O ṣeun fun lilo si Nature.com. O nlo ẹya ẹrọ aṣawakiri kan pẹlu atilẹyin CSS lopin. Fun iriri ti o dara julọ, a ṣeduro pe ki o lo ẹrọ aṣawakiri imudojuiwọn kan (tabi mu Ipo Ibamu ṣiṣẹ ni Internet Explorer). Ni afikun, lati rii daju atilẹyin ti nlọ lọwọ, a fihan aaye naa laisi awọn aza ati JavaScript.
Ṣe afihan carousel ti awọn kikọja mẹta ni ẹẹkan. Lo awọn ti tẹlẹ ati awọn bọtini atẹle lati gbe nipasẹ awọn ifaworanhan mẹta ni akoko kan, tabi lo awọn bọtini ifaworanhan ni ipari lati gbe nipasẹ awọn ifaworanhan mẹta ni akoko kan.
Awọn patikulu siliki ti o ni la kọja ni a pese sile nipasẹ ọna sol-gel pẹlu diẹ ninu awọn iyipada lati gba awọn patikulu pore jakejado. Awọn patikulu wọnyi jẹ itọsẹ pẹlu N-phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate (PMI) ati styrene nipasẹ yiyipada pq gbigbe-fragmentation (RAFT) polymerization lati ṣe agbejade N-phenylmaleimide intercalated polyamides. Styrene (PMP) adaduro alakoso. Awọn ọwọn irin alagbara, irin dín (100 × 1.8 mm opin inu) ni a kojọpọ pẹlu iṣakojọpọ slurry kan. Iṣẹ ṣiṣe chromatographic ti iwe PMP ni a ṣe ayẹwo lati yapapọ awọn peptides sintetiki ti o ni awọn peptides marun (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leu amino acid enkephalin) ati tryptic hydrolyzate ti omi ara eniyan (HAS). Labẹ awọn ipo elution ti o dara julọ, nọmba imọ-jinlẹ ti awọn awopọ pẹlu adalu peptides de 280,000 awo/sq.m. Ti a ṣe afiwe iṣẹ iyapa ti ọwọn ti o ni idagbasoke pẹlu ọwọn Ascentis Express RP-Amide ti iṣowo, o ṣe akiyesi pe ṣiṣe iyapa ti iwe PMP ti ga ju iwe-iṣowo lọ ni awọn ofin ti ṣiṣe iyapa ati ipinnu.
Ile-iṣẹ biopharmaceutical ti di ọja agbaye ti o gbooro pẹlu ilosoke pataki ni ipin ọja ni awọn ọdun aipẹ. Pẹlu idagba ibẹjadi ti ile-iṣẹ biopharmaceutical1,2,3 iwulo nla wa fun peptide ati itupalẹ amuaradagba. Ni afikun si peptide ibi-afẹde, ọpọlọpọ awọn impurities ni a ṣẹda lakoko iṣelọpọ peptide, nitorinaa isọdọtun chromatographic ni a nilo lati gba mimọ ti peptide ti o fẹ. Onínọmbà ati isọdi ti awọn ọlọjẹ ninu awọn omi ara, awọn ara, ati awọn sẹẹli jẹ iṣẹ-ṣiṣe ti o nija pupọ nitori nọmba nla ti awọn eeya ti o le rii ti o wa ninu apẹẹrẹ kan. Botilẹjẹpe spectrometry pupọ jẹ ohun elo ti o munadoko fun titọpa awọn peptides ati awọn ọlọjẹ, ti iru awọn apẹẹrẹ ba wa ni taara sinu spectrometer ibi-ipin, ipinya yoo jẹ alaiwulo. Iṣoro yii ni a le yanju nipasẹ ṣiṣe kiromatogirafi omi (LC) ṣaaju itupalẹ MS, eyiti yoo dinku iye awọn atunnkanwo ti nwọle spectrometer pupọ ni akoko ti a fifun4,5,6. Ni afikun, awọn atunnkanka le ṣojumọ ni agbegbe dín lakoko ipinya alakoso omi, nitorinaa fifokan awọn itupalẹ wọnyi ati jijẹ ifamọ ti wiwa MS. Kiromatografi Liquid (LC) ti ni ilọsiwaju ni pataki ni awọn ọdun mẹwa sẹhin ati pe o ti di ọna ti a lo jakejado fun itupalẹ proteomic7,8,9,10.
Kiromatogirafi olomi-alakoso (RP-LC) ni lilo pupọ lati sọ di mimọ ati lọtọ awọn akojọpọ ti awọn peptides ni lilo siliki octadecyl-títúnṣe (ODS) gẹgẹbi ipele iduro11,12,13. Bibẹẹkọ, nitori eto eka wọn ati iseda amphoteric, awọn ipele iduro RP 14,15 ko le pese ipinya itelorun ti awọn peptides ati awọn ọlọjẹ. Nitorinaa, itupalẹ ti awọn peptides ati awọn ọlọjẹ pẹlu awọn ajẹkù pola ati ti kii ṣe pola nilo awọn ipele iduro ti a ṣe apẹrẹ pataki lati ṣe ajọṣepọ ati idaduro awọn itupalẹ wọnyi16. Kiromatografi ti o dapọ, eyiti o funni ni awọn ibaraenisepo multimodal, le jẹ yiyan si RP-LC fun yiya awọn peptides, awọn ọlọjẹ, ati awọn akojọpọ eka miiran. Orisirisi awọn ipele adaduro iru adalu ni a pese sile ati awọn ọwọn ti o kun pẹlu awọn ipele iduro wọnyi ni a lo lati ya awọn peptides ati awọn ọlọjẹ17,18,19,20,21. Nitori wiwa ti pola ati awọn ẹgbẹ ti kii ṣe pola, awọn ipele iduro ipo ti o dapọ (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, intercalation polar / RPLC) jẹ o dara fun iyapa awọn peptides ati awọn ọlọjẹ22,23,24,25,26,27,28. , pola intercalated adaduro awọn ipele pẹlu covalently bonded pola awọn ẹgbẹ fi ti o dara Iyapa agbara ati ki o oto selectivity fun pola ati ti kii-pola atunnkanka nitori Iyapa da lori awọn ibaraenisepo laarin awọn analyte ati awọn adaduro alakoso Multimodal awọn ibaraẹnisọrọ 29,30,31,32. Laipẹ, Zhang et al. 30 gba awọn ipele iduro ti behenyl-opin ti awọn polyamines ati ni aṣeyọri niya awọn hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ati diẹ ninu awọn atunnkanka miiran. Awọn ohun elo ti o wa ni ifibọ pola ni awọn mejeeji pola ati awọn ẹgbẹ ti kii ṣe pola, nitorina o le ṣee lo lati ya awọn peptides ati awọn ọlọjẹ sinu awọn ẹya hydrophobic ati hydrophilic. Awọn ọwọn inline Polar (fun apẹẹrẹ, awọn ọwọn C18 pẹlu inline amide) wa labẹ orukọ iṣowo Ascentis Express RP-Amide columns, ṣugbọn awọn ọwọn wọnyi nikan ni a ti lo fun itupalẹ amine 33.
Ninu iwadi lọwọlọwọ, ipele ifisinu pola kan (N-phenylmaleimide, ifibọ polystyrene) ti pese ati ṣe iṣiro fun iyapa peptide ati pipin HSA tryptic. Ilana ti o tẹle yii ni a lo lati ṣeto ipele iduro. Awọn patikulu silica ti o wa ni erupẹ ni a pese sile gẹgẹbi awọn ilana ti a ṣe apejuwe ninu awọn atẹjade wa tẹlẹ, pẹlu awọn iyipada diẹ ninu awọn eto igbaradi 31, 34, 35, 36, 37, 38, 39. Awọn ipin ti urea, polyethylene glycol (PEG), TMOS ati olomi-acetic acid ni a tunṣe lati gba pẹlu awọn patikulu silica nla. Ni ẹẹkeji, ligand tuntun phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ti wa ni iṣelọpọ ati awọn patikulu silica ti a ti derivatized rẹ ni a lo lati ṣeto awọn ipele iduro ti a fi sinu pola. Ipele iduro ti o gba ni a kojọpọ sinu ọwọn irin alagbara kan (iwọn ila opin inu 100 × 1.8 mm) ni ibamu si ero iṣapeye iṣapeye. Iṣakojọpọ ti ọwọn naa jẹ iranlọwọ nipasẹ gbigbọn ẹrọ lati rii daju pe ipele aṣọ kan laarin ọwọn naa. A ṣe ayẹwo iwe ti a kojọpọ fun iyapa ti adalu peptides ti o ni awọn peptides marun (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin peptide). ati tryptic hydrolysates ti omi ara eniyan albumin (HSA). A ṣe akiyesi pe adalu peptide ati HSA tryptic digest yapa pẹlu ipinnu to dara ati ṣiṣe. Iyapa ṣiṣe ti ọwọn PMP ni a ṣe afiwe si ti ọwọn Ascentis Express RP-Amide. A ṣe akiyesi pe awọn peptides ati awọn ọlọjẹ ni ipinnu ti o dara ati ṣiṣe iyapa giga lori iwe PMP, ati ṣiṣe iyasọtọ ti iwe PMP ga ju ti Ascentis Express RP-Amide iwe.
PEG (polyethylene glycol), urea, acetic acid, trimethoxyorthosilicate (TMOS), trimethylchlorosilane (TMCS), trypsin, eda eniyan albumin (HSA), ammonium kiloraidi, urea, hexamethylmethacryloyldisilazane (HMDS), methacryloyl chloride (MC), POZ-hydrone, styrene (MC4), styrene. acetonitrile (ACN) fun HPLC, methanol, 2-propanol ati acetone. Sigma-Aldrich Company (St. Louis, Missouri, USA).
Adalu urea (8 g), polyethylene glycol (8 g) ati 8 milimita ti 0.01 N. acetic acid ni a mu soke fun awọn iṣẹju 10, ati 24 milimita ti TMOS ti wa ni afikun sibẹ labẹ itutu yinyin. Adalu ifaseyin naa jẹ kikan ni 40 ° C fun awọn wakati 6 ati lẹhinna ni 120 ° C fun awọn wakati 8 ni autoclave irin alagbara. Omi naa ti ya ati pe a ti gbẹ iyokù ni 70 ° C fun wakati 12. Awọn bulọọki rirọ ti o gbẹ ti wa ni ilẹ laisiyonu ati pe ninu adiro ni 550 ° C fun wakati 12. Awọn ipele mẹta ni a pese ati ṣe afihan lati ṣe idanwo atunṣe ti awọn iwọn patiku, iwọn pore ati agbegbe dada.
Ẹgbẹ pola ati ipo iduro fun awọn ẹwọn polystyrene. Ilana igbaradi ti wa ni apejuwe ni isalẹ.
N-phenylmaleimide (200 miligiramu) ati methyl fainali isocyanate (100 miligiramu) ni tituka ninu toluene anhydrous, ati lẹhinna 0.1 milimita ti 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ni a fi kun si flask ifa lati gba copolymer ti phenylmaleimCPide ati methyl vinyl vinyl (PMPM). ) Awọn adalu ti wa ni kikan ni 60 ° C fun 3 wakati, filtered ati ki o gbẹ ninu adiro ni 40 ° C fun 3 wakati.
Awọn patikulu siliki ti o gbẹ (2 g) ni a tuka ni toluene gbigbẹ (100 milimita), ti a ru ati sonicated fun awọn iṣẹju 10 ni 500 milimita yika igo isalẹ. PMCP (10 miligiramu) ni tituka ni toluene o si fi kun dropwise si ọpọn ifasẹyin nipasẹ eefin afikun. A tun da adalu naa pada ni 100 ° C fun awọn wakati 8, ti a ṣe iyọda, fo pẹlu acetone ati ki o gbẹ ni 60 ° C fun wakati 3. Lẹhinna, awọn patikulu siliki ti o ni nkan ṣe pẹlu PMCP (100 g) ni tituka ni toluene (200 milimita), ati 4-hydroxy-TEMPO (2 milimita) ti wa ni afikun sibẹ niwaju 100 μl ti dibutyltin dilaurarate bi ayase. A ti gbe adalu naa ni 50 ° C fun awọn wakati 8, ti a ṣe iyọ ati ki o gbẹ ni 50 ° C fun wakati 3.
Styrene (1 milimita), benzoyl peroxide BPO (0.5 milimita) ati awọn patikulu silica ti a so si TEMPO-PMCP (1.5 g) ti tuka ni toluene ati sọ di mimọ pẹlu nitrogen. Awọn polymerization ti styrene ni a ṣe ni 100 ° C fun awọn wakati 12. Abajade ọja naa ni a fo pẹlu kẹmika, a si gbẹ ni alẹ ni 60°C. Eto gbogbogbo ti iṣesi naa han ni ọpọtọ. ọkan .
Awọn ayẹwo ni a fi omi ṣan ni 393 K fun 1 h titi ti titẹ agbara ti o kere ju 10-3 Torr ti gba. Awọn iye ti N2 adsorbed ni ojulumo titẹ P/P0 = 0.99 ti a lo lati mọ awọn lapapọ pore iwọn didun. Ẹkọ-ara ti awọn patikulu siliki mimọ ati asopọ ligand ni a ṣe ayẹwo nipa lilo microscope elekitironi ọlọjẹ (Hitachi High Technologies, Tokyo, Japan). Awọn ayẹwo gbigbẹ (yanrin mimọ ati awọn patikulu siliki ti o ni asopọ ligand) ni a gbe sori awọn ọpa aluminiomu nipa lilo teepu erogba. Wura ti wa ni ipamọ lori apẹẹrẹ ni lilo ohun elo sputtering Q150T, ati pe o ti gbe Layer Au ti o nipọn 5 nm sori apẹẹrẹ naa. Eleyi se awọn ṣiṣe ti awọn kekere foliteji ilana ati ki o pese itanran tutu spraying. A ṣe itupalẹ eroja nipa lilo Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Filaṣi EA1112 oluyanju akojọpọ ipilẹ. Ayẹwo iwọn patiku Malvern kan (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ni a lo lati gba pinpin iwọn patiku. Awọn patikulu siliki ti a ko tii ati awọn patikulu siliki ti o ni asopọ ligand (5 miligiramu kọọkan) ni a tuka ni 5 milimita isopropanol, sonicated fun awọn iṣẹju 10, agitated fun awọn iṣẹju 5, ati gbe sori ibujoko opitika Mastersizer. Ayẹwo thermogravimetric ni a ṣe ni iwọn 5 °C fun iṣẹju kan ni iwọn otutu lati 30 si 800 °C.
Gilaasi ti o wa ni wiwọn awọn ọwọn irin alagbara ti o dín pẹlu awọn iwọn (ID 100 × 1.8 mm) ni a kojọpọ nipasẹ ọna kikun slurry ni atẹle ilana kanna gẹgẹbi itọkasi 31. Apapọ irin alagbara (laini gilasi, ID 100 × 1 .8 mm) ati iṣanjade ti o ni 1 µm frit ti a ti sopọ si ẹrọ iṣakojọpọ USA, IL. Mura idadoro ti ipele iduro nipasẹ didaduro 150 miligiramu ti ipele iduro ni 1.2 milimita ti kẹmika ati fifun ni sinu iwe ifiomipamo. Methanol ni a lo bi epo slurry ati epo iṣakoso. Pa ọwọn naa nipa lilo ọna titẹ ti 100 MP fun iṣẹju 10, 80 MP fun iṣẹju 15, ati 60 MP fun iṣẹju 30. Ilana iṣakojọpọ lo awọn gbigbọn ọwọn chromatography gaasi meji (Alltech, Deerfield, IL, USA) fun gbigbọn ẹrọ lati rii daju iṣakojọpọ iwe-iṣọkan aṣọ. Pa apoti slurry ki o tu titẹ silẹ laiyara lati yago fun ibajẹ si okun naa. Awọn ọwọn ti ge-asopo lati slurry nozzle ati awọn miiran ibamu ti a so si awọn agbawole ati ki o ti sopọ si awọn LC eto lati se idanwo awọn oniwe-isẹ.
A ṣe agbekalẹ MLC aṣa kan nipa lilo fifa LC kan (10AD Shimadzu, Japan), oluṣayẹwo pẹlu 50 nL abẹrẹ loop (Valco (USA) C14 W.05), membran degasser (Shimadzu DGU-14A), ati window capillary UV-VIS. Ẹrọ aṣawari (UV-2075) ati microcolumn enamelled. Lo awọn ọpọn isopo to dín ati kukuru lati dinku ipa ti imugboroja ọwọn afikun. Lẹhin kikun iwe naa, fi sori ẹrọ capillary kan (50 µm id 365) ni ijade ti 1/16 ″ idinku ipade ki o fi sori ẹrọ capillary kan (50 µm) ti ipade idinku. Gbigba data ati sisẹ chromatogram ni a ṣe pẹlu lilo sọfitiwia Multichro 2000. Ni 254 nm, ifasilẹ UV ti awọn atupale awọn koko-ọrọ ni a ṣe abojuto ni 0. A ṣe ayẹwo data Chromatographic nipa lilo OriginPro8 (Northampton, MA).
Serum albumin eniyan, lulú lyophilized, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 miligiramu ti a dapọ pẹlu trypsin (1.5 mg), urea 4.0 M (1 milimita) ati 0.2 M ammonium bicarbonate (1 milimita). Ojutu naa ni aruwo fun awọn iṣẹju 10 ati pe o wa ninu iwẹ omi ni 37 ° C fun wakati 6, lẹhinna pa pẹlu 1 milimita ti 0.1% TFA. Ṣe àlẹmọ ojutu ati tọju ni isalẹ 4 ° C.
Iyapa ti adalu peptides ati tryptic digest HSA lori iwe PMP ni a ṣe ayẹwo lọtọ. Ṣayẹwo awọn tryptic hydrolysis ti adalu peptides ati HSA niya nipa a PMP iwe ki o si afiwe awọn esi pẹlu ohun Ascentis Express RP-Amide iwe. Nọmba ti awọn awo imọ-jinlẹ jẹ iṣiro nipa lilo idogba atẹle:
Awọn aworan SEM ti awọn patikulu siliki mimọ ati awọn patikulu ligand ligand ni a fihan ni Nọmba 2. Awọn aworan SEM ti awọn patikulu silica mimọ (A, B) ṣe afihan apẹrẹ ti iyipo ninu eyiti awọn patikulu ti wa ni elongated tabi ni aiṣedeede aiṣedeede akawe si awọn ẹkọ iṣaaju wa. Ilẹ ti awọn patikulu silica ti a dè nipasẹ ligand (C, D) jẹ irọrun ju ti awọn patikulu siliki mimọ, eyiti o le jẹ nitori awọn ẹwọn polystyrene ti o bo oju ti awọn patikulu silica.
Ṣiṣayẹwo awọn micrographs elekitironi ti awọn patikulu yanrin mimọ (A, B) ati awọn patikulu yanrin ligand (C, D).
Pipin iwọn patiku ti awọn patikulu ohun alumọni mimọ ati awọn patikulu siliki ti o ni asopọ ligand ti han ni aworan 2. 3 (A). Awọn iṣipopada ipinfunni iwọn didun iwọn didun fihan pe iwọn patiku siliki pọ si lẹhin iyipada kemikali (Fig. 3A). Awọn data pinpin iwọn siliki lati inu iwadi lọwọlọwọ ati iwadi iṣaaju ni a ṣe afiwe ni Table 1 (A). Iwọn patiku iwọn didun d (0.5) ti PMP jẹ 3.36 µm, ni akawe si ipolowo (0.5) iye ti 3.05 µm ninu iwadi wa ti tẹlẹ (awọn patikulu silica polystyrene bonded)34. Nitori iyipada ninu ipin ti PEG, urea, TMOS ati acetic acid ninu idapọ ifa, ipinpin iwọn patiku ti ipele yii dinku ni akawe si ikẹkọ iṣaaju wa. Iwọn patiku ti apakan PMP jẹ die-die ti o tobi ju ti ipele patiku silica ti a dè polystyrene ti a ti kẹkọọ tẹlẹ. Eyi tumọ si pe iṣẹ ṣiṣe dada ti awọn patikulu yanrin pẹlu styrene ti a fi silẹ nikan Layer polystyrene kan (0.97 µm) lori dada silica, lakoko ti o wa ni ipele PMP sisanra Layer jẹ 1.38 µm.
Pipin iwọn patiku (A) ati pinpin iwọn pore (B) ti awọn patikulu ohun alumọni mimọ ati awọn patikulu ohun alumọni ligand.
Iwọn pore, iwọn pore, ati agbegbe dada ti awọn patikulu silica ti a lo ninu iwadi yii ni a fihan ni Tabili 1 (B). Awọn profaili PSD ti awọn patikulu siliki mimọ ati awọn patikulu siliki ti o ni asopọ ligand ti han ni Ọpọtọ. 3(B). Awọn abajade jẹ afiwera si iwadi wa ti tẹlẹ34. Awọn iwọn pore ti funfun ati awọn patikulu siliki ti o ni asopọ ligand jẹ 310 Å ati 241 Å, ni atẹlera, ti o nfihan pe lẹhin iyipada kemikali, iwọn pore dinku nipasẹ 69 Å, bi o ti han ni Table 1 (B), ati iṣipopada iyipada ni a fihan ni Ọpọtọ. (124 m2/g). Gẹgẹbi a ṣe han ni Table 1 (B), agbegbe agbegbe (m2 / g) ti awọn patikulu siliki lẹhin iyipada kemikali tun dinku lati 116 m2 / g si 105 m2 / g.
Awọn abajade ti itupalẹ ipilẹ ti ipele iduro ni a gbekalẹ ni Tabili. 2. Akoonu erogba ti ipele ti o duro lọwọlọwọ jẹ 6.35%, eyiti o kere ju ninu iwadi wa ti tẹlẹ (awọn patikulu silica ti o ni nkan ṣe pẹlu polystyrene, 7.93% 35 ati 10.21%, lẹsẹsẹ) 42. Awọn erogba akoonu ti ipo iduro ti o wa ni isalẹ, niwon diẹ ninu awọn ligands pola gẹgẹbi phenylmaleimide ati methyl-TEvinyl TEvinyl (PCYMP) a ti lo ni afikun si styrene ni igbaradi ti SP. Iwọn iwuwo ti nitrogen ni ipele iduro lọwọlọwọ jẹ 2.21% ni akawe si 0.1735 ati 0.85% ninu awọn ẹkọ iṣaaju42. Eyi tumọ si pe ipele iduro lọwọlọwọ ni ipin iwuwo giga ti nitrogen nitori phenylmaleimide. Bakanna, awọn ọja (4) ati (5) ni erogba akoonu ti 2.7% ati 2.9%, lẹsẹsẹ, nigba ti ik ọja (6) ni o ni a erogba akoonu ti 6.35%, bi o han ni Table 2. Thermogravimetric onínọmbà (TGA) ti a lo lori awọn adaduro ipele ti PMP lati se idanwo fun àdánù làìpẹ, ati awọn TGA ti tẹ ti wa ni han ni ti o dara ti tẹ ni Figure 4. adehun pẹlu akoonu erogba (6.35%), nitori awọn ligands ko ni C nikan, ṣugbọn tun N, O ati H.
Awọn ligand phenylmaleimide-methylvinyl isocyanate ni a yan lati ṣe atunṣe oju ti awọn patikulu silica nitori awọn phenylmaleimide pola ati awọn ẹgbẹ vinylisocyanate. Awọn ẹgbẹ isocyanate Vinyl le fesi siwaju sii pẹlu styrene nipa gbigbe polymerization ipilẹṣẹ. Idi keji ni lati fi ẹgbẹ kan sii ti o ni awọn ibaraenisepo iwọntunwọnsi pẹlu analyte ati pe ko si awọn ibaraenisepo elekitirotatiki ti o lagbara laarin atupalẹ ati ipo iduro, niwọn igba ti phenylmaleimide moiety ko ni idiyele foju ni pH deede. Awọn polarity ti awọn adaduro alakoso le ti wa ni dari nipasẹ awọn ti aipe iye ti styrene ati awọn lenu akoko ti awọn free radical polymerization. Igbesẹ ikẹhin ti ifaseyin (polimaization radical ọfẹ) ṣe pataki bi o ṣe n yipada polarity ti ipele iduro. A ṣe itupalẹ eroja lati ṣayẹwo akoonu erogba ni awọn ipele iduro wọnyi. O ti ṣe akiyesi pe jijẹ iye ti styrene ati akoko ifarabalẹ pọ si akoonu erogba ti ipele iduro ati ni idakeji. Awọn SP ti a pese sile pẹlu awọn ifọkansi oriṣiriṣi ti styrene ni awọn ẹru erogba oriṣiriṣi. Bakanna, awọn ipele iduro wọnyi ni a gbe sori awọn ọwọn irin alagbara irin ati awọn abuda chromatographic wọn (aṣayan, ipinnu, iye N, ati bẹbẹ lọ) ti ṣayẹwo. Da lori awọn adanwo wọnyi, akopọ iṣapeye fun igbaradi ti ipele iduro PMP ni a yan lati pese polarity iṣakoso ati idaduro to dara ti itupalẹ.
A tun ṣe ayẹwo iwe PMP fun itupalẹ awọn apapo marun ti awọn peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine-enkephalin) nipa lilo agbara ti alakoso alagbeka. 60/40 (v/v) ACN/omi (0.1% TFA) ni iwọn sisan ti 80 µl/min. Labẹ awọn ipo elution ti o dara julọ (200,000 awọn awopọ / m), nọmba awọn awopọ imọ-jinlẹ (N) fun iwe kan (100 × 1.8 mm) jẹ 20,000 ± 100. Awọn iye N fun awọn ọwọn PMP mẹta ni a fihan ni Tabili 3 ati awọn chromatograms ti han ni Nọmba 5A. Ayẹwo ti o yara ni iwọn sisan ti o ga (700 µl / min) lori iwe PMP, awọn peptides marun ti jade laarin iṣẹju kan, iye N ti o dara julọ ti 13,500 ± 330 fun iwe kan (100 x 1.8 mm diamita), deede si 135,000 farahan / m (Fig. 5B). Awọn ọwọn mẹta ti iwọn kanna (iwọn ila opin inu 100 x 1.8 mm) ni a kun pẹlu awọn ipele oriṣiriṣi mẹta ti ipele iduro PMP lati ṣe idanwo atunṣe. A ṣe igbasilẹ awọn atunnkanwo fun iwe kọọkan nipa yiya sọtọ adalu idanwo kanna lori iwe kọọkan nipa lilo awọn ipo elution ti o dara julọ, nọmba ti awọn awo imọ-jinlẹ N, ati akoko idaduro. Awọn data atunwi fun awọn ọwọn PMP ni a fihan ni Tabili 4. Atunse ti iwe PMP ni ibamu daradara pẹlu awọn iye % RSD kekere pupọ bi o ṣe han ni Tabili 3.
Iyapa ti awọn apopọ peptide lori iwe PMP (B) ati iwe Ascentis Express RP-Amide (A), alakoso alagbeka 60/40 ACN / H2O (TFA 0.1%), awọn iwọn ọwọn PMP (100 x 1.8 mm id) , Ilana Elution ti awọn agbo ogun: 1 (Gly-Tyr), - 2-Tyr (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ati 5 (leucic acid enkephalin).
A ṣe ayẹwo iwe PMP kan (iwọn ila opin inu 100 x 1.8 mm) fun iyapa ti tryptic hydrolyzate ti omi ara eniyan nipasẹ HPLC. Awọn chromatogram ni Nọmba 6 fihan pe awọn ayẹwo ti yapa daradara pẹlu ipinnu ti o dara pupọ. Awọn ojutu HSA ni a ṣe atupale nipa lilo iwọn sisan ti 100 μl / min, apakan alagbeka ti 70/30 acetonitrile / omi ati 0.1% TFA. Cleavage ti HSA ti pin si awọn oke giga 17, bi a ṣe han ninu chromatogram (Fig. 6), ti o baamu si awọn peptides 17. Awọn ṣiṣe ipinya ti awọn oke kọọkan lati HSA hydrolyzate ni iṣiro ati awọn iye ti han ni Tabili 5.
HSA tryptic hydrolysates ti yapa lori iwe PMP (iwọn ila opin inu 100 x 1.8 mm), oṣuwọn sisan (100 μl/min), alakoso alagbeka 60/40 acetonitrile/omi, ati 0.1% TFA.
nibiti L jẹ ipari ọwọn, η jẹ iki ti apakan alagbeka, ΔP jẹ titẹ ẹhin ti ọwọn, ati u jẹ iyara laini ti apakan alagbeka. Iyatọ ti ọwọn PMP jẹ 2.5 × 10–14 m2, iwọn sisan jẹ 25 µl/min, 60/40 v/v ti lo. ACN/omi. Iyatọ ti ọwọn PMP (ID 100 × 1.8 mm) jẹ iru ti iwadi Ref.34 ti tẹlẹ wa. Iyatọ ti ọwọn ti o kun pẹlu awọn patikulu la kọja ni 1.7 × 10 .6 µm, 2.5 × 10-14 m2 fun awọn patikulu 5 µm43. Nitoribẹẹ, aiṣedeede ti alakoso PMP jẹ iru si agbara ti awọn patikulu mojuto-ikarahun pẹlu iwọn ti 5 μm.
nibiti Wx ti wa ni iwọn ti ọwọn ti o kun pẹlu chloroform, Wy ni iwọn ti ọwọn ti o kun fun kẹmika, ati ρ jẹ iwuwo ti epo. Iwuwo kẹmika (ρ = 0.7866) ati chloroform (ρ = 1.484). Lapapọ porosity ti ọwọn patiku silica-C18 (100 × 1.8 mm ID) 34 ati iwe C18-urea31 ti a ti kọ tẹlẹ jẹ 0.63 ati 0.55, lẹsẹsẹ. Eyi tumọ si pe wiwa awọn ligands urea dinku ailagbara ti ipele iduro. Ni apa keji, lapapọ porosity ti iwe PMP (ipin ti inu 100 × 1.8 mm) jẹ 0.60. Awọn ọwọn PMP ko kere ju awọn ọwọn ti o wa pẹlu awọn patikulu siliki ti o ni asopọ C18 nitori ni iru awọn ipele iduro C18 awọn ligands C18 ti wa ni asopọ si awọn patikulu silica ni awọn ẹwọn laini, lakoko ti o wa ni iru awọn ipele iduro ti polystyrene ti o nipọn polima ti o nipọn ni ayika awọn patikulu. Layer A. Ni a aṣoju ṣàdánwò, iwe porosity ti wa ni iṣiro bi wọnyi:
Lori ọpọtọ. 7A, B fihan awọn igbero Van Deemter fun iwe PMP kan (id 100 x 1.8 mm) ati iwe Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) labẹ awọn ipo elution kanna, 60/40 ACN/H2O ati 0 .1% TFA 20 µl/min lori ọwọn mejeeji 8. Awọn iye HETP ti o kere ju ni iwọn sisan ti aipe (80 µl/min) jẹ 2.6 µm ati 3.9 µm fun iwe PMP ati iwe Ascentis Express RP-Amide, ni atele. Awọn iye HETP fihan pe ṣiṣe ipinya ti ọwọn PMP (100 x 1.8 mm id) ga julọ ju ti ọwọn Ascentis Express RP-Amide ti o wa ni iṣowo (100 x 1.8 mm id). Aworan van Deemter ni aworan 7 (A) fihan pe idinku ninu iye N ko ni pataki ti o ga julọ pẹlu ṣiṣan ti o pọ si ni akawe si iwadi iṣaaju wa. Iṣiṣẹ Iyapa ti o ga julọ ti iwe PMP (id 100 × 1.8 mm) ni akawe si iwe-iwe Ascentis Express RP-Amide da lori apẹrẹ patiku ti ilọsiwaju ati iwọn ati ilana iṣakojọpọ ọwọn fafa ti a lo ninu iṣẹ lọwọlọwọ34.
(A) Idite Van Deemter (HETP vs. mobile alakoso laini iyara) gba lori iwe PMP (id 100 x 1.8 mm) ni 60/40 ACN/H2O pẹlu 0.1% TFA. (B) Idite Van Deemter (HETP dipo iyara laini alakoso alagbeka) ti o gba lori iwe Ascentis Express RP-Amide (id 100 x 1.8 mm) ni 60/40 ACN/H2O pẹlu 0.1% TFA.
Ipele iduro ti pola ti polystyrene intercalated ti pese ati ṣe iṣiro fun ipinya ti adalu awọn peptides sintetiki ati tryptic hydrolyzate ti omi ara eniyan (HSA) ni chromatography olomi iṣẹ giga. Išẹ chromatographic ti awọn ọwọn PMP fun awọn akojọpọ peptide dara julọ ni awọn ofin ti ṣiṣe iyapa ati ipinnu. Imudara Iyapa ti o ni ilọsiwaju ti awọn ọwọn PMP jẹ nitori awọn idi pupọ gẹgẹbi iwọn patiku silica ati iwọn pore, iṣakoso iṣakoso ti awọn ipele ti o duro, ati awọn ohun elo iṣakojọpọ ọwọn eka. Ni afikun si ṣiṣe iyapa giga, anfani miiran ti ipele iduro yii jẹ titẹ iwe kekere ti o ni ẹhin ni awọn iwọn sisan ti o ga. Awọn ọwọn PMP jẹ atunṣe pupọ ati pe o le ṣee lo lati ṣe itupalẹ awọn akojọpọ awọn peptides ati tito nkan lẹsẹsẹ tryptic ti awọn ọlọjẹ lọpọlọpọ. A pinnu lati lo ọwọn yii fun ipinya awọn agbo ogun bioactive lati awọn ọja adayeba, awọn iyọkuro ti awọn ohun ọgbin oogun ati awọn olu ni kiromatogirafi olomi. Ni ojo iwaju, awọn ọwọn PMP yoo tun ṣe ayẹwo fun iyapa awọn ọlọjẹ ati awọn egboogi monoclonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Iwadi sinu yiyipada chromatography peptide awọn ọna šiše Iyapa apakan I: Idagbasoke ti a Ilana fun awọn kikọ kikọ. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Iwadi sinu yiyipada awọn ọna ṣiṣe chromatography peptide Iyapa apakan I: Idagbasoke ilana kan fun kikọ kikọ.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ati Petersson, P. Iwadi ti Peptide Iyapa Systems nipasẹ Yiyipada-Alakoso Chromatography, Apá I: Ṣiṣe idagbasoke Ilana kan fun Imudaniloju Ọwọn. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Iwadi sinu yiyipada chromatography peptide awọn ọna šiše Iyapa apakan I: Idagbasoke ti ilana fun awọn abuda ọwọn. Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Iwadi sinu yiyipada chromatography peptide awọn ọna šiše Iyapa apakan I: Idagbasoke ti ilana fun awọn abuda ọwọn.Field, JK, Owerby, MR, Lau, J., Togersen, H., ati Petersson, P. Iwadi ti Peptide Iyapa Systems nipasẹ Yiyipada-Alakoso Chromatography, Apá I: Ṣiṣe idagbasoke Ilana kan fun Imudaniloju Ọwọn.J.色谱法。 1603, 113-129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038(2019).
Gomez, B. et al. Awọn ọna fun ṣiṣẹda awọn peptides ti nṣiṣe lọwọ ilọsiwaju fun itọju awọn aarun ajakalẹ. Imọ-ẹrọ imọ-ẹrọ. Awọn aṣeyọri 36 (2), 415-429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Sintetiki mba peptides: Imọ ati oja. Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Sintetiki mba peptides: Imọ ati oja.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ati Chreschatyski M. Sintetiki mba peptides: Imọ ati oja.Vliege P, Lisowski V, Martinez J ati Khreschatsky M. Sintetiki mba peptides: Imọ ati oja. oògùn Awari. Loni 15 (1–2), 40–56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. To ti ni ilọsiwaju proteomic olomi chromatography. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. To ti ni ilọsiwaju proteomic olomi chromatography.Wo F., Smith RD ati Shen Yu. Kiromatogirafi olomi proteomic ti ilọsiwaju. Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. 高级蛋白质组液相色谱。 Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. To ti ni ilọsiwaju amuaradagba tiwqn 液相色谱.Wo F., Smith RD ati Shen Yu. Kiromatogirafi olomi proteomic ti ilọsiwaju.J. Kiromatografi. Ọdun 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Kiromatogirafi olomi to ti ni ilọsiwaju-sipekitirometry pupọ ni anfani lati ṣajọpọ awọn metabolomics ti o gbooro ati awọn ọlọjẹ. anus. Chim. Ìṣirò 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ipa ti UHPLC ni idagbasoke elegbogi. Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ipa ti UHPLC ni idagbasoke elegbogi.Chesnut, SM ati Salisbury, JJ Ipa ti UHPLC ni idagbasoke elegbogi.Chesnut, SM ati Salisbury, JJ Ipa ti UHPLC ni idagbasoke oogun. J. Sept Imọ. 30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Pataki ati awọn ẹya iṣe ti chromatography omi titẹ ultrahigh fun awọn iyapa iyara. Wu, N. & Clausen, AM Pataki ati awọn ẹya iṣe ti chromatography omi titẹ ultrahigh fun awọn iyapa iyara.Wu, N. ati Clausen, AM Ipilẹ ati awọn ẹya iṣe ti chromatography omi ti o ga fun iyapa iyara. Wu, N. & Clausen, AM 用于快速分离的超高压液相色谱的基础和实践方面。 Wu, N. & Clausen, AM Ipilẹ ati awọn ẹya iṣe ti chromatography omi ti o ga julọ fun iyapa iyara.Wu, N. ati Clausen, AM Ipilẹ ati awọn ẹya iṣe ti chromatography omi ti o ga fun iyapa iyara.J. Oṣu Kẹsan Imọ. 30 (8), 1167–1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Lilo awọn chromatography olomi iṣẹ ṣiṣe ni idagbasoke elegbogi. Wren, SA & Tchelitcheff, P. Lilo awọn chromatography olomi iṣẹ ṣiṣe ni idagbasoke elegbogi.Ren, SA ati Chelischeff, P. Awọn lilo ti ultra ga iṣẹ kiromatogirafi omi ni idagbasoke elegbogi. Wren, SA & Tchelitcheff, P. 超高效液相色谱在药物开发中的应用。 Wren, SA & Tchelitcheff, P.Ren, SA ati Chelischeff, P. Ohun elo ti kiromatogirafi olomi iṣẹ ṣiṣe ni idagbasoke oogun.J. Kiromatografi. 1119 (1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. A monolithic macroporous hydrogel yo lati ẹya epo-ni-omi emulsion pẹlu kan to ga ti abẹnu alakoso fun daradara ìwẹnumọ ti enterovirus 71. Kemikali. ise agbese. Iwe akosile 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ipa ti chromatography omi ni awọn ọlọjẹ. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ipa ti chromatography omi ni awọn ọlọjẹ.Shi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ati Wilkins, JA Ipa ti chromatography omi ni awọn ọlọjẹ. Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA 液相色谱在蛋白质组学中的作用。 Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JAShi, Y., Xiang, R., Horvath, C. ati Wilkins, JA Ipa ti chromatography omi ni awọn ọlọjẹ.J. Kiromatografi. A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Vutey, J.-L. & Guillarme, D. Awọn aṣa tuntun ni awọn ipinya chromatographic olomi-alakoso ti awọn peptides iwosan ati awọn ọlọjẹ: Imọran ati awọn ohun elo. & Guillarme, D. Awọn aṣa tuntun ni awọn ipinya chromatographic olomi-alakoso ti awọn peptides iwosan ati awọn ọlọjẹ: Imọran ati awọn ohun elo. & Guillarme, D. Новые тенденции обращенной фазой: теория и приложения. & Guillarme, D. Awọn aṣa tuntun ni ipinya ti awọn peptides itọju ati awọn ọlọjẹ nipasẹ yiyipada chromatography olomi alakoso: ilana ati awọn ohun elo. & Guillarme, D. 治疗性肽和蛋白质的反相液相色谱分离的新趋势：理论和应用。 & Guillarme, D.ati Guillarmé, D. Awọn aṣa tuntun ni ipinya ti awọn peptides itọju ailera ati awọn ọlọjẹ nipasẹ yiyipada chromatography olomi alakoso: ilana ati awọn ohun elo.J. Pharm. Biomedical Imọ. anus. 69, 9–27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Iyapa meji ti awọn peptides nipa lilo eto RP-RP-HPLC pẹlu pH ti o yatọ ni akọkọ ati awọn iwọn iyapa keji. Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Iyapa meji ti awọn peptides nipa lilo eto RP-RP-HPLC pẹlu pH ti o yatọ ni akọkọ ati awọn iwọn iyapa keji.Gilar M., Olivova P., Dali AE ati Gebler JK Iyapa meji ti awọn peptides nipa lilo eto RP-RP-HPLC pẹlu pH ti o yatọ ni akọkọ ati awọn iwọn iyapa keji.Gilar M., Olivova P., Dali AE ati Gebler JK Iyapa onisẹpo meji ti awọn peptides ni lilo awọn iye pH oriṣiriṣi ni akọkọ ati awọn iwọn iyapa keji ni lilo eto RP-RP-HPLC. J. Sept Imọ. 28 (14), 1694-1703 (2005).
Fellitti, S. et al. Iwadii ti gbigbe lọpọlọpọ ati awọn abuda kainetik ti awọn ọwọn kiromatogirafi iṣẹ ṣiṣe giga ti o kun pẹlu la kọja ni kikun ati la kọja awọn patikulu C18 ti o kere ju 2 µm. J. Sept Imọ. 43 (9–10), 1737–1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Awọn aṣa aipẹ ati awọn italaya itupalẹ ni ipinya, idanimọ, ati afọwọsi ti awọn peptides bioactive ọgbin. anus. Furo ẹda. Kemikali. 410 (15), 3425-3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Muller, JB et al. Ala-ilẹ Proteomic ti ijọba ti igbesi aye. Iseda 582 (7813), 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
De Luca, K. et al. Itọju lẹhin-itọju awọn peptides itọju ailera nipasẹ kiromatografi omi igbaradi. Molecules (Basel, Switzerland) 26 (15), 4688 (2021).
Yang, Y. & Geng, X. Kiromatogirafi ipo-ipo ati awọn ohun elo rẹ si awọn onimọ-jinlẹ. Yang, Y. & Geng, X. Kiromatogirafi ipo-ipo ati awọn ohun elo rẹ si awọn onimọ-jinlẹ.Yang, Yu. ati Geng, X. Kiromatografi ipo ti o dapọ ati ohun elo rẹ si awọn biopolymers. Yang, Y. & Geng, X. 混合模式色谱及其在生物聚合物中的应用。 Yang, Y. & Geng, X. Kiromatografi ipo ti o dapọ ati ohun elo rẹ ni biopolymers.Yang, Yu. ati Gene, X. Kiromatografi ipo ti o dapọ ati ohun elo rẹ si awọn onimọ-jinlẹ.J. Kiromatografi. A 1218 (49), 8813-8825 (2011).