Ifunni ounjẹ ati pinpin n ṣepọpọ awọn ifunmọ kokoro ati awọn ami itan-aye itan aye.Lati isanpada fun awọn ailagbara ninu awọn ounjẹ kan pato ni awọn ipele igbesi aye oriṣiriṣi, awọn kokoro le gba awọn ounjẹ wọnyi nipasẹ ifunni afikun, fun apẹẹrẹ, nipa fifun awọn aṣiri vertebrate ni ilana ti a mọ ni puddles.Mosquito Anopheles arabiani han lati jẹ aijẹunnuwọn ati ti iṣelọpọ ti iṣelọpọ mejeeji, nitorina o nilo awọn ounjẹ ti iṣelọpọ ati awọn mejeeji. lati ṣe ayẹwo boya An. arabiensis agitation lori ito Maalu fun imudara eroja ti o mu awọn abuda itan igbesi aye dara si.
Rii daju pe o jẹ ailewu.arabisis ni ifamọra si oorun ti alabapade, 24-wakati kan, 72-decoles agbo ninu ito maalu ni gbogbo mẹrin ori kilasi.Synthetic apapo ti bioactive agbo won akojopo ni Y-tube ati aaye trials.Lati se iwadi ito Maalu ati awọn oniwe-akọkọ nitrogen-containing yellow urea as potential supplemental diets for malaria vectors, ono parameters and life history characters were won.The proportion of women mosquitoes and the female feeding and the amount of malu. ṣe ayẹwo fun iwalaaye, ọkọ ofurufu ti o ni asopọ, ati ẹda.
Wá fun awọn ogun ká ẹjẹ ati nourishment.In yàrá ati aaye-ẹrọ, Larubawa ni won kale si awọn adayeba ki o si sintetiki lofinda ti alabapade ati agbalagba ito Maalu.Aboyun obirin wà alainaani si Maalu ito ti şe ni spawning sites.Host-koni ati ẹjẹ-sii mu obinrin actively fa malu ito ati urea gẹgẹ bi aye-fisioloji awọn oluşewadi ti o ni ibamu si awọn iṣẹ-ṣiṣe ti aye-aye. fun flight, iwalaaye, tabi atunse.
Anopheles arabinis akomora ati pinpin ito Maalu fun imudarasi itan igbesi aye awọn abuda.Ififun ifunni ti ito maalu yoo ni ipa lori agbara fekito taara nipasẹ jijẹ iwalaaye ojoojumọ ati iwuwo fekito, ati ni aiṣe-taara nipasẹ yiyipada iṣẹ-ofurufu ati nitorinaa yẹ ki o gbero ni awọn awoṣe iwaju.
Ifunni ounjẹ ati pinpin n ṣepọ awọn ifunmọ kokoro ati awọn abuda itan igbesi aye [1,2,3] . Awọn kokoro ni anfani lati yan ati gba ounjẹ ati ṣiṣe ifunni isanpada ti o da lori wiwa ounjẹ ati awọn ibeere ounjẹ [1, 3] . Pipin awọn ounjẹ ti o da lori ilana itan-aye ati pe o le ja si awọn ibeere oriṣiriṣi fun didara ounjẹ ati opoiye ni awọn ipele igbesi aye ni pato, 2 ni awọn ipele sec. Awọn kokoro le gba awọn ounjẹ wọnyi nipasẹ ifunni afikun, gẹgẹbi lori ẹrẹ, orisirisi awọn iyọkuro ati awọn ikọkọ ti awọn vertebrates, ati carrion, ilana ti a mọ ni puddles [2] Bi o tilẹ jẹ pe orisirisi awọn labalaba ati awọn eya moth ni a ṣe apejuwe akọkọ, awọn ihò agbe tun waye ni awọn ibere kokoro miiran, ati ifamọra si ati fifun awọn iru awọn ohun elo wọnyi le ni ipa pataki lori ilera ati awọn igbesi aye miiran 6. ,7].Ẹfọn iba Anopheles gambiae sensu lato (sl) farahan bi agbalagba 'aiṣedeede' [8], nitoribẹẹ agbe le ṣe ipa pataki ninu awọn abuda itan igbesi aye rẹ, ṣugbọn ihuwasi yii ti ni igbagbe.
Gbigbe Nitrogen ninu agbalagba obinrin Anopheles efon ni opin nitori awọn ifiṣura caloric kekere ti a gbe lati ipele idin ati lilo aiṣedeede ti ounjẹ ẹjẹ [9].Female Ann.gambiae sl maa n sanpada fun eyi nipa fifi afikun pẹlu awọn ounjẹ ẹjẹ afikun [10, 11], nitorinaa fifi awọn eniyan diẹ sii sinu eewu ti arun na ati ki o jẹ ki apanirun lewu. awọn efon le lo ifunni afikun ti vertebrate excreta lati gba awọn agbo ogun nitrogenous ti o mu isọdọtun ati maneuverability ti ọkọ ofurufu ṣe, gẹgẹ bi a ti ṣe afihan nipasẹ awọn kokoro miiran [2].Ni idi eyi, ifamọra ti o lagbara ati iyatọ ti ọkan ninu awọn eya arakunrin laarin An.The Gambian sl eya complex, Anopheles arabinis, ito malu tuntun ati arugbo, Abin, 14 jẹ ohun ti o nifẹ si. opportunistic ninu awọn ayanfẹ agbalejo rẹ ati pe a mọ lati ṣepọ pẹlu ati jẹun lori ẹran. ito Maalu jẹ orisun ti o ni ọlọrọ ni awọn agbo ogun nitrogenous, pẹlu urea ti o ni iṣiro 50-95% ti apapọ nitrogen ninu ito tuntun [15, 16].Bi ito Maalu ti ọjọ ori, awọn microorganisms lo awọn orisun wọnyi lati dinku idiju ti awọn wakati nitrogen 5.24th. ti o ni nkan ṣe pẹlu idinku ninu nitrogen Organic, awọn microorganisms alkalophilic (ọpọlọpọ ninu eyiti o ṣe agbejade awọn agbo ogun majele si awọn ẹfọn) ṣe rere [15], eyiti o le jẹ obinrin Ann.arabiensis jẹ ifamọra ni pataki si ito ti ọjọ ori 24 wakati tabi kere si [13, 14].
Ninu iwadi yii, agbalejo ati awọn Ans ti o jẹ ẹjẹ ni a wa fun.Ni akoko ipele gonadotropin akọkọ rẹ, a ṣe ayẹwo arabiensis fun gbigba awọn agbo ogun nitrogenous, pẹlu urea, nipasẹ ito dapọ.Next, a jara ti awọn adanwo ni a ṣe lati ṣe ayẹwo bi awọn efon obirin ṣe n pin awọn ohun elo eroja ti o pọju fun ilọsiwaju ti iwalaaye, atunṣe atunṣe ati atunṣe. ito ti a ṣe ayẹwo lati mọ boya awọn wọnyi pese awọn amọran ti o gbẹkẹle fun ogun ati ẹjẹ-jẹ An.Ni wiwa wọn fun awọn orisun ijẹẹmu ti o pọju yii, arabiensis ṣe awari awọn atunṣe kemikali lẹhin ti o ṣe akiyesi iyatọ iyatọ ti a ṣe akiyesi. ti ẹkọ iwulo ẹya-ara. ifamọra Mosquito.Awọn esi ti o gba jerisi pe An. arabiensis gba ati pinpin awọn agbo ogun nitrogenous ti a rii ni ito vertebrate lati ni ipa awọn abuda itan igbesi aye.Awọn abajade wọnyi ni a jiroro ni aaye ti awọn abajade ajakale-arun ti o pọju ati bii wọn ṣe le lo fun iwo-kakiri ati iṣakoso fekito.
Anopheles arabicans (Dongola igara) ti wa ni itọju ni 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH ati imọlẹ 12:12 h: okunkun dudu. Awọn agolo milimita 30 (Nolato Hertila, Åstorp, SE) ati lẹhinna gbe lọ si awọn agọ Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) lati gba awọn agbalagba agbalagba laaye. pẹlu distilled omi saju si awọn ṣàdánwò, bi a ti salaye ni isalẹ. Awọn obirin lo fun flight tube adanwo won starved fun nikan 4-6 wakati pẹlu omi ad libitum.Lati ṣeto ẹjẹ-siimu efon fun tetele bioassays, 4 dpe obirin won pese pẹlu defibrotic agutan ẹjẹ (Håtunalab, Bro, SE) lilo a awo awo onjẹ eto (HeckyCkryington Workshomotek UK). Lẹhinna a gbe awọn obinrin lọ si awọn ẹyẹ kọọkan ati pese ounjẹ taara, bi a ti ṣalaye ni isalẹ, tabi 10% sucrose ad libitum fun awọn ọjọ 3 ṣaaju awọn idanwo ti a ṣalaye ni isalẹ. Awọn obinrin ti o kẹhin ni a lo fun awọn bioassays tube tube ati gbe lọ si yàrá-yàrá, ati lẹhinna ti distilled omi ad libitum fun awọn wakati 4-6 ṣaaju idanwo naa.
Awọn igbelewọn ifunni ni a lo lati ṣe iwọn ito ati agbara urea ni agbalagba An.Arab obinrin.Oniyan alejo gbigba ati awọn obinrin ti o jẹ ẹjẹ ni a pese ounjẹ ti o ni 1% ti a ti fomi titun ati ito malu ti ogbo, awọn ifọkansi ti urea, ati awọn iṣakoso meji (10% sucrose ati omi) fun 48 h. Ni afikun, awọ ounje (FFxy ml-1 mg) 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) ni a fi kun si ounjẹ ati ti a pese ni 4 × 4 matrix ni 250 µl microcentrifuge tubes (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Figure 1A) Fọwọsi si eti (~ 300 µl awọn ipa ti o pọju ti awọn awọ 1). efon ni kan ti o tobi Petri satelaiti (12 cm ni iwọn ila opin ati ki o 6 cm ni iga; Semadeni, Ostermundigen, CH; Figure 1A) ni pipe òkunkun ni 25 ± 2 cm °C ati 65 ± 5% ọriniinitutu ojulumo. Awọn wọnyi ni adanwo ti a tun 5 to 10 igba. Lẹhin ifihan lati onje, mosquitoes ti a gbe ni - siwaju sii onínọmbà.
Wa ito eran ati urea ti o gba nipasẹ agbalejo ati abo ti nmu ẹjẹ jẹ Anopheles arabianus.Ni idanwo ifunni (A), awọn ẹfọn abo ni a pese pẹlu ounjẹ ti o wa ninu ito malu titun ati ti ogbo, orisirisi awọn ifọkansi ti urea, sucrose (10%), ati omi distilled (H2O) .Gbalejo-wiwa (B) ati idanwo ẹjẹ diẹ sii ju obirin lọ. pe awọn obinrin ti o n wa ogun gba ito malu 72-wakati ti o kere ju 168-wakati malu ito (B) .Itumọ lapapọ akoonu nitrogen (± boṣewa iyapa) ti ito ti wa ni ipoduduro ninu inset.Host-seeking (D, F) ati ẹjẹ-siimu (E, G) obinrin gba soke urea ni a iwọn lilo-ti o gbẹkẹle ona.Mean ifasimu ti o yatọ si awọn orukọ (D) orisirisi awọn orukọ ti o yatọ si awọn orukọ (D) ANOVA ti o nlo Tukey's post hoc onínọmbà; p <0.05) Awọn ọpa aṣiṣe jẹ aṣoju aṣiṣe deede ti itumọ (BE) .Laini ti o taara duro fun laini ipadasẹhin log-linear (F, G)
Lati tu ounjẹ ti o gba silẹ, awọn efon ni a gbe lọkọọkan sinu awọn tubes microcentrifuge 1.5 milimita ti o ni 230 µl ti omi distilled ati tissu ti wa ni idalọwọduro nipa lilo pestle isọnu ati mọto alailowaya (VWR International, Lund, SE), atẹle nipa centrifugation ni 10 krpm fun 10 krpm fun 10 min) Super-na gbe lọ si 10 min. microplate (Sigma-Aldrich) ati absorbance (λ620) ni a pinnu nipa lilo oluka microplate ti o da lori spectrophotometer (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm) . 620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE) .Lati ṣe iwọn gbigbemi ti ijẹunjẹ, a ti pese apẹrẹ ti o ṣe deede nipasẹ dilution tẹlentẹle lati mu 0.2 µl si 2.4 µl ti 1 mg ml-1 xylene cyanide.Lẹhinna, iwuwo opitika ti awọn ifọkansi awọ ti a mọ ni a lo lati pinnu iye awọn ifọkansi ti ounjẹ kọọkan.
A ṣe atupale data iwọn didun nipa lilo itupalẹ ọna kan ti iyatọ (ANOVA) atẹle nipasẹ awọn afiwera post hoc ti Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989-2007) . Awọn itupalẹ ifasẹyin laini ti ṣapejuwe gbigbemi urea ti o gbẹkẹle ifọkansi ati awọn ifọkansi-iwoye-gbalejo ati awọn idahun ti o rii laarin awọn agbalejo-Gesu v8.0.0 fun Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
O fẹrẹ to 20 µl ti awọn ayẹwo ito lati ẹgbẹ ọjọ-ori kọọkan ni a dè lori Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) ati ti a fi sinu awọn capsules tin (8 mm × 5 mm) . Waltham, MA, US) lati pinnu akoonu nitrogen ninu ito titun ati ti ogbo ni ibamu si ilana ilana olupese. Apapọ nitrogen (g N l-1) jẹ iwọn ti o da lori awọn ifọkansi urea ti a mọ ti a lo bi idiwọn.
Lati ṣe ayẹwo ipa ti ounjẹ lori wiwa-ogun ati iwalaaye obirin ti o nmu ẹjẹ, awọn efon ni a gbe ni ọkọọkan ni awọn ounjẹ Petri nla (12 cm ni iwọn ila opin ati 6 cm ni giga; Semadeni) pẹlu iho ti a fi awọ ṣe ni ideri (3 cm ni iwọn ila opin) pẹlu Fun atẹgun ati ipese ounje. Awọn ounjẹ ti a pese ni taara lẹhin 4 dpe ati pẹlu 1% ti a fi omi ṣan ti alabapade ati 1% ti a fi omi ṣan u ati 1% ti a fi omi ṣan u ati 1% diluted u idari, 10% sucrose ati water.Each onje ti a pipetted pẹlẹpẹlẹ a ehín tampon (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) fi sii sinu kan 5 milimita syringe (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), awọn plunger kuro, ati ki o gbe lori oke kan ti a ti petri satelaiti (apejuwe rẹ lab olusin loke awọn ọjọ 1).1A. Awọn efon ni a kà lẹmeji ọjọ kan, lakoko ti a ti sọ awọn efon ti o ku silẹ titi ti efon ti o kẹhin ti kú (n = 40 fun itọju) .Iwalaaye ti awọn efon ti a jẹun lori awọn ounjẹ oniruuru ni a ṣe ayẹwo ni iṣiro nipa lilo awọn igbiyanju iwalaaye Kaplan-Meyer ati awọn ayẹwo ipo-iwọle lati ṣe afiwe awọn afiwe pinpin iwalaaye laarin awọn ounjẹ (IBM SP.40).
A aṣa efon flying ọlọ da lori Attisano et al.[17], ṣe ti 5 mm nipọn ko akiriliki paneli (10 cm fife x 10 cm gun x 10 cm ga) lai iwaju ati ki o ru paneli (Fig. 3: oke) .A pivot ijọ pẹlu kan inaro tube ṣe ti a gaasi chromatography iwe (0.25 mmle id L 7.5 mm L;) ti daduro chromatography ni opin id; bata ti neodymium magnets 9 cm yato si. tube petele kan ti a ṣe ti ohun elo kanna (6.5 cm L) ti pin tube ti o ni inaro lati ṣe apa ti o ni asopọ ati apa ti o gbe nkan kekere ti aluminiomu aluminiomu bi ifihan agbara-ina.
Awọn obirin ti ebi npa 24-wakati ni a fun ni ounjẹ ti o wa loke fun awọn iṣẹju 30 ṣaaju ki o to ni idaduro. aṣa-itumọ ti data logger, lẹhinna ti o ti fipamọ ati ifihan nipa lilo PC-Lab 2000 ™ software (v4.01; Velleman, Gavere, BE) .A ti gbe ọlọ ọkọ ofurufu sinu yara ti o ni iṣakoso afefe (12 h: 12 h, ina: dudu, 25 ± 2 ° C, 65 ± 5% RH).
Lati ṣe akiyesi apẹrẹ ti iṣẹ-ṣiṣe ọkọ ofurufu, apapọ ijinna ti o fò (m) ati apapọ nọmba awọn iṣẹ-ṣiṣe ti o tẹle ni a ṣe iṣiro fun wakati kan lori akoko wakati 24. Ni afikun, awọn ijinna ti o pọju ti awọn obirin kọọkan ni a ṣe afiwe si awọn itọju ati ṣe atupale nipa lilo ọna-ọna ANOVA ati Tukey's post hoc onínọmbà (JMP Pro, v14.0.0), ni ibi ti a ṣe akiyesi aaye itọju SAS ti o gbẹkẹle, ni ibi ti a ṣe akiyesi aaye itọju ti o gbẹkẹle Inc. ifosiwewe.Ni afikun, nọmba apapọ ti awọn iyipo ti wa ni iṣiro ni awọn iṣẹju 10-iṣẹju.
Lati ṣe ayẹwo ipa ti ounjẹ lori iṣẹ ibisi ti An.arabiensis, awọn obirin mẹfa (4 dpe) ni a gbe lọ taara si awọn ẹyẹ Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) lẹhin igbasilẹ ẹjẹ ati lẹhinna pese ounjẹ idanwo fun 48 h gẹgẹbi a ti salaye loke. Awọn ounjẹ ti a ti yọ kuro ati awọn agolo spawning (30 milimita; Nolato Hertila) ti a pese ni ọjọ kẹta ti distilled. awọn wakati, iyipada ni gbogbo wakati 24. Tun ṣe ilana ijọba ounjẹ kọọkan ni awọn akoko 20-50. Awọn ẹyin ti a kà ati ki o gba silẹ fun ẹyẹ idanwo kọọkan. Awọn apẹẹrẹ ti awọn ẹyin ni a lo lati ṣe ayẹwo iwọn iwọn ati iyatọ gigun ti awọn eyin kọọkan (n ≥ 200 fun ounjẹ kọọkan) nipa lilo Dialux-20 microscope (DM1000; Ernst Leratz Weraica) ti o ni ipese pẹlu ẹrọ afọwọṣe Dialux-20 (DM1000); Ernst Leera (DFC) 320 R2; Leica Microsystems Ltd., DE) .Awọn eyin ti o ku ni a tọju ni yara iṣakoso afefe labẹ awọn ipo ti o ṣe deede fun awọn wakati 24, ati apẹẹrẹ ti awọn idin 1st instar ti o ṣẹṣẹ laipe (n ≥ 200 fun ounjẹ kan) ni a wọn, gẹgẹbi a ti salaye loke. Nọmba awọn ẹyin ati iwọn awọn eyin ati idin ni a fiwewe laarin awọn itọju ati lilo ọkan-itupalẹ ti o wa ni 1-igi-igi (n ≥ 200 fun onje). v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Headspace volatiles lati alabapade (1 hr post-sampling), 24 hr, 72 hr ati 168 hr aged ito won gba lati awọn ayẹwo ti a gba lati Zebu ẹran, Arsi races.Fun wewewe, ito awọn ayẹwo ti a gba ni kutukutu owurọ nigba ti awọn malu wà si tun ni abà.Urine samples won gba lati 10 ml kọọkan si 10 milimita kọọkan. polyamide baking baagi (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH ati Co., Minden, DE) ni 3 l polyamide pẹlu ideri Ni vinyl kiloraidi ṣiṣu drums.Headspace volatiles lati kọọkan bovine ito ayẹwo ti a gba boya taara (alabapade) tabi lẹhin maturation ni yara otutu fun 24 h, 68 ọjọ ori awọn ayẹwo ati 1.
Fun gbigba awọn volatiles ori aaye, a ti lo eto tiipa-pipade lati tan kaakiri ṣiṣan carbon-filtered carbon ti a mu ṣiṣẹ (100 milimita min-1) nipasẹ apo polyamide kan si iwe adsorption fun 2.5 h nipa lilo fifa vacuum diaphragm (KNF Neuberger, Freiburg, DE) .Gẹgẹbi iṣakoso kan, a ṣe gbigba polyamide ti o ṣofo. tubing (5.5 cm x 3 mm id) ti o ni 35 miligiramu ti Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, US) laarin awọn pilogi irun gilasi. Ṣaaju lilo, a ti fọ ọwọn naa pẹlu 1 milimita ti a tun ṣe atunṣe n-hexane (Merck, Darmstadt, DE) ati 19 ml. Aldrich) .Awọn iyipada adsorbed ti wa ni eluted pẹlu 400 μl ti pentane. Awọn akojọpọ ori aaye ti wa ni idapọ ati lẹhinna ti a fipamọ ni -20 ° C titi ti a fi lo fun imọran siwaju sii.
Awọn idahun ihuwasi ti wiwa ogun ati jijẹ ẹjẹ An.Headspace awọn iyọkuro iyipada ti a gba lati alabapade, 24-h, 72-h, ati ito 168-h-ar ti wa ni atupale fun awọn iyọkuro iyipada lati awọn efon Arabidopsis nipa lilo olfactometer tube gilasi taara [18]. aṣayan iṣẹ-ṣiṣe.Arab [19].A gilasi tube olfactometer (80 cm × 9.5 cm id) ti wa ni itana pẹlu 3 ± 1 lx ti ina pupa lati oke.Charcoal filtered and humidified air flow (25 ± 2 °C, 65 ± 2% ojulumo ọriniinitutu) kọja awọn bioassay ni 30 cm s s aisi-irin ti a ti kọja iboju, irin ti a ti kọja iboju ti o ti kọja nipasẹ iboju ti ash lash. a uniform plume structure.Dental tampon dispenser (4 cm × 1 cm; L: D; DAB Dental AB), ti daduro lati inu 5 cm coil kan lori afẹfẹ afẹfẹ ti olfactometer, pẹlu awọn iyipada ti o nfa ni gbogbo iṣẹju 5. Fun itupalẹ, 10 μl ti aaye ori-ori kọọkan, ti fomi 1: 10, ni a lo bi iye ti o jẹ pe iye iwọn ti iṣakoso. wiwa ogun tabi awọn ẹfọn ti o nfa ẹjẹ ni a gbe sinu awọn ẹyẹ ifasilẹ kọọkan ni awọn wakati 2-3 ṣaaju ibẹrẹ idanwo naa. A gbe ẹyẹ itusilẹ naa si apa isalẹ ti olfactometer, ati pe awọn efon ni a gba laaye lati ṣe acclimate fun 1 min, ati lẹhinna valve labalaba ti ẹyẹ naa ti ṣii lati tu silẹ. Ifarabalẹ ti o wa laarin itọju tabi iṣakoso ti o wa ni isunmọtosi ti o wa laarin awọn orisun ti o wa ni itupale moquito. Awọn iṣẹju 5 ti idasilẹ.Each headspace volatile extract and control were replicated ni o kere 30 igba, ati lati yago fun awọn ipa ti eyikeyi ojo kan, awọn nọmba kanna ti awọn itọju ati idari won ni idanwo lori kọọkan esiperimenta day.Wa awọn idahun lati ogun ati ẹjẹ-je Ans.Arabic dipo headspace tosaaju won atupale lilo nominal logistic regression atẹle nipa awọn afiwera Institute oddwise, S.4.0. Inc.).
An's spawning reply.Headspace ayokuro lati alabapade ati ti ogbo ito Maalu ni won atupale ni Bugdorm cages (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Imọ). 10 μl ti kọọkan headspace jade ni a 1: 10 dilution. An dogba iye ti pentane ti a lo lati ṣatunṣe awọn iṣakoso ife.Treatment ati iṣakoso agolo won paarọ laarin kọọkan ṣàdánwò lati sakoso fun ipo ipa.Ten ẹjẹ-je obirin won tu sinu esiperimenta cages ni ZT 9-11 ati eyin ni agolo won kà 24 wakati nigbamii.The agbekalẹ fun awọn spa ti wa ni awọn wakati 24 calculating. ago - nọmba awọn eyin ti a gbe sinu ago iṣakoso) / (nọmba apapọ awọn eyin ti a gbe) .Itọju kọọkan ni a tun ṣe ni igba 8.
Gas chromatographic ati elekitironi eriali Àpẹẹrẹ erin (GC-EAD) igbekale ti obinrin An.arabiensis ti a ṣe bi tẹlẹ ṣàpèjúwe [20].Ni ṣoki, alabapade headspace iyipada ayokuro ni won yapa nipa lilo ohun Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US) ni ipese pẹlu HP-5 kan (30 m × 0.0.25mm film sisanra, Aworan μm μm sisanra). ati ito ti ogbo.Hydrogen ti a lo gẹgẹbi alakoso alagbeka pẹlu iwọn ilawọn laini apapọ ti 45 cm s-1. Ayẹwo kọọkan (2 μl) ni abẹrẹ fun awọn aaya 30 ni ipo ti ko ni pipin pẹlu iwọn otutu inlet ti 225 °C. Iwọn otutu GC ti a ṣe eto lati 35 °C (3 iṣẹju idaduro) si 300 °C ni iṣẹju 10 C ni iṣẹju 10 Effluent splitter, 4 psi ti nitrogen ti a fi kun ati pipin 1: 1 ni Gerstel 3D / 2 kekere agbelebu iwọn didun ti o ku (Gerstel, Mülheim, DE) laarin ina ionization oluwari ati EAD. GC effluent capillary fun EAD ti kọja nipasẹ Gerstel ODP-2 gbigbe laini, eyi ti o ntọpa 5 tube tube 1 ° C ni ibiti o ti wa ni iwọn otutu ti 5 ° C ni ibiti o ti wa ni ibiti o ti kọja 5 tube 8 ° C. o ti dapọ pẹlu erogba-filtered, air humidified (1.5 l min-1) . A ti gbe eriali naa 0.5 cm lati inu iṣan ti tube naa. Efon kọọkan kọọkan jẹ iṣiro kan fun ẹda kan, ati fun awọn efon ti n wa ogun, o kere ju awọn atunṣe mẹta ni a ṣe lori awọn ayẹwo ito ti ọjọ ori kọọkan.
Idanimọ ti awọn agbo ogun bioactive ni awọn ikojọpọ ori aye ti ito egbo tuntun ati ti ogbo nipa lilo GC apapọ ati spectrometer pupọ (GC-MS; 6890 GC ati 5975 MS; Awọn Imọ-ẹrọ Agilent) lati mu awọn idahun eriali han ni itupalẹ GC-EAD, ti n ṣiṣẹ ni ipo ionization ikolu elekitironi ni 70 eVMS ti a fi agbara mu GC ti ni ipese si UI-5. iwe (60 m × 0.25 mm iwọn ila opin inu, 0.25 μm fiimu sisanra) nipa lilo helium bi alakoso alagbeka pẹlu iwọn oṣuwọn laini laini apapọ ti 35 cm s-1.A 2 μl ayẹwo ti a fi sii nipa lilo awọn eto injector kanna ati iwọn otutu adiro gẹgẹbi fun GC-EAD onínọmbà.Compounds ti a mọ ti o da lori akoko idaduro wọn (Ková) Ile-ikawe NIST14 (Agilent) .Awọn agbo ogun idanimọ ni a fi idi rẹ mulẹ nipasẹ abẹrẹ awọn iṣedede ododo (Faili Afikun 1: Table S2) .Fun titobi, heptyl acetate (10 ng, 99.8% mimọ kemikali, Aldrich) ni abẹrẹ bi boṣewa ita.
Ṣiṣayẹwo ipa ti olfato sintetiki ti o ni awọn agbo ogun bioactive ti a mọ ni ito tuntun ati ti ogbo lati fa wiwa ogun ati mimu ẹjẹ Ans.arabiensis, lilo olfactometer kanna ati ilana bi loke. 72-wakati, ati 168-wakati arugbo ito (Figure 5D-G; Afikun Faili 1: Table S2) .Fun onínọmbà, lo 10 μl ti a 1: 100 dilution ti awọn ni kikun sintetiki adalu, pẹlu ohun ìwò Tu oṣuwọn orisirisi lati to 140-2400 ng h-1, fun a ṣe ayẹwo-essucking ẹjẹ ati ki o gbalejo ti wa ni awọn oniwe-apejuwe. awọn akojọpọ pipe, ninu eyiti a yọkuro awọn akojọpọ iyokuro ti awọn agbo ogun kan ti idapọpọ pipe. Wa awọn idahun lati ọdọ agbalejo ati ti a jẹ ẹjẹ Ans.Arab vs sintetiki ati awọn idapọpọ iyokuro ni a ṣe atupale nipa lilo isọdọtun logistic ipin ti o tẹle pẹlu awọn afiwera pairwise fun awọn ipin ti odd (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Lati ṣe ayẹwo boya ito maalu le ṣe iṣẹ bi aaye ibugbe alejo fun awọn ẹfọn iba, ito maalu titun ati ti ogbo, ti a gba gẹgẹbi a ti salaye loke, ati omi ti a gbe sinu awọn buckets 3 l (100 milimita) ati ti a ṣeto sinu awọn ẹgẹ idẹ ogun. (BG-HDT version; BioGents, Regensburg, DE) .Mẹwa ẹgẹ gbe 50 m yato si ni àgbegbe, 400 m lati abule awujo (Silay, Ethiopia, 5°53′24′N, 37°29′24′′E) ko si ẹran, lori yẹ ibisi aaye ati awọn abule.Marun ẹgẹ won kikan niwaju ti a simu. ipo itọju ti wa ni yiyi ni alẹ fun apapọ awọn alẹ marun. Awọn nọmba ẹfọn ti a gba ni awọn ẹgẹ ti o ni ito ti awọn ọjọ ori ti o yatọ ni a ṣe afiwe pẹlu lilo atunṣe logistic pẹlu pinpin binomial beta (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Ni a iba-endemic abule nitosi ilu ti Maki, Oromia ekun, Ethiopia (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Figure 6A) .Iwadi naa waiye laarin aarin-Oṣù ati aarin-Kẹsán ṣaaju ki o to awọn lododun inu ile iṣẹku spraying, pẹlú pẹlu kan gun ojo akoko. Marun-meji-5 ti awọn ile ti a ti yan ni igberiko ti a ti yan ni aarin-Oṣù ati aarin-Oṣu Kẹsan. iwadi (Fig. 6A) . Awọn ilana ti a lo lati yan awọn ile ni: ko si eranko ti a gba laaye ninu ile, ko si sise inu ile (yiya igi-igi tabi eedu) ti a gba laaye (o kere ju lakoko akoko idanwo), ati awọn ile ti o pọju awọn olugbe meji, ti o sùn ni awọn ohun elo ti ko ni nkan. labẹ awọn itọju efon net.Ethical ifọwọsi ti a ti funni nipasẹ awọn Institutional Research Ethics Atunwo Board (IRB/022/2016) ti awọn Oluko ti Adayeba Sciences (CNS-IRB), Addis Ababa University, ni ibamu pẹlu awọn itọnisọna mulẹ nipasẹ awọn World Medical Association Declaration ti Helsinki.Consent lati kọọkan olori ti ile ti a gba pẹlu awọn iranlowo ti awọn osise agbegbe ti ilera itẹsiwaju ti agbegbe. ('kebele') ipele. Apẹrẹ adanwo tẹle 2 × 2 Latin square design, ninu eyiti awọn apapo sintetiki ati awọn iṣakoso ti a fi sọtọ si awọn ile ti a ti so pọ ni alẹ akọkọ ati ti a yipada laarin awọn ile ni alẹ idanwo ti o tẹle. A tun ṣe ilana yii ni igba mẹwa. Pẹlupẹlu, lati ṣe iṣiro iṣẹ-ṣiṣe efon ni awọn ile ti a ti yan, awọn ẹgẹ CDC ti ṣeto lati ṣiṣe marun itẹlera ni awọn alẹ ọjọ ati awọn akoko idanwo ni akoko kanna ni ibẹrẹ ọjọ aṣalẹ.
Adalu sintetiki ti o ni awọn agbo ogun bioactive mẹfa ni a tuka ni heptane (97.0% epo GC grade, Sigma Aldrich) ati tu silẹ ni 140 ng h-1 nipa lilo apanirun wick owu kan [20]. Olupin wick ti gba gbogbo awọn agbo ogun laaye lati tu silẹ ni awọn iwọn deede ni gbogbo igba idanwo wakati 12 naa. Iṣakoso ati Idena Arun (CDC) pakute ina (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Nọmba 6A) . Awọn ẹgẹ naa ni a gbe soke 0.8 - 1 m loke ilẹ, nitosi ẹsẹ ti ibusun, ati pe oluyọọda kan sùn labẹ idọti ti a ko ni itọju ati ṣiṣẹ laarin 18: 00 ati 06: 30 ti ibalopo ti ara ẹni, ti a ti mu ibalopo ti ara ẹni, ati awọn ipo iṣe-ara ti ara. ologbele-aboyun, ati aboyun [21] ni a ṣe ayẹwo ni atẹle nipa lilo iṣesi pipọ polymerase (PCR) lati ṣe idanimọ ẹda ti ara ẹni ti a mọ si A. gambiae sl. Ninu iwadi aaye, idẹkùn ti awọn ile ti a so pọ ni a ṣe atupale nipa lilo awoṣe isọda-ọrọ isọdi ti orukọ, nibiti ifamọra jẹ igbẹkẹle ti o gbẹkẹle ati ipadabọ (syntic 1). 0. SAS Institute Inc.).
Ṣe ayẹwo boya o jẹ ailewu.arabiensis ni anfani lati gba ito, orisun nitrogen akọkọ rẹ, urea, nipasẹ ifunni taara, laarin 48 h ti iṣakoso fun awọn ọjọ 4 post (dpe) wiwa ogun ati awọn idanwo ifunni ti awọn obinrin ti o jẹ ẹjẹ (Fig. 1A) . Mejeeji agbalejo ati awọn obinrin ti nmu ẹjẹ gba = significantly diẹ sucrose ju eyikeyi ounjẹ miiran, 2 tabi omi (F52). 0.0001 ati F (5,299) = 56.00, p <0.0001, lẹsẹsẹ; 1B, C) mM ni akawe si gbogbo awọn ifọkansi ati omi miiran, lakoko ti a ko ṣe iyatọ lati 10% sucrose (F (10,813) = 15.72, p <0.0001; Figure 1D) .Eyi jẹ iyatọ si idahun ti awọn obinrin ti o jẹ ẹjẹ, ti o gba deede diẹ sii urea-ti o ni awọn ounjẹ ti o ni urea = diẹ sii ju omi lọ, bi o tilẹ jẹ pe 5% kere ju omi lọ (50) 78.35, p <0.0001; Figure 1.1E) .Pẹlupẹlu, nigbati o ba ṣe afiwe laarin awọn ipinle ti ẹkọ-ara meji, awọn obirin phlebotomized gba urea diẹ sii ju awọn obirin ti o wa ni ile-iṣẹ ni awọn ifọkansi ti o kere julọ, ati pe awọn obirin wọnyi gba iru iye urea ni awọn ifọkansi ti o ga julọ (F (1,953) 0.0. 1F, G) . Lakoko ti gbigbe lati inu ounjẹ ti o ni urea han lati ni awọn iye ti o dara julọ (Fig 1D, E), awọn obirin ni awọn ilu-ara mejeeji ni anfani lati ṣe atunṣe iye urea ti o gba lori gbogbo awọn ifọkansi urea ni aṣa log-linear (Fig. 1F, G). .Bakanna, awọn efon han lati ṣakoso gbigba nitrogen wọn nipa ṣiṣe ilana iye ito ti o gba, bi iye nitrogen ninu ito ṣe afihan ni iye ti o gba (Figure 1B, C ati B insets).
Lati ṣe ayẹwo awọn ipa ti ito ati urea lori wiwa agbalejo ati iwalaaye ẹfọn-ẹjẹ, awọn obinrin ni wọn jẹ ito ti gbogbo awọn ọjọ-ori mẹrin (tuntun, 24 h, 72 h, ati 168 h post-deposition) ati ọpọlọpọ awọn ifọkansi urea, bakanna bi omi distilled ati 10% 10% sucrose ti yoo ṣiṣẹ bi atupalẹ ti o ṣe pataki ninu iwalaaye 2 kan. iwalaaye ninu awọn obinrin ti n wa agbalejo ( ito: χ2 = 108.5, df = 5, p <0.0001; urea: χ2 = 122.8, df = 5, p <0.0001; Fig. 2B, C) ati ẹjẹ ti o jẹ obirin (itọ: 93 χ0). 0.0001; urea: χ2 = 137.9, df = 5, p <0.0001; Figure 2D,E).Ni gbogbo awọn adanwo, awọn obirin jẹ ounjẹ ti ito, urea, ati omi ni awọn oṣuwọn iwalaaye ti o dinku pupọ si awọn obirin ti o jẹun ti o jẹun ti o yatọ si ijẹẹmu. awọn oṣuwọn, pẹlu awọn ti a jẹ 72-h ito stale (p = 0.016) nini iṣeeṣe iwalaaye ti o kere julọ (Fig. 2B) .Pẹlupẹlu, awọn obirin ti n wa ile-iṣẹ ti o jẹun 135 mM urea ti ye diẹ sii ju awọn iṣakoso omi lọ (p <0.04) (Fig. 2C = 2C) ti a fiwera pẹlu omi, awọn obinrin ati urin ti o jẹun 2. 0.001 ati p = 0.012, lẹsẹsẹ; Nọmba 2D), lakoko ti awọn obinrin ti o jẹun pẹlu ito wakati 72 ti ye diẹ sii ju awọn ti a fun ni ito kukuru tuntun ati ito 24-wakati (p <0.0001 ati p = 0.013, lẹsẹsẹ; Figure 2D,5-M) awọn ifọkansi ti urea ati omi (p <0.013; Nọmba 2E).
Iwalaaye ti ogun ati ti nmu ẹjẹ obinrin Anopheles arabinis ti o jẹun lori ito maalu ati urea.Ninu bioassay (A), awọn ẹfọn obinrin ni a pese ounjẹ ti o wa ninu ito malu tuntun ati ti ogbo, awọn ifọkansi ti urea, sucrose (10%) ati omi distilled (H2O) .The iwalaaye ti ogun-wiwa (B) gbogbo ẹjẹ (B) Moquitos. Awọn wakati 12 titi gbogbo awọn obinrin ti o jẹun lori ito (B, D) ati urea (C, E), ati awọn iṣakoso, Sucrose ati omi, ti ku.
Lapapọ ijinna ati nọmba ti awọn iyipo ti a pinnu ni idanwo ọlọ ọkọ ofurufu lori akoko 24-wakati kan yatọ laarin wiwa-ogun ati awọn efon ti nmu ẹjẹ, eyiti o ṣe afihan iṣẹ-ṣiṣe ti o kere ju ni apapọ (Fig 3) .Awọn efon ti o n wa ogun ti o pese ito tutu ati ti ogbo tabi sucrose ati omi fihan awọn ilana flight pato (Fig. 3), pẹlu awọn obirin ti o jẹun diẹ sii ni awọn ti o wa ni oju-ara tuntun 4. 168-wakati ti ogbo Mosquitoes ti o jẹun lori ito ti ṣe afihan awọn ilana afẹfẹ ti o yatọ ati pe o jẹ akọkọ diurnal. Awọn efon obinrin ti o pese sucrose tabi ito wakati 72 ṣe afihan iṣẹ-ṣiṣe ni gbogbo akoko 24-wakati, lakoko ti awọn obirin ti o pese omi ni o ṣiṣẹ diẹ sii ni akoko aarin. ito ti ọjọ-ori wakati 72 ni iriri idinku igbagbogbo ni iṣẹ ṣiṣe ju wakati 24 lọ (Aworan 3).
Ofurufu iṣẹ ti ode-koni ẹjẹ-mu obinrin Anopheles arabinis ono lori ito maalu ati urea.Ni awọn flight ọlọ igbeyewo, obinrin efon je lori alabapade ati ti ogbo ito Maalu, orisirisi awọn ifọkansi ti urea, sucrose (10%), ati distilled omi (H2O) won tethered to petele, larọwọto ogun rotating (wo ẹjẹ) ogun-ajo. (ọtun) awọn obirin, apapọ ijinna ati nọmba awọn ọkọ ofurufu fun wakati kan fun ounjẹ kọọkan lori akoko 24-wakati kan ni a gba silẹ (dudu: grẹy; ina: funfun) .Apapọ ijinna ati apapọ nọmba ti bouts ti wa ni han si awọn ọtun ti awọn ti sakediani aṣayan iṣẹ-ṣiṣe graph.Error ifi soju boṣewa aṣiṣe ti awọn tumosi.Statistical onínọmbà wo ọrọ.
Ni gbogbogbo, iṣẹ-ofurufu gbogbogbo ti awọn obinrin ti n wa agbalejo tẹle ilana ti o jọra si ti ijinna ọkọ ofurufu lori akoko wakati 24. Itumọ ijinna ọkọ ofurufu ti ni ipa pataki nipasẹ ounjẹ ti o jẹ ingested (F (5, 138) = 28.27, p <0.0001), ati awọn obinrin ti n wa ogun ti gba awọn wakati 72 ti ito fò lọna pupọ si awọn ijinna miiran (p 0). sucrose-je mosquitoes fò to gun ju alabapade (p = 0.022) ati 24-h-ori ito (p = 0.022) -je efon.Ni idakeji si awọn flight aṣayan iṣẹ-ṣiṣe ilana ti a sapejuwe nipasẹ awọn ito onje, urea-je ogun-wiwa obinrin ti o ti jubẹẹlo flight aṣayan iṣẹ-ṣiṣe lori kan 24-h akoko ti okunkun akoko. Awọn ilana iṣẹ ṣiṣe jẹ iru, awọn obinrin ti n wa ogun ti o jẹ urea pọ si ni iwọn ijinna ọkọ ofurufu ti o da lori ifọkansi ti o gba (F(5, 138) = 1310.91, p <0.0001).
Iwoye iṣẹ-ofurufu ti awọn efon ti nmu ẹjẹ jẹ iduroṣinṣin ati idaduro lori awọn wakati 24 ni gbogbo awọn ounjẹ, pẹlu iṣẹ ito ti o pọ sii ni akoko idaji keji ti akoko dudu fun awọn obirin ti o jẹun lori omi bi daradara bi ninu awọn obirin ti o jẹ alabapade ati 24 wakati atijọ (aworan 3) . Lakoko ti ounjẹ ito ti o ni ipa ti o ni ipa ti o tumọ si ijinna ofurufu ni ẹjẹ-jẹ = awọn obirin (F (5, 4.38). urea onje ko (F (5, 138) = 1.36, p = 0.24) .pẹlu ito miiran ati ounjẹ iṣakoso (tuntun, p = 0.0091; 72 wakati, p = 0.0022; 168 wakati, p = 0.001; sucrose, p = 0.001.
Awọn ipa ti ito ati ifunni urea lori awọn aye ibisi ni a ṣe ayẹwo ni awọn bioassays ti o gbe ẹyin (Nọmba 4A) ati pe a ṣe iwadii ni ibamu si nọmba awọn ẹyin ti a gbe kalẹ nipasẹ obinrin kọọkan, iwọn ẹyin, ati awọn idin akọkọ ti a ti hatch tuntun. Nọmba awọn ẹyin ti a gbe kalẹ. Awọn obinrin Arab ti a jẹ ito yatọ = yatọ nipasẹ ounjẹ (F(5,4.02.0). 4B) Awọn obinrin jẹ ito 24-wakati, ounjẹ ẹjẹ ti gbe awọn ẹyin pupọ diẹ sii ju awọn obinrin ti o jẹun awọn ounjẹ ito miiran ati pe wọn jẹ iru awọn ti o jẹ sucrose (Fig. 4B) .Bakanna, iwọn awọn ẹyin ti a gbe nipasẹ awọn obinrin ti o jẹ ito yatọ nipasẹ ounjẹ (F(5, 209) = 12.85,04 p. sucrose-je obinrin laying significantly o tobi eyin ju omi-je obirin , nigba ti awọn eyin ti awọn obirin je pẹlu 168 h ti ito wà significantly kere (Fig. 4C) .Ni afikun, ito onje significantly fowo idin iwọn (F (5, 187) = 7.86, p <0.0001), pẹlu significantly tobi larvaeid 2 lati eyin-7-2 eoldho. awọn obirin ti o jẹ ito ju lati awọn ẹyin ti a gbe lati awọn idin ẹyin.Omi-omi ati awọn obirin ti o ni ito 168-h (Figure 4D).
Iṣẹ ibisi ti obinrin Anopheles arabinis ti o jẹun lori ito maalu ati urea.Awọn efon obinrin ti o jẹ ẹjẹ jẹ ounjẹ ti o wa ninu ito malu tuntun ati ti ogbo, awọn ifọkansi ti urea, sucrose (10%), ati omi distilled (H2O) fun awọn wakati 48 ṣaaju gbigbe ni awọn wakati bioassays ati gbigba ẹyin 4 (awọn wakati Egg) E), iwọn ẹyin (C, F) ati iwọn idin (D, G) ni ipa pataki nipasẹ ounjẹ ti a pese ( ito malu: BD; urea: EG) . Awọn ọna fun paramita kọọkan ti a wọn nipa lilo awọn orukọ lẹta oriṣiriṣi yatọ si ara wọn (ANOVA-ọna kan ni lilo Tukey's post hoc onínọmbà; p <0.05) . Awọn ọpa aṣiṣe jẹ aṣoju aṣiṣe boṣewa ti ọna asopọ.
Gẹgẹbi paati nitrogenous pataki ti ito, urea, nigba ti a pese bi ounjẹ si awọn obinrin ti o jẹun ti ẹjẹ, ni ipa pataki awọn igbelewọn ibisi ni gbogbo awọn ẹkọ. Nọmba awọn ẹyin ti awọn obinrin ti jẹun urea, lẹhin ounjẹ ẹjẹ, ti o da lori ifọkansi urea (F(11, 360) = 4.69; p <0.0001), ifọkansi obinrin 4 laarin 3. mM gbe awọn ẹyin diẹ sii (Nọmba 4E) . Awọn obirin ti o jẹun lori awọn ifọkansi urea ti 134 µM tabi loke dubulẹ awọn ẹyin ti o tobi ju awọn obirin ti o jẹun lori omi (F (10, 4245) = 36.7; p <0.0001; Figure 4F), ati iwọn idin, biotilejepe o ni ipa nipasẹ awọn ifọkansi ti urea (3019 iya) (3019). <0.0001) jẹ iyipada diẹ sii (Fig. 4G).
Ìwò ifamọra si ogun-wá ito bovine headspace iyipada ayokuro.The arabiensis da iwon ninu awọn gilasi tube olfactometer (Fig. 5A) ti a significantly fowo nipasẹ ito ori (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Fig. 5B) . Post hoc onínọmbà ṣẹlẹ ni pataki ti o ga ito wakati 4 ti awọn ipele ito (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Fig. 5B). (72 wakati: p = 0.0060, 168 wakati: p = 0.012, pentane: p = 0.00070), Ayafi fun awọn olfato ti titun ito (p = 0.13; olusin 5B) .Biotilẹjẹpe awọn ìwò ifamọra ti ẹjẹ-siimu efon to = f = p ito õrùn ko ni pataki (8χ8). 0.067; Fig. 5C), awọn obirin wọnyi ni a ri pe o wuni diẹ sii si awọn ayokuro ti o ni iyipada ti o wa pẹlu 72-wakati ito ti a fiwe si awọn iṣakoso (p = 0.0066; Figure 5C).
Ihuwasi idahun si adayeba ki o si sintetiki ito Maalu odors ninu awọn search fun ogun ati ẹjẹ-je Anopheles arabianus.Schematic of the glass tube olfactometer (A).Attraction of headspace volatile extracts from fresh and aged cow ito to host (B) and blood-sucking (C) mosquitoes.Find thespace Anoples arabianus.Find the Lord tentacle.D 24-wakati (E), 72-wakati (F), ati 168-wakati (G) agbalagba ito Maalu ti wa ni han.Electron eriali erin (EAD) itọpa fihan foliteji ayipada ninu esi si bioactive agbo ninu awọn headspace eluted lati awọn chromatograph gaasi ati ki o ri nipasẹ a iná ion oluwari (FID) .The scale barde duro idahun. awọn oṣuwọn (µg h-1) ti awọn agbo ogun biologically ti nṣiṣe lọwọ ni a fihan. Aami akiyesi kan (*) tọkasi idahun iwọn kekere ti o ni ibamu.Asterisks meji (**) tọkasi awọn idahun ti ko ni atunṣe. Wa ogun (H) ati mimu ẹjẹ (I) An.arabiensis ni awọn ẹdun oriṣiriṣi oriṣiriṣi si awọn idapọmọra sintetiki ti awọn idapọmọra ti o ni itunmọ ti o ni itunmọ ti o ni itunmọ ti awọn ohun elo ti o ni itunnu titun ati awọn ohun elo ti o ni ibatan si awọn ohun elo ti o wa ni erupẹ tuntun. ni ifojusi si awọn orukọ lẹta oriṣiriṣi yatọ si ara wọn (ANOVA-ọna kan ni lilo Tukey's post hoc onínọmbà; p <0.05) . Awọn ọpa aṣiṣe jẹ aṣoju aṣiṣe boṣewa ti iwọn.
Obirin Ann.arabiensis, 72 h ati 120 h lẹhin ounjẹ ẹjẹ, lakoko fifun, ko si ààyò ti a fihan fun awọn iyọkuro iyipada ti ori aaye lati inu ito malu titun ati ti ogbo ti a fiwewe pẹlu awọn iṣakoso pentane (χ2 = 3.07, p> 0.05; Afikun faili 1: Fig. S1).
Fun obinrin Ann.arabiensis, GC-EAD ati GC-MS itupale mọ mẹjọ, mefa, mẹta ati mẹta bioactive agbo (Figure 5D-G) .Biotilẹjẹpe orisirisi ba wa ni awọn nọmba ti agbo ti o elicited electrophysiological ti şe won woye, julọ ti awọn wọnyi agbo wà bayi ni kọọkan headspace iyipada jade ti a gba lati alabapade ati ti ogbo ito.Nitorina, nikan physiological ti o jade lati inu ito ito ti o dagba kọọkan. ẹnu-ọna ti wa ninu awọn itupalẹ siwaju.
Iwọn idasilẹ iyipada lapapọ ti awọn agbo ogun bioactive ninu gbigba ori aaye pọ si lati 29 µg h-1 ninu ito tuntun si 242 µg h-1 ni ito ọjọ-wakati 168, nipataki nitori p-cresol ati m-formaldehyde Phenol pọsi bi daradara bi phenol.Ni ifiwera, awọn iwọn idasilẹ ti cycloh2 miiran decanal, dinku pẹlu jijẹ ọjọ ori ito, eyiti o ni ibamu pẹlu idinku ti a ṣe akiyesi ni kikankikan ifihan agbara (ọpọlọpọ) ninu chromatogram (Fig. 5D) -G apa osi) ati awọn idahun ti ẹkọ-ara si awọn agbo ogun wọnyi (Fig. 5D-G apa ọtun).
Iwoye, adalu sintetiki ni ipin adayeba ti o jọra ti awọn agbo ogun bioactive ti a ṣe idanimọ ni awọn iyọkuro iyipada ti awọn aaye ori ito titun ati ti ogbo (Fig. 5D–G) ko si han pe o fa afilọ pataki ni wiwa agbalejo kan (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; quito. 5H) tabi ẹjẹ-sucking. = 4, p = 0.30; Fig. 5I).Sibẹsibẹ, awọn afiwera post hoc laarin awọn itọju fihan pe awọn efon ti n wa ogun jẹ iwunilori pupọ si adalu sintetiki ti ito agbalagba 24-h ni akawe pẹlu awọn iṣakoso pentane (p = 0.0086; Figure 5H).
Lati ṣe ayẹwo ipa ti awọn ẹya ara ẹni kọọkan ninu awọn apopọ sintetiki ti ito ọjọ-ori 24-h, awọn idapọ iyokuro mẹfa ni a ṣe ayẹwo lodi si awọn akojọpọ pipe ni idanwo Y-tube, ninu eyiti a ti yọ awọn agbo ogun kọọkan kuro.Fun awọn efon ti n wa ogun, iyokuro awọn agbo ogun kọọkan lati idapọ pipe ni ipa pataki lori awọn idahun ihuwasi (χ2 = 19.60.3, p. 1: Ṣe nọmba S2A), gbogbo awọn akojọpọ iyokuro jẹ diẹ wuni ju Kere ju idapọpọ ni kikun. Ni idakeji, yiyọkuro awọn agbo ogun kọọkan lati inu idapọ sintetiki ni kikun ko ni ipa awọn idahun ihuwasi ti awọn efon ti n mu ẹjẹ (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), pẹlu ayafi ti decanal, eyiti o mu ki awọn ipele 2 ti o wa ni isalẹ ni afikun. 1: olusin S2B).
Ni abule ti o wa ni iba-ẹjẹ-ẹjẹ ni Etiopia, ipa ti adalu sintetiki ti ito malu 24-wakati ni fifamọra awọn efon labẹ awọn ipo aaye ni a ṣe ayẹwo fun awọn alẹ mẹwa (Fig. 6A) .Apapọ 4,861 efon ni a gba ati ti a mọ, eyiti 45.7% jẹ Anthropus.gambiaennopsis .9% . 35.4% jẹ Culex spp. (Afikun faili 1: Table S1) .Anopheles arabinis jẹ ọmọ ẹgbẹ kanṣoṣo ti eka eya An.Gambian ti a ṣe idanimọ nipasẹ itupalẹ PCR. Ni apapọ, awọn efon 320 ni a mu ni alẹ kan, lakoko eyiti awọn ẹgẹ akoko pẹlu awọn baits idapọpọ sintetiki mu diẹ ẹ sii awọn ẹfọn = ju awọn ẹgẹ ti a so pọ laisi adalu (χ120), p0.7. 0.0001). ti awọn efon ti a mu ninu awọn ẹgẹ ti o ni idapọ sintetiki ti pọ si ni pataki: wiwa alejo (χ2 (0, 2107) = 138.7, p <0.0001), ifunni ẹjẹ aipẹ (χ2 (0, 650) = 32.2, p <0.0001 = = 32.2, p <0.0001 = = 32.2, p <0.0001 = 6, p. 0.0123; Afikun faili 1: Table S1) .Eyi tun ṣe afihan ni apapọ nọmba ti awọn efon ti a mu: wiwa ogun> mimu ẹjẹ> aboyun> aboyun ologbele> akọ.
Agbeyewo aaye ti ipa ti 24-wakati sintetiki ito ito olfato.Awọn idanwo aaye ni a ṣe ni gusu-aringbungbun Etiopia (maapu), nitosi ilu Maki (fi sii), lilo awọn ile-iṣẹ fun Iṣakoso Arun (CDC) pakute ina (ọtun) ni awọn ile ti a ti so pọ, pẹlu apẹrẹ Latin square (aworan eriali) (Adortrapsthetic CDC obirin ti o ni imọran) (Adortrapsthetic CDC) arabesques (B), ṣugbọn kii ṣe Anopheles farroes (C), ni ọna ti o yatọ, ipa-igbẹkẹle ti ẹkọ iṣe-ara-ara.Ni afikun, awọn ẹgẹ wọnyi ti gba awọn nọmba ti o pọju ti awọn efon Culex. ṣe aṣoju atọka yiyan apapọ ni awọn orisii awọn ẹgẹ iṣakoso (ṣii; N = 5). .Asterisks tọkasi awọn ipele pataki iṣiro (*p = 0.01 ati *** p <0.0001)
Awọn eya mẹta naa ni a mu ni oriṣiriṣi ni awọn ẹgẹ ti o ni awọn apopọ sintetiki. Wiwa fun ogun (χ2 (1, 1345) = 71.7, p <0.0001), ifunni ẹjẹ (χ2 (1, 517) = 16.7, p <0.0001) = 0.0001) = oyun (χ2 (1, 1.345)) a .arabiensis ti wa ni idẹkùn ni idẹkùn ti o nfi iyọdapọ sintetiki (Fig. 6B), nigba ti iye An ko yato.Pharoensis ni orisirisi awọn ẹya ara ilu ti a ri (Fig. 6C) .Fun Culex, nikan ni ilọsiwaju ti o pọju ninu nọmba awọn efon ti n wa awọn ọmọ-ogun ni a ri ni awọn ẹgẹ = awọn ẹgẹ = bated with the synthetic mix (χ1.6). 0.0004; olusin 6D), akawe pẹlu awọn ẹgẹ iṣakoso.
Awọn ẹgẹ ẹgẹ ogun ti o wa ni ita ti awọn ogun ti o pọju laarin awọn aaye ibisi ati awọn agbegbe igberiko ni Etiopia ni a lo lati ṣe ayẹwo boya awọn apanirun iba lo õrùn ito maalu bi aaye ibugbe ogun.Ni aini ti awọn ifojusi ogun, ooru, ati pẹlu tabi laisi niwaju õrùn ito maalu, ko si awọn efon ti a gba (Fifiili 1: Fikun faili 1: Figure S3 niwaju iwọn otutu ti o ga, dor ati cow urine). awọn efon ni ifamọra ati ki o gba, botilẹjẹpe ni awọn nọmba kekere, ominira ti ọjọ ori ito (χ2 (5, 25) = 2.29, p = 0.13; Afikun faili 1: Nọmba S3) .Ni idakeji, awọn iṣakoso omi ko gba awọn efon iba ni awọn iwọn otutu ti o ga (Faili afikun 1: Figure S3).
Awọn efon iba gba ati pin kaakiri awọn agbo ogun ti o ni nitrogen nipasẹ ifunni isanpada lori ito Maalu (ie, puddles) lati jẹki awọn ami itan-akọọlẹ igbesi-aye, ti o jọra si awọn kokoro miiran [2, 4, 24, 25, 26]. Ito Maalu jẹ orisun isọdọtun ti o wa ni imurasilẹ ti o ni ibatan pẹkipẹki pẹlu awọn aaye isinmi fun awọn ibi-itọju iba, ati bii awọn ibi isunmi fun awọn iṣọn-igbẹ iba, ati bii awọn ibi-isimi ti o wa ni ile ibà, spawning sites.Female mosquitoes wa yi awọn oluşewadi nipa olfato ati ki o wa ni anfani lati fiofinsi awọn gbigba ti awọn nitrogenous agbo ninu ito, pẹlu urea, awọn pataki nitrogenous paati ninu ito [15, 16].Ti o da lori awọn obinrin efon ká eto ẹkọ ẹkọ ẹkọ ẹkọ ẹkọ ẹkọ ẹkọ ẹkọ ẹkọ ẹya-ara, awọn eroja ti o wa ninu ito ti wa ni soto lati jẹki awọn flight iṣẹ-ati iwalaaye ti awọn obinrin bi iwalaaye ti awọn flight aṣayan iṣẹ-ṣiṣe. Awọn abuda ibisi ti awọn ẹni-kọọkan ti o jẹun ti ẹjẹ ni akoko iyipo gonadotropic akọkọ.Nitorina, ito ito ṣe ipa pataki ti ijẹẹmu fun awọn iṣọn-aisan iba ti o wa ni pipade bi awọn agbalagba ti ko ni aijẹunjẹ [8], bi o ti n pese awọn efon abo pẹlu agbara lati gba awọn agbo ogun nitrogenous pataki nipasẹ gbigbe ni ifunni-kekere ti o ni ewu.Wiwa yii ni o ni ipa ti o pọju ti awọn iṣẹ-ṣiṣe ti awọn obirin ti o ni ipa lori awọn abajade ajakale-arun ti awọn obirin ti o ni ipa lori awọn abajade ti igbesi aye ti awọn aboyun, ati awọn abajade ti igbesi aye ti awọn obirin ti o ni ipa ti o pọju. agbara fekito.Pẹlupẹlu, ihuwasi yii le jẹ ibi-afẹde ti awọn eto iṣakoso fekito iwaju.