O ṣeun fun lilo si Nature.com.Ẹya ẹrọ aṣawakiri ti o nlo ni atilẹyin to lopin fun CSS.Fun iriri ti o dara julọ, a ṣeduro pe ki o lo ẹrọ aṣawakiri imudojuiwọn kan (tabi pa ipo ibamu ni Internet Explorer) .Ni akoko yii, lati rii daju pe atilẹyin tẹsiwaju, a yoo ṣafihan aaye naa laisi awọn aza ati JavaScript.
Awọn patikulu silica ti o ni aiṣan ni a pese sile nipasẹ ọna sol-gel pẹlu diẹ ninu awọn iyipada lati gba awọn patikulu macroporous.Awọn patikulu wọnyi ti wa ni itọsẹ nipasẹ iyipada afikun fragmentation pq gbigbe (RAFT) polymerization pẹlu N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) ati styrene lati ṣeto N-phenylmaleimiderice-irin-irin-irin-irin-irin (PMI) ati styrene lati mura N-phenylmaleimstyrerrow irin-iduroṣinṣin irin-ipin-ipin-ipin. 100 × 1.8 mm id) ti a ṣajọpọ nipasẹ iṣakojọpọ slurry. Ti a ṣe ayẹwo ipinya iwe-iwe PMP ti adalu peptide kan ti o ni awọn peptides marun (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin ti awọn eniyan) ati awo-orin ti o pọju ti chromatphalin (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr). awọn ipo elution ti ko dara, kika awo imọ-jinlẹ ti idapọ peptide jẹ giga bi 280,000 awo/m². Ni ifiwera iṣẹ iyapa ti ọwọn ti o dagbasoke pẹlu ọwọn Ascentis Express RP-Amide ti iṣowo, a ṣe akiyesi pe iṣẹ iyapa ti iwe PMP ga ju ọwọn iṣowo lọ ni awọn ofin ti ṣiṣe ipinya ati ipinnu.
Ni awọn ọdun aipẹ, ile-iṣẹ biopharmaceutical ti di ọja agbaye ti o gbooro pẹlu ilosoke pupọ ni ipin ọja.Pẹlu idagbasoke ibẹjadi ti ile-iṣẹ biopharmaceutical1,2,3, itupalẹ ti awọn peptides ati awọn ọlọjẹ ni a fẹ gaan. fifa, awọn tissues ati awọn sẹẹli jẹ iṣẹ-ṣiṣe ti o nija pupọ nitori nọmba nla ti awọn eya ti o le ṣawari ni apẹẹrẹ kan.Biotilẹjẹpe iṣiro ti o pọju jẹ ohun elo ti o munadoko fun peptide ati ilana amuaradagba, ti o ba jẹ pe iru awọn apẹẹrẹ ti wa ni itasi sinu ọpọn spectrometer ni ọkan kọja, iyapa naa kii yoo jẹ apẹrẹ.Iṣoro yii le dinku nipasẹ imuse awọn chromatography ti omi ti o ṣaju, ti o jẹ ki awọn iṣiro MSpartly ti o wa ni iṣaaju ti o dinku (awọn iṣiro ti o wa ni iwaju) spectrometer ni akoko ti a fun ni akoko4,5,6.Ni afikun, lakoko iyapa alakoso omi, awọn atupale le wa ni idojukọ ni awọn agbegbe dín, nitorina ni idojukọ awọn atupale wọnyi ati imudarasi ifamọ wiwa MS. Liquid chromatography (LC) ti ni ilọsiwaju pataki ni ọdun mẹwa ti o ti kọja ati pe o ti di ilana ti o gbajumo ni imọran proteomic7,8,9,10.
Yipada-alakoso omi kiromatogirafi (RP-LC) ti wa ni o gbajumo ni lilo fun awọn ìwẹnumọ ati Iyapa ti peptide apapo lilo octadecyl-modified silica (ODS) bi awọn adaduro alakoso11,12,13.Sibẹsibẹ, RP adaduro awọn ipele ma ko pese itelorun Iyapa ti peptides ati awọn ọlọjẹ nitori won eka eka 111,12,13. ni a nilo lati ṣe itupalẹ awọn peptides ati awọn ọlọjẹ pẹlu awọn ohun elo pola ati ti kii-pola lati ṣe ajọṣepọ pẹlu ati idaduro awọn itupalẹ wọnyi16.Mixed-mode chromatography, eyiti o pese awọn ibaraẹnisọrọ multimodal, le jẹ yiyan si RP-LC fun ipinya ti awọn peptides, awọn ọlọjẹ, ati awọn idapọpọ eka miiran.Several mix-mode stationary phases, ti a ti pese sile1 awọn ipele amuaradagba 1 ati awọn ipele amuaradagba 1 wọnyi. 8,19,20,21.Mixed-mode adaduro ipele (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, polar intercalation / RPLC) ni o dara fun peptide ati amuaradagba separations nitori awọn niwaju ti awọn mejeeji pola ati ti kii-pola awọn ẹgbẹ22,23,24,25,26,27,28 .Similarly pẹlu awọn ẹgbẹ ti o dara polarating polar show polarly portary portary. iṣiṣẹpọ fun awọn atupale pola ati ti kii-pola, bi ipinya ṣe da lori ibaraenisepo laarin itupalẹ ati alakoso iduro.Awọn ibaraẹnisọrọ Multimodal 29, 30, 31, 32. Laipe, Zhang et al.30 pese sile kan dodecyl-opin polyamine adaduro alakoso ati ni ifijišẹ niya hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ati awọn orisirisi miiran analytes.The pola intercalator ni o ni awọn mejeeji pola ati ti kii-pola awọn ẹgbẹ, ki o le ṣee lo lati ya awọn peptides ati awọn ọlọjẹ ti o ni awọn mejeeji hydrophobic ati hydrophilic-moieties ti o wa ni columned Cloginde ti ọwọn-moieties. ly wa labẹ orukọ iṣowo Ascentis Express RP-Amide ọwọn, ṣugbọn awọn ọwọn wọnyi ni a lo fun itupalẹ amine 33 nikan.
Ninu iwadi ti o wa lọwọlọwọ, a ti pese ipilẹ ti o wa ni pola (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ati ki o ṣe ayẹwo fun pipin awọn peptides ati trypsin digests ti HSA. A ti pese ipele ti o duro ni lilo ilana ti o tẹle. Awọn patikulu silica porous ti pese sile gẹgẹbi ilana ti a fun ni atẹjade ti tẹlẹ wa pẹlu diẹ ninu awọn iyipada ti glycol proglycol. OS, omi acetic acid ti wa ni titunse lati ṣeto awọn patikulu yanrin pẹlu titobi pore nla.Ikeji, ligand titun kan, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, ti a ti ṣajọpọ ati ti a lo lati ṣe itọlẹ awọn patikulu silica lati pese aaye ti o duro ti o duro pola. Abajade adaduro iduro ti wa ni aba ti sinu apo-iṣiro ti o wa ni irin alagbara, irin × 1.8.8 pẹlu gbigbọn ẹrọ lati rii daju pe ibusun isokan ti wa ni akoso laarin awọn iwe.(Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ati Trypsin digest ti awọn eniyan serum albumin (HAS) .The peptide adalu ati trypsin digest ti HSA won woye lati ya pẹlu ti o dara ipinnu ati ṣiṣe ti PRP ti a ṣe afiwe iṣẹ-ṣiṣe ti PRP. Mejeeji peptides ati awọn ọlọjẹ ni a ṣe akiyesi lati ni ipinnu daradara ati daradara lori iwe PMP, eyiti o munadoko diẹ sii ju iwe-iwe Ascentis Express RP-Amide lọ.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Acetic Acid, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MC), Peroxide (Mc), StyrdOxidyl Chloride (MC), HPLC Grade Acetonitrile (ACN), Methanol, 2-Propanol, ati Acetone Ra lati Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Apapo urea (8 g), polyethylene glycol (8 g), ati 8 milimita ti 0.01 N acetic acid ni a gbe soke fun iṣẹju mẹwa 10, lẹhinna 24 mL ti TMOS ti wa ni afikun sibẹ labẹ awọn ipo tutu-yinyin.Apapọ ifura naa ti gbona ni 40 ° C fun awọn wakati 6 ati lẹhinna ni 120 ° C ti a fi omi ṣan silẹ fun awọn wakati 8 ti a fi omi ṣan silẹ ni omi ti o gbẹ ni awọn wakati 8. 0 ° C fun awọn wakati 12. Ibi-mimu ti o gbẹ jẹ ilẹ ti o dara ni adiro ati ti a ṣe ni 550 ° C fun wakati 12. Awọn ipele mẹta ti a pese sile ati ti a ṣe apejuwe lati ṣe ayẹwo atunṣe ni iwọn patiku, iwọn pore ati agbegbe agbegbe.
Nipa iyipada dada ti awọn patikulu silica pẹlu ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ti a ti ṣajọpọ tẹlẹ pẹlu polymerization radial pẹlu styrene, a ti pese akojọpọ ẹgbẹ ti o ni pola kan.Ipele iduro fun awọn akojọpọ ati awọn ẹwọn polystyrene. Ilana igbaradi ti wa ni apejuwe ni isalẹ.
N-phenylmaleimide (200 miligiramu) ati methyl fainali isocyanate (100 miligiramu) ni tituka ni toluene ti o gbẹ, ati 0.1 milimita ti 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ni a fi kun si flask ifa lati ṣeto phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer ati 0.1 milimita ti o gbẹ ni wakati hepolymer. adiro ni 40 ° C fun wakati 3.
Awọn patikulu siliki ti o gbẹ (2 g) ni a tuka ni toluene ti o gbẹ (100 milimita), ti a rú ati sonicated ni 500 mL yika flask isalẹ fun 10 min.PMCP (10 miligiramu) ti tuka ni toluene ati ṣafikun dropwise si flask ifa nipasẹ funnel sisọ silẹ.Apapọ naa ti refluxed ni awọn wakati 1800 ati 180 °C ti o gbẹ ni Asẹ 180C. Awọn wakati 3. Lẹhinna, awọn patikulu silica ti o ni asopọ PMCP (100 g) ni tituka ni toluene (200 milimita) ati 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) ti a fi kun ni iwaju 100 µL ti dibutyltin dilaurarate bi olutọpa.Apopọ naa ti mu ni 50 ° C ti o gbẹ fun wakati 8, ° C ti gbẹ fun wakati 8.
Styrene (1 mL), benzoyl peroxide BPO (0.5 mL), ati TEMPO-PMCP-somọ silica particles (1.5 g) ti tuka ni toluene ati ki o sọ di mimọ pẹlu nitrogen.Polimerization ti styrene ni a ṣe ni 100 ° C fun awọn wakati 12. Abajade ọja ti a ti wẹ pẹlu methanol ° C ni alẹ ni alẹ 6.
Awọn ayẹwo ti wa ni igbasilẹ ni 393 K fun wakati 1 lati gba titẹ agbara ti o kere ju 10-3 Torr. Iye N2 adsorbed ni titẹ ojulumo ti P / P0 = 0.99 ti a lo lati pinnu iwọn didun pore lapapọ. A ṣe ayẹwo morphology ti igboro ati ligand-bonded silica particles ti a ṣe ayẹwo pẹlu ẹrọ itanna elekitironi, Japan si microscopy. Awọn patikulu siliki ti o ni asopọ ligand) ni a gbe sori iwe aluminiomu nipa lilo teepu carbon adhesive.Gold ti palara lori awọn apẹẹrẹ nipa lilo ohun elo sputter Q150T, ati pe 5 nm Au Layer ti wa ni ipamọ lori awọn apẹẹrẹ.Eyi ṣe imudara ilana ṣiṣe nipa lilo awọn foliteji kekere ati pese ọkà ti o dara, tutu sputtering.A Thermoti Elementron, USA 1 onínọmbà ti a lo fun Atupalẹ Thermo2 Electron. .A Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 olutọpa iwọn patikulu ti a lo lati gba ipinfunni ipinfunni. 5 °C fun iṣẹju kan lori iwọn otutu ti 30 si 800 °C.
Irin alagbara ti o ni gilaasi ti o ni awọn ọwọn dín ti awọn iwọn (100 × 1.8 mm id) ni a kojọpọ nipa lilo ọna iṣakojọpọ slurry, ni lilo ilana kanna ti a lo ninu Ref.31.A irin alagbara, irin iwe (gilasi-lined, 100 × 1.8 mm id) pẹlu ohun ijade ibamu ibamu ti o ni awọn 1 µm frit ti a ti sopọ si a slurry Packer (Alltech Deerfield, IL, USA) .Mura a adaduro alakoso slurry nipa suspending 150 miligiramu ti columnary ipele ti a lo methan ni methan 2 mL ti a fi ranṣẹ si ibi ipamọ ti methan. slurry epo bi daradara bi awọn propelling solvent.Fill awọn iwe lesese nipa a to awọn igara ti 100 MP fun 10 iṣẹju, 80 MP fun 15 iṣẹju, ati 60 MP fun 30 minutes. Nigba packing, darí gbigbọn ti a loo pẹlu meji GC ọwọn shakers (Alltech, Deerfield, IL, USA) lati rii daju awọn iwe-iṣiro titẹ sita ni eyikeyi ninu awọn iwe. .Ge asopọ iwe naa lati inu apo iṣakojọpọ slurry ki o so ẹrọ miiran ti o yẹ si ẹnu-ọna ati si eto LC lati ṣayẹwo iṣẹ rẹ.
Ohun LC fifa (10AD Shimadzu, Japan), injector (Valco (USA) C14 W.05) pẹlu 50nL abẹrẹ lupu, awo degasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS capillary window ti a ti won ko Special µLC ẹrọ aṣawari (UV-2075) ati awọn gilaasi-ila asopọ kukuru kukuru ipa. Lẹhin ti iṣakojọpọ, awọn capillaries (50 μm id 365 ati idinku awọn capillaries Union (50 μm) ni a fi sori ẹrọ ni 1/16 ″ iṣan ti iṣọkan idinku. Gbigba data ati sisẹ chromatographic ni a ṣe nipa lilo sọfitiwia Multichro 2000. Abojuto ni 254 nm Oriṣiriṣi Analytes ni idanwo fun UVginance8 Chromat data.
Albumin lati inu omi ara eniyan, lulú lyophilized, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg ti a dapọ pẹlu trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 mL), ati 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL) . A ti gbe ojutu naa fun awọn iṣẹju 10 ati ki o tọju ni omi iwẹ ni 37 ° C ti 37 ° C. Mu ojutu naa ki o tọju ni isalẹ 4 ° C.
Iyapa ti awọn apopọ peptide ati HSA trypsin digests ni a ṣe ayẹwo lọtọ lori awọn ọwọn PMP. Ṣayẹwo iyapa ti adalu peptide ati trypsin digest ti HSA nipasẹ iwe PMP ki o ṣe afiwe awọn esi si Ascentis Express RP-Amide column. Nọmba awo ti o ni imọran jẹ iṣiro bi atẹle:
Awọn aworan SEM ti awọn patikulu siliki igboro ati awọn patikulu siliki ti o ni asopọ ligand jẹ afihan ni FIG.Awọn aworan.
Ṣiṣayẹwo awọn aworan microscope elekitironi ti awọn patikulu yanrin igboro (A, B) ati awọn patikulu yanrin ti o ni asopọ ligand (C, D).
Awọn ipinfunni ti o wa ni iwọn ti awọn patikulu silica igboro ati awọn patikulu silica ligand-bonded ti wa ni afihan ni Figure 3 (A) . Iwọn iwọn didun ti o ni ipilẹ ti o ni iwọn didun ti o pọju ti o pọju lẹhin iyipada kemikali (Fig. 3A) . 3.36 μm, akawe si wa tẹlẹ iwadi pẹlu ad (0.5) iye ti 3.05 μm (polystyrene-bound silica patikulu) 34.This ipele ní a narrower patiku iwọn pinpin akawe si wa ti tẹlẹ iwadi nitori awọn orisirisi awọn ipin ti PEG, urea, TMOS, ati acetic acid ninu awọn ti o tobi iwọn patikulu ti PEG, urea, TMOS, ati acetic acid ni awọn iwọn ti o tobi ju apakan apakan ti PEG. Eyi tumọ si pe iṣẹ ṣiṣe dada ti awọn patikulu yanrin pẹlu styrene nikan ni ifipamọ Layer polystyrene kan (0.97 µm) sori dada yanrin, lakoko ti o wa ni ipele PMP sisanra Layer jẹ 1.38 µm.
Pipin iwọn patiku (A) ati pinpin iwọn pore (B) ti awọn patikulu yanrin igboro ati awọn patikulu ohun alumọni ligand.
Iwọn pore, iwọn didun pore ati agbegbe ti awọn patikulu silica ti iwadi lọwọlọwọ ni a fun ni Table 1 (B) . Awọn profaili PSD ti awọn patikulu silica igbona ati awọn patikulu silica ligand-bonded ti wa ni afihan ni Nọmba 3 (B) Awọn abajade jẹ afiwera si iwadi wa ti tẹlẹ. Awọn iwọn pore ti igboro ati ligand-1 ti o ni ọwọ silica 1 ti o jẹ 1 silica 1 ti o ni ọwọ si 1 silica. iwọn re dinku nipasẹ 69 lẹhin iyipada kemikali, gẹgẹbi o ti han ni Table 1 (B), ati iyipada ti iṣipopada ti han ni 3 (B) .Bakanna, iwọn didun pore ti awọn patikulu silica ti dinku lati 0.67 si 0.58 cm3 / g lẹhin iyipada kemikali. Agbegbe pato ti awọn ohun elo ti a ṣe iwadi lọwọlọwọ silica 111111 m2 ti o ti wa tẹlẹ si 111 g2 ti o jẹ iwadi silica 2 ti o ti wa tẹlẹ. g) .Bi a ṣe han ni Table 1 (B), agbegbe agbegbe (m2 / g) ti awọn patikulu silica tun dinku lati 116 m2 / g si 105 m2 / g lẹhin iyipada kemikali.
Awọn abajade ti igbekale ipilẹ ti ipele ti o duro ni a fihan ni Table 2. Awọn ikojọpọ erogba ti ipo iduro lọwọlọwọ jẹ 6.35%, eyiti o kere ju ikojọpọ erogba ti iwadi wa ti tẹlẹ (awọn patikulu polystyrene ti o ni ibatan silica, 7.93% 35 ati 10.21%, lẹsẹsẹ) 42. Awọn ikojọpọ erogba ti aaye ti o wa ni ipo kekere, SP ti o wa ni afikun si ipo ti o wa ni ipo ti o wa ni isalẹ. ligands bi phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ati 4-hydroxy-TEMPO ni won lo.The nitrogen àdánù ogorun ti awọn ti isiyi adaduro alakoso ni 2.21%, akawe si 0.1735 ati 0.85% nipa àdánù ti nitrogen ni išaaju-ẹrọ, lẹsẹsẹ.Eyi tumo si wipe wt % ti erogba fifuye ni ipele ti o wa lọwọlọwọ si awọn ọja ti o ga julọ ti awọn ọja nitrogenlelma. 4) ati (5) jẹ 2.7% ati 2.9%, lẹsẹsẹ, lakoko ti ikojọpọ erogba ti ọja ikẹhin (6) jẹ 6.35%, bi o ti han ni Table 2. A ṣe ayẹwo pipadanu iwuwo pẹlu PMP adaduro alakoso, ati pe TGA ti tẹ ni nọmba 4.TGA ti tẹ n ṣe afihan pipadanu iwuwo ti 8.6%, ṣugbọn awọn ligands ti o dara ni 6% C, ṣugbọn ti o wa ninu 6. ati H.
A ti yan ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate fun iyipada dada ti awọn patikulu silica nitori pe o ni awọn ẹgbẹ phenylmaleimide pola ati awọn ẹgbẹ vinylisocyanate.Vinyl isocyanate group.Vinyl isocyanate group le fesi siwaju sii pẹlu styrene nipasẹ gbigbe radical polymerization.Idi keji ni lati fi sii ẹgbẹ kan ti o ni ibaraenisepo iwọntunwọnsi ati pe ko si ibaraenisepo ti o lagbara laarin aaye elekitiroti analy Nylmaleimide moiety ni o ni ko foju idiyele ni deede pH.The polarity ti awọn adaduro alakoso le ti wa ni dari nipasẹ awọn ti aipe iye ti styrene ati awọn lenu akoko ti free radical polymerization.The kẹhin igbese ti awọn lenu (free-radical polymerization) jẹ lominu ni ati ki o le yi awọn polarity ti awọn adaduro phase.Elemental onínọmbà ti a ṣe lati ṣayẹwo awọn erogba npo si fifuye akoko ti awọn wọnyi stationary ti a ṣe akiyesi awọn iwọn ti awọn erogba ikojọpọ ti awọn akoko ti awọn ti o ti ṣe akiyesi awọn ti awọn erogba loading. adaduro alakoso ati idakeji.SPs pese sile pẹlu orisirisi awọn ifọkansi ti styrene ni o yatọ si erogba loadings. Lẹẹkansi, fifuye wọnyi adaduro awọn ipele sinu alagbara, irin ọwọn ati ki o ṣayẹwo wọn chromatographic iṣẹ (yiyan, ipinnu, N iye, bbl) .Da lori awọn wọnyi adanwo, ohun iṣapeye agbekalẹ ti a ti yan lati ṣeto awọn PMP adaduro alakoso lati rii daju polarity iṣakoso ati ti o dara analyte idaduro.
Awọn apapo peptide marun (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ni a tun ṣe ayẹwo nipa lilo iwe PMP kan nipa lilo alakoso alagbeka;60/40 (v / v) acetonitrile / omi (0.1% TFA) ni iwọn sisan ti 80 μL / min. Labẹ awọn ipo elution ti o dara julọ, nọmba awo-ara imọ-ẹrọ (N) fun iwe kan (100 × 1.8 mm id) jẹ 20,000 ± 100 (200,000 awọn chrome) ati awọn chrome mẹta mẹta. Atograms ti wa ni afihan ni Figure 5A.Itupalẹ kiakia lori iwe PMP ni iwọn sisan ti o ga julọ (700 μL / min), awọn peptides marun ni a ti gbe jade laarin iṣẹju kan, awọn iye N dara julọ, 13,500 ± 330 fun iwe kan (100 × 1.8 mm id), Ni ibamu si 135,000 columns / m .8 Fig. mm id) ti a ti ṣajọpọ pẹlu ọpọlọpọ awọn oriṣiriṣi mẹta ti ipele iduro PMP lati ṣayẹwo atunṣe atunṣe.Iwọn ifọkanbalẹ fun iwe-iwe kọọkan ni a gba silẹ nipa lilo awọn ipo elution ti o dara julọ ati nọmba ti awọn awo-ara ti o ni imọran N ati akoko idaduro lati yapa adalu idanwo kanna lori iwe kọọkan. Awọn alaye atunṣe fun awọn ọwọn PMP ni a fihan ni Table 4. Awọn atunṣe atunṣe ti awọn ipele ti o wa ni isalẹ% PMPD ti o wa ni isalẹ daradara ni iwọn 3.
Iyapa ti peptide adalu lori PMP iwe (B) ati Ascentis Express RP-Amide iwe (A);alakoso alagbeka 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), awọn iwọn ọwọn PMP (100 × 1.8 mm id);analitikali Ilana elution ti awọn agbo ogun: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ati 5 (leucine) acid enkephalin)).
A ṣe ayẹwo iwe PMP kan (100 × 1.8 mm id) fun iyapa ti awọn ohun elo tryptic digess ti albumin ara eniyan ni chromatography omi ti o ga julọ. chromatogram ti o wa ninu Nọmba 6 fihan pe ayẹwo naa ti yapa daradara ati pe ipinnu naa dara julọ. HSA digests ti wa ni atupale nipa lilo iwọn sisan ti 100 µL / min, mobile 0% ti a fihan ni 70.1. chromatogram (Nọmba 6), tito nkan lẹsẹsẹ HSA ti pin si awọn oke giga 17 ti o ni ibamu si awọn peptides 17. Iyapa iyasọtọ ti oke kọọkan ni iṣiro HSA ati awọn iye ti a fun ni Table 5.
Dijeji tryptic ti HSA (100 × 1.8 mm id) ti yapa lori iwe PMP;Oṣuwọn sisan (100 µL/min), alakoso alagbeka 60/40 acetonitrile/omi pẹlu 0.1% TFA.
nibiti L jẹ ipari ipari, η jẹ iki ti apakan alagbeka, ΔP jẹ titẹ ẹhin ọwọn, ati u jẹ iyara laini ti ọna ẹrọ alagbeka. The permeability of the PMP column was 2.5 × 10-14 m2, awọn sisan oṣuwọn jẹ 25 μL / min, ati 60/40 v / v ACN / omi ti a lo iru 1 mm10. ti o ti wa tẹlẹ iwadi Ref.34.The permeability ti awọn iwe aba ti pẹlu superficially porous patikulu ni: 1.7 × 10-15 fun 1.3 μm patikulu, 3.1 × 10-15 fun 1.7 μm patikulu, 5.2 × 10-15 5.2 × 10-15 ati 2.5 μm 2.5 μm. 43.Nitorina, aiṣedeede ti ipele PMP jẹ iru ti 5 μm mojuto-ikarahun patikulu.
ibi ti WX jẹ iwuwo ti iwe ti o kun pẹlu Chloroform ti o kun pẹlu Chlaroform, Wy jẹ iwuwo ti epo-ara siliki -. A kẹkọọ tẹlẹ ni 0.63 ati 0,55, beleyi tumọ si pe niwaju urea ti o dinku agbara pẹlu awọn plumals ti PMP Es awọn ligads C18 ti wa ni so si awọn patiku tlaca bi awọn ẹwọn laini ile, lakoko ti o wa ni polysty-oriṣi polystyrene
Nọmba 7A, B ṣe afihan iwe PMP (100 × 1.8 mm id) ati Ascentis Express RP-Amide iwe (100 × 1.8 mm id) ni lilo awọn ipo elution kanna (ie, 60/40 ACN / H2O ati 0.1% TFA).) ti idite van Deemter.Awọn apopọ peptide ti a ti yan (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ni a pese sile ni 20 µL / Iwọn sisan ti o kere julọ fun awọn ọwọn mejeeji jẹ 800 µL/min. Iwọn HETPm ti o kere ju ti o lọ ni iwọn 800 µL/min. jẹ KIAKIA RP-Amide iwe jẹ 2.6 µm ati 3.9 µm, lẹsẹsẹ. Awọn iye HETP tọkasi pe ṣiṣe iyapa ti iwe PMP (100 × 1.8 mm id) dara julọ ju iṣowo ti o wa ni Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) ti o wa ni iṣowo ti o wa ni iṣowo ti Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm) ti o wa ni iṣowo ti o wa ninu iwe-iṣiro 100 × 1.8. ko ṣe pataki ni akawe si iwadi wa ti tẹlẹ.Iwọn iyasọtọ ti o ga julọ ti iwe PMP (100 × 1.8 mm id) ti a fiwe si Ascentis Express RP-Amide iwe ti da lori awọn ilọsiwaju ni apẹrẹ patiku, iwọn, ati awọn ilana iṣakojọpọ ọwọn eka ti a lo ninu iṣẹ lọwọlọwọ34.
(A) van Deemter Idite (HETP dipo mobile alakoso laini iyara) gba nipa lilo a PMP iwe (100 × 1.8 mm id) ni 60/40 ACN/H2O pẹlu 0.1% TFA. (B) van Deemter Idite (HETP dipo mobile alakoso laini iyara) gba lilo ohun Ascentis Express RP-Amide / 0000 id (CN 18 mmH2) 0.1% TFA.
Ipele iduro ti polystyrene ti a fi sinu pola ti a ti pese ati ṣe ayẹwo fun ipinya ti awọn idapọ peptide sintetiki ati awọn itọsi trypsin ti omi ara albumin (HAS) ni iṣẹ ṣiṣe giga ti omi chromatography.Iṣẹ chromatographic ti awọn ọwọn PMP fun awọn idapọpọ peptide jẹ dara julọ ni ṣiṣe iyapa ati ipinnu ipinnu.Iwọn ilọsiwaju ti ipinya ti awọn idii ti iwọn pọ si ti PMP, nitori iwọn iwọn ti iwọn pọ si ti PMP. a patikulu, iṣakoso kolaginni ti awọn adaduro alakoso, ati eka iwe packing.In afikun si ga Iyapa ṣiṣe, kekere iwe pada titẹ ni ga sisan awọn ošuwọn ni miran anfani ti yi adaduro alakoso.PMP ọwọn afihan ti o dara reproducibility ati ki o le ṣee lo fun awọn igbekale ti peptide apapo ati trypsin lẹsẹsẹ ti awọn orisirisi proteins.We pinnu lati lo yi fun awọn ohun elo ti awọn ohun ọgbin fun awọn nkanmimu ti awọn ohun ọgbin fun awọn ohun elo ti awọn ohun elo ti o wa ni nkanmimu ati awọn ohun elo ti o wa ni nkan ti o wa ni erupe ile lati inu awọn ohun elo ti o wa ni ipilẹ ti awọn ohun elo ti o wa ninu awọn ohun elo ti o wa ni ipilẹ ti awọn ohun elo ti o wa ni ipilẹ ti awọn ohun elo ti o wa ni ipilẹ ti awọn ohun elo ti o wa ni erupe ile. chromatography.Ni ojo iwaju, awọn ọwọn PMP yoo tun ṣe ayẹwo fun iyapa awọn ọlọjẹ ati awọn egboogi monoclonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Iwadi lori Peptide Iyapa Systems nipasẹ Yipada Alakoso Chromatography Apá I: Idagbasoke ti a Ọwọn Ilana Ilana.Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Imudara awọn peptides ti nṣiṣe lọwọ ti a ṣe apẹrẹ fun itọju awọn aarun ajakalẹ-arun.Biotechnology.Advanced.36 (2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Sintetiki mba peptides: Imọ ati awọn market.drug awari.15 (1-2) loni, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.12.109.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Onitẹsiwaju Proteomic Liquid Chromatography.J.Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al.To ti ni ilọsiwaju chromatography-mass spectrometry jẹ ki iṣakojọpọ ti awọn metabolomics ti a fojusi gbooro ati proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ipa ti UHPLC ni idagbasoke oogun.J.Oṣu Kẹsan Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Pataki ati awọn ẹya iṣe ti chromatography omi ultrahigh titẹ fun awọn iyapa iyara.J.Oṣu Kẹsan Sci.30 (8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Ohun elo chromatography omi ti o ga julọ ni idagbasoke oogun.J.Chromatography.1119 (1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic macroporous hydrogels pese sile lati epo-ni-omi ga ti abẹnu alakoso emulsions fun daradara ìwẹnumọ ti enteroviruses.Chemical.Britain.J.401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ipa ti chromatography omi ni awọn proteomics.J.Chromatography.A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. Awọn aṣa ti o nwaye ni awọn ipinya chromatography olomi-alakoso ti awọn peptides iwosan ati awọn ọlọjẹ: ilana ati awọn ohun elo.J.Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Iyapa onisẹpo meji ti awọn peptides nipa lilo eto RP-RP-HPLC nipa lilo awọn iye pH oriṣiriṣi ni akọkọ ati awọn iwọn iyapa keji.Oṣu Kẹsan Sci.28 (14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Awọn abuda gbigbe pupọ ati iṣẹ kainetik ti awọn ọwọn chromatographic ti o ni agbara-giga ti o ṣajọpọ pẹlu C18 sub-2 μm ni kikun ati awọn patikulu la kọja ni a ṣe iwadii.J.Oṣu Kẹsan Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Recent lominu ati analitikali italaya ni ipinya, idamo ati afọwọsi ti ọgbin bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s00216-518-x08-.
Mueller, JB et al.Ila-ilẹ proteomic ti ijọba ti igbesi aye.Iseda 582 (7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Sisọ isalẹ ti awọn peptides itọju ailera nipasẹ chromatography omi igbaradi.Molecule (Basel, Switzerland) 26 (15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Kiromatografi ipo-adapọ ati ohun elo rẹ si awọn onimọ-jinlẹ.J.Chromatography.A 1218(49), 8813-8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligands fun kiromatogirafi amuaradagba ipo-ipo: ilana, ijuwe, ati apẹrẹ.J.Biotechnology.144 (1), 3-11 (2009).