Diẹ ninu awọn koko-ọrọ laasigbotitusita LC ko ti pẹ, bi awọn ọran ti wa ni adaṣe LC, paapaa bi imọ-ẹrọ ohun elo ṣe ilọsiwaju ni akoko pupọ.Awọn ọna pupọ wa ninu eyiti awọn iṣoro le dide ninu eto LC kan ati pari ni apẹrẹ oke ti ko dara.Nigbati awọn ọran ti o nii ṣe pẹlu apẹrẹ oke dide, atokọ kukuru ti awọn idi ti o ṣeeṣe fun awọn abajade wọnyi ṣe iranlọwọ simplify iriri laasigbotitusita wa.
O jẹ igbadun kikọ iwe “Laasigbotitusita LC” yii ati ronu nipa awọn akọle ni oṣu kọọkan, nitori diẹ ninu awọn akọle ko lọ kuro ni aṣa. Lakoko ti o wa ni aaye ti chromatography ṣe iwadii awọn koko-ọrọ tabi awọn imọran kan di ti atijo bi wọn ti rọpo nipasẹ awọn imọran tuntun ati ti o dara julọ, ni aaye ti laasigbotitusita, lati igba akọkọ laasigbotitusita article han ninu iwe akọọlẹ yii (awọn LC Akosile ni akoko naa)3) Awọn ọdun diẹ sẹhin, Mo ti dojukọ ọpọlọpọ awọn apakan Laasigbotitusita LC lori awọn aṣa ode oni ti o ni ipa lori chromatography omi (LC) (fun apẹẹrẹ, lafiwe ibatan ti oye wa ti ipa ti titẹ lori idaduro [2] Awọn ilọsiwaju Tuntun) Itumọ wa ti awọn abajade LC ati bii o ṣe le ṣe wahala pẹlu awọn ohun elo LC ode oni. Ni diẹdiẹ oṣu yii, Mo n tẹsiwaju ni 20 ninu jara mi ni 1 Oṣu kejila, eyiti o tẹsiwaju ni 2 ninu jara mi 1. ati iku” awọn koko-ọrọ ti laasigbotitusita LC — awọn eroja ti o jẹ nla fun eyikeyi laasigbotitusita jẹ pataki, laibikita ọjọ-ori ti eto ti a nlo.The core topic of this series is highly relevant to the LCGC's famous “LC Laasigbotitusita Guide” ogiri chart (4) adiye ni ọpọlọpọ awọn laboratories.Fun awọn kẹta apa ti yi jara, Mo ti yàn si idojukọ lori awon oran jẹmọ si tente apẹrẹ tabi pereti o yatọ si awọn abuda 4. ko dara tente oke apẹrẹ! A ko le ro gbogbo awọn ti awọn wọnyi oran ni apejuwe awọn ninu ọkan article, ki ni yi akọkọ diẹdiẹ lori koko, Emi yoo idojukọ lori diẹ ninu awọn ti eyi ti mo ti ri julọ often.Mo lero ọdọ ati arugbo LC awọn olumulo yoo ri diẹ ninu awọn wulo awọn italolobo ati awọn olurannileti lori yi pataki koko.
Mo rii ara mi ni idahun awọn ibeere laasigbotitusita pẹlu “ohunkohun ṣee ṣe”. Idahun yii le dabi irọrun nigbati o ba gbero awọn akiyesi ti o ṣoro lati tumọ, ṣugbọn Mo rii nigbagbogbo nigbagbogbo.Pẹlu ọpọlọpọ awọn okunfa ti o ṣeeṣe ti apẹrẹ tente oke ti ko dara, o ṣe pataki lati tọju ọkan ti o ṣii nigbati o ba gbero kini iṣoro naa le jẹ, ati lati ni anfani lati ṣaju awọn okunfa ti o pọju lati bẹrẹ awọn igbiyanju laasigbotitusita wa, idojukọ lori awọn ti o wọpọ julọ, awọn iṣeeṣe ti o ṣeeṣe jẹ pataki.
Igbese bọtini kan ni idaraya eyikeyi wahala - ṣugbọn ọkan ti Mo ro pe Mo wa ni riri pe iṣoro wa ti o nilo lati tọka si gangan lati tọka si gangan lati tọka si gangan dan, fluffy, asiwaju eti, tailing, ati be be lo), sugbon tun si awọn width.Wa ireti fun gangan tente apẹrẹ ni o rọrun.Theory (6) daradara atilẹyin awọn iwe eko ireti pe, ni ọpọlọpọ igba, awọn chromatographic ga ju yẹ ki o wa symmetrical ati ki o ni ibamu si awọn apẹrẹ ti a Gaussian pinpin, bi han ni Figure 1a. Ohun ti a reti lati tente oke apẹrẹ, ati awọn ti a yoo siwaju sii ọrọ awọn article ni ojo iwaju. Nọmba 1 ṣe afihan diẹ ninu awọn iṣeeṣe miiran ti o le ṣe akiyesi-ni awọn ọrọ miiran, diẹ ninu awọn ọna ti awọn nkan le lọ si aṣiṣe.Ni iyokù diẹdiẹ yii, a yoo lo akoko lati jiroro diẹ ninu awọn apẹẹrẹ pato ti awọn ipo ti o le ja si awọn iru apẹrẹ wọnyi.
Nigbakuran awọn oke giga ko ni akiyesi ni gbogbo ni chromatogram nibiti wọn ti ṣe yẹ lati wa ni eluted.Atọka ogiri ti o wa loke tọkasi pe isansa ti tente oke kan (ti o ro pe ayẹwo naa ni gangan ni itupale afojusun ni ifọkansi ti o yẹ ki o ṣe idahun oluwari ti o to lati ri loke ariwo) nigbagbogbo ni ibatan si diẹ ninu awọn ohun elo tabi awọn ipo alakoso ti ko tọ (ti o ba ṣe akiyesi ni gbogbo). awọn oke giga, nigbagbogbo ju “ailagbara”) .Atokọ kukuru ti awọn iṣoro ti o pọju ati awọn solusan ni ẹka yii ni a le rii ni tabili I.
Gẹgẹbi a ti sọ loke, ibeere ti bi o ṣe yẹ ki o ṣe ifarabalẹ giga ti o pọju ṣaaju ki o to ṣe akiyesi ati igbiyanju lati ṣatunṣe o jẹ koko-ọrọ ti o nipọn ti emi yoo jiroro ni nkan iwaju kan. Iriri mi ni pe iṣipopada giga ti o pọju ni igbagbogbo pẹlu iyipada nla ni apẹrẹ ti o ga julọ, ati peak tailing jẹ diẹ sii ju ti iṣaaju-peak tabi pipin lọ. Sibẹsibẹ, awọn ami-ipin ti a npe ni ami-ami ni a tun fa nipasẹ awọn idi diẹ ti o yatọ, eyiti o le jẹ ki o gbooro sii nipasẹ awọn idi diẹ ti o yatọ, eyi ti o le jẹ ki o gbooro sii nipasẹ awọn idi diẹ ti o yatọ.
Ọkọọkan awọn ọran wọnyi ni a ti jiroro ni awọn alaye ni awọn ọran iṣaaju ti Laasigbotitusita LC, ati awọn oluka ti o nifẹ si awọn akọle wọnyi le tọka si awọn nkan iṣaaju wọnyi fun alaye lori awọn idi gbongbo ati awọn ojutu ti o pọju si awọn ọran wọnyi. Awọn alaye diẹ sii.
Oke tailing, tente oke fronting, ati pipin le gbogbo wa ni šẹlẹ nipasẹ kemikali tabi ti ara iyalenu, ati awọn akojọ ti awọn ti o pọju solusan si awon isoro yatọ ni opolopo, da lori boya a ti wa ni awọn olugbagbọ pẹlu kan kemikali tabi ti ara isoro.Nigbagbogbo, nipa wé awọn ti o yatọ tente oke ni a chromatogram, o le ri pataki awọn amọran nipa eyi ti o jẹ awọn culprit.Ti o ba ti gbogbo awọn apẹrẹ ti awọn chromatoto ti ara ni o seese ko jẹ ti ara. nikan kan tabi kan diẹ ga ju ti wa ni fowo, ṣugbọn awọn iyokù wo itanran, awọn fa jẹ julọ seese kemikali.
Awọn okunfa ti kemikali ti oke ti o pọju jẹ idiju pupọ lati jiroro ni ṣoki nibi. Oluka ti o nifẹ ni a tọka si ọrọ to ṣẹṣẹ ti "Laasigbotitusita LC" fun ifọrọwerọ ti o jinlẹ diẹ sii (10) . Sibẹsibẹ, ohun ti o rọrun lati gbiyanju ni lati dinku ibi-ipamọ ti abẹrẹ ti abẹrẹ ati ki o wo boya apẹrẹ ti o ga julọ dara. awọn ọpọ eniyan atupale kekere, tabi awọn ipo chromatographic gbọdọ yipada ki awọn apẹrẹ tente oke ti o dara le ṣee gba paapaa pẹlu abẹrẹ ti o tobi julọ.
Nibẹ ni o wa tun ọpọlọpọ awọn ti o pọju ti ara idi fun tente tailing.Readers nife ninu a alaye fanfa ti awọn ti o ṣeeṣe ti wa ni tọka si miiran to šẹšẹ oro ti "LC Laasigbotitusita" (11) .Ọkan ninu awọn diẹ wọpọ ti ara okunfa ti tente oke tailing ni a ko dara asopọ ni a ojuami laarin awọn injector ati oluwari (12) .Apeere ti o ga julọ ti han ni Figure 1d, ti a gba ni abẹrẹ mi ni ọsẹ diẹ sẹyin ti a ko lo. ṣaaju ki o to, ati ki o fi sori ẹrọ abẹrẹ iwọn didun kekere kan pẹlu ferrule ti a ti ṣe apẹrẹ si ori capillary irin alagbara.Lẹhin diẹ ninu awọn idanwo laasigbotitusita akọkọ, a ṣe akiyesi pe ijinle ibudo ni stator valve abẹrẹ jẹ jinle pupọ ju ti a lo lati, ti o mu ki iwọn didun ti o tobi ju ni isalẹ ti ibudo naa.Iṣoro yii ni irọrun ni irọrun nipasẹ rirọpo atunṣe abẹrẹ ti abẹrẹ ti o wa ni isalẹ ti abẹrẹ ti o dara lati mu iwọn didun kuro ni ipo ti o dara lati mu iwọn didun ti o dara ju ti a lo si isalẹ ti tuberu ti o dara julọ ti a le ṣe imukuro iwọn didun ti abẹrẹ ti o wa ni isalẹ. ibudo.
Peak fronts bi awon ti o han ni Figure 1e le tun ti wa ni šẹlẹ nipasẹ ti ara tabi kemikali isoro.A wọpọ ti ara idi ti awọn asiwaju eti ni wipe awọn patiku ibusun ti awọn iwe ti wa ni ko daradara aba ti, tabi ti awọn patikulu ti reorganized lori time.Bi pẹlu tente oke tailing ṣẹlẹ nipasẹ yi ti ara lasan, awọn ti o dara ju ona lati fix yi ni lati ropo awọn iwe ati ki o tẹsiwaju a ti lọ. Awọn ipo idaduro "ti kii ṣe laini".Labẹ awọn ipo ti o dara julọ (ilana), iye ti iṣiro ti o wa ni idaduro nipasẹ awọn ipele ti o duro (nitorina, ifosiwewe idaduro) ti wa ni ila ti o ni ibatan si ifọkansi ti iṣiro ti o wa ninu iwe. nikan di ti o ga ṣugbọn tun gbooro sii bi a ti ṣe itasi diẹ sii.Ni afikun, awọn apẹrẹ ti kii ṣe deede ṣe ipinnu apẹrẹ ti awọn oke giga chromatographic, ti o mu ki o jẹ asiwaju tabi awọn itọpa itọpa.Bi pẹlu apọju ti o pọju ti o fa peak tailing (10), oke asiwaju ti o ṣẹlẹ nipasẹ idaduro ti kii ṣe ailopin le tun ṣe ayẹwo nipasẹ didinkuro ibi-iṣiro itasi ti abẹrẹ ti o ni ilọsiwaju ti o yẹ ki o ṣe atunṣe ọna ti o dara julọ ti abẹrẹ naa ko yẹ ki o ṣe atunṣe. eti, tabi awọn ipo chromatographic gbọdọ yipada lati dinku ihuwasi yii.
Nigbakuran a ṣe akiyesi ohun ti o han pe o jẹ "pipin" tente oke, bi a ṣe han ni Figure 1f. Igbesẹ akọkọ ni lohun iṣoro yii ni lati pinnu boya apẹrẹ ti o pọju jẹ nitori igbẹpọ apa kan (ie, wiwa ti awọn meji ti o yatọ ṣugbọn awọn agbo ogun ti o sunmọ ni pẹkipẹki) .Ti o ba jẹ pe awọn olutọpa oriṣiriṣi meji ti o yatọ si sunmọ papọ, lẹhinna o jẹ ọrọ kan ti imudarasi ipinnu wọn (fun apẹẹrẹ, awọn ohun elo ti o pọju) tabi awọn ohun elo ti o pọju, awọn ohun elo ti o pọju, ati awọn ohun elo ti o pọju, awọn ohun elo ti o pọju, ati awọn ohun elo ti o pọju ti awọn ohun elo ti o pọju. ti o ni ibatan si Iṣẹ iṣe ti ara ko ni nkankan lati ṣe pẹlu ọwọn funrararẹ. Nigbagbogbo, itọkasi pataki julọ si ipinnu yii jẹ boya gbogbo awọn oke giga ti chromatogram ṣe afihan awọn apẹrẹ pipin, tabi o kan ọkan tabi meji. ti gbogbo awọn oke ba pin, o ṣee ṣe ọrọ ti ara, o ṣeeṣe julọ ti o ni ibatan si ọwọn funrararẹ.
Pipin awọn oke ti o ni ibatan si awọn ohun-ini ti ara ti ọwọn funrararẹ nigbagbogbo jẹ nitori idinamọ apakan apakan tabi awọn frits itọjade, tabi isọdọtun ti awọn patikulu ninu iwe, gbigba apakan alagbeka lati ṣan ni iyara ju apakan alagbeka lọ ni awọn agbegbe kan ti iṣeto ikanni ọwọn .ni awọn agbegbe miiran (11) apakan clogged frit le jẹ imukuro nigbakan nipasẹ yiyipada sisan nipasẹ ọwọn; sibẹsibẹ, ninu iriri mi, eyi maa n jẹ igba diẹ kuku ju ojutu igba pipẹ.Eyi nigbagbogbo jẹ apaniyan pẹlu awọn ọwọn ode oni ti awọn patikulu ba tun darapọ laarin ọwọn. Ni aaye yii, o dara julọ lati rọpo ọwọn naa ki o tẹsiwaju.
Awọn tente oke ni Figure 1g, tun lati kan laipe apeere ninu ara mi lab, maa tọkasi wipe awọn ifihan agbara jẹ ki o ga ti o ti de awọn ga opin ti awọn esi ibiti o.Fun opitika absorbance aṣawari (UV-vis ninu apere yi), nigbati awọn analyte fojusi jẹ gidigidi ga, awọn Analyte fa julọ ti awọn ina ti o ti kọja awọn oluwari sisan cell, nlọ gan kekere ina lati wa ni ri nipa elekitiriki awọn ipo ti o ti wa ni ti wa ni ri awọn ipo elekitiriki. awọn orisun ariwo, gẹgẹbi ina ti o ṣina ati “okunkun lọwọlọwọ”, ti o jẹ ki ifihan naa jẹ “iruju” ni irisi ati ominira ti ifọkansi itupalẹ. Nigbati eyi ba ṣẹlẹ, iṣoro naa le ni irọrun ni irọrun yanju nipasẹ didin iwọn iwọn abẹrẹ ti itupale-dinku iwọn abẹrẹ, diluti ayẹwo, tabi mejeeji.
Ni ile-iwe chromatography, a lo ifihan agbara aṣawari (ie, y-axis ni chromatogram) gẹgẹbi itọkasi ti ifọkansi analyte ninu apẹẹrẹ.Nitorina o dabi ohun ajeji lati ri chromatogram kan pẹlu ifihan agbara ni isalẹ odo, gẹgẹbi itumọ ti o rọrun ni pe eyi tọkasi ifọkansi analyte odi - eyi ti dajudaju ko ṣee ṣe ni ti ara. Ni iriri mi, awọn iyasọtọ ti ko dara julọ nigba lilo awọn aṣawari-ipejuwe V.
Ni idi eyi, a odi tente nìkan tumo si wipe moleku eluting lati awọn iwe fa kere ina ju awọn mobile alakoso ara lẹsẹkẹsẹ ṣaaju ki o si lẹhin ti awọn peak.This le šẹlẹ, fun apẹẹrẹ, nigba lilo jo kekere erin wavelengths (<230 nm) ati mobile alakoso additives ti o fa julọ ti awọn ina ni wọnyi wavelengths.Such additives le jẹ mobile fasesolte irinše tabi bi awọn ohun elo Aceffer Methante. le lo awọn oke giga ti ko dara lati mura ọna isọdiwọn ati gba alaye pipo deede, nitorinaa ko si idi pataki lati yago fun wọn fun ọkọọkan (ọna yii ni igba miiran tọka si bi “iwadii UV aiṣe-taara”) (13) (13) . Sibẹsibẹ, ti a ba fẹ gaan lati yago fun awọn oke odi lapapọ, ninu ọran wiwa ifamọ, ojutu ti o dara julọ ni lati lo ipele wiwa ti o yatọ tabi igbi ti o yatọ ju igbi ti alagbeka lọ ti o jẹ ki igbi ti o yatọ si ti o jẹ ki igbi ti o yatọ ju igbi agbara lọ. awọn mobile alakoso ki Wọn fa kere ina ju atunnkanka.
Awọn oke odi tun le han nigba lilo wiwa itọka ifasilẹ (RI) nigbati itọka ifasilẹ ti awọn paati miiran yatọ si itupale ninu apẹẹrẹ, gẹgẹbi matrix epo, yatọ si itọka ifasilẹ ti apakan alagbeka.Eyi tun ṣẹlẹ pẹlu wiwa UV-vis, ṣugbọn ipa yii duro lati jẹ attenuated ni ibatan si wiwa RI. si ti awọn mobile alakoso.
Ni apakan mẹta lori koko ipilẹ ti laasigbotitusita LC, Mo jiroro awọn ipo ninu eyiti apẹrẹ tente oke ti a ṣe akiyesi yatọ si ti o ti ṣe yẹ tabi apẹrẹ deede.Laasigbotitusita ti o munadoko ti iru awọn iṣoro bẹ bẹrẹ pẹlu imọ ti awọn apẹrẹ tente oke ti a nireti (da lori imọ-jinlẹ tabi iriri iṣaaju pẹlu awọn ọna ti o wa tẹlẹ), nitorinaa awọn iyapa lati awọn ireti wọnyi jẹ kedere.Awọn iṣoro apẹrẹ ti o ni ọpọlọpọ awọn oriṣiriṣi awọn okunfa ti o pọju (fife pupọ, tailing, ni diẹ ninu awọn idi pataki, ati bẹbẹ lọ Mo wo diẹ ninu awọn idi pataki, ati bẹbẹ lọ). Nigbagbogbo.Mọ awọn alaye wọnyi n pese aaye ti o dara lati bẹrẹ laasigbotitusita, ṣugbọn ko gba gbogbo awọn iṣeeṣe.Awọn oluka ti o nifẹ si atokọ diẹ sii ti o jinlẹ ti awọn okunfa ati awọn solusan le tọka si LCGC “Itọsọna Laasigbotitusita LC” iwe aworan odi.
(4) LCGC “Itọsọna Laasigbotitusita LC” aworan ogiri.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Onínọmbà Data ati Ṣiṣe ifihan agbara ni Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), oju-iwe 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF ati Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31-44 (2016) .https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.