O ṣeun fun lilo si Nature.com.Ẹya ẹrọ aṣawakiri ti o nlo ni atilẹyin opin fun CSS.Fun iriri ti o dara julọ, a ṣeduro pe ki o lo ẹrọ aṣawakiri imudojuiwọn kan (tabi pa ipo ibaramu ni Internet Explorer) .Ni akoko yii, lati rii daju pe atilẹyin tẹsiwaju, a yoo ṣafihan aaye naa laisi awọn aza ati JavaScript.
Gene vectors fun awọn itọju ti cystic fibrosis ẹdọfóró arun yẹ ki o Àkọlé awọn ifọnọhan awọn atẹgun nitori agbeegbe ẹdọfóró transduction ko ni pese mba anfaani.Viral transduction ṣiṣe ti wa ni taara jẹmọ si fekito ibugbe time.Sibẹsibẹ, ifijiṣẹ fifa gẹgẹbi awọn ti ngbe Jiini nipa ti tan kaakiri sinu alveoli nigba awokose, ati ki o mba patikulu ti awọn gbigbe ni kiakia ti ibugbe ti eyikeyi fọọmu. Jiini ẹjẹ ni awọn ọna atẹgun jẹ pataki sugbon soro lati se aseyori.Gene ti ngbe-conjugated se awon patikulu ti o le wa ni directed si awọn dada ti awọn ọna atẹgun le mu agbegbe targeting.Nitori awọn italaya ti ni vivo iworan, awọn ihuwasi ti iru kekere se patikulu lori awọn airway dada ni niwaju ohun elo oofa aaye ti wa ni ibi ti gbọye.Ero ti awọn lilo ti awọn aworan ti awọn vivo ninu iwadi yi ni ibi. awọn patikulu oofa ninu atẹgun ti awọn eku anesthetized lati ṣe ayẹwo awọn agbara ati awọn ilana ti olukuluku ati ihuwasi patiku olopobobo ni vivo. vivo.Particles ko le ni irọrun fa pẹlu oju-ọna ti ọna atẹgun ti o wa laaye pẹlu awọn oofa, ṣugbọn lakoko gbigbe, awọn ohun idogo ti wa ni idojukọ ni aaye wiwo nibiti aaye oofa ti o lagbara julọ.Iṣẹ gbigbe ti a tun pọ si ni ilọpo mẹfa nigbati awọn patikulu oofa lentiviral ni a fi jiṣẹ ni iwaju aaye oofa kan.Papọ, awọn abajade wọnyi daba pe apakan lentiviral le ni ilọsiwaju si ibi-afẹde jiini lentiviral ati aaye ibi-afẹde ti o niyelori ti o ni ilọsiwaju si aaye gbigbẹ lentiviral. ati mu awọn ipele transduction pọ si ni ṣiṣe awọn ọna atẹgun ni vivo.
Cystic fibrosis (CF) jẹ nipasẹ iyatọ ninu ẹda kan ti a npe ni CF transmembrane conductance regulator (CFTR) .Amuaradagba CFTR jẹ ikanni ion ti o wa ninu ọpọlọpọ awọn sẹẹli epithelial jakejado ara, pẹlu awọn ọna atẹgun ti n ṣe atẹgun, aaye pataki kan ti CF pathogenesis. Awọn abawọn CFTR yorisi gbigbe omi ajeji, gbigbe omi oju-omi afẹfẹ ti afẹfẹ SLA. n ṣe idiwọ agbara ti eto gbigbe mucociliary (MCT) lati ko awọn patikulu ifasimu ati awọn aarun ayọkẹlẹ kuro lati awọn ọna atẹgun.Ipinnu wa ni lati ṣe agbekalẹ itọju ailera lentiviral (LV) lati fi ẹda ti o tọ ti jiini CFTR ati ilọsiwaju ASL, MCT, ati ilera ẹdọfóró, ati lati tẹsiwaju idagbasoke awọn imọ-ẹrọ tuntun ti o lagbara lati wiwọn awọn iwọn wọnyi ni vivo1.
Awọn olutọpa LV jẹ ọkan ninu awọn oludije asiwaju fun itọju ailera ti ọna atẹgun CF, paapaa nitori pe wọn le ṣepọ patapata jiini iwosan sinu awọn sẹẹli basal ti afẹfẹ (awọn sẹẹli atẹgun atẹgun) .Eyi ṣe pataki nitori pe wọn le ṣe atunṣe hydration deede ati imukuro mucus nipasẹ iyatọ si iṣẹ-ṣiṣe ti o ni atunṣe CF-atunṣe ti o niiṣe pẹlu CF ti o niiṣe pẹlu awọn sẹẹli oju-afẹfẹ ti o yẹ ki o jẹ awọn anfani ti ọna igbesi aye, ti o mu ki awọn anfani ti o wa ni igbesi aye. ni ibi ti CF ẹdọfóró arun bẹrẹ.Ifijiṣẹ ti awọn fekito jinle sinu ẹdọfóró le ja si ni alveolar transduction, sugbon yi ni o ni ko si mba anfani ni CF.Sibẹsibẹ, olomi gẹgẹbi awọn ti ngbe jiini nipa ti jade lọ si alveoli lori awokose lẹhin ifijiṣẹ3,4 ati ki o mba patikulu ti wa ni nyara nso sinu awọn ẹnu iho nipa gbigbe akoko ti erẹ. fekito maa wa lẹgbẹẹ awọn sẹẹli afojusun lati gba igbasilẹ cellular - "akoko ibugbe" 5 - eyi ti o ni irọrun dinku nipasẹ iṣan afẹfẹ agbegbe aṣoju bi daradara bi imudani patiku mucus ati MCT.Fun CF, agbara lati pẹ akoko ibugbe ti LV laarin ọna atẹgun jẹ pataki lati ṣe aṣeyọri awọn ipele giga ti gbigbe ni agbegbe yii, ṣugbọn o ti jẹ idijaja.
Lati bori idiwo yii, a daba pe awọn patikulu magnetic LV (MPs) le ṣe iranlọwọ ni awọn ọna ibaramu meji. Ni akọkọ, wọn le ṣe itọsọna magnetically si oju-ọna oju-ofurufu lati mu ilọsiwaju idojukọ ati ṣe iranlọwọ fun awọn patikulu ti ngbe jiini gbe ni agbegbe atẹgun ti o fẹ; ati ASL) lati gbe si sẹẹli Layer 6.MPs ti ni lilo pupọ bi awọn ọkọ gbigbe oogun ti a fojusi nigbati wọn sopọ si awọn apo-ara, awọn oogun chemotherapeutic, tabi awọn ohun elo kekere miiran ti o so mọ awọn membran sẹẹli tabi sopọ si awọn olugba oju sẹẹli ti o yẹ ati pejọ ni awọn aaye tumo ni iwaju ina aimi. Oofa aaye fun akàn Itoju 7. Miiran “hyperthermal” imuposi ifọkansi lati ooru soke MPs nigba ti won ti wa ni fara si oscillating se aaye, nitorina run tumo cell.The opo ti se gbigbe, ninu eyi ti a se aaye ti wa ni lo bi awọn kan gbigbe oluranlowo lati jẹki awọn gbigbe ti DNA si awọn sẹẹli, ti wa ni commonly lo ninu fitiro lilo kan ibiti o ti gbogun ti awọn ti kii-ẹda-ẹjẹ ati awọn ti o munadoko awọn ila ti awọn sẹẹli ti o munadoko. ti LV magnetotransfection ti a ti iṣeto, pẹlu ni fitiro ifijiṣẹ ti LV-MPs to a eda eniyan bronhical epithelial cell laini niwaju kan aimi aaye, jijẹ transduction ṣiṣe nipasẹ 186-agbo akawe si LV fekito only.LV-MP ti a ti tun loo si ohun in vitro CF awoṣe, ibi ti se gbigbe ti o pọju LV niwaju iwọn ni wiwo CF ni wiwo air-agbo. sputum10.Sibẹsibẹ, ni vivo magnetotransfection ti awọn ara ti gba jo kekere akiyesi ati ki o ti nikan a ti akojopo ni kan diẹ eranko studies11,12,13,14,15, paapa ninu awọn lungs16,17.Sibẹsibẹ, awọn anfani fun oofa gbigbe ni CF ẹdọfóró ailera wa ni ko o. Tan et al. Ifijiṣẹ ẹdọforo yoo pa ọna fun awọn ọgbọn ifasimu CFTR iwaju lati mu awọn abajade ile-iwosan dara si ni awọn alaisan CF”6.
Ihuwasi ti awọn patikulu oofa kekere lori awọn aaye oju-ofurufu ni iwaju aaye oofa ti a lo ni o ṣoro lati wo oju ati iwadi, ati nitorinaa a ko loye.Ninu awọn ijinlẹ miiran, a ṣe agbekalẹ synchrotron-propagation-based fase-contrast X-ray imaging (PB-PCXI) ọna lati ṣe aiṣe-vasively wiwo ati ṣe iwọn iṣẹju ni vivo awọn ayipada ninu ASL si iwọn gaasi18 ati le ṣe iwọn gaasi20 taara. ti a lo bi itọka ibẹrẹ ti ipa itọju.Ni afikun, ọna igbelewọn MCT wa nlo awọn patikulu iwọn ila opin 10-35 µm ti alumina tabi gilaasi itọka itọka giga bi awọn ami-ami MCT ti o han nipa lilo PB-PCXI21.Awọn ilana mejeeji dara fun iwoye ti awọn iru patiku, pẹlu MP.
Nitori awọn oniwe-giga aaye ati awọn ti o ga akoko, wa PB-PCXI-orisun ASL ati MCT onínọmbà imuposi ni o wa daradara ti baamu fun ayẹwo awọn dainamiki ati awọn ilana ti nikan ati ki o olopobobo patiku ihuwasi ninu vivo lati ran wa ni oye ati ki o je ki MP jiini awọn ọna ti ifijiṣẹ imuposi.The ona ti a gba sise nibi derives lati wa-ẹrọ nipa lilo awọn orisun omi-8 BL20B20 iwọn lilo omi gbigbe gbigbe ni wiwo ti a fi oju sinu iwọn lilo ti orisun omi-8 BL20B22. imu ati ẹdọforo atẹgun ti awọn eku lati ṣe iranlọwọ lati ṣalaye awọn ilana ikosile jiini ti kii ṣe aṣọ ti a ṣe akiyesi ninu awọn ẹkọ ẹranko ti ngbe pupọ wa 3,4.
Ero ti iwadi yii ni lati lo synchrotron PB-PCXI lati wo awọn iṣipopada in vivo ti onka awọn ọmọ ile-igbimọ ninu ọra ti awọn eku alãye. Awọn ijinlẹ aworan PB-PCXI wọnyi ni a ṣe lati ṣe idanwo ọpọlọpọ awọn MPs, awọn agbara aaye oofa, ati awọn ipo lati pinnu ipa wọn lori išipopada MP. wa lati ṣe idanimọ awọn atunto oofa ti o mu ki nọmba awọn patikulu ti o wa ninu trachea pọ si lẹhin igbasilẹ.Ninu jara keji ti awọn ẹkọ, a wa lati lo iṣeto ti o dara julọ yii lati ṣe afihan ilana gbigbe ti o waye lati inu vivo ifijiṣẹ ti LV-MPs si ọna atẹgun eku, da lori arosinu pe ifijiṣẹ LV-MPs ni ipo ti ifọkansi oju-ofurufu yoo mu ilọsiwaju LV.
Gbogbo awọn ẹkọ ẹranko ni a ṣe gẹgẹbi awọn ilana ti a fọwọsi nipasẹ University of Adelaide (M-2019-060 ati M-2020-022) ati SPring-8 Synchrotron Animal Ethics Committee.Awọn idanwo ni a ṣe gẹgẹbi awọn ilana ARRIVE.
Gbogbo awọn aworan aworan X-ray ni a ṣe ni BL20XU beamline ni SPring-8 synchrotron ni Japan, ni lilo iṣeto ti o jọmọ ti a ti ṣalaye tẹlẹ21,22. Ni kukuru, apoti idanwo ti wa ni 245 m lati inu oruka ipamọ synchrotron. Ayẹwo-si-detector ti 0.6 m ti wa ni lilo fun awọn imọ-ẹrọ aworan aworan ti o yatọ si m 0. Agbara ina monochromatic ti 25 keV ni a lo. Awọn aworan ni a gba pẹlu lilo oluyipada X-ray ti o ga-giga (SPring-8 BM3) pọ si aṣawari sCMOS. Oluyipada naa ṣe iyipada awọn egungun X si ina ti o han nipa lilo 10 µm nipọn scintillator (Gd3Al2Ga3O12) ti o nipọn (Gd3Al2Ga3O12), eyi ti o jẹ itọnisọna ohun elo 1CMOS0 si microscope kan. 0.3).Oluwari sCMOS naa jẹ Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Japan) pẹlu titobi titobi 2048 × 2048 pixels ati iwọn piksẹli aise kan ti 6.5 × 6.5 µm. Iṣeto yii n pese iwọn piksẹli isotropic ti o munadoko ti 0.51 µm ati aaye ipari ti 1.1 mm. 100 ms ti yan lati mu iwọn ifihan agbara-si-ariwo ti awọn patikulu oofa inu ati ita ọna atẹgun lakoko ti o dinku awọn ohun elo iṣipopada ti mimi.Fun ninu awọn ẹkọ vivo, iyara X-ray ti o yara ni a gbe ni ọna X-ray lati ṣe idinwo iwọn itọsi nipasẹ didi egungun X-ray laarin awọn ifihan.
A ko lo agbẹru LV ni eyikeyi awọn ijinlẹ aworan SPring-8 PB-PCXI nitori iyẹwu aworan BL20XU kii ṣe ifọwọsi Ipele Biosafety 2. Dipo, a yan ọpọlọpọ awọn MPs ti o ni agbara daradara lati awọn olupese iṣowo meji-ibora awọn titobi titobi, awọn ohun elo, awọn ifọkansi iron, ati awọn ohun elo ti o wa laarin aaye akọkọ lati ni ipa lori awọn ohun elo gilasi ati awọn ohun elo MP. awọn ọna atẹgun. lori dada.MPs ibiti ni iwọn lati 0.25 to 18 μm ati ki o ti wa ni se lati kan orisirisi ti awọn ohun elo (wo Table 1), ṣugbọn awọn tiwqn ti kọọkan ayẹwo, pẹlu awọn iwọn ti awọn se patikulu laarin MP, jẹ unknown.Based lori wa sanlalu MCT-ẹrọ 19, 20, 21, 23, 24, a reti wipe MPS bi kekere bi 5 dada ti a le ri lori awọn airway. iyokuro awọn fireemu itẹlera lati rii iwo imudara ti iṣipopada MP. Iwọn iwọn 0.25 μm kan kere ju ipinnu ẹrọ aworan lọ, ṣugbọn PB-PCXI ni a nireti lati rii iyatọ iwọn didun wọn ati iṣipopada omi dada lori eyiti wọn fi sii lẹhin ifisilẹ.
Awọn ayẹwo fun MP kọọkan ni Table 1 ni a pese sile ni awọn capillaries gilasi 20 μl (Drummond Microcaps, PA, USA) pẹlu iwọn ila opin ti inu ti 0.63 mm. Awọn patikulu corpuscular wa ninu omi, lakoko ti awọn patikulu CombiMag wa ninu omi-ini ti olupese.Each tube ti wa ni idaji ti o kún fun omi (isunmọ 1) gilasi. capillaries won gbe nâa lori awọn ipele ayẹwo ni awọn aworan apoti, lẹsẹsẹ, ki o si ipo awọn egbegbe ti awọn fluid.A 19 mm opin (28 mm gun) nickel ikarahun rare earth neodymium iron boron (NdFeB) magnet (N35, cat. No. LM1652, Jaycar Electronics, Australia) pẹlu kan iṣẹku se aseyori kan ti o ti wa ni isakoṣo latọna jijin ti Tela1. nigba ti aworan.X-ray image akomora bẹrẹ nigbati awọn oofa wa ni ipo to 30 mm loke awọn ayẹwo, ati awọn aworan ti wa ni ipasẹ ni kan oṣuwọn ti 4 awọn fireemu fun keji. Nigba aworan, awọn oofa ti a mu sunmo si awọn gilasi capillary tube (nipa 1 mm kuro) ati ki o si tumo pẹlú awọn tube lati se ayẹwo awọn ipa ti aaye agbara ati ipo.
Iṣeto aworan in vitro ti o ni awọn ayẹwo MP ninu awọn capillaries gilasi lori ipele itumọ xy ayẹwo. Ọna ti X-ray beam ti samisi pẹlu laini fifọ pupa.
Ni kete ti a ti fi idi hihan in vitro ti awọn MPs mulẹ, ipin kan ninu wọn ni idanwo ni vivo ni awọn eku abo albino Wistar iru egan (~ 12 ọsẹ atijọ, ~ 200 g) .0.24 mg/kg medetomidine (Domitor®, Zenoaq, Japan), 3.2 mg/kg midazolam (Dormicum®, Astelg) ati Japan (Vetorphale®, Meiji Seika) Eku ti wa ni anesthetized pẹlu kan adalu Pharma), Japan) nipa intraperitoneal abẹrẹ.Lẹhin akuniloorun, won ti pese sile fun aworan nipa yiyọ awọn onírun ni ayika awọn trachea, fifi ohun endotracheal tube (ET; 16 Ga iv cannula, Terumo BCT) ati lori immobilizing awọn iwọn otutu ti o ni awọn iwọn otutu ti o ni awọn iwọn otutu ti a ṣe lati ṣetọju iwọn otutu ti a ṣe. 22 .Awo awo aworan lẹhinna so si ipele itumọ ayẹwo ni apoti aworan ni igun diẹ lati ṣe deedee trachea ni petele ni aworan X-ray, bi a ṣe han ni Figure 2a.
(a) Ninu iṣeto aworan vivo ni apoti aworan SPring-8, ọna ti X-ray beam ti samisi pẹlu ila ila pupa kan.
Eto fifa syringe isakoṣo latọna jijin (UMP2, Awọn ohun elo Itọka Agbaye, Sarasota, FL) nipa lilo syringe gilasi 100 μl ti a ti sopọ si PE10 tubing (OD 0.61 mm, ID 0.28 mm) nipasẹ abẹrẹ 30 Ga. Samisi tube lati rii daju pe itọpa naa wa ni itọpa tube ti o tọ nigbati o ba wa ni ipo ti o tọ ni micropuing tube. syringe plunger ti yọ kuro lakoko ti a ti fi ipari ti tube naa sinu apẹrẹ MP lati firanṣẹ.The tube ifijiṣẹ ti a kojọpọ lẹhinna ti fi sii sinu tube endotracheal, fifi aaye naa sinu apakan ti o lagbara julọ ti aaye oofa ti a ti ṣe yẹ ti a ti ṣe yẹ. Imudaniloju aworan ti wa ni iṣakoso nipa lilo oluwari isunmi ti a ti sopọ si Arduino orisun akoko akoko, ati gbogbo awọn ifihan agbara ti o gbasilẹ, iwọn otutu ti o wa ni gbigbẹ, fun apẹẹrẹ, iwọn otutu, ati awọn ifihan agbara ti o wa ni šiši. Powerlab ati LabChart (AD Instruments, Sydney, Australia) 22. Nigba ti aworan Nigbati awọn apade je inaccessible, meji IP kamẹra (Panasonic BB-SC382) wa ni ipo ni to 90 ° si kọọkan miiran ati awọn ti a lo lati bojuto awọn ipo ti awọn oofa ojulumo si awọn trachea nigba aworan (Fig. 2b,c) .Lati gbe awọn aworan ti a fi opin si-mimu nigba ti o ti gba perft. Plateau.
Oofa ti wa ni asopọ si ipele keji ti o le wa latọna jijin lati ita ile aworan. Awọn ipo oofa orisirisi ati awọn atunto ni idanwo, pẹlu: Agesin ni igun kan ti o to 30 ° loke trachea (awọn atunto ti o han ni Awọn nọmba 2a ati 3a); oofa kan ti o wa loke ẹranko ati ekeji ni isalẹ, pẹlu awọn ọpa ti a ṣeto lati fa (Figure 3b); oofa kan loke ẹranko ati ekeji ni isalẹ, pẹlu awọn ọpa ti a ṣeto lati kọ (Figure 3c); ati ọkan oofa loke ati papẹndikula si awọn trachea (Figure 3d) .Ni kete ti eranko ati oofa ti wa ni tunto ati awọn MP lati wa ni idanwo ti wa ni ti kojọpọ sinu awọn syringe fifa, fi kan 50 μl iwọn lilo ni a oṣuwọn ti 4 μl / sec nigba ti gbigba images.The magnet wa ni ki o gbe pada ati siwaju pẹlú tabi ita kọja awọn aworan nigba ti tẹsiwaju lati gba awọn aworan.
Iṣeto oofa fun in vivo imaging (a) oofa kan loke atẹgun ni igun kan ti o to 30 °, (b) awọn oofa meji ṣeto lati fa, (c) awọn oofa meji ṣeto lati kọ, (d) oofa kan loke ati papẹndikula ni trachea. Oluwoye wo isalẹ lati ẹnu si ẹdọforo nipasẹ ọna atẹgun, ati pe X-ray ti o wa ni apa ọtun kọja nipasẹ awọn oofa ẹgbẹ ọtun. gbe ni gigun ti ọna atẹgun tabi osi ati ọtun loke atẹgun si ọna ti X-ray tan.
A tun wa lati pinnu hihan ati ihuwasi ti awọn patikulu ni awọn ọna atẹgun ni laisi isunmi airoju ati iṣipopada ọkan ọkan.Nitorina, ni opin akoko aworan, awọn ẹranko ni a pa eniyan ti eniyan fun overdose pentobarbital (Somnopentil, Pitman-Moore, Washington Crossing, USA; ~ 65 mg / kg ip, awọn ẹranko duro ni kete ti o duro lori aaye ibi-mimu ati awọn ẹranko ti o duro lori pẹpẹ). Ilana aworan ti tun ṣe, fifi afikun iwọn lilo MP ti ko ba han ni oju ọna atẹgun.
Awọn aworan ti o gba ni aaye alapin ati ti a ṣe atunṣe aaye dudu ati lẹhinna pejọ sinu fiimu kan (awọn fireemu 20 fun iṣẹju keji; 15-25 × iyara deede ti o da lori oṣuwọn atẹgun) ni lilo iwe afọwọkọ aṣa ti a kọ sinu MATLAB (R2020a, Awọn Mathworks).
Gbogbo awọn ikẹkọ ifijiṣẹ jiini LV ni a ṣe ni Ile-iṣẹ Iwadi Eranko ti yàrá ni Ile-ẹkọ giga ti Adelaide ati ifọkansi lati lo awọn abajade ti idanwo SPring-8 lati ṣe ayẹwo boya ifijiṣẹ LV-MP ni iwaju aaye oofa kan le mu gbigbe gbigbe pupọ pọ si ni vivo.
LV gene vectors won ti ipilẹṣẹ nipa lilo awọn ọna ti a ti ṣapejuwe tẹlẹ 25, 26 .The LacZ fekito expresses iparun-agbegbe beta-galactosidase Jiini ìṣó nipasẹ awọn constitutive MPSV olugbeleke (LV-LacZ), eyi ti o gbe awọn kan blue lenu ọja ni transduced ẹyin, han ni ẹdọfóró àsopọ fronts ati tissues awọn apakan.Titration ti a ṣe ni awọn sẹẹli ti o dara ni kika sẹẹli LacZ ti o dara ni awọn sẹẹli ti o wa ni ọna kika. hemocytometer lati ṣe iṣiro titer ni TU / ml. Awọn ọkọ ayọkẹlẹ ti wa ni ipamọ ni -80 ° C, thawed ṣaaju lilo, ati ni asopọ si CombiMag nipa didapọ ni ipin 1: 1 ati incubating lori yinyin fun o kere 30 iṣẹju ṣaaju ifijiṣẹ.
Awọn eku Sprague Dawley deede (n = 3 / ẹgbẹ, ~ 2-3 ti wa ni anesthetized intraperitoneally pẹlu adalu 0.4 mg / kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) ati 60 mg / kg ketamine (Ilium, Australia) oṣooṣu) ip) abẹrẹ ati ti kii-abẹ-abẹ ti o le ṣe atẹgun atẹgun 16Tola àsopọ gba LV transduction, ti o ti iloniniye nipa lilo wa tẹlẹ ṣàpèjúwe darí perturbation Ilana, ninu eyi ti awọn tracheal airway dada ti a rubbed axially pẹlu kan waya agbọn (N-Circle, Nitinol Tipless Stone Extractor NTSE-022115) -UDH, Cook Medical, USA) 30 s28.Tracheal ailewu iseju ti a ṣe nipasẹ L minisita 1.028. rudurudu.
Aaye oofa ti a lo ninu idanwo yii ni a tunto ni ọna ti o jọra si iwadii aworan aworan in vivo X-ray, pẹlu awọn oofa kanna ti o waye loke ọna atẹgun nipa lilo awọn agekuru stent distillation (Nọmba 4) .A 50 μl iwọn didun (2 × 25 μl aliquots) ti LV-MP ti a fi jiṣẹ sinu trachea = A ti ṣapejuwe ẹgbẹ ti pipe (n = tte eranko) tẹlẹ. 3 eranko) gba LV-MPs kanna laisi lilo oofa.Lẹhin ti idapo naa ti pari, a ti yọ cannula kuro ninu tube ET ati pe eranko naa wa ni extubated.Magna naa wa ni aaye fun awọn iṣẹju 10, lẹhinna a yọ kuro. Awọn eku gba iwọn lilo subcutaneous ti meloxicam (1 milimita / kg) (Ilium, Australia) ti abẹrẹ ti 1 mg ti abẹrẹ ti abẹrẹ ti abẹrẹ ti abẹrẹ ti 1 mg (Ilium, Australia) ti abẹrẹ ti abẹrẹ ti 1 mg hydrok (Antisedan, Zoetis, Australia).
Ohun elo ifijiṣẹ LV-MP ni minisita aabo ti ibi.Imọlẹ grẹy Luer ibudo ti tube ET ni a le rii ti o yọ jade lati ẹnu ati ipari gel ti pipette ti o han ni aworan ti fi sii nipasẹ tube ET si ijinle ti o fẹ sinu trachea.
Ni ọsẹ kan lẹhin ilana iwọn lilo LV-MP, awọn ẹranko ni a pa eniyan nipasẹ 100% ifasimu CO2 ati ikosile LacZ ti a ṣe ayẹwo nipa lilo itọju X-gal boṣewa wa.Awọn caudal mẹta ti o pọ julọ awọn oruka cartilaginous ti yọ kuro lati rii daju pe eyikeyi ibajẹ ẹrọ tabi idaduro ito lati ibi-itọju tube endotracheal ko wa ninu itupalẹ.Ọkọọkan trachea ti ge lati ge ni igba pipẹ ti o wa ninu satelaiti kan ati pe wọn ti ge ni gigun ni gigun ati pe wọn ti ṣe agbero ti o ni awọn iwọn ilawọn meji. silikoni roba (Sylgard, Dow Inc) lilo abẹrẹ Minutien (Fine Science Tools) lati wo oju iboju luminal. Awọn pinpin ati ilana ti awọn sẹẹli ti a ti yipada ni a fi idi rẹ mulẹ nipasẹ fọtoyiya iwaju nipa lilo microscope Nikon (SMZ1500) pẹlu kamẹra DigiLite kan ati software TCapture (Tucsen Photonics, China) Awọn aworan 20 ti a gba ni iwọn ti o ga julọ (Awọn aworan 20 ti o ga julọ ti o pọju ni gbigbo ni iwọn ti o pọju). trachea), pẹlu gbogbo ipari ti trachea aworan ni igbese-nipasẹ-Igbese, aridaju to ni lqkan laarin kọọkan aworan lati gba fun awọn aworan “stitching” aworan.Aworan lati kọọkan trachea won ki o si jọ sinu kan nikan apapo image lilo awọn Image Composite Editor v2.0.3 (Microsoft Iwadi) lilo a planar išipopada algorithm.LacZified lati awọn agbegbe ti awọn ẹranko ni awọn agbegbe ti o ni ipa ti o ni ibamu pẹlu awọn agbegbe ti o ni iṣiro ti o wa ni agbegbe ti o wa ni iṣiro ti o wa ni agbegbe ti o ni iṣiro ti o wa ni agbegbe ti o wa ninu awọn ilana ti o niiṣe pẹlu algorithm. Iwe afọwọkọ MATLAB (R2020a, MathWorks) gẹgẹbi a ti ṣalaye tẹlẹ, ni lilo awọn eto ti 0.35
Kọọkan trachea ti wa ni ifibọ sinu paraffin ati awọn apakan μm 5 ni a ge. Awọn apakan ni a koju pẹlu pupa didoju ti o yara fun awọn iṣẹju 5 ati awọn aworan ti a ti gba nipa lilo microscope Nikon Eclipse E400, DS-Fi3 kamẹra ati NIS eroja Yaworan software (version 5.20.00).
Gbogbo awọn atupale iṣiro ni a ṣe ni GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.) . Awọn iṣiro iṣiro ti ṣeto ni p ≤ 0.05. Normality ti wa ni idaniloju nipa lilo idanwo Shapiro-Wilk, ati awọn iyatọ ti LacZ idoti ni a ṣe ayẹwo nipa lilo t-test ti ko ni iyasọtọ.
Awọn MPs mẹfa ti a ṣe apejuwe ni Table 1 ni a ṣe ayẹwo ni lilo PCXI, ati ifarahan ti wa ni apejuwe ni Table 2. Meji polystyrene MPs (MP1 ati MP2; 18 μm ati 0.25 μm, lẹsẹsẹ) ko han labẹ PCXI, ṣugbọn awọn iyokù ti awọn ayẹwo jẹ idanimọ (awọn apẹẹrẹ ti han ni Figure 5% 1 MP3-5) . μm ati 0.9 μm, lẹsẹsẹ) ti han lainidii.Biotilẹjẹpe ti o ni diẹ ninu awọn patikulu ti o kere julọ ti idanwo, MP5 (98% Fe3O4; 0.25 μm) jẹ eyiti a sọ julọ.Ọja CombiMag MP6 jẹ gidigidi lati rii.Ni gbogbo awọn ọran, agbara wa lati rii MP ti ni ilọsiwaju pataki nipasẹ itumọ ti iṣan paramita naa. capillary, awọn patikulu gbooro ni awọn okun gigun, ṣugbọn bi awọn oofa ti sunmọ ati agbara aaye oofa ti pọ si, awọn okun patiku naa kuru bi awọn patikulu ti lọ si oke dada ti capillary (wo Fidio Afikun S1: MP4), jijẹ iwuwo patiku ti oju. oke oke ti capillary (wo Afikun Fidio S2: MP4) .Lẹhin ti oofa naa duro gbigbe, awọn patikulu naa tẹsiwaju lati gbe fun igba diẹ lẹhin ti o de ipo iwọntunwọnsi. Bi MP ti nlọ si ati kuro lati oke oke ti capillary, awọn patikulu oofa maa n fa idoti naa nipasẹ omi.
Hihan ti MP labẹ PCXI yatọ significantly laarin awọn ayẹwo.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 ati (d) MP6. Gbogbo awọn aworan han nibi won ya pẹlu kan oofa be to 10 mm taara loke awọn capillary.The kedere tobi iyika ni o wa air nyoju idẹkùn ninu awọn capillaries, kedere fifi awọn dudu ati funfun eti awọn ẹya ara ẹrọ ti awọn ifarapa ti awọn ipele ti awọn aworan ti awọn ipele ti awọn iwọn. awọn iwọn ila opin ti awọn sikematiki oofa ni gbogbo awọn isiro kii ṣe iwọn ati pe o to awọn akoko 100 tobi ju ti a fihan.
Bi a ṣe tumọ oofa si apa osi ati sọtun pẹlu oke ti capillary, igun ti okun MP yipada lati ṣe deede pẹlu oofa (wo Nọmba 6), nitorinaa ṣe afihan awọn laini aaye oofa.Fun MP3-5, lẹhin ti okun naa ti de igun ẹnu-ọna, awọn patikulu ti fa pẹlu oke dada ti capillary. Eyi nigbagbogbo n mu abajade si awọn ẹgbẹ MPs ti o lagbara julọ nibiti o ti sunmọ awọn ẹgbẹ fidio ti o lagbara julọ ni ibi ti awọn ẹgbẹ pọsi ti o lagbara julọ. S3: MP5) .Eyi tun ṣe afihan paapaa nigbati aworan ba sunmọ opin capillary, eyi ti o mu ki awọn MPs lati ṣajọpọ ati ki o ṣojumọ ni wiwo afẹfẹ-afẹfẹ. Awọn patikulu ninu MP6, eyiti o nira sii lati ṣe akiyesi ju MP3-5, ko fa bi oofa ti gbe pẹlu capillary, ṣugbọn awọn okun MP ti yapa, ti o kuro ni aaye ti awọn fidio 6 (Wo Siwaju sii) diẹ ninu awọn apakan fidio. awọn iṣẹlẹ, nigbati aaye oofa ti a lo ti dinku nipasẹ gbigbe oofa ni ijinna nla si ipo aworan, eyikeyi awọn ọmọ ile-igbimọ ti o ku laiyara sọkalẹ si ilẹ isalẹ ti tube nipasẹ agbara walẹ lakoko ti o wa ninu okun (wo Afikun Fidio S5: MP3).
Igun ti okun MP n yipada bi a ṣe tumọ oofa si apa ọtun loke capillary.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 ati (d) MP6. Apoti pupa naa ni imudara itansan ti o ga julọ. Ṣe akiyesi pe awọn fidio afikun jẹ alaye bi wọn ṣe n ṣe afihan ipilẹ patiku pataki ati alaye ti o ni agbara ti a ko le wo inu awọn aworan aimi wọnyi.
Awọn idanwo wa fihan pe gbigbe oofa naa laiyara sẹhin ati siwaju lẹgbẹẹ atẹgun n ṣe iworan ti MP ni aaye ti iṣipopada eka ni vivo.In vivo idanwo ko ṣe bi awọn ilẹkẹ polystyrene (MP1 ati MP2) ko han ninu capillary.Each of the four ti o ku MPS ni idanwo ni vivo pẹlu oofa gigun ti iṣeto ni tunto loke awọn trachea ti 3 iwọn ati ki o kan ° B. 3a), nitori eyi yorisi ni awọn ẹwọn MP to gun ati pe o munadoko diẹ sii ju iṣeto oofa ti pari.MP3, MP4 ati MP6 ko rii ni atẹgun ti eyikeyi ẹranko laaye.Nigbati a ya aworan awọn ọna atẹgun eku lẹhin ti awọn ẹranko ti pa eniyan, awọn patikulu naa jẹ alaihan paapaa nigba ti a ṣafikun iwọn didun afikun nipa lilo fifa syringes ni vivo ihuwasi ti MP.
Gbigbe oofa lori atẹgun lakoko ifijiṣẹ MP jẹ abajade ni ọpọlọpọ, ṣugbọn kii ṣe gbogbo, awọn ọmọ ile-igbimọ ni ogidi ni aaye wiwo. Awọn nkan ti o wọ inu iṣan ni a ṣe akiyesi dara julọ ni awọn ẹranko ti a fi rubọ eniyan.Eyaworan 7 ati Fidio Afikun S6: MP5 fihan imudani oofa iyara ati titete awọn patikulu lori dada ti ventral trachea, o le ṣe afihan awọn agbegbe ti o fẹ. distally pẹlú awọn trachea lẹhin MP ifijiṣẹ, diẹ ninu awọn MPS ni won ri jo si awọn carina, ni iyanju wipe awọn oofa aaye agbara je insufficient lati gba ati idaduro gbogbo MPS, bi nwọn ti wa ni jišẹ nipasẹ awọn ekun ti o pọju se aaye agbara nigba ti ito ilana.Sibe, postpartum MP ifọkansi wà ti o ga ni ayika awọn aworan agbegbe, ni iyanju wipe ọpọlọpọ awọn MPS wà ni awọn agbegbe oko ofurufu ibi ti awọn ti o ga julọ.
Awọn aworan lati (a) ṣaaju ati (b) lẹhin ifijiṣẹ ti MP5 sinu trachea ti eku euthanized laipe kan pẹlu oofa ti o wa ni ipo taara loke agbegbe aworan. Agbegbe aworan ti o wa laarin awọn oruka kerekere meji. Ṣaaju ifijiṣẹ MP, diẹ ninu awọn ito wa ninu ọna atẹgun. Apoti pupa naa ni imudara itansan-igbelaruge. Awọn aworan wọnyi wa lati fidio fidio ti o han ni Supplement S6.
Itumọ oofa lẹgbẹẹ trachea ni vivo mu ki pq MP yi pada laarin oju ọna atẹgun ni ọna ti o jọra si eyiti a rii ni awọn capillaries (wo Nọmba 8 ati Fidio Afikun S7: MP5) .Sibẹsibẹ, ninu ikẹkọọ wa, awọn MPs ko le fa pẹlu oju oju ọna atẹgun ti ngbe bi wọn ṣe le pẹlu awọn capillaries. Ni awọn igba miiran, pq MP yoo gun ni apa osi ati pe okun ti o wa ni apa ọtun yoo gun bi okun ti o tọ. yoo han lati yi ijinle ti ipele ito dada pada nigbati oofa ti gbe ni gigun ni ọna atẹgun, o si gbooro nigbati oofa ba gbe taara si oke ati okun patiku ti yiyi si ipo inaro (wo Fidio S7 Afikun). : MP5 ni 0: 09, isalẹ ọtun) .Aṣa ihuwasi ti išipopada yipada nigbati a ṣe itumọ oofa kọja oke ti trachea ni ita (iyẹn ni, si apa osi tabi ọtun ti ẹranko dipo gigun gigun ti trachea) .Awọn patikulu tun han kedere bi wọn ti nlọ, ṣugbọn nigbati a ti yọ oofa kuro lati inu trachea, awọn imọran ti awọn okun patiku naa di han ni Fidio: Spplement 8MP. 0: 08) Eyi ni ibamu pẹlu ihuwasi MP ti a ṣe akiyesi labẹ aaye oofa ti a lo ninu capillary gilasi kan.
Awọn aworan apẹẹrẹ ti o nfihan MP5 ninu ọra ti eku anesthetized laaye.(a) Oofa naa ni a lo lati gba awọn aworan loke ati si apa osi ti trachea, lẹhinna (b) lẹhin gbigbe oofa si apa ọtun. Apoti pupa naa ni imudara itansan ti o pọ si. Awọn aworan wọnyi wa lati fidio ti o han ni Fidio Afikun S7: MP5.
Nigbati a ba tunto awọn ọpa meji naa ni iṣalaye ariwa-guusu loke ati ni isalẹ trachea (ie fifamọra; Fig. 3b), awọn kọọdu MP han gun ati pe o wa ni ẹgbẹ ẹgbẹ ti trachea ju ki o wa lori aaye ẹhin ẹhin (wo Afikun Fidio S9: MP5) .Sibẹsibẹ, awọn ifọkansi giga ti awọn patikulu ni aaye kan ti dorsal (ie) ko dada ti ito oju omi lẹhin ibi kan dorsal (ie). a lo ẹrọ oofa meji, eyiti o waye nigbagbogbo nigbati ẹrọ oofa kan ba lo.Lẹhinna nigbati a ti tunto oofa kan lati tun awọn ọpá naa pada (Fig 3c), nọmba awọn patikulu ti o han ni aaye wiwo ko han lati pọ si lẹhin ifijiṣẹ.Oṣo ti awọn atunto oofa meji-meji jẹ nija nitori giga giga tabi titari awọn oofa ti nfa. ni afiwe si ọna atẹgun ṣugbọn ti o kọja nipasẹ ọna atẹgun ni awọn iwọn 90 ki awọn ila aaye ti kọja odi ti tracheal orthogonally (Fig. 3d), iṣalaye ti a ṣe lati pinnu ti o ba jẹ pe a le ṣe akiyesi ifunpọ patiku lori odi ẹgbẹ .Sibẹsibẹ, ninu iṣeto yii, ko si iṣipopada idanimọ ti ikojọpọ MP tabi gbigbe gbigbe oofa.Da lori gbogbo awọn esi-itumọ 30-ọna-ọna-ọna-ọna-ọna-ara-ara- gbogbo awọn esi-ọna-ọna-ọna-ara-ara- gbogbo awọn esi-ọna-ọna-ọna-ara-ara- gbogbo awọn abajade wọnyi. 3a) ni a yan fun awọn iwadii ti ngbe jiini vivo.
Nigba ti ẹranko naa ti ya aworan leralera lẹsẹkẹsẹ lẹhin pipa eniyan, isansa ti iṣipopada ara ti o ni rudurudu tumọ si pe awọn laini patiku ti o dara ati kukuru ni a le rii ni aaye interchondral ti o han gbangba, “wobbly” ni ila pẹlu išipopada itumọ ti oofa. Bibẹẹkọ, ko tun le rii kedere wiwa ati išipopada ti awọn patikulu MP6.
Iwọn LV-LacZ jẹ 1.8 × 108 TU / ml, ati lẹhin 1: 1 dapọ pẹlu CombiMag MP (MP6), awọn ẹranko gba iwọn lilo tracheal 50 μl ti 9 × 107 TU / ml LV ọkọ (ie 4.5 × 106 TU / rat). Ninu awọn ẹkọ wọnyi, dipo titumọ oofa lakoko iṣẹ, a ṣe atunṣe oofa ni ipo kan lati pinnu boya gbigbe LV (a) le dara si ni akawe si ifijiṣẹ vector ni laisi aaye oofa, ati (b) le ni idojukọ Awọn sẹẹli Airway ti wa ni gbigbe si awọn agbegbe ibi-afẹde oofa ti ọna atẹgun oke.
Iwaju awọn oofa ati lilo CombiMag ni idapo pelu LV vectors ko han lati ni ikolu ti ipa lori ilera eranko, bi wa boṣewa LV vector ifijiṣẹ bèèrè.Frontal images ti awọn tracheal ekun tunmọ si darí perturbation (Afikun Ọpọtọ. 1) tọkasi wipe nibẹ wà significantly ti o ga awọn ipele ti transduction ni awọn ẹgbẹ ti eranko mu pẹlu kan LV-MP iye nigba ti Ọpọtọ. LacZ abawọn wa ninu ẹgbẹ iṣakoso (Fig. 9b) . Iwọn ti awọn agbegbe ti o wa ni X-Gal ti o ṣe deede fihan pe isakoso ti LV-MP ni iwaju aaye oofa ti o ṣe imudara ilọsiwaju 6-fold (Fig. 9c).
Apeere awọn aworan akojọpọ ti o nfihan itusilẹ tracheal nipasẹ LV-MP (a) ni iwaju aaye oofa ati (b) ni isansa ti oofa kan.
Awọn apakan abariwon pupa ti o yara (apẹẹrẹ ti o han ni Apọju.
Ipenija bọtini kan fun itọju jiini ọna atẹgun maa wa ni isọdi deede ti awọn patikulu ti ngbe si awọn agbegbe ti iwulo ati ṣiṣe awọn ipele ti o ga julọ ti iṣiṣẹ gbigbe ni ẹdọfóró gbigbe ni iwaju ṣiṣan ti afẹfẹ ati imukuro mucus ti nṣiṣe lọwọ.Fun awọn ọkọ ayọkẹlẹ LV ti a ṣe apẹrẹ lati ṣe itọju arun atẹgun CF, jijẹ akoko ibugbe ti awọn patikulu ti ngbe laarin awọn ifọnọhan awọn ọna atẹgun ti jẹ ibi-afẹde ti o ti lo. oofa aaye lati mu transduction ni o ni anfani akawe si awọn miiran Jiini ifijiṣẹ awọn ọna bi electroporation, bi o ti le darapo ayedero, iye owo-ndin, ifijiṣẹ localization, pọ ṣiṣe, ati kikuru abeabo igba , ati ki o seese a kere ti ngbe dose10.Sibẹsibẹ, awọn in vivo iwadi oro ati ihuwasi ti se patikulu ninu awọn ọna atẹgun ti kosi ti a ti sapejuwe awọn ipa ọna ti awọn ọna atẹgun ti awọn ọna ti o ti wa ni a ti se apejuwe awọn ti o jẹ ti awọn ọna ti awọn oofa ni awọn ọna ti awọn ọna ti awọn ọna ti o ti wa ni ti o ti wa ni titọ ni awọn ọna ti o ti wa ni ti gidi. ṣe afihan ni vivo lati mu awọn ipele ikosile jiini pọ si ni awọn ọna atẹgun ti o wa laaye.
Awọn adanwo in vitro synchrotron PCXI wa fihan pe gbogbo awọn patikulu ti a ṣe idanwo, ayafi ti MPP polystyrene, ni o han ni iṣeto aworan ti a lo.Ni iwaju aaye oofa kan, awọn MPs ṣe awọn okun ti awọn ipari wọn ni ibatan si iru patiku ati agbara aaye oofa (ie isunmọtosi ati išipopada ti oofa) .Gẹgẹbi a ṣe han ni Nọmba 10, apakan kọọkan ni a ṣẹda okun ti ara rẹ si okun ti ara rẹ. aaye oofa agbegbe.Awọn aaye ọtọtọ wọnyi jẹ ki awọn patikulu miiran ti o jọra lati ṣajọpọ ati sopọ, pẹlu awọn iṣipopada okun-bi ẹgbẹ nitori awọn ipa agbegbe lati agbegbe ti o wuni ati awọn ipa ti o korira ti awọn patikulu miiran.
Fifihan sikematiki (a,b) awọn ọkọ oju irin patiku ti ipilẹṣẹ inu awọn capillaries ti o kun omi-omi ati (c,d) trachea ti o kun fun afẹfẹ. Akiyesi pe awọn capillaries ati trachea ko fa si iwọn.Panel (a) tun ni apejuwe ti MP, eyiti o ni awọn patikulu Fe3O4 ti a ṣeto sinu awọn okun.
Nigba ti a gbe oofa naa si oke capillary, igun ti okun patiku naa de ibi ti o ṣe pataki fun MP3-5 ti o ni Fe3O4, lẹhin eyi ti okun patiku ko duro ni ipo atilẹba, ṣugbọn o gbe lọ si aaye titun kan.magnet. Ipa yii le waye nitori pe gilasi capillary dada jẹ dan to lati jẹ ki iṣipopada yii waye. awọn patikulu naa kere ju, ti o ni awọn aṣọ ti o yatọ tabi awọn idiyele dada, tabi omi gbigbe ti ohun-ini kan ni ipa lori agbara wọn lati gbe.Itọsọna aworan ti awọn patikulu CombiMag tun jẹ alailagbara, ni iyanju pe omi ati awọn patikulu le ni awọn iwuwo ti o jọra ati nitorinaa ko ni irọrun gbe si ara wọn. Awọn patikulu tun le di di ti okun ba n gbe ni iyara pupọ, ti o nfihan pe apakan oofa naa ko le ni iyanju nigbagbogbo ni aaye iṣan omi ti o le jẹ ki o ni iyanju ni aaye ti o ṣee ṣe ki o ma jẹ ki iṣan omi ti o ni agbara ti o ni agbara ti o pọ julọ laarin awọn eefa ti o le ṣe afihan nigbagbogbo. ko yanilenu wipe awọn oofa aaye agbara ati awọn aaye laarin awọn oofa ati awọn afojusun agbegbe Pupọ pataki.Ti a mu papo, awọn wọnyi esi tun daba wipe, nigba ti awọn oofa le Yaworan ọpọlọpọ awọn MPS ti o san nipasẹ awọn afojusun agbegbe, o jẹ išẹlẹ ti pe awọn oofa le wa ni gbarale lori lati gbe CombiMag patikulu pẹlú awọn dada ti awọn trachea.Nitorina, a pinnu wipe ni vivo LV-MP eko ti ara yẹ ki o fojusi si static awọn ẹkun ni ti ara.
Nigbati awọn patikulu ti wa ni jišẹ ninu ara, ti won ni o wa soro lati da ni o tọ ti eka gbigbe ara àsopọ, ṣugbọn awọn agbara lati ri wọn ti a ti mu dara si nipa itumo awọn oofa nâa loke awọn trachea to “wiggle” awọn MP strings.Biotilejepe ifiwe aworan jẹ ṣee ṣe, o jẹ rọrun lati discern patiku išipopada ni kete ti awọn eranko ti a ti humanely pa.MP ifọkansi wà ni gbogbo ga ni ipo loke awọn ipo nigba ti apa kan ninu awọn aworan wà loke awọn ipo nigba ti apa kan ninu awọn aworan wà ni ipo ti o ga julọ ni ipo yii nigba ti apakan ti o ga julọ ni aaye yii. Awọn trachea.Ni idakeji si awọn ẹkọ in vitro, awọn patikulu ko le fa pẹlu ọna atẹgun nipasẹ titumọ magnet. Wiwa yii jẹ ibamu pẹlu bi mucus ti o ndan oju ti atẹgun naa ṣe n ṣe ilana awọn patikulu fa simu, ti o npa wọn sinu mucus ati lẹhinna yọ kuro nipasẹ ilana imukuro mucociliary.
A ṣe akiyesi pe lilo awọn oofa fun ifamọra loke ati ni isalẹ awọn trachea (Fig 3b) le ja si aaye oofa ti o ni aṣọ diẹ sii, dipo aaye oofa ti o ni idojukọ pupọ ni aaye kan, ti o le yori si pinpin aṣọ kan diẹ sii ti awọn patikulu.Sibẹsibẹ, iwadii alakoko wa ko rii ẹri ti o han gbangba lati ṣe atilẹyin ile-itumọ yii. Bakanna, atunto oofa ni ọna asopọ pọ si (Fig. Iṣeduro patiku ni agbegbe ti a fi han.Awọn awari meji wọnyi ṣe afihan pe iṣeto meji-oofa ko ni ilọsiwaju iṣakoso agbegbe ti ibi-afẹde MP, ati pe awọn abajade agbara oofa ti o lagbara ni o ṣoro lati tunto, ṣiṣe ọna yii kere si iṣe.Bakanna, iṣalaye oofa loke ati nipasẹ trachea (Fig. 3d) tun ko mu nọmba awọn patikulu ti o wa ni isale nitori awọn abajade ti o wa ni agbegbe ti o ni aṣeyọri le jẹ ki awọn abajade ti o wa ni isalẹ ti awọn abajade ti o wa ni isalẹ. awọn agbara aaye oofa laarin agbegbe ifisilẹ.Nitorina, atunto oofa igun 30-ìyí nikan (Ọpọlọpọ 3a) ni a ka ni irọrun ati ọna ti o munadoko julọ fun idanwo vivo.
Iwadi LV-MP fihan pe nigba ti a ṣe idapo awọn olutọpa LV pẹlu CombiMag ati jiṣẹ lẹhin ibajẹ ti ara ni iwaju aaye oofa kan, awọn ipele gbigbe ni a pọ si ni itọpa ti a fiwewe si awọn iṣakoso.Da lori awọn iwadii aworan synchrotron ati awọn abajade LacZ, aaye oofa naa han gbangba pe o le ṣe itọju LV laarin iṣọn-ẹjẹ ki o dinku awọn ipin ti o jinlẹ lẹsẹkẹsẹ ti awọn ifọkansi ti o jinlẹ. le ja si ipa ti o ga julọ lakoko ti o dinku awọn titers ti a firanṣẹ, ifasilẹ ti ibi-afẹde, iredodo ati awọn ipa ẹgbẹ ti ajẹsara, ati awọn idiyele ti ngbe jiini.Ni pataki, ni ibamu si olupese, CombiMag le ṣee lo ni apapo pẹlu awọn ọna gbigbe jiini miiran, pẹlu pẹlu awọn ọlọjẹ ọlọjẹ miiran (bii AAV) ati awọn acids nucleic.
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu Keje-16-2022
