O ṣeun fun lilo si Nature.com.Ẹya ẹrọ aṣawakiri ti o nlo ni atilẹyin opin fun CSS.Fun iriri ti o dara julọ, a ṣeduro pe ki o lo ẹrọ aṣawakiri imudojuiwọn kan (tabi pa ipo ibaramu ni Internet Explorer) .Ni akoko yii, lati rii daju pe atilẹyin tẹsiwaju, a yoo ṣafihan aaye naa laisi awọn aza ati JavaScript.
Awọn patikulu silica ti o ni aiṣan ni a pese sile nipasẹ ọna sol-gel pẹlu diẹ ninu awọn iyipada lati gba awọn patikulu macroporous.Awọn patikulu wọnyi jẹ itọsẹ nipasẹ iyipada afikun fragmentation pq gbigbe (RAFT) polymerization pẹlu N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) ati styrene lati mura N-phenylmaleimstyrerrow polyneurion. Awọn ọwọn irin alagbara (100 × 1.8 mm id) ti a ti ṣajọpọ nipasẹ iṣakojọpọ slurry. Ti a ṣe ayẹwo iyasọtọ PMP ti o wa ni iyatọ ti peptide adalu ti o ni awọn peptides marun (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Argographic ti eda eniyan, iṣẹ-ṣiṣe ati iṣẹ-ṣiṣe) dimi-Tyr-Gly-Ser-Arg. omi ara albumin (HAS) .Labẹ awọn ipo elution ti o dara julọ, iṣiro awo-oye ti adalu peptide jẹ giga bi 280,000 plates/m². Ti o ba ṣe afiwe iṣẹ iyapa ti ọwọn ti o ni idagbasoke pẹlu ọwọn Ascentis Express RP-Amide, o ṣe akiyesi pe iṣẹ iyapa ti iwe PMP ti ga julọ si ọwọn ipinya effici.
Ni awọn ọdun aipẹ, ile-iṣẹ biopharmaceutical ti di ọja agbaye ti o gbooro pẹlu ilosoke idaran ti ipin ọja.Pẹlu idagbasoke ibẹjadi ti ile-iṣẹ biopharmaceutical1,2,3, itupalẹ ti awọn peptides ati awọn ọlọjẹ ni a fẹ gaan. ti awọn ọlọjẹ ninu awọn fifa ara, awọn tissues ati awọn sẹẹli jẹ iṣẹ-ṣiṣe ti o nija pupọ nitori nọmba nla ti awọn eya ti o ni agbara ti o le ṣawari ni apẹẹrẹ kan.Biotilẹjẹpe spectrometry ti o pọju jẹ ohun elo ti o munadoko fun peptide ati ilana amuaradagba, ti o ba jẹ pe iru awọn apẹẹrẹ ti wa ni itasi sinu ọpọn spectrometer ni ọkan kọja, iyapa naa kii yoo jẹ apẹrẹ.Iṣoro yii le dinku chromat eyi ti yoo dinku nọmba ti chromat ti omi lati ṣe imuse ti o pọju MS (ipinnu ti o wa ni iwaju) ti a ṣe ayẹwo chromat ti chromat. ti awọn atunnkanka ti nwọle ni ibi-iwoye ti o pọju ni akoko ti a fun ni4,5,6. Ni afikun, lakoko iyapa alakoso omi, awọn olutọpa le wa ni idojukọ ni awọn agbegbe ti o dín, nitorina ni idojukọ awọn atupale wọnyi ati imudarasi ifarahan MS. Liquid chromatography (LC) ti ni ilọsiwaju pataki ni ọdun mẹwa ti o ti kọja ati pe o ti di ilana ti o gbajumo ni proteomic analysis10.8,9.
Yipada-alakoso omi kiromatogirafi (RP-LC) ti wa ni o gbajumo ni lilo fun awọn ìwẹnumọ ati Iyapa ti peptide apapo lilo octadecyl-modified silica (ODS) bi awọn adaduro alakoso11,12,13.Sibẹsibẹ, RP adaduro awọn ipele ma ko pese itelorun Iyapa ti peptides ati awọn ọlọjẹ nitori won eka 1 amphire be ati . Awọn ipele iduro ti a ṣe apẹrẹ ni a nilo lati ṣe itupalẹ awọn peptides ati awọn ọlọjẹ pẹlu awọn ohun elo pola ati ti kii-pola lati ṣe ajọṣepọ pẹlu ati idaduro awọn analytes16.Mixed-mode chromatography, eyiti o pese awọn ibaraenisepo multimodal, le jẹ yiyan si RP-LC fun ipinya ti awọn peptides, awọn ọlọjẹ, ati awọn idapọpọ eka miiran.Ọpọlọpọ awọn akojọpọ-ipo ti a ti pese sile pẹlu awọn ipele ti a ti pese sile fun awọn ipele ti a ti pese sile. peptide ati protein separations17,18,19,20,21.Mixed-mode adaduro awọn ipele (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, pola intercalation / RPLC) ni o dara fun peptide ati amuaradagba separations nitori awọn niwaju ti awọn mejeeji pola ati ti kii-pola awọn ẹgbẹ22,23,24,25,28,28. covalently bonded pola awọn ẹgbẹ fi ti o dara Iyapa agbara ati ki o oto selectivity fun pola ati ti kii-pola atunnkanka, bi Iyapa da lori awọn ibaraenisepo laarin analyte ati adaduro alakoso. Awọn ibaraẹnisọrọ Multimodal 29, 30, 31, 32. Laipe, Zhang et al. 30 pese sile dodecyl-opin polyamine adaduro alakoso ati ni ifijišẹ niya hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ati awọn orisirisi miiran analytes.The pola intercalator ni o ni awọn mejeeji pola ati ti kii-pola awọn ẹgbẹ, ki o le ṣee lo lati ya awọn peptides ati awọn ọlọjẹ ti o ni awọn mejeeji hydrophobic ati hydrophilic-moieties-hydrophilic-moieties. awọn ọwọn) wa ni iṣowo labẹ orukọ iṣowo Ascentis Express RP-Amide columns, ṣugbọn awọn ọwọn wọnyi ni a lo fun itupalẹ amine 33 nikan.
Ninu iwadi ti o wa lọwọlọwọ, a ti pese ipilẹ ti o wa ni pola (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ati ki o ṣe ayẹwo fun iyapa awọn peptides ati trypsin digests ti HSA. A ti pese ipele ti o duro ni lilo ilana ti o tẹle. (PEG), TMOS, omi acetic acid ni a tunṣe lati ṣeto awọn patikulu silica pẹlu iwọn pore nla.Ikeji, ligand tuntun kan, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, ti ṣajọpọ ati ti a lo lati ṣe itọlẹ awọn patikulu silica lati ṣeto awọn patikulu ti o duro pola kan ti a fi sinu iduro.The Abajade adaduro iṣipopada iṣipopada 1 × 1. Eto iṣakojọpọ.Awọn iṣakojọpọ ọwọn ti wa ni iranlọwọ pẹlu gbigbọn ẹrọ lati rii daju pe ibusun isokan ti wa ni akoso laarin awọn iwe. (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ati Trypsin digest ti eda eniyan albumin (HAS) .The peptide adalu ati trypsin digest ti HSA won woye lati ya pẹlu ti o dara ipinnu ati ṣiṣe ti PMP ti a ṣe afiwe iṣẹ-ṣiṣe ti PAPis. Apapọ RP-Amide. Mejeeji peptides ati awọn ọlọjẹ ni a ṣe akiyesi lati yanju daradara ati daradara lori iwe PMP, eyiti o munadoko diẹ sii ju iwe-aṣẹ Ascentis Express RP-Amide lọ.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Acetic Acid, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimetyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MC), Styroxyloyl Chloride (MC), Styroxy-H4. Peroxide (BPO), HPLC Grade Acetonitrile (ACN), Methanol, 2-Propanol, ati Acetone Ra lati Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Apapo urea (8 g), polyethylene glycol (8 g), ati 8 milimita ti 0.01 N acetic acid ni a gbe soke fun awọn iṣẹju 10, lẹhinna 24 mL ti TMOS ti wa ni afikun sibẹ labẹ awọn ipo otutu yinyin. Aṣeyọri ifarabalẹ jẹ kikan ni 40 ° C fun awọn wakati 6 ati lẹhinna ni 120 ° C ti a fi omi ṣan silẹ fun awọn wakati 8 ti ko ni ohun elo ti a fi omi ṣan ni irin-irin ti a ko ni omi. ti gbẹ ni 70 ° C fun awọn wakati 12. Ibi-iṣan ti o gbẹ jẹ ilẹ ti o dara ni adiro ati ti a ṣe ni 550 ° C fun awọn wakati 12. Awọn ipele mẹta ti a pese sile ati ti a ṣe afihan lati ṣe ayẹwo atunṣe ni iwọn patiku, iwọn pore ati agbegbe agbegbe.
Nipa iyipada dada ti awọn patikulu silica pẹlu ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ti a ti ṣajọpọ tẹlẹ pẹlu polymerization radial pẹlu styrene, a ti pese akojọpọ ẹgbẹ ti o ni pola kan. Ipele iduro fun awọn akojọpọ ati awọn ẹwọn polystyrene. Ilana igbaradi ti wa ni apejuwe ni isalẹ.
N-phenylmaleimide (200 miligiramu) ati methyl vinyl isocyanate (100 miligiramu) ni tituka ni toluene ti o gbẹ, ati 0.1 milimita ti 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ni a fi kun si flask ifa lati pese phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer, 0.1 milimita ti 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) filtered ati ki o gbẹ ninu adiro ni 40 ° C fun wakati 3.
Awọn patikulu siliki ti o gbẹ (2 g) ni a tuka ni toluene ti o gbẹ (100 milimita), ti a rú ati sonicated ni 500 mL yika flask isalẹ fun 10 min.PMCP (10 miligiramu) ti wa ni tituka ni toluene ati fi kun dropwise si flask ifa nipasẹ funnel ti n silẹ.Apapọ naa ti refluxed ni awọn wakati 180 ati 1800C ti o gbẹ ni filtered. 60 ° C fun awọn wakati 3. Lẹhinna, awọn patikulu silica ti o ni asopọ PMCP (100 g) ni tituka ni toluene (200 milimita) ati 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) ti a fi kun ni iwaju 100 µL ti dibutyltin dilaurarate bi ayase.Apapọ ti a ti gbe soke fun 80 ° C ti o gbẹ ni wakati 50.
Styrene (1 mL), benzoyl peroxide BPO (0.5 mL), ati TEMPO-PMCP-somọ silica particles (1.5 g) ti tuka ni toluene ati ki o sọ di mimọ pẹlu nitrogen.Polimerization ti styrene ni a ṣe ni 100 ° C fun awọn wakati 12. Abajade ọja ti a ti wẹ pẹlu methanol ° C ni alẹ ni alẹ 6.
Awọn ayẹwo ti wa ni igbasilẹ ni 393 K fun wakati 1 lati gba titẹ agbara ti o kere ju 10-3 Torr. Iye N2 adsorbed ni titẹ ojulumo ti P / P0 = 0.99 ti a lo lati pinnu iwọn didun pore lapapọ.The morphology of bare and ligand-bonded silica particles ti a ṣe ayẹwo pẹlu scanning electron microscopy Japan. (silica bare and ligand-bonded silica particles) ni a gbe sori iwe alumini kan nipa lilo teepu carbon adhesive.Gold ti wa ni apẹrẹ lori awọn apẹẹrẹ nipa lilo ohun elo sputter Q150T, ati pe 5 nm Au Layer ti wa ni ipamọ lori awọn apẹẹrẹ.Eyi ṣe ilọsiwaju ilana ṣiṣe nipa lilo awọn foliteji kekere ati pese ọkà ti o dara, tutu spultham, USA Flash Electron. EA1112 elemental analyzer was used for elemental analyzer.A Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 patiku iwọn analyzer ti a lo lati gba awọn patikulu iwọn pinpin. ibujoko ti Mastersizer.Thermogravimetric onínọmbà ti a ṣe ni kan oṣuwọn ti 5 °C fun iseju lori kan otutu ibiti o ti 30 to 800 °C.
Irin alagbara ti o ni gilaasi ti o ni awọn ọwọn dín ti awọn iwọn (100 × 1.8 mm id) ni a kojọpọ nipa lilo ọna iṣakojọpọ slurry, ni lilo ilana kanna ti a lo ninu Ref. 31.Ọwọn irin alagbara (glass-lined, 100 × 1.8 mm id) pẹlu itọjade ti njade ti o ni 1 µm frit ti a ti sopọ si packer slurry (Alltech Deerfield, IL, USA) . Ṣetan slurry alakoso ti o duro nipasẹ idaduro 150 miligiramu ti iwe-ipamọ ti o wa ni ipade ti methan 2 mL si ibi ipamọ ti methan. ti a lo bi epo slurry bi daradara bi olutọpa ti ntan.Fill awọn ọwọn lẹsẹsẹ nipasẹ titẹ awọn titẹ ti 100 MP fun awọn iṣẹju 10, 80 MP fun awọn iṣẹju 15, ati 60 MP fun awọn iṣẹju 30. Lakoko iṣakojọpọ, gbigbọn ẹrọ ti a lo pẹlu awọn gbigbọn ọwọn GC meji (Alltech, Deerfield, IL, USA) lati tu silẹ aṣọ pasilo ti columns. titẹ laiyara lati ṣe idiwọ eyikeyi ibajẹ laarin ọwọn naa. Ge asopọ iwe naa lati inu apo iṣakojọpọ slurry ki o so ẹrọ miiran ti o baamu si agbawọle ati si eto LC lati ṣayẹwo iṣẹ rẹ.
LC fifa (10AD Shimadzu, Japan), injector (Valco (USA) C14 W.05) pẹlu 50nL abẹrẹ lupu, awo degasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS capillary window ti a ti won ko Akanse µLC ẹrọ aṣawari (UV-2075) ati ki o gilaasi-ila asopọ minicolumns kukuru ati afikun ipa. iwe band broadening.Lẹhin ti apoti, awọn capillaries (50 μm id 365 ati atehinwa union capillaries (50 μm) won ti fi sori ẹrọ ni 1/16" iṣan ti awọn atehinwa Euroopu. Data gbigba ati kiromatography processing won ṣe nipa lilo Multichro 2000 software. Abojuto ni 254 nm Analytes won ti ni idanwo fun UV. (Northampton, MA).
Albumin lati inu omi ara eniyan, lulú lyophilized, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 miligiramu ti a dapọ pẹlu trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 mL), ati 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL) . A mu ojutu naa fun awọn iṣẹju 10 ati ki o tọju ni omi iwẹ ni 6ched ti wakati 37 ° C, lẹhinna 1 m. 0.1% TFA.Filter ojutu ati tọju ni isalẹ 4 °C.
Iyapa ti awọn apopọ peptide ati HSA trypsin digests ni a ṣe ayẹwo lọtọ lori awọn ọwọn PMP. Ṣayẹwo iyapa ti adalu peptide ati trypsin digest ti HSA nipasẹ iwe PMP ki o ṣe afiwe awọn esi si Ascentis Express RP-Amide column. Nọmba awo ti o ni imọran jẹ iṣiro bi atẹle:
Awọn aworan SEM ti awọn patikulu siliki igboro ati awọn patikulu siliki ti o ni asopọ ligand jẹ afihan ni FIG. Awọn aworan 2 .SEM ti awọn patikulu silica igboro (A, B) fihan pe, ni idakeji si awọn ẹkọ wa ti tẹlẹ, awọn patikulu wọnyi jẹ iyipo ninu eyiti awọn patikulu ti wa ni elongated tabi ni aiṣedeede aiṣedeede.Idaju ti awọn patikulu silica ligand (C, D) jẹ smoother ju ti silica igboro jẹ awọn patikulu ti o wa lori pq ti awọn patikulu ti polystyne, eyiti o le jẹ ki awọn patikulu ti o wa ni erupẹ ti polystyne. yanrin patikulu.
Ṣiṣayẹwo awọn aworan microscope elekitironi ti awọn patikulu yanrin igboro (A, B) ati awọn patikulu yanrin ti o ni asopọ ligand (C, D).
Awọn ipinfunni ti o wa ni iwọn ti awọn patikulu silica igboro ati awọn patikulu silica ligand-linked ni a fihan ni Nọmba 3 (A) . Iwọn iwọn didun ti o ni ipilẹ ti o ni iwọn ti o ni iwọn ti o pọju ti o pọju lẹhin iyipada kemikali (Fig 3A) . ti PMP jẹ 3.36 μm, ni akawe si iwadi wa ti tẹlẹ pẹlu ipolowo (0.5) iye ti 3.05 μm (awọn patikulu silica polystyrene-bound) 34.This batch had a narrower patiku size pinpin akawe si wa ti tẹlẹ iwadi nitori awọn orisirisi awọn ipin ti PEG, urea, TMOS, ati acetic acid ni die-die ti o tobi ju awọn ipele ti PEG ti o tobi ju apakan acetic acid ni ipele ti o tobi ju ti PEG. Ipele patiku polystyrene ti o ni asopọ silica ti a ti ṣe iwadi tẹlẹ.Eyi tumọ si pe iṣẹ ṣiṣe dada ti awọn patikulu yanrin pẹlu styrene nikan ti a gbe silẹ Layer polystyrene kan (0.97 µm) lori dada yanrin, lakoko ti o wa ni ipele PMP sisanra Layer jẹ 1.38 µm.
Pipin iwọn patiku (A) ati pinpin iwọn pore (B) ti awọn patikulu yanrin igboro ati awọn patikulu ohun alumọni ligand.
Iwọn pore, iwọn didun pore ati agbegbe ti awọn patikulu silica ti iwadi lọwọlọwọ ni a fun ni Table 1 (B) . Awọn profaili PSD ti awọn patikulu silica igboro ati awọn patikulu silica ligand-bonded ni a fihan ni Figure 3 (B) Awọn abajade jẹ afiwera si iwadi wa ti tẹlẹ. Awọn iwọn pore ti igboro ati ligand-1 ti o ni ọwọ silica 1, eyiti o jẹ apakan 3 silica. tọkasi pe iwọn pore dinku nipasẹ 69 lẹhin iyipada kemikali, bi o ti han ni Table 1 (B), ati iyipada ti tẹ ni a fihan ni 3 (B) .Bakanna, iwọn didun pore ti awọn patikulu silica ti dinku lati 0.67 si 0.58 cm3 / g lẹhin iyipada kemikali. Awọn agbegbe agbegbe ti o wa ni pato / 6 ti a ṣe iwadi lọwọlọwọ jẹ silica1 m1 silica. iwadi wa ti tẹlẹ (124 m2 / g) .Gẹgẹbi a ṣe han ni Table 1 (B), agbegbe agbegbe (m2 / g) ti awọn patikulu silica tun dinku lati 116 m2 / g si 105 m2 / g lẹhin iyipada kemikali.
Awọn abajade ti igbekale ipilẹ ti ipele ti o duro ni a fihan ni Table 2. Awọn ikojọpọ erogba ti ipo iduro lọwọlọwọ jẹ 6.35%, eyiti o kere ju ikojọpọ erogba ti iwadi iṣaaju wa (awọn patikulu siliki polystyrene ti a ti sopọ, 7.93% 35 ati 10.21%, lẹsẹsẹ) 42. Awọn ikojọpọ erogba ti akoko ti o wa ni isalẹ, nitori igbaradi SP ti o kere si lọwọlọwọ styrene, diẹ ninu awọn pola ligands bi phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ati 4-hydroxy-TEMPO won used.The nitrogen àdánù ogorun ti awọn ti isiyi adaduro alakoso ni 2.21%, akawe si 0.1735 ati 0.85% nipa àdánù ti nitrogen ni išaaju-ẹrọ, lẹsẹsẹ.Eyi tumo si wipe nitrogen ni ipele ti o ga ni wt . phenylmaleimide.Bakanna, awọn ikojọpọ erogba ti awọn ọja (4) ati (5) jẹ 2.7% ati 2.9%, lẹsẹsẹ, lakoko ti ikojọpọ erogba ti ọja ikẹhin (6) jẹ 6.35%, bi o ti han ni Table 2. A ṣe ayẹwo pipadanu iwuwo pẹlu PMP adaduro alakoso, ati TGA ti tẹ ni a fihan ni Nọmba 8 ti iwọn ti o dara ti o fihan ni iwọn 4. ikojọpọ erogba (6.35%) nitori awọn ligands ko ni C nikan ṣugbọn tun N, O, ati H.
Awọn ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ni a yan fun iyipada dada ti awọn patikulu silica nitori pe o ni awọn ẹgbẹ phenylmaleimide pola ati awọn ẹgbẹ vinylisocyanate.Vinyl isocyanate group.Vinyl isocyanate group le fesi siwaju sii pẹlu styrene nipasẹ gbigbe radical polymerization.Idi keji ni lati fi sii ẹgbẹ kan ti o ni ibaraenisepo iwọntunwọnsi ati pe ko si ibaraenisepo eleto elekitiroli ati pe ko si ibaraenisepo ti o ni agbara laarin ibudo elekitiroti analy. alakoso, niwon awọn phenylmaleimide moiety ni o ni ko foju idiyele ni deede pH.The polarity ti awọn adaduro alakoso le ti wa ni dari nipasẹ awọn ti aipe iye ti styrene ati awọn lenu akoko ti free radical polymerization.The kẹhin igbese ti awọn lenu (free-radical polymerization) jẹ lominu ni ati ki o le yi awọn polarity ti awọn adaduro alakoso.Elemental onínọmbà ti a ṣe lati ṣayẹwo awọn wọnyi stationary iye ti awọn erogba fifuye. ati awọn lenu akoko pọ erogba ikojọpọ ti awọn adaduro alakoso ati idakeji.SPs pese sile pẹlu o yatọ si awọn ifọkansi ti styrene ni o yatọ si erogba loadings. Lẹẹkansi, fifuye awọn wọnyi adaduro awọn ifarahan sinu alagbara, irin ọwọn ati ki o ṣayẹwo wọn chromatographic iṣẹ (yiyan, ipinnu, N iye, ati be be lo) .Da lori awọn wọnyi adanwo, ohun iṣapeye agbekalẹ ti a ti yan lati rii daju awọn ti o dara adaduro alakoso PMP ti a ti yan awọn ipele ti o ti wa ni ti o dara ati ki o duro ni idaduro ti PMP.
Awọn apapo peptide marun (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ni a tun ṣe ayẹwo nipa lilo iwe PMP kan nipa lilo alakoso alagbeka; 60/40 (v / v) acetonitrile / omi (0.1% TFA) ni iwọn sisan ti 80 μL / min. Labẹ awọn ipo elution ti o dara julọ, nọmba awo-ara imọ-ẹrọ (N) fun iwe (100 × 1.8 mm id) jẹ 20,000 ± 100 (200,000 awọn awo / mP mẹta) awọn ọwọn ati awọn chromatograms ni a fihan ni Nọmba 5A. Ayẹwo ti o yara lori iwe PMP ni iwọn sisan ti o ga (700 μL / min), awọn peptides marun ni a ti gbe jade laarin iṣẹju kan, awọn iye N dara pupọ, 13,500 ± 330 fun iwe kan (100 × 1.8 mm id), ni ibamu si 135, 00 Figures. awọn ọwọn (100 × 1.8 mm id) ti a ti papọ pẹlu ọpọlọpọ awọn oriṣiriṣi mẹta ti ipele iduro PMP lati ṣayẹwo atunṣe atunṣe.Iwọn ifọkanbalẹ fun iwe-iwe kọọkan ni a gba silẹ nipa lilo awọn ipo elution ti o dara julọ ati nọmba ti awọn awo-ọrọ ti o ni imọran N ati akoko idaduro lati yapa adalu idanwo kanna lori iwe kọọkan. Awọn alaye atunṣe fun awọn ọwọn PMP ti a ṣe atunṣe ni a fihan ni Tableducibility 4 daradara. % awọn iye RSD, bi o ṣe han ninu Tabili 3.
Iyapa ti peptide adalu lori PMP iwe (B) ati Ascentis Express RP-Amide iwe (A); alakoso alagbeka 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), awọn iwọn ọwọn PMP (100 × 1.8 mm id); analitikali The elution ibere ti awọn agbo: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ati 5 (leucine) acid enkephalin)).
A ṣe ayẹwo iwe-iwe PMP (100 × 1.8 mm id) fun iyapa ti awọn ohun elo tryptic ti albumin ti ara eniyan ni chromatography omi ti o ga julọ. chromatogram ti o wa ninu Nọmba 6 fihan pe ayẹwo naa ti yapa daradara ati pe ipinnu naa dara julọ. HSA digests ti wa ni atupale nipa lilo iwọn sisan ti 100 µL / min, alagbeka 300 µL / min, 70. TFA.Bi o ti han ninu chromatogram (Nọmba 6), tito nkan lẹsẹsẹ HSA ti pin si awọn oke giga 17 ti o baamu si awọn peptides 17. Iṣeyọri ipinya ti oke kọọkan ni iṣiro HSA ati awọn iye ti a fun ni tabili 5.
Dijeji tryptic ti HSA (100 × 1.8 mm id) ti yapa lori iwe PMP; Oṣuwọn sisan (100 µL/min), alakoso alagbeka 60/40 acetonitrile/omi pẹlu 0.1% TFA.
nibiti L jẹ ipari ipari, η jẹ viscosity ti alakoso alagbeka, ΔP jẹ titẹ ẹhin ọwọn, ati u jẹ iyara laini ti ọna ẹrọ alagbeka. Imudaniloju ti iwe-ipamọ PMP jẹ 2.5 × 10-14 m2, oṣuwọn sisan jẹ 25 μL / min, ati 60/40 v / v ACN / omi ti a lo 1 mm.0. id) jẹ iru si ti iwadi wa ti tẹlẹ Ref.34.The permeability of the column packed with superficially porous particles is: 1.7 × 10-15 for 1.3 μm particles, 3.1 × 10-15 for 1.7 μm particles, 5.2 × 10-15 2 × 2.2 × 10-15 × 2.2. Awọn patikulu Fun awọn patikulu 5 μm 43.Nitorina, aibikita ti apakan PMP jẹ iru ti awọn patikulu mojuto-ikarahun 5 μm.
nibiti Wx ti jẹ iwuwo ti ọwọn ti o wa pẹlu chloroform, Wy jẹ iwuwo ti ọwọn ti o wa pẹlu kẹmika, ati ρ jẹ iwuwo ti epo.Densities of methanol (ρ = 0.7866) ati chloroform (ρ = 1.484) .Apapọ porosity ti SILICA PARTICLES1 × 1 × 1 × 1.80 Awọn ọwọn C18-Urea 31 ti a ti kọkọ tẹlẹ jẹ 0.63 ati 0.55, lẹsẹsẹ.Eyi tumọ si pe wiwa awọn ligands urea dinku iyọkuro ti ipele iduro. Awọn patikulu silica nitori pe ni awọn ipele iduro ti iru C18 awọn ligands C18 ti wa ni asopọ si awọn patikulu silica bi awọn ẹwọn laini, lakoko ti o wa ni awọn ipele iduro iru polystyrene, Layer polymer ti o nipọn ti a ṣẹda ni ayika rẹ. Ninu idanwo aṣoju, a ṣe iṣiro porosity ọwọn bi:
Nọmba 7A, B ṣe afihan iwe PMP (100 × 1.8 mm id) ati Ascentis Express RP-Amide iwe (100 × 1.8 mm id) ni lilo awọn ipo elution kanna (ie, 60/40 ACN / H2O ati 0.1% TFA). ) ti idite van Deemter. Awọn apopọ peptide ti a ti yan (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ni a pese sile ni 20 µL / Iwọn sisan ti o kere julọ fun awọn ọwọn mejeeji jẹ 800 µL/min. Oṣuwọn HETPm ti o kere ju 800 µL/min. iwe ati ọwọn Ascentis Express RP-Amide jẹ 2.6 µm ati 3.9 µm, lẹsẹsẹ. Awọn iye HETP tọkasi pe ṣiṣe iyapa ti iwe PMP (100 × 1.8 mm id) dara julọ ju iṣowo ti o wa ni Ascentis Express RP-Amide (100 × 1) ti o wa ni iṣowo (100 × 1. De Figure). pe idinku ninu iye N pẹlu ṣiṣan ti o pọ si ko ṣe pataki ni akawe si iwadi wa ti tẹlẹ. Iyapa ti o ga julọ ti iwe PMP (100 × 1.8 mm id) ti a fiwe si Ascentis Express RP-Amide iwe ti da lori awọn ilọsiwaju ni apẹrẹ patiku, iwọn, ati awọn ilana iṣakojọpọ ọwọn eka ti a lo ninu iṣẹ lọwọlọwọ34.
(A) van Deemter Idite (HETP dipo mobile alakoso laini iyara) gba nipa lilo a PMP iwe (100 × 1.8 mm id) ni 60/40 ACN/H2O pẹlu 0.1% TFA. (B) van Deemter Idite (HETP dipo mobile alakoso laini iyara) gba lilo ohun Ascentis Express RP-Amide × 0 iwe (.18 mm4) ACN/H2O pẹlu 0.1% TFA.
Ipele iduro ti polystyrene ti a fi sinu pola ti a ti pese ati ṣe ayẹwo fun ipinya ti awọn idapọ peptide sintetiki ati awọn itọsi trypsin ti omi ara albumin (HAS) ni iṣẹ ṣiṣe giga ti omi chromatography.Iṣe iṣẹ chromatographic ti awọn ọwọn PMP fun awọn idapọpọ peptide jẹ dara julọ ni ṣiṣe iyapa ati ipinnu ipinnu.Iwọn ilọsiwaju ti ipin ipin ti PMP jẹ awọn idi ti ipin ti o pọju ti PMP. iwọn ti awọn patikulu silica, iṣakoso iṣakoso ti alakoso iduro, ati iṣakojọpọ ọwọn ti o nipọn.Ni afikun si ṣiṣe iyapa giga, titẹ kekere iwe pada ni awọn oṣuwọn ṣiṣan giga jẹ anfani miiran ti alakoso iduro yii.Awọn ọwọn PMP ṣe afihan atunṣe ti o dara ati pe o le ṣee lo fun igbekale ti awọn apapo peptide ati tito nkan lẹsẹsẹ trypsin ti awọn oriṣiriṣi awọn ọlọjẹ.We ind lati inu awọn ọja ti o ni nkan ṣe lati lo awọn ohun elo ti ara ẹni lati inu awọn ohun elo ti o yatọ si awọn ọlọjẹ. awọn ohun elo oogun ati awọn ayokuro olu ni chromatography omi.Ni ojo iwaju, awọn ọwọn PMP yoo tun ṣe ayẹwo fun iyapa awọn ọlọjẹ ati awọn egboogi monoclonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Iwadi lori Peptide Iyapa Systems nipasẹ Yipada Alakoso Chromatography Apá I: Idagbasoke ti a Ọwọn Ilana Ilana. Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Imudara awọn peptides ti nṣiṣe lọwọ ti a ṣe apẹrẹ fun itọju awọn aarun ajakalẹ-arun.Biotechnology.Advanced.36 (2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Sintetiki mba peptides: Imọ ati awọn market.drug awari.15 (1-2) loni, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.12.109.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Onitẹsiwaju Proteomic Liquid Chromatography.J. Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al.To ti ni ilọsiwaju chromatography-mass spectrometry jẹ ki iṣakojọpọ ti awọn metabolomics ti a fojusi gbooro ati proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ipa ti UHPLC ni idagbasoke oogun.J. Oṣu Kẹsan Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Pataki ati awọn ẹya iṣe ti chromatography omi ultrahigh titẹ fun awọn iyapa iyara.J. Oṣu Kẹsan Sci.30 (8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Ohun elo chromatography omi ti o ga julọ ni idagbasoke oogun.J. Chromatography.1119 (1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic macroporous hydrogels pese sile lati epo-ni-omi ga ti abẹnu alakoso emulsions fun daradara ìwẹnumọ ti enteroviruses.Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ipa ti chromatography omi ni awọn proteomics.J. Chromatography.A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. Awọn aṣa ti o nwaye ni awọn ipinya chromatography olomi-alakoso ti awọn peptides iwosan ati awọn ọlọjẹ: ilana ati awọn ohun elo.J. Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Iyapa onisẹpo meji ti awọn peptides nipa lilo eto RP-RP-HPLC nipa lilo awọn iye pH oriṣiriṣi ni akọkọ ati awọn iwọn iyapa keji. Oṣu Kẹsan Sci.28 (14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Awọn abuda gbigbe pupọ ati iṣẹ kainetik ti awọn ọwọn chromatographic ti o ni agbara-giga ti o ṣajọpọ pẹlu C18 sub-2 μm ni kikun ati awọn patikulu la kọja ni a ṣe iwadii.J. Oṣu Kẹsan Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Recent lominu ati analitikali italaya ni ipinya, idamo ati afọwọsi ti ọgbin bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s00216-518-x08-.
Mueller, JB et al.Ila-ilẹ proteomic ti ijọba ti igbesi aye.Iseda 582 (7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Sisọ isalẹ ti awọn peptides itọju ailera nipasẹ chromatography omi igbaradi.Molecule (Basel, Switzerland) 26 (15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Kiromatografi ipo-adapọ ati ohun elo rẹ si awọn onimọ-jinlẹ.J. Chromatography.A 1218(49), 8813-8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligands fun kiromatogirafi amuaradagba ipo-ipo: ilana, ijuwe, ati apẹrẹ.J. Biotechnology.144 (1), 3-11 (2009).