Diẹ ninu awọn koko-ọrọ laasigbotitusita LC ko ti pẹ, bi awọn ọran ti wa ni adaṣe LC, paapaa bi imọ-ẹrọ ohun elo ṣe ilọsiwaju ni akoko pupọ.Awọn ọna pupọ wa ninu eyiti awọn iṣoro le dide ninu eto LC kan ati pari ni apẹrẹ oke ti ko dara.Nigbati awọn ọran ti o nii ṣe pẹlu apẹrẹ oke dide, atokọ kukuru ti awọn idi ti o ṣeeṣe fun awọn abajade wọnyi ṣe iranlọwọ simplify iriri laasigbotitusita wa.
O jẹ igbadun kikọ iwe yii “Laasigbotitusita LC” ati ironu nipa awọn koko-ọrọ ni oṣu kọọkan, nitori diẹ ninu awọn akọle ko lọ kuro ni aṣa. Lakoko ti o wa ni aaye ti chromatography ṣe iwadii awọn koko-ọrọ kan tabi awọn imọran di igba atijọ bi wọn ti rọpo nipasẹ awọn imọran tuntun ati ti o dara julọ, ni aaye ti laasigbotitusita, lati igba akọkọ laasigbotitusita article ti han ninu iwe akọọlẹ yii (awọn LC Akosile ni akoko ti o ti kọja 1)3) ti dojukọ ọpọlọpọ awọn apakan Laasigbotitusita LC lori awọn aṣa ode oni ti o ni ipa lori chromatography omi (LC) (fun apẹẹrẹ, lafiwe ibatan ti oye wa ti ipa ti titẹ lori idaduro [2] Awọn ilọsiwaju Tuntun) Itumọ wa ti awọn abajade LC ati bii o ṣe le ṣe wahala pẹlu awọn ohun elo LC igbalode.Ni diẹdiẹ oṣu yii, Mo n tẹsiwaju lẹsẹsẹ mi, igbesi aye 20 ti o ni idojukọ lori koko-ọrọ 1 Oṣu kejila (3) ting — eroja ti o wa ni nla fun eyikeyi laasigbotitusita ni o wa awọn ibaraẹnisọrọ to, ko si awọn ọjọ ori ti awọn eto ti a ti wa ni lilo.The mojuto koko ti yi jara jẹ nyara ti o yẹ si awọn LCGC ká olokiki “LC Laasigbotitusita Guide” ogiri chart (4) adiye ni ọpọlọpọ awọn laboratories.Fun awọn kẹta apa ti yi jara, Mo ti yàn si idojukọ lori awon oran jẹmọ si tente apẹrẹ tabi tente oke awọn abuda.In chart ti o yatọ si awọn oran le ro pe gbogbo awọn wọnyi ni o le fa akojọ awọn apẹrẹ ti ko dara. apejuwe ninu ọkan article, ki ni yi akọkọ diẹdiẹ lori koko, Emi yoo idojukọ lori diẹ ninu awọn ti awọn eyi ti mo ti ri julọ igba.Mo lero ọdọ ati arugbo LC olumulo yoo ri diẹ ninu awọn wulo awọn italolobo ati awọn olurannileti lori yi pataki koko.
Mo rii ara mi ni idahun awọn ibeere laasigbotitusita pẹlu “ohunkohun ṣee ṣe”. Idahun yii le dabi irọrun nigbati o ba gbero awọn akiyesi ti o ṣoro lati tumọ, ṣugbọn Mo rii nigbagbogbo nigbagbogbo.Pẹlu ọpọlọpọ awọn okunfa ti o ṣeeṣe ti apẹrẹ tente oke ti ko dara, o ṣe pataki lati tọju ọkan ti o ṣii nigbati o ba gbero kini iṣoro naa le jẹ, ati lati ni anfani lati ṣaju awọn okunfa ti o pọju lati bẹrẹ awọn igbiyanju laasigbotitusita wa, idojukọ lori awọn ti o wọpọ julọ, awọn iṣeeṣe ti o ṣeeṣe jẹ pataki.
Igbesẹ pataki kan ninu eyikeyi adaṣe laasigbotitusita - ṣugbọn ọkan ti Mo ro pe o wa labẹ - jẹ mimọ pe iṣoro kan wa ti o nilo lati yanju eti, tailing, bbl), ṣugbọn tun si iwọn.Awọn ireti wa fun apẹrẹ ti o ga julọ jẹ rọrun. Theory (6) daradara ṣe atilẹyin ireti iwe-ẹkọ pe, ni ọpọlọpọ igba, awọn oke giga chromatographic yẹ ki o jẹ iṣiro ati ki o ṣe deede si apẹrẹ ti pinpin Gaussian, bi a ṣe han ni Figure 1a. Ohun ti a reti lati awọn iwọn tente oke jẹ ọrọ ti o pọju sii ni ọrọ iwaju ti o pọju 1. bilities ti o le wa ni šakiyesi-ni awọn ọrọ miiran, diẹ ninu awọn ti awọn ọna ohun le lọ ti ko tọ.Ni awọn iyokù ti yi diẹdiẹ, a yoo na akoko jíròrò diẹ ninu awọn kan pato apeere ti awọn ipo ti o le ja si awọn iru apẹrẹ.
Nigbakuran awọn oke giga ko ni akiyesi ni gbogbo ni chromatogram nibiti wọn ti ṣe yẹ lati wa ni eluted.Atọka ogiri ti o wa loke tọkasi pe isansa ti tente oke kan (ti o ro pe ayẹwo naa ni gangan ni itupale afojusun ni ifọkansi ti o yẹ ki o ṣe idahun oluwari ti o to lati ri loke ariwo) nigbagbogbo ni ibatan si diẹ ninu awọn ohun elo tabi awọn ipo alakoso ti ko tọ (ti o ba ṣe akiyesi ni gbogbo).awọn oke giga, nigbagbogbo ju “ailagbara”) .Atokọ kukuru ti awọn iṣoro ti o pọju ati awọn solusan ni ẹka yii ni a le rii ni tabili I.
Gẹgẹbi a ti sọ loke, ibeere ti bi o ṣe yẹ ki o ṣe ifarabalẹ giga ti o pọju ṣaaju ki o to ṣe akiyesi ati igbiyanju lati ṣatunṣe o jẹ koko-ọrọ ti o nipọn ti emi yoo jiroro ni nkan iwaju kan. Iriri mi ni pe iṣipopada giga ti o pọju ni igbagbogbo pẹlu iyipada nla ni apẹrẹ ti o ga julọ, ati peak tailing jẹ diẹ sii ju ti iṣaaju-peak tabi pipin lọ. Sibẹsibẹ, awọn ami-ipin ti a npe ni ami-ami ni a tun fa nipasẹ awọn idi diẹ ti o yatọ, eyiti o le jẹ ki o gbooro sii nipasẹ awọn idi diẹ ti o yatọ, eyi ti o le jẹ ki o gbooro sii nipasẹ awọn idi diẹ ti o yatọ.
Ọkọọkan awọn ọran wọnyi ni a ti jiroro ni awọn alaye ni awọn ọran iṣaaju ti Laasigbotitusita LC, ati awọn oluka ti o nifẹ si awọn akọle wọnyi le tọka si awọn nkan iṣaaju wọnyi fun alaye lori awọn idi gbongbo ati awọn ojutu ti o pọju si awọn ọran wọnyi.Awọn alaye diẹ sii.
Oke tailing, tente oke fronting, ati pipin le gbogbo wa ni šẹlẹ nipasẹ kemikali tabi ti ara iyalenu, ati awọn akojọ ti awọn ti o pọju solusan si awon isoro yatọ ni opolopo, da lori boya a ti wa ni awọn olugbagbọ pẹlu kan kemikali tabi ti ara isoro.Nigbagbogbo, nipa wé awọn ti o yatọ si ga ju ni a chromatogram, o le ri pataki awọn amọran nipa eyi ti o jẹ awọn culprit.Ti o ba ti gbogbo awọn apẹrẹ ti o pọju ni ti ara kan pato ti ara. Awọn oke giga ni o kan, ṣugbọn awọn iyokù wo itanran, idi naa jẹ kemikali julọ.
Awọn idi ti kemikali ti oke ti o wa ni oke jẹ idiju pupọ lati jiroro ni ṣoki nihin. Oluka ti o nifẹ ni a tọka si ọrọ to ṣẹṣẹ ti "Laasigbotitusita LC" fun ifọrọwerọ ti o jinlẹ diẹ sii (10) . Sibẹsibẹ, ohun ti o rọrun lati gbiyanju ni lati dinku ibi-ipamọ ti abẹrẹ ti abẹrẹ ati ki o wo boya apẹrẹ ti o ga julọ dara. sses, tabi awọn chromatographic ipo gbọdọ wa ni yipada ki o dara tente ni nitobi le wa ni gba ani pẹlu tobi ọpọ eniyan itasi.
Nibẹ ni o wa tun ọpọlọpọ awọn ti o pọju ti ara idi fun tente tailing. Awọn olukawe ti o nifẹ si ifọrọwerọ alaye ti awọn o ṣeeṣe ni a tọka si ọrọ aipẹ miiran ti “Laasigbotitusita LC” (11) .Ọkan ninu awọn idi ti ara ti o wọpọ julọ ti iru oke jẹ asopọ ti ko dara ni aaye kan laarin injector ati aṣawari (12) .Apeere ti o ga julọ ti han ni Figure 1d, ti a gba ni laabu mi ni awọn ọsẹ diẹ sẹhin, a ko lo abẹrẹ ti abẹrẹ kan ati pe a ko lo ninu ọran tuntun kan ni ọsẹ diẹ sẹhin. Iwọn abẹrẹ iwọn kekere kekere pẹlu ferrule ti a ti ṣe apẹrẹ si ori capillary irin alagbara.Lẹhin diẹ ninu awọn adanwo laasigbotitusita akọkọ, a rii pe ijinle ibudo ni stator àtọwọdá abẹrẹ jẹ jinle pupọ ju ti a lo lati lọ, ti o mu ki iwọn didun nla ti o ku ni isalẹ ti ibudo naa.Iṣoro yii jẹ irọrun ni irọrun nipasẹ rirọpo lupu abẹrẹ pẹlu tube miiran, a le ṣatunṣe iwọn didun ti o ku ni ibudo to dara.
Peak fronts bi awon ti o han ni Figure 1e le tun ti wa ni šẹlẹ nipasẹ ti ara tabi kemikali isoro.A wọpọ ti ara idi ti awọn asiwaju eti ni wipe awọn patiku ibusun ti awọn iwe ti wa ni ko daradara aba ti, tabi ti awọn patikulu ti reorganized lori akoko.Bi pẹlu tente oke tailing ṣẹlẹ nipasẹ yi ti ara lasan, awọn ti o dara ju ona lati fix yi ni lati ropo awọn iwe ati ki o tẹsiwaju awọn ti lọ.Fundamente ipe awọn ipo ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti o ti wa ni kiko si. Labẹ awọn ipo ti o dara julọ (ilana), iye ti iṣiro ti o wa ni idaduro nipasẹ awọn ipele ti o duro (nitorina, ifosiwewe idaduro) jẹ asopọ ti o ni ibatan si ifọkansi ti iṣiro ti o wa ninu iwe. ed.Ni afikun, awọn apẹrẹ ti kii ṣe deede ṣe ipinnu apẹrẹ ti awọn oke giga chromatographic, ti o mu ki o jẹ asiwaju tabi awọn itọpa itọpa.Bi pẹlu apọju ti o pọju ti o fa peak tailing (10), asiwaju ti o ga julọ ti o ṣẹlẹ nipasẹ idaduro ti kii ṣe deede ni a le ṣe ayẹwo nipasẹ idinku iṣiro itasi ti abẹrẹ ti abẹrẹ.Ti tente oke ba dara si, ọna naa gbọdọ wa ni iyipada ti o yẹ ki o ko ni iyipada si awọn ipo chromat lati ko kọja iwọn chromat.
Nigbakuran a ṣe akiyesi ohun ti o han pe o jẹ "pipin" tente oke, bi o ṣe han ni Figure 1f. Igbesẹ akọkọ ni lohun iṣoro yii ni lati pinnu boya apẹrẹ ti o pọju jẹ nitori iṣeduro apa kan (ie, wiwa ti awọn meji ti o yatọ ṣugbọn awọn agbo ogun ti o sunmọ ni pẹkipẹki) .Ti o ba jẹ pe awọn olutọpa oriṣiriṣi meji ti o yatọ si sunmọ papọ, lẹhinna o jẹ ọrọ kan ti imudarasi ipinnu wọn (fun apẹẹrẹ, awọn ohun elo ti o ni ibatan si Perak, ati awọn ti o ni ibatan si awọn ohun elo ti o ni ibatan si awọn ohun elo ti o ni ibatan, awọn ohun elo ti o ni ibatan tabi awọn ohun elo ti o ni ibatan si peak). ance ko ni nkankan lati ṣe pẹlu ọwọn funrararẹ. Nigbagbogbo, itọkasi pataki julọ si ipinnu yii jẹ boya gbogbo awọn oke giga ti chromatogram ṣe afihan awọn ẹya pipin, tabi ọkan tabi meji.ti gbogbo awọn oke ba pin, o ṣee ṣe ọrọ ti ara, o ṣeeṣe julọ ti o ni ibatan si ọwọn funrararẹ.
Pipin awọn oke ti o ni ibatan si awọn ohun-ini ti ara ti ọwọn funrararẹ nigbagbogbo jẹ nitori idinamọ apakan apakan tabi awọn frits itọjade, tabi isọdọtun ti awọn patikulu ninu iwe, gbigba apakan alagbeka lati ṣan ni iyara ju apakan alagbeka lọ ni awọn agbegbe kan ti iṣeto ikanni ọwọn .ni awọn agbegbe miiran (11) apakan clogged frit le jẹ imukuro nigbakan nipasẹ yiyipada sisan nipasẹ ọwọn;sibẹsibẹ, ninu iriri mi, eyi maa n jẹ igba diẹ kuku ju ojutu igba pipẹ.Eyi nigbagbogbo jẹ apaniyan pẹlu awọn ọwọn ode oni ti awọn patikulu ba tun darapọ laarin ọwọn. Ni aaye yii, o dara julọ lati rọpo ọwọn naa ki o tẹsiwaju.
Awọn tente oke ni Figure 1g, tun lati kan laipe apeere ninu ara mi lab, maa tọkasi wipe awọn ifihan agbara jẹ ki o ga ti o ti de awọn ga opin ti awọn esi ibiti o.Fun opitika absorbance aṣawari (UV-vis ninu apere yi), nigbati awọn Analyte fojusi jẹ gidigidi ga, awọn analyte fa julọ ti awọn ina ti o kọja nipasẹ awọn oluwari sisan cell, nlọ gan kekere ina lati wa ni ri nipa elekitiriki awọn ipo ti o ti wa ni ti o ti wa ni ti wa ni ri lori awọn orisun ti itanna ti awọn ipo. gẹgẹbi ina ti o ṣina ati "okunkun lọwọlọwọ", ṣiṣe ifihan agbara pupọ "iruju" ni irisi ati ominira ti ifọkansi atupale.Nigbati eyi ba ṣẹlẹ, iṣoro naa le ni irọrun ni irọrun yanju nipasẹ didin iwọn iwọn abẹrẹ ti itupale-dinku iwọn abẹrẹ, diluti ayẹwo, tabi mejeeji.
Ni ile-iwe chromatography, a lo ifihan agbara aṣawari (ie, y-axis ni chromatogram) gẹgẹbi itọkasi ti ifọkansi analyte ninu apẹẹrẹ.Nitorina o dabi ohun ajeji lati ri chromatogram kan pẹlu ifihan agbara ni isalẹ odo, gẹgẹbi itumọ ti o rọrun ni pe eyi tọkasi ifọkansi analyte odi - eyi ti dajudaju ko ṣee ṣe ni ti ara. Ni iriri mi, awọn iyasọtọ ti ko dara julọ nigba lilo awọn aṣawari-ipejuwe V.
Ni idi eyi, a odi tente nìkan tumo si wipe moleku eluting lati awọn iwe fa kere ina ju awọn mobile alakoso ara lẹsẹkẹsẹ ṣaaju ki o si lẹhin ti awọn peak.This le šẹlẹ, fun apẹẹrẹ, nigba lilo jo kekere erin wavelengths (<230 nm) ati mobile alakoso additives ti o fa julọ ti awọn ina ni wọnyi wavelengths.Such additives le jẹ mobile fasea epo iru bi awọn ẹya ara ẹrọ ti awọn ohun elo Aceffer tabi awọn ohun elo ti o le jẹ awọn ohun elo ti o wa ni oju-ọna ti o pọju ti awọn ohun elo ti o wa ni oju-iwe ti o le jẹ bi awọn ohun elo ti o wa ni oju-ọna ti o wa ni oju-ọna ti o wa ni oju-ọna ti o wa ni oju-ọna. aks lati mura ohun ti iwọn odiwọn ati gba alaye pipo deede, nitorinaa ko si idi pataki lati yago fun wọn fun ọkan (ọna yii ni igba miiran tọka si bi “iwadii UV aiṣe-taara”) (13) . Sibẹsibẹ, ti a ba fẹ gaan lati yago fun awọn oke odi lapapọ, ninu ọran ti wiwa gbigba, ojutu ti o dara julọ ni lati lo iru igbi wiwa ti o yatọ ti o jẹ ki o fa apakan ti o ni agbara ti o kere ju ti alagbeka lọ ki o fa diẹ sii ju apakan ina lọ ti o kere ju apakan ti o ni agbara ti alagbeka. atunnkanka.
Awọn tente oke odi tun le han nigba lilo wiwa itọka ifasilẹ (RI) nigbati itọka ifasilẹ ti awọn paati miiran yatọ si analyte ninu apẹẹrẹ, gẹgẹ bi matrix epo, yatọ si itọka ifasilẹ ti apakan alagbeka.Eyi tun ṣẹlẹ pẹlu wiwa UV-vis, ṣugbọn ipa yii duro lati jẹ attenuated ni ibatan si wiwa RI. alakoso.
Ni apakan mẹta lori koko ipilẹ ti laasigbotitusita LC, Mo jiroro awọn ipo ninu eyiti apẹrẹ tente oke ti a ṣe akiyesi yatọ si apẹrẹ ti o ti ṣe yẹ tabi deede.Laasigbotitusita ti o munadoko ti iru awọn iṣoro bẹ bẹrẹ pẹlu imọ ti awọn apẹrẹ tente oke ti a nireti (da lori imọran tabi iriri iṣaaju pẹlu awọn ọna ti o wa tẹlẹ), nitorinaa awọn iyapa lati awọn ireti wọnyi jẹ eyiti o han .Awọn iṣoro apẹrẹ ti o ni ọpọlọpọ awọn oriṣiriṣi awọn okunfa ti o pọju (ju jakejado, tailing, ni diẹ ninu awọn idii ti o ṣaju, ati bẹbẹ lọ Mo wo awọn idi pataki yii, ati bẹbẹ lọ) Awọn alaye n pese aaye ti o dara lati bẹrẹ laasigbotitusita, ṣugbọn ko gba gbogbo awọn iṣeeṣe. Awọn oluka ti o nifẹ si atokọ ijinle diẹ sii ti awọn okunfa ati awọn solusan le tọka si iwe apẹrẹ ogiri LCGC “Itọsọna Laasigbotitusita LC”.
(4) LCGC “Itọsọna Laasigbotitusita LC” aworan ogiri.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Onínọmbà Data ati Ṣiṣe ifihan agbara ni Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), oju-iwe 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF ati Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev.907, 31-44 (2016) .https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.