין מאָם מגילה.די דאַטן פֿאָרשלאָגן אַז דיספערענטיאַטיאָן, וואָס נאָרמאַלי אַקערז נאָך לאַנג-טערמין קאַלטשערינג, איז גאָר אַטטענואַטעד אונטער מט טנאָים (סאַפּלאַמענערי פיג. 8 אַ, ב). 8 אַ, ב).אָפּגעהיט לערנען פון Sarcomere Genes געוויזן אַז בלויז אונטער די באדינגונגען זענען די גענעס קאָדירונג די Sarkomere (Fig. 4Fדי דאַטן באַווייַזן אַז מיט אַ קאָמבינאַציע פון ​​מאַקאַניקאַל און הומאָראַל סטימיאַליישאַן (ט 3 / דעקס), די האַרץ רעפטל טראַנסקריפּטאַרט קענען בלייַבן ענלעך צו פריש האַרץ סלייסיז נאָך 12 טעג אין קולטור.
די טראַנסקריפּטיאָנאַל פיינדינגז זענען געשטיצט דורך די פאַקט אַז די סטראַקטשעראַל אָרנטלעכקייַט פון קאַרדיאָמיאָסיטעס אין האַרץ סעקשאַנז איז בעסטער אפגעהיט אונטער מט טנאָים פֿאַר 12 טעג, ווי געוויזן דורך בעשאָלעם און לאָוקאַלייזד קאַנעקסין 43 (פיג. 53 (פיג. 5 אַ).אין דערצו, פייבראָסיס אין האַרץ סעקשאַנז אונטער מט טנאָים איז געווען באטייטיק רידוסט קאַמפּערד מיט קטרל און ענלעך צו פריש האַרץ סעקשאַנז (Fig. 5 ב).די דאַטן באַווייַזן אַז די קאָמבינאַציע פון ​​מאַקאַניקאַל סטימיאַליישאַן און ט 3 / דעקס באַהאַנדלונג יפעקטיוולי פּראַזערווז קאַרדיאַק סטרוקטור אין האַרץ סעקשאַנז אין קולטור.
א פארשטייער יממונאָפלואָרעססענסע בילדער פון טראָפּאָנין-ה (גרין), קאַנעקסין 43 (רויט), און דאַפּי (בלוי) אין פרעשלי אפגעזונדערט האַרץ סעקשאַנז (ד 0 טעג אין אַלע פיר האַרץ אָפּטיילונג קולטור טנאָים (וואָג באַר = 100 μ ם).). קינסטלעך סייכל קוואַנטראַפאַקיישאַן פון די האַרץ געוועב סטראַקטשעראַל ינטעגריטי (N = 7 (D0 און ד 12 קסטרל), 5 (ד 12 ט 12 סענטימעטער, איין-וועג \ #### p <0.0001 קאַמפּערד צו D12 Ctrl). קינסטלעך סייכל קוואַנטראַפאַקיישאַן פון די האַרץ געוועב סטראַקטשעראַל ינטעגריטי (N = 7 (D0 און ד 12 קסטרל), 5 (ד 12 ט 12 סענטימעטער, איין-וועג \ #### p <0.0001 קאַמפּערד צו D12 Ctrl). די סאָרט פון די טעריטאָריע איז קיין מאַסאַזש טאַקאַלאַנס сардца исустеного исощтеного исощمного исощمного исощمного исощمного исощمного исощمного исощمного исощمного исощمного исощеного исощمного исощمного исощمного исощمного исустелекта (N12 CTRL), 5 (D11 क д 12 Д1 क д 12 Д1 क д12 g1 क д 12 Д0 и d12 g1 и d12 g1 и d12 g1 и d12 g1. ВЕней Виненен офгрорный тест Anova; #### P <0,0001 צום ד 0 И0 и 0,05 אָדער *** **** פּ <0,0001 צושטאַנד - Сравнею С ד 12 קטרל). קוואַנטאַפאַקיישאַן פון סטראַקטשעראַל ינטעגריטי פון האַרץ געוועב ניצן קינסטלעך סייכל (n = 7 (D0 און D12 CTRL), 5 (D12 MT, O1 ° C <0.05 אָדער **** p <0,0001 קאַמפּערד צו D12 CTRL).קוואַנטאַפאַקיישאַן פון סטראַקטשעראַל אָרנטלעכקייַט פון קאַרדיאַק געוועב מיט קינסטלעך סייכל אין פאַרשידענע פּיגס (N = 7 (D0 and L11 און D12 CTRL), 5 (D12 MC און D12 MC און D12 MT) סעקשאַנז / גרופּע) סעקשאַנז / גרופּע) פּלאַן#### P <0,0001 צושטאַנד - ד 0 и 0 и * и * и * P <0,05 אָדער **** פּ <0,0001 צושטאַנד - ד 12 קטרל). #### p <0.0001 קאַמפּערד צו D0 און * P <0.05 אָדער **** p <0.0001 קאַמפּערד צו D12 Ctrl). b 12 קטרל). b 12 קטרל). b 用 Mason 三三 染料 染色 的 切片 的 方 差 差 差 差 差 差 差 差 差) 0.001, 或 **** p <0.0001 与 ד 12 קטרל 相比). b 12 מט) שטאט טעמפּאָ стных скиней / Группы, Один-- Speal mang aanova; #### p <0,001 или **** p <0,0001 פון די ד 12 קטרל). ב רעפּרעסענטאַטיווע בילדער און קוואַנטאַפאַקיישאַן פון האַרץ סעקשאַנז פון פאַרשידענע פּיגס / גרופּע, איין אַנאָוואַ אופֿן;טעות באַרס רעפּראַזענץ די דורכשניטלעך ± נאָרמאַל דיווייישאַן.
לעסאָף, די פיייקייט פון CTCM צו מימיקער קאַרדיאַק כייפּערטראָפי איז געווען אַססעססעד דורך ינקריסינג קאַרדיאַק געוועב.אין קטקם, שפּיץ לופט קאַמער דרוק געוואקסן פון 80 ממד צו 80 מממה.קונסט.(נאָרמאַל אויסשטרעקן) אַרויף צו 140 מממה קונסט.(פיג. 6 אַ).דאָס קאָראַספּאַנדז צו אַ 32% פאַרגרעסערן אין אויסשטרעקן (Fig. 6 ב), וואָס איז געווען פריער געוויזן ווי די קאָראַספּאַנדינג פּראָצענט אויסשטרעקן איז פארלאנגט פֿאַר האַרץ סעקשאַנז צו דערגרייכן אַ סאַרקאָמפערראָפּעד, ענלעך צו דעם געזען אין כייפּערטראָפי.אויסשטרעקן און גיכקייַט פון קאַרדיאַק געוועב בעשאַס קאַנטראַקשאַן און אָפּרו פארבליבן קעסיידערדיק בעשאַס זעקס טעג פון קולטור (פיג. 6 ק).קאַרדיאַק געוועב פון מט טנאָים איז געווען אונטערטעניק צו נאָרמאַל סטרעטטשעט (מט (נאָרמאַל)) אָדער אָוווערסטרעטש טנאָים (מט (אַס)) פֿאַר זעקס טעג.נאָך פיר טעג אין קולטור, די כייפּערטראָפיק ביאָמאַרקער אין די פּראָבנפּ איז געווען באטייטיק עלעוואַטעד אין די מיטל אונטער MT (OS) באדינגונגען קאַמפּערד מיט MT (נאָרמאַל).אין זעקס טעג פון קאַלטשערינג, די צעל גרייס אין מט (אַס) (פיג. 7 ב באטייטיק געוואקסן קאַמפּערד צו סעקשאַנז פון מט האַרץ (נאָרמאַל).אין דערצו, NFatc4 יאָדער טראַנסלאָסאַטיאָן איז געווען באטייטיק געוואקסן אין אָוווערסטרעסט געוועבן (פיג. 7 ק).די רעזולטאַטן ווייַזן די פּראָגרעסיוו אַנטוויקלונג פון פּאַטאַלאַדזשיקאַל רימאַדאַלינג נאָך היפּערדיסטענשאַן און שטיצן דער באַגריף אַז די באַגריף איז געניצט ווי אַ פּלאַטפאָרמע צו לערנען סטרעטטשעט-ינדוסט קאַרדטראָפי סיגנפיקייַט סיגנאָפי סיגנאַלינג.
רעפּרעסענטאַטיווע שפּור פון לופט קאַמער דרוק, פליסיק קאַמער דרוק, און געוועב באַוועגונג מעזשערמאַנץ באַשטעטיקן אַז קאַמער דרוק ענדערונגען פליסיק קאַמער דרוק, קאָזינג אַ קאָראַספּאַנדינג באַוועגונג פון די געוועב רעפטל.ב פארשטייער פון די פארשטייער און אויסשטרעקן קורס פֿאַר נאָרמאַלי אויסגעשטרעקט (מאַראַנץ) און אָוווערסטרעסט (בלוי) געוועב סעקשאַנז.C באַר גראַפיק וואָס ווייַזונג ציקל צייט (N = 19 סלייסיז פּער גרופּע, פון פאַרשידענע פּיגס), צונויפנעמען צייט (n = 18-19 סלייסיז פּער גרופּע, פון פאַרשידענע פּיגס / גרופע באַוועגונג, פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס), פון פאַרשידענע פּיגס; גרופּעס) פון פאַרשידענע פּיגס), צוויי-טיילד תּלמיד ס ט-פּרובירן קיין באַטייַטיק חילוק אין קיין פּאַראַמעטער, וואָס ינדיקייץ אַז די פּאַראַמעטערס זענען נישט קעסיידערדיק בעשאַס 6 טעג.טעות באַרס רעפּראַזענץ די דורכשניטלעך ± נאָרמאַל דיווייישאַן.
אַ בראָג פון די באַר גראַפיק קוואַנטאַפאַקיישאַן אַ בראָג פון די באַר גראַפיק קוואַנטאַפאַקיישאַןקוואַנטיטאַטיווע היסטאָגראַם פון NT-Prompnp קאַנסאַנטריישאַן אין קולטור מיטל פון האַרץ סלייסיז גאַלטשאַרדעד אונטער באדינגונגען פון נאָרמאַל מט** פּ <0,01 פירמע לויט מער אינפֿאָרמאַציע). ** פּ <0.01 קאַמפּערד צו נאָרמאַל אויסשטרעקן). א 在 מט 正常 (קלאַל (OS) 条件 下 的 的 的 心脏 切片 切片 切片 培养 培养 培养 培养 נט-פּראָבנפּ 浓度 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 条形 条形 条形 猪 猪 猪 猪 条形 条形 条形 猪 条形 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 正常 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 的 的) 01). אַ קוואַנטאַפאַקיישאַן פון נט-פּראָטימנפּ קאַנסאַנטריישאַן אין האַרץ סלייסיז געבילץ ביליק אונטער מט נאָרמאַל אויסשטרעקן (קלאַל) אָדער אָווועררייטש (ען) קאָנדנעהיסטאָגראַם קוואַנטאַפאַקיישאַן פון NT-Prompnp קאַנסאַנטריישאַנז אין האַרץ סלייסיז קאַלטאַווייטאַד אונטער באדינגונגען פון נאָרמאַל מט סטרעטש (קלאַל) סלייסיז / גרופּע פון ​​פאַרשידענע פּיגס, צוויי-וועג אַנאַליסיס פון ווערייישאַן;** פּ <0,01 פירמע לויט מער אינפֿאָרמאַציע). ** פּ <0.01 קאַמפּערד צו נאָרמאַל אויסשטרעקן). ב רעפּרעסענטאַטיווע בילדער פֿאַר האַרץ סלייסיז סטיינד מיט טראָפּאָנין-ה און ווגאַ (לינקס) און די קוואַנטאַפאַקיישאַן (רעכט) (ד 6 מטעס, סעלז / גרופּע פון ​​פאַרשידענע פּיגס, סעלז / גרופּע פון ​​פאַרשידענע פּיגס זענען דורכגעקאָכט; **** p <0.*** p <0.801 קאַמפּערד מיט נאָרמאַל סטרעטשירט). ב רעפּרעסענטאַטיווע בילדער פֿאַר האַרץ סלייסיז סטיינד מיט טראָפּאָנין-ה און ווגאַ (לינקס) און די קוואַנטאַפאַקיישאַן (רעכט) (ד 6 מטעס, סעלז / גרופּע פון ​​פאַרשידענע פּיגס, סעלז / גרופּע פון ​​פאַרשידענע פּיגס, סעלז / גרופּע איז דורכגעקאָכט; **** p <0.801 קאַמפּערד מיט נאָרמאַל B רעקאָרדינג און סעקסידערז, אָבער, עס איז געווען די מאַקסימום-ט און קאָו (Слева) и Клева размелекра разметок (Справа) (ען = 3309 (ד 6 מטנעאָרם) קילן / גוראָ עאַס און 10 באַמערקונגען. . ב רעפּרעסענטאַטיווע בילדער פון האַרץ סעקשאַנז סטיינד מיט טראָפּאָנין-ה און אַזפּ (לינקס) און קוואַנטאַפאַקיישאַן (רעכט) (ד 6 מטעס, סעלז / גרופּע פון ​​פאַרשידענע פּיגס זענען דורכגעקאָכט; **** p <0.0001 ב רעפּרעסענטאַטיווע בילדער פון האַרץ סלייסיז סטיינד מיט קאַלקאַרעין-ה און ווגאַ (לינקס) און צעל גרייס (רעכט) (רעכט) (ען = 3309 פון 10 פאַרשידענע סלייסיז (ד 6 מטנאָם)))))) סעלז / קאַמפּערד מיט נאָרמאַל סטרעטשינג, **** p <0501). B רעקאָרדינג און סעקסעטעדזשאַוס טערסידזשיז, אָבער, Каева) и Клева) и Клетмесена рклеток (С = 330 (D6 MTOS), 369 (ד 6 מטס), 369 (ד 6 מטאָ. נאָרמאַל) און 10 מינוט צו באַפרייַען די לעצטע פייץ קריג ב רעפּרעסענטאַטיווע בילדער פון האַרץ סעקשאַנז סטיינד מיט טראָפּאָנין-ה און אַזפּ (לינקס) און קוואַנטאַפאַקיישאַן פון צעל גרייס (ד 6 מטנס) פון 10 פאַרשידענע פּיגס) פון פאַרשידענע פּיגס))**** p <0.0001 קאַמפּערד צו נאָרמאַל שפּאַנונג). C רעקאָרדינג און ספעיס אַרבאַדינג 0 און 6 טעג, טטאָס, עס איז געווען די Тля Тля Тля Тля Т и Коиконенная пранслокации nfatc4 Трнакрации nfatc4 Трнакрацини nfatc4 Трнакрацини nfatc4 Трнакнацина дранрацинацацинацацинкинкинкинкинкинки Трранслоки Ных Клеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) C רעפּרעסענטאַטיווע בילדער פֿאַר האַרץ סעקשאַנז בייַ 0 און 6 טעג מטאָס, Immunolabeled פֿאַר טראָפּאָנין-ה און נפאַטק 4, און קוואַנטאַפאַקיישאַן פון NFatC4 איבערזעצונג (N = 4 (D0)* פּ <0.05). C 用 于 肌钙 蛋白-蛋白 נפאַטק 4 免疫 标记 的的 天 / 组 天, mtos 进行 切片 的 的 代表性 代表性 代表性 不同 来自 不同 不同 核 核 核 核 核 核 核 核 核 核 核 核 的 的 的 的 的 的 核 核 核 的 核 的 的 核 核 用 用 用 用 c <0.05). C רעפּרעסענטאַטיווע בילדער פון קאַלאַנין-ה און נפאַטק 4 IMMUNOLABELINGE 切礼 0 天 和 和 和 和 MTOS האַרץ סלייסיז און NFatC4 פון פאַרשידענע NFATC4 ℃ 易位; * p <0.05). C רעקאָרדישע טאַטאַקשאַן פון דעם אַרטיקל און 6 טעג פון דיין Иммаркиркировки ТТ и Т и корест4 и Трреслокинации nfatc4 Трукрации nfatc4 Трукрации neрнацинацинацнацинка и Транслокации neрнацинацинацинкацинка и Транслокации natранслокоции natранслокации natранслокины х דאַונלאָוגעטן (N = 4 (D0), 3 (ד 6 מטאָס) מאַכן-אַרויף- двостатый t-Китеtristrie Стоентента; * פּ <0,05). C רעפּרעסענטאַטיווע בילדער פון MTOS האַרץ סלייסאַז אין טאָג 0 און 6 פֿאַר טראָפּאָנין-ה און נפאַטק 4 יממונאָלאַאַבאַלאַבעלינג און קוואַנטאַפאַקיישאַן פון NFatC4 איבערזעצונג אין די קערן פון סענטימעטער פון סענטימעטער פון ס <0.05).טעות באַרס רעפּראַזענץ מיינען ± נאָרמאַל דיווייישאַן.
טראַנסמאַציאַל קאַרדיאָווואַסקיאַלער פאָרשונג ריקווייערז סעללולאַר מאָדעלס וואָס אַקיעראַטלי רעפּראָדוצירן די קאַרדיאַק סוויווע.אין דעם לערנען, אַ CTCM דיווייס איז דעוועלאָפּעד און קעראַקטערייזד וואָס קענען סטימולירן די Ultrations סטימולירן די Ultrations סעקשאַנז פון די האַרץ.די קטקם סיסטעם ינקלודז פיזיאַלאַדזשיקלי סינגקראַנייזד ילעקטראָומאַכאַל סטימיאַליישאַן סטימיאַליישאַן און ט 3 און דעקס פליסיק ענריטשמענט.ווען פּאָראָנסינע האַרץ סעקשאַנז זענען יקספּאָוזד צו די סיבות, זייער ווייאַבילאַטי, סטראַקטשעראַל אָרנטלעכקייַט, מעטאַבאַליק טעטיקייט, און די טראַנסקריפּטיאָנאַל אויסדרוק איז די זעלבע ווי אין פריש האַרץ געוועב נאָך 12 טעג פון קולטור.אין דערצו, יבעריק סטרעטשינג פון קאַרדיאַק געוועב קענען אָנמאַכן היפּערטראָפי פון די האַרץ געפֿירט דורך כייפּערסטענשאַן.קוילעלדיק, די רעזולטאַטן שטיצן די קריטיש ראָלע פון ​​פיזיאַלאַדזשיקאַל קולטור טנאָים אין מיינטיינינג אַ נאָרמאַל קאַרדיאַק פענאָטיפּע און צושטעלן אַ פּלאַטפאָרמע פֿאַר מעדיצין זיפּונג.
פילע סיבות ביישטייערן צו שאַפֿן אַן אָפּטימאַל סוויווע פֿאַר די פאַנגקשאַנינג און ניצל פון קאַרדיאָמיאָסיטעס.די מערסט קלאָר ווי דער טאָג פון די סיבות זענען שייך צו (1) ינטערסעללולאַר ינטעראַקשאַנז, (2) ילעקטראָומאַשאַנאַל סטימיאַליישאַן, (3) הומאָראַל סיבות און (4) מעטאַבאַליק סאַבסטרייץ.פיסיאָלאָגיקאַל צעל-צו-צעל ינטעראַקשאַנז דאַרפן קאָמפּלעקס דריי-דימענשאַנאַל נעטוואָרקס פון קייפל צעל טייפּס געשטיצט דורך אַן עקסטראַסעללולאַר מאַטריץ.אַזאַ קאָמפּלעקס סעליאַלער ינטעראַקשאַנז זענען שווער צו רעקאָנסטרוירן אין וויטראָ דורך קאָ-קולטור פון יחיד צעל טייפּס, אָבער קענען זיין אַטשיווד לייכט ניצן די אָרגאַנאַטיישיק נאַטור פון האַרץ סעקשאַנז.
מעטשאַניקאַל סטרעטש און עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן פון קאַרדיאָמיאָסיטעס זענען קריטיש פֿאַר מיינטיינינג קאַרדיאַק פענאָטיפּע 33,34,35.בשעת מאַקאַניקאַל סטיקולאַטיאָן איז וויידלי געניצט פֿאַר היפּסק-סענטימעטער קאַנדישאַנינג און מאַטשוריישאַן, עטלעכע עלעגאַנט שטודיום האָבן לעצטנס געפרוווט מאַקאַניקאַל סטימיאַליישאַן פון האַרץ סלייסיז אין קולטור ניצן וניאַקסיאַל לאָודינג.די שטודיום ווייַזן אַז 2 ד יוניסיקיאַל מאַקאַניקאַל לאָודינג האט אַ positive ווירקונג אויף די פענאָטיפּע פון ​​די האַרץ בעשאַס קולטור.אין די שטודיום, די סעקשאַנז פון די האַרץ איז געווען לאָודיד מיט יסאָמעטריק טענסאַל פאָרסעס17, לינעאַר אוקסאָטאָניק לאָודינג 18, אָדער די קאַרדיאַק ציקל איז געווען ריקריייטיד ניצן קראַפט טראַנסדוסער באַמערקונגען און שפּאַנונג דרייווז.אָבער, די מעטהאָדס נוצן וניאַקסיאַל געוועב סטרעטש אָן ינווייראַנמענאַל אַפּטאַמאַזיישאַן, וואָס ריזאַלטינג אין די סאַפּרעשאַן פון פילע קאַרדיאַק גענעס אָדער אָוווערזשעשאַן פון גענעס פארבונדן מיט אַבנאָרמאַל אויסשטרעקן ענטפֿערס.די קטקם דיסקרייבד דאָ פּראָווידעס אַ 3 ד ילעקטראַשאַנאַקאַל סטימול, אַז מימיקס די נאַטירלעך קאַרדיאַק ציקל אין טערמינען פון ציקל צייט און פיזיאַלאַדזשיקאַל אויסשטרעקן (25% אויסשטרעקן, 40% סטרעטשיז, 60% דיאַסטאָל און 72 ביץ פּער מינוט).כאָטש די דריי-דימענשאַנאַל מאַקאַניקאַל סטימיאַליישאַן איז נישט גענוג צו טייַנען געוועב אָרנטלעכקייַט, אַ קאָמבינאַציע פון ​​הומאָראַל און מעטשאַניקאַל סטימיאַליישאַן ניצן ט 3 / דעקס איז פארלאנגט צו אַדאַקוואַטלי טייַנען געוועב, פונקציאָנירן, פונקטיוויטי.
הומאָראַל סיבות שפּיל אַ וויכטיק ראָלע אין מאַדזשאַלייטינג די דערוואַקסן האַרץ פענאָטיפּע.דאָס איז געווען כיילייטיד אין היפּס-סענטימעטער שטודיום אין וואָס ט 3 און דעקס זענען צוגעגעבן צו קולטור מעדיע צו פאַרגיכערן צעל מאַטשוריישאַן.ט 3 קען ווירקן די אַריבערפירן פון אַמינאָ אַסאַדז, שוגערז און קאַלסיום איבער צעל מעמבראַנעס 36.אין דערצו, ט 3 פּראַמאָוץ מהק-α אויסדרוק און מהק-β דאַונרעגיאַליישאַן, פּראַמאָוטינג די פאָרמירונג פון שנעל טוויטטש מיאָטשיאָמיאָסיטעס קאַמפּערד צו פּאַמעלעך טוויטש מיאָפיבראַלז אין פיטאַל סענטימעטער.ט 3 דיפישאַנסי אין היפּאָטהיראָיד פּאַטיענץ רעזולטאַטן אין די אָנווער פון MyOfibrillar באַנדס און אַ רידוסט קורס פון טאָן דעוועלאָפּמענט 37.דעקס אַקס אויף גלוקאָקאָרטיקאָיד ראַסעפּטערז און איז געוויזן צו פאַרגרעסערן מיאָקאַרדיאַס קאַנטראַקטיליטי אין אפגעזונדערט פּערוסוסעד הערצער;38 דער פֿאַרבעסערונג איז געדאַנק צו זיין שייך צו די ווירקונג אויף קאַלסיום אַוועקלייגן-געטריבן פּאָזיציע (סצאָע) 39,40.אין דערצו, דעקס ביינדז צו זיין ראַסעפּטערז, קאָזינג אַ ברייט ינטראַסעללולאַר ענטפער אַז סאַפּרעסיז ימיון פונקציע און אָנצינדונג 30.
אונדזער רעזולטאַטן אָנווייַזן אַז גשמיות מאַקאַניקאַל סטימיאַליישאַן (מס) ימפּרוווד קוילעלדיק סטאַדי קולטור פאָרשטעלונג קאַמפּערד מיט קטרל, אָבער ניט אַנדערש צו טייַנען ווייאַבילאַטי, סטראַקטשעראַל אָרקפּרעססיענסע, און קאַרדיאַק אויסדרוק איבער 12 טעג אין קולטור.קאַמפּערד מיט קטרל, דערצו פון ט 3 און דעקס צו קטקם (מט) קולטורעס ימפּרוווד ווייאַבילאַטי און מיינטיינד ענלעך טראַנסקריפּציע פּראָופיילז, סטראַקטשעראַל אָרנטלעכקייַט פֿאַר 12 טעג.אין קאַנטראָולינג די גראַד פון געוועב, אַ כייפּעראַפאַקיישאַן-ינדוסט קאַרדיאַק כייפּערטראָפי איז געווען באשאפן מיט סטקם, ילאַסטרי, אילוסטרירן די ווערסאַטילאַטי פון די סטקם סיסטעם.עס זאָל זיין אנגעוויזן אַז כאָטש קאַרדיאַק רימאַדאַלינג און פייבראָסיס יוזשאַוואַלי אַרייַנציען די בעשאָלעם אָרגאַנס וועמענס סעלז סערקיאַלייטינג סעלז קענען צושטעלן די צונעמען סיטאָקינעס און די פיגסיעס פון די האַרץ קענען זיין נאָכמאַכן די פייבראָטיק פּראָצעס אין ענטפער צו דרוק און טראַוומע.אין מיאָפיבראָבלאַסץ.דאָס איז ביז אַהער עוואַלואַטעד אין דעם קאַרדיאַק רעפטל מאָדעל.עס זאָל זיין אנגעוויזן אַז CTCM פּאַראַמעטערס קענען זיין מאַדזשאַלייטיד דורך טשאַנגינג דרוק / עלעקטריקאַל אַמפּליטוד און אָפטקייַט צו סימולירן פילע באדינגונגען, און מאַקאַניקאַל סערקיאַלאַטאָרי (מעטשאַניקאַל קאָראַלאַטאָרי).דאָס מאכט די סיסטעם אַ מיטל אָפּקלענדט פֿאַר מעדיצין טעסטינג.די פיייקייט פון קטקם צו מאָדעל אָוווערעקשאַן-ינדוסט קאַרדיאַק היפּערטראָפי פּאַוועס דעם וועג פֿאַר טעסטינג דעם סיסטעם פֿאַר פּערסאַנאַלייזד טעראַפּיע.אין מסקנא, די פאָרשטעלן לערנען דעמאַנסטרייץ אַז מעטשאַניקאַל אויסשטרעקן און הומאָראַל סטימיאַליישאַן זענען קריטיש פֿאַר מיינטיינינג די קולטור פון קאַרדיאַק געוועב סעקשאַנז.
כאָטש די דאַטן דערלאנגט דאָ פֿאָרשלאָגן אַז CTCM איז אַ זייער פּראַמאַסינג פּלאַטפאָרמע פֿאַר מאָדעלינג בעשאָלעם פון די קולטור אופֿן האט עטלעכע לימיטיישאַנז.די הויפּט באַגרענעצונג פון CTCM קולטור איז אַז עס ימפּאָוזאַז קעסיידערדיק דינאַמיש מעטשאַנטשאַניקאַל סטרעסיז אויף די סלייסיז, וואָס פּריקלודז די פיייקייט צו אַקטיוולי מאָניטאָר קאַרדיאַק רעפטל סקלעסיאָנס בעשאַס יעדער ציקל.אין דערצו, רעכט צו דער קליין גרייס פון קאַרדיאַק סעקשאַנז (7 מם), די פיייקייט צו אָפּשאַצן ססיפּליק פונקציאָנירן אַרויס פון קולטור סיסטעמען ניצן טראַדיציאָנעל קראַפט סענסאָרס איז לימיטעד.אין דעם קראַנט מאַנוסקריפּט, מיר טיילווייאַלי באַקומען דעם באַגרענעצונג דורך עוואַלואַטינג אָפּטיש וואָולטידזש ווי אַ גראדן פון קאָנטראַקטיקן פונקציע.אָבער, די באַגרענעצונג וועט דאַרפן ווייַטער אַרבעט און קען זיין גערעדט אין דער צוקונפֿט דורך ינטראָודוסינג מעטהאָדס פֿאַר אָפּטיש מאָניטאָרינג פון די פונקציע פון ​​האַרץ סלייסיז אין קולטור, אַזאַ ווי אָפּטיש מאַפּינג ניצן קאַלסיום און וואָולטידזש-שפּירעוודיק דייז.אן אנדער באַגרענעצונג פון קטקם איז אַז די אַרבעט מאָדעל טוט נישט מאַניפּולירן פיזיאַלאַדזשיקאַל דרוק (פּרעלאָאַד און אַפיילעללאָאַד).אין קטקם, די דרוק איז ינדוסט אין פאַרקערט אינסטרוקציעס צו רעפּראָדוצירן 25% פיזיאַלאַדזשיקאַל אויסשטרעקן אין דיאַסטאָאָל (די פּלאַסטאָול (לענג פון צונויפצי בעשאַס די עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן) אין זייער גרויס געוועבן.די באַגרענעצונג זאָל זיין אַוועקגענומען אין צוקונפֿט קטקם דיזיינז דורך טויגן דרוק אויף די קאַרדיאַק געוועב פון ביידע זייטן און דורך אַפּלייינג די פּינטלעך דרוק-באַנד באציונגען וואָס פאַלן אין די טשיימבערז פון די האַרץ.
די אָווועררייטש-ינדוסט רימאַדאַלינג האָט געמאלדן אין דעם מאַנוסקריפּט איז לימיטעד צו נאָכקרימען כייפּערטראָפיק כייפּערסטרעטש סיגנאַלז.אזוי, דער מאָדעל קענען העלפֿן אין די לערנען פון אויסשטרעקן-ינדאַקטראָדיק סיגנאַלינג אָן די נויט פֿאַר הומאָראַל אָדער נוראַל סיבות (וואָס טאָן ניט עקסיסטירן אין דעם סיסטעם).ווייַטער שטודיום זענען דארף צו פאַרגרעסערן די קייפל סעלז פֿאַרבעסערן די פּאַסאַבילאַטיז פון קרענק מאָדעלינג מיט קטקם.
דרייַצן פּיגס זענען געניצט אין דעם לערנען.כל כייַע פּראָוסידזשערז זענען דורכגעקאָכט אין לויט מיט ינסטיטושאַנאַל גיידליינז און זענען באוויליקט דורך די אוניווערסיטעט פון לאָויסוויללע ינסטיטושאַנאַל כייַע זאָרגן און נוצן קאמיטעט.די אַאָרטיק אַרטש איז קלאַמפּט און די האַרץ איז געווען פּערד מיט 1 ל פון סטערילע קאַרדיכאָאָלאָגיאַ (110 מם נאַקל, 1.2 מם קקל 2, 16 מם KCL2, 5 Ublo3, 5 U / ML Heparin, PH אַרויף צו 7.4); די הערצער זענען אפגעהיט אין אייז קאַלט קאַרדיאָאָפּליק לייזונג ביז טראַנספּאָרטאַד צו די לאַב אויף אייז וואָס איז יוזשאַוואַלי <10 מין. די הערצער זענען אפגעהיט אין אייז קאַלט קאַרדיאָאָפּליק לייזונג ביז טראַנספּאָרטאַד צו די לאַב אויף אייז וואָס איז יוזשאַוואַלי <10 מין. Сердца хранили в Ледяномоплегичегичегичегичегичеги раствораеги раствором Раствором растворитри в Трансортиририровки в Лерпорорию с чедруорию на что пеу, וואָס איז די לעצטע וואָך <10 мин. הערצער זענען סטאָרד אין אייז-קאַלט קאַרדיאָאָלאָגאָפּליק לייזונג ביז אַריבערפירן צו די לאַבאָראַטאָריע אויף די לאַבאָראַטאָריע אויף די לאַבאָראַטאָריע, וואָס יוזשאַוואַלי נעמט <10 מינוט.将 心脏 保存 在 的 心脏 停搏液 停搏液, 直到 冰上 运送 到 到 到 到, 通常 <10 分钟.将 心脏 保存 在 的 心脏 停搏液 停搏液, 直到 冰上 运送 到 到 到 到, 通常 <10 分钟. די לעצטע טערערד אין די Ледяной кардиоплеги до Трансоритовки в 2000 на льду, Обычно <10 мин. האַלטן כאַרץ אויף אייז קאַרדיאָאָפּלעגיאַ ביז אַריבערפירן צו די לאַבאָראַטאָריע אויף אייז, יוזשאַוואַלי <10 מינוט.
די CTCM מיטל איז דעוועלאָפּעד אין סאָלידוואָרקס קאָמפּיוטער-אַסיסטאַד פּלאַן (CAD) ווייכווארג.די קולטור טשיימבערז, דיווידערז און לופט טשיימבערז זענען געמאכט פון קנק קלאָר אַקריליק פּלאַסטיק.די ווייכווארג פון 7 מם דיאַמעטער איז געמאכט פון הויך געדיכטקייַט פּאַליעטאַלין (HDPE) אין דעם צענטער און האט אַ אָ-רינג) אין דעם צענטער און האט אַ אָ-רינג) אין דעם צענטער און האט אַ אָ-רינג) אין דעם צענטער און האט אַ אָ-רינג 05.א דין סיליקיקאַ מעמבראַנע סעפּערייץ די קולטור טשאַמבער פון די צעשיידונג טעלער.די סיליקאָנע מעמבראַנע איז לאַזער שנייַדן פון 0.02 "דיק סיליקאָנע בלאַט און האט אַ כאַרדנאַס פון 35 אַ.די דנאָ און שפּיץ סיליקאָנע גאַסקעץ זענען לאַזער שנייַדן פון 1/16 "דיק סיליקאָנע בלאַט און האָבן אַ כאַרדנאַס פון 50 אַ.316 ל ומבאַפלעקט שטאָל סקרוז און פליגל ניסלעך זענען געניצט פֿאַר פאַסאַנינג די בלאָק און שאפן אַ ערטייט פּלאָמבע.
א דעדאַקייטאַד געדרוקט קרייַז ברעט (פּקב) איז דיזיינד צו זיין ינאַגרייטיד מיט די C-PACE-עם סיסטעם.די שווייצער מאַשין קאַנעקטער סאַקאַץ אויף די פּקב זענען פארבונדן צו גרויצן ילעקטראָודז דורך זילבער-פּלייטאַד קופּער ווירעס און בראָנדז 0-60 סקרוז סקרוד אין די ילעקטראָודז.די געדרוקט קרייַז באָרד איז געשטעלט אין די דעקן פון די 3 ד דרוקער.
די CTCM מיטל איז קאַנטראָולד דורך אַ פּראָגראַממאַבלע פּנעוומאַטיש אַקטיואַטאָר (פּפּד) וואָס קריייץ אַ קאַנטראָולד סערקולאַטאָרי דרוק ענלעך צו אַ קאַרדיאַק ציקל.ווען די דרוק ין די לופט קאַמער ינקריסאַז, די פלעקסאַבאַל סיליקאָנע מעמבראַנע פון ​​סיליקאָנע מעמבראַנע יקספּאַנד, פאָרסינג די מיטל אונטער די געוועב פּלאַץ.די געגנט פון געוועב וועט זיין אויסגעשטרעקט דורך דעם יקספּאַלשאַן פון פליסיק, נאָכקרימען די פיזיאַלאַדזשיקאַל יקספּאַנשאַן פון די האַרץ בעשאַס דיאַסטאָלע.אין דער שפּיץ פון אָפּרו, עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן איז געווען געווענדט דורך גראַפייט ילעקטראָודז, וואָס רידוסט די דרוק אין די לופט קאַמער און געפֿירט קאַנטראַקשאַן פון די געוועב פון געוועב סעקשאַנז.אין די רער איז אַ העמאָסטאַטיק וואַלוו מיט אַ דרוק סענסער צו דיטעקט די דרוק אין די לופט סיסטעם.דער דרוק סענסעד דורך די דרוק סענסער איז געווענדט צו אַ דאַטן קאַלעקטער פארבונדן צו די לאַפּטאַפּ.דאָס אַלאַוז קעסיידערדיק מאָניטאָרינג פון די דרוק אין די גאַז קאַמער.ווען די מאַקסימום קאַמער דרוק איז ריטשט (נאָרמאַל 80 מממה, 140 מממה אַס), די דאַטן אַקוואַזישאַן מיטל איז געווען באפוילן צו שיקן אַ סיגנאַל צו די C-PACE- עם סיסטעם צו דזשענערייט אַ ביטי, שטעלן צו 4 ך.
האַרץ סעקשאַנז זענען באקומען און קולטור טנאָים אין 6 וועלז זענען פּערפאָרמד ווי גייט: אַריבערפירן די כאַרוואַסטיד הערצער פון די אַריבערפירן שיף צו אַ טאַץ מיט קאַלט (4 ° C.) קאַרדיכאָולעגיאַ.די לינקס ווענטריקלע איז אפגעזונדערט מיט אַ סטערילע בלייד און שנייַדן אין ברעקלעך פון 1-2 קמ 3.די געוועב בלאַקס זענען אַטאַטשט צו געוועב שטיצט מיט געוועב קלעפּיק און געשטעלט אין אַ ווייברייטינג מיקראָטאָמע געוועב געוועב וואַנע וואַנע מיט טעראָד ס לייזונג און קאַנטיניואַסלי (5,44 £ (0,447 ג). 2.38 ג), 1 מם MGCL2 (1 מל 1 ב לייזונג), 1.8 מם CACL2 (1.8 מל 1 ב לייזונג), אַרויף צו 1 ל דדה 2 אָ).די ווייברייטינג מיקראָטאָמע איז געווען באַשטימט צו שנייַדן 300 μ סענטימעטער דיק סלייסיז ביי 80 הז, אַ האָריזאָנטאַל ווייבריישאַן אַמפּליטוד פון 2 מם, און אַ שטייַגן קורס פון 0.03 מם / s.די געוועב וואַנע איז געווען סעראַונדאַד דורך אייז צו האַלטן די לייזונג קיל און די טעמפּעראַטור איז געווען מיינטיינד בייַ 4 ° C.אַריבערפירן געוועב סעקשאַנז פון די מיקראָטיזאַם וואַנע צו אַ ינגקיוביישאַן וואַנע מיט קאַנטיניואַסלי אָקסיגענאַטעד טיראָדע לייזונג אויף אייז ביז גענוג סעקשאַנז זענען באקומען פֿאַר איין קולטור טעלער.פֿאַר טראַנסוועל קאַלטשערז, געוועב סעקשאַנז זענען אַטאַטשט צו סטערילע 6 מם ברייט פּאַליוראַטיין שטיצט און געשטעלט אין 6 מל פון אָפּטימיזעד מיטל (199. מיטל, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס, 1 קס.עלעקטריקאַל סטימיאַליישאַן (10 וו, אָפטקייַט 1.2 הז) איז געווען געווענדט צו די פּלאַף סעקשאַנז דורך די C- גאַנג.פֿאַר טד טנאָים, פריש ט 3 און דעקס זענען צוגעגעבן אין 100 נם און 1 μ ם אין יעדער מיטל ענדערונג.די מיטל איז סאַטשערייטאַד מיט זויערשטאָף איידער פאַרבייַט 3 מאל אַ טאָג.אין אַ ינגקיאַבייטער אין געוועב, די סעקשאַנז זענען געבילד אין אַ ינגקיאַבייטער ביי 37 ° C און 5% קאָו 2.
פֿאַר קטקם קאַלטשערז, געוועב סעקשאַנז זענען געשטעלט אויף אַ קאַסטאַמייזד 3 ד דרוקער אין אַ פּעטרי שיסל מיט מאַדאַפייד טעראָד ס לייזונג.דער מיטל איז דיזיינד צו פאַרגרעסערן די גרייס פון דעם רעפטל פון די האַרץ דורך 25% פון די שטח פון די שטיצן רינג.דאָס איז געשען אַזוי אַז די סעקשאַנז פון די האַרץ טאָן ניט אויסשטרעקן נאָך טראַנספערד פון טעראָד ס לייזונג צו די מיטל און דיאַסטאָל.ניצן היסטאָאַקריליק קליי, די סעקשאַנז 300 μ סענטימעטער דיק זענען פאַרפעסטיקט אויף אַ שטיצן רינג 7 מם אין דיאַמעטער.נאָך אַטאַטשינג די סעקשאַנז צו די שטיצן רינג, שנייַדן אַוועק די וידעפדיק געוועב סעקשאַנז און שטעלן די אַטאַטשט טויס פון טיראָדע סאַלעס צוריק אין די וואַנע פון ​​טיראָד לייזונג אויף אייז (4 ° C) ביז גענוג סעקשאַנז זענען צוגעגרייט פֿאַר איין מיטל.די גאַנץ פּראַסעסינג צייט פֿאַר אַלע דעוויסעס זאָל נישט יקסיד 2 שעה.נאָך 6 געוועב סעקשאַנז זענען אַטאַטשט צו זייער שטיצן רינגס, די קטקם מיטל איז געווען פארזאמלט.די קטקאָם קולטור טשאַמבער איז פּרי-אָנגעפילט מיט 21 מל פאַר-אָקסיגענאַטעד מיטל.אַריבערפירן די פּלוע סעקשאַנז צו די קולטור קאַמער און קערפאַלי באַזייַטיקן קיין לופט באַבאַלז מיט אַ פּיפּעטטע.די אָנהייב פון די געוועב איז דאַן גיידיד אין די לאָך און דזשענטלי פּרעסט אין פּלאַץ.לעסאָף, שטעלן די ילעקטראָוד היטל אויף די מיטל און אַריבערפירן די מיטל צו די ינגקיאַבייטער.דערנאָך פאַרבינדן די קטקם צו די לופט רער און די C-PACE-עם סיסטעם.די פּנעוומאַטיש אַקטיואַטאָר אָפּענס און די לופט וואַלוו אָפּענס די קטקם.די C-PACE-עם סיסטעם איז קאַנפיגיערד צו באַפרייַען 4 V ביי 1.2 הז בעשאַס ביטיאַסיק פּאַסינג פֿאַר 2 מס.די מיטל איז געווען פארענדערט צוויי מאָל פּער טאָג און די ילעקטראָודז זענען געביטן אַמאָל אַ טאָג צו ויסמייַדן אַקיומיאַליישאַן פון גראַפייט אויף די ילעקטראָודז.אויב נויטיק, די סעקשאַנז קענען ווערן אַוועקגענומען פון זייער קולטור וועלז צו אַרויסטרייַבן קיין לופט באַבאַלז וואָס קען האָבן געפֿאַלן אונטער זיי.טם באַהאַנדלונג טנאָים, ט 3 / דעקס איז צוגעגעבן פריש מיט יעדער מיטל ענדערונג מיט 100 נם ט 3 און 1 μ סי דעקס.די CTCM דעוויסעס זענען קאַלטאַווייטאַד אין אַ ינגקיאַבייטער ביי 37 ° C און 5% קאָו 2.
צו באַקומען אויסגעשטרעקט טראַפטאָריעס פון האַרץ סלייסיז, אַ ספּעציעל אַפּאַראַט סיסטעם איז דעוועלאָפּעד.א סלר אַפּאַראַט (Canon Debrel T7i, Cannos, Toko, יאַפּאַן) איז געווען געוויינט מיט אַ נאַוויוויטאַר פארגרעסער 7000 18-108 מם מאַקראָו מאַקראָו מ.מ. מאַקראָ.ל.וויזשוואַלאַזיישאַן איז געווען פּערפאָרמד אין צימער טעמפּעראַטור נאָך ריפּלייסט די מיטל מיט פריש מיטל.דער אַפּאַראַט איז פּאַזישאַנד אין אַ 51 ° ווינקל און ווידעא איז רעקאָרדעד ביי 30 ראָמען פּער סעקונדע.ערשטער, עפֿן מקור ווייכווארג (מאַסקלעעמאַטיז 43) איז געווען געוויינט מיט בילד-דזש צו קוואַנטיפיצירן די באַוועגונג פון האַרץ סלייסיז.די מאַסקע איז געווען באשאפן מיט Matlab (מאַטווערקס, נאַטאַקק, מאַ, USA) צו דעפינירן מקומות פון אינטערעס פֿאַר ביטינג האַרץ סלייסיז צו ויסמיידן ראַש.מאַניואַלי סעגמענטעד מאַסקס זענען געווענדט צו אַלע בילדער אין אַ פריים סיקוואַנס און דורכגעגאנגען צו די מאַסקלעמאָן פּלוג-אין.מוסקל באַוועגונג ניצט די דורכשניטלעך ינטענסיטי פון די בילדצעלן אין יעדער ראַם צו קוואַנטיפיצירן זייַן באַוועגונג קאָרעוו צו דערמאָנען ראַם.דאַטן זענען רעקאָרדעד, געפילטערט און געוויינט צו קוואַנטאַפיי ציקל צייט און אַססעסס געוועב, שטיין בעשאַס די קאַרדיאַק ציקל.די רעקאָרדעד ווידעא איז געווען פּאָסטן-פּראַסעסט מיט אַ ערשטער-סדר נול-פאַסע דיגיטאַל פילטער.צו קוואַנטאַפיי געוועב סטרעטש (שפּיץ-צו-שפּיץ), שפּיץ-צו-שפּיץ אַנאַליסיס איז געווען פּערפאָרמד צו ויסטיילן צווישן פּיקס און טראָוז אין די רעקאָרדעד סיגנאַל.אין דערצו, דעטרענדינג איז געטאן מיט אַ 6 סדר פּאָלינאָמיאַל צו עלימינירן סיגנאַל דריפט.פּראָגראַם קאָד איז דעוועלאָפּעד אין MALAB צו באַשליסן גלאבאלע געוועב באַוועגונג, ציקל צייט, אָפּרו צייט און צונויפנעמען צייט (סופּפּלעמענטאַרי פּראָגראַם קאָוד 44).
פֿאַר שפּאַנונג אַנאַליסיס, ניצן די זעלבע ווידיאס באשאפן פֿאַר מעטשאַניקאַל אויסשטרעקן אַסעסמאַנט, מיר ערשטער טרייסט צוויי בילדער וואָס רעפּריזענטינג באַוועגונג פון באַוועגונג (די העכסטן (אויבערשטער) און לאָואַסט (נידעריקער) פונט פון באַוועגונג) לויט די מוסקלוטיאָן ווייכווארג.מיר סעגמענטעד די געוועב מקומות און געווענדט אַ פאָרעם פון שיידינג אַלגערידאַם צו די אָפּשניט געוועב (סאַליאַקערי פיג. 2 אַ).די אָפּשניט געוועב איז דעמאָלט צעטיילט אין צען סאַבסורפאַסעס, און די דרוק אויף יעדער ייבערפלאַך איז געווען קאַלקיאַלייטיד מיט די פאלגענדע יקווייזשאַן: Sup-Sup-Sup-Suplown, ווו סאַון זענען די דיסטאַנסאַז זענען די דיסטאַנסאַז זענען די דיסטאַנסאַז זענען די דיסטאַנסאַז זענען די דיסטאַנסאַז זענען די דיסטאַנסאַז פון די דיסטאַנסאַז זענען די ווייַטקייט.
האַרץ סעקשאַנז זענען פאַרפעסטיקט אין 4% פּעראַפאָראַלדאַכייד פֿאַר 48 שעה.פאַרפעסטיקט געוועבן זענען דיכיידרייטאַד אין 10% און 20% סוקראָוס פֿאַר 1 ה, אין 30% סוקראָוס יבערנאַכטיק.די סעקשאַנז זענען דעמאָלט עמבעדיד אין אָפּטימום קאַטינג טעמפּעראַטור קאַמפּאַונד (אקטאבער קאַמפּאַונד) און ביסלעכווייַז פאַרפרוירן אין אַ יסאָפּענטאַנע / טרוקן ייַז וואַנע.קראָם אבשר עמבעדינג בלאַקס ביי -80 ° C ביז סעפּאַראַטיאָן.סליידז זענען געווען צוגעגרייט ווי סעקשאַנז מיט אַ גרעב פון 8 μ ם.
צו באַזייַטיקן אַוועק פון האַרץ סעקשאַנז, היץ די סליידז אויף אַ באַהיצונג בלאָק אין 95 ° C פֿאַר 5 מינוט.לייג 1 מל פּבס צו יעדער רוק און ינקאַקייטיד פֿאַר 30 מינוט אין צימער טעמפּעראַטור, און פּערמיץ די סעקשאַנז דורך באַשטעטיקן 0.1% Triton-x אין Pbs פֿאַר 15 מינוט אין צימער טעמפּעראַטור.צו פאַרמייַדן ניט-ספּעציפיש אַנטיבאָדיעס פון ביינדינג צו דער מוסטער, לייגן 1 מל פון 3% בסאַ לייזונג צו סליידז און ינקאַקאַבייט פֿאַר 1 שעה אין צימער טעמפּעראַטור.די בסאַ איז דאַן אַוועקגענומען און די סליידז זענען געוואשן מיט PBS.מארק יעדער מוסטער מיט אַ בלייַער.ערשטיק אַנטיבאָדיעס (דיילוטאַד 1: 200 אין 1% BSA) (Connexin 43 (ABCAM; # AB11370), NFATC4 (ABCAM; 9) קעגן קיניגל Adver Alexal 594 (טערמאָ סייאַנטיפיק; # ט 6391) און געחתמעט 90 מינוט געוואשן 3 מאָל מיט PBS Magsifice, מיר געוויינט בלויז די הינטערגרונט, און די פידז איז צוגעשטעלט, דאַפּי נוקלעאַר קוספּקראָפּ מיט 40x מאַגנאַפאַקיישאַן.
ווגאַ-אַלעקסע 555 (טערמאָ סייאַנטיפיק; # וו 32464) ביי 5 μ ג און פּבס איז געניצט פֿאַר ווגאַ סטיינינג און געווענדט צו פאַרפעסטיקט סעקשאַנז פֿאַר 30 מינוט אין צימער טעמפּעראַטור.די סליידז זענען דעמאָלט געוואשן מיט פּבס און סודאַן שוואַרץ איז צוגעגעבן צו יעדער רוק און ינקובאַטעד פֿאַר 30 מינוט.די סליידז זענען געווען דעמאָלט געוואשן מיט פּבס און וועקטאָרעד עמבעדדינג מיטל איז צוגעגעבן.די סליידז זענען וויזשוואַלייזד אויף אַ קלאַוויאַטור פון די שליסל מעטהאָדס אין 40x מאַגנאַפאַקיישאַן.
אקטאבער איז אַוועקגענומען פון די סאַמפּאַלז ווי דיסקרייבד אויבן.נאָך רימוווינג די בייַקט, ייַנטונקען די סליידז אין באָין ס לייזונג יבערנאַכטיק.די סליידז זענען געווען רינסעד מיט דיסטילד וואַסער פֿאַר 1 שעה און דאַן געשטעלט אין אַ ביברייטש אַלאָו אַסיד פוטשסין לייזונג פֿאַר 10 מינוט.דערנאָך די סליידז זענען געוואשן מיט דיסטילד וואַסער און געשטעלט אין אַ לייזונג פון 5% פאַספאָמאָליבדענום / 5% פאַספייטונג יסוד פֿאַר 10 מינוט.אָן רינסינג, אַריבערפירן די סליידז גלייַך אין די אַנינינע בלוי לייזונג פֿאַר 15 מינוט.דערנאָך די סליידז זענען געוואשן מיט דיסטילד וואַסער און געשטעלט אין אַ אַסעטיק זויער לייזונג פֿאַר 1% פֿאַר 2 מינוט.סליידז זענען געווען דאַר אין 200 n עטאַנאָל און טראַנספערד צו קסילענע.סטאַינעד סליידז זענען וויזשוואַלייזד מיט אַ קלאָטיש פּראָווינעססקאָד מיט אַ 10x אָביעקטיוו.פיבראָסיס שטח פּראָצענט איז קוואַנטיפיעד ניצן קלענסטער אַנאַלייזער ווייכווארג.
סייקאַנאַנט פּראָטאָקאָל מיט די פּראָטאָקאָל פון די קאַרלס).אין באַזונדער, אַ כירורגיש זעץ מיט דיאַמעטער פון 6 מם איז געניצט צו ענשור מונדיר געוועב גרייס בעשאַס MTT אַנאַליסיס.געוועבן זענען ינדיווידזשואַלי פּלייטיד אין די וועלז פון אַ 12-געזונט טעלער מיט MTT סאַבסטרייט לויט די פּראָטאָקאָל פאַבריקאַנט.די סעקשאַנז זענען ינקובאַטעד ביי 37 ° סי פֿאַר 3 שעה און די לעבעדיק געוועב מעטאַבאָליזעס די מטט סאַבסטרייט צו פאָרעם אַ לילאַ פאָרמאַסאַן קאַמפּאַונד.פאַרבייַטן די MTT לייזונג מיט 1 מל דמסאָ און ינקובייט ביי 37 ° C פֿאַר 15 מינוט צו עקסטראַקט לילאַ פאָראַזאַן פון האַרץ סעקשאַנז.סאַמפּאַלז זענען דיילוטאַד 1:10 אין DMSO אין 96-געזונט קלאָר דנאָ פּלאַטעס און לילאַ קאָליר ינטענסי ינטענסיעסדיק ינטענסיטי איז געמאסטן ביי 570 נם ​​ניצן אַ סיטאָטאַטיאָן טעלער רידער (ביאָטעעק).רידינגז זענען נאָרמאַלייזד צו די וואָג פון יעדער רעפטל פון די האַרץ.
האַרץ רעפטל מעדיע איז געווען ריפּלייסט מיט מעדיע מיט 1 μ סי / מל [5-3h] --Gucose (Moravek בייאָטשעמיקאַלז, Bra, USA) פֿאַר גלוקאָוס יוטאַלאַזיישאַן אַססע ווי פריער דיסקרייבד.נאָך 4 שעה פון ינגקיוביישאַן, לייגן 100 מייל אַוועק צו אַ עפענען מיקראָסענטריפיק רער מיט 100 μ ל.דערנאָך די רער איז געווען געשטעלט אין אַ סקייַטיללאַטיאָן רער מיט 500 מייל פון Dh2o צו יוואַפּערייט [3H] 2 אָ פֿאַר 72 שעה ביי 37 ° C.באַזייַטיקן די רער פון מיקראָ פּראָווין רער און לייגן 10 מל פון סקינטיללאַטיאָן פליסיק.Scintillation קאַונץ זענען דורכגעקאָכט מיט אַ טרי-קאַרב 2900 ינק פליסיק וויקיפּעדיע אַנאַלייזער (פּאַקקאַרד בייאָוס בייאָוסאַנס פירמע, Meriden, CT, USA).גלוקאָוס יוטאַלאַזיישאַן איז דערנאָך קאַלקיאַלייטיד גענומען אין חשבון [5-3h] -Gluckose ספּעציפיש טעטיקייט, דערענדיקט יקוואַליבריאַם און הינטערגרונט, דיילושאַן פון דאָמפּליאַטעד גלוקאָוס און ססינטילל.די דאַטן זענען נאָרמאַליזעד צו די מאַסע פון ​​די סעקשאַנז פון די האַרץ.
נאָך די האָמאָגעניזאַטיאָן אין טריזאָל, רנאַ איז אפגעזונדערט פון האַרץ סעקשאַנז ניצן די קיאַגען מירנעיסי מיקראָ קיט # 210874 לויט צו דער פּראָטאָקאָל פון דער פאַבריקאַנט.RNASEK ביבליאָטעק צוגרייטונג, סיקוואַנסינג און דאַטן אַנאַליסיס זענען דורכגעקאָכט ווי גייט:
1 μ ג ראַנאַ פּער מוסטער איז געניצט ווי סטאַרטינג מאַטעריאַל פֿאַר דער צוגרייטונג פון די רנאַ ביבליאָטעק.סיקוואַנסינג לייברעריז זענען דזשענערייטאַד ניצן די נעבשנעקסט ולטרטרם רנאַ ביב ביבליאָטעקבעקיצער, מרנאַ געווען פּיוראַפייד פון גאַנץ רנאַ מיט מאַגנעטיק קראָץ אַטאַטשט מיט אַ אָלסאַנוקלעאָטעס.פראַגמענטאַטיאָן איז געפירט אויס מיט דערטראַקץ ביי הויך טעמפּעראַטור אין נעבנטעקעקסט ערשטער סטראַנדז סינטעז אָפּרוף באַפער (5 קס).ערשטער שנירל דידינאַ איז סינטאַסייזד ניצן טראַפ - העקסאַמער פּרימערס און M-Mulv פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע (RNASE H-).די רגע שנירל דידינאַ איז סינטאַסייזד מיט דנאַ פּאָלימעראַסע איך און רנייס ה. די רוען אָוווערכאַנגז זענען קאָנווערטעד צו אָפן ענדס דורך עקסאָנוקאַלע / פּאָלימעראַסע טעטיקייט.נאָך אַדעניליישאַן פון די 3 'סוף פון די דנאַ פראַגמענט, אַ נעבענטעקסט אַדאַפּטער מיט אַ האָרפּין שלייף סטרוקטור איז אַטאַטשט צו צוגרייטן עס פֿאַר כייבראַדאַזיישאַן.פֿאַר סעלעקציע פון ​​עדנאַ פראַגמאַנץ פון בילכער לענג 150-200 בפּ.ביבליאָטעק פראַגמאַנץ זענען פּיוראַפייד מיט די אַמפּורע XP סיסטעם (בעקמאַן קאָולטער, בעווערלי, USA).פּקר איז דערנאָך דורכגעקאָכט מיט די פוסיאָן פון די פודעליטילעסאָף, פּקר פּראָדוקטן זענען פּיוראַפייד (אַמפּורע XP סיסטעם) און ביבליאָטעק קוואַליטעט אַססעססעד אויף אַ אַגיאַלער בייאָינאַליזער 2100 סיסטעם.די CDNA ביבליאָטעק איז געווען סיקוואַנסעד ניצן אַ נאָוואַסעק סעקווענסער.רוי בילד טעקעס פון ילומאַ געווען קאָנווערטעד צו רוי לייענט מיט קאַסאַוואַ באַזע פאַך.רוי דאַטן זענען סטאָרד אין פאַסטק (FQ) פֿאָרמאַט טעקעס וואָס אַנטהאַלטן לייענען סיקוואַנסיז און קאָראַספּאַנדינג באַזע מידות.סעלעקט העאַט 2 צו גלייַכן פילטערד סיקוואַנסינג לייענט צו די ססקראָפטאַ 11.1 רעפֿערענץ גענאָמע.אין אַלגעמיין, hisat2 שטיצט גענאָמעס פון קיין גרייס, אַרייַנגערעכנט גענאָמעס גרעסער ווי 4000000000 באַסעס, און פעליקייַט וואַלועס זענען באַשטימט פֿאַר רובֿ פּאַראַמעטערס.ספּלייסינג לייענט פון RNN SEQ דאַטן קענען זיין יפישאַנטלי אַליינד ניצן Heat2, די פאַסטאַסט סיסטעם בנימצא, מיט דער זעלביקער אָדער בעסער אַקיעראַסי ווי קיין אנדערע אופֿן.
דער שעפע פון ​​טראַנסקריפּץ גלייַך ריפלעקס די הייך פון דזשין אויסדרוק.דזשין עקספּרעססיאָן לעוועלס זענען אַססעססעד דורך די זעט פון טראַנסקריפּץ (סיקוואַנסינג ציילן) פֿאַרבונדן מיט די גענאָמע אָדער עקסאָנס.די נומער פון לייענט איז פּראַפּאָרשאַנאַל צו דזשין עקספּרעססיאָן לעוועלס, דזשין לענג און סיקוואַנסינג טיפעניש.פפּקם (פראַגמאַנץ פּער טויזנט באַזע פּערז פון טראַנסקריפּט סיקוואַנסעד פּער מיליאָן באַזע פּערז) זענען קאַלקיאַלייטיד און פּ-וואַלועס פון דיפערענטשאַל אויסדרוק זענען באשלאסן ניצן די דעסעק 2 פּעקל.מיר דעמאָלט קאַלקיאַלייטיד די פאַלש ופדעקונג קורס (FDR) פֿאַר יעדער פּ ווערט ניצן די בענדזשאַמיני-האָטשבערג מעטהאָדס 9 באזירט אויף די געבויט-אין ר-פונקציע "P.ADJACT".
רנאַ אפגעזונדערט פון האַרץ סעקשאַנז איז קאָנווערטעד צו CDNA ביי אַ קאַנסאַנטריישאַן פון 200 נג / μL ניצן די סופּערסקריפּט יוו ווילאָ בעל מישן פון טערמאָו, קאַץ. ניין. 11756050). ניין.קוואַנטיטאַטיווע רט-פּקר איז געטאן מיט אַ געווענדט ביאָסיסטעמס ענדוראַ טעלער מיקראָאַמפּ 384-געזונט טראַנספּעראַנט אָפּרוף טעלער (טערמאָו, קאַץ. 448319) און מיקראָאַמפּאַטאַד קלעפּיק פון די קוואַנטיטאַטיווע רט.דער אָפּרוף געמיש קאָנסיסטעד פון 5 obl Taqman Fasd Advanced Master מיקס (טהערמאָ, קאַץ # 4444557), 0.5 μ לוממען אָנפאַנגער און 3.5 μ ל געמישט פּער געזונט.נאָרמאַל QPCR סייקאַלז זענען געווען לויפן און CT וואַלועס מיט געמאסטן מיט אַ געווענדט BISSYSTEMS QUATSESDIO 5 פאַקטיש-צייט PCR ינסטרומענט (384-נו מאָדולע; פּראָדוקט # A28135).
מעדיע מעלדונג פון NT- פּראָבנפּ איז געווען אַססעססעד מיט די NT-Prot-Prot-Prot-Prot-Prot-Prot-Prot-Pronk) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ) (קאַץ 2086979, Mybiosource) לויט דער פּראָטאָקאָל פון די פאַבריקאַנט.בעקיצער, 250 מייל פון יעדער מוסטער און נאָרמאַל איז צוגעגעבן אין דופּליקאַט צו יעדער געזונט.גלייך נאָך אַדינג דעם מוסטער, לייגן 50 ויל פון אַססאַסע ריגענט אַ צו יעדער געזונט.דזשענטלי טרייסלען די טעלער און פּלאָמבע מיט סילאַנט.דערנאָך די טאַבלעץ זענען ינקובאַטעד ביי 37 ° C פֿאַר 1 שעה.דערנאָך אַספּיראַטע לייזונג און וואַשן די וועלז 4 מאל מיט 350 μ ל וואַשן לייזונג, ינקאַטיטינג די וואַשן לייזונג פֿאַר 1-2 מינוט יעדער מאָל.דערנאָך לייגן 100 ויל פון אַססעסס ריאַלד B פּער געזונט און פּלאָמבע מיט די טעלער סילאַנט.די טאַבלעט איז דזשענטלי אויפגעטרייסלט און ינקובאַטעד ביי 37 ° C פֿאַר 30 מינוט.אַספּיראַטע די לייזונג און וואַשן די וועלז 5 מאל מיט 350 מייל פון 1x וואַשן לייזונג.לייג 90 אָלס פון סאַבסטרייט לייזונג צו יעדער געזונט און פּלאָמבע די טעלער.ינקובייט די טעלער ביי 37 ° C פֿאַר 10-20 מינוט.לייג 50 μ ל האַלטן לייזונג צו יעדער געזונט.דער טעלער איז געווען גלייך געמאסטן מיט אַ סיטאָס (ביאָטעעק) טעלער רידער שטעלן אין 450 נם.
מאַכט אַנאַליזעס זענען דורכגעקאָכט צו קלייַבן די גרופּע סיזעס וואָס וועט צושטעלן> 80% מאַכט צו דעטעקט אַ 10% אַבסאָלוט ענדערונג אין דער פּאַראַמעטער מיט אַ 5% טיפּ איך טעות. מאַכט אַנאַליזעס זענען דורכגעקאָכט צו קלייַבן די גרופּע סיזעס וואָס וועט צושטעלן> 80% מאַכט צו דעטעקט אַ 10% אַבסאָלוט ענדערונג אין דער פּאַראַמעטער מיט אַ 5% טיפּ איך טעות. מאַכט אַנאַליסיס איז געווען פּערפאָרמד צו סעלעקטירן גרופּע סיזעס וואָס וואָלט צושטעלן 80% מאַכט צו דעטעקט 10% אַבסאָלוט פּאַראַמעטער ענדערונג מיט אַ 5% טיפּ איך טעות.进行 功效 分析 以 将 将> 80% 功效 以 检测 检测 参数检测 参数 10% 绝对 变化 变化 5% I 型 错误率错误率 的的进行 功效 分析 以 将 将> 80% 功效 以 检测 检测 参数检测 参数 10% 绝对 变化 变化 5% I 型 错误率错误率 的的 Был проведен нанаиз мощности для азарора размера размера геппы, Соторый сыиносичечил Бля пля для пля изметного изметого изметотого изметов играметров играметров играметров играметров און 5% פֿאַרבינדונג Па i. א מאַכט אַנאַליסיס איז געווען פּערפאָרמד צו סעלעקטירן אַ גרופּע גרייס וואָס וואָלט צושטעלן 80% מאַכט צו דעטעקט 10% אַבסאָלוט פּאַראַמעטער ענדערונג און 5% טיפּ איך טעות.געוועב סעקשאַנז זענען ראַנדאַמלי אויסגעקליבן איידער דער עקספּערימענט.אַלע אַנאַליזעס געווען צושטאַנד בלינד און סאַמפּאַלז זענען דעקאָדעד בלויז נאָך אַלע דאַטן זענען אַנאַלייזד.PraphPad Prism ווייכווארג (סאַן דיעגאָ, קאַ) איז געניצט צו דורכפירן אַלע סטאַטיסטיש אַנאַליזעס. פֿאַר אַלע סטאַטיסטיק, פּ-וואַלועס זענען געהאלטן באַטייַטיק אין וואַלועס <0.05. פֿאַר אַלע סטאַטיסטיק, פּ-וואַלועס זענען געהאלטן באַטייַטיק אין וואַלועס <0.05. אין דעם אַרטיקל. פֿאַר אַלע סטאַטיסטיק, פּ-וואַלועס זענען געהאלטן באַטייַטיק אין וואַלועס <0.05.对于对于 统计 统计, p 值 在值 <0.05 时 认为 是 显着 显着.对于对于 统计 统计, p 值 在值 <0.05 时 认为 是 显着 显着. אין דעם אַרטיקל. פֿאַר אַלע סטאַטיסטיק, פּ-וואַלועס זענען געהאלטן באַטייַטיק אין וואַלועס <0.05.די ה-טעסט פון צוויי-טיילד תּלמיד איז געווען פּערפאָרמד אויף די דאַטן מיט בלויז 2 קאַמפּעראַסאַנז.איין-וועג אָדער צוויי-וועג אַנאָוואַ איז געניצט צו באַשליסן באַטייַט צווישן קייפל גרופּעס.ווען איר דורכפירן די פּאָסטן האָק טעסץ, די קערעקשאַן פון טוקיי איז געווען געווענדט צו חשבון פֿאַר קייפל קאַמפּעראַסאַנז.RNASEC דאַטן האָבן ספּעציעלע סטאַטיסטיש קאַנסידעריישאַנז ווען קאַלקיאַלייטינג FDR און P.ADJust ווי דיסקרייבד אין די מעטהאָדס אָפּטיילונג.
פֿאַר מער אינפֿאָרמאַציע אויף לערנען פּלאַן, זען די נאַטור פאָרשונג מעלדונג אַבסטראַקט לינגקט צו דעם אַרטיקל.